CN110305186A - 前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种前列腺癌PET诊断试剂68Ga‑DOTA‑ANCP‑PSMA及其制备方法和应用。所述68Ga‑DOTA‑ANCP‑PSMA的结构式如下:所述制备方法包括如下步骤:(S1)采用固相合成法合成前体化合物DOTA‑ANCP‑PSMA;(S2)使用直接标记法进行68Ga放射性标记。所述68Ga‑DOTA‑ANCP‑PSMA具有标记速度快、标记率高的特点,同时具有稳定性好、较好的亲水性、高灵敏度和高特异性等优点。另外,68Ga‑DOTA‑ANCP‑PSMA在血液中清除较快,肿瘤摄取较高。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,具体涉及一种前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA及其制备方法和应用。
背景技术
前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤,截至2018年,全球范围内每年新增病例42.75万人,每年因患前列腺癌死亡人数达到36.18万人,是男性癌症中发病率第二、死亡率第五高的癌症。前列腺特异性抗原(PSA)筛查可以为大部分患者提供早期诊断,但对于会出现高风险或转移灶的部分患者,导致无法给出准确的诊断。早期准确的诊断和分期对于选择有效的治疗至关重要。传统的成像方式如计算机断层扫描(CT)和核磁共振(MRI)存在一定的缺陷,特别是在低PSA水平下,漏诊和误诊率较高。使用正电子发射断层扫描(PET)对于诊断前列腺癌有非常好的前景,使用传统诊断试剂,如胆碱(11C/18F-Choline)或氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)进行正电子发射断层扫描(PET)对于中晚期的前列腺癌有很好的效果,然而对于早期的前列腺癌及其转移性病灶仍存在一定的局限性。
前列腺特异性膜抗原(PSMA)是II型跨膜糖蛋白,最早在人类前列腺癌细胞系LNCaP中发现,PSMA在前列腺癌细胞中显著升高,可以作为诊断和治疗的理想靶点。谷氨酸-脲及其类似物(Glu-Urea-R)是靶向PSMA的小分子抑制剂,尤其是含谷氨酸-脲-赖氨酸序列的小分子抑制剂,能高效、特异性地与PSMA结合。Glu-Urea-R具有生物学活性稳定、体内循环半衰期短、组织渗透性好的特点,在前列腺癌分子影像学诊断方面具有更好的应用价值。使用正电子核素68Ga标记PSMA小分子抑制剂可以与前列腺癌细胞特异性结合,通过PET-CT显像对前列腺癌及其转移灶的的诊断有重要意义,68Ga-PSMA已成为国际研究的热点。目前,国际上关注较多的68Ga标记的PSMA诊断试剂主要有68Ga-PSMA-11(68Ga-HBED-CC(Ahx)-PSMA)和68Ga-PSMA-617,目前已经有较多的临床研究,在前列腺癌及其转移灶的诊断显示出高灵敏度和特异性,取得了很好的效果。
PSMA-11已经在临床上有较多应用,而且不受专利保护,取得了较好的效果,但适合用于诊断,不适用于靶向治疗。PSMA-617已经在前列腺癌的诊断与治疗方面取得了一定的进展,但已受专利保护。研制68Ga标记的PSMA小分子标记物对前列腺癌及其转移灶的诊断和分期具有重要意义,筛选具有研究价值和开发前景的诊疗一体化的PSMA小分子标记物对前列腺癌的诊治提供重要基础。
Glu-Urea-Lys作为PSMA靶点的小分子抑制剂,以其为核心设计新型小分子抑制剂,可以与PSMA高效、快速的结合;在PSMA-617的基础上,增加苯丙氨酸延长侧链的长度,适当提高亲脂性,而且增加苯丙氨酸作为侧链可以提高与血浆蛋白的结合,延长肿瘤持续积累的时间,为诊疗一体化标记物的研制奠定基础;DOTA是常见的螯合基团,与Ga3+螯合的稳定常数Ki达到21.33,可以与68Ga 3+形成稳定的标记物。
发明内容
针对背景技术中存在的问题,本发明的目的在于提供一种新型的具有较好体内体外性质的68Ga标记的PSMA小分子化合物,并适当提升其亲脂性,获得高灵敏度和高特异性的PSMA探针,设计了以谷氨酸-脲-赖氨酸(Glu-Urea-Lys)为核心基团,以1-萘基丙氨酸,4-胺甲基环己甲酸,苯丙氨酸(Ala(Nap)-Cyh-Phe,以下简称ANCP)为侧链的PSMA小分子抑制剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA。
为了实现上述目的,本发明的具体技术方案如下:
一种前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA,所述68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的具体结构式如下:
一种化合物DOTA-ANCP-PSMA,所述DOTA-ANCP-PSMA的具体结构式如下:
本发明的第二个目的是提供如上所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的制备方法,所述方法包括如下步骤:
(S1)采用固相合成法合成前体化合物DOTA-ANCP-PSMA;
化合物3的制备:
称量取代度为0.3mmol/g起始原料Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin3g,加入至反应器中,加入DMF,浸泡30min;之后抽干DMF,加3倍体积的20%Pip/DMF,充氮气保护,用以脱除Fmoc,反应30min,抽干20%Pip/DMF,DMF洗涤5次,茚三酮检测显示深蓝色;按比例投入N,N'-琥珀酰亚胺基碳酸酯DSC、N,N-二异丙基乙胺DIPEA和4-二甲氨基吡啶DMAP,加入适量DMF,在氮气保护下,反应1h;将H-Glu(OtBu)-OtBu·HCl加入至反应器中,加入适量DMF,在氮气保护下,反应1h,获得化合物3;
化合物4的制备:
将化合物3用切割液E液切割反应1h,使用茚三酮检测法确定是否完全连接,若未完全连接,重新投料直至完全连接;完全连接后,加入3倍体积2%水合肼、DMF溶液,反应30min,脱去Dde保护,DMF洗涤5次,获得化合物4;
化合物5的制备:
按照多肽固相合成法加入侧链所需的氨基酸、化合物4、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基异脲六氟磷酸盐HBTU、N-甲基吗啡啉NMM;按照上述方法依次连接1-萘基丙氨酸,4-胺甲基环己甲酸,苯丙氨酸,加入3当量的氨基酸,加入适量DMF,反应1h;将合成产物转移至切割管中,加入E液,震荡切割反应1h;将切割液收集至离心管中,加入6倍体积冰乙醚,低速离心机沉淀;将沉淀的粗品用乙醚洗三遍,得到前体化合物5的粗产物;通过半制备色谱柱纯化得到化合物5;
化合物6的制备:
在化合物5的基础上,加入3当量的螯合剂DOTA,加入适量DMF,反应1h;将合成产物转移至切割管中,加入E液,震荡切割反应1h;将切割液收集至离心管中,加入6倍体积冰乙醚,低速离心机沉淀;将沉淀的粗品用乙醚洗三遍;通过半制备色谱柱纯化得到化合物6;
所述化合物6即为前体化合物DOTA-ANCP-PSMA;
(S2)使用直接标记法进行68Ga放射性标记;
打开反应器并将温度设定在95℃;取出冷冻的化合物6DOTA-ANCP-PSMA冻干制剂,用超纯水配制成5mg/mL溶液,取4μL置于1.5mL EP反应管中,向反应管中加入90μL 1.0mol/LHEPES缓冲溶液;取3.5mL 0.05mol/L HCl溶液,淋洗68Ge-68Ga发生器;取1.0mL淋洗的68Ga0.05mol/L HCl溶液,约111-185MBq加入反应管,并置于95℃的加热模块中;200rpm转速下反应15min;将反应后的溶液取出并用活度计测量总活度,测定pH值,然后注入到活化的Sep-pak C18柱中,以3.0mL纯水冲洗C18柱,以清洗杂质;在C18柱上安装0.22μm微孔滤膜,以1.0mL 95%的乙醇溶液淋洗,收集到无菌真空瓶中;用于动物实验时,将95%的乙醇淋洗的组分置于加热模块上,以氮气吹干,用生理盐水复溶,得到目标标记物68Ga-DOTA-ANCP-PSMA;
合成路线为:
作为一种优选的方案,在所述化合物3的制备中,Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin、DSC、DIPEA、DMAP的摩尔比为1:6:12:1;
Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin、H-Glu(OtBu)-OtBu·HCl、DIPEA、DMAP的摩尔比为1:3:9:1。
作为一种优选的方案,在化合物4的制备中,所述切割液E液中纯TFA、茴香硫醚、水、苯酚、1,2-乙二硫醇的摩尔配比为35:2:1:1:1。
作为一种优选的方案,在所述化合物5的制备中,化合物4、氨基酸、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基异脲六氟磷酸盐、N-甲基吗啡啉的摩尔比为1:3:2.85:6。
本发明的第三个目的是提供一种如上所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在前列腺癌诊断、分期和疗效评价中的应用。
本发明的有益效果在于:
68Ga标记的68Ga-DOTA-ANCP-PSMA具有标记速度快、标记率高的特点,15分钟完成标记与纯化,放化纯大于95%。稳定性好,在2小时内放化纯始终保持在95%左右,化合物的有较好的亲水性。68Ga-DOTA-ANCP-PSMA主要通过肾脏排泄,其它非靶器官摄取均较低,在肿瘤中有一定的摄取。在PET-CT的诊断研究中,显示出较好的灵敏度和特异性,在肿瘤位置有清晰的影像,除了肾脏和膀胱外,其它器官和组织摄取均较低。68Ga-DOTA-ANCP-PSMA具有较好的体内外性质,有望成为新型的前列腺癌特异性靶向诊断试剂。
附图说明
图1为前体化合物DOTA-ANCP-PSMA的质谱图;
图2前体化合物DOTA-ANCP-PSMA的HPLC图谱;
图3为纯化后68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的HPLC图谱;
图4为PBS和BSA中的68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的稳定性;
图5为68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在60分钟时荷瘤裸鼠体内的PET-CT显像。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步了解,下面提供的实施例对其做了更详细的说明。这些实施例仅供叙述而并非用来限定本发明的范围或实施原则,本发明的保护范围仍以权利要求为准。
实施例1
本实施例提供一种前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的制备方法,所述方法包括如下步骤:
(S1)采用固相合成法合成前体化合物DOTA-ANCP-PSMA;
化合物3的制备
合成路线如下所示,以Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin(化合物1)为起始原料,称量取代度为0.3mmol/g原料的3g,加入至反应器中,加入DMF,浸泡30min。之后抽干DMF,加3倍体积的20%Pip/DMF,充氮气保护,用以脱除Fmoc,反应30min,抽干20%Pip/DMF,DMF洗涤5次,茚三酮检测显示深蓝色。按比例投入N,N'-琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)和4-二甲氨基吡啶(DMAP),投入比例为树脂:DSC:DIPEA:DMAP=1:6:12:1,加入适量DMF,在氮气保护下,反应1h。将H-Glu(OtBu)-OtBu·HCl(化合物2)加入至反应器中,投入比例为化合物1:化合物2:DIPEA:DMAP=1:3:9:1,加入适量DMF,在氮气保护下,反应1h,获得化合物3。
化合物4的制备
将化合物3用切割液E液(摩尔配比为纯TFA:茴香硫醚:水:苯酚:EDT(1,2-乙二硫醇)=35:2:1:1:1)切割反应1h,使用茚三酮检测法确定是否完全连接,若未完全连接,重新投料直至完全连接。完全连接后,加入3倍体积2%水合肼、DMF溶液,反应30min(15min换一次液),脱去Dde保护,DMF洗涤5次,获得化合物4。
化合物5的制备
之后加入按照多肽固相合成法加入侧链所需的氨基酸及其它试剂,氨基酸投料摩尔比为:化合物4:氨基酸:HBTU(苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基异脲六氟磷酸盐):NMM(N-甲基吗啡啉)=1:3:2.85:6。按照上述方法依次连接1-萘基丙氨酸,4-胺甲基环己甲酸,苯丙氨酸,加入3当量的氨基酸,加入适量DMF,反应1h。将合成产物转移至切割管中,加入E液,震荡切割反应1h;将切割液收集至离心管中,加入6倍体积冰乙醚,低速离心机沉淀;将沉淀的粗品用乙醚洗三遍,得到前体化合物5的粗产物。通过半制备色谱柱纯化得到化合物5PSMA-Ala(Nap)-Cyh-Phe。
化合物6的制备
PSMA-Ala(Nap)-Cyh-Phe-DOTA(化合物6)的合成采用固相合成法。按照化合物5的制备方法,在化合物5的基础上,依次加入3当量螯合剂DOTA,加入适量DMF,反应1h。将合成产物转移至切割管中,加入E液,震荡切割反应1h;将切割液收集至离心管中,加入6倍体积冰乙醚,低速离心机沉淀;将沉淀的粗品用乙醚洗三遍。通过半制备色谱柱纯化得到化合物6。通过负离子模式质谱等方法进行结构确认,通过HPLC定量分析。
结果如图1所示,在质谱图中可以看出,593.4处为(M-2H)/2峰,1187.0处为M-H峰,其分子量实为1188.6,根据质谱结构确证其结构正确。从色谱图结果中可以看出,纯度大于95%。色谱方法:流动相:0.1%TFA的水和含0.1%TFA的乙腈溶液,0-13min:20-55%乙腈相,13-15min:55%乙腈相,15-18min:55-20%乙腈相。
(S2)使用直接标记法进行68Ga放射性标记;
打开反应器并将温度设定在95℃;取出冷冻的DOTA-ANCP-PSMA冻干制剂,用超纯水配制成5mg/mL溶液,取4μL置于1.5mL EP反应管中,向反应管中加入90μL 1.0mol/LHEPES缓冲溶液。取3.5mL 0.05mol/L HCl溶液,淋洗68Ge-68Ga发生器(前1.5mL淋洗液可以弃去,取后2.0mL使用);取1.0mL淋洗的68Ga 0.05mol/L HCl溶液,约111-185MBq加入反应管,并置于95℃的加热模块中。200rpm转速下反应15min。将反应后的溶液用2mL注射器取出并用活度计测量总活度,精密pH试纸测定pH值,然后注入到活化的Sep-pak C18柱中,以3.0mL纯水冲洗C18柱,以清洗杂质;在C18柱上安装0.22μm微孔滤膜,以1.0mL 95%的乙醇溶液淋洗,收集到无菌真空瓶中。用于动物实验时,将95%的乙醇淋洗的组分置于加热模块上,以氮气吹干,用生理盐水复溶,得到目标标记物68Ga-DOTA-ANCP-PSMA。
使用HPLC分别测定标记率和放射化学纯度。标记后经HPLC测量计算,标记率达到97%。纯化后的放射化学纯度HPLC结果如图2所示,前体化合物的保留时间为11.748分钟,在图3中可以看出,纯化后的68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在放射性检测器上显示的保留时间为12.104分钟,由于色谱仪的紫外检测器与放射性检测器为串联方式,同一化合物的保留时间相差0.3-0.3分钟,放射性标记的保留时间与前体化合物的保留时间一致。68Ga-DOTA-ANCP-PSMA放射化学纯度可达95.3%,其中保留时间2.8分钟处为游离的68Ga3+,含量为1.4%,11.8分钟处的杂质为前体化合物中的多肽杂质与68Ga3+螯合形成的放射性杂质,含量为3.3%。纯化后的产品收率为75%-81%(衰减校正后)。
合成路线如下:
实施例2
体外稳定性测定:
68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的放射化学稳定性在小牛血清和磷酸缓冲液两种体系中开展。PBS法:置于0.5mL的磷酸缓冲液(PBS,pH=7.4)中,置于37℃下,孵育30、60、90、120、150min后,采用HPLC测定其放射化学纯度,以测定其体外稳定性。血清法:置于0.5mL的小牛血清溶液中,在pH=7,37℃条件下孵育。孵育30、60、90、120、150min时,采用HPLC测定其放射化学纯度,以测定其体外稳定性。
根据图4结果所示,从30分钟开始至150分钟,放化纯略有降低,但稳定性始终保持在95%以上,68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在PBS体系中的稳定性良好。在血清体系中,从30分钟开始,放射化学纯度有一定降低,1.5小时的放化纯已低于95%。68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在血清中的稳定性稍差,但在1.5小时维持在95%左右,可以满足PET诊断的要求。
实施例3
脂水分配系数的测量:
标记物68Ga-DOTA-ANCP-PSMA通过Sep-Pak C18Cartridge分离纯化得到,使用95%乙醇洗脱。将获得的标记物通过干燥的氮气吹干,使用相同体积的(0.5mL:0.5mL)正辛醇和磷酸缓冲溶液(pH=7.4)将得到的标记物溶于1.5mL EP管(约3.7MBq)中。充分震荡5min,在离心机中离心分层5min,转速为2000rpm。分别取有机相和水相各100uL于1mL EP管中,在井型γ探测器中分别测量其放射性计数,由有机相和水相的放射性计数的比值来计算脂水分配系数P。P=log(NO/NW)(NO和NW分别为有机相和水相样品的计数)。重复操作3次,取平均值为该标记物的脂水分配系数。
根据所测得的数据计算得,脂水分配系数为-1.42±0.02。与68Ga-PSMA-11脂水分配系数-4.10,68Ga-PSMA-617脂水分配系数-2.00相比,具有更高的亲脂性。
实施例4
荷瘤裸鼠的生物分布:
将LNCaP肿瘤块皮下接种到7-8周的裸鼠右腋下,肿瘤生长1至2周,达到长径0.8-1.0cm使用。取荷瘤裸鼠12只,3只一组,取0.15mL(111-185kBq)的68Ga-DOTA-ANCP-PSMA通过尾静脉注射。在5min 15min,30min,60min断颈处死,处死后分别取心脏、肺、肝、脾、肾、胰腺、胃、小肠、大肠、膀胱、骨、肌肉、肿瘤等器官,并进行取血。将各器官进行称重,放射性计数,计数通过标准液进行标准校正,经过计算得到ID%。
68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在荷瘤裸鼠体内分布结果如表1所示,68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在血液中清除较快,主要通过肾脏代谢,肝脏摄取较低,在心脏、肺、脾、胰腺、胃、小肠、大肠中摄取均较低,远低于血液摄取;肌肉、骨等摄取也较低。血液中均未显示出长时间的高摄取,血液清除较快,表明68Ga标记的化合物在体内稳定性较好,没有产生游离的Ga3+在血液中富集。在肿瘤中有较高的摄取,在5min、15min、30min的摄取值分别可达11.51±1.12%ID/g、6.13±0.75%ID/g、2.30±0.06%ID/g,随着时间肿瘤摄取有一定的下降,在5min左右摄取达到最高值,之后逐渐开始降低。瘤/血比在15min时达到最高,为0.71。瘤/肌肉比和瘤/骨比均较高,15min时达到最高,分别达到3.41和2.26,15min后随着时间而逐渐降低。
表1 68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的荷瘤裸鼠生物分布结果
实施例5
PET-CT显像:
MicroPET显像研究时,取0.15mL(约3.7MBq)的68Ga-DOTA-ANCP-PSMA通过尾静脉注射到荷LNCaP瘤的小鼠中。异氟烷麻醉后的动物俯卧式固定在动物PET扫描仪上,从注射后60分钟开始扫描15分钟静态PET-CT影像。
68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在60分钟的显像结果显示(如图5),68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在荷瘤裸鼠体内主要分布在肾脏和膀胱,与动物分布实验结果一致,该化合物主要通过肾脏排泄。在其它非靶器官摄取较低,在肿瘤部位有较高摄取,可以清晰观察肿瘤的位置。在阻断实验中,荷瘤裸鼠体内的肿瘤摄取较低。在60分钟时相,由于非靶器官摄取降低,肿瘤部位有清晰的影像。
Claims (7)
1.一种前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA,其特征在于,所述68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的具体结构式如下:
2.一种化合物DOTA-ANCP-PSMA,其特征在于,所述DOTA-ANCP-PSMA的具体结构式如下:
3.一种如权利要求1所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(S1)采用固相合成法合成前体化合物DOTA-ANCP-PSMA;
化合物3的制备:
称量取代度为0.3mmol/g起始原料Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin3 g,加入至反应器中,加入DMF,浸泡30min;之后抽干DMF,加3倍体积的20%Pip/DMF,充氮气保护,用以脱除Fmoc,反应30min,抽干20%Pip/DMF,DMF洗涤5次,茚三酮检测显示深蓝色;按比例投入N,N'-琥珀酰亚胺基碳酸酯DSC、N,N-二异丙基乙胺DIPEA和4-二甲氨基吡啶DMAP,加入适量DMF,在氮气保护下,反应1h;将H-Glu(OtBu)-OtBu·HCl加入至反应器中,加入适量DMF,在氮气保护下,反应1h,获得化合物3;
化合物4的制备:
将化合物3用切割液E液切割反应1h,使用茚三酮检测法确定是否完全连接,若未完全连接,重新投料直至完全连接;完全连接后,加入3倍体积2%水合肼、DMF溶液,反应30min,脱去Dde保护,DMF洗涤5次,获得化合物4;
化合物5的制备:
按照多肽固相合成法加入侧链所需的氨基酸、化合物4、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基异脲六氟磷酸盐HBTU、N-甲基吗啡啉NMM;按照上述方法依次连接1-萘基丙氨酸,4-胺甲基环己甲酸,苯丙氨酸,加入3当量的氨基酸,加入适量DMF,反应1h;将合成产物转移至切割管中,加入E液,震荡切割反应1h;将切割液收集至离心管中,加入6倍体积冰乙醚,低速离心机沉淀;将沉淀的粗品用乙醚洗三遍,得到前体化合物5的粗产物;通过半制备色谱柱纯化得到化合物5;
化合物6的制备:
在化合物5的基础上,加入3当量的螯合剂DOTA,加入适量DMF,反应1h;将合成产物转移至切割管中,加入E液,震荡切割反应1h;将切割液收集至离心管中,加入6倍体积冰乙醚,低速离心机沉淀;将沉淀的粗品用乙醚洗三遍;通过半制备色谱柱纯化得到化合物6;
所述化合物6即为前体化合物DOTA-ANCP-PSMA;
(S2)使用直接标记法进行68Ga放射性标记;
打开反应器并将温度设定在95℃;取出冷冻的化合物6 DOTA-ANCP-PSMA冻干制剂,用超纯水配制成5mg/mL溶液,取4μL置于1.5mL EP反应管中,向反应管中加入90μL 1.0mol/LHEPES缓冲溶液;取3.5mL 0.05mol/L HCl溶液,淋洗68Ge-68Ga发生器;取1.0mL淋洗的68Ga0.05mol/L HCl溶液,约111-185MBq加入反应管,并置于95℃的加热模块中;200rpm转速下反应15min;将反应后的溶液取出并用活度计测量总活度,测定pH值,然后注入到活化的Sep-pak C18柱中,以3.0mL纯水冲洗C18柱,以清洗杂质;在C18柱上安装0.22μm微孔滤膜,以1.0mL 95%的乙醇溶液淋洗,收集到无菌真空瓶中;用于动物实验时,将95%的乙醇淋洗的组分置于加热模块上,以氮气吹干,用生理盐水复溶,得到目标标记物68Ga-DOTA-ANCP-PSMA;
合成路线为:
4.根据权利要求3所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的制备方法,其特征在于,在所述化合物3的制备中,Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin、DSC、DIPEA、DMAP的摩尔比为1:6:12:1;
Fmoc-Lys(Dde)-Wang Resin、H-Glu(OtBu)-OtBu·HCl、DIPEA、DMAP的摩尔比为1:3:9:1。
5.根据权利要求3所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的制备方法,其特征在于,在化合物4的制备中,所述切割液E液中纯TFA、茴香硫醚、水、苯酚、1,2-乙二硫醇的摩尔配比为35:2:1:1:1。
6.根据权利要求3所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA的制备方法,其特征在于,在所述化合物5的制备中,化合物4、氨基酸、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基异脲六氟磷酸盐、N-甲基吗啡啉的摩尔比为1:3:2.85:6。
7.一种如权利要求1所述的前列腺癌PET诊断试剂68Ga-DOTA-ANCP-PSMA在前列腺癌诊断、分期和疗效评价中的应用。
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