CN110283152A - 从苍耳中提取苍耳皂素的方法 - Google Patents
从苍耳中提取苍耳皂素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110283152A CN110283152A CN201910650667.9A CN201910650667A CN110283152A CN 110283152 A CN110283152 A CN 110283152A CN 201910650667 A CN201910650667 A CN 201910650667A CN 110283152 A CN110283152 A CN 110283152A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- siberian cocklebur
- saponin
- siberian
- cocklebur
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241001251949 Xanthium sibiricum Species 0.000 title claims abstract description 274
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 title claims abstract description 152
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 title claims abstract description 152
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 title claims abstract description 152
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 51
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 40
- 239000012925 reference material Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 108
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 65
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 42
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 35
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 35
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 35
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 27
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 23
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 20
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 20
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 17
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 16
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 15
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 15
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 9
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims description 7
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 2
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 claims 1
- 229940106154 cocklebur extract Drugs 0.000 claims 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000008236 heating water Substances 0.000 description 20
- 229910020820 NaAc-HAc Inorganic materials 0.000 description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 16
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 12
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 12
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 8
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 7
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 7
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 5
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229930009674 sesquiterpene lactone Natural products 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- -1 Sesquiterpene lactones Compound Chemical class 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000002318 cardia Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 244000008038 Canada cocklebur Species 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N Thapsigargin Natural products CCCCCCCC(=O)OC1C(OC(O)C(=C/C)C)C(=C2C3OC(=O)C(C)(O)C3(O)C(CC(C)(OC(=O)C)C12)OC(=O)CCC)C HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001506766 Xanthium Species 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000002107 sesquiterpene lactone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D307/93—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with a ring other than six-membered
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供了一种从苍耳中提取苍耳皂素的方法，包括：对苍耳样品进行液相色谱检测，筛选出优质苍耳；再对优质苍耳进行提取纯化得到苍耳皂素；其中，优质苍耳的筛选标准为：与苍耳皂素标准对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于50％；或在没有标准对照品的情况下，液相色谱检测保留时间在17.5～19.5分钟内，同时205纳米紫外末端吸收的色谱峰峰面积大于50％。本发明能够高效快速检测苍耳样品中是否含有苍耳皂素，含量是否符合要求，操作简单。本发明针对符合要求的样品进行有目的的提取分离，可获得高纯度的苍耳皂素，纯度可高达98％以上。本发明的方法简便，不需要使用昂贵的大型仪器，成本低，有益于实现工业化应用。
Description
技术领域
本发明涉及苍耳皂素提取技术领域。更具体地说，本发明涉及一种从苍耳中提取苍耳皂素的方法。
背景技术
苍耳(Xanthium sibiricum)为菊科苍耳属植物，在临床上被用来治疗风寒头痛、皮肤湿疹、鼻塞流涕等症状，具有抗炎、抗过敏、抗氧化、抗肿瘤等药理作用(王蓓，赵卫星，苍耳化学成分研究及应用[J].化工时刊，2011.25(7)：47-49)。苍耳含有多种倍半萜内酯类化合物，且具有包括抗菌、抗病毒、抗肿瘤等广泛的生物学效应(Vasas V，HohmannJ.Xanthane sesquiterpenoids：structure，synthesis and biological activity[J].Nat Prod Rep，2011，28(4):824)(Favier LS，Maria AOM，Wendel GH，et al.Anti-ulcergenic activity of xanthanolide sesquiterpenes from Xanthium cavanillesiiin rats[J].J Ethnopharmacol，2005，100:260-267)。但涉及单个倍半萜内酯化合物的提取与分离方面的研究甚少。张文治等人研究了苍耳皂素对不同菌种的抑制，发现其对番茄早疫、黄瓜枯萎、番茄灰霉、苹果腐烂菌有较好的抑菌活性(张文治、栗娜、白丽明等，苍耳化学成分及生物活性研究[J].广西植物，2017，37(5)：621-626)。
苍耳皂素的化学结构式为：倍半萜内酯类化合物中药理活性最高的的苍耳皂素含量较低，且不同的样品中的苍耳皂素含量差别较大，参差不齐，苍耳化学成分分离提取方面，目前存在提取技术繁琐，效率低且纯度不高等问题。
为了进一步研究苍耳皂素的药理活性，开发利用苍耳药用价值，亟需设计一种能够解决上述问题的从苍耳中提取苍耳皂素的方法。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种基于高效液相色谱技术，筛选出苍耳皂素含量较高的苍耳样品，进而从中提取苍耳皂素的方法，以提高获得的苍耳皂素的纯度。
本发明还有一个目的是提供一种从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其中，包括：
对苍耳样品进行液相色谱检测，筛选出优质苍耳；再对优质苍耳进行提取纯化得到苍耳皂素；其中，优质苍耳的筛选标准为：与苍耳皂素标准对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于50％，积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算得到；或在没有标准对照品的情况下，液相色谱检测保留时间在17.5～19.5分钟内，同时205纳米紫外末端吸收的色谱峰峰面积大于50％。苍耳皂素标准对照品可以通过市售获得，也可以自行使用纯苍耳皂素配制。
通过苍耳样品进行液相色谱检测，筛选出苍耳皂素含量高的油脂苍耳，然后再利用优质苍耳进行提取纯化得到苍耳皂素，从而提高获得的苍耳皂素的纯度。该方法快速准确，操作简单，能够解决目前技术存在的技术繁琐，效率低且纯度不高的问题。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，对苍耳样品进行液相色谱检测的色谱条件为：
色谱柱：C18柱；
流动相：乙腈：水的体积比＝35:65，流速1.0mL/min；
检测波长：205nm；柱温：25℃；
所述苍耳皂素标准对照品进样量10μL，所述苍耳样品进样量15μL。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，对优质苍耳进行提取纯包括以下步骤：
步骤一、取优质苍耳粉末，加入纤维素酶和缓冲溶液进行酶解反应后，高温灭活，用半仿生提取液在37℃和超声波辅助下提取，冷却后过滤，加热浓缩，与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
步骤二、将所得的苍耳硅胶粉上硅胶柱，用氯仿和乙醇的混合液梯度洗脱得到洗脱产物；将所得的洗脱产物进行薄层层析分析，合并相同样，获得得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样；
步骤三、将所得苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液梯度洗脱，进行薄层层析分析，合并相同样，用石油醚脱脂后，乙酸乙酯-正己烷萃取，减压浓缩，即得所述苍耳皂素。
该提取方法目的性强，不需要使用昂贵的大型仪器设备，成本低，有益于实现工业化应用。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，所述优质苍耳粉末的粒径为24～60目。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，所述纤维素酶的加入量为20～35U/g，所述缓冲液为pH 4.5的乙酸钠-乙酸缓冲液，所述优质苍耳粉末与缓冲液的质量比为1:7～12。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，所述步骤二中，进行梯度洗脱时，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1；或依次为2:1、3:1、7:2、4:1、9:2；或依次为1:1、3:2、5:2、4:1、6:1。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，所述步骤三中，进行梯度洗脱时，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％；或依次为70％、80％和85％；或依次为85％、95％和100％。
优选的是，所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法中，进行所述酶解反应的方法如下：
取粒径40～42目的优质苍耳粉末，加入纤维素酶和缓冲溶液进行第一次酶解，然后过40目的筛网，筛除粒径大于40目的固体后得到第一酶解产物；
将所得的第一酶解产物与纤维素酶和缓冲液混合进行第二次酶解，然后过38目筛网，筛除粒径大于38目的固体后得到第二酶解产物；
将所得的第二酶解产物与纤维素酶和缓冲液混合进行第三次酶解，然后过35目筛网，筛除粒径大于35目的固体后得到第三酶解产物；
最后再利用所得第三酶解产物进行后续的步骤。
由于酶的活性、温度和时间等等反应条件的影响，苍耳粉末并非完全彻底进行酶解，这部分苍耳粉末的细胞壁未被纤维素酶破解，内部有效成分不能溶解释放出来，从而影响了后续的提取纯化，导致提取得到的苍耳皂素纯度不高。
因此本申请的技术方案对苍耳粉末进行多级酶解，并且每一级酶解都进行过筛处理，充分酶解后的苍耳粉末细胞壁被溶解，苍耳粉末的粒径减小，因此能够通过筛网的筛孔，而为完全酶解的苍耳粉末粒径未减小，因此被筛网截留下来，经过三级筛网后的筛选后，得到的第三酶解产物的酶解程度很高，苍耳粉末的细胞壁被溶解破坏的程度也很高，因此内部的苍耳皂素能够极大程度释放出来，进而提高了后续提取纯化得到的苍耳皂素的纯度。
本发明至少包括以下有益效果：
首先，本发明的方法能够高效快速检测苍耳样品中是否含有苍耳皂素，含量是否符合要求，操作简单。
其次，本发明的方法针对符合要求的样品进行有目的的提取分离，可获得高纯度的苍耳皂素，纯度可高达98％以上。
再次，本发明的方法简便，不需要使用昂贵的大型仪器，成本低，有益于实现工业化应用。
最后，本发明的方法快速准确，操作简单；苍耳皂素提取通过酶解，超声波辅助半仿生提取液提取，得到的苍耳皂素纯度高，可达98％，方法简单，成本低，有益于实现工业化应用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明所述的苍耳皂素标准对照品的液相色谱图，保留时间为18.5min；
图2为本发明所述的苍耳样品的液相色谱图，保留时间为18.5min。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
实施例1
取5克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热,2小时后高温灭活5分钟，加入100毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声40min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测，其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳皂素标准对照品进样量10μL，苍耳样品的进样量15μL，苍耳皂素标准对照品由市售获得。色谱检测结果中，苍耳样品对应的色谱峰面积为90％，说明该苍耳样品可作为苍耳皂素提取的材料。
准确称取40目苍耳粗粉，加入20U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解120min后，高温灭活5min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取40min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100-200目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素标准对照品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比3:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度97％。
实施例2
取3克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热1.5小时后高温灭活5分钟，加入70毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声30min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测。其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳皂素标准对照品进样量10μL，苍耳样品的进样量15μL，苍耳皂素标准对照品由市售获得。色谱检测结果中，苍耳样品对应的色谱峰面积为81％，该样品可作为苍耳皂素提取的材料。
准确称取24目苍耳粗粉，加入30U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:7)，45℃水浴加热，酶解90min后，高温灭活5min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取30min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100～120目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为2:1、3:1、7:2、4:1、9:2，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标准品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为70％、80％和85％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比1.5:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度82％。
实施例3
取6克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热，2.5小时后高温灭活10分钟，加入120毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声30min，超声2次，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测。其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳皂素标准对照品进样量10μL，苍耳样品的进样量15μL，苍耳皂素标准对照品由市售获得。色谱检测结果中，苍耳样品对应的色谱峰面积为94％，说明该样品可作为苍耳皂素提取的材料。
准确称取60目苍耳粗粉，加入35U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:12)，45℃水浴加热，酶解150min后，高温灭活10min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取30min，超声提取2次，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100～120目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、3:2、5:2、4:1、6:1，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标准品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为85％、95％和100％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比3:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度98％。
实施例4
取5克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热,2小时后高温灭活5分钟，加入100毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声40min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测：保留时间在17.5～19.5分钟内，同时205纳米紫外末端吸收的色谱峰峰面积；其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳样品的进样量15μL，检测苍耳皂素标准对照品由市售获得。结果发现苍耳样品对应的色谱峰面积为90％，说明该苍耳样品可作为苍耳皂素提取的材料。
准确称取40目苍耳粗粉，加入20U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解120min后，高温灭活5min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取40min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100-200目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素标准对照品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比3:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度97％。
实施例5
取5克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热,2小时后高温灭活5分钟，加入100毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声40min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测，其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳皂素标准对照品进样量10μL，苍耳样品的进样量15μL，苍耳皂素标准对照品由市售获得。色谱检测结果中，苍耳样品对应的色谱峰面积为40％，说明该苍耳样品不适合作为苍耳皂素提取的材料。
为了验证该苍耳样品提取纯化得到的苍耳皂素纯度高低：
准确称取40目苍耳粗粉，加入20U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解40min后，过40目筛网，得到第一酶解产物；在第一酶解产物中加入20U/g底物的纤维素酶，和pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解40min后，过38目筛网，得到第二酶解产物；在第二酶解产物加入20U/g底物的纤维素酶，和pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解40min后，过35目筛网，得到第三酶解产物。
将所得的第三酶解产物进行高温灭活5min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取40min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100-200目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素标准对照品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比3:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度达到81％。
对比例1
取5克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热,2小时后高温灭活5分钟，加入100毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声40min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测，其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳皂素标准对照品进样量10μL，苍耳样品的进样量15μL，苍耳皂素标准对照品由市售获得。色谱检测结果中，苍耳样品对应的色谱峰面积为40％，说明该苍耳样品不适合作为苍耳皂素提取的材料。
为了验证该苍耳样品提取纯化得到的苍耳皂素纯度高低：准确称取40目苍耳粗粉，加入20U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解120min后，高温灭活5min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取40min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100-200目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素标准对照品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比3:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度只有42％。
对比例2
取5克苍耳粗粉加入10毫升纤维素酶提，加30毫升缓冲溶液(pH为4.5的NaAc-HAc缓冲溶液)，45度水浴加热,2小时后高温灭活5分钟，加入100毫升仿生提取液(0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶、0.02mol/L盐酸)，超声40min，冷却后过滤，取续滤液20ml水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至容量瓶定容，过滤，进入高效液相色谱仪检测，其中，色谱条件：色谱柱：C18柱(柱径4.6毫米×长度250毫米，粒径5μm)；流动相乙腈-水(35:65)，流速1.0mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；苍耳皂素标准对照品进样量10μL，苍耳样品的进样量15μL，苍耳皂素标准对照品由市售获得。色谱检测结果中，苍耳样品对应的色谱峰面积为32％，说明该苍耳样品不适合作为苍耳皂素提取的材料。
为了验证该苍耳样品提取纯化得到的苍耳皂素纯度高低：准确称取40目苍耳粗粉，加入20U/g底物的纤维素酶，加pH＝4.5的NaAc-HAc缓冲溶液(固液比1:8)，45℃水浴加热，酶解120min后，高温灭活5min，用pH＝6.0的仿生提取液(由0.9％氯化钠、0.32％胃蛋白酶及0.02mol/L盐酸配制而成)在37℃、500W超声波辅助下提取40min，冷却后过滤，合并滤液，50℃水浴加热浓缩，与100-200目硅胶按照1:20的质量比混合，得苍耳硅胶粉。将苍耳硅胶粉上硅胶柱(硅胶为200～300目)，用氯仿和乙醇的混合液对产物进行梯度洗脱，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素标准对照品对比，找出并提取含有苍耳皂素的粗样，合并相同样，得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样。将苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液对所述苍耳皂素浓缩粗样梯度洗脱，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％，继续进行薄层层析，在紫外光(205nm)下观察显色，与苍耳皂素的标样对比，将与苍耳皂素的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述苍耳皂素的纯化产物的乙醇溶液，该溶液用乙酸乙酯-正己烷(体积比3:1)萃取，减压浓缩除去溶剂，即得苍耳皂素，纯度只有33％。
数据分析
通过将实施例1和对比例1对比可以发现，经过色谱检测发现色谱峰面积低于50％的，其提取纯化得到的苍耳皂素的纯度也很低。
通过实施例5和对比例1发现，经过色谱检测发现色谱峰面积均为40％的情况下，未经三级酶解步骤的对比例1最终的苍耳皂素的纯度只有42％，而经历三级酶解步骤后的实施例5却能使得最终产物苍耳皂素的纯度达到81％。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (8)
1.一种从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，包括：
对苍耳样品进行液相色谱检测，筛选出优质苍耳；再对优质苍耳进行提取纯化得到苍耳皂素；其中，优质苍耳的筛选标准为：与苍耳皂素标准对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于50％；或在没有标准对照品的情况下，液相色谱检测保留时间在17.5～19.5分钟内，同时205纳米紫外末端吸收的色谱峰峰面积大于50％。
2.如权利要求1所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，对苍耳样品进行液相色谱检测的色谱条件为：
色谱柱：C18柱；
流动相：乙腈：水的体积比＝35:65，流速1.0mL/min；
检测波长：205nm；柱温：25℃；
所述苍耳皂素标准对照品进样量10μL，所述苍耳样品进样量15μL。
3.如权利要求1所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，对优质苍耳进行提取纯包括以下步骤：
步骤一、取优质苍耳粉末，加入纤维素酶和缓冲溶液进行酶解反应后，高温灭活，用半仿生提取液在37℃和超声波辅助下提取，冷却后过滤，加热浓缩，与硅胶混合，得苍耳硅胶粉；
步骤二、将所得的苍耳硅胶粉上硅胶柱，用氯仿和乙醇的混合液梯度洗脱得到洗脱产物；将所得的洗脱产物进行薄层层析分析，合并相同样，获得得苍耳皂素粗样，减压浓缩，得到苍耳皂素浓缩粗样；
步骤三、将所得苍耳皂素浓缩粗样上反相硅胶柱，用乙醇溶液梯度洗脱，进行薄层层析分析，合并相同样，用石油醚脱脂后，乙酸乙酯-正己烷萃取，减压浓缩，即得所述苍耳皂素。
4.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，所述优质苍耳粉末的粒径为24～60目。
5.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，所述纤维素酶的加入量为20～35U/g，所述缓冲液为pH 4.5的乙酸钠-乙酸缓冲液，所述优质苍耳粉末与缓冲液的质量比为1:7～12。
6.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，所述步骤二中，进行梯度洗脱时，氯仿和乙醇的配比依次为1:1、6:4、2:1、3:1、4:1；或依次为2:1、3:1、7:2、4:1、9:2；或依次为1:1、3:2、5:2、4:1、6:1。
7.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，所述步骤三中，进行梯度洗脱时，乙醇溶液的质量分数依次为75％、85％和95％；或依次为70％、80％和85％；或依次为85％、95％和100％。
8.如权利要求3所述的从苍耳中提取苍耳皂素的方法，其特征在于，进行所述酶解反应的方法如下：
取粒径40～42目的优质苍耳粉末，加入纤维素酶和缓冲溶液进行第一次酶解，然后过40目的筛网，筛除粒径大于40目的固体后得到第一酶解产物；
将所得的第一酶解产物与纤维素酶和缓冲液混合进行第二次酶解，然后过38目筛网，筛除粒径大于38目的固体后得到第二酶解产物；
将所得的第二酶解产物与纤维素酶和缓冲液混合进行第三次酶解，然后过35目筛网，筛除粒径大于35目的固体后得到第三酶解产物；
最后再利用所得第三酶解产物进行后续的步骤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910650667.9A CN110283152A (zh) | 2019-07-18 | 2019-07-18 | 从苍耳中提取苍耳皂素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910650667.9A CN110283152A (zh) | 2019-07-18 | 2019-07-18 | 从苍耳中提取苍耳皂素的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110283152A true CN110283152A (zh) | 2019-09-27 |
Family
ID=68023255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910650667.9A Pending CN110283152A (zh) | 2019-07-18 | 2019-07-18 | 从苍耳中提取苍耳皂素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110283152A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102617530A (zh) * | 2012-03-09 | 2012-08-01 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 一种从意大利苍耳提取的化合物及其作为除草剂的应用 |
-
2019
- 2019-07-18 CN CN201910650667.9A patent/CN110283152A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102617530A (zh) * | 2012-03-09 | 2012-08-01 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 一种从意大利苍耳提取的化合物及其作为除草剂的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 卢卫红主编: "《天然产物分离技术》", 中国轻工业出版社, pages: 5 - 6 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100488976C (zh) | 从何首乌中分离制备四羟基二苯乙烯苷方法 | |
| CN107353201A (zh) | 一种高含量天然莽草酸提取物及其制备方法 | |
| CN113801084B (zh) | 一种橘醋发酵底泥提取的多甲氧基黄酮及提取方法和应用 | |
| CN105753917B (zh) | 一种甘草苷的分离纯化方法 | |
| CN110423187A (zh) | 一种隧道超声与热循环蒸馏联用萃取大麻二酚（cbd）方法 | |
| CN1302003C (zh) | 苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法 | |
| CN106317148B (zh) | 一种从蛹虫草中提取虫草素的方法 | |
| CN1935798B (zh) | 一种穿心莲内酯的制备方法 | |
| Yan et al. | New ionic liquid-based preparative method for diosgenin from Rhizoma dioscoreae nipponicae | |
| CN110283152A (zh) | 从苍耳中提取苍耳皂素的方法 | |
| CN106883321B (zh) | 一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法 | |
| CN106432167A (zh) | 一种从红茶中提取茶黄素的方法 | |
| CN102617674B (zh) | 一种山莨菪根中东莨菪苷单体的制备方法 | |
| CN109400566B (zh) | 一种从卷柏属植物中提取分离高纯度穗花杉双黄酮的方法 | |
| CN1740137A (zh) | 一种从葵花粕中提取纯化绿原酸的方法 | |
| CN102399259A (zh) | 一种山麦冬皂苷b的分离纯化方法 | |
| CN102924545B (zh) | 一种木通皂苷d的富集和纯化方法 | |
| CN102942455B (zh) | 一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法 | |
| CN102190693A (zh) | 罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法 | |
| CN102351825B (zh) | 一种银杏双黄酮的提取分离方法 | |
| CN101434522B (zh) | 从棉籽脱酚液中制备高纯度棉酚的方法 | |
| CN1566349A (zh) | 一种从虎杖中制备白藜芦醇的方法 | |
| CN101353294A (zh) | 高含量白藜芦醇分离纯化的方法 | |
| CN108864240B (zh) | 地塞米松环氧水解物的提纯方法 | |
| CN103421058A (zh) | 一种高效率精确分离纯化去氧土大黄苷的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190927 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |