CN110302208A - 一种血塞通软胶囊制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种血塞通软胶囊及其制备方法与应用。所述的血塞通软胶囊包括如下质量百分比的药物组分：人参皂苷Rb2 0.001~99.996%、人参皂苷Rb1 0.001~99.996%、人参皂苷Rg1 0.001~99.996%、人参皂苷Rc 0.001~99.996%和三七皂苷R1 0.001~99.996%。本发明的血塞通软胶囊对心肌梗塞、脑中风、脑梗塞、脑偏瘫疾等缺血性心脑血管病以及由于缺血性心脑血管病、糖尿病等原因引起的视网膜病变或视神经损伤疾病有显著疗效，具有广阔的应用前景。与现有技术及产品相比，本发明的血塞通软胶囊疗效更好，安全性更高，能更好地满足临床用药的要求。本发明提供的制备方法工艺简单、条件温和，便于操作，质量稳定可控，适合于产业化大规模生产。

Description

一种血塞通软胶囊制剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种血塞通软胶囊制剂及其制备方法与应用。

背景技术

三七为五加科植物 Panax Notoginseng(Burk)F． H Chen的干燥根及根茎，又名参三七、田七，是中医治疗心脑血管疾病的名贵中药，有散瘀止血，消肿定痛的功效。《玉揪药解》记载，三七能“和营止血，通脉行瘀，行瘀血而敛新血。凡产后、经期、跌打、痈肿，一切瘀血皆破;凡吐衄、崩漏、刀伤、箭伤，一切新血皆止。”

三七总皂苷(PNS)是从中药三七中提取的一系列皂苷及其苷元类成分的总称，其组成成分较为多样复杂，有的成分已经分离确认，但仍有大量未知成分尚未被人类搞清楚。迄今为止，人们已从 PNS 中分离并鉴别出100多个皂苷单体成分，如人参皂苷Rb1，Rb2，Rb3，Rc，Rd，Re，Ro ，Rh1，Rg1，Rg2，Rg3，Rg4，Rg5，三七皂苷R1，R2，R3，R4等。这些皂苷，根据其苷元的不同，主要分为三醇型和二醇型。二醇型(PDS) 主要有人参二醇皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rh2等，三醇型(PTS)主要有人参三醇皂苷Re、Rg1、Rg2、Rh1、R1 等。有文献报道，栽培根中三七皂苷含量由高到低为Rg1(43.36%)，Rb1(41.08%)，R1(3.65%)，Re(3. 42%)，Rh1(0. 22%)，其他皂苷 8.26%。也有文献研究表明， PNS 主要含人参皂苷Rb1(约 30%)、人参皂苷Rg1(约20%)、三七皂苷R1(约5 %)和人参皂苷Re(约2.5%)。还有文献认为，三七地下部分以三醇皂苷为主，与二醇型的含量比约为 3∶1，而地上部分则相反，以二醇型(PDS)为主。

目前市售的血塞通产品是一种以三七总皂苷(PNS)为药物原料，辅以必要的药用辅料而制成的中药制剂。目前已上市的血塞通产品有冻干剂、注射剂、胶囊、软胶囊、片剂、滴丸等剂型，具有活血祛瘀，通脉活络的功效，临床用于瘀血阻滞所致的缺血性中风病（脑梗塞）中经络恢复期，症见半身不遂、偏身麻木、口舌歪斜，语言蹇涩等。然而，目前市场上来源于不同厂家的三七总皂苷(PNS)原料，由于提取三七总皂苷所用药材三七的产地不同、用药部位不同、采收时间和年限不同，以及提取方法和工艺条件不同，所得三七总皂苷(PNS)的化学成分不尽相同，即使是同一厂家生产的不同批次的三七总皂苷(PNS)，其化学成分和三七总皂苷的组成、含量也是千差万别的。正是由于以上原因，导致市售血塞通产品的药效成分和组成不固定，不清晰，不同厂家或不同批次间产品的药效成分和组成配比千差万别致，严重影响到了产品临床疗效的发挥，并引发一系列不良反应和安全性问题，因此，急切需要科研工作者加以研究解决。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血塞通软胶囊制剂及其制备方法与应用。

本发明所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 0.001~99.996%

人参皂苷Rb1 0.001~99.996%

人参皂苷Rg1 0.001~99.996%

人参皂苷Rc 0.001~99.996%

三七皂苷 R1 0.001~99.996%。

优选地，该药物组合物包括如下质量百分比的单体药物组分：

人参皂苷Rb2 0.01~99.96%

人参皂苷Rb1 0.01~99.96%

人参皂苷Rg1 0.01~99.96%

人参皂苷Rc 0.01~99.96%

三七皂苷 R1 0.01~99.96%

更为优选地，该药物组合物包括如下质量百分比的单体药物组分：

人参皂苷Rb2 54.6 %

人参皂苷Rb1 21.1%

人参皂苷Rg1 11.3%

人参皂苷Rc 8.5%

三七皂苷 R1 4.5%

或：

人参皂苷Rb2 20.5 %

人参皂苷Rb1 47.8%

人参皂苷Rg1 23.4%

人参皂苷Rc 6.7%

三七皂苷 R1 1.6%

或：

人参皂苷Rb2 1.2 %

人参皂苷Rb1 14.6%

人参皂苷Rg1 55.7%

人参皂苷Rc 19.3%

三七皂苷 R1 9.2%

或：

人参皂苷Rb2 21.1 %

人参皂苷Rb1 2.5%

人参皂苷Rg1 28.2%

人参皂苷Rc 37.6%

三七皂苷R1 10.6%

或：

人参皂苷Rb2 20.9 %

人参皂苷Rb1 2.7%

人参皂苷Rg1 21.5%

人参皂苷Rc 10.2%

三七皂苷 R1 44.7%

本发明中，人参皂苷Rb2为单体化合物，化学结构见下式所示，英文名GinsenosideRb2，英文化学名称为20-((6-O-alpha-L-Arabinopyranosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy)-12beta-hydroxydammar-24-en-3beta-yl 2-O-beta-D-glucopyranosyl-beta-D-glucopyranoside，分子式C₅₃H₉₀O₂₂，分子量1079.27；

人参皂苷Rb1化学结构见下式所示，英文名Ginsenoside Rb1，英文化学名称为(3beta,12beta)-20-[(6-O-beta-D-Glucopyranosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-12-hydroxydammar-24-en-3-yl2-O-beta-D-glucopyranosyl-beta-D-glucopyranoside，分子式C54H92O23，分子量1109.29；

人参皂苷Rg1化学结构见下式所示，英文名Ginsenoside Rg1，别名三七皂苷C1 ，英文别名Sanchinoside C1，分子式C₄₂H₇₂O₁₄，分子量801.01；

人参皂苷Rc，化学结构见下式所示，英文名Ginsenoside Rc，英文化学名称为20-[(6-O-alpha-L-Arabinofuranosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-12b-hydroxydammar-24-en-3b-yl 2-O-beta-D-glucopyranosyl-beta-D-glucopyranoside，分子式C₅₃H₉₀O22，分子量1079.27；

三七皂甙 R1，化学结构见下式所示，英文名Notoginsenoside R1，英文化学名称为glucopyranosyloxy)-3,12-dihydroxydammar-24-en-6-yl2-O-β-D-xylopyranosyl-;(3β,6α,12β)-20-(β-D-Glucopyranosyloxy)-3,12-dihydroxydammar-24-en-6-yl 2-O-β-D-xylopyranosyl-β-D-glucopyranoside，分子式C₄₇H₈₀O₁₈，分子量933.131。

上述人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rc和三七皂苷R1化合物，可通过植物提取方法，如从三七、人参、西洋参、太子参、刺五加、土三七、菊三七、血三七、高丽参等植物中提取分离得到，也可通过人工全合成、半合成或生物合成等方法制备得到。目前，可从市场上直接购买得到，纯度可达98 %以上。

本发明以市售三七总皂苷药物为对照，采用ICR小鼠腹腔注射给药，进行了本发明药物组合物静脉注射给药的急性毒性实验研究，结果表明：本发明的药物组合物ICR小鼠单次静脉注射的LD50为397mg/kg，显著高于市售三七总皂苷的LD50值306mg/kg，说明本发明药物组合物具有极高的药用安全性，其安全性优于现有的三七总皂苷药物。详见实验例4。

此外，本发明还以市售三七总皂苷药物为对照，进行了本发明药物组合物的血管刺激性、溶血性和过敏性实验研究，结果表明，本发明药物组合物无明显刺激性、溶血性和过敏性等不良反应，完全符合药用安全性要求，各项不良反应安全性评价指标均优于三七总皂苷对照药物。详见实验例5。

所述的血塞通药物组合物的制备方法包括如下步骤：

步骤1): 称取三七皂苷R1，置于乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

步骤2): 称取人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rc，置蒸馏水中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

步骤3):上述滤液，置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

传统的药物组合物制备方法往往采取机械研磨、混合等方式来实现，存在各种成分难以均一混合，产品质量缺乏均一性等问题。尤其是原料在混合、研磨过程中，受机械剪切力和冲击力的作用，原料相互摩擦产生局部过热，导致原料的稳定性和药理活性受到一定破坏。为克服上述缺陷，本发明采用溶剂溶解加低温冷冻干燥的方式来制备药物组合物，一方面保证了组合物的质量均一性，另一方面也充分保证了药物成分的稳定性和药理活性不受破坏。

本发明的血塞通药物制剂是由所述的的血塞通药物组合物与药学上的辅料、载体、基质所制成，包括注射剂、片剂、口服液、胶囊、软胶囊、滴丸、缓释制剂、控释制剂。

本发明的血塞通药物制剂由本发明所述的血塞通药物组合物与药学上的辅料、载体、基质所制成，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等，剂型可为片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸、注射液、冻干粉针剂、口服液、贴剂、膏剂、巴布剂或缓释制剂、控释制剂等。

本发明药物组合物的药物剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂、口服液和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片、缓释片、控释片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊、缓释胶囊、控释胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明药物组合物可以制成普通制剂，也可制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明药物组合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。 还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将本发明药物组合物制成胶囊剂，可以将本发明药物组合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将本发明药物组合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。

为将本发明药物组合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇、聚乙二醇或它们的混合物作溶剂，并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是乙醇、异丙醇、丙二醇、聚乙二醇、泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化物等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物、药物制剂可用任何公知的给药方法给药。

本发明药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明药物组合物的每天的合适剂量范围为0.001~1000mg/Kg体重，优选为0.01~500mg/Kg体重，更优选为0.1~200mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

本发明药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。

本发明的目的是这样实现的，本发明的血塞通软胶囊制剂是以所述的血塞通药物组合物作为药物的有效成分，并辅以辅料和/或助剂加工而成。

具体地讲，本发明的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 0.001~99.996%

人参皂苷Rb1 0.001~99.996%

人参皂苷Rg1 0.001~99.996%

人参皂苷Rc 0.001~99.996%

三七皂苷 R1 0.001~99.996%

作为优选，本发明的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 0.01~99.96%

人参皂苷Rb1 0.01~99.96%

人参皂苷Rg1 0.01~99.96%

人参皂苷Rc 0.01~99.96%

三七皂苷 R1 0.01~99.96%

作为更进一步优选，本发明的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 54.6 %

人参皂苷Rb1 21.1%

人参皂苷Rg1 11.3%

人参皂苷Rc 8.5%

三七皂苷 R1 4.5%

或

人参皂苷Rb2 20.5 %

人参皂苷Rb1 47.8%

人参皂苷Rg1 23.4%

人参皂苷Rc 6.7%

三七皂苷 R1 1.6%

或

人参皂苷Rb2 1.2 %

人参皂苷Rb1 14.6%

人参皂苷Rg1 55.7%

人参皂苷Rc 19.3%

三七皂苷 R1 9.2%

或

人参皂苷Rb2 21.1 %

人参皂苷Rb1 2.5%

人参皂苷Rg1 28.2%

人参皂苷Rc 37.6%

三七皂苷 R1 10.6%

或

人参皂苷Rb2 20.9 %

人参皂苷Rb1 2.7%

人参皂苷Rg1 21.5%

人参皂苷Rc 10.2%

三七皂苷 R1 44.7%

本发明的血塞通软胶囊制剂的制备方法是：称取所述的血塞通药物组合物作为药物的有效成分，加入溶剂中，搅拌均匀，置于压丸机中，与胶囊皮压丸，干燥，即得。

上述血塞通软胶囊制备方法中，所述溶剂为水、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、吐温、芝麻油、花生油、姜油、花椒油、玫瑰油、亚麻油、菜籽油、紫苏油、牡丹籽油、黑桃油、葵花油、藿香油、火麻油、猪油、牛油、羊油、鱼油、鲨鱼油、蛇油等中的任何一种或任何两种以上以任意比例的混合物。

上述血塞通软胶囊制备方法中，所述胶囊皮由胶体与溶剂、调和剂经热溶、调制、塑胶、稳胶而制得。制备胶囊皮的胶体选自动物胶如明胶、牛皮胶、狗皮胶、猪皮胶，也可选自植物胶如卡拉胶、瓜尔多胶、海藻胶、刺槐豆胶、魔芋胶、黄原胶等。制备胶囊皮的溶剂为水、乙醇、丙醇、乙二醇、异丙三醇、正丙三醇、异丁醇、叔丁醇、正丁醇、聚乙二醇中的任何一种或任何两种以上以任意比例的混合物。制备胶囊皮的调和剂包括调色剂如叶黄素、胭脂红、苋菜红、橄榄绿等，也包括调酸剂如柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸、磷酸三钠、磷酸二钠、磷酸一钠、苹果酸、苹果酸钠、乳酸、乳酸钠，也包括调柔剂如纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、蜂蜡、石蜡、硬脂酸、单硬脂肪酸甘油酯等。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂的应用为所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗缺血性脑中风、脑梗塞、脑偏瘫疾病药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗视网膜病变药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗因视神经萎缩、视网膜色素变性或视网膜黄斑引起的视力疲劳或视力下降药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗因糖尿病、心血管疾病、脑血管疾病、神经性疾病引起的视网膜病变药物中的应用。

本发明以市售三七总皂苷等药物为对照，采用SD大鼠心肌缺血动物模型，进行了本发明药物组合物对SD大鼠心肌缺血的保护作用实验研究，结果表明：本发明的药物组合物可显著减少心肌缺血大鼠的心肌梗死面积，对心肌缺血有明显的保护作用；可显著改善心肌缺血大鼠的心功指标，对心肌缺血损伤所致的心功能障碍有明显改善作用；可显著降低大鼠冠脉结扎后血清 LDH，CK，GOT和 HBDH 活性的升高，表明其对结扎冠状动脉所致的心肌缺血有保护作用。实验还表明，本发明药物组合物的上述对心肌缺血的保护作用效果均优于同剂量的市售三七总皂苷等对照药物。以上研究表明，本发明药物组合物可以用于缺血性心脑血管疾病的预防或治疗，其疗效优于现有的三七总皂苷药物。详见实验例1。

本发明还以市售三七总皂苷等药物为对照，采用SD大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型，进行了本发明药物组合物对SD大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用实验研究，结果表明：本发明的药物组合物可显著改善缺血再灌注大鼠的神经症状，对缺血再灌注造成的中风、偏瘫症状有明显治疗作用；可显著降低缺血再灌注大鼠的脑梗死体积；可显著降低缺血再灌注大鼠脑部的伊文思蓝含量，提示本发明的药物组合物对缺血再灌注大鼠的血脑屏障具有保护作用。实验还表明，本发明药物组合物的上述对脑缺血再灌注损伤的保护作用效果均优于同剂量的市售三七总皂苷等对照药物。以上研究表明，本发明药物组合物可以用于缺血性脑中风、脑梗塞、脑偏瘫等缺血性脑血管疾病的预防或治疗，其疗效优于现有的三七总皂苷药物。详见实验例2。

其次，本发明还提供了该药物组合物在用于制备预防或治疗视网膜病变或视神经损伤的药物中的应用，尤其，是其在制备预防或治疗因视神经萎缩、视网膜色素变性或视网膜黄斑引起的视力疲劳或视力下降的药物中的应用以及其在制备预防或治疗因糖尿病、心血管疾病、脑血管疾病、神经性疾病引起的视网膜病变的药物中的应用。

本发明以市售三七总皂苷等药物为对照，采用SD大鼠持续性高眼压视网膜神经损伤动物模型，进行了本发明药物组合物对SD大鼠视网膜神经损伤的保护作用实验研究，结果表明：本发明的药物组合物可显著降低持续性高眼压对视网膜神经的损伤，对神经元损伤有良好的保护和修复作用。本实验还表明，本发明药物组合物的对视神经损伤的保护作用效果优于同剂量的市售三七总皂苷等对照药物。因此，本发明药物组合物可作为视网膜或视神经性病变的治疗药物。详见实验例3。

与现有技术的三七总皂苷药物相比，本发明提供的血塞通药物组合物与制剂具有如下显著优势和特点：

1、药理成分清晰、明确，成分固定，产品质量均一，稳定可控。

2、不含有毒有害非药理成分或未知成分，毒副作用和不良反应低，具有更高的用药安全性能；

3、药理作用明确，临床疗效更高。

现有技术的三七总皂苷，含有100多种皂苷成分及许多未知成分，组份复杂多变，质量难于控制，尤其是许多组分的作用机制、药理作用和彼此间的相互作用和影响至今尚不明确，不良反应频发，这给临床用药的安全性和有效性带来了诸多问题。与现有技术及产品相比，本发明的的血塞通软胶囊药物组合物及其制剂疗效更高，而且成分清晰、固定，产品质量均一、稳定，毒副作用和不良反应低，大大提供了药物使用的安全性。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 0.001~99.996%

人参皂苷Rb1 0.001~99.996%

人参皂苷Rg1 0.001~99.996%

人参皂苷Rc 0.001~99.996%

三七皂苷 R1 0.001~99.996%。

所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 0.01~99.96%

人参皂苷Rb1 0.01~99.96%

人参皂苷Rg1 0.01~99.96%

人参皂苷Rc 0.01~99.96%

三七皂苷 R1 0.01~99.96%。

所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 54.6 %

人参皂苷Rb1 21.1%

人参皂苷Rg1 11.3%

人参皂苷Rc 8.5%

三七皂苷 R1 4.5%。

所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 20.5 %

人参皂苷Rb1 47.8%

人参皂苷Rg1 23.4%

人参皂苷Rc 6.7%

三七皂苷 R1 1.6%。

所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 1.2 %

人参皂苷Rb1 14.6%

人参皂苷Rg1 55.7%

人参皂苷Rc 19.3%

三七皂苷 R1 9.2%。

所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 21.1 %

人参皂苷Rb1 2.5%

人参皂苷Rg1 28.2%

人参皂苷Rc 37.6%

三七皂苷 R1 10.6%。

所述的血塞通药物组合物包括如下质量百分比的药物组分：

人参皂苷Rb2 20.9 %

人参皂苷Rb1 2.7%

人参皂苷Rg1 21.5%

人参皂苷Rc 10.2%

三七皂苷 R1 44.7%。

本发明所述的血塞通药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1): 称取三七皂苷R1，置于乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

步骤2): 称取人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rc，置蒸馏水中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

步骤3):上述滤液，置真空冷冻干燥机内，降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，即得。

步骤1）中三七皂苷R1与乙醇溶剂的质量比为0.05~5:100，乙醇的体积百分浓度为50~100%。

步骤2）中四种人参皂苷与针用活性炭、蒸馏水的质量比为0.1~10:0.01~0.5：100。

步骤3）中预冻降温速率为5~15℃/h。

本发明所述的血塞通药物组合物的制剂，是由所述的的血塞通药物组合物与药学上的辅料、载体、基质所制成，包括注射剂、片剂、口服液、胶囊、软胶囊、滴丸、缓释制剂、控释制剂。

本发明所述的血塞通软胶囊制剂，是以所述的血塞通药物组合物作为药物的有效成分，并辅以辅料和/或助剂加工而成。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 0.001~99.996%

人参皂苷Rb1 0.001~99.996%

人参皂苷Rg1 0.001~99.996%

人参皂苷Rc 0.001~99.996%

三七皂苷 R1 0.001~99.996%。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 0.01~99.96%

人参皂苷Rb1 0.01~99.96%

人参皂苷Rg1 0.01~99.96%

人参皂苷Rc 0.01~99.96%

三七皂苷 R1 0.01~99.96%。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 54.6 %

人参皂苷Rb1 21.1%

人参皂苷Rg1 11.3%

人参皂苷Rc 8.5%

三七皂苷 R1 4.5%。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 20.5 %

人参皂苷Rb1 47.8%

人参皂苷Rg1 23.4%

人参皂苷Rc 6.7%

三七皂苷 R1 1.6%。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 1.2 %

人参皂苷Rb1 14.6%

人参皂苷Rg1 55.7%

人参皂苷Rc 19.3%

三七皂苷 R1 9.2%。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 21.1 %

人参皂苷Rb1 2.5%

人参皂苷Rg1 28.2%

人参皂苷Rc 37.6%

三七皂苷 R1 10.6%。

所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 20.9 %

人参皂苷Rb1 2.7%

人参皂苷Rg1 21.5%

人参皂苷Rc 10.2%

三七皂苷 R1 44.7%。

本发明所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，是称取所述的血塞通药物组合物作为药物的有效成分，加入溶剂中，搅拌均匀，置于压丸机中，与胶囊皮压丸，干燥，即得。

所述溶剂为水、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、吐温、花生油、姜油、花椒油、玫瑰油、菜籽油、牡丹籽油、黑桃油、葵花油、藿香油、猪油、牛油、羊油、鱼油、鲨鱼油、蛇油中的任何一种或任何两种以上以任意比例的混合物。

所述胶囊皮由胶体与溶剂、调和剂经热溶、调制、塑胶、稳胶而制得。

制备胶囊皮的胶体选自动物胶或植物胶。

所述的动物胶包括明胶、牛皮胶、狗皮胶、猪皮胶。

所述的植物胶包括卡拉胶、瓜尔多胶、海藻胶、刺槐豆胶、魔芋胶、黄原胶。

制备胶囊皮的溶剂为水、乙醇、丙醇、乙二醇、异丙三醇、正丙三醇、异丁醇、叔丁醇、正丁醇、聚乙二醇中的任何一种或任何两种以上以任意比例的混合物。

制备胶囊皮的调和剂包括调色剂和调酸剂。

所述的调色剂包括胭脂红、苋菜红或橄榄绿。

所述的调酸剂包括柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸、磷酸三钠、磷酸二钠、磷酸一钠、苹果酸、苹果酸钠、乳酸或乳酸钠。

制备胶囊皮的调和剂还包括调柔剂。

所述的调柔剂包括纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、蜂蜡、石蜡、硬脂酸或单硬脂肪酸甘油酯。

本发明所述的血塞通药物组合物和/或其制剂的应用为所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗缺血性脑中风、脑梗塞、脑偏瘫疾病药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗视网膜病变药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗因视神经萎缩、视网膜色素变性或视网膜黄斑引起的视力疲劳或视力下降药物中的应用。

所述的血塞通药物组合物和/或其制剂在制备预防和/或治疗因糖尿病、心血管疾病、脑血管疾病、神经性疾病引起的视网膜病变药物中的应用。

下面结合具体实施案例对本发明做进一步说明：

实施例1 1#药物组合物的制备

原料组成：

人参皂苷Rb2 54.6 g

人参皂苷Rb1 21.1 g

人参皂苷Rg1 11.3 g

人参皂苷Rc 8.5 g

三七皂苷 R1 4.5g

共计 100g

制备方法：

1）称取三七皂苷R1 4.5 g，置于100 g体积百分浓度为50%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

2）称取人参皂苷Rb2 54.6 g、人参皂苷Rb1 21.1 g、人参皂苷Rg1 11.3 g和人参皂苷Rc 8.5 g，置蒸馏水900 g中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭2.0g，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

3）上述滤液，置真空冷冻干燥机内，以5℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例2 2#药物组合物的制备

原料组成：

人参皂苷Rb2 20.5 g

人参皂苷Rb1 47.8 g

人参皂苷Rg1 23.4 g

人参皂苷Rc 6.7 g

三七皂苷 R1 1.6 g

共计 100g

制备方法：

1）称取三七皂苷R1 1.6 g，置于100 g体积百分浓度为80%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

2）称取人参皂苷Rb2 20.5 g、人参皂苷Rb1 47.8 g、人参皂苷Rg1 23.4 g和人参皂苷Rc 6.7 g，置蒸馏水950 g中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭1.0g，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

3）上述滤液，置真空冷冻干燥机内，以15℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例3 3#药物组合物的制备

原料组成：

人参皂苷Rb2 1.2 g

人参皂苷Rb1 14.6 g

人参皂苷Rg1 55.7 g

人参皂苷Rc 19.3 g

三七皂苷 R1 9.2 g

共计 100g

制备方法：

1）称取三七皂苷R1 9.2 g，置于500 g体积百分浓度为100%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

2）称取人参皂苷Rb2 1.2 g、人参皂苷Rb1 14.6 g、人参皂苷Rg1 55.7 g和人参皂苷Rc19.3 g，置蒸馏水1000 g中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭3.0g，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

3）上述滤液，置真空冷冻干燥机内，以10℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例4 4#药物组合物的制备

原料组成：

人参皂苷Rb2 21.1 g

人参皂苷Rb1 2.5g

人参皂苷Rg1 28.2g

人参皂苷Rc 37.6g

三七皂苷 R1 10.6g

共计 100g

制备方法：

1）称取三七皂苷R1 10.6g，置于1500 g体积百分浓度为60%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

2）称取人参皂苷Rb2 21.1 g、人参皂苷Rb1 2.5g、人参皂苷Rg1 28.2g和人参皂苷Rc37.6g，置蒸馏水5000 g中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭8.0g，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

3）上述滤液，置真空冷冻干燥机内，以12℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例5 5#药物组合物的制备

原料组成：

人参皂苷Rb2 20.9 g

人参皂苷Rb1 2.7g

人参皂苷Rg1 21.5g

人参皂苷Rc 10.2g

三七皂苷 R1 44.7g

共计 100g

制备方法：

1）称取三七皂苷R1 44.7g，置于4500 g体积百分浓度为90%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，得溶液A；

2）称取人参皂苷Rb2 20.9 g、人参皂苷Rb1 2.7g、人参皂苷Rg1 21.5g和人参皂苷Rc10.2g，置蒸馏水3000 g中搅拌溶解，加热至50-70℃，边搅拌边加入溶液A，加入针用活性炭1.0g，升温煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭；

3）上述滤液，置真空冷冻干燥机内，以15℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例6 1#对照样品的制备

原料组成：

人参皂苷Rb1 50g

人参皂苷Rg1 50g

共计 100g

制备方法：

称取人参皂苷Rb1 50g、人参皂苷Rg1 50g置于1000 g体积百分浓度为75%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，加入针用活性炭1.5g，加热煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭，滤液置真空冷冻干燥机内，以15℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例7 2#对照样品的制备

原料组成：

三七皂苷 R1 30g

人参皂苷Rb1 35g

人参皂苷Rg1 35g

共计 100g

制备方法：

称取三七皂苷 R1 30g、人参皂苷Rb1 35g、人参皂苷Rg1 35g置于1000 g体积百分浓度为75%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，加入针用活性炭1.5g，加热煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭，滤液置真空冷冻干燥机内，以15℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例8 3#对照样品的制备

原料组成：

人参皂苷Rb2 25 g

三七皂苷 R1 25g

人参皂苷Rb1 25g

人参皂苷Rg1 25g

共计 100g

制备方法：

称取人参皂苷Rb2 25 g、三七皂苷 R1 25g、人参皂苷Rb1 25g、人参皂苷Rg1 25g置于1000 g体积百分浓度为75%的乙醇溶剂中，搅拌溶解，加入针用活性炭1.5g，加热煮沸30-50分钟，静置冷却至室温，过滤脱出活性炭，滤液置真空冷冻干燥机内，以15℃/h的降温速率降温冷却至-40~-30℃，预冻3~5小时，然后控制温度-25~-20℃，压力10~20Pa，升华干燥3~5小时，然后再控制温度30~50℃，压力1~10Pa，解析干燥4~6小时，恢复至常压室温，即得。

实施例9 片剂

药物处方(质量百分比)：

本发明实施例1的1#药物组合物 15.0%

淀粉 62.5%

微晶纤维素 13.2%

羧甲基淀粉钠 9.3 %

共计 100%

按上述处方配比，将本发明实施例1的1#药物组合物与淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合后于压片机上压片，即得。

实施例10 胶囊

药物处方(质量百分比)：

本发明实施例2的2#药物组合物 10.0%

淀粉 69.0%

微晶纤维素 12.5%

硬脂酸镁 3.2%

羧甲基淀粉钠 5.3 %

共计 100%

按上述处方配比，将本发明实施例2的2#药物组合物与淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁混合后填充入硬明胶胶囊中，即得。

实施例11 口服液体

药物处方(质量百分比)：

本发明实施例3的3#药物组合物 5.2%

蔗糖 12.3%

乙醇 0.5%

蒸馏水 82.0 %

共计 100%

按上述处方配比，将本发明实施例3的3#药物组合物与蔗糖、乙醇、蒸馏水混合溶解后，过滤，按10mL/支灌封于口服液中，100℃湿热灭菌30min，即得。

实施例12 注射液

药物处方：

本发明实施例4的4#药物组合物 55g

氯化钠 90g

注射用水 适量

制成 1000ml

按上述处方配比，将本发明实施例4的4#药物组合物，加氯化钠及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1% 针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按5mL/支灌封，100℃湿热灭菌30min，经灯检合格，即得。

实施例13 冻干粉针剂

药物处方：

本发明实施例5的5#药物组合物 100g

氯化钠 90g

甘露醇 75g

注射用水 适量

制成 1000ml

按上述处方配比，将本发明实施例5的5#药物组合物加氯化钠、甘露醇及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1% 针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按2mL/支分装，冷冻干燥，封装，经检验合格，即得。

实施例14 1#血塞通软胶囊的制备

药物处方：

本发明实施例1的1#药物组合物 100g

1#溶剂 250 g

1#胶囊皮 100 g

共制成 1000粒软胶囊

制备方法：

称取本发明实施例1的1#药物组合物100g，加入1#溶剂250g，搅拌均匀，置于压丸机中，与1#胶囊皮压丸，干燥，即得每粒含有效成分100mg的血塞通软胶囊。

1#溶剂组方（质量百分比）

正丙三醇 48.5%

乙醇 20.0%

水 25.8%

玫瑰油 0.1%

黑桃油 5.6%

共计 100%

1#溶剂制备方法：

按上述组方配比，称取正丙三醇、乙醇、水、玫瑰油、黑桃油，混合，搅拌均匀，即得。

1#胶囊皮组方（质量百分比）：

明胶 18.2%

水 75.9%

柠檬酸 0. 2%

单硬脂肪酸甘油酯 0.5%

羧甲基纤维素 5.2%

共计 100%

1#胶囊皮制备方法：按上述组方配比，称取明胶，加入水中，于60-80℃加热搅拌溶解，然后依次加入羧甲基纤维素、单硬脂肪酸甘油酯和柠檬酸进行调制、塑胶，于30-40℃稳胶24小时即得。

实施例15 2#血塞通软胶囊的制备

药物处方：

本发明实施例2的2#药物组合物 120g

2#溶剂 350 g

2#胶囊皮 150 g

共制成 2000粒软胶囊

制备方法：

称取本发明实施例2的2#药物组合物120g，加入2#溶剂350g，搅拌均匀，置于压丸机中，与2#胶囊皮压丸，干燥，即得每粒含有效成分60mg的血塞通软胶囊。

2#溶剂组方（质量百分比）

乙二醇 42.3%

乙醇 15.2%

水 18.6%

吐温60 2.8%

花生油 21.1%

共计 100%

2#溶剂制备方法：

按上述组方配比，称取乙二醇、乙醇、水、吐温60、花生油，混合，搅拌均匀，即得。

2#胶囊皮组方（质量百分比）：

海藻胶 23.2%

水 70.4%

苋菜红 0.02%

磷酸二钠 0.87%

磷酸一钠 0.21%

甲基纤维素 5.3%

共计 100%

2#胶囊皮制备方法：按上述组方配比，称取海藻胶，加入水中，于60-80℃加热搅拌溶解，然后依次加入甲基纤维素、苋菜红、磷酸二钠和磷酸一钠进行调制、塑胶，于30-40℃稳胶24小时即得。

实施例16 3#血塞通软胶囊的制备

药物处方：

本发明实施例3的3#药物组合物 60g

3#溶剂 400 g

3#胶囊皮 200 g

共制成 2000粒软胶囊

制备方法：

称取本发明实施例3的3#药物组合物60g，加入3#溶剂400g，搅拌均匀，置于压丸机中，与3#胶囊皮压丸，干燥，即得每粒含有效成分30mg的血塞通软胶囊。

3#溶剂组方（质量百分比）

丙二醇 35.3%

聚乙二醇-400 26.5%

吐温60 6.8%

鱼油 31.4%

共计 100%

3#溶剂制备方法：

按上述组方配比，称取丙二醇、聚乙二醇-400、吐温60、鱼油，混合，搅拌均匀，即得。

3#胶囊皮组方（质量百分比）：

瓜尔多胶 16.3%

黄原胶 7.5%

水 60.4%

乙二醇 6.2%

乳酸钠 1.3%

蜂蜡 4.8%

羟甲基纤维素 3.5%

共计 100%

3#胶囊皮制备方法：按上述组方配比，称取瓜尔多胶、黄原胶、乙二醇，加入水中，于60-80℃加热搅拌溶解，然后依次加入羟甲基纤维素、蜂蜡、乳酸钠进行调制、塑胶，于30-40℃稳胶24小时即得。

实施例17 4#血塞通软胶囊的制备

药物处方：

本发明实施例4的4#药物组合物 50g

4#溶剂 300 g

4#胶囊皮 150 g

共制成 2000粒软胶囊

制备方法：

称取本发明实施例4的4#药物组合物50g，加入4#溶剂300g，搅拌均匀，置于压丸机中，与4#胶囊皮压丸，干燥，即得每粒含有效成分25mg的血塞通软胶囊。

4#溶剂组方（质量百分比）

水 79.3%

正丙三醇 20.7%

共计 100%

4#溶剂制备方法：

按上述组方配比，称取水、正丙三醇，混合，搅拌均匀，即得。

4#胶囊皮组方（质量百分比）：

明胶 12.5%

卡拉胶 6.9%

水 65.4%

聚乙二醇-400 9.7%

碳酸氢钠 0.9%

石蜡 1.5%

纤维素 3.1%

共计 100%

4#胶囊皮制备方法：按上述组方配比，称取明胶、卡拉胶、聚乙二醇-400，加入水中，于60-80℃加热搅拌溶解，然后依次加入纤维素、石蜡、碳酸氢钠进行调制、塑胶，于30-40℃稳胶24小时即得。

实施例18 5#血塞通软胶囊的制备

药物处方：

本发明实施例5的5#药物组合物 150g

5#溶剂 400 g

5#胶囊皮 200 g

共制成 1000粒软胶囊

制备方法：

称取本发明实施例5的5#药物组合物150g，加入5#溶剂400g，搅拌均匀，置于压丸机中，与5#胶囊皮压丸，干燥，即得每粒含有效成分150mg的血塞通软胶囊。

5#溶剂组方（质量百分比）

乙醇 58.1%

水 27.6%

乙二醇 14.3%

共计 100%

5#溶剂制备方法：

按上述组方配比，称取乙醇、水、乙二醇，混合，搅拌均匀，即得。

5#胶囊皮组方（质量百分比）：

牛皮胶 5.3%

刺槐豆胶 13.7%

水 75.4%

橄榄绿 0.03%

苹果酸钠 0.97%

单硬脂肪酸甘油酯 1.5%

甲基纤维素 3.1%

共计 100%

5#胶囊皮制备方法：按上述组方配比，称取牛皮胶、刺槐豆胶，加入水中，于60-80℃加热搅拌溶解，然后依次加入橄榄绿、甲基纤维素、单硬脂肪酸甘油酯、苹果酸钠进行调制、塑胶，于30-40℃稳胶24小时即得。

实验例1 本发明药物组合物对SD大鼠心肌缺血的保护作用

1. 材料与方法

1.1 药品和试剂

1#药物组合物：人参皂苷Rb2 54.6%，人参皂苷Rb1 21.1%，人参皂苷Rg1 11.3 %，人参皂苷Rc 8.5 %，三七皂苷 R1 4.5 %，按实施例1制备。

2#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.5%，人参皂苷Rb1 47.8%，人参皂苷Rg1 23.4%，人参皂苷Rc 6.7 %，三七皂苷 R1 1.6 %，按实施例2制备。

3#药物组合物：人参皂苷Rb2 1.2%，人参皂苷Rb1 14.6%，人参皂苷Rg1 55.7%，人参皂苷Rc 19.3 %，三七皂苷 R1 9.2 %，按实施例3制备。

4#药物组合物：人参皂苷Rb2 21.1%，人参皂苷Rb1 2.5%，人参皂苷Rg1 28.2%，人参皂苷Rc 37.6%，三七皂苷 R1 10.6 %，按实施例4制备。

5#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.9%，人参皂苷Rb1 2.7%，人参皂苷Rg1 21.5%，人参皂苷Rc 10.2%，三七皂苷 R1 44.7 %，按实施例5制备。

1#对照样品：人参皂苷Rb1 50%，人参皂苷Rg1 50%，按实施例6制备。

2#对照样品：人参皂苷Rb1 35%，人参皂苷Rg1 35%，三七皂苷 R1 30%，按实施例7制备.

3#对照样品：人参皂苷Rb1 25%，人参皂苷Rg1 25%，三七皂苷 R1 25%，人参皂苷Rb225% ，按实施例8制备。

市售三七总皂苷：质量符合2015版《中国药典》一部要求，购自中国医药有限公司。

氯化三苯基四氮唑 (TTC)：北京马氏精细化学品有限公司提供。

戊巴比妥钠：北京化学试剂公司提供。

肝素钠注射液：江苏万邦生化医药股份有限公司提供。

肌酸激酶 (CK)试剂盒和乳酸脱氢酶 (LDH)试剂盒：北京中生北控生物科技股份有限公司提供。

1. 2 主要仪器

HX-300 动物呼吸机和 BL-420S 生物机能仪：成都泰盟科技有限公司；

TGL-16G-A高速冷冻离心机：上海安亭科学医学仪器厂；

日立 7600 全自动生化分析仪：日本SHIMADZU公司；

BS 110S 电子天平：德国 Sartorius公司。

1.3 动物分组和给药

SD雄性大鼠110只，质量250 ±30g，随机分为11组：假手术组、模型组、1#药物组合物组、2#药物组合物组、3#药物组合物组、4#药物组合物组、5#药物组合物组、1#对照样品组、2#对照样品组、3#对照样品组、市售三七总皂苷组，每组 10 只。

各药物组大鼠分别 ig给予50 mg.kg^-1，假手术组、模型组给予等量的溶剂，每天 2次，连续给药 7 天。末次给药 30 min 后，结扎冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型。

1.4 急性心肌缺血动物模型的制备

大鼠 ip 给予 1%戊巴比妥钠60 mg.kg^-1麻醉，四肢皮下连接心电图电极，记录标准Ⅱ导联心电图。经口插气管，连接动物呼吸机。于左侧第四肋间开胸，轻挤出心脏，用丝线在肺动脉圆锥和左心耳交界下缘 1 ～ 2 mm 结扎，迅速把心脏放回胸腔，以结扎部分发绀、膨出和心电图 ST 段抬升作为结扎成功的标志。假手术组仅在左前降支相应位置穿针而不打结，其余操作与手术组相同。手术后观察10 min，挤出胸腔内空气并逐层关胸，恢复大鼠自主呼吸，拔出气管插管并清除气管内分泌物，给予饲料和水喂养 24 h。实验过程中，所有因手术、麻醉意外等原因死亡的以及术后存活时间未达到取材时间要求的大鼠，均不列入实验观察项目之内。

1. 5 心功能检测

大鼠结扎冠状动脉左前降支 24 h 后，ip 给予1%戊巴比妥钠60 mg·kg^－1麻醉，仰卧位固定，颈部正中切开皮肤，止血钳钝性分离颈部肌肉，暴露出右侧颈总动脉。近头端用丝线穿过，远端用动脉夹夹住，在右颈总动脉上剪一 V 型切口，插入充满250 kU·L^－1肝素生理盐水溶液的导管，并用丝线固定。松开动脉夹，将肝素化 PE 导管经右颈总动脉插管至左心室，根据显示器所示压力图形改变，判断插管是否进入心室腔。导管另一头连接于压力换能器，将信号输入 BL-420S 生物信号采集分析系统，以监测左心室血流动力学变化。插入左心室平衡 30 min 后，记录左心室收缩压 (LVSP)、左心室舒张末压 (LVEDP)，同时将左心室压力电信号同步输入微分器，测得等容收缩期左心室内压最大上升速率 (+ dp/dtmax ) 和等容舒张期左心室内压最大下降速率 (-dp/dt max )。

1. 6 TTC 染色测定心肌梗死面积

心功能检测完毕后，迅速取出心脏，置冰冷生理盐水中冲洗除去血污，剔除心房、血管、脂肪等非心肌组织，置于－20℃冰箱放置 30 min。在心脏结扎线下，平行冠状沟将心脏自心尖至心底部横切成5 片 (厚 1.5 ～2 mm)，置于 1% TTC 磷酸盐缓冲液中 (pH 7.4) 于37℃恒温水浴中孵育10 min。将染色后的心脏横切片置于 4% 多聚甲醛溶液中固定，扫描心脏切片的正反两面，用 Photoshop 软件计算梗死范围，以梗死面积占全心室面积的百分比表示。

1. 7 血清心肌酶的检测

心功能检测完毕后，腹主动脉取血，于 1200 r/min、4℃下离心 15 min，得到血清样品，冻于-80℃冰箱备用。血清心肌酶谱检测包括 CK、LDH、α-羟丁酸脱氢酶 (α-HBDH)、谷丙转氨酶 (GPT) 及谷草转氨酶 (GOT)，采用日立 7600 全自动生化分析仪进行测定。

2.实验结果

2.1对心肌缺血损伤大鼠梗死面积的影响

上述实验结果表明，本发明药物组合物可显著减少心肌缺血大鼠的心肌梗死面积，对心肌缺血有明显的保护作用，其效果优于1-3#对照样品和市售三七总皂苷对照药物。

2. 2对心肌缺血大鼠心功能的影响

上述实验结果表明，本发明的药物组合物可显著改善心肌缺血大鼠的心功指标，对心肌缺血损伤所致的心功能障碍有明显改善作用，其效果优于1-3#对照样品和市售三七总皂苷对照药物。

2. 3对心肌缺血大鼠血清心肌酶的影响

上述实验结果表明，本发明的药物组合物可显著降低大鼠冠脉结扎后血清 LDH，CK，GOT和 HBDH 活性的升高，表明本发明的药物组合物对结扎冠状动脉所致的心肌缺血有保护作用，其效果优于1-3#对照样品和市售三七总皂苷对照药物。

结论：本发明的药物组合物可显著降低大鼠冠脉结扎后心肌梗死范围，改善心梗后大鼠的心脏功能，而且可以降低大鼠冠脉结扎后血清 LDH，CK，GOT和 HBDH 活性的升高，表明本发明的药物组合物对结扎冠状动脉所致的心肌缺血有保护作用，而且，其效果优于对照样品和市售三七总皂苷。

实验例2 对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

1. 材料与仪器

1.1 药品和试剂

1#药物组合物：人参皂苷Rb2 54.6%，人参皂苷Rb1 21.1%，人参皂苷Rg1 11.3 %，人参皂苷Rc 8.5 %，三七皂苷 R1 4.5 %，按实施例1制备。

2#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.5%，人参皂苷Rb1 47.8%，人参皂苷Rg1 23.4%，人参皂苷Rc 6.7 %，三七皂苷 R1 1.6 %，按实施例2制备。

3#药物组合物：人参皂苷Rb2 1.2%，人参皂苷Rb1 14.6%，人参皂苷Rg1 55.7%，人参皂苷Rc 19.3 %，三七皂苷 R1 9.2 %，按实施例3制备。

4#药物组合物：人参皂苷Rb2 21.1%，人参皂苷Rb1 2.5%，人参皂苷Rg1 28.2%，人参皂苷Rc 37.6%，三七皂苷 R1 10.6 %，按实施例4制备。

5#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.9%，人参皂苷Rb1 2.7%，人参皂苷Rg1 21.5%，人参皂苷Rc 10.2%，三七皂苷 R1 44.7 %，按实施例5制备。

1#对照样品：人参皂苷Rb1 50%，人参皂苷Rg1 50%，按实施例6制备。

2#对照样品：人参皂苷Rb1 35%，人参皂苷Rg1 35%，三七皂苷 R1 30%，按实施例7制备.

3#对照样品：人参皂苷Rb1 25%，人参皂苷Rg1 25%，三七皂苷 R1 25%，人参皂苷Rb225% ，按实施例8制备。

市售三七总皂苷：质量符合2015版《中国药典》一部要求，购自中国医药有限公司。

以上受试药物，用0.9%生理盐水兑为1.0%的溶液使用。

白介素-β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α( TNF-α)，白介素-6 ( IL-6)、白介素-8 (IL-8) ABC-ELISA 检测盒： Sigma公司提供。

伊文思蓝(Evans Blue)：Fluka 公司提供；

甲酰胺：天津外环化工公司；

2% 四氮唑红(TTC)：Sigma 公司提供。

1.2 主要仪器

CR-412 低温常速离心机：法国 Jouan公司提供；

721 分光光度计：上海第三仪器厂提供；

计算机图像分析系统：上海医科大学生产。

2．实验方法

2.1脑缺血再灌注模型的建立

SD 大鼠330只，随机分为11 组：假手术组、模型组、1#药物组合物组、2#药物组合物组、3#药物组合物组、4#药物组合物组、5#药物组合物组、1#对照样品组、2#对照样品组、3#对照样品组、市售三七总皂苷组，每组 30 只。模型组和各药物组大鼠ip 10% 水合氯醛3. 5mL.kg^{－ 1}麻醉，仰卧固定，分离左侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉 (ICA) 及颈外动脉 (ECA)，结扎 ECA 与 CCA，用动脉夹夹闭 ICA远心端后，迅速于距 ECA 与 ICA 分叉处约 0. 5 cm的颈总动脉处作一切口，插入一端圆钝的直径为 0. 3 mm的尼龙线，插入深度为(20. 0 ±2. 0 mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约 1 cm，缝合皮肤。2h 后轻轻提拉所留线头至略有阻力以实现大脑中动脉再灌注。假手术组大鼠只分离颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉(同造模组)，但不结扎 CCA。

2.2动物给药及处理

各药物组在缺血前 15min 和缺血后 6 h ，ip 给药各一次，每次给药剂量10 mg·kg^{－ 1}。假手术组与模型组ip予等量生理盐水。

2.3神经行为学评分

麻醉苏醒后，将动物放回鼠笼，自由进食，术后 24 h 进行神经行为学评分。参照 ZeaLonga 的 5 分制标准评分进行评分：无神经损伤症状为 0 分，不能完全伸展健侧前爪为1 分，向健侧转圈为 2 分，向健侧倾倒为 3 分，不能自发行走，意识丧失为 4 分。

2. 4梗死体积测定

各组取大鼠10只，在大鼠脑缺血 2 h 再灌注 22 h后断头取脑，用脑切片器按 2 mm厚度，在距额极 1，3，5，7 mm 处冠状切开大脑。将脑切片浸入 37 ℃的2% 四氮唑红染色，30 min 后取出置于 10% 甲醛中固定，24 h 后拍照。采用图像分析系统计算梗死面积，将各脑片的梗死面积与厚度的乘积进行累加，获得梗死体积。

2. 5脑组织伊文思蓝定量测定

各组取大鼠10只，在 10% 水合氯醛(3. 5 mL.kg^{－ 1} ) 麻醉下，由左心室用生理盐水灌注，至流出液无色为止，由右侧股静脉注入 2% 伊文思蓝，1 mL/只。摘取脑组织用电子天平精确称其湿重后，投入中号试管中，分别加入3 mL 甲酰胺，加盖后于 45 ℃的水浴箱孵育48 h，轻轻摇匀，3 000 r/min离心 15 min，取上清液于λ = 632 nm下测吸光度(A)，计算脑组织伊文思蓝含量。

2.6细胞因子含量的测定

各组取大鼠10只，在术后 24 h 处死大鼠，于冰盘上快速剥离脑部组织，以冰冷 PBS冲洗，滤纸吸干，立即于电子天平秤重，制成 10% 脑组织匀浆，匀浆于 4 ℃下以4 000 r/min的速度离心15 min，取上清液，采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法，在波长 492 nm 检测IL-1β，TNF-α，IL-6，IL-8 的含量。

3. 实验结果

3. 1 对缺血再灌注大鼠神经症状的影响

实验显示，模型组大鼠在缺血2 h后再灌注 22 h，均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩抗力下降，向健侧倾倒。本次实验结果表明，本发明的药物组合物可显著改善缺血再灌注大鼠的神经症状，对缺血再灌注造成的中风、偏瘫症状有明显治疗作用，而且其效果优于1-3#对照样品和市售三七总皂苷对照药物。

2. 对缺血再灌注大鼠脑梗死体积的影响

上述实验结果表明，本发明的药物组合物可显著降低缺血再灌注大鼠的脑梗死体积，而且其效果优于1-3#对照样品和市售三七总皂苷对照药物。

3、对缺血再灌注大鼠脑组织伊文思蓝含量的影响

血脑屏障 (BBB)破坏是脑缺血再灌注性脑损伤的重要病理生理基础。伊文思蓝系小分子，是常见的BBB 指示剂。Evans 蓝能与血浆蛋白结合，正常时不能通过血脑屏障。而脑缺血再灌注时，BBB破坏，脑组织中的 Evans 蓝含量增加，通过测定脑组织中Evans蓝含量可反映血脑屏障的破坏程度。

上述实验结果表明，本发明的药物组合物可显著降低缺血再灌注大鼠脑部的伊文思蓝含量，提示本发明的药物组合物对缺血再灌注大鼠的血脑屏障具有保护作用，而且其效果优于1-3#对照样品和市售三七总皂苷对照药物。

结论：

本发明药物组合物可显著改善缺血再灌注大鼠的神经症状，对缺血再灌注造成的中风、偏瘫症状有明显治疗作用；可显著降低缺血再灌注大鼠的脑梗死体积；可显著降低缺血再灌注大鼠脑部的伊文思蓝含量，提示本发明的药物组合物对缺血再灌注大鼠的血脑屏障具有保护作用。实验还表明，本发明药物组合物的上述对脑缺血再灌注损伤的保护作用效果均优于同剂量的市售三七总皂苷等对照药物。以上研究表明，本发明药物组合物可以用于缺血性脑中风、脑梗塞、脑偏瘫等缺血性脑血管疾病的预防或治疗，其疗效优于现有的三七总皂苷药物。

实验例3 对大鼠视网膜神经损伤的保护作用研究

1. 材料与方法

1.1 药品和试剂

1#药物组合物：人参皂苷Rb2 54.6%，人参皂苷Rb1 21.1%，人参皂苷Rg1 11.3 %，人参皂苷Rc 8.5 %，三七皂苷 R1 4.5 %，按实施例1制备。

2#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.5%，人参皂苷Rb1 47.8%，人参皂苷Rg1 23.4%，人参皂苷Rc 6.7 %，三七皂苷 R1 1.6 %，按实施例2制备。

3#药物组合物：人参皂苷Rb2 1.2%，人参皂苷Rb1 14.6%，人参皂苷Rg1 55.7%，人参皂苷Rc 19.3 %，三七皂苷 R1 9.2 %，按实施例3制备。

4#药物组合物：人参皂苷Rb2 21.1%，人参皂苷Rb1 2.5%，人参皂苷Rg1 28.2%，人参皂苷Rc 37.6%，三七皂苷 R1 10.6 %，按实施例4制备。

5#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.9%，人参皂苷Rb1 2.7%，人参皂苷Rg1 21.5%，人参皂苷Rc 10.2%，三七皂苷 R1 44.7 %，按实施例5制备。

1#对照样品：人参皂苷Rb1 50%，人参皂苷Rg1 50%，按实施例6制备。

2#对照样品：人参皂苷Rb1 35%，人参皂苷Rg1 35%，三七皂苷 R1 30%，按实施例7制备.

3#对照样品：人参皂苷Rb1 25%，人参皂苷Rg1 25%，三七皂苷 R1 25%，人参皂苷Rb225% ，按实施例8制备。

市售三七总皂苷：质量符合2015版《中国药典》一部要求，购自中国医药有限公司。

灿烂甲酚紫(Cresyl Vio-let)：上海国药集团化学试剂有限公司提供。

1.2 实验仪器

手术显微镜：GX.SS.ZZ-3 型, 上海医用光学仪器厂；

眼科显微手术器械：苏州明仁医疗器械公司；

Nikon 光学显微镜：Alphaphot -2 YS2 和 YS100型，Nikon公司提供；电子分析天平：AB204-N 型，Mettler ToledoGroup)公司提供；数码摄影显微镜：型号 BX51，OLYMPUS 公司提供。

1.3 实验动物

SD大鼠，昆明医科大学实验动物中心提供, 雌雄各半，体重 200~240 g，8~12 周龄，经检查无明显歪颈，角膜透明，虹膜血管清晰，瞳孔等大等圆，对光反应灵敏。适应性驯养 3天后连续测3 天眼压 , 剔除平均眼压高于或低于正常眼压区间(9 ~16mmHg)者。

1.4 动物分组及给药

SD大鼠110只，随机分为11 组：正常对照组、模型组、1#药物组合物组、2#药物组合物组、3#药物组合物组、4#药物组合物组、5#药物组合物组、1#对照样品组、2#对照样品组、3#对照样品组、市售三七总皂苷组，每组10 只。除正常对照组外，其余100 只按 Akira 法烙闭大鼠右眼上巩膜静脉，制作大鼠持续性高眼压视网膜神经损伤模型 , 观察10天眼压稳定在30mm Hg以上者纳入实验。各药物组灌胃治疗 1 个月，每日 1 次，正常对照组和模型组灌胃给予等量蒸馏水。每周测量眼压 1 次。各组实验期满后取视网膜做全层铺片，甲酚固紫染色行 RGCL 神经元计数。

1.5 计算机图像分析

每张待测视网膜铺片通过视乳头对称画线, 将其分为颞上、颞下、鼻上、鼻下 4个象限,将每一象限视网膜分为 3 等份, 即中央、中间及周边 3 区 ,各分区随机取 3 个点，每点面积为 32500 μm，对每点的视网膜神经元细胞进行计数后换算成每平方毫米的细胞数(细胞数/mm² ) ，将每区3 点细胞密度的均数作为该区的神经元密度。通过形态学易于辨别 RGCL中的血管内皮细胞, 具有浓染的核且无尼氏物质的细胞为胶质细胞, 这两种细胞均不纳入 RGCL 神经元计数

2 实验结果

上述实验结果表明，本发明药物组合物可显著降低持续性高眼压对视网膜神经的损伤，对视网膜神经损伤有良好的保护和修复作用，可作为视网膜或视神经病变的治疗药物。

实验例4 急性毒性实验

1材料与方法：

1.1受试药物：5#药物组合物，按实施例5制备。

1.2对照药物：市售三七总皂苷，质量符合2015版《中国药典》一部要求，购自中国医药有限公司。

1.3 实验动物：SPF级健康ICR小鼠，130只，3～4周龄，体重18.0～22.0g。

1.4 试验方法：ICR小鼠130只，随机分为13组：空白对照组，受试药物1-6剂量组，对照药物1-6剂量组，每组10只，雌雄各半。根据预试验结果，受试药物和对照药物均以550mg/kg体重的剂量为最高剂量，以 0.80的剂间比向下设5个剂量，共6个剂量组。各组小鼠，实验前禁食不禁水12 h 后，腹腔注射给药1 次，空白对照组腹腔注射等体积的生理盐水。给药后，正常饲养，药后 2 h之内，每 15 min 观察 1 次；药后 2~4 h 之内，每 30 min观察 1 次；药后 4~8 h 之内，每 1h 观察 1 次；药后 8~24 h 之内，每 4 h 观察 1 次；药后第 2d 起，每天观察 1 次，称取体重，密切观察各小鼠的动度进食、饮水情况及 14 d内可能出现的动度、异常肌肉运动、对外反应、瞳孔改变、异常分泌物、大小便异常、眼球凸出、眼睑下垂、呼吸异常、皮肤颜色改变等毒性反应和死亡情况。若有小鼠死亡，则将死亡小鼠解剖，检查心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器的病理变化，14 d 观。根据各剂量组小鼠死亡数量及给药剂量，采用 Bliss 法计算受试药物和对照药物的LD 50 值。

2 . 实验结果

采用小鼠一次静脉注射测定LD50试验方法，观察、比较5#药物组合物与市售三七总皂苷的急性毒性反应。结果显示，5#药物组合物ICR小鼠单次静脉注射的LD50为397mg/kg，市售三七总皂苷ICR小鼠单次静脉注射的LD50为306mg/kg，说明实5#药物组合物的半数致死剂量高于市售三七总皂苷。

参照上述实验方案，对实施例1-4的1-4#药物组合物进行急性毒性试验，结果表明，与实施例5的5#药物组合物的急性毒性试验结果相似，组间差别无统计学意义。

上述实验表明，本发明药物组合物具有极高的药用安全性，其安全性优于现有的三七总皂苷药物。

实验例5 血管刺激性、溶血性和过敏性实验研究

1. 材料与仪器

1.1 药物、试剂

1.1 药品和试剂

1#药物组合物：人参皂苷Rb2 54.6%，人参皂苷Rb1 21.1%，人参皂苷Rg1 11.3 %，人参皂苷Rc 8.5 %，三七皂苷 R1 4.5 %，按实施例1制备。

2#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.5%，人参皂苷Rb1 47.8%，人参皂苷Rg1 23.4%，人参皂苷Rc 6.7 %，三七皂苷 R1 1.6 %，按实施例2制备。

3#药物组合物：人参皂苷Rb2 1.2%，人参皂苷Rb1 14.6%，人参皂苷Rg1 55.7%，人参皂苷Rc 19.3 %，三七皂苷 R1 9.2 %，按实施例3制备。

4#药物组合物：人参皂苷Rb2 21.1%，人参皂苷Rb1 2.5%，人参皂苷Rg1 28.2%，人参皂苷Rc 37.6%，三七皂苷 R1 10.6 %，按实施例4制备。

5#药物组合物：人参皂苷Rb2 20.9%，人参皂苷Rb1 2.7%，人参皂苷Rg1 21.5%，人参皂苷Rc 10.2%，三七皂苷 R1 44.7 %，按实施例5制备。

市售三七总皂苷：质量符合2015版《中国药典》一部要求，购自中国医药有限公司。

以上药品，临用时用0.9%NaCl 注射液溶解。

牛血清白蛋白：Genbase Bio-science Co 公司提供。

伊文思蓝：上海如吉生物科技发展有限公司提供。

1.2主要仪器

TP1020 脱水机、EG1160 包埋机、ＲM2235电动切片机、HI1210 摊片机、HI1220 烘片机、MLB生物显微镜：德国 Leica 仪器有限公司提供；

MR231 型台式高速冷冻离心机：法国捷安集团提供；

T6紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司提供。

1.3 实验动物

新西兰兔：普通级，雌雄各半，体重 2. 0~2.5 kg，广东省医学实验动物中心提供。

成年健康 ICＲ小鼠，体重 22~25 g，广东省医学实验动物中心提供。

2. 实验方法

2.1 血管刺激性试验

选取新西兰兔70只，随机分为7组：阴性对照组、1#药物组合物组、2#药物组合物组、3#药物组合物组、4#药物组合物组、5#药物组合物组、市售三七总皂苷组，每组10只，雌雄各半。选择左侧耳缘静脉进行静脉滴注，阴性对照组给予等量0.9% NaCl 注射液，滴注速率约每分钟 50 滴，qd，连续给药 7 d，每天给药前以及末次给药后 48 和 72 h，肉眼观察新西兰兔注射部位反应情况，按血管刺激反应分值标准(见表 1)进行打分，计算每个部位平均打分后按血管刺激反应评价标准(见表 2)评价刺激反应程度。同时观察新西兰兔的一般状况、被毛、粪便、活动等。末次给药后 72 h，每组取 2 只(雌雄各半)新西兰兔，执行安死术，沿耳根部切除新西兰兔左侧(给药侧)兔耳，分别于注射部位、注射部位近心端及注射部位远心端各取 1 块组织进行组织病理学检查。每组余下 2 只(雌雄各半)新西兰兔继续观察14 d 后再取材做组织病理学检查，以了解刺激性反应的可逆程度。

表 1 血管刺激反应分值标准

表 2 血管刺激反应评价标准

2.2体外溶血试验

新西兰兔心脏采血约30mL，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇 10 min，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，加入 NaCl 注射液约 10 倍量，摇匀，1 200 r/min离心 15 min，除去上清液，沉淀的红细胞再用 NaCl注射液按上述方法洗涤 2 ～3 次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用 NaCl 注射液配成 2% 的混悬液备用。取洁净试管80支，顺序编为1-8号，每号10只。按表3所示依次加入 2% 红细胞悬液、NaCl 注射液、纯净水和药液，混匀后，立即置(37 ±0.5) ℃的恒温水浴中进行温育。温育3 h后观察：若溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，可将凝聚物置于载玻片上，在盖玻片边缘滴加 2 滴NaCl 溶液，显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，不被冲散者为真凝聚。观察后，取上清液，在分光光度计上，545 nm 处，以纯净水为空白读取各管的 A 值，用下式计算各试验管的溶血率:

溶血率 = (A t － A nc ) /(A pc － A nc ) × 100%。式中:A t代表试验管吸光度，A nc 代表阴性对照管吸光度（即7号管），A pc 代表阳性对照管吸光度（即8号管）。若溶血率＞5%，表明出现了溶血。

体外溶血试验加样表 (ml)

2.3过敏性试验

80 只成年健康 ICＲ小鼠，体重 22 ～25 g，随机分为8组：生理盐水对照组、阳性药物牛血清白蛋白对照组、1#药物组合物组、2#药物组合物组、3#药物组合物组、4#药物组合物组、5#药物组合物组、市售三七总皂苷组。以上各受试物中均含有 0. 4% 的伊文思蓝，各组小鼠经尾静脉注射相应受试物。观察给药后 30 min 小鼠的行为学变化及耳廓蓝染情况。记录每组出现耳廓蓝染的动物数、蓝染总耳数、耳廓蓝染面积。耳廓蓝染面积(S)为耳蓝染面积/耳廓面积，按照下表分级标准评估耳蓝染分值。再将各组小鼠脱颈椎处死，取双耳，剪碎，用 2 mL 甲酰胺浸泡 2 d，400 目筛子过滤，取上清液于 630 nm 处测吸光度 A。根据伊文思蓝标准曲线计算各鼠双耳的伊文思蓝染料渗出量(μg)。根据每组发生耳廓蓝染的动物数计算各组血管反应阳性率(简称反应率)；根据蓝染耳数计算耳蓝染率。

蓝染分级评分指标

3、实验结果

3.1血管刺激性试验

上述实验结果表明，本发明药物组合物对新西兰兔静脉滴注的血管刺激反应分值在0.11~0.23之间，属于“无刺激性”级别，其血管刺激性明显低于对照药物市售三七总皂苷。

3.2溶血性试验

上述实验结果表明，本发明药物组合物无明显溶血性，其溶血率明显低于对照药物市售三七总皂苷。

3.3过敏性

上述实验结果表明，本发明药物组合物过敏性引起的炎症反应程度轻微，明显低于对照药物市售三七总皂苷。

结论：上述实验结果表明，本发明药物组合物无明显刺激性、溶血性和过敏性等不良反应，完全符合药用安全性要求，各项不良反应安全性评价指标均优于三七总皂苷对照药物。

典型病例：

1、张某某，男，65岁，患有糖尿病7年。自2014年5月起，感觉双眼视力下降，检查视力右眼0.5，左眼0.1，视网膜可见微血管瘤，中心窝反光消失，确诊为糖尿病视网膜病变。服用本发明实施例18的5#血塞通软胶囊，每天1粒，3个月后，经检查，右眼视力1.0，左眼视力0.6，双眼玻璃体内混浊吸收，微血管淤血减轻。随访半年无复发。

2、李某某，女，58岁，患有糖尿病7年，自2014年8起，感觉双眼视力下降，眼前黑影飞舞。经检查，视网膜静脉扩张，有微血管瘤、出血斑，左眼视力0.3，右眼视力0.4，确诊为糖尿病视网膜病变。服用本发明实施例17的4#血塞通软胶囊，每天1粒，3个月后，视物飞影减轻，微血管淤血减轻，左眼视力恢复到0.9，右眼视力恢复到1.0。随访半年无复发。

3、王某某，女，14岁，初中三年级学生，平时课业负担大，白天学习一天后眼睛非常疲劳，白天眼胀，到了晚上就经常眼痛，时有视物模糊、流泪等情况服用本发明实施例16的3#血塞通软胶囊，每天1粒，1个月后眼胀、眼痛、流泪等情况消失了，视疲劳情况明显改善。

4、肖某，男，35岁，某医药公司产业调研员，工作经常使用电脑、手机。自2015年9起，感觉眼睛特别容易疲劳，眼睛发干，发痒，发疼，视物模糊。点用氧氟沙星等眼药水，上述症状无明显改善。服用本发明实施例15的2#血塞通软胶囊，每天1粒，3个月后，眼干、发痒、发疼症状消失，视力明显改善。随访半年无复发。

Claims (26)

1.一种血塞通软胶囊制剂，其特征在于是以血塞通药物组合物作为药物的有效成分，并辅以辅料和/或助剂加工而成。

2.根据权利要求1所述的血塞通软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 0.001~99.996%

人参皂苷Rb1 0.001~99.996%

人参皂苷Rg1 0.001~99.996%

人参皂苷Rc 0.001~99.996%

三七皂苷 R1 0.001~99.996%。

3.根据权利要求1所述的血塞通软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 0.01~99.96%

人参皂苷Rb1 0.01~99.96%

人参皂苷Rg1 0.01~99.96%

人参皂苷Rc 0.01~99.96%

三七皂苷 R1 0.01~99.96%。

4.根据权利要求1-3任一所述的血塞通药物组合物的软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通药物组合物的软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 54.6 %

人参皂苷Rb1 21.1%

人参皂苷Rg1 11.3%

人参皂苷Rc 8.5%

三七皂苷 R1 4.5%。

5.根据权利要求1-3任一所述的血塞通软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 20.5 %

人参皂苷Rb1 47.8%

人参皂苷Rg1 23.4%

人参皂苷Rc 6.7%

三七皂苷 R1 1.6%。

6.根据权利要求1-3任一所述的血塞通软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 1.2 %

人参皂苷Rb1 14.6%

人参皂苷Rg1 55.7%

人参皂苷Rc 19.3%

三七皂苷 R1 9.2%。

7.根据权利要求1-3任一所述的血塞通软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 21.1 %

人参皂苷Rb1 2.5%

人参皂苷Rg1 28.2%

人参皂苷Rc 37.6%

三七皂苷 R1 10.6%。

8.根据权利要求1-3任一所述的血塞通软胶囊制剂，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂含有如下质量百分比的药物有效成分：

人参皂苷Rb2 20.9 %

人参皂苷Rb1 2.7%

人参皂苷Rg1 21.5%

人参皂苷Rc 10.2%

三七皂苷 R1 44.7%。

9.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于称取权利要求1~8任一项所述的药物有效成分，加入溶剂中，搅拌均匀，置于压丸机中，与胶囊皮压丸，干燥，即得。

10.根据权利要求9所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述溶剂为水、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、吐温、花生油、姜油、花椒油、玫瑰油、菜籽油、牡丹籽油、黑桃油、葵花油、藿香油、猪油、牛油、羊油、鱼油、鲨鱼油、蛇油中的任何一种或任何两种以上以任意比例的混合物。

11.根据权利要求9所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述胶囊皮由胶体与溶剂、调和剂经热溶、调制、塑胶、稳胶而制得。

12.根据权利要求9所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于制备胶囊皮的胶体选自动物胶或植物胶。

13.根据权利要求12所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述的动物胶包括明胶、牛皮胶、狗皮胶、猪皮胶。

14.根据权利要求12所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述的植物胶包括卡拉胶、瓜尔多胶、海藻胶、刺槐豆胶、魔芋胶、黄原胶。

15.根据权利要求9所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于制备胶囊皮的溶剂为水、乙醇、丙醇、乙二醇、异丙三醇、正丙三醇、异丁醇、叔丁醇、正丁醇、聚乙二醇中的任何一种或任何两种以上以任意比例的混合物。

16.根据权利要求9所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于制备胶囊皮的调和剂包括调色剂和调酸剂。

17.根据权利要求16所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述的调色剂包括胭脂红、苋菜红、橄榄绿。

18.根据权利要求16所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述的调酸剂包括柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸、磷酸三钠、磷酸二钠、磷酸一钠、苹果酸、苹果酸钠、乳酸或乳酸钠。

19.根据权利要求16所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于制备胶囊皮的调和剂还包括调柔剂。

20.根据权利要求19所述的血塞通软胶囊制剂的制备方法，其特征在于所述的调柔剂包括纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、蜂蜡、石蜡、硬脂酸或单硬脂肪酸甘油酯。

21.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的应用，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂在制备预防和/或治疗心脑血管疾病药物中的应用。

22.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的应用，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂在制备预防和/或治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用。

23.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的应用，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂在制备预防和/或治疗缺血性脑中风、脑梗塞、脑偏瘫疾病药物中的应用。

24.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的应用，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂在制备预防和/或治疗视网膜病变药物中的应用。

25.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的应用，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂在制备预防和/或治疗因视神经萎缩、视网膜色素变性或视网膜黄斑引起的视力疲劳或视力下降药物中的应用。

26.一种权利要求1~8任一所述的血塞通软胶囊制剂的应用，其特征在于所述的血塞通软胶囊制剂在制备预防和/或治疗因糖尿病、心血管疾病、脑血管疾病、神经性疾病引起的视网膜病变药物中的应用。