CN110312505B - 包含肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物 - Google Patents

包含肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN110312505B
CN110312505B CN201780086961.0A CN201780086961A CN110312505B CN 110312505 B CN110312505 B CN 110312505B CN 201780086961 A CN201780086961 A CN 201780086961A CN 110312505 B CN110312505 B CN 110312505B
Authority
CN
China
Prior art keywords
botulinum toxin
liquid composition
polysorbate
present disclosure
alanine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780086961.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110312505A (zh
Inventor
任贤我
金清世
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Daewoong Co Ltd
Original Assignee
Daewoong Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Daewoong Co Ltd filed Critical Daewoong Co Ltd
Publication of CN110312505A publication Critical patent/CN110312505A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110312505B publication Critical patent/CN110312505B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本公开文本涉及包含肉毒杆菌毒素作为活性成分的无需重构过程便即时可用的稳定液体组合物，并且特别涉及这样的液体组合物，所述液体组合物即使在包含有低浓度肉毒杆菌毒素时也能够防止肉毒杆菌毒素聚集从而表现出高稳定性，并且能够有效地防止吸附至容器等等，以持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素活性。具体地，本公开文本涉及液体组合物，其包含(i)作为活性成分的肉毒杆菌毒素，(ii)L‑丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。根据本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物是这样的液体组合物，其无需进行重构过程便即时可用，因此，可以改善用户的便利性并减少由于重构过程中的稀释误差等引起的肉毒杆菌毒素活性的偏差等。此外，根据本公开文本的液体组合物即使在低肉毒杆菌毒素浓度下也有效地防止肉毒杆菌毒素聚集从而具有极其优异的储存稳定性，并且有效地防止肉毒杆菌毒素吸附至容器，从而持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素活性。

Description

包含肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物
技术领域
本公开文本涉及包含肉毒杆菌毒素作为活性成分的无需重构过程便即时可用的稳定液体组合物，并且特别涉及这样的液体组合物，所述液体组合物即使在包含有低浓度肉毒杆菌毒素时也能够防止肉毒杆菌毒素聚集从而表现出高稳定性，并且能够有效地防止吸附至容器等等，以持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素活性。
具体地，本公开文本涉及液体组合物，其包含(i)作为活性成分的肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。
此外，本公开文本涉及一种使用液体组合物来稳定肉毒杆菌毒素的方法，所述液体组合物包含(i)肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。
背景技术
自19世纪90年代以来，已经发现了多种分泌神经毒性毒素的梭菌属菌株，并且在过去的70年中已经鉴定了由这些菌株分泌的毒素的特征(Schant,E.J.等人,Microbiol.Rev.,56:80,1992)。
源自梭菌属菌株的具有神经毒性的毒素，即肉毒杆菌毒素，根据其血清学特征分为A型至G型7种。每种毒素具有约150kDa的毒素蛋白，其天然地由与几种无毒蛋白质结合的复合物组成。中等复合物(300kDa)由毒素蛋白和无毒非血凝素蛋白组成，大型复合物(450kDa)和超大型复合物(900kDa)具有中间体复合物与血凝素结合的形式(Sugiyama,H.,Microbiol.Rev.,44:419,1980)。已知这些无毒非血凝素蛋白质保护毒素不受低pH和肠道中各种蛋白酶的影响。
特别地，已经发现当A型肉毒杆菌毒素以不系统地影响人体的剂量局部给予时，可以使局部给予部位的局部肌肉麻痹，其中所述特征可广泛用于去除皱纹、僵硬偏瘫和脑瘫的治疗用途等，因此，需求一直迅速增长。
同时，考虑到用户便利性，优选包含肉毒杆菌毒素作为活性成分的无需进行重构过程的即时可用形式的液体组合物，但是肉毒杆菌毒素的缺点在于液体形式的肉毒杆菌毒素的稳定性大大降低，因此，为了增加蛋白质的稳定性，常规的商业肉毒杆菌毒素制剂以冻干形式或真空干燥的干粉形式制备。
然而，通过冻干等方式制备的干粉配制品的问题在于，由于在使用过程中需要进行重构过程，因此使用时不方便，并且由于在重构过程中的稀释过程的误差等而发生肉毒杆菌毒素量的偏差，特别是鉴于活性的偏差等。因此，对能够改善用户便利性并使重构过程中误差最小化的液体组合物的需求不断增长。
特别地，由于肉毒杆菌毒素具有高毒性，应给予痕量用于治疗或美容目的，因此，与高浓度肉毒杆菌毒素的液体组合物相比，优选较低浓度的肉毒杆菌毒素的液体组合物。
然而，已知当肉毒杆菌毒素以低浓度存在时，它倾向于聚集在一起，并被吸附至容器，因而没有表现出期望的和足够的肉毒杆菌毒素活性，或者更确切地说毒素的活性变得更高等，也就是说，对于每个批次或每个液体小瓶发生肉毒杆菌毒素的活性偏差，这会导致意想不到的副作用等，因此，制备具有低肉毒杆菌毒素浓度的稳定的液体组合物并不容易。
在这一方面，迫切需要一种新型液体组合物，所述新型液体组合物当被使用者使用时能够提高便利性、即使在低的肉毒杆菌毒素浓度下也能有效地防止肉毒杆菌毒素聚集、有效地防止肉毒杆菌毒素被吸附至容器以持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素的活性。
发明内容
技术问题
本公开文本的目的是提供一种新型液体组合物，所述新型液体组合物即使在低的肉毒杆菌毒素浓度下也能够有效地防止肉毒杆菌毒素聚集、有效地防止肉毒杆菌毒素被吸附至容器，从而持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素的活性。
问题的解决方案
为了实现上述目的，本公开文本提供了一种稳定的肉毒杆菌毒素的液体组合物，其包含(i)作为活性成分的肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。
此外，本公开文本还提供了一种使用液体组合物来稳定肉毒杆菌毒素的方法，所述液体组合物包含(i)肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。
实施本发明的最佳方式
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开文本所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。一般而言，本说明书中使用的命名是本领域熟知并且通常使用的。
在一方面，本公开文本涉及一种液体组合物，其包含(i)作为活性成分的肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。
在本公开文本中，术语“肉毒杆菌毒素”用于包括由肉毒梭菌菌株或其突变体产生的神经毒素(NTX)和修饰的、重组的、杂交的和嵌合的肉毒杆菌毒素二者。
重组肉毒杆菌毒素可以具有由非梭菌属物种重组产生的轻链和/或重链。此外，本公开文本的肉毒杆菌毒素包括肉毒杆菌毒素血清型A、B、C、D、E、F和G，并且不仅包括肉毒杆菌毒素复合物(即300、600和900kDa复合物)，还包括纯肉毒杆菌毒素(即约150kDa神经毒性分子)，这两者在本公开文本的实践中都是有用的。
优选地，在本公开文本的液体组合物中含有的肉毒杆菌毒素是A型肉毒杆菌毒素。
根据本公开文本的液体组合物可以含有含量为约10至200单位/ml或约20至150单位/ml、优选25至100单位/ml、或25至75单位/ml、和最优选25至50单位/ml的肉毒杆菌毒素，但肉毒杆菌毒素的含量不限于此。
根据本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物使用L-丙氨酸或甲基纤维素赋予疏水性，所述L-丙氨酸或甲基纤维素是一种非极性氨基酸。L-丙氨酸可以通过疏水效应或盐效应增加肉毒杆菌毒素的溶解度，并且当与非离子表面活性剂，特别是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80组合使用时可以调节临界胶束浓度。甲基纤维素是与聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80具有相似的两亲特性的聚合物，但在不同形式的表面活性剂中具有温度敏感性，这被预期有助于热稳定性。
在根据本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物中，L-丙氨酸的含量可以是基于所述组合物的总含量的0.01％至1％(w/v)、优选0.05％至0.5％(w/v)和最优选0.075％至0.3％(w/v)。在示例性实施方案中，L-丙氨酸的含量可以是基于所述组合物的总含量的0.1％(w/v)。
在根据本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物中，甲基纤维素的含量可以是基于所述组合物的总含量的0.00001％至0.1％(w/v)、优选0.0001％至0.01％(w/v)和最优选0.0005％至0.0015％(w/v)。在示例性实施方案中，甲基纤维素的含量可以是基于所述组合物的总含量的0.00125％或0.000625％(w/v)。
在本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物中，非离子表面活性剂可以是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，但不限于此。优选地，可以使用聚山梨醇酯20。发现非离子表面活性剂，特别是聚山梨醇酯20用于防止肉毒杆菌毒素被吸附至容器，并且大大增加肉毒杆菌毒素的稳定性，同时改善疏水性和表面相互作用，并防止吸附至容器。然而，当液体组合物中包含聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80时，肉毒杆菌毒素可以同时稳定，但是存在的问题是肉毒杆菌毒素的活性可能高于期望值。
为了解决这一问题，在本公开文本中，发现当聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80以在基于所述组合物的总含量的0.00001％至0.1％(w/v)、优选0.0001％至0.01％(w/v)和最优选0.0005％至0.0015％(w/v)范围内的痕量使用时，可以防止肉毒杆菌毒素活性高的问题，并且可以有效地防止吸附至容器以持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素的活性。在示例性实施方案中，聚山梨醇酯20的含量是基于所述组合物的总含量的0.001％(w/v)。
本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物可以含有生理学相容的缓冲液以维持pH在等电点以下，从而确保长期稳定性。生理学相容缓冲液需要能够将pH维持在4.5至6.5、优选5.0至6.0和最优选约5.5的范围内。作为生理学合适的缓冲液，可以使用柠檬酸钠、琥珀酸、磷酸、一磷酸钾、乙酸钠、氯化钠等。优选地，柠檬酸钠可以用作根据本公开文本的液体组合物中的缓冲液。柠檬酸钠缓冲液能够控制pH变化，pH变化对蛋白质药物长期储存时的稳定性有严重影响，但当与特定赋形剂组合使用时，可能降低含量和活性(效力)，因此，需要通过进行相容性测试来确定柠檬酸钠缓冲液的使用。
在本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物中的生理学相容的缓冲液可以具有基于所述组合物的总含量的5至35mM、优选10至30mM和最优选15至25mM的含量。在示例性实施方案中，pH 5.5的柠檬酸钠以基于所述组合物的总含量的20mM的含量被包含在内作为生理学相容的缓冲液。发现L-丙氨酸和柠檬酸钠缓冲液的组合显著增加A型肉毒杆菌毒素的稳定性。
此外，本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物可以任选地进一步包含等渗剂。等渗剂的例子可以包括氯化钠、甘油、甘露醇、蔗糖、氯化钾、右旋糖等。等渗剂的含量可以是基于所述组合物的总含量的0.7％至0.95％(w/v)。优选地，本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物包含0.7％至0.95％(w/v)和最优选0.9％(w/v)氯化钠作为等渗剂。
在示例性实施方案中，本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物中可以含有基于所述组合物的总含量的0.01％至1％(w/v)丙氨酸、0.00001％至0.1％(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、5至35mM柠檬酸钠、和0.7％至0.95％(w/v)等渗剂。
在另一个示例性实施方案中，本公开文本的A型肉毒杆菌毒素的液态注射剂可以含有基于所述组合物的总含量的0.00001％至0.1％(w/v)甲基纤维素、0.00001％至0.1％(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80、5至35mM柠檬酸钠和0.7％至0.95％(w/v)等渗剂。
本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物可以通过常规给予途径给予。在本公开文本的一些示例性实施方案中，肉毒杆菌毒素的液体组合物通过作为局部给予方法的肌内注射或皮下注射(这是一种给予至有需要的受试者。由于本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物处于液态，因此可以在使用时直接给予而不进行重构步骤。此外，包含在根据本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物中的肉毒杆菌毒素可以在室温下维持稳定约12周或在应激条件下维持稳定长达5周。
本公开文本的肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物可用于治疗以骨骼肌过度活跃为特征的神经肌肉障碍。此外，本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物可以用于如治疗疾病和美容等各种目的，用于头痛、偏头痛、紧张性头痛、窦性头痛、颈源性头痛、多汗、腋窝多汗症、手部多汗症、脚部多汗症、弗雷综合征、多动皮纹(hyperkinetic skin line)、面部皱纹、皱眉皱纹、眼部皱纹、嘴附近的皱纹、鼻唇沟、皮肤障碍、失弛缓症、斜视、慢性肛裂、眼睑痉挛、肌肉骨骼疼痛、纤维肌痛、胰腺炎、心动过速、前列腺肥大、前列腺炎、尿潴留、尿失禁、膀胱过敏、半侧面部痉挛、震颤、肌肉痉挛、胃肠道障碍、糖尿病、多涎、逼尿肌-括约肌合作障碍、中风后僵硬、伤口恢复、小儿脑瘫、平滑肌痉挛、再狭窄、肌张力障碍、癫痫、颈肌张力障碍、甲状腺障碍、高钙血症、强迫性障碍、关节炎疼痛、雷诺综合征、膨胀纹、腹膜粘连、血管痉挛、流鼻涕、肌肉挛缩、喉肌张力失常、书写痉挛以及腕管综合征等。
在另一个方面，本公开文本涉及一种使用液体组合物来稳定肉毒杆菌毒素的方法，所述液体组合物包含(i)肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液以及任选的等渗剂。
在示例性实施方案中，本公开文本涉及一种稳定肉毒杆菌毒素制剂的方法，其包括通过将(i)肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸，(iii)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，(iv)柠檬酸钠和作为等渗剂的任选的氯化钠组合形成液体组合物，其中基于所述组合物的总含量所述丙氨酸的含量是0.01％至1％(w/v)，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的含量是0.00001％至0.1％(w/v)，柠檬酸钠的浓度是5至35mM，并且作为等渗剂的氯化钠的含量是0.7％至0.95％(w/v)。
在另一个示例性实施方案中，本公开文本涉及一种稳定肉毒杆菌毒素制剂的方法，其包括通过将(i)肉毒杆菌毒素，(ii)甲基纤维素，(iii)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，(iv)柠檬酸钠和作为等渗剂的任选的氯化钠混合形成液体组合物，其中基于所述总组合物所述甲基纤维素的含量是0.00001％至0.1％(w/v)，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的含量是0.00001％至0.1％(w/v)，柠檬酸钠的浓度是5至35mM，并且作为等渗剂的氯化钠的含量是0.7％至0.95％(w/v)。
由于通过本公开文本方法稳定的肉毒杆菌毒素制剂可以作为液体制剂用作注射剂，因而在使用前不需要单独的重构过程，因此，肉毒杆菌毒素制剂可以方便地使用，并且可以以稳定状态储存约6个月或更长时间。
实施例
在下文中，将参考以下实施例更加详细地描述本公开文本。然而，以下实施例仅用于举例说明本公开文本，并且对于本领域技术人员而言清楚的是，本公开文本的范围不应解释为限制这些实施例。
实施例1：根据两亲性赋形剂的类型和含量评估肉毒杆菌毒素的含量
为了找到适合于增强肉毒杆菌毒素稳定性的赋形剂，将各种类型的两亲性赋形剂添加至A型肉毒杆菌毒素中，然后使用Versamax酶标仪BC-138和BC-378(MolecularDevices，LLC)通过ELISA测试评估两亲性赋形剂的类型和含量对肉毒杆菌毒素含量的影响。柠檬酸钠缓冲液(下文称为“SC缓冲液”或“SC缓冲液”)和氯化钠缓冲液用作缓冲液。除非另有说明，否则使用通过包含0.9％(w/v)氯化钠作为等渗剂制备的柠檬酸钠缓冲液。
通过韩国专利号1,339,349中描述的方法制备测试中使用的A型肉毒杆菌毒素。
对于ELISA测试，将稀释至不同浓度的A型肉毒杆菌毒素标准品(DaewoongPharmaceutical)和根据本公开文本的液体组合物分配在用A型肉毒杆菌抗毒素(NIBSC,59/021)涂覆的96孔板中，并且通过使用夹心ELISA技术进行ELISA测试。
对各标准品和液体组合物进行一级和二级抗体反应，然后与底物反应。然后，通过测量450至540nm波长处的吸光度根据标准品的标准曲线来测量液体组合物的活性。在下文中，还通过相同的方法测试了本公开文本中的其他ELISA方法，并计算了含量。
测试结果用相对于以与每种组合物相同的储备浓度(2ng/ml)添加的对照组(0.02％人血清白蛋白，0.9％氯化钠)的百分比表示。将赋形剂添加至表1中所示的每种含量以制备1L赋形剂液体，然后以40U/ml的浓度添加肉毒杆菌毒素，并确认与40U/ml相比降低的含量。
[表1]两亲性赋形剂的类型和含量对肉毒杆菌毒素含量的影响
Figure BDA0002172822170000071
Figure BDA0002172822170000081
Figure BDA0002172822170000091
如表1所示，已经证实，当添加甲基纤维素或聚山梨醇酯20时，A型肉毒杆菌毒素的活性维持很高。相反，当添加PEG 400、羧甲基纤维素钠(Sod.CMC)或聚维酮K17(PVPK17)时，A型肉毒杆菌毒素的活性降低。因此，在本公开文本中，甲基纤维素或聚山梨醇酯20用作两亲性赋形剂以稳定肉毒杆菌毒素。此外，可以证实，当缓冲液，特别是柠檬酸钠缓冲液或氯化钠缓冲液一起使用时，特性(维持A型肉毒杆菌毒素的活性)即稳定性特性是不同的。
实施例2：可与聚山梨醇酯20组合使用的其他赋形剂
确认了聚山梨醇酯20的最大可用浓度，并且评估了当将聚山梨醇酯20作为基本赋形剂与其他赋形剂组合使用时对肉毒杆菌毒素含量的影响。根据实施例1的结果选择聚山梨醇酯20作为主要赋形剂，并使用ELISA测试方法进行每种赋形剂的筛选。
作为预期与选择的聚山梨醇酯20一起起作用的稳定剂，考虑到物理性质如疏水性、pKa、pKb值和氨基酸的等电点等，添加L-脯氨酸和L-丙氨酸作为候选赋形剂。由于需要另外的稳定剂以及聚山梨醇酯20来维持蛋白质的结构稳定性，考虑到A型肉毒杆菌毒素的pKa 6.0，选择了两种氨基酸即L-脯氨酸和L-丙氨酸。
通过给予标准溶液进行动物效力测试，其中将干粉形式的A型肉毒杆菌毒素稀释至不同浓度，并且将根据本公开文本的液体组合物分别给予至10只ICR-小鼠(4周龄，体重：18至22克)(0.1ml/小鼠)的腹膜腔中，确认3天内死亡动物的数量和存活动物的数量，然后使用统计程序计算活性(
Figure BDA0002172822170000102
2009Program(Release 5.9.8,AnalystSoft))。在下文中，在本公开文本中还通过相同的方法进行了其他动物效力测试，并计算了活性。
[表2]聚山梨醇酯20与氨基酸组合使用的结果
Figure BDA0002172822170000101
N/A；不适用
当以40U/ml浓度处理的肉毒杆菌毒素的量转化至100％并通过ELISA法分析时，在聚山梨醇酯20的含量为1％或更多时肉毒杆菌毒素的含量降至80％或更低，这说明含量下降。作为使用测试组NBT-25I-L169(维持100％含量的唯一组)进行动物效力测试的结果，与100％含量值相比，活性为143.8％，并且活性得到高度评估。此外，与聚山梨醇酯20与L-脯氨酸组合使用时相比，当聚山梨醇酯20与L-丙氨酸组合使用时，ELISA测试中A型肉毒杆菌毒素的初始含量值较高，因此，聚山梨醇酯20和L-丙氨酸在本公开文本中一起使用。
实施例3：聚山梨醇酯20和L-丙氨酸的组合对效力的影响
为了证实通过实施例2选择的聚山梨醇酯20和L-丙氨酸对肉毒杆菌毒素的活性(效力)的影响，将聚山梨醇酯20和L-丙氨酸一起添加以制备如下所述的A型肉毒杆菌毒素配制品，并确认对其活性(效力)的影响。
[表3]聚山梨醇酯20和L-丙氨酸的组合的效力的测量结果
Figure BDA0002172822170000111
表3显示，即使在相同的实验条件下使用相同含量的聚山梨醇酯20和L-丙氨酸，对于每个批次的A型肉毒杆菌毒素的活性(效力)也是不同的，并且总体上活性得到高度评估。总之，聚山梨醇酯20的肉毒杆菌毒素活性的高评估持续直到聚山梨醇酯20的浓度高达0.015％，这表明所产生的每个批次的值的流量是不恒定且不稳定的。由于这种现象被认为是由具有两亲特性的聚山梨醇酯20引起的，因此证实有必要将聚山梨醇酯20以能够维持肉毒杆菌毒素活性(效力)的含量包含在液体组合物中。
实施例4：根据聚山梨醇酯20的含量评估效力
为了研究聚山梨醇酯20的含量对肉毒杆菌毒素效力的影响，通过改变含量来进行具有下列组合物的液体配制品的动物效力筛选。如下所述进行不同浓度的聚山梨醇酯20的动物效力测试，以确认活性是否根据聚山梨醇酯20的浓度得到高度评估。使用5mM柠檬酸钠来补偿这样的现象，即通过降低的聚山梨醇酯20降低蛋白质稳定性。
[表4]根据聚山梨醇酯20的含量测量动物效力的结果
Figure BDA0002172822170000112
Figure BDA0002172822170000121
在通过动物效力测试进行的肉毒杆菌毒素的活性评估的测试中，80％至125％可以作为合适的范围被接受。这是由动物效力测试中的变化引起的现象，因此，与一般测试方法相比，程度非常大。如上表4所示，已证实肉毒杆菌毒素的滴度为114.4％，其是稳定的，即使当使用极少量的聚山梨醇酯20，例如0.00075％(w/v)的痕量时也是如此。
实施例5：根据L-丙氨酸的浓度评估滴度和稳定性
为了研究L-丙氨酸的含量对肉毒杆菌毒素效力的影响，通过改变L-丙氨酸的含量进行动物效力筛选。为了证实L-丙氨酸对聚山梨醇酯20的效力协同作用以及L-丙氨酸对柠檬酸钠缓冲液的相互作用和稳定性的影响，通过包含5mM柠檬酸钠缓冲液和0.001％聚山梨醇酯20制备液体注射剂。L-丙氨酸以0.1％、0.02％和0.05％的浓度使用，并且比较和评估在0.1％与0.02％之间的应激条件下的稳定性。
在应激条件下的稳定性评估中，考虑到A型肉毒杆菌毒素的热稳定性和动物效力测试方案，根据KFDA的通知将应激条件确定为40℃和75％RH，或者为了比较和评估效力降低方面将应激条件确定为37℃。在下文中，使用相同的方法进行所有应激条件下的稳定性评估。
[表5]根据L-丙氨酸的浓度测量动物效力和稳定性的结果
Figure BDA0002172822170000122
Figure BDA0002172822170000131
可以证实，L-丙氨酸含量越高，在应激条件下的稳定性越高，并且聚山梨醇酯20的滴度的协同作用也被部分抑制。预期L-丙氨酸影响聚山梨醇酯20的临界胶束浓度，并且证实在应激条件下与0.1％L-丙氨酸的组合在3周内仅有14％的活性降低。鉴于上述结果，当L-丙氨酸的浓度为0.1％时，稳定性尤其好。
实施例6：通过缓冲液评估A型肉毒杆菌毒素的活性和稳定性
考虑到A型肉毒杆菌毒素的等电点，选择液体组合物的缓冲液。将确定为配制品的主要缓冲液，所述柠檬酸钠缓冲液和氯化钠具有低于pH 6.0的缓冲能力、肉毒杆菌毒素的等电点并且其最常用于肌肉给予的产品中，从而确认了安全性。在所有本发明的实验中，除非另有说明，否则通过包含0.9％(w/v)氯化钠作为等渗剂制备柠檬酸钠缓冲液。
通过将(i)L-丙氨酸或甲基纤维素和(ii)聚山梨醇酯20与(iii)柠檬酸钠缓冲液(pH 5.5)和0.9％(w/v)氯化钠两种缓冲液中的任何一种组合，制备A型肉毒杆菌毒素配制品。添加至A型肉毒杆菌毒素中的赋形剂的类型和浓度总结在下表6中。
在制备缓冲液后，添加L-丙氨酸、甲基纤维素和聚山梨醇酯20以对应各个浓度，从而制备赋形剂溶液。然后，添加肉毒杆菌毒素使其浓度为40U/ml。
[表6]根据缓冲液类型测量A型肉毒杆菌毒素的稳定性的结果
Figure BDA0002172822170000132
Figure BDA0002172822170000141
作为实验结果，如表6所示，当使用0.9％(w/v)氯化钠缓冲液时，甲基纤维素和聚山梨醇酯20的组合在应激条件下显示出非常低的稳定性。另一方面，与0周相比，在应激条件下在1周时L-丙氨酸和聚山梨醇酯20的组合显示出低于甲基纤维素和聚山梨醇酯20的组合的活性降低。
同时，当使用柠檬酸钠缓冲液时，甲基纤维素和聚山梨醇酯20的组合的稳定性充分增加，并且在应激条件下稳定性维持在1周与2周之间。
也就是说，可以确认当使用柠檬酸钠缓冲液时，稳定性的可维持性得到改善。这是因为肉毒杆菌毒素的稳定性可以维持在pH 6.0或更低，并且可以通过柠檬酸钠缓冲液的功能缓和如在应激条件等环境中发生的现象如氧化。
[表7]根据柠檬酸钠缓冲液浓度(pH 5.5)通过动物效力(第二次测试)测量动物效力和稳定性的结果
Figure BDA0002172822170000142
此外，在第二次测试结果中，证实10mM或更多的柠檬酸钠缓冲液部分有助于在应激条件下的稳定性的维持。特别地，当使用20mM柠檬酸钠缓冲液时，稳定性最高。
工业实用性
根据本公开文本的肉毒杆菌毒素的液体组合物是这样的液体组合物，其无需进行重构过程便即时可用，因此，可以改善用户的便利性并减少由于重构过程中的稀释误差等引起的肉毒杆菌毒素活性的偏差。此外，根据本公开文本的液体组合物即使在低肉毒杆菌毒素浓度下也有效地防止肉毒杆菌毒素聚集从而具有极其优异的储存稳定性，并且有效地防止肉毒杆菌毒素吸附至容器，从而持续维持每个批次或每个液体小瓶的肉毒杆菌毒素活性。
尽管已经详细地描述了本公开文本的具体实施例，但是对于本领域技术人员而言清楚的是，具体的描述仅是期望的示例性实施方案，并且不应当解释为限制本公开文本的范围。因此，本公开文本的实质范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种液体组合物，其包含(i)肉毒杆菌毒素，(ii)L-丙氨酸或甲基纤维素，(iii)非离子表面活性剂和(iv)缓冲液，
其中所述液体组合物包含0.01至0.2％w/v的L-丙氨酸或包含基于所述组合物的总含量的0.00125至0.05％w/v的甲基纤维素，
其中所述非离子表面活性剂是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，以及所述液体组合物包含基于所述组合物的总含量的0.0005％至0.1％w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，并且
其中所述缓冲液包含5至20mM柠檬酸钠和0.7至0.95％NaCl。
2.根据权利要求1的液体组合物，其中所述肉毒杆菌毒素是A型肉毒杆菌毒素。
3.根据权利要求1的液体组合物，其包含25至50单位/ml肉毒杆菌毒素。
4.根据权利要求1至3中任一项的液体组合物，其中所述组合物对于注射是即时可用的。
5.一种使用根据权利要求1的液体组合物稳定肉毒杆菌毒素的方法。
6.根据权利要求5的方法，其中所述液体组合物还包含等渗剂。
CN201780086961.0A 2017-01-20 2017-10-17 包含肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物 Active CN110312505B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170009727A KR101744900B1 (ko) 2017-01-20 2017-01-20 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 조성물
KR10-2017-0009727 2017-01-20
PCT/KR2017/011438 WO2018135722A1 (en) 2017-01-20 2017-10-17 Stable liquid composition comprising botulinum toxin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110312505A CN110312505A (zh) 2019-10-08
CN110312505B true CN110312505B (zh) 2022-03-15

Family

ID=59221269

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780086961.0A Active CN110312505B (zh) 2017-01-20 2017-10-17 包含肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物

Country Status (14)

Country Link
US (1) US11185503B2 (zh)
EP (1) EP3570816B1 (zh)
JP (1) JP6877560B2 (zh)
KR (1) KR101744900B1 (zh)
CN (1) CN110312505B (zh)
AU (1) AU2017394571B2 (zh)
BR (1) BR112019014876A2 (zh)
CA (1) CA3049755C (zh)
ES (1) ES2961458T3 (zh)
MX (1) MX2019008416A (zh)
RU (1) RU2728776C1 (zh)
SA (1) SA519402275B1 (zh)
TW (1) TWI653048B (zh)
WO (1) WO2018135722A1 (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3436054B2 (en) 2016-09-13 2022-07-27 Allergan, Inc. Stabilized non-protein clostridial toxin compositions
KR101744900B1 (ko) * 2017-01-20 2017-06-08 주식회사 대웅 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 조성물
KR102259423B1 (ko) * 2018-11-30 2021-06-02 주식회사 휴온스바이오파마 보툴리눔 독소의 안정화 액상 조성물
JP2022521237A (ja) 2019-02-21 2022-04-06 メルツ ファーマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディト ゲゼルシャフト アウフ アクティーン 振戦治療のためのボツリヌス神経毒素の新規用途
KR102324855B1 (ko) * 2020-05-20 2021-11-11 오스템임플란트 주식회사 보툴리눔 독소를 포함하는 약제학적 액상 조성물
KR20240060314A (ko) * 2022-10-28 2024-05-08 주식회사 파마리서치바이오 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 제제
KR102551301B1 (ko) * 2022-10-28 2023-07-03 주식회사 파마리서치바이오 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 제제

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101175478A (zh) * 2005-10-06 2008-05-07 阿勒根公司 非蛋白稳定的梭菌毒素药物组合物
CN100438905C (zh) * 1998-09-11 2008-12-03 索尔斯蒂斯神经科学公司 稳定的肉毒毒素液体制剂
CN101687046A (zh) * 2007-07-10 2010-03-31 株式会社美地拓斯 稳定性改善的肉毒毒素药物液体组合物
CN102387791A (zh) * 2009-04-17 2012-03-21 德国麦氏大药厂 用于稳定蛋白的不含哺乳动物赋形剂的制剂
CN102793661A (zh) * 2011-05-25 2012-11-28 咸钟旭 A型肉毒毒素的液态产品
CN102869373A (zh) * 2009-06-25 2013-01-09 雷文斯治疗公司 不含白蛋白的肉毒杆菌毒素制剂

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2733914B1 (fr) * 1995-05-11 1997-08-01 Sanofi Sa Composition de liquide stable contenant de l'urate oxydase et composition lyophilisee pour sa preparation
US20120238504A1 (en) * 1998-09-11 2012-09-20 Solstice Neurosciences, Llc Stable Formulations of Botulinum Toxin in Hydrogels
RU2220163C1 (ru) * 2002-04-16 2003-12-27 Закрытое акционерное общество "Полицелл" - дочернее общество ОАО "Полимерсинтез" Композиция на основе метилцеллюлозы и способ ее получения
US20040086532A1 (en) 2002-11-05 2004-05-06 Allergan, Inc., Botulinum toxin formulations for oral administration
GB2416122A (en) 2004-07-12 2006-01-18 Ipsen Ltd Botulinum neurotoxin composition
US8168206B1 (en) * 2005-10-06 2012-05-01 Allergan, Inc. Animal protein-free pharmaceutical compositions
EP2373294B1 (en) * 2008-12-10 2016-04-20 Allergan, Inc. Clostridial toxin pharmaceutical compositions
PT3241547T (pt) 2011-03-31 2020-08-26 Medy Tox Inc Preparação liofilizada de toxina botulínica
CN104470506A (zh) 2012-06-25 2015-03-25 新兴产品开发盖瑟斯堡有限公司 温度稳定性疫苗制剂
KR101339349B1 (ko) 2013-08-02 2013-12-09 주식회사 대웅 보툴리눔 독소의 제조방법
US9480731B2 (en) 2013-12-12 2016-11-01 Medy-Tox, Inc. Long lasting effect of new botulinum toxin formulations
WO2017179775A1 (en) 2016-04-12 2017-10-19 Hugel Inc. Microstructure formulation techniques for botulinum toxin
KR101744900B1 (ko) 2017-01-20 2017-06-08 주식회사 대웅 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100438905C (zh) * 1998-09-11 2008-12-03 索尔斯蒂斯神经科学公司 稳定的肉毒毒素液体制剂
CN101175478A (zh) * 2005-10-06 2008-05-07 阿勒根公司 非蛋白稳定的梭菌毒素药物组合物
CN101687046A (zh) * 2007-07-10 2010-03-31 株式会社美地拓斯 稳定性改善的肉毒毒素药物液体组合物
CN102387791A (zh) * 2009-04-17 2012-03-21 德国麦氏大药厂 用于稳定蛋白的不含哺乳动物赋形剂的制剂
CN102869373A (zh) * 2009-06-25 2013-01-09 雷文斯治疗公司 不含白蛋白的肉毒杆菌毒素制剂
CN102793661A (zh) * 2011-05-25 2012-11-28 咸钟旭 A型肉毒毒素的液态产品

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017394571B2 (en) 2019-12-19
US20200121599A1 (en) 2020-04-23
EP3570816A1 (en) 2019-11-27
CA3049755C (en) 2021-12-21
TWI653048B (zh) 2019-03-11
WO2018135722A1 (en) 2018-07-26
CN110312505A (zh) 2019-10-08
JP2020505382A (ja) 2020-02-20
AU2017394571A1 (en) 2019-07-25
TW201827073A (zh) 2018-08-01
BR112019014876A2 (pt) 2020-05-19
EP3570816C0 (en) 2023-08-16
JP6877560B2 (ja) 2021-05-26
SA519402275B1 (ar) 2024-08-26
US11185503B2 (en) 2021-11-30
EP3570816A4 (en) 2020-10-21
RU2728776C1 (ru) 2020-07-31
EP3570816B1 (en) 2023-08-16
ES2961458T3 (es) 2024-03-12
MX2019008416A (es) 2019-09-13
CA3049755A1 (en) 2018-07-26
KR101744900B1 (ko) 2017-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110312505B (zh) 包含肉毒杆菌毒素的稳定液体组合物
EP2627318B1 (en) Formulation suitable for stabilizing proteins, which is free of mammalian excipients
US9198856B2 (en) Formulation for stabilizing proteins, which is free of mammalian excipient
CA2532475C (en) Formulation for a protein pharmaceutical without added human serum albumin (hsa)
EP3756656B1 (en) Lyophilized preparation of botulinum toxin
JP6043627B2 (ja) アルブミン非含有ボツリヌス毒素製剤
KR102551301B1 (ko) 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 제제
TWI826919B (zh) 用於長期保存的肉毒桿菌毒素冷凍乾燥製劑及其製備方法
KR20240060315A (ko) 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 제제
KR20240060314A (ko) 보툴리눔 독소를 포함하는 안정한 액상 제제

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40008419

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant