CN110248943B

CN110248943B - 制备嘌呤衍生物的方法

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Publication number: CN110248943B
Application number: CN201880008763.7A
Authority: CN
Inventors: B.斯凯德; R.韦斯特伍德; D.朗德斯布拉夫; J.诺特恩; C.阿瑟顿
Original assignee: Cyclacel Ltd
Current assignee: Cyclacel Ltd
Priority date: 2017-01-26
Filing date: 2018-01-25
Publication date: 2022-09-20
Anticipated expiration: 2038-01-25
Also published as: JP2020505348A; CN110248943A; EP3573988B1; AU2018213119A1; KR102524773B1; JP7122759B2; EP4212533A1; WO2018138500A1; EP3573988A1; US10927113B2; KR20190111043A; CA3050061A1; AU2018213119B2; US20190389863A1; PL3573988T3; JP2022163113A; ES2939049T3

Abstract

本发明涉及一种制备式[I]的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：式[II]+式[III]→式[1]，(i)形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，和(c)1,2‑丙二醇或聚乙二醇或其混合物，以及任选地(d)碱；(ii)将所述反应混合物加热到至少约150℃的温度以形成式[I]的化合物；(iii)分离所述式[I]的化合物；和(iv)任选将所述式[I]的化合物转化为盐形式；并且涉及制备结晶的式[I]化合物的酒石酸盐和游离碱的方法。

Description

制备嘌呤衍生物的方法

本发明涉及一种制备嘌呤衍生物的方法以及与其相关的中间体和衍生物。

发明背景

在WO 2008/122767(Cyclacel Limited；Cancer Research Technology Limited)中披露，嘌呤衍生物具有CDK抑制活性。举例来说，研究证明化学名为(2R,3S)-3-(6-((4,6-二甲基吡啶-3-基甲基氨基)-9-异丙基-9H-嘌呤-2-基氨基)戊-2-醇的化合物[1]显示强CDK抑制活性，因此在增殖性疾病、免疫介导疾病和炎性疾病、自体免疫疾病和自体免疫介导的疾病、肾病、心血管疾病、眼科疾病、神经变性疾病、精神病、病毒性疾病、代谢病和呼吸道疾病的治疗中具有潜在的治疗用途。

制备嘌呤衍生物的方法

有利地，化合物[1]在多种不同细胞系的细胞毒性研究中显示了出人意料的高效力。

在WO 2008/122767中首次描述了化合物[1]的合成制备。反应流程如图1所示。制备涉及合成氟-取代的嘌呤衍生物[2]以及与(2R,3S)-3-氨基戊-2-醇[3]偶联。偶联反应在ⁿBuOH中在DMSO和DIEA存在下进行。反应需要在140℃的温度下加热72小时，并且仅获得12％的所需产物。中间体化合物[3]经由(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇的Swern氧化和随后用MeLi和CuBr.SMe₂还原制成。随后将所得的中间体用TFA处理，得到化合物[3]。然而，MeLi/CuBr.SMe₂还原步骤导致立体选择性差，得到仅具有75％非对映体过量(d.e.)的产品。

在WO 2011/089401(Cyclacel Limited)中公开了偶联步骤的替代性条件，如图2中所示。这些替代性条件涉及将化合物[2]与化合物[3]在DIEA和乙二醇中在125℃的温度反应48小时。这引起了粗化合物产率的显著提高(59％，相比于WO 2008/122767中的12％)，随后将其从MTBE结晶，得到49.4％的总产率。随后通过从乙醇/水混合物中重结晶将结晶的游离碱物质转化为L-酒石酸盐晶体(II型；也称为E型)，产率72％。

本发明旨在提供诸如化合物[1]的CDK抑制剂的替代性合成制备以及与其相关的中间体和衍生物。更具体地，但非排他地，本发明旨在提供一种适合放大和/或引起以下效果中的一项或多项的合成路径：提高的产率，提高的纯度，改进的立体选择性，改进的易制备性，更快的反应时间，更少量/较少的副产品，和/或需要减少量的试剂。

发明内容

本发明的第一方面涉及一种制备式[I]的化合物的方法：

其中：

R¹和R²各自独立是H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立是H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵是烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，它们中的每个可任选被一个或多个OH基团取代；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，且其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和每个R⁹中的至少一个不是H；

所述方法包括以下步骤：

(i)形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，和(c)1,2-丙二醇或聚乙二醇或其混合物；

(ii)将所述反应混合物加热到至少约150℃的温度以形成式[I]的化合物；

(iii)分离所述式[I]的化合物；和

(iv)任选将所述式[I]的化合物转化为盐形式。

有利地，申请人已证明，上述偶联条件导致产率的显著提高。例如，对于化合物[1](结构如下所示)，在步骤(i)中使用1,2-丙二醇，结晶游离碱的总产率为约79％，相比于WO2011/089401中的59％。

本发明的第二方面涉及一种制备化合物[1]的结晶的L-酒石酸盐的方法，所述方法包括以下步骤：将化合物[1]在乙醇中的溶液回流，并向其中逐滴添加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液，其中在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少约15:1

有利地，申请人已证明，提高结晶步骤中乙醇相对于水的比率使化合物[1]的结晶的酒石酸盐的产率相对于本领域中公开的产率有显著提高(约87％，相比于WO 2011/089401的实施例5.5中的72％)。

本发明的第三方面涉及一种制备式[IV]或[III]的化合物的方法：

其中：

R^1'是烷基或卤代烷基；

R^3'是烷基、卤代烷基或芳基；和

PG是保护基团；

所述方法包括以下步骤：

(a')将式[V]的化合物用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成式[IV]的化合物；和

(b')任选地，从所述式[IV]的化合物去除保护基团PG，得到式[III]的化合物。

有利地，申请人已证明，上述条件导致了高非对映体选择性还原，在所得中间体中产生了非常高的非对映体过量(约99％)。非对映体过量远超在根据现有技术方法制备这种中间体时所观察到的水平；参见，例如，WO 2003/002565(Cyclacel Limited)或WO 2008/122767(Cyclacel Limited；Cancer Research Technology Limited)。

本发明的第四方面涉及一种通过以下步骤制备式[II]的化合物的方法：

(i)用HF、吡啶和^tBuONO处理式[VI]的化合物以形成式[VII]的化合物；和

(ii)在DMSO和K₂CO₃中用R⁵Br处理所述式[VII]的化合物以形成式[II]的化合物；

其中R⁵和R⁶如上文针对本发明第一方面所定义的。

本发明的第五方面涉及一种通过以下步骤制备化合物[2]的方法：

(i)用HF、吡啶和^tBuONO处理化合物[6]以形成化合物[7]；和

(ii)用在DMSO和K₂CO₃中异丙基溴处理所述化合物[7]以形成化合物[2]。本发明的第六方面涉及化合物[6]：

本发明的第七方面涉及用作制备化合物[1]的中间体的化合物[6]。

本发明的第八方面涉及一种制备化合物[1]的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)如上所述，从式[6]的化合物制备化合物[2]；和

(ii)如上所述，使化合物[2]与化合物[3]反应以形成化合物[1]。

具体说明

式[I]化合物的制备方法

本发明提供了一种合成通式[I]的化合物、特别是具体化合物[1]的新方法。举例说明，申请人已证明，为获得足够纯度的游离碱化合物[I]从而得到目标规格的化合物[I]-L-酒石酸盐，关键在于使用高纯度中间体[2]。化合物[1]的游离碱的结晶通过在方法中包括接种晶体的操作来实现。酒石酸盐形成/结晶也已成功地得到改进，优于现有技术条件，从而提高了得到化合物[1]-L-酒石酸盐的最终阶段的总产率。

如所提及的，本发明的第一方面涉及一种制备式[I]化合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(iii)分离所述式[I]的化合物；和

(iv)任选将所述式[I]的化合物转化为盐形式。

在一个优选实施方式中，步骤(i)中的反应混合物任选进一步包含碱，更优选脂肪族叔胺碱。更优选地，所述碱选自N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三-^N丙胺和三-^N丁胺。仍然更优选，所述碱式N,N-二异丙基乙胺(DIEA)。

优选地，当反应混合物包含碱时，其相对于式[II]的化合物以至少约2摩尔当量的量存在，更优选地，相对于式[II]的化合物为约2至约6摩尔当量，更优选地，相对于式[II]的化合物为约2至约4摩尔当量。在一个优选实施方式中，碱以相对于式[II]的化合物约2摩尔当量的量存在。在另一个优选实施方式中，碱以相对于式[II]的化合物约3摩尔当量的量存在。在另一个优选实施方式中，碱以相对于式[II]的化合物约4摩尔当量的量存在。在另一个实施方式中，碱不存在。

在一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，(c)1,2-丙二醇，和(d)碱，优选DIEA。

在另一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，和(c)1,2-丙二醇。

在另一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，(c)聚乙二醇，和(d)碱，优选DIEA。

在另一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，和(c)聚乙二醇。

优选地，聚乙二醇是液态聚乙二醇。本领域技术人员将熟悉各种形式的聚乙二醇。更优选地，聚乙二醇是PEG-200或PEG-400，更优选PEG-200。PEG-200和PEG-400以及类似的这种液态聚乙二醇可从商业来源获得(例如，Sigma Aldrich；Dow，商品名CARBOWAX^TM)。

在一个优选实施方式中，R¹和R²之一是H，另一个是烷基。

更优选地，R¹和R²之一是H，另一个是甲基、乙基或异丙基。

甚至更优选地，R¹是乙基，R²是H。

在一个优选实施方式中，R³和R⁴各自独立是H、烷基、卤代烷基或芳基，且其中R³和R⁴中的至少一个不是H。

在一个优选实施方式中，R³和R⁴之一是H，另一个是烷基或卤代烷基。

在一个优选实施方式中，R³是H，R⁴是烷基或卤代烷基。

在一个优选实施方式中，R³是H，R⁴是甲基。

在一个优选实施方式中，R⁶是：

在一个优选实施方式中，Y是N。优选地，对于该实施方式：

X是CH，Z是C-Me，R⁷是H，R⁸是Me；或

X是CH，Z是C-Me，R⁷和R⁸都是H；或

X是CH，Z是C-CF₃，R⁷和R⁸都是H。

在另一个优选实施方式中，X是N。优选地，对于该实施方式：

Y是C-Me，Z是CH，R⁷和R⁸都是H；或

Y和Z是CH，R⁷是H，R⁸是Me。

在另一个优选实施方式中，Z是N。优选地，对于该实施方式，X是CH，Y是C-Me，R⁷是Me，R⁸是H。

在另一个优选实施方式中，R⁶是环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基或环丁基甲基氨基。

在一个优选实施方式中，R⁵是异丙基或异丙烯基，更优选地，R⁵是异丙基。

在一个非常优选的实施方式中，式[I]的化合物选自以下：

在一个优选实施方式中：

通式[I]的化合物是化合物[1]；

通式[II]的化合物是化合物[2]；和

通式[III]的化合物是化合物[3]；

即，本发明涉及包括以下步骤的方法：

(i)形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，和(c)1,2-丙二醇或聚乙二醇或其混合物；

(ii)将所述反应混合物加热到至少约150℃的温度以形成式[1]的化合物；

(iii)分离所述式[1]的化合物；和

(iv)任选将所述式[1]的化合物转化为盐形式。

在一个优选实施方式中，步骤(i)中的反应混合物任选进一步包含碱，优选地，包含脂肪族叔胺碱。更优选地，所述碱选自N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三-^N丙胺和三-^N丁胺。仍然更优选地，所述碱是N,N-二异丙基乙胺(DIEA)。

优选地，当反应混合物包含碱时，其相对于式[2]的化合物以至少约2摩尔当量的量存在，更优选地，其相对于式[2]的化合物以约2至约6摩尔当量存在，更优选地，其相对于式[2]的化合物以约2至约4摩尔当量存在。在一个优选实施方式中，碱相对于式[2]的化合物以约2摩尔当量的量存在。在另一个优选实施方式中，碱相对于式[2]的化合物以约3摩尔当量的量存在。在另一个优选实施方式中，碱相对于式[2]的化合物以约4摩尔当量的量存在。

在一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，(c)1,2-丙二醇，和(d)碱，优选DIEA。

在另一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，和(c)1,2-丙二醇。

在另一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，(c)聚乙二醇，和(d)碱，优选DIEA。优选地，聚乙二醇是PEG-200或PEG-400，更优选地，所述聚乙二醇是PEG-200。

在另一个优选实施方式中，步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，和(c)聚乙二醇。优选地，聚乙二醇是PEG-200或PEG-400，更优选地，所述聚乙二醇是PEG-200。

在一个优选实施方式中，反应混合物被加热至约150℃至约180℃的温度，更优选约150℃至约170℃，更优选约150℃至约160℃，甚至更优选约150℃至约155℃。

甚至更优选地，反应混合物被加热至约150℃的温度。

在另一个优选实施方式中，将反应混合物加热至少48小时的时间。在更优选的实施方式中，将反应混合物加热至少24小时的时间。在另一个优选实施方式中，将反应混合物加热至少12小时的时间。在另一个优选实施方式中，将反应混合物加热至少72小时的时间。在一个非常优选的实施方式中，将反应混合物加热约24小时的时间。在另一个非常优选的实施方式中，将反应混合物加热约48小时的时间。在另一个非常优选的实施方式中，将反应混合物加热约72小时的时间。

在另一个优选实施方式中，将反应混合物加热约24至约96小时的时间，更优选地，加热约24至约72小时的时间，或加热约24至约48小时的时间。在另一个优选实施方式中，将反应混合物加热约48至约96小时的时间，更优选地，约加热48至约72小时的时间。

在一个优选实施方式中，1,2-丙二醇或聚乙二醇相对于式[II]的化合物(或式[2])以至少约2体积当量的量存在，更优选地，相对于式[II]的化合物(或式[2])以约2至约20体积当量，更优选地，相对于式[II]的化合物(或式[2])以约2至约10体积当量。在一个优选实施方式中，碱相对于式[II]的化合物(或式[2])以至少约5至约10体积当量的量存在。在另一个优选实施方式中，碱相对于式[II]的化合物(或式[2])以约5体积当量的量存在。在一个优选实施方式中，碱相对于式[II]的化合物(或式[2])以约9体积当量的量存在])。

有利地，与本领域中所述的方法(参见WO 2008/122767，其在化合物[1]的制备中需要5.7当量的化合物[3]，以及WO 2011/089401，其需要3.5当量)相比，本发明的方法允许相对于化合物[II]使用摩尔当量降低的式[III]的化合物。这在使试剂的使用最小化和易提纯方面以及从规模放大的经济角度考虑，都是有利的。

因此，在一个优选实施方式中，相对于化合物[II]，反应混合物包含约2至约3摩尔当量的化合物[III]。更优选地，相对于化合物[II]，反应混合物包含约2至约2.5或约2至约2.2摩尔当量的化合物[III]。甚至更优选地，相对于化合物[II]，反应混合物包含约2摩尔当量的化合物[III]。

在一个特别优选的实施方式中，在制备化合物[1]的背景下，相对于化合物[2]，反应混合物包含约2至约3摩尔当量的化合物[3]。更优选地，相对于化合物[2]，反应混合物包含约2至约2.5或约2至约2.2摩尔当量的化合物[3]。甚至更优选地，相对于化合物[2]，反应混合物包含约2摩尔当量的化合物[3]。

在一个非常优选的实施方式中，所述方法形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物(2当量)，(c)1,2-丙二醇(5体积)，和(d)DIEA(4当量)，并将所述反应混合物加热至约150℃的温度并保持约72小时的时间。在替代性优选实施方式中，省略DIEA。

在一个非常优选的实施方式中，所述方法包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物(2当量)，(c)聚乙二醇，优选地，PEG-400或PEG-200(5体积)，和(d)DIEA(4当量)，并将所述反应混合物加热至约150℃的温度并保持约72小时的时间。在替代性优选实施方式中，省略DIEA。

在一个非常优选的实施方式中，所述方法包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物(2当量)，(c)1,2-丙二醇(5体积)，和(d)DIEA(4当量)，并将所述反应混合物加热至约150℃的温度并保持72小时的时间。在替代性优选实施方式中，省略DIEA。

在一个非常优选的实施方式中，所述方法包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物(2当量)，(c)聚乙二醇，优选地，PEG-400或PEG-200(5体积)，和(d)DIEA(4当量)，并将所述反应混合物加热至约150℃的温度并保持72小时的时间。在替代性优选实施方式中，省略DIEA。

在一个优选实施方式中，步骤(iii)包括将来自步骤(ii)的反应混合物提取到水和乙酸乙酯中，分离乙酸乙酯相并用干燥剂干燥，过滤，并浓缩滤液。本领域技术人员将熟悉合适的干燥剂(例如，硫酸镁)。

在一个优选实施方式中，步骤(iii)进一步包括以下步骤：将浓缩滤液与叔丁基甲醚(TBME)共沸。

在一个优选实施方式中，在制备化合物[1]的背景下，步骤(iii)进一步包括以下步骤：将化合物[1]从叔丁基甲醚(TBME)中重结晶。优选地，该步骤包括回流加热和用根据WO 2011/089401的方法制成的化合物[1]的晶体接种，上述文献的内容在此通过引用并入本申请(特别是参见实施例1)。优选地，将经接种晶体的混合物冷却至约50至约55℃的温度。

优选地，将混合物于该温度搅拌约30分钟，随后使其冷却至室温。

盐形成

在一个优选实施方式中，所述方法包括将所述式[1]的化合物转化为L-酒石酸盐、更优选转化成结晶形式的L-酒石酸盐的步骤。甚至更优选地，L-酒石酸盐是II型晶体(对应于WO 2011/089401中所述的E型)，并且可通过该文献中所述的方法制备(参见实施例5.5)。

因此，在一个优选实施方式中，所述方法包括如下结晶步骤：其涉及将步骤(iii)中分离的产品在乙醇中回流，并向其中逐滴添加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液。

在一个特别优选的实施方式中，在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少15:1，更优选地，为至少20:1，更优选为至少25:1，甚至更优选为至少30:1。有利地，提高结晶步骤中乙醇相对于水的比率导致化合物[1]的结晶酒石酸盐的产率相对于现有技术中所公开的产率有显著提高(约87％，相比于WO 2011/089401的实施例5.5中的72％)。

在一个特别优选的实施方式中，在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为约37.5:1。

在一个优选实施方式中，所述方法包括在添加L-酒石酸溶液的过程中将温度保持在75-78℃。

在一个优选实施方式中，结晶步骤进一步包括精密过滤(polish filter)混合物，将滤液加热至约60至约65℃的温度，并用[1]-L-酒石酸盐II型晶体接种。[1]-L-酒石酸盐II型晶体(也称为E型)可根据WO 2011/089401的教导制备，该文献(Cyclacel Limited)的内容在此通过引用并入本申请。

在一个优选实施方式中，将经接种晶体的滤液在约60至约65℃的温度搅拌至少1小时。

在一个优选实施方式中，所述方法进一步包括以下步骤：将混合物冷却至约15至约20℃的温度，并于该温度搅拌至少1小时以诱导化合物[1]-L-酒石酸盐的结晶。优选地，冷却速率为约5℃/小时至约10℃/小时，更优选为约10℃/小时。

在一个优选实施方式中，将化合物[1]-L-酒石酸盐过滤、用乙醇洗涤，并真空干燥。

如上文中所提及的，在偶联反应的背景下，申请人已证明，为获得足够纯度的游离碱形式的式[I]的化合物从而得到目标规格的化合物[I]-L-酒石酸盐，关键在于使用高纯度的式[II]的中间体。

在一个优选实施方式中，在步骤(i)之前，将式[II]的化合物(例如，化合物[2])通过硅胶垫，在二乙醚中浆化，过滤，并干燥。

在一个优选实施方式中，通过HPLC测量，式[II]的化合物(例如，化合物[2])具有至少97％的纯度，更优选地，具有至少97.5％的纯度，甚至更优选地，具有至少98％的纯度。

申请人还证明，为在与式[II]的偶联反应中获得良好产率，使用具有高非对映体纯度(即，高d.e.)的式[III]的化合物也是重要的。在此方面，本发明提供了一种制备式[III]化合物的替代方法，该方法导致极好的非对映体选择性，例如，d.e.值大于或等于99％。在偶联步骤中使用具有高非对映体纯度的通式[III]的化合物能够以高产率制备式[I]的化合物而不需要从其立体异构体中通过色谱分离将其分离出来。相反，可通过从MTBE中结晶而简单地分离和纯化粗产品，这在放大规模的效率方面有显著优点。

在一个优选实施方式中，式[III]的化合物(例如，化合物[3])具有至少85％的非对映体过量，更优选地，具有至少90％的非对映体过量，甚至更优选地，具有至少95％的非对映体过量。

在一个非常优选的实施方式中，式[III]的化合物(例如，化合物[3])具有至少96％、97％、98％或99％的非对映体过量。

在一个优选实施方式中，式[III]的化合物通过以下步骤制备：

其中：

R¹是烷基或卤代烷基；

R³是烷基、卤代烷基或芳基；和

PG是保护基团；

所述方法包括：

(a)将式[V]的化合物用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成式[IV]的化合物；和

(b)从所述化合物[IV]去除保护基团PG，得到式[III]的化合物。

在一个优选实施方式中，步骤(b)包括将所述化合物[IV]在甲醇中用气态HCl处理，真空浓缩，溶解在乙酸乙酯中，随后用NH₃鼓泡。

在一个非常优选的实施方式中，式[III]的化合物是化合物[3]，其通过以下步骤制备：

(a)将化合物[5]用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成化合物[4]；和

(b)从所述化合物[4]去除保护基团PG，得到化合物[3]。

本领域技术人员将熟悉合适的胺保护基团；参见，例如，Protective Groups inOrganic Synthesis by Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts。优选地，保护基团PG是叔丁氧羰基(Boc)基团。

制备式[II]化合物的方法

本发明的另一方面涉及一种通过以下步骤制备式[II]化合物的方法：

(i)将式[VI]的化合物用HF、吡啶和^tBuONO处理以形成式[VII]的化合物；和

(ii)将所述式[VII]的的化合物在DMSO和K₂CO₃中用R⁵Br处理以形成式[II]的化合物；

其中R⁵和R⁶如上所定义。

在非常优选的实施方式中，本发明涉及一种通过以下方式制备化合物[2]的方法：

(i)用HF、吡啶和^tBuONO处理化合物[6]以形成化合物[7]；和

(ii)将所述化合物[7]在DMSO和K₂CO₃中用异丙基溴处理以形成化合物[2]。

本发明的另一方面涉及化合物[6]。

本发明的另一方面涉及用作制备化合物[1]的中间体的化合物[6]。

本发明的另一方面涉及一种制备化合物[1]的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)如上所述，从式[6]的化合物制备化合物[2]；和

(ii)如上所述，使化合物[2]与化合物[3]反应以形成化合物[1]。

参考流程1中所阐述的反应流程，在下文中描述了本发明的合成方法的更多细节：

流程1：化合物[1]-L-酒石酸盐的制备

在115g规模上成功进行反应，得到所需产物化合物[4]，产率为85％(99.2g)，其是白色固体。

将化合物[4]的Boc充分去保护得到所需的化合物[3]的HCl盐。随后通过使氨气鼓泡通过HCl盐在乙酸乙酯中的悬浮液来形成游离碱，得到化合物[3]，其是浅黄色油状物，95％的总产率(48.7g)。¹H NMR分析显示所分离的物质适合用于偶联步骤中。

申请人已发现化合物[2]的纯度对于最终偶联反应也有显著影响。为评估较高纯度的[2]对于最终偶联反应的影响，使55g化合物[2](经HPLC测量，纯度为96.80％)通过硅胶垫，用在DCM中的15％MeOH洗脱。随后将所得产品在二乙酯中浆化，过滤和干燥，得到49.3g化合物[2]，经HPLC测量，纯度为98.46％。

最终偶联反应在1,2-丙二醇(5体积)中与2当量化合物[3]在150℃进行。

纯化的化合物[2]与散装化合物[3]的使用测试(use test)以1g规模进行(2当量化合物[3]，在5体积1,2-丙二醇中，于150℃)。在18小时后，HPLC显示94.13％的化合物[1]，1.74％的化合物[2]和1.66％的丙二醇加合物。尽管反应未完全，上述结果证实了使用高纯度化合物[2]对于实现>90％的产品转化来说是关键的(相比于使用96.80％纯度的化合物[2]时，87％转化为化合物[1])。

进行10g规模的最终偶联反应，得到93.11％的产品转化(1.4％的1,2-丙二醇加合物)，并在后处理(workup)后提供了经HPLC测定纯度为95.54％的粗游离碱化合物[1](1.3％的1,2-丙二醇加合物)。¹H NMR证实在后处理中成功去除了1,2-丙二醇。将粗产品(12.2g)从TBME(2体积TBME)中重结晶。当添加结晶游离碱化合物[1]的晶种时发生结晶(根据WO 2011/089401的教导制备的晶种；Cyclacel Limited；A型，实施例1)。将所得的固体过滤并燥，得到游离碱化合物[1]，总产率为81％(基于加入的化合物[2]，目标为79％)，经HPLC测量纯度为97.84％，(0.95％的1,2-丙二醇加合物，目标纯度>97％)。将该物质用于形成酒石酸盐。

随后以36.2g规模进行大规模最终偶联反应。反应以预期方式进行，得到95.01％的产品转化率(0.29％的1,2-丙二醇加合物)。后处理提供了粗游离碱化合物[1]，其是白色泡沫状固体(46.9g)，经HPLC测得纯度为95.22％(0.20％的1,2-丙二醇加合物，1.74％RRT0.98)。用TBME进行重结晶并接种晶体(使用如上所述的A型种晶)，得到结晶的游离碱化合物[1]，其总产率为79％，纯度为97.32％(0.14％的1,2-丙二醇加合物，1.10％RRT 0.98)。

随后将化合物[1](87.6％纯度)转化为相应的结晶L-酒石酸盐。实验性盐形成可以5g规模进行，使用来自大规模偶联反应的材料。使用了37.5:1的乙醇:水之比。在添加酒石酸之后，于60-65℃添加II型晶种(在该温度下其不会溶解)。将反应于60-65℃搅拌1小时(在此期间开始结晶)，随后经1小时冷却至15-20℃。在于15-20℃搅拌之后，分离并干燥所得固体。这得到了化合物[1]-L-酒石酸盐，其产率为83％(自游离碱开始，基于所加入的化合物[2]，总产率为65％)，纯度为98.57％(0.15％的1,2-丙二醇加合物，0.37％RRT 0.98)。¹H NMR证实1:1的盐，XRPD确定了II型。

随后使用上述条件以29.9g规模进行大规模盐形成以证实该方法。分离得到化合物[1]-L-酒石酸盐，产率为87％(从游离碱开始，基于所加入的化合物[2]，总产率为69％)，纯度为98.80％(0.37％的1,2-丙二醇加合物，0.02％RRT0.98)。¹H NMR证实了1:1的盐，XRPD证实了II型。

至此，申请人已证明，在最终偶联反应中使用较高纯度的化合物[2]对于实现～95％向化合物[1]的转化来说是关键的。随后可将游离碱化合物[1]以良好产率转换化为相应的结晶L-酒石酸盐形式。

制备化合物[1]的结晶L-酒石酸盐的方法。

本发明的另一方面涉及一种制备化合物[1]的结晶L-酒石酸盐的方法。所述方法包括以下步骤：使化合物[1]的乙醇溶液回流，并向其中逐滴添加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液，其中乙醇:水之比为至少15:1

在一个优选实施方式中，在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少20:1，更优选地为至少25:1,甚至更优选为至少30:1，甚至更优选地为至少35:1。

在一个优选实施方式中，在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为约37.5:1。

优选地，在添加L-酒石酸溶液的过程中将温度保持在75-78℃。

在一个优选实施方式中，所述方法包括以下步骤：精密过滤混合物，将滤液加热到约60至约65℃的温度，和用[1]-L-酒石酸盐II型晶体接种。

在一个优选实施方式中，所述方法包括将接种了晶种的滤液在约60至约65℃的温度搅拌至少1小时。

在一个优选实施方式中，所述方法进一步包括以下步骤：将混合物冷却至约15至约20℃的温度，并于该温度搅拌至少1小时以诱导化合物[1]-L-酒石酸盐的结晶。

优选地，冷却速率为约5℃/小时至约10℃/小时，更优选地，约10℃/小时。

在一个优选实施方式中，将化合物[1]-L-酒石酸盐过滤、用乙醇洗涤并真空干燥。

制备式[III]化合物的非对映体选择性方法

本发明的另一方面涉及一种制备具有高非对映体过量的式[III]化合物的非对映体选择性方法。

因此，在一个方面，本发明涉及一种制备式[IV]或[III]的化合物的方法：

其中：

R^1'是烷基或卤代烷基；

R^3'是烷基、卤代烷基或芳基；和

PG是保护基团；

所述方法包括以下步骤：

(b')任选从所述式[IV]的化合物去除保护基团PG，得到式[III]的化合物。

在一个非常优选的实施方式中，所述方法包括以下步骤：

(a')将化合物[5]用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成化合物[4]；和

(b')任选从所述化合物[4]去除保护基团PG，得到化合物[3]。

有利地，以上条件导致高非对映体选择性还原，在所得中间体中得到了非常高的非对映体过量(约99％)。这种非对映体过量远超根据现有技术方法制备这种中间体时所观察到的水平；参见，例如，WO 2003/002565(Cyclacel Limited；d.e.为80％)或WO 2008/122767(Cyclacel Limited；Cancer Research Technology Limited；d.e.为75％)。

在一个优选实施方式中，(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷是在甲苯中的溶液。

在一个优选实施方式中，步骤(a')包括(i)将硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物逐滴添加到(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷在THF中的混合物中；和(ii)将在THF中的式[V]的化合物(例如，化合物[5])逐滴添加到步骤(i)形成的混合物中。

优选地，将步骤(ii)中形成的混合物于室温搅拌至少12小时。

在一个优选实施方式中，步骤(a')进一步包括将式[IV]的化合物(例如，化合物[4])从庚烷中结晶。

在一个优选实施方式中，步骤(b')包括将所述式[IV]的化合物(例如，化合物[4])用气态HCl在甲醇中处理，真空浓缩，溶解在乙酸乙酯中，随后用NH₃鼓泡。

参考以下附图进一步描述本发明，其中：

图1示出了如WO 2008/122767中所公开的制备化合物[1]的反应流程。

图2示出了如WO 2011/089401中所公开的制备化合物[1]-L-酒石酸盐的反应流程。

参考以下非限制性实施例进一步描述本发明。

实施例

缩写

THF 四氢呋喃

EtOAc 乙酸乙酯

PMA 磷钼酸

MeOH 甲醇

DCM 二氯甲烷

TBME 叔丁基甲醚

DCM 二氯甲烷

DIEA N,N-二异丙基乙胺

¹H NMR：使用配有自动进样器的JEOL ECX 400MHz分光仪收集¹H NMR谱。将样品溶解在D₆-DMSO进行分析，使用标准质子试验于环境温度获得光谱，使用Delta NMRProcessing and Control Software 4.3版本获得16次扫描。随后使用ACD labs 1D NMRprocessor 12.0版本处理数据。

DSC：在配有45位样品架的PerkinElmer Pyris 6000 DSC上收集DSC数据。使用经认证的铟对仪器进行能量和温度校正。将预定量的样品0.5-3.0mg置于带针孔的铝锅，并以20℃.min^-1从30℃加热到350℃，或随着试验不同而变化。在样品上方以20ml.min^-1进行干燥氮气的吹扫。用Pyris Software v11.1.1 Revision H进行仪器控制、数据获取和分析。

XRPD：在PANalytical衍射仪上收集X-射线粉末衍射图谱，使用Cu Kα辐射(45kV,40mA)，θ-θ量角器，聚焦镜，发散狭缝(1/2”)，在入射和发散光束(4mm)处的索勒狭缝和PIXcel检测器。用于数据收集的软件是X’Pert Data Collector,2.2f版本，使用X’PertData Viewer,1.2d版本呈现数据。

XRPD图谱在环境条件下经由透射箔样品台(聚酰亚胺-Kapton,12.7μm厚度的膜)在环境条件下使用PANalytical X’Pert PRO获得。数据收集范围是2.994-35°2θ，连续扫描速度为0.202004°s^-1。

HPLC：方法A

样品溶液制备：

准确称量50mg样品并置于100ml容量烧瓶中。向烧瓶中添加50ml甲醇，如果必要经由声处理溶解，用纯净水稀释定容，并彻底混合所得溶液。

柱： 150x 4.6mm Luna C18(2),5μm粒径，(ex-Phenomenex；#

OOF-4252-EO)

移动相： A-0.01M醋酸铝缓冲液(pH 8.0)

B-乙腈

流速： 1.0ml.min^-1

进样体积： 5μl

检测： UV@254nm

柱温： 30℃

后运行： 5分钟

HPLC：方法B

样品溶液制备：

准确称量50mg样品并置于100ml容量烧瓶中。向烧瓶中添加50ml甲醇，如果必要经由声处理溶解，用纯净水稀释定容，并充分混合所得溶液。

柱： 150x 4.6mm XBridge Phenyl,3.5μm粒径，(ex-waters；#

186003335)

移动相： A–纯净水:三氟乙酸(100:0.1)

B–乙腈:三氟乙酸(100:0.1)

流速： 1.0ml.min^-1

进样体积： 5μl

检测： UV@268nm

柱温： 30℃

后运行： 5分钟

手性HPLC

柱： 250x 4.6mm Chiralpak AD-H,5μm粒径，(ex-Daicel

Chemical Industries,Ltd；#DAIC 19325)

移动相：乙醇:己烷(50:50)

流速： 1.0ml.min^-1

进样体积： 20μl

检测： UV@268nm

柱温： 40℃

运行时间： 20分钟

HRGC：

样品溶液制备

准确称量50mg样品并置于10ml容量烧瓶中。溶解在5ml二氯甲烷中，如需要使用声处理，用二氯甲烷稀释定容，并充分混合所得溶液。

柱： DB-1 30m x 0.32mm；1.0μm膜厚(ex-J&W Scientific

#123-1033)

升温程序： 40℃(保持5分钟)，随后以10℃.min^-1至300℃

(保持10分钟)

进样器温度： 200℃，分流

柱温： 250℃,F.I.D.

压头： 12psi，恒压

载气：氮气

分流比： 50:1

进样体积： 2μl

内衬：带有玻璃棉插片的SGE Focusliner

通过HRGC测量的对映体过量：

标准溶液制备

准确称量10mg每种对映异构体[(2R,3S)；(2S,3R)；(2R,3R)；(2S,3S)]并置于合适容器中。溶解在约1ml HPLC级二氯甲烷中，如需要进行声处理。添加500μl三氟乙酸酐和500μl三氟乙酸，并于室温衍生化15-30分钟。进样该溶液。

样品溶液制备

一式两份准确称量10mg样品并置于合适容器中。溶解在约1ml HPLC级二氯甲烷中，如必要进行声处理。添加500μl三氟乙酸酐和500μl三氟乙酸，并于室温衍生化15-30分钟。进样该溶液。

柱： Gamma-TA Cyclodextrin 30m x 0.32mm；

0.125μm膜(ex-Astec；目录号73033)

烘箱程序： 80℃(保持10分钟)，随后2℃.min^-1至90℃

(保持20分钟)，随后以10℃.min^-1至80℃

进样器温度：200℃，分流

柱温： 250℃,F.I.D.

压头： 20psi,恒压

载气：氮气

分流比： 50:1

进样体积： 1μl

内衬：带有玻璃棉插片的SGE Focusliner

(2R,3S)-3-氨基戊-2-醇的合成

化合物[4]的制备

在干燥的、氮气吹扫的容器中用THF(171mL)稀释(S)-2-甲基-CBS-氧氮硼杂环戊烷(在甲苯中的1M溶液，59.6mL，0.06mol)。于室温逐滴添加硼烷N,N-二乙基苯胺复合物(102mL,0.57mol)，并将溶液搅拌15分钟。将化合物[5](115.0g,0.57mol)溶解在THF(345mL)中，并经4.5小时逐滴添加。在添加完成后，将反应于室温在氮气氛下搅拌过夜。薄层色谱(20％EtOAc在庚烷中，通过PMA可视化)显示起始物料完全耗尽。通过经1小时逐滴添加甲醇(174mL)小心地淬灭反应。在整个淬灭过程中保持温度<20℃。溶液真空浓缩，随后添加额外的甲醇(174mL)。溶液减压浓缩，得到白色蜡状固体。粗产品从庚烷(202mL)中重结晶。将重结晶产品过滤并用庚烷漂洗(2x 156mL)，得到白色固体。将其在真空烘箱中于40℃干燥过夜，得到作为白色固体的化合物[4](99.2g,85％)。通过如上所述的HRGC和手性HRGC进行分析。

化合物[4]的去保护

于<20℃在20L烧瓶中在N₂下向MeOH(645mL)中通入1小时的HCl气。经滴定，溶液为3.85M。将烧瓶冷却至<15℃。于<15℃分批加入化合物[4](101.1g,0.50mol)。将溶液搅拌过夜。TLC确认反应完全(5％MeOH/DCM，用PMA可视化)。溶液于35-40℃真空浓缩。将油状物与EtOAc共沸(4x 75mL)并磨碎，得到白色固体。将固体溶于EtOAc(588mL)中。反应混合物冷却至0-5℃，并于0-5℃在N₂下用NH₃(气体)鼓泡1小时。在添加结束时，pH为8。将混合物过滤，滤饼用EtOAc(147mL)洗涤。将滤液于35-40℃真空浓缩，得到所需产物[3]，其是浅黄色油状物(50.7g)。¹H NMR证实得到了产品，显示存在～4％的残余EtOAc，得到活性物的产率为48.7g，95％。

化合物[7]的制备

将60％HF/吡啶(2982.3.g)装入6L PTFE容器中并冷却至-35到-30℃之间。将化合物[6](322.2g,1摩尔当量)装入容器中，保持批料温度在-35到-30℃之间。将容器内容物温热至-15到-10℃之间，随后逐滴添加叔丁腈(160ml,1摩尔当量)，保持温度在-15至-5℃之间。使批料温热至室温(介于15至20℃之间)并搅拌17小时。对批料取样并通过HPLC判断反应是否完成，显示存在11.3％的化合物[6]。再加入叔丁腈(48ml,0.3摩尔当量)并搅拌3小时，进行判断反应是否完成的检查，结果显示剩余2.3％化合物[6]。再加入额外的叔丁腈(48ml,0.3摩尔当量)并搅拌过夜。最终完成显示剩余0.7％的化合物[6]。将反应混合物在饱和K₂CO₃水溶液(12000ml)中淬灭，加入额外的饱和K₂CO₃水溶液(3500ml)以调节至pH 8，将批料搅拌90分钟随后过滤。过滤器用纯净水(3200ml)洗涤。将固体返回到淬灭容器中，在纯净水(3200ml)中浆化34分钟并过滤。过滤器用纯净水(3200ml)洗涤。将固体返回到淬灭容器中，在纯净水(3200ml)中浆化34分钟并过滤。过滤器用纯净水(3200ml)和TBME(3x1600ml)洗涤。固体于45℃真空干燥。产率＝222.5g(68.3％)；HPLC(方法A)测定纯度94.9％。

化合物[2]的制备

反应在一批次中进行，分四份进行后处理，随后分两部分纯化，得到总产率为2261.6g(79％，相对于目标85％)。

在N₂下装入DMSO(25000ml)、化合物[7](2479.9g，1摩尔当量)和碳酸钾(2504.7g，2摩尔当量)。添加2-溴丙烷(8520ml，10摩尔当量)，保持批料温度在15-25℃之间。将反应混合物加热至60℃并搅拌35分钟，保持温度在58-62℃之间。对反应混合物取样以进行反应是否完成的分析。HPLC(方法A)显示反应完全(剩余0.14％的化合物[7])。将反应混合物冷却至18-25℃之间。将批料分为四个大致相等的部分。将每部分返回到装有纯净水(11200ml)和乙酸乙酯(11200ml)的容器中，搅拌10分钟，并分层。

反应后处理

将水层装入容器中并用乙酸乙酯(3x 6200ml)萃取。将合并的有机层装入容器中，用纯净水(6x 9300ml)洗涤。将有机层用硫酸镁(1014.1g)干燥并过滤。滤饼用乙酸乙酯(3x2500ml)洗涤。对批料溶液取样以进行HPLC分析，显示粗纯度为94.1％。

纯化

将干燥的有机层合并成两部分，将每部分从50L容器蒸馏到最小搅拌，然后转移至2L旋转蒸发器中以完成浓缩。在大玻璃瓶(carboy)中，将粗化合物[2](1480.5g)溶解在15％MeOH/EtOAc(3000ml)中。向大玻璃瓶中装入硅胶(2961.3g)，并将内容物搅拌15分钟。再向大玻璃瓶中装入15％MeOH/EtOAc(2000ml)以帮助浆化硅胶。设置板式过滤器并装填在15％MeOH/EtOAc中的硅胶(4441.5g)。将粗化合物[2]/硅胶浆料转移到过滤板并装填。随后用15％MeOH/EtOAc(88800ml)洗涤硅胶垫，分5份收集，15％MeOH/EtOAc(44360ml)分2份收集，和15％MeOH/EtOAc(44360ml)分2份收集。将包含化合物[2]的部分精密过滤并浓缩。所得固体与EtOAc(3x 3000ml)共沸，并在真空烘箱中于30℃干燥过夜。产率＝1090.3g；HPLC(方法A)测得纯度为96.9％。

可如下制备化合物[2]的相应烯基类似物。将在甲苯(40ml)、三甲吡啶(0.9g,2当量)和丙酮(2.1g,10当量)中的化合物[7](1.0g)和五氧化磷(1.04g,2当量)加热回流并搅拌过夜。将反应冷却至室温并过滤。滤饼用饱和NaHCO₃水溶液(30ml)和甲苯(30ml)搅拌5分钟，随后再过滤。相分离，水相用甲苯(30ml)萃取。将合并的有机相干燥(硫酸钠)、过滤并真空浓缩。产品通过色谱纯化(硅胶65g)，洗脱液＝EtOAc→在EtOAc中的10％MeOH)，得到190mg产品，¹H NMR测定～90％纯度，还有0.1g纯度较低的物质。将纯度较低的产品重新过柱(硅胶51g，洗脱液＝在DCM中的4％MeOH)，得到额外的产品(70mg)。总产率260mg(22.7％)。[2]的烯基类似物可与化合物[3](3-10当量)在PEG200和DIPEA中通过于120-130℃加热过夜来反应。产品可通过柱色谱纯化，使用在DCM中的4％MeOH作为洗脱液，得到产品，通过¹H NMR测得纯度>95％。

化合物[2]的纯化

为评估较高纯度的化合物[2]对最终偶联反应的影响，使55g化合物[2](通过HPLC测得96.80％纯度)通过硅胶垫，用在DCM中的15％MeOH洗脱。所得产品随后在二乙醚中浆化，过滤并干燥，得到49.3g化合物[2]，通过HPLC测得纯度为98.46％(方法A)。

在步骤(i)中使用1,2-丙二醇制备化合物[1]

将化合物[2](36.2g,115.15mmol)和化合物[3](24.7g,23.8g活性物,230.71mmol)在1,2-丙二醇(181mL)中的溶液于150℃加热过夜。通过HPLC分析(方法B)显示0.29％丙二醇加合物、95.01％化合物[1]和0.57％化合物[4]。或者可选地，可用PEG-200替代1,2-丙二醇。任选地，反应混合物还包含DIEA(2摩尔当量)。在冷却到15-20℃之后，将水(250mL)和乙酸乙酯(120mL)加入到容器中，并将批料搅拌10分钟。层分离，水层用乙酸乙酯萃取(4x 100mL)。合并的有机层先用2.5w/w％盐水(3x 160mL)然后用水(3x 160mL)洗涤。有机层用MgSO₄干燥并过滤。将滤液浓缩，随后与TBME(2x 250mL)共沸以分离出粗化合物[1]游离碱(46.9g)。HPLC分析显示纯度为95.22％(方法B)。

将粗物质(46.9g)溶于TBME(94mL)中并加热回流。添加结晶的化合物[1]的晶种(0.009g；根据WO 2011/089401的教导制成；A型；Cyclacel Limited)，将所得的混浊溶液冷却至50-55℃并搅拌30分钟。晶种根据WO 2011/089401的实施例1制成(CyclacelLimited)。随后将反应混合物冷却至室温并过夜。过滤所得固体，用TBME洗涤(3x 47mL)并抽干。将米白色固体于40℃真空干得到结晶的化合物[1]游离碱(36.0g,79％；A型)。XRPD和DSC的特征符合A型，WO 2011/089401；见表1中的参考XRPD峰)。任选地，化合物[1]的仲羟基可通过以下方式氧化：在作为溶剂的MeCN中用诸如氯铬酸吡啶鎓(0.2当量)和过碘酸(2.5当量)的氧化剂处理，例如，于室温搅拌21h，随后当必要时再加入更多的氯铬酸吡啶鎓和过碘酸以促使反应完成(然后使用柱色谱纯化)。

在步骤(i)中使用PEG-200和DIEA制备化合物[1]

进行小规模反应以直接比较使用PEG-200的反应与使用1,2-丙二醇的反应的HPLC反应曲线。因此，在N₂下装入化合物[2](1.0g,3.181mmol)和反应溶剂(9.0mL,9体积)。随后将混合物搅拌5分钟，然后添加DIEA(2.2mL,4当量)和化合物[3](0.66g,6.362mol)，随后将反应加热到一定温度(150℃)。72h之后所显示的反应曲线如下表中所示。

化合物[1]-L-酒石酸盐的合成

将结晶的化合物[1]游离碱(29.9g,75.22mmol)溶解在乙醇(420mL)中，将所得溶液加热回流。逐滴加入L-酒石酸(11.29g,75.22mmol)在水(12mL)/乙醇(30mL)中的溶液，保持批料温度在75-78℃之间。将溶液精密过滤(在过滤过程中冷却至57℃，没有结晶迹象)。将过滤出的溶液加热到60-65℃，并用根据WO 2011/089401(Cyclacel Limited)的实施例5制成的化合物[1]-L-酒石酸盐II型(0.003g)接种晶种。将混合物于60-65℃搅拌1小时，在此期间开始结晶。随后将悬浮液以10℃/h冷却至15-20℃。于15-20℃搅拌1小时，过滤固体，用乙醇洗涤(3x 60mL)，并抽干。在真空烘箱中进一步干燥得到[1]-L-酒石酸盐，其是白色固体(36.0g，从游离碱计算为87％)。¹H NMR证实为所需产品，HPLC(方法B)显示纯度98.80％。还通过手性HPLC分析产品。DSC分析(峰182.73℃，起始点179.61℃)，XRPD证实符合WO 2011/089401的II型(见表2的参考XRPD峰)。

在不背离本发明范围和精神的情况下，对本发明所述方面的各种修改和变化对于本领域技术人员来说是显而易见的。尽管已结合具体的优选实施方式描述了本发明，应理解所要求的发明不应被不适当地限制为这些具体实施方式。实际上，对于相关领域的技术人员来说显而易见的是，对所描述的实施本发明的方式进行的各种修改预期落入所附权利要求的范围内。

表1：化合物[1]的结晶游离碱的XRPD峰

表2：化合物(1)的酒石酸盐(E型，也称II型)的XRPD峰

Claims

1.一种制备式[I]的化合物的方法，

其中：

R¹和R²各自独立是H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立是H、烷基、卤代烷基或芳基；

其中X、Y和Z之一为N，且其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹中的至少一个不是H；

所述方法包括以下步骤：

(ii)将所述反应混合物加热到至少150℃的温度以形成式[I]的化合物；

(iii)分离所述式[I]的化合物；和

(iv)任选将所述式[I]的化合物转化为盐形式。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(i)中的反应混合物任选进一步包含碱。

3.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(i)中的反应混合物任选进一步包含脂肪族叔胺碱。

4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤(i)中的反应混合物任选进一步包含选自下组的碱：N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三-正丙胺和三-正丁胺。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，(c)1,2-丙二醇，和(d)任选地，碱。

6.根据前述权利要求1所述的方法，其中步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[II]的化合物，(b)式[III]的化合物，(c)聚乙二醇，和(d)任选地，碱。

7.根据权利要求6所述的方法，其中聚乙二醇是液态聚乙二醇。

8.根据权利要求7所述的方法，其中聚乙二醇是PEG-200或PEG-400。

9.根据权利要求8所述的方法，其中聚乙二醇是PEG-200。

10.根据权利要求1所述的方法，其中将反应混合物加热至150℃至180℃的温度。

11.根据权利要求10所述的方法，其中将反应混合物加热至150℃至170℃。

12.根据权利要求10所述的方法，其中将反应混合物加热至150℃至160℃。

13.根据权利要求10所述的方法，其中将反应混合物加热至150℃至155℃的温度。

14.根据权利要求10所述的方法，其中将反应混合物加热至150℃的温度。

15.根据权利要求1所述的方法，其中将反应混合物加热至少12小时。

16.根据权利要求15所述的方法，其中将反应混合物加热至少24小时的时间。

17.根据权利要求1所述的方法，其中相对于化合物[II]，反应混合物包含2至3摩尔当量的化合物[III]。

18.根据权利要求17所述的方法，其中相对于化合物[II]，反应混合物包含2摩尔当量的化合物[III]。

19.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(iii)包括将来自步骤(ii)的反应混合物提取到水和乙酸乙酯中，分离乙酸乙酯相并用干燥剂干燥，过滤，并浓缩滤液。

20.根据权利要求19所述的方法，其进一步包含以下步骤：将浓缩滤液与叔丁基甲醚(TBME)共沸。

21.根据权利要求19所述的方法，其中步骤(iii)进一步包括以下步骤：将化合物[I]从叔丁基甲醚(TBME)中结晶。

22.根据权利要求1所述的方法，其包括将所述式[I]的化合物转化为L-酒石酸盐。

23.根据权利要求1所述的方法，其包括以下步骤：

(ii)将所述反应混合物加热到至少150℃的温度以形成式[1]的化合物；

(iii)分离所述式[1]的化合物；和

(iv)任选转化所述式[1]的化合物为盐形式。

24.根据权利要求23所述的方法，其中步骤(i)中的反应混合物任选进一步包含选自下组的碱：N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三-正丙胺和三-正丁胺。

25.根据权利要求23所述的方法，其中步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，(c)1,2-丙二醇，和(d)任选地，碱。

26.根据权利要求23所述的方法，其中步骤(i)包括形成包含以下的反应混合物：(a)式[2]的化合物，(b)式[3]的化合物，(c)聚乙二醇，和(d)任选地，碱。

27.根据权利要求22所述的方法，其中L-酒石酸盐是结晶形式。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述结晶形式为II型。

29.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其包括将步骤(iii)中所分离的产品在乙醇中回流，并向其中逐滴添加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液。

30.根据权利要求29所述的方法，其中在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少15:1。

31.根据权利要求30所述的方法，其中在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少37.5:1。

32.根据权利要求29所述的方法，其包括在添加L-酒石酸溶液的过程中将温度保持在75-78℃。

33.根据权利要求29所述的方法，其进一步包括以下步骤：精密过滤混合物，将滤液温热至60至65℃的温度，并用[1]-L-酒石酸盐II型晶体接种。

34.根据权利要求33所述的方法，其包括将所述经接种晶体的滤液在60至65℃的温度搅拌至少1小时。

35.根据权利要求34所述的方法，其进一步包括以下步骤：将混合物冷却至15至20℃的温度，并在该温度搅拌至少1小时以诱导化合物[1]-L-酒石酸盐的结晶。

36.根据权利要求35所述的方法，其中冷却速率为5℃/小时至10℃/小时。

37.根据权利要求35所述的方法，其中将化合物[1]-L-酒石酸盐过滤，用乙醇洗涤，并真空干燥。

38.根据权利要求23-37中任一项所述的方法，其中在步骤(i)之前，将化合物[2]通过硅胶垫，用MeOH/DCM洗脱，在二乙醚中浆化，过滤，并干燥。

39.根据权利要求38所述的方法，其中通过HPLC测量，化合物[2]具有至少97％的纯度。

40.根据权利要求39所述的方法，其中通过HPLC测量，化合物[2]具有至少97.5％的纯度。

41.根据权利要求40所述的方法，其中通过HPLC测量，化合物[2]具有至少98％的纯度。

42.根据权利要求23所述的方法，其中化合物[3]具有至少85％的非对映体过量。

43.根据权利要求42所述的方法，其中化合物[3]具有至少90％的非对映体过量。

44.根据权利要求43所述的方法，其中化合物[3]具有至少95％的非对映体过量。

45.根据权利要求44所述的方法，其中化合物[3]具有至少99％的非对映体过量。

46.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中化合物[III]通过以下步骤制备：

(a)将化合物[V]用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成化合物[IV]；和

(b)从所述化合物[IV]去除保护基团PG，得到化合物[III]，

其中PG是保护基团，R¹是烷基或卤代烷基，和R³是烷基、卤代烷基或芳基。

47.根据权利要求46所述的方法，其中PG是Boc。

48.根据权利要求46或47所述的方法，其中步骤(b)包括将所述化合物[IV]用气态HCl在甲醇中处理，真空浓缩，溶解在乙酸乙酯中，并随后用NH₃鼓泡。

49.根据权利要求46所述的方法，其包括以下步骤：

(b)从所述化合物[4]去除保护基团PG，得到化合物[3]，

其中PG是保护基团。

50.根据权利要求49的方法，其中PG为Boc。

51.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其包括通过以下步骤制备式[II]的化合物：

(i)用HF、吡啶和tBuONO处理式[VI]的化合物以形成式[VII]的化合物；和

(ii)用R⁵Br在DMSO和K₂CO₃中处理所述式[VII]的化合物以形成式[II]的化合物；

其中R⁵和R⁶如权利要求1中所定义。

52.根据权利要求51所述的方法，其包括以下步骤：

(i)用HF、吡啶和^tBuONO处理化合物[6]以形成化合物[7]；和

(ii)用异丙基溴在DMSO和K₂CO₃中处理所述化合物[7]以形成化合物[2]。

53.一种制备化合物[1]的结晶L-酒石酸盐的方法，所述方法包括以下步骤：将化合物[1]的乙醇溶液回流并向其中逐滴添加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液，其中在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少15:1，

54.根据权利要求53所述的方法，其中在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为37.5:1。

55.根据权利要求53所述的方法，其包括在添加L-酒石酸溶液的过程中将温度保持在75-78℃。

56.根据权利要求53至55中任一项所述的方法，其进一步包括以下步骤：精密过滤混合物，将滤液加热至60至65℃的温度，并用[1]-L-酒石酸盐II型晶体接种。

57.根据权利要求56所述的方法，其包括将所述经接种晶体的滤液在60至65℃的温度搅拌至少1小时。

58.根据权利要求57所述的方法，其进一步包括以下步骤：将混合物冷却至15至20℃的温度，并于该温度搅拌至少1小时以诱导化合物[1]-L-酒石酸盐的结晶。

59.根据权利要求58所述的方法，其中冷却速率为5℃/小时至10℃/小时。

60.根据权利要求58或59中任一项所述的方法，其中将化合物[1]-L-酒石酸盐过滤，用乙醇洗涤，并真空干燥。