CN110317798B - 一种醇脱氢酶及其制备醇的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种醇脱氢酶，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。而且还公开了该醇脱氢酶在以醛为底物合成醇的反应中的应用。该新型重组醇脱氢酶在大肠杆菌表达体系中具有高效的可溶性表达能力，且该重组醇脱氢酶在醛还原反应体系中合成醇的转化率为90％左右。

Description

一种醇脱氢酶及其制备醇的应用

技术领域

本发明属于基因工程领域。特别地，本发明涉及将醛(特别是呋喃醛)还原为醇的脱氢酶，及涉及编码这种脱氢酶的多核苷酸及其在醛至醇的生物转化中的应用。

背景技术

醇(特别是呋喃醇)是一种重要的用途广泛的有机化工原料，可由相应的醛通过催化加氢制得，工业上加氢还原分为液相加氢和气相加氢两种工艺。液相加氢法又分高压法和中压法，高压法多在9.8MPa以上操作，温度控制在170-200℃之间，用三氧化二铬和氧化铜做催化剂，转化率在95-100％之间，中压法多在6.73-6.86MPa左右操作，温度控制在160-170℃左右，也用三氧化二铬和氧化铅作为催化剂，所得产物在66.5-79.84kPa减压精馏得到目标产物，转化率一般为80-90％。气相加氢法在0.1-0.39MPa下进行，温度控制在80-170℃左右，用镍或铬-铜系催化剂。传统的催化加氢工艺需要在高温高压下进行，存在较大的危险性，并且生产装置的投资成本高。

醇脱氢酶广泛存在于动植物和微生物体内，虽然醇脱氢酶容易获得，且大多数性质稳定，大都是通过多重筛选、显色法、基于辅酶衍生物的筛选方法、基于辅酶荧光的筛选方法，基于以上方法获得耐受醛的醇脱氢酶比较困难。

另外，在利用醇脱氢酶合成醇的反应过程中，过高浓度的醇会抑制反应的进一步进行，使反应向正向移动的速度变得缓慢，导致产物的产率较低。为了减少产物的抑制，利用酶反应热力学和动力学原理，加大底物的浓度，采用两相反应体系，能够使底物缓慢释放到水中，而生成的大量产物被抽提到有机相，促使反应向呋喃醇合成的方向进行，可以提高还原反应的得率。与在水溶液中进行的酶催化反应相比，酶在两相中进行催化反应有如下优越性：①有利于疏水性底物的反应；②酶不溶于有机溶剂，容易回收再利用；③能提高酶的稳定性，可扩大反应的适应范围；④可控制底物的专一性；⑤没有微生物污染。因此，获得能够耐耐受醛和有机溶剂中的醇脱氢酶显得尤为重要。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的发明人通过提取生物质酸水解设备附近土壤的总DNA并纯化，将纯化后的总DNA经BamHI酶切，连接到克隆载体pUC19上，电击转化大肠杆菌DH5α高效感受态，建立宏基因组文库，通过涂布含抑制浓度醛平板高通量筛选得到阳性克隆子，经测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆到目的片段。

本发明人进一步测试了筛选到的耐受高浓度醛的醇脱氢酶的有机溶剂耐受性，发现该酶能够耐受甲基叔丁醚、异丙醚、二氯甲烷、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、1,3-丙二醇、1,2-丙二醇，特别是水、甲基叔丁醚和乙酸乙酯、二氯甲烷、乙酸丁酯。因此，筛选的醇脱氢酶非常适用于利用呋喃醛合成高浓度呋喃醇的反应。接下来，本发明在20％(v/v)甲基叔丁醚的溶剂体系中、常温常压条件下、1,4-丁二醇做为氢供体，利用醇脱氢酶催化还原呋喃醛制备相应的醇，摩尔转化率达到90％以上，转化浓度达到800mM，提供了一条呋喃醇的安全和绿色化制备工艺。

因而，本发明提供以下各项：

1.一种醇脱氢酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码根据以上1所述的醇脱氢酶的核苷酸序列，优选其如SEQ ID NO.1所示。

3.融合多肽，其包含根据以上1所述的醇脱氢酶并且具有醇脱氢酶活性。

4.一种克隆醇脱氢酶基因(优选根据以上1所述的醇脱氢酶)的宏基因组学方法，所述方法包括以下步骤：

a.提取生物质酸水解设备附近(例如，土壤)的总DNA并纯化，将纯化后的总DNA经酶切(优选BamHI酶切)后连接到克隆载体(如pUC19)上，获得重组克隆载体；

b.将所述重组克隆载体转化(如电转化)感受态大肠杆菌(如DH5α)，建立宏基因组文库；

c.将转化后的大肠杆菌通过涂布含抑制浓度的醛(优选呋喃醛)的平板高通量筛选得到阳性克隆子，经测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆到目的片段，即醇脱氢酶基因。

5.一种重组醇脱氢酶的制备方法，包括以下步骤：将含有根据以上2所述的核苷酸序列的表达载体转化宿主细胞(优选大肠杆菌或者酵母)，培养转化体，从培养转化体中获得重组醇脱氢酶蛋白。

6.根据以上5所述的重组醇脱氢酶的制备方法，包括：用以上4中所述的目的片段经BamHI、HindIII双酶切，与同样经BamHI、HindIII双酶切的pET-32a(+)载体连接，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导(优选所述IPTG终浓度为0.6-1.8mM，诱导温度为18-37℃)，得到高效可溶性表达。

7.一种将醛(特别是呋喃醛，如糠醛和5-羟甲基糠醛)转化为醇的方法，所述方法包括：在溶剂中，在10℃-60℃(优选20℃-40℃)的反应温度下，和/或在pH 5.5-8.0下，使用根据以上1所述的醇脱氢酶将醛(特别是呋喃醛，如糠醛和5-羟甲基糠醛)转化为醇的步骤。

8.根据以上7所述的方法，其中所述溶剂选自水、有机醇、酯、醚或它们的混合物(水与有机醇/酯/醚的优选体积比为10:1-10:5)，优选地，其中有机醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、1，3-丙二醇、1，2-丙二醇中的一种或二种以上；酯为乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸丁酯、乳酸乙酯、乳酸甲酯、丁二酸单乙酯、丁二酸单甲酯、丁二酸二甲酯、丁二酸二乙酯中的一种或二种以上；醚为异丙醚或者甲基叔丁基醚、异丙醚或者甲基叔丁基醚中的一种或二种以上，特别优选水、甲基叔丁醚和乙酸乙酯、二氯甲烷、乙酸丁酯。

9.根据以上7或8所述的方法，其中所述醛在溶剂中的浓度为0.001-1mol/L，和/或其中反应体系中醇脱氢酶的加入量为1-100μmol/L。

10.根据以上7或8所述的方法，其中所述转化采用1,4-丁二醇作为氢供体。

附图说明

图1为实施例1中菌落筛选图；

其中，图中较大的单菌落为目标菌落。

图2为实施例1中重组醇脱氢酶的SDS-PAGE电泳图；

其中，M为标准蛋白分子量maker，1为重组蛋白粗提物，2为破碎液上清，3为纯化的重组蛋白；

图3为中pH值对重组醇脱氢酶酶活性(●)和稳定性(■)的影响折线图；

图4为温度对重组醇脱氢酶酶活性(●)和稳定性(■)的影响折线图；

图5为重组醇脱氢酶以糠醛为底物的还原反应生成糠醇的薄层层析(TLC)分析结果图，其中1为糠醛的标准样品；2为反应生成产物；3为糠醇的标准样品；

图6为重组醇脱氢酶以糠醛为底物还原生成糠醇的连续投料图；

图7为醇脱氢酶以糠醛为底物生成糠醇的GC图，其中，糠醛的出峰时间为5.0min，糠醇的出峰时间为8.04min，1,4-丁二醇的出峰时间为12.4min；

图8为醇脱氢酶的全长DNA序列；和

图9为醇脱氢酶的全长氨基酸序列。

具体实施方式

在本发明的一个实施方案中，提供了：

本发明的第一个目的在于提供一种醇脱氢酶的新基因。

本发明的第二个目的在于提供上述醇脱氢酶的宏基因组学克隆方法。

本发明的第三个目的在于提供利用上述表达载体构建的重组醇脱氢酶及其制备方法。

本发明的第四个目的在于提供上述醇脱氢酶在将醛高效转化为醇中的应用。

本发明的第一个目的是通过如下技术方案来实现的：一种醇脱氢酶，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供的上述新型醇脱氢酶，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第二个目的是通过如下技术方案来实现的：一种醇脱氢酶的宏基因组学克隆方法，提取生物质酸水解设备旁边土的总的DNA并纯化，将纯化后的总DNA经BamHI酶切，连接到克隆载体pUC19上，电击转化大肠杆菌DH5α高效感受态建立宏基因组文库，通过涂布含抑制浓度醛平板快速筛选得到阳性克隆子，经测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆得到目的片段。

本发明的第四个目的是通过如下技术方案来实现的：一种重组醇脱氢酶的制备方法，包括用上述表达载体转化宿主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组醇脱氢酶。

上述重组醇脱氢酶的制备方法中，表达宿主细胞为大肠杆菌。

上述重组醇脱氢酶酶的制备方法，其具体过程为：包括用BamHI、HindIII双酶切获得目的基因并连接pET-32a(+)载体，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，得到高效可溶性表达。

所述的IPTG终浓度为0.6-1.8mM，诱导温度为18-37℃。

本发明提供的重组醇脱氢酶，包括用上述表达载体转化表达宿主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组醇脱氢酶的方法和步骤。

本发明的最后一个目的是通过如下技术方案来实现的：本发明所述重组醇脱氢酶在将醛高效转化为醇的应用。

本发明的有益效果是：

①本发明从生物质酸水解设备附近的土样品构建好的宏基因组文库中得到一个新的醇脱氢酶的DNA序列，通过基因工程技术对其功能研究，发现该序列在大肠杆菌中高效可溶表达，经蛋白纯化及SDS-PAGE电泳，得到一条单一的蛋白条带(图2)，减去融合蛋白，初步确定醇脱氢酶酶的分子量约为54KDa。

②本发明将SEQ ID NO.1所示的DNA序列克隆到原核表达载体上，转化大肠杆菌感受态细胞，通过对阳性克隆子的诱导表达得到重组蛋白，研究其酶学性质，结果如下：

(1)在大肠杆菌表达体系中，该重组蛋白具有高效可溶性表达；

(2)以糠醛为底物，测得重组醇脱氢酶的最适反应温度为30℃，升高或降低温度都会导致酶活性的减少。该酶在40℃、25℃、20℃时酶活分别为最高酶活性的63％、94％、88％。在30℃以下，该醇脱氢酶具有良好的热稳定。在40℃时，残留酶活性为12％，在50℃条件下，几乎完全失活。该酶的最适反应pH值为6.0，在pH5.5-8.0的范围内保留活性80％以上的酶活性，酶的pH稳定性较好；

(3)本发明在研究重组醇脱氢酶以醛(特别是呋喃醛)为底物生成醇，经薄层层析(TLC)和GC内标法分析，醛的转化率为80-90％。

实施例

下文将参考实施例和附图详细描述本发明，所述实施例和附图仅是意图举例说明本发明，而不是意图限制本发明的范围。本发明的范围由后附的权利要求具体限定。

实施例1宏基因组文库的建立和阳性克隆子的获得、基因克隆与表达

1、总DNA的提取：

称取5g样品，样品为生物质酸水解设备附近土壤，加入13.5ml DNA提取缓冲液(0.1M Tris，0.1M EDTA-Na，0.1M Na₃PO₄，1.5M NaCl，1％CTAB，pH值8.0)，剧烈振荡混匀，加入300μl溶菌酶(100mg/ml)，反复颠倒5-6次，37℃水浴30min，加入1.5ml 20％SDS，65℃水浴1h(期间每隔15min上下颠倒几次)，8000r/min离心5min，取上清液，用等体积氯仿抽提2次，8000r/min离心10min，取上清，加入0.6倍体积的异丙醇，室温放置2h，20000r/min离心20min，弃上清，沉淀加5mL预冷的70％乙醇，20000r/min离心10min，收集DNA沉淀，风干，用适量TE缓冲液溶解。

试剂盒法纯化DNA：按照OMEGA胶回收试剂盒说明书进行。

宏基因组电泳检测：用1％琼脂糖凝胶电泳检测总DNA量和纯度。

酶切总DNA：用限制性内切酶BamHI部分酶切总DNA，回收2-8kb的酶切片段，方法同试剂盒法纯化DNA。

酶切片段及克隆载体的电泳检测：方法同宏基因组电泳检测。

酶切片段的连接：将回收得到的酶切片段和上述构建好的克隆载体连接过夜，按照OMEGA MicroCycle-Pure Kit操作回收连接产物。

连接产物的转化：吸取3μl的连接产物加入到100μl的大肠杆菌DH5α高效感受态中，2500V/cm(Eppdoff 2510电击仪)电击1次，46℃热激6-10min，37℃，180-200rpm摇床培养45-60min，吸取20-50μl涂布于含卡那霉素抗生素(100μg/ml)、IPTG(1mM)和抑制浓度的糠醛(9.608mg/ml)的LB琼脂平板，37℃培养过夜。由此构建了一个库容量达20000个转化子、高多样性的宏基因组文库。

文库筛选和阳性克隆子的鉴定：将涂布后的平板置于37℃培养箱培养72h，由于不受抑制浓度醛的影响的菌落比受抑制的明显长的大，因而长的大的菌落即为阳性克隆子(如附图1所示)。通过筛选，得到一株阳性克隆子。从平板中将阳性克隆子挑出并接种至10ml含卡那霉素抗生素(100μg/ml)的LB液体培养基中，37℃、220r/min摇床培养过夜，取2ml菌体进行质粒提取，对插入片段测序，将测定的序列经过NCBI的BLAST软件分析比较，发现该DNA由1119个碱基对组成，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，该DNA编码的多肽，含373个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

基因片段的克隆：根据测序结果设计一对引物：F1和F2，引物两端引入能插入pET-32a(+)载体的BamHI和HindIII酶切位点，引物序列如下：

F'-CGGGGATCCATGACCAGCACACATAGCGTTG

R'-CCGAAGCTTCGGTTTCATATCATAGGCACGATCAAATTC

利用两条引物，以重组克隆载体为模板进行PCR扩增反应，PCR体系如下：条件为：94℃，5min，94℃，30sec，66℃，30sec，72℃，2min，30个循环，72℃，10min。

用胶回收试剂盒将PCR产物纯化并用BamHI、HindIII于37℃双酶切24h，与用BamHI、HindIII双酶切的pET-32a(+)(Novagen)表达载体进行连接，取5μl重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，转化液涂布含卡那霉素抗生素(100μg/ml)的LB固体培养基，37℃培养过夜，随机挑取10株单菌落接种提取质粒DNA，双酶切验证后，送交测序。

重组醇脱氢酶粗酶液的获得、纯化及分子量检测：将重组工程菌划线至含卡那霉素抗生素(100μg/ml)的LB固体培养基中，37℃培养过夜活化，随机挑取1株重组菌接种至含卡那霉素抗生素(100μg/ml)的LB液体培养基中，37℃、220r/min摇床培养过夜，按1∶100的接种量转接至50mL的含卡那霉素抗生素(100μg/ml)的LB液体培养基中，当生长至OD600＝0.6-0.8时加入IPTG进行诱导，30℃、200r/min摇床培养8-9小时(OD600＝3)，取诱导表达后菌液1ml加入到2ml EP管中，12000rpm离心1min，收集湿细胞，用1ml 50mM Tris-HCl(pH8.0)洗涤菌体两次，再重悬于1ml 50mM Tris-HCl(pH 8.0)中。超声波破碎2min，破碎5s间隔5s，4℃、12000rpm离心1min，上清即为粗酶液。之后进行酶液的纯化，具体纯化方法参见Purification Kit(Novagen)试剂盒。

说明书：

(1)用10ml预冷的1×Binding Buffer悬浮从100ml培养液中收集的菌体；

(2)采用超声波破碎细胞至澄清(4℃)、14000rpm离心20min收集上清即得到粗酶液；

(3)加入4ml His·Bind resin至滤柱中，形成2ml的纯化柱；

(4)依次6ml无菌水洗涤，10ml 1×Charge Buffer洗涤，6ml 1×Binding Buffer洗涤；

(5)将上述粗酶液置于纯化柱上，除去滤液；

(6)依次用20ml 1×Binding Buffer洗涤，12ml 1×Wash Buffer洗涤纯化柱；

(7)最后用12ml 1×Elute Buffer洗脱纯化柱中的蛋白质，即得纯化的醇脱氢酶。

将获得的粗重组蛋白和纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳，将粗酶液中蛋白的各个组分分开，用考马斯亮蓝R-250染色，蛋白maker估计酶蛋白的大小。通过蛋白纯化试剂盒纯化酶蛋白，SDS-PAGE电泳得到一条单一的蛋白条带。SDS-PAGE电泳结果表明，SEQID NO.1所述核苷酸序列所编码的多肽在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达，且所有重组蛋白均是可溶的，无包涵体形成，初步估计重组蛋白的分子量约为72kDa(如附图2所示)。

实施例2酶活的测定

(1)糠醛为底物的醇脱氢酶活性的定义：1个单位醇脱氢酶的活性定义为在pH6.0，30℃每分钟还原1μmol糠醛所需的酶量。

(2)测定原理：以糠醛为底物进行酶活性测定，醇脱氢酶催化1mol糠醛还原生成1mol糠醇，与此同时1mol NADPH氧化生成1mol NADP⁺，NADPH在340nm处有最大特征吸收峰，在一定光吸收值范围内，340nm处光吸收值与NADPH浓度呈正比。

(3)测定方法如下：

反应体系：300μl，包括：10mM糠醛、0.1mM NADPH、50μl稀释酶液、pH 6.0磷酸钾缓冲液。在酶标仪中，检测340nm处的光吸收值。

实施例3重组醇脱氢酶酶学性质研究

重组醇脱氢酶的最适pH和pH稳定性的测定

分别取用不同pH的50mM的缓冲液(pH范围4.0-8.5)，体系：300μl、10mM糠醛、0.1mMNADPH，50μl稀释酶液，设置三个平行，测定35℃下各pH值条件下的酶活。以酶活力最高者定为100％，以相对酶活力对pH作图。

将稀释酶液在不同pH的缓冲液(pH范围4.0-8.5)中37℃放置1h，各设三个平行，按上述标准方法测定不同pH下保存的醇脱氢酶活性，以未处理酶液的酶活力为100％，以相对酶活力对pH作图(结果如附图3所示)，重组醇脱氢酶的最适反应pH为6.0，在pH5.5-8.0的范围内活性比较稳定，仍保留大于80％的酶活。

重组醇脱氢酶最适反应温度和热稳定性的测定

分别测定pH6.0下不同温度条件的稀释酶液的酶活力，每个温度设三个平行，以酶活力最高者定为100％，以相对酶活力对温度作图。

将酶液分别放入不同温度的水浴中保温2h，取出酶液后置于冰上，设置三个平行，同时用未经处理的样品作正对照，按照上述标准方法测定不同温度下样品的酶活力。以未处理酶液的酶活力为100％，以相对酶活力对温度作图，如图4所示，重组醇脱氢酶最适反应温度为30℃，升高或降低温度都会导致酶活性的减少。该酶在40℃、25℃、20℃时酶活分别为最高酶活性的63％、94％、88％。在30℃以下，该醇脱氢酶具有良好的热稳定性。但是，在40℃时，残留酶活性为12％，在50℃条件下，几乎完全失活。

实施例4重组醇脱氢酶以糠醛为底物的还原反应

在常温常压条件下，然后采用醇脱氢酶的底物1,4-丁二醇来供氢，在“一锅法”中协同催化还原糠醛制备糠醇，实现糠醇的绿色制备过程。

首先：加入1M的1,4-丁二醇供氢，200mM糠醛，0.1mM NADP⁺，将酶液用pH8.0Tris-HCl缓冲液中进行悬浮，之后按20％(v/v)甲基叔丁醚和含有酶液的缓冲液混合，在30℃、转速为120rpm的条件下反应。分别在4h、8h、12h、20h各补200mM糠醛、每隔8h补一次酶液(如附图6所示)。反应完毕，10000rpm离心2分钟，反应体系分层，将下层反应产物在100℃处理15min，12000rpm离心5min，上清进行薄层层析(TLC)分析，在TLC薄板(silica gel160，Merck)点样，于展层剂(乙酸乙酯：石油醚＝1∶2，v/v)中展析，取出薄板晾干后，用高锰酸钾溶液染色，晾干，如果糠醛斑点附近生成糠醇斑点，则表明该醇脱氢酶能够还原糠醛，糠醇斑点越大，表明酶的活性越强(如附图5所示)。同时利用气相色谱法(GC)进行分析(GC-2010型气相色谱仪)(如附图7所示)，FFAP柱(5μm，4.6x250mm)，初始温度为80℃，保留1min，10℃/min程序升温，升到200℃，保留2min。经过TLC薄层层析和GC内标法分析，糠醇的转化率为92％。

实施例5重组醇脱氢酶以5-羟甲基糠醛为底物的还原反应

在常温常压条件下，然后采用醇脱氢酶的底物1,4-丁二醇来供氢，在“一锅法”中协同催化还原5-羟甲基糠醛制备2,5-呋喃二甲醇，实现2,5-羟甲基呋喃的绿色制备过程。

首先：加入1M的1,4-丁二醇供氢，250mM 5-羟甲基糠醛，0.1mM NADP⁺，将酶液用pH8.0的Tris-HCl缓冲液中进行悬浮，之后按20％(v/v)甲基叔丁醚和含有酶液的缓冲液混合，在30℃、转速为120rpm的条件下反应。分别在4h、7.5h、12h、18h补200mM 5-羟甲基糠醛、每隔8h补一次酶液。反应完毕，10000rpm离心2min，反应体系分层，将下层反应产物在100℃处理15min，12000rpm离心5min，上清进行薄层层析(TLC)分析，在TLC薄板(silica gel160，Merck)点样，于展层剂(乙酸乙酯：石油醚＝1∶1，v/v)中展析，取出薄板晾干后，用高锰酸钾溶液染色，晾干，如果5-羟甲基糠醛斑点附近生成2,5-呋喃二甲醇斑点，则表明该醇脱氢酶能够还原5-羟甲基糠醛，2,5-呋喃二甲醇斑点越大，表明酶的活性越强。同时利用气相色谱法(GC)进行分析(GC-2010型气相色谱仪)，FFAP柱(5μm，4.6x250mm)，初始温度为80℃，保留1min，10℃/min程序升温，升到200℃，保留2min。经过TLC薄层层析和GC内标法分析，糠醇的转化率为90.6％。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。

Claims (12)

1.一种醇脱氢酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码根据权利要求1所述的醇脱氢酶的核苷酸，其如SEQ ID NO.1所示。

3.融合多肽，其包含根据权利要求1所述的醇脱氢酶并且具有醇脱氢酶活性。

4.一种重组醇脱氢酶的制备方法，包括以下步骤：将含有根据权利要求2所述的核苷酸的表达载体转化宿主细胞，培养转化体，从培养转化体中获得重组醇脱氢酶蛋白。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中所述宿主细胞是大肠杆菌或者酵母。

6.一种将醛转化为醇的方法，所述方法包括：在溶剂中，在10℃-60℃的反应温度下，和/或在pH 5.5-8.0下，使用根据权利要求1所述的醇脱氢酶将醛转化为醇的步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述醛为呋喃醛。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述醛为糠醛或5-羟甲基糠醛。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述溶剂选自水、有机醇、酯、醚或它们的混合物，其中有机醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、仲丁醇、异丁醇、1，3-丙二醇、1，2-丙二醇中的一种或二种以上；酯为乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸丁酯、乳酸乙酯、乳酸甲酯、丁二酸单乙酯、丁二酸单甲酯、丁二酸二甲酯、丁二酸二乙酯中的一种或二种以上；醚为异丙醚或者甲基叔丁基醚。

10.根据权利要求6所述的方法，其中所述溶剂为水、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或乙酸丁酯。

11.根据权利要求6至10中任一项所述的方法，其中所述醛在溶剂中的浓度为0.001-1mol/L，和/或其中反应体系中醇脱氢酶的加入量为1-100μmol/L。

12.根据权利要求6至10中任一项所述的方法，其中所述转化采用1,4-丁二醇作为氢供体。

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