CN110300593B - 用于咳嗽的组合物 - Google Patents

用于咳嗽的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN110300593B
CN110300593B CN201880011901.7A CN201880011901A CN110300593B CN 110300593 B CN110300593 B CN 110300593B CN 201880011901 A CN201880011901 A CN 201880011901A CN 110300593 B CN110300593 B CN 110300593B
Authority
CN
China
Prior art keywords
composition
fraction
cells
cough
polysaccharide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201880011901.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110300593A (zh
Inventor
瓦伦蒂诺·梅尔卡蒂
路易沙·马托利
帕奥拉·博伦扎尼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aboca SpA Societa Agricola
Original Assignee
Aboca SpA Societa Agricola
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aboca SpA Societa Agricola filed Critical Aboca SpA Societa Agricola
Publication of CN110300593A publication Critical patent/CN110300593A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110300593B publication Critical patent/CN110300593B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/68Plantaginaceae (Plantain Family)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56Materials from animals other than mammals
    • A61K35/63Arthropods
    • A61K35/64Insects, e.g. bees, wasps or fleas
    • A61K35/644Beeswax; Propolis; Royal jelly; Honey
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/61Myrtaceae (Myrtle family), e.g. teatree or eucalyptus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/739Sanguisorba (burnet)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/752Citrus, e.g. lime, orange or lemon
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/14Antitussive agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06Free radical scavengers or antioxidants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明涉及用于治疗咳嗽的新组合物,其包含一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、蜂蜜、红糖、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分。

Description

用于咳嗽的组合物
技术领域
本发明涉及用于治疗咳嗽的新组合物,其包含一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、蜂蜜、红糖、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分。
背景技术
经典药理学治疗基本上基于通过化学和药理学机制的咳嗽抑制。根据其作用机制,止咳药物可分为3类:
粘液溶解剂(Mucolytic):通过粘蛋白复合物(mucoproteic complexes)和核酸的解聚机制增加粘液流动性。
祛痰剂(Expectorant):增加支气管分泌物并且间接降低粘液粘度
镇静剂(Sedative):抑制咳嗽中枢,消除症状。
止咳药物的局限性在于其作用特异性及其副作用:粘液溶解剂仅作用于湿咳;镇静剂仅用于干咳,阻碍其生理作用;祛痰剂几乎没有合理的作用机制,以至于事实上它们并没有被处方。
此外,止咳药物在儿科年龄几乎不适当:事实上,粘液溶解剂和中枢镇静剂在2岁以下是禁忌的。
因此,通过有效、稳定且不含诸如基于可的松的药物或抗生素的无刺激性组合物治疗咳嗽在现有技术中具有明显的兴趣,所述组合物因此可以使用而没有由于这类药物的过剂量造成的禁忌症,并且因此还适合于儿科使用。
发明内容
因此,本发明涉及用于治疗咳嗽的制剂,其组分能够协同作用以局部干预生理-发病机制的机械-物理作用,并且还具有与粘膜保护的粘膜粘附作用一起的强抗氧化作用。
本发明的制剂能够通过以下的主要机械作用起作用:
I.对于炎症(其为引起咳嗽的因素),通过形成保护层实现间接作用,所述保护层一方面防止与外部刺激剂进一步接触并保持粘膜水合,另一方面由于抗氧化物质的干预减轻了感染产生的自由基的有害作用;
II.对于在粘液,通过吸引水的亲水性物质使粘液水合,使其流动性更高并且因此更容易通过生理清除机制除去。
因此,可以减轻咳嗽症状而不会使其生理作用无效,并促进粘液和粘膜的正常状态的恢复。
本发明的作者已经制备了一种组合物,其在粘膜上具有良好的粘膜粘附和屏障效应性质,以及与止咳制剂中常用的随时间稳定的维生素C剂量的抗氧化性质相当的抗氧化性质,因此不需要存在通常用于使抗坏血酸稳定的稳定剂。
作者实际上制备了一种组合物,其中由龙牙草(龙牙草属(Agrimonia))代表的单一成分负责制剂的强粘膜粘附性质及其抗氧化性质,这种抗氧化性能与维生素C的相当,但比所述维生素更稳定。
事实上,已知的是抗坏血酸在含水产品中的快速降解迄今为止是含有它的产品制剂中高度相关的因素。还已知抗坏血酸氧化在碱性环境中快速发生。抗坏血酸降解在有氧和厌氧两种条件下发生,并且取决于许多因素,例如氧气、温度、光、pH和储存条件。
相反,本发明的组合物主题显示出优异的粘膜粘附和屏障效应能力,与通常使用剂量的维生素C展现出的抗氧化活性相当的抗氧化活性,以及随时间良好的稳定性。事实上,当将分析的样品保持在40℃和75%相对湿度的极端条件下时,本发明的组合物即使是流体形式也证明是稳定的。在实例部分,报道了在稳定性测定中获得的数据。
正如从文献中预期的并且也由发明人观察到的,维生素C在相同的流体形式(具有相同的辅料)中被证明是显著不稳定的。
因此,本发明提供了优化用于治疗咳嗽的组合物,其所选择的组分具有屏障效应、粘膜粘附和抗氧化作用以及优异的长期稳定性。
因此,本发明涉及用于治疗咳嗽的组合物,其包含一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分、红糖、蜂蜜。
本发明还涉及用于制备所述组合物的方法,其中将一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分与蜂蜜、红糖和一种或多种药学上可接受的载体和/或辅料混合。
术语
出于本发明的目的,“车前草”是指长叶车前草(Plantago lanceolata),“龙牙草”是指欧洲龙牙草(Agrimonia eupatoria),并且“药蜀葵”是指药蜀葵(Althaeaofficinalis)。
顶部或开花顶部(flowering top)是草药和植物文献中常用的术语,因此是指植物的空中末端,包括叶、茎(意为分枝而不是植物的主茎)和花,或这些组分中的至少一种。
药蜀葵的多糖级分和车前草的多糖级分分别是指包含多糖的药蜀葵根的提取物级分,优选水醇或水提取物级分,以及包含多糖的车前草叶的提取物级分,水醇或水提取物级分。
包含丹宁的龙牙草多酚级分是指包含多酚,特别是包含多酚亚类单宁的龙牙草的顶部或开花顶部的提取物级分,优选水醇或水提取物级分。
附图详述
在图1中,报道了在静态条件下不同稀释度的产品对人颊细胞的粘膜粘附百分比,其通过评估产品粘附于细胞的能力来测量,该能力通过抑制凝集素与膜糖蛋白的结合评估,如下文的描述和实例中详细说明的。
图1显示了具有以下稀释度的糖浆形式的根据本发明的制剂的这种百分比:未稀释、1:2稀释和1:5稀释。
在图2中,报道了粘膜粘附层在动态条件下的抗性,即通过使系统在Franz池上经受人造唾液的2ml/min的流动来评估产品随时间保持粘附于粘膜的能力,如下文的描述和实例中详细说明的。
图2显示了用以1:2稀释的糖浆形式的产品获得的粘膜粘附层在0.5小时、1小时和2小时的不同时间对模拟唾液溶液(0.9%NaCl生理溶液)的抗性。
图3显示了对由糖浆形式的产品发挥的屏障效应的评估,糖浆形式的产品形成能够保护细胞免受炎性剂(LPS)损伤的保护膜。
图4显示通过进行与图3中进行的屏障测定法相同的步骤但是细胞的应激顺序颠倒(即首先用LPS刺激细胞,然后使其暴露于样品(本发明组合物和阳性对照))所获得的数据,获得的数据表明,本发明组合物的抗炎活性归因于屏障效应,并且不是直接的抗炎活性。
图5和6显示了多种浓度的组合物的结果,分别表示为代表随时间的自由基形成的图和代表随时间的清除作用的直方图。对1克本发明的组合物进行实验,在盐水中使最终体积为10ml,并以组合物的0.5mg/ml的最大浓度和0.03mg/ml的最小浓度进行测定。
图7显示了用于比色反应的凝集素标记系统。
发明详述
咳嗽是一种突然的呼气动作,其可以作为反射或作为自愿动作发生,目的是释放呼吸道中任何存在的物质(咳痰),从而发挥呼吸系统生理功能必不可少的作用。
然而,由于反复刺激性刺激(感染剂、刺激性物质)导致分泌物和粘液过量产生,其在呼吸道中累积并成为咳嗽刺激的伴随原因,这种用于保护呼吸道的系统在时间上延长时成为病理状态。
呼吸道内的粘膜具有在外界环境和组织之间的功能屏障的保护性作用。
a)代表真实的物理屏障,保护下面的组织不与外界接触;
b)由于同步和单向运动的纤毛细胞的存在,将粘液包裹的异物推向食道;
c)产生分泌物和粘液;
d)发挥免疫功能,并且在病毒的存在下制定一系列对抗病毒反应重要的有效防御机制。
其保护功能的一部分由覆盖它的粘液进行,粘液是由杯状细胞产生的粘性粘弹性凝胶,并且其主要大分子是糖蛋白。
应该考虑的是,在正常条件下具有保护作用的粘液在感染或其它类型的刺激的情况下本身会引起咳嗽:事实上,见证了其过量产生和更高的粘度。
从引起耳和喉炎症的感染和/或刺激性事件开始的主要机制可描述如下:
1.喉部和气管直接受累,因为它们接近口腔、咽部和鼻并且与其密切连通。
2.将感染部位产生的炎症调节因子通过血流运输到下呼吸道,在那里它们引发炎症反应;对豚鼠和人类的研究表明,从鼻或食道传入的化学型感觉刺激可以增加中枢神经通路对咳嗽的敏感性,从而导致伴随呼吸道、鼻和食道炎性疾病的“高咳(hypertussive)”状态。
3.在鼻后滴注(post-nasal drip)中,发生粘液的持续存在,通常是难以从鼻咽部排出的粘性细丝的形式,其通过沿着咽部下行而刺激咽部。这种刺激导致神经与气管和食道肌肉之间失去协调性,使部分过量的分泌物进入喉部,引起其机械刺激,并转化为持续性、连续性和刺激性咳嗽,这在儿童中非常频繁。
咳嗽机制中的重要作用是通过位于食道水平的不同类型的受体进行的,它们的刺激可以通过多种机制引发咳嗽:
在感染事件的情况下通过反复尝试吞咽大量粘性粘液而刺激张力机械传感器;
刺激对粘膜丝在下咽部和食道之间停滞所产生的轻微压力刺激敏感的粘膜受体;
通过在局部产生并由粘液携带到其它部位的炎性调节因子刺激伤害感受器(类似的刺激机制已在豚鼠中证实,即使是酸性化学刺激也是如此)。
基于这样一个事实,即用于保护呼吸道粘膜的生理机制和咳嗽的发病过程两者实际上都是基于机械型机制(一方面粘液和完整的粘膜,另一方面粘液过量产生和机械刺激),发明人认为干预粘膜保护作用可能是唯一真正有效的方法。此外,本发明人寻求并挑选出了基于天然来源的物质的随时间稳定的制剂,其可具有高粘膜粘附能力、对刺激剂的有效屏障效应以及高抗氧化作用。
这需要开发一种活性复杂的制剂,即其组分能够协同作用,以便局部干预生理-发病机制的机械-物理作用,同时提供能够有效防止自由基的抗氧化作用。
考虑到这样的目的,制备了用于治疗咳嗽的组合物,其包含一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分、红糖和蜂蜜以及一种或多种药学上可接受的载体和/或辅料。
如上所述,植物x或y的多糖级分或包含单宁的植物z的多酚级分在本文是指所述植物的提取物级分,其包含所指出类别的化合物,并且不含植物的目标部分中通常存在的其它类别的化合物。特别地,上述级分可以通过水醇提取或水提取技术生产。这些级分可以是水醇或水提取物、干燥提取物、通过喷雾干燥技术(不同于冻干)干燥的提取物、软提取物或其混合物的形式。
根据本发明的冻干提取物或通过喷雾干燥技术干燥的提取物可以是冻干或干燥的水醇或水提取物。
根据本发明,上述级分优选地对于特征标志物的含量进行归一化。
在一个实施例中,车前草多糖级分是包含分子量高于20000道尔顿的多糖的级分(或一组级分),所述多糖的重量百分比大于或等于3%,例如4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%。根据另一个实施例,药蜀葵多糖级分是包含分子量高于20000道尔顿的多糖的级分(或一组级分),所述多糖的重量百分比大于或等于5%,例如6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%。
根据一个实施例,药蜀葵多糖级分是从所述植物中提取的粘液质(mucilaginous)级分。
根据又一个实施例,龙牙草多酚级分是包含多酚的含单宁的多酚级分(或一组级分)(即,包含多酚),所述多酚的重量百分比大于或等于3%,例如4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%。
在一个优选的实施例中,组合物包含:车前草多糖级分,其包含重量百分比大于或等于3%的分子量大于20000道尔顿的多糖;药蜀葵多糖级分,其是包含重量百分比大于或等于5%的分子量大于20000道尔顿的多糖的级分;和包含单宁的龙牙草多酚级分,其包含重量百分比大于或等于3%的多酚。
在车前草和药蜀葵的情况下,优选冻干提取物或通过喷雾干燥干燥的提取物,因为对于多糖,通常使用具有低百分比的醇或水的提取溶液,并且这种干燥技术是最好的,以便给予级分适合于储存的特性。这种类型级分的制备可以用众所周知的方法进行,因此本领域技术人员实施本发明不需要进一步指示。然而,在实例部分中,报道了用于制备适合于本发明组合物的级分的合适方法,但不限制本发明。
根据本发明的组合物适用于成人、老年人、妊娠期、青少年和儿科年龄的患者。如已经提到的,提取物的制备可以根据本领域技术人员已知的任何技术进行,在一个具体实施例中,所述提取物可以是冻干提取物。
蜂蜜可以是蜜蜂蜂蜜、蜜露蜂蜜(honeydew honey)或其混合物,并且可以以冻干形式或任何形式使用。
然后该制剂可以包含配制剂(formulative agent),例如天然或合成来源的增稠剂、矫味剂和防腐剂(preservative agent)或本领域技术人员根据现有技术可以选择的其它技术辅料。仅举例来说,可以选择果汁(例如柠檬汁)或其它水果矫味剂(例如天然橙矫味剂、天然柠檬矫味剂、天然桃矫味剂、天然桃金娘矫味剂、天然黑莓矫味剂)、增稠剂(例如黄原胶、阿拉伯树胶)。
因此,上述组合物可包含一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分、红糖、蜂蜜和合适的辅料、矫味剂、防腐剂。
在本发明的一个优选实施例中,组合物中包含的唯一活性成分由一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分、红糖、蜂蜜代表。
因此,本发明的组合物还可以定义为由一种或多种车前草多糖级分、一种或多种药蜀葵多糖级分、一种或多种包含单宁的龙牙草多酚级分、红糖、蜂蜜和药学上可接受的载体和/或辅料组成的组合物。
根据一个实施例,本发明的组合物可包含:30-60%w/w的红糖;20-50%w/w的蜂蜜;0.1-2%w/w车前草多糖级分;0.1-2%的药蜀葵多糖级分;0.1-2%的包含单宁龙牙草多酚级分;以及至少一种药学上可接受的载体和/或辅料,补充至100%。
因此,对于接近蜂蜜范围上端的重量百分比,对应于接近红糖范围下端的重量百分比,反之亦然,因为包含至少一种药学上可接受的载体和/或辅料的成分的重量份的总和为100。
在上述范围内,包含了下端和上端,包括在这些端之间的所有值,以及落入这些间隔内并且其总和为100的成分的重量份的所有可能组合。
在下文中,提供了根据本发明的可能实施例的非限制性实例。
根据一个实施例,本发明的组合物可包含:30-50%w/w的红糖;30-50%w/w的蜂蜜;0.1-1%w/w的车前草多糖级分;0.1-1%的药蜀葵多糖级分;0.4-2%的包含单宁的龙牙草多酚级分,以及药学上可接受的载体和/或辅料中的至少一种,以使总量达到100%(即“补充至100%”)。
根据另一个实施例,本发明的组合物可包含:35-55%w/w的红糖;30-50%w/w的蜂蜜;0.1-1%w/w的车前草多糖级分;0.1-5%的药蜀葵多糖级分;0.2-2%的包含单宁的龙牙草多酚级分;以及药学上可接受的载体和/或辅料中的至少一种,其补充至100%。
根据另一个实施例,本发明的组合物可包含:40-60%w/w的红糖;20-30%w/w的蜂蜜;0.1-1%w/w的车前草多糖级分;0.1-5%的药蜀葵多糖级分;0.2-2%的包含单宁的龙牙草多酚级分;以及药学上可接受的载体和/或辅料中的至少一种,其补充至100%。
根据另一个实施例,本发明的组合物可包含:40-60%w/w的红糖;20-30%w/w的蜂蜜;0.1-1%w/w的车前草多糖级分;0.1-1.7%的药蜀葵多糖级分;0.2-1%的包含单宁的龙牙草多酚级分;以及药学上可接受的载体和/或辅料中的至少一种,其补充至100%。
根据另一个实施例,本发明的组合物可包含:40-60%w/w的红糖;20-30%w/w的蜂蜜;0.1-1%w/w的车前草多糖级分;0.1-1.6%的药蜀葵多糖级分;0.3-1%的包含单宁的龙牙草多酚级分;以及药学上可接受的载体和/或辅料中的至少一种,其补充至100%。
根据另一个实施例,本发明的组合物可包含:40-60%w/w的红糖;20-30%w/w的蜂蜜;0.2-1%w/w的车前草多糖级分;0.1-1.6%的药蜀葵多糖级分;0.3-1%的包含单宁的龙牙草多酚级分;以及药学上可接受的载体和/或辅料中的至少一种,其补充至100%。
在本发明的所有实施例中,术语“多糖级分”还包括一组级分,以及术语“多酚级分”还包括一组级分,只要上述化合物的类别存在,优选以本说明书中指出的浓度存在即可。
因此,本发明的组合物包含一组具有化学-物理性质的功能性物质,例如在由上呼吸道代表的施用部位水平整体上发挥粘液流化作用和保护粘膜的作用。
从本说明书中报道的实验中显而易见,当通过评估未稀释的或稀释至1:5的产品粘附至培养的颊粘膜细胞以抑制凝集素与膜蛋白的结合的能力来测量时,根据本发明的组合物的粘膜粘附百分比为85%至50%。所述能力如下测量:用待测定的物质(在这种情况下用本发明的组合物)处理颊粘膜的细胞,然后用生物素化的凝集素处理,用合适的系统(例如链霉亲和素过氧化物酶-邻苯丙氨酸)检测与所述细胞结合的凝集素,并且将用目标组合物处理的样品中结合的凝集素的量相对于其中细胞未用目标组合物处理的对照中结合的凝集素的量进行比较。
在下文中报道了所使用的方法的方案:
粘膜粘附的程度可以例如通过比色反应来测量,该比色反应能够定量被粘膜粘附产品结合而未被凝集素结合的糖蛋白上的位点。由于图7所示的特殊的凝集素标记系统,可以进行比色反应。
吸光度值的降低与产品粘附(“粘膜粘附”)于细胞的能力成比例。粘膜粘附能力表示为糖蛋白/凝集素结合的抑制百分比,并由根据以下等式的被产品占据的粘膜位点的百分比表示:
产品的粘膜粘附百分比=(1-abs样品/abs对照)×100
其中abs是用分光光度计在λ=450nm处测量的吸光度
考虑到在实际使用中在递送后立即与口咽腔中存在的唾液混合的事实,将产品在稀释后施用。
根据本发明,未稀释或用合适的稀释剂稀释至1:5的组合物的用凝集素结合测定法测量的粘膜粘附百分比可在85%和50%之间,优选在82%和52%之间(见图1)。
表述在85%和50%之间是指小于85%且大于50%(因此为84.9%至50.1%)的任何整数,其可以是85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、74%、73%、72%、71%、70%、69%、68%、67%、66%、65%、64%、63%、62%、61%、60%、59%、58%、57%、56%、55%、54%、53%、52%、51%、50%,以及上述整数的任何小数。
包含在这两个端值之间的如上所述测量的粘膜粘附能力的任何间隔也是本发明的目的。
此外,从所进行的测定中可以明显看出,通过使系统在Franz池上经受人造唾液的2ml/min的流动,本发明的组合物具有粘膜粘附对用盐水洗涤的良好抗性。这种模拟组合物对唾液原位流动的抗性的处理表明,本发明的组合物的特征在于长时间持续的高粘膜粘附,如图2中报道的数据所示。
此外,组合物可以进一步或替代地表征为其发挥保护性屏障效应,这通过计算在本发明产品的存在下对细胞进行的实验中在与能够诱导细胞因子产生的合适的炎性剂接触之后产生的细胞因子相对于没有产品的阳性对照的减少来表征。
作为测量系统,可以使用任何已知的炎性剂和由此活化的相应细胞因子。可能的炎性剂系统的实例由脂多糖(LPS)和IL-6表示。
屏障效应测定(barrier effect assay)是一种生物型体外测定,其用于评估成品和/或原料通过形成薄的“绝缘”层来避免粘膜和皮肤与环境污染物(灰尘、花粉、微生物等)接触的能力。
开发该测定法以在体外模拟施用于皮肤和/或粘膜上旨在产生针对外部侵害物的保护膜的产品所发挥的作用。
该模型利用了这样的原理:与炎性剂接触的细胞在细胞外环境中产生和分泌促炎性调节因子(细胞因子),其量与引起的炎症程度相关;在一定范围内,在浓度和暴露于炎性剂的时间与释放的细胞因子的量之间存在正比例。
采用的实验模型提供了由半透膜(0.4μm孔)物理分隔的两个室。将细胞接种在下室中,而上室容纳有炎性剂;在分隔两个室的半透膜上,使所分析样品的薄膜成层(stratified)以突出(如果存在的话)对炎性剂的自由转运的屏障效应。
半透膜允许炎性剂通过到下室中,并构成了使待分析样品的在上面成层的支持物。取决于样品的“绝缘”能力,LPS从上室到下室迁移是否会减少(因此较少刺激细胞以产生细胞因子)。
进行的测定表明,由本发明组合物所发挥的屏障效应使得,在所述组合物的存在下经受炎性剂作用的细胞中IL-6标志物的产生相对于在不存在所述组合物的情况下经受相同炎性剂作用的对照细胞降低约65-75%。
开发该测定法以在体外模拟施用于皮肤和粘膜上的形成对于外部试剂的“分离”膜的物质和制剂的保护作用。该模型利用了这样的原理:与炎性剂接触的细胞在细胞外环境中产生和分泌促炎性调节因子(细胞因子),其量与引起的炎症程度相关。该测定法设想了建立由允许足够小的溶质转运的半透膜物理分隔的两个室。
在由包含用于细胞培养物的板的孔组成的在下室中,细胞生长(人成纤维细胞的原代细胞系-HUDE),而上室由插入物(transwell)组成并容纳炎性剂LPS。
在分隔两个室的transwell膜的内表面上,使待检查的样品的薄膜成层以评估对于炎性剂自由转运的任何屏障效应(BE)。
通过下室培养基中释放的细胞因子,特别是炎症反应后期典型的白细胞介素6(IL-6)的半定量剂量评估炎症反应的程度。
在下表1中,报道了通过上述实验获得的结果,其也总结在图3中。
表1
Figure GDA0003523906600000101
从结果可以看出,在存在测定产品的实验中产生的IL-6的浓度显著降低。
对于阴性对照检测的IL-6值等于63.28pg/μL,与正常基础值(即非炎性条件)相当。
图3清楚地显示了产品对细胞的保护作用。
通过应用以下公式,数据表示为与对照C-相比的倍数(F.O.):
相对于(C-)的倍数=[测量的IL-6]/[C-IL-6]
根据在屏障测定和阳性对照中测量的平均IL-6值,计算IL-6释放减少的百分比:
100-[(IL-6样品)/IL-6C+)×100]
因此,通过应用制剂,获得了在测定样品存在下进行的实验中IL-6产生减少的值。与图3中报道的阳性对照相比,通过用本发明的组合物进行测定获得的平均值为70.93%。
为了验证结果仅取决于测定样品的屏障效应并排除对细胞因子合成的任何干预(抗炎作用),对每个样品进行屏障测定(B.A.)的同时还进行了内部对照(IC)测定,其中进行上述屏障测定的相同步骤,但是颠倒了细胞的应激顺序:细胞首先用LPS刺激,然后暴露于样品。
在这种情况下,白细胞介素的产生不受样品存在的影响,如图4中报道的图所示,表明产品不具有直接的抗炎活性。最后,细胞活力测定表明,所进行的操作和所进行的处理均未证实对细胞具有细胞毒性。
获得的结果(未报道)显示片剂具有形成阻碍炎性剂LPS转运的保护屏障的良好能力。
本发明的作者已经进行了用于评估本发明组合物在各种稀释度下的抗氧化活性的实验,其通过用本发明的组合物相对于空白和相对于溶解在所述空白中的维生素C平行进行的实验实施。
因此,下文报道的数据显示本发明的组合物如何也具有优异的抗氧化活性,以及所述组合物如何相对于混悬于相同辅料中的维生素C以流体形式保持稳定。
获得的数据表明,本发明的组合物具有自由基清除作用,其与当引入以代替本发明组合物中的龙牙草多酚级分的维生素C所发挥的作用相当。图5和6显示了结果,分别表示为各种浓度的组合物的代表随时间的自由基形成的图和代表随时间的清除作用的直方图。对1克本发明的组合物进行实验,在盐水中使最终体积为10ml,并以组合物的0.5mg/ml的最大浓度和0.03mg/ml的最小浓度进行测定。
通过评估所分析样品中和通过用500μM H2O2溶液处理培养细胞产生的自由基的有效性来进行实验。针对H2O2诱导的氧化应激的保护,用实验实例2中报道的测定法在100分钟时测量针对自由基形成的保护百分比表示。
在实验部分中,详细报道了为评估本发明组合物的清除活性而进行的实验。
进行的实验表明,本发明的组合物具有良好的清除作用,能够中和H2O2诱导的自由基(FR):分析的第一剂量(0.5mg/ml)在每个暴露时间之后分别使FR形成减少39-50-53-53-55和56%;分析的第二剂量(0.25mg/ml)在每个暴露时间之后分别使FR形成减少40-50-51-49-48和47%;第三剂量(0.125mg/ml)在每个暴露时间之后分别使FR形成减少41-43-42-35-32和30%;第四剂量(0.0625mg/ml)在每个暴露时间之后分别使FR形成减少31-32-30-27-25和23%;并且第五剂量(0.0313mg/ml)在每个暴露时间之后分别使FR形成显著抑制30-26-24-23-22和19%。
抗坏血酸(0.05mg/ml)具有清除作用,其能够在暴露于应激的6个时间之后分别使FR减少45-57-60-60-63和61%,因此这些值与第一剂量的所检查组合物的那些值相当。
根据本发明,该组合物可制备用于口服施用,并可制成片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、糖浆剂、液体剂、酏剂、喷雾剂、混悬剂、乳剂、溶液剂的形式。
对于口服施用,组合物可以以每日单位剂量或每日单位剂量的部分的形式制备(例如,根据治疗医生的判断,每天可摄取2、3、4、5、6或更多片剂、丸剂、颗粒剂或粉剂单剂量,糖浆剂、酏剂、喷雾剂或液体剂),并且可以包含常规的辅料,包括例如粘合剂、增稠剂如树胶(黄蓍胶、阿拉伯树胶)、动物明胶和聚乙烯吡咯烷酮;稀释剂,如糖、多元醇(山梨糖醇、甘露醇、木糖醇)、麦芽糖糊精、无机盐(磷酸氢钙、碳酸钙);崩解剂,如大米淀粉、玉米淀粉和马铃薯淀粉;润滑剂,如硬脂酸镁、不同分子量的聚乙二醇;助流剂,如胶体二氧化硅;抗粘附剂,例如滑石;润湿剂,如十二烷基硫酸钠。片剂可以根据标准药学实践中熟知的方法包衣。
组合物也可以制成液体或半液体形式,作为用于口服施用的混悬剂、乳剂、溶液剂,并且可以任选地含有天然矫味剂以给予其可口的味道。
粉末或颗粒形式的组合物可以在合适的容器中预先计量并通过原样摄取或重悬在适当的液体如水、茶等中准备使用。在这种情况下,组合物也含有天然矫味剂,使其具有可口的味道。
显然,所有上述辅料均可以药学上可接受的等级使用。
在一个实施例中,在任何一个上述实施例中的本文所述的组合物可以是药物组合物的形式,即包含药物级成分,或者其可以是或可以引入医疗食品或医疗装置。
根据本说明书的组合物可以制备成药物组合物的形式,或者根据Directive 93/42/EEC中对于医疗装置描述的任一类型的医疗装置的形式(还包含物质并且不仅仅是物体含义上的“装置”)。
在糖浆的情况下,也可以使用上述活性组分和一种或多种前述试剂(防腐剂、增稠剂、辅料,矫味剂等)。
因此,在本发明的一个具体实施例中,组合物可以由以下组分组成或包含以下组分:
表2
Figure GDA0003523906600000121
Figure GDA0003523906600000131
可以是例如以下比例:
表3
一般组成 %w/w
红糖 40-60
蜂蜜 20-30
水载体 10-40
车前草叶多糖级分 0.1-1
药蜀葵多糖级分 0.1-1
龙牙草多酚级分 0.1-1
本发明还涉及用于制备所述组合物的方法,其中将如上所述的车前草、药蜀葵和龙牙草的各提取物与蜂蜜、红糖和一种或多种天然矫味剂、防腐剂、增稠剂和任选的药学上可接受的辅料混合。
最后,本发明还涉及用于治疗干咳、痰咳、URTI(上呼吸道感染)相关咳嗽和鼻后滴注引起的咳嗽的方法,该方法包括向有此需要的患者施用治疗活性剂量的本发明组合物,其中所述患者也可以处于儿科年龄、老年年龄、妊娠期。
制剂实例
在下文中,提供了液体制剂的一些具体实例,其不应理解为对本申请的限制。
表4
Figure GDA0003523906600000132
Figure GDA0003523906600000141
表5
组合物实例2 %w/w
红糖 35-55
蜂蜜 30-50
山梨糖醇糖浆 40-60
车前草叶多糖级分 0.1-1
药蜀葵多糖级分 0.1-1.5
龙牙草多酚级分 0.2-2
表6
组合物实例3 %w/w
红糖 40-60
蜂蜜 20-30
甘露醇糖浆辅料 10-40
车前草叶多糖级分 0.1-1
药蜀葵多糖级分 0.1-1.5
龙牙草多酚级分 0.2-2
表7
Figure GDA0003523906600000142
Figure GDA0003523906600000151
表8
组合物实例5 %w/w
红糖 40-60
蜂蜜 20-30
木糖醇糖浆辅料 10-20
甘露醇糖浆 10-20
车前草叶多糖级分 0.1-1
药蜀葵多糖级分 0.1-1.6
龙牙草多酚级分 0.3-1
表9
组合物实例6 %w/w
红糖 40-60
蜂蜜 20-30
去离子水和/或其它合适的载体或辅料 10-20
葡萄糖糖浆 10-20
麦芽糖醇糖浆 10-20
车前草多糖级分 0.2-1
药蜀葵多糖级分 0.1-1.6
龙牙草多酚级分 0.3-1
在一个优选的实施例中,在所有上述报道的实例中,将多糖和多酚级分冻干或通过喷雾干燥进行干燥。
实验实例
以下实验实例的目的是说明对本发明组合物进行的一些测定
1.粘膜粘附测定
可以通过合适的体外模型评估产品的粘膜粘附作用,其有助于在粘膜上形成保护膜。
使用的模型表明,用于处理粘膜的产品的粘膜粘附性可以通过评估凝集素-糖蛋白结合抑制的百分比来确定。将粘膜颊细胞先用生物素化的凝集素(Con-A)处理,凝集素是一些豆科植物(Canavalia ensiformis)中包含的对膜糖蛋白中存在的葡糖苷和甘露糖苷残基具有高亲和力的蛋白质。因此,粘膜糖蛋白的位点将全部与生物素化(用生物素(即维生素H)处理)的凝集素结合。用生物素化的凝集素处理的细胞带有链霉亲和素过氧化物酶,使得由于生物素与链霉亲和素之间的高亲和力而可以形成蛋白质/葡萄糖/凝集素/生物素/链霉亲和素过氧化物酶复合物。
此时,洗涤细胞,并通过邻苯二胺的氧化反应来定量蛋白质/葡萄糖/凝集素/生物素/链霉亲和素过氧化物酶复合物(比色评估),以评估过氧化物酶活性。
事实上,蛋白质/葡萄糖/凝集素/生物素/链霉亲和素过氧化物酶复合物会催化以下氧化反应:
Figure GDA0003523906600000161
溶液的黄色/橙色着色的强度(使用分光光度计在λ=450nm测量)与糖蛋白-凝集素键的量成比例,因此与用于粘膜粘附的可用位点(糖蛋白)的量成比例。
由此确定的吸光度值构成“对照”。
当确定产品的粘膜粘附性时,将细胞首先用该产品预先处理(在用凝集素处理之前在30℃孵育15分钟)。
如果检查的产品包含粘膜粘附物质,它们将与膜糖蛋白中存在的葡糖苷和甘露糖苷位点结合。
在下一阶段,顺序添加生物素化凝集素、链霉亲和素过氧化物酶和邻苯二胺将获得与对照相比较低强度的着色,这是因为可用于与Con-A结合的葡糖苷位点的一部分已被待测定产品中存在的粘膜粘附物质占据。事实上,待测定产品中包含的粘膜粘附物质与葡糖苷位点之间的初始结合部分地降低了随后Con-A与链霉亲和素过氧化物酶复合物的结合以及随后添加含氧水之后的显色。
吸光度值的降低与所检查物质“粘膜粘附”至粘膜细胞的能力成比例。
粘膜粘附能力表示为糖蛋白/凝集素结合抑制的百分比,并代表根据以下表达的由产品占据的粘膜位点的百分比:
产品的粘膜粘附百分比=(1–abs样品/abs样品)×100
此外,除了粘膜粘附能力之外,还评估了粘膜粘附层对与其接触的唾液溶液的作用的抗性。
为此,在实验的第二阶段中,在暴露于连续流动的人造唾液溶液之后,产品的粘膜粘附性随时间的抗性(0.5-2h)。
为了进行该测定,使用Franz池系统,其通常用于评估物质的经皮吸收或用于研究通过天然或人工膜的其它渗透过程。
在该实验中,在供给器(donor)中沉积颊细胞培养物,并用图2中报道的不同稀释度(所有可能的稀释度接近于体内可能发生的真实条件)的如测定2中所述的产品制剂进行处理。然后通过蠕动泵向供给器供给连续流动(2ml/min)的人造唾液溶液。
在供给器的基部与接收器(receptor)分离的区域中,放置醋酸纤维素膜,其能够允许唾液溶液从供给器流出到接收器,同时将粘膜细胞保留在供给器中。
在0.5、1、2小时后定期停止通过用检查产品处理的粘膜细胞的唾液流动,并将供给器细胞转移到合适的试管中进行粘膜粘附性评估。
根据获得的结果,可以推断具有良好的抗性粘膜粘附性的产品可以对口腔粘膜细胞起到有意义的保护作用。
为了模拟口腔中糖浆的天然稀释,对1:2稀释的产品进行粘膜粘附性测定;为了更完整,还测定了1:5稀释的产品的粘膜粘附性。
图1中报道了未稀释的或稀释的(1:2和1:5)产品对人颊细胞的粘膜粘附百分比。
在0.5小时、1小时和2小时的不同时间,用以1:2稀释的产品获得的粘膜粘附层对模拟唾液溶液(0.9%NaCl生理溶液)的抗性显示在图2中。
2.清除剂型抗氧化活性测定
评估样品对暴露于化学型渐进氧化应激的人细胞的抗氧化活性。
通过暴露于样品和氧化应激的细胞中的自由基形成的定量来获得抗氧化作用的评估。
所应用的方法基于使用荧光探针2,7二氯荧光素乙酸酯(DCA):该探针渗透到细胞中,与细胞膜蛋白和大分子结合。在这种形式中,探针不发荧光,仅在被自由基氧化时发荧光。将用DCA预处理的细胞暴露于多种稀释度的样品和过氧化氢。以20分钟至100分钟的规律间隔(5次测量),用荧光计(Victor X4 Perkin Elmer)评估自由基形成:通过将暴露于样品和氧化氢的细胞产生的自由基与仅暴露于过氧化氢的那些进行比较来获得清除剂作用。
制备根据实例2、4和6的组合物。
将由0.2%w/w药蜀葵多糖级分、0.35%车前草多糖级分、0.2%包含单宁的龙牙草多酚级分、25%蜂蜜(对于组合物4和6,而对于组合物2为35%)、46.6%的红糖和药学上可接受的载体和辅料(根据各个实例)组成的1g组合物称重,并使其在盐水中终体积为10ml(10mg/ml)。测定的溶液的pH大于7。从该母液开始,在盐水中制备浓度为0.5mg/ml的第一稀释液;通过应用1:2稀释因子从第一稀释液获得其它四种稀释液。
还测定了根据上述组合物实例的其它组合物,得到了类似的结果。还证实了组合物中使用的载体和辅料不具有抗氧化活性。伴随组合物,还分析了阳性对照和内部对照。
阳性对照:暴露于500μM H2O2溶液的细胞。
内部对照:暴露于抗坏血酸溶液(0.05mg/ml)的细胞。
阴性对照:暴露于接种培养基的细胞。
该测定在由单层稳定的人角膜细胞组成的简单细胞模型上进行(细胞购自IZSLER并且保证不含任何病毒/细菌污染和/或支原体)。
试剂/溶液及相关缩写的描述:
胎牛血清 FCS
十二烷基硫酸钠 SDS
培养培养基:补充有谷氨酰胺(2mM)、抗生素如青霉素(2000UI/ml)-链霉素(1000UI/ml)-两性霉素(2μg/ml)和胎牛血清(10%)、氢化可的松0.5ng/ml、胰岛素5μg/ml、上皮生长因子0.01μg/ml的Dulbecco高葡萄糖(D-MEM)DMEM
接种培养基:补充有谷氨酰胺(2mM)、抗生素如青霉素(2000UI/ml)-链霉素(1000UI/ml)-两性霉素(2μg/ml)和胎牛血清(5%)、氢化可的松0.5ng/ml、胰岛素5μg/ml,上皮生长因子0.01μg/ml的Dulbecco高葡萄糖(D-MEM) DMEMi
磷酸盐缓冲液 PBS
中性红工作溶液:临使用前将0.4%储备溶液在最低必需培养基(MEM)中稀释并在纸上过滤。使用浓度为0.04% NRw
中性红提取液:使用前几分钟制备,由49%蒸馏水-50%乙醇-1%冰醋酸组成 ExB
2,7二氯荧光素二乙酸酯:4μm DCA剂量、施用途径和分析重复
建立样品的5个基础2倍稀释液的两个系列(在存在和不存在H2O2的情况下):0.5–0.25–0.125–0.0625和0.0313mg/ml。在500μM H2O2盐水溶液中进行相同的程序以获得相同的五种稀释液。将每种稀释液150μl(在盐水和H2O2中)分配到两个不同板上的四个孔中。
第1天
细胞接种
将培养的细胞从生长培养基中酶促脱壁,并用电子细胞计数器(Scepter)计数;制备密度为300,000个细胞/ml的细胞混悬液(在接种培养基中),然后将其分配到96孔板中:每孔100μl,获得每孔30,000个细胞的接种密度。最后,将板放回37℃和富含5%CO2的潮湿气氛的培养箱中持续随后24小时。
第2天
暴露于DCA探针
除去接种培养基,用PBS洗涤细胞一次,然后弃去PBS并将150μl DCA(4μM)分配到两个板中。然后,将板放回37℃和富含5%CO2的气氛的培养箱中15分钟。
在DCA孵育期结束时,除去溶液,将细胞用PBS洗涤一次,然后将样品和对照的150μl上述稀释液分配到板中。然后,从T0(刚接种到两个板中后)开始每20分钟用荧光计测量自由基形成,直至100分钟(5次测量)。在测量结束时,100分钟后,除去两个板的接种物并进行中性红摄取活力测定(Neutral Red Uptake vitality assay)。
使细胞在具有富含5%CO2的气氛的培养箱中在37℃下与150μl NRw接触3小时。中性红(NR)穿透细胞并储存在溶酶体中。只有保持膜功能完整的活细胞才能保留NR。因此,活细胞数量越多,细胞中存储的NR量越大。在孵育3小时结束时,收集板,除去NR溶液,并用150μl PBS洗涤细胞以除去过量的NR。然后,通过在每个孔中施用150μl ExB来提取溶酶体中积累的中性红。提取阶段在室温下搅拌持续15分钟。从而获得红色流体,其通过570±30nm的分光光度读数测量的强度与存在的活细胞数成比例。
通过使用Victor X4(Perkin Elmer)读板仪在540nm处的荧光和分光光度读数,测量在96孔板中发射荧光和提取的中性红的强度。
结果评估和计算
生存率检测
%活力=[(O.D.样品±H2O2/O.D.对照Pos/Neg)×100]
%活力抑制=(100-%活力)
O.D.:光密度
O.D.样品±H2O2:从在具有和不具有H2O2的情况下暴露于样品的细胞获得的光密度平均值
O.D.阳性/阴性对照:从暴露于H2O2溶液或仅盐水(100%活力)的细胞中获得的光密度平均值
清除剂抗氧化活性的评估
F.U.:荧光单位
F.U.阳性对照:从暴露于H2O2溶液(最大自由基产生)的细胞发射的F.U.的平均值
F.U.阴性对照:从未暴露于氧化应激的细胞发射的F.U.的平均值
在暴露的每个间隔(T0-T1-T2-T3-T4-T5)进行:
1)归一化
从暴露于样品、维生素C和氧化应激的细胞发射的F.U.的平均值中减去暴露于样品、维生素C但没有氧化应激的细胞发射的F.U.的平均值。换句话说,从应激板发射的荧光的平均值中减去从非应激板发射的荧光的平均值。
2)自由基减少的百分比的计算:
%FR抑制=
[100-(F.U.样品pos-F.U.样品neg)/(U.F.对照pos-U.F.对照neg)*100]
F.U.样品pos:暴露于样品和氧化应激的细胞
F.U.样品neg:仅暴露于样品的细胞
U.F.对照pos:仅暴露于氧化应激的细胞
U.F.对照neg:暴露于没有氧化应激的盐水的细胞
研究纳入标准
样品-阳性和阴性对照:变异系数必须<20%。
变异系数
VC=((sd/OD平均值)×100)
p值(2型双尾t检验)必须低于0.05%。
下表报道了与自由基形成有关的数据。处理的数据在图5中报道。
表10
Figure GDA0003523906600000201
Figure GDA0003523906600000211
表中报告的数据表明,在0.5mg/ml和0.25mg/ml稀释度下,用本发明的组合物获得的值与用维生素C获得的值相当。
然后根据所分析物质发挥的自由基保护百分比处理获得的数据。
下表报道了与获得的结果相关的数据。下表中报告的内容在图6中以图形方式处理。
表11
Figure GDA0003523906600000212
表中报告的数据表明,在0.5mg/ml和0.25mg/ml稀释度下,用本发明的组合物获得的值与用维生素C获得的值相当。
下表报道了获得结果的统计显著性。
表12
Figure GDA0003523906600000213
从上表中可以明显看出,对所得结果的统计分析证实,所进行的试验符合所有要求的可接受标准,因此验证了所检查物质的数据。
综上所述,在如上所述的各种实施例中对本发明组合物的样品进行的测定证明该组合物具有良好的清除作用,能够中和H2O2诱导的自由基(FR):分析的第一剂量(0.5mg/ml)在每次暴露时间之后分别使FR形成减少39-50-53-53-55和56%。凭借该结果,该剂量可被认为是最有效的剂量。
分析的第二剂量(0.25mg/ml)在每次暴露时间之后分别使FR形成减少40-50-51-49-48和47%。
在第三剂量(0.125mg/ml)下,在每次暴露时间之后分别使FR形成减少41-43-42-35-32和30%。
在第四剂量(0.0625mg/ml)下,在每次暴露时间之后分别使FR形成减少31-32-30-27-25和23%。
第五剂量(0.0313mg/ml)在每次暴露时间后分别显著抑制FR形成30-26-24-23-22和19%。
抗坏血酸(0.05mg/ml)具有清除作用,在六次暴露于应激之后能够分别使FR减少45-57-60-60-63和61%。
在未暴露于氧化应激的板上进行的中性红摄取活力测定突出显示细胞活力没有降低,例如损害测定的显著性。
因此,考虑到所施加的高应激力,本发明的组合物被证明是良好的清除剂。
3.本发明组合物的稳定性的评估
通过欧洲药典(EP 9.2,2.8.14)中对于龙牙草所描述的分光光度法测量以连苯三酚(pyrogallol)表示的总单宁含量,以评价流体形式(糖浆,根据上述实例2)的本发明组合物关于单宁的稳定性。
从下表13中报告的数据可以观察到,在将样品保持在40℃和75%相对湿度的极端条件下的6个月的间隔中,没有观察到滴度的变化。
在与该制剂的区别仅在于存在维生素C以代替单宁的制剂中,维生素C没有表现出超过T0的稳定性。
表13
Figure GDA0003523906600000221
4.屏障效应测定
对于屏障效应测定,使用由半透膜(0.4μm孔)物理分隔的两个室。将人成纤维细胞接种在下室中,而将炎性剂LPS(纯化的大肠杆菌脂多糖)引入上室中;在分隔两个室的半透膜上,使如本发明所述的组合物的薄膜成层。
通过下室培养基中释放的白细胞介素6(IL6)细胞因子的半定量剂量来估计诱导的炎症反应:通过与阳性对照进行比较来获得屏障效应的评估,在阳性对照中,两个室通过相同类型的半透膜分离,但没有任何屏障。
对于高于其时可以说物质在本文报道的测定中引起屏障效应的阈值,发明人基于对已知具有屏障效应的物质进行的测定,在测定建立期间确定了与对照相比等于15%抑制的值。
然后,评估上述2中制剂的组合物的屏障效应。
图3中报告的数据显示该组合物如何具有显著的屏障效应。
如下,通过开发来在体外模拟物质和制剂的保护作用的方法进行评估测定,所述物质和制剂在施用于体内皮肤和粘膜时形成针对环境因子的“绝缘”膜。
该模型利用了这样的原理:与炎性剂接触的细胞在细胞外环境中产生和分泌促炎性调节因子(细胞因子),其量与引起的炎症程度相关。到达细胞的炎性剂的量越大,释放的细胞因子的量越大。
设置通过半透膜物理分隔的两个室,所述半透膜物允许足够小尺寸的溶质通过。
在由包含用于细胞培养物的板的孔组成的在下室中,培养HuDe细胞(no.BS PRC41,购自Istituto Zooprofilattico di Brescia,意大利),而由用于复合细胞培养的插入物(transwell)组成的上室容纳炎性剂。
在分隔两个室的插入物的半透膜的表面上
在分隔两个室的插入物的半透膜的表面上,在上室中引入炎性剂之前,使检查的样品的薄膜成层以评估对于炎性剂自由转运的任何BE。
取决于样品的绝缘能力,炎性剂从上室的迁移将减少,继而作为结果,较少地刺激细胞以产生细胞因子。通过下室培养基中释放的细胞因子,特别是白细胞介素6(IL-6)的半定量剂量评估炎症反应的程度。
作为对照,使用类似的实验,其中没有样品在膜上成层,因此使得可以在除了半透膜之外没有任何屏障的情况下测量炎性剂的作用。
此外,使用内部对照,其中将培养的细胞用适于诱导标志物释放的物质预处理,并且将样品在没有所述物质的情况下放置在半透膜上,因此随时间进行所述内部对照的培养基中标志物的量的一次或多次测量。因此,在内部对照中,首先用诱导物质刺激细胞,然后评估可通过膜并且进入由上述培养基推动的细胞的样品是否对减少标志物的释放有任何作用,而与屏障效应无关。例如,当使用炎性剂作为诱导物质时,内部对照使得可以理解培养基中细胞因子浓度的降低是否是由于屏障效应或者可以进入由上述培养基推动的细胞的样品是否对减少炎症反应具有任何影响,而与屏障效应无关。
屏障效应(BE)表示为IL-6释放减少的百分比,并且通过与阳性对照进行比较来计算,在阳性对照中,两个室由相同类型的半透膜隔开,但是没有通过样品产生的屏障。
4.1细胞培养物的准备:
对于每个测定的样品(如上文2所述),将HuDe细胞系在补充有10%牛血清(FBS)的MEM培养基中以40,000个细胞/ml的密度接种在细胞培养板的孔中,一个用于屏障测定(TB)(BA),另一个用于内部对照;每孔1ml细胞混悬液。
用样品(CAM)、阳性对照(C+)(炎性剂而无样品)和阴性对照(C-)(仅培养基)处理细胞,每个测定一式三份进行。
将板在37℃孵育过夜(22-24小时)。
4.2用于复合细胞培养的插入物的制备
将用于复合细胞培养的细胞培养插入物(Becton Dickinson)置于其它板上,并在每个板上提供固定量的0.1mg/ml的胶原蛋白。将板在37℃孵育过夜(22-24小时)。
为了进行实验,预期汇合度不低于95%。
从具有插入物的两个板(BA和IC)中除去胶原,并将插入物留在通风橱的流动下持续使其完全干燥所需的时间(10-15分钟)。
4.3屏障测定(BA)
在BA的培养板中进行下述步骤。
建立BA中的样品层:
在样品的半透膜上,接种100μl基于0.5%藻酸盐的组合物并使其成层20分钟,而在C+插入物和C-插入物中不添加任何物质。一旦经过20分钟,就根据方案中规定的程序除去过量的样品,并用PBS洗涤膜。
向BA插入物中添加LPS(炎性剂)
一旦如上2中的实例所述的样品层干燥,在前三个CAM插入物和三个C+插入物中,以1μg/ml的浓度接种300μl LPS(膜脂多糖)溶液,而在剩余的三个C-插入物中,添加300μl含5%FBS的MEM培养基。将插入物插入到其各自的具有细胞的孔中,并将板在37℃孵育和富含5%CO2的气氛下孵育1小时,过夜(22-24小时)。
一旦完成1小时孵育,取出插入物并丢弃,再将板孵育过夜(22-24小时)。
4.4内部对照(IC)分析:
与BA同时进行内部对照测定。
IC细胞暴露于LPS:
一旦干燥,在IC的前六个插入物(三个用于待分析的样品CAM,三个用于C+)中接种300μl的LPS溶液,而在剩余的三个C-中,添加300μl培养基。
然后将具有LPS和MEM的插入物插入具有IC细胞的孔中,并且全部孵育1小时。
LPS去除和IC膜干燥:
一旦完成1小时孵育,从具有细胞的孔中取出插入物并转移到空板中,同时将具有细胞的板置于培养箱中。
从插入物中除去仍然存在的LPS溶液,用超纯无菌水快速洗涤插入物并使其干燥。
IC中样品层的设置:
在用于样品的三个插入物的半透膜上,接种100μl基于0.5%藻酸盐的组合物并使其成层20分钟,而在C+插入物和C-插入物中不添加任何物质。一旦20分钟过去,根据方案规定的程序除去过量的样品并用PBS洗涤膜。
在IC插入物中添加LPS
一旦准备好具有样品的插入物,向所有插入物(CAM、C+、C-)中加入300μl培养基。将各插入物插入其各自的具有细胞的孔中,将板在37℃下孵育1小时。
完成1小时孵育后,取出插入物并丢弃,并再将板孵育过夜(22-24小时)。
4.5上清液收集和酶免疫测定
一旦22-24小时过去,从BA和IC板收集上清液,用于进行ELISA测定和IL-6的半定量剂量。
屏障效应(BE)评估
物质或化合物的BE表示为暴露于LPS的细胞释放IL-6细胞因子的减少%,其中相对于细胞仅暴露于LPS的阳性对照(C+)测定样品。
BE=IL-6细胞因子释放的减少%=100-[(从样品释放的细胞因子pg/μL/从C+释放的细胞因子pg/μL)×100]
从图1-4中的结果可以看出,本发明的组合物具有优异的粘膜粘附性质和高屏障效果。
因此,显然,除了自由基清除剂活性和随时间的稳定性外,该组合物还具有屏障效应和高粘膜粘附性质。
5.级分的制备
1.药蜀葵的多糖(粘质物)级分的制备实例
将干燥和破碎的药蜀葵根通过渗滤消化在静态提取器中用水进行提取,将植物浸入溶剂中并使溶剂通过机械泵从底部到顶部再循环。
药物-溶剂比(DSR)等于1:10,提取温度为90℃,提取时长为12小时。从得到的混合物中,通过静态倾析然后在纸过滤器上过滤使不溶性残余物与可溶性级分分离。使用真空浓缩系统通过乙醇蒸发将所得溶液浓缩。在达到10:1的浓缩度时,停止浓缩,并通过冷冻干燥或喷雾干燥完成干燥。冻干的材料构成目标级分(DER 4-10:1)。
2.车前草多糖级分的制备实例
将干燥和破碎的车前草叶通过渗滤消化在静态提取器中进行50%乙醇(乙醇:水50:50v/v)提取,将植物浸入溶剂中并使溶剂通过机械泵从底部到顶部再循环。
药物-溶剂比(DSR)等于1:10,提取温度为50℃,提取时长为6-8小时。从得到的混合物中,通过静态倾析然后在纸过滤器上过滤使不溶性残余物与可溶性级分分离。使用真空浓缩系统通过乙醇蒸发将所得溶液浓缩。在达到10:1的浓缩度时,停止浓缩,并通过冷冻干燥或喷雾干燥完成干燥。冻干的材料构成目标级分(DER 4-10:1)。
3.龙牙草多酚级分的制备实例
将干燥和破碎的龙牙草顶部通过渗滤消化在静态提取器中用水进行提取,将植物浸入溶剂中并使溶剂通过机械泵从底部到顶部再循环。
药物-溶剂比(DSR)等于1:8,提取温度为90℃,提取时长为12小时。从得到的混合物中,通过静态倾析然后在纸过滤器上过滤使不溶性残余物与可溶性级分分离。使用真空浓缩系统通过乙醇蒸发将所得溶液浓缩。在达到10:1的浓缩度时,停止浓缩,并通过冷冻干燥或喷雾干燥完成干燥。冻干的材料构成目标级分(DER 4-10:1)。

Claims (11)

1.一种组合物,所述组合物用于在治疗咳嗽中使用,所述组合物由0.1-2%w/w的长叶车前草(Plantago lanceolata)多糖级分、0.1-5%w/w的药蜀葵(Althaea officinalis)多糖级分、0.1-2%w/w的包含单宁的欧洲龙牙草(Agrimonia eupatoria)多酚级分、30-60%w/w的红糖、20-50%w/w的蜂蜜和补充至100%w/w的一种或多种药学上可接受的载体和/或辅料组成。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述长叶车前草多糖级分包含分子量高于20000道尔顿的多糖。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中所述药蜀葵多糖级分包含分子量高于20000道尔顿的多糖。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述辅料选自天然矫味剂、防腐剂、增稠剂。
5.根据权利要求4所述的组合物,其中所述天然矫味剂选自柠檬汁、黑莓汁、天然橙矫味剂、天然柠檬矫味剂和天然桃金娘矫味剂,所述增稠剂是黄原胶。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述级分是冻干形式或喷雾干燥形式。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述组合物为片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、硬明胶剂、软明胶剂、混悬剂、喷雾剂、乳剂或溶液剂的形式。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其特征在于当不稀释或稀释至最大1:5时,所述组合物通过凝集素结合抑制测量的粘膜粘附百分比为85%至50%。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述治疗是治疗干咳、痰咳、与上呼吸道感染(URTI)相关的咳嗽、或鼻后滴注引起的咳嗽。
10.权利要求1至9中任一项所述的组合物在制备用于治疗咳嗽的药物中的用途。
11.一种用于制备组合物的方法,所述组合物由0.1-2%w/w的长叶车前草多糖级分、0.1-5%w/w的药蜀葵多糖级分、0.1-2%w/w的包含单宁的欧洲龙牙草多酚级分、30-60%w/w的红糖、20-50%w/w的蜂蜜和补充至100%w/w的一种或多种药学上可接受的载体和/或辅料组成,其中将长叶车前草多糖级分、药蜀葵多糖级分、包含单宁的欧洲龙牙草多酚级分与蜂蜜、红糖和一种或多种药学上可接受的辅料和/或载体混合。
CN201880011901.7A 2017-02-15 2018-02-12 用于咳嗽的组合物 Active CN110300593B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT102017000016964 2017-02-15
IT102017000016964A IT201700016964A1 (it) 2017-02-15 2017-02-15 Composizione per la tosse
PCT/IB2018/050837 WO2018150309A1 (en) 2017-02-15 2018-02-12 Composition for cough

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110300593A CN110300593A (zh) 2019-10-01
CN110300593B true CN110300593B (zh) 2022-05-24

Family

ID=59297239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880011901.7A Active CN110300593B (zh) 2017-02-15 2018-02-12 用于咳嗽的组合物

Country Status (20)

Country Link
US (1) US11154564B2 (zh)
EP (1) EP3582796B1 (zh)
JP (1) JP7088943B2 (zh)
CN (1) CN110300593B (zh)
AU (1) AU2018220880B2 (zh)
BR (1) BR112019013857A2 (zh)
CA (1) CA3049843A1 (zh)
CY (1) CY1124457T1 (zh)
DK (1) DK3582796T3 (zh)
EA (1) EA201991659A1 (zh)
ES (1) ES2886511T3 (zh)
HR (1) HRP20211330T1 (zh)
HU (1) HUE055336T2 (zh)
IT (1) IT201700016964A1 (zh)
LT (1) LT3582796T (zh)
PL (1) PL3582796T3 (zh)
PT (1) PT3582796T (zh)
RS (1) RS62203B1 (zh)
SI (1) SI3582796T1 (zh)
WO (1) WO2018150309A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT201700016964A1 (it) 2017-02-15 2018-08-15 Aboca Spa Societa Agricola Composizione per la tosse
ES2805776T1 (es) * 2019-03-26 2021-02-15 Schwabe Pharma Italia S R L Formulación farmacéutica para uso oral que contiene miel y extractos de plantas con un contenido ensayado de polisacáridos y mucílagos para el tratamiento de toses productivas y no productivas y enfermedades de garganta
CN115010823B (zh) * 2022-06-16 2023-03-24 佳木斯大学 一种调节肠道菌群的车前子多糖及其制备方法与应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105764519A (zh) * 2013-10-25 2016-07-13 阿波卡-阿格里科拉共同股份公司 用于治疗咳嗽的基于植物的组合物
CN105848664A (zh) * 2013-12-23 2016-08-10 阿波卡-阿格里科拉共同股份公司 用于治疗持续性咳嗽的组合物

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4401651A (en) * 1979-04-18 1983-08-30 Knutson Richard A Wound-healing compositions containing povidone-iodine
JPS60174728A (ja) * 1984-02-22 1985-09-09 Sato Seiyaku Kk 持効性製剤
JPH0453495A (ja) * 1990-06-20 1992-02-21 Takeshi Uozumi 粘性多糖類の生産方法
AU767241B2 (en) * 1998-09-14 2003-11-06 Qiang Xu Immunosuppressive agents
JP2004269513A (ja) * 2003-02-19 2004-09-30 Rohto Pharmaceut Co Ltd 固形製剤
WO2006032091A2 (en) * 2004-09-21 2006-03-30 Lavender Hill Projects Pty Ltd Herbal composition
DE202008008532U1 (de) * 2008-06-30 2009-08-13 Maria Clementine Martin Klosterfrau Vertriebsgesellschaft Mbh Lutschzusammensetzung zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen des Mund- und Rachenraums
IT1391658B1 (it) * 2008-11-10 2012-01-17 Aboca Spa Societa Agricola Estratti di piante medicinali ottenibili per rimozione o neutralizzazione della frazione farmacologicamente attiva e composizioni che li contengono
US20130273113A1 (en) * 2012-04-12 2013-10-17 The Regents Of The University Of Michigan Immunogenic apoptosis inducing compositions and methods of use thereof
WO2014161811A1 (de) * 2013-04-02 2014-10-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Lutschtablette zur behandlung von halsschmerz, heiserkeit und assoziiertem trockenen husten, sowie entzündlichen erkrankungen des mund und rachenraums
CN104873524B (zh) * 2015-04-28 2019-01-11 中国药科大学 一类具有治疗的应激性肠易激综合征的鞣质的用途
CN105497223A (zh) * 2015-12-23 2016-04-20 蒙堂计 一种治疗咳嗽的中药组合物
IT201700016964A1 (it) 2017-02-15 2018-08-15 Aboca Spa Societa Agricola Composizione per la tosse

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105764519A (zh) * 2013-10-25 2016-07-13 阿波卡-阿格里科拉共同股份公司 用于治疗咳嗽的基于植物的组合物
CN105848664A (zh) * 2013-12-23 2016-08-10 阿波卡-阿格里科拉共同股份公司 用于治疗持续性咳嗽的组合物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Medfit Syrup with honey for cough relieving;佚名;《http://www.pharmamed.ba/en/cough-cold-flu/medifit-sirup-s-medom-protiv-ka%C5%A1lja-detail#.YGVuZ3byWfI》;20210401;第1-3页 *
药用多糖的应用现状和展望;Franz G;《国外医学.药学分册》;19901231;第17卷(第6期);第324-327页 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3582796A1 (en) 2019-12-25
CY1124457T1 (el) 2022-07-22
ES2886511T3 (es) 2021-12-20
HUE055336T2 (hu) 2021-11-29
DK3582796T3 (da) 2021-08-09
JP2020506204A (ja) 2020-02-27
US20190388448A1 (en) 2019-12-26
IT201700016964A1 (it) 2018-08-15
PT3582796T (pt) 2021-08-30
AU2018220880B2 (en) 2020-11-26
AU2018220880A1 (en) 2019-06-20
BR112019013857A2 (pt) 2020-01-28
SI3582796T1 (sl) 2021-11-30
US11154564B2 (en) 2021-10-26
EP3582796B1 (en) 2021-05-26
CA3049843A1 (en) 2018-08-23
PL3582796T3 (pl) 2021-12-20
NZ754291A (en) 2021-09-24
JP7088943B2 (ja) 2022-06-21
LT3582796T (lt) 2021-09-10
RS62203B1 (sr) 2021-08-31
EA201991659A1 (ru) 2019-12-30
WO2018150309A1 (en) 2018-08-23
CN110300593A (zh) 2019-10-01
HRP20211330T1 (hr) 2021-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110300593B (zh) 用于咳嗽的组合物
CN105764519B (zh) 用于治疗咳嗽的基于植物的组合物
KR20160050108A (ko) 천연물 추출물을 유효성분으로 포함하는 구강 위생 증진용 조성물 및 이의 용도
CN105848664A (zh) 用于治疗持续性咳嗽的组合物
CN113332244A (zh) 一种抗病毒口腔喷剂及制备方法
EP2996703B1 (en) Senna extracts and uses thereof
CN104918625B (zh) 灌肠剂
US20150216920A1 (en) Incense extract fractions and uses thereof
EP3672589A1 (fr) Produit de combinaison pour soulager les symptômes liés aux infections des voies respiratoires supérieures
US20160367719A1 (en) Fractions of extracts of helichrysum having mucohadhesive properties
EA042160B1 (ru) Композиция для лечения кашля
NZ754291B2 (en) Composition for cough
EP3714940A1 (en) Pharmaceutical formulation for oral use containing honey and plant extracts with an assayed polysaccharide and mucilage content for the treatment of productive and non-productive coughs and throat diseases
WO2023026227A1 (en) Composition for the prevention and/or treatment of gastric and esophageal diseases

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant