CN110248668A - 用于消耗调节性b10细胞的抗体和方法以及与免疫检查点抑制剂的联用 - Google Patents

用于消耗调节性b10细胞的抗体和方法以及与免疫检查点抑制剂的联用 Download PDF

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Abstract

提供了涉及组合治疗的方法，包括向有需要的个体施用优先消耗人B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂。还提供了用于该方法的抗体。

Description

用于消耗调节性B10细胞的抗体和方法以及与免疫检查点抑 制剂的联用
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2016年12月15日提交的美国临时专利申请第62/434,833号的优先权，该临时专利申请整体通过援引加入本文。
序列表
本申请通过EFS-Web以电子方式提交，并包括电子提交的.txt格式序列表。该.txt文件包含2017年12月15日创建的名为“2017-12-15_5667-00417_ST25.txt”的序列表，大小为32，337字节。该.txt文件中包含的序列表是说明书的一部分，在此其整体通过通过援引加入本文。
技术领域
本文提供了在组合治疗方案中向个体施用优先消耗调节性B10细胞的抗体和调节免疫检查点通路的治疗的方法。该方法可用于治疗将从这种联合疗法中受益的任何疾病或病症。该方法可用于启动或激活预先存在的适应性免疫应答，例如针对也使用免疫检查点抑制剂治疗的癌症的抗肿瘤应答，所述癌症诸如白血病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤和实体非淋巴组织肿瘤。还提供了用于方法和治疗的CD22特异性抗体。
背景技术
调节性B10细胞(“B10细胞”)具有产生IL-10的能力，其特征在于它们在体内抑制炎症和自身免疫免疫应答的能力。B10细胞可以调节炎症和自身免疫反应的一种方式是通过它们抑制淋巴细胞和先天免疫系统细胞的活化或效应物功能及其促炎细胞因子产生的能力。或者，各种免疫检查点受体，例如LAG-3，影响效应T细胞和调节性T(Treg)细胞。与大多数成熟B细胞一样，人B10细胞在其细胞表面上表达CD19，CD20，CD21和CD22。另外，如本领域技术人员所知，人血B10细胞主要是CD27+，大多数是CD24hiCD27+，特别是对于成人；而在儿童中，血液B10细胞倾向于表达CD24hiCD38hi细胞表面表型。
已经描述了抗CD22抗体，例如在美国专利No.5,484,892；6,183,744；6,187,287；6,254,868；7,829,086；8,734,792中和Tuscano等人，Blood 94(4)：1382-92(1999)中。描述了单克隆抗体(包括抗CD22抗体)在治疗淋巴瘤，白血病和自身免疫疾病中的用途。通常，这些治疗依赖于通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)或补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDC)杀伤B细胞的抗体，并且利用所述抗体治疗的癌症仅限于B细胞淋巴瘤和白血病。
免疫检查点抑制剂是阻断或参与由某些类型的免疫系统细胞(例如T细胞，巨噬细胞)以及一些癌细胞表达的某些蛋白质(免疫检查点受体或其配体)的分子或药物。总体而言，免疫检查点蛋白及其功能途径有助于控制免疫反应；然而，它们还可以抑制T细胞的活化并遏制免疫系统，从而阻止T细胞应答于或杀死癌细胞。当这些蛋白质被阻断时，它们对免疫系统的抑制作用被释放，使T细胞应答于肿瘤抗原并被程序化以杀死癌细胞。免疫检查点还可以限制T细胞应答的持续时间和强度。如本领域技术人员已知，在T细胞或癌细胞上发现的检查点蛋白的实例包括但不限于PD-1，PD-L1，CTLA-4(也称为CD152)，4-1BB(也称为CD137)，LAG-3和OX40(TNF受体家族成员)。一些免疫检查点抑制剂用于治疗癌症。在临床中，免疫检查点抑制剂诸如抗PD1抗体和抗CTLA-4抗体已显示诱导的客观反应率在约10％至约35％的范围内，约22％的患者获得长期存活益处，具体取决于诸如使用的免疫检查点抑制剂，剂量，所治疗个体的免疫状态，疾病阶段和所治疗的癌症类型等因素。对于大多数癌症、特别是淋巴瘤和白血病的治疗，仍然需要改进的或新的治疗方法。
发明内容
本文提供的方法至少部分基于下述令人吃惊的发现，即作为将优先消耗调节性B10细胞的抗体与免疫检查点抑制剂在组合治疗中联用的结果，实现T细胞活化(包含一种或多种CD4+细胞和CD8+细胞的T细胞)的协同作用。在组合治疗方案中，在包含优先消耗调节性B10细胞的抗体的组合物与包含免疫检查点抑制剂的组合物的联合施用中，所述(治疗有效量的)组合物可以单独施用、依次施用、间歇施用、或者一起施用。联用的组合物可以配制成单独的组合物或作为单一组合物配制在一起。在一个方面，该方法导致T细胞免疫应答的诱导或增强，或者逆转、克服或调节对预先存在的T细胞免疫应答的免疫抑制。在其他疾病(包括诸如慢性感染(例如乙型肝炎和丙型肝炎病毒，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒，麻风分枝杆菌和麻疹病毒)等病症和病症)和癌症中也会遇到所述作用或免疫抑制。
在一个方面，提供了免疫治疗的方法，其导致在其中预先存在的免疫应答被抑制或遏制的个体中的T细胞活化或所述预先存在的免疫应答的再活化，所述方法包括给予所述个体组合治疗方案，所述组合治疗方案含有包含优先消耗调节性B10细胞的抗体的组合物和包含免疫检查点抑制剂的组合物。
在另一个方面，提供了通过向个体施用包含优先消耗调节性B10细胞的抗体的组合物来启动或增强检查点抑制剂的有效性(例如，治疗功效)的方法，当与免疫检查点抑制剂在组合疗法方案中施用时，导致所述个体对免疫检查点抑制剂的反应的改善，增强或实现(与单独施用免疫检查点抑制剂的治疗方案(即，在同样的治疗方案中不施用优先消耗调节性B10细胞的抗体)相比)。可以通过例如T细胞应答(例如，抗肿瘤免疫应答)的活化的增加或疾病进展的改善或抑制来测量所述改善的、增强的或实现的应答，其意图受组合治疗方案的治疗性影响。
另一方面，提供了一种降低免疫检查点抑制剂的毒性或使得能够以较低剂量获得免疫检查点抑制剂的治疗效果的方法，该方法包括向个体施用治疗有效量的包含优选消耗调节性B10细胞的抗体的组合物以及治疗有效量的包含免疫检查点抑制剂的组合物。该方法也可用于延长免疫检查点抑制剂的治疗有效性。
在另一方面，提供了一种治疗癌症，或用于促进(一种或多种启动，增强或延长)有需要的个体(患有癌症的个体)中的抗肿瘤免疫应答的方法，包括给予个体包括治疗有效量的优先消耗调节性B10细胞的抗体和治疗有效量的免疫检查点抑制剂的治疗方案。优先消耗人B10细胞的抗体可以进一步包含药学上可接受的载体。用于本文所述方法的一种或多种免疫检查点抑制剂疗法还可以进一步包含药学上可接受的载体。
本文还提供了优先消耗调节性B10细胞的抗体在治疗其中T细胞免疫应答被遏制或抑制的疾病中的用途，以促进或增强T细胞活化(例如，CD4+T细胞和/或CD8+ T细胞)，或抗肿瘤反应。该用途还可以包括促进或增强T细胞活化，或用免疫检查点抑制剂治疗诱导的抗肿瘤反应。本文提供了在抑制免疫检查点途径以治疗癌症的疗法中优先消耗调节性B10细胞的抗体的用途。
在另一方面，还提供了能够结合人CD22和消耗B10细胞的抗体。这些抗体包含选自由以下组成的组的VH：SEQ ID NO：2，3，4和5和与SEQ ID NO：2，3，4和5具有90％相同性的序列，和选自由以下组成的组的VL：SEQ ID NO：15，16，19和20以及与SEQ ID NO：15，16，19和20具有90％相同性的序列。特异性结合人CD22的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区(“VH”)包含三个互补决定区VH CDR1，VH CDR2和VH CDR3，轻链可变区(“VL”)包含三个互补决定区VL CDR1，VL CDR2和CDR CDR3，其中VH CDR1选自SEQ ID NO：27，28和与SEQ ID NO：27和28具有90％相同性的序列组成的组；VH CDR2选自SEQ ID NO：29，30和31以及与SEQ ID NO：29，30和31具有90％相同性的序列组成的组；VH CDR3选自SEQ ID NO：32和33以及与SEQ ID NO：32和33具有90％相同性的序列组成的组；VL CDR1选自SEQ ID NO：34，37，40，43以及与SEQ ID NO：34，37，40，43具有90％相同性的序列组成的组；VL CDR2选自SEQ ID NO：35，38，41和44以及与SEQ ID NO：35，38，41和44具有90％相同性的序列组成的组；VL CDR3选自SEQ ID NO：36，39，42和45以及与SEQ ID NO：36，39，42和45具有90％相同性的序列组成的组。本文所述的各种VH和VL链可以以各种组合使用，并可以以嵌合或人源化形式提供。合适地，所述抗体能够诱导同型粘附。
从以下描述中，本发明的其他方面、目的和特征将变得显而易见。
附图的简要说明
图1和2是显示在MC38肿瘤诱导的小鼠炎症期间B10细胞数量扩增的图。在第0天给予小鼠皮下MC38肿瘤细胞(2×106)或PBS之前和之后第7、14和21天，对腹股沟淋巴结(图1)和脾脏(图2)中的IL-10感受态B10细胞进行定量。在指定的天数，纯化组织淋巴细胞并单独用莫能菌素培养或用LPS，PMA，离子霉素和莫能菌素(L+PIM)离体刺激5小时。对野生型淋巴细胞的细胞表面CD19和细胞内IL-10进行染色以定量B10细胞频率，同时对来自Tiger小鼠的淋巴细胞的CD19染色，通过流式细胞术评估细胞质GFP表达。代表性的流式细胞术直方图显示单个活CD19+B细胞的IL-10表达。单独用莫能菌素培养的淋巴细胞用作阴性染色对照(Matsushita，Tedder TF。鉴定在小鼠中产生IL-10的调节性B细胞(B10细胞)。Methods MolBiol.2011；677:99-111)。数字表示所有测试小鼠的指示门内细胞的频率(平均值±SEM)。来自PBS处理的小鼠的数据在时间点(第7，14和21天)之间没有显著差异，因此将其汇集。散点图显示个体小鼠的平均B10细胞频率和数量，每组6-19只小鼠。条形表示平均值。标示出组平均值之间的显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01，****表示p<0.0001。
图3是显示B10细胞消耗抑制MC38肿瘤生长的图。在第0天给予PBS或MC38细胞(2×106)之前，在第-7天，第0天和第7天给予小鼠MB22-10mAb以消耗B10细胞或给与对照mAb。值代表来自6个独立实验(每组n＝23只小鼠)的汇总的平均(±SEM)肿瘤体积。标示出组之间的显著差异：***表示p<0.001。
图4是显示总B细胞消耗不改变MC38肿瘤生长的图。在第0天皮下给予所述小鼠PBS或MC38肿瘤细胞(2×106)7天之前给予小鼠CD20(MB20-11)mAb以消耗所有成熟B细胞或同种型匹配对照(CTRL)mAb。从2个独立实验(每组n＝8-10只小鼠)汇集所示天数的平均(±SEM)肿瘤体积。组间差异无统计学意义。
图5是显示治疗性B10细胞消耗和免疫检查点抑制剂延迟具有已建立的MC38肿瘤的小鼠中肿瘤进展的图。在第0天MC38肿瘤体积为40-100mm3的小鼠对以下处理：在第0、6和12天用MB22-10或对照(CTRL)mAb处理，在第0、3、6和9天用PD-1mAb处理，或者在第0、3和6天用CTLA-4mAb处理。该图显示在第0天开始治疗后的平均(±SEM)肿瘤体积。值表示来自2个独立实验的合并结果(每组n＝9-10只小鼠)。显示了每个指定的治疗组和对照mAb治疗组之间的显著差异：***表示p<0.001。
图6是显示治疗性B10细胞消耗和免疫检查点抑制剂延长具有已建立的MC38肿瘤的小鼠的存活的图。在第0天MC38肿瘤体积为40-100mm3的小鼠如下处理：在第0、6和12天用MB22-10或对照(CTRL)mAb处理，在第0、3、6和9天用PD-1mAb处理，或者在第0、3和6天用CTLA-4 mAb处理。该图显示了在第0天开始治疗后得自图5的Kaplan-Meier存活图。值表示来自2个独立实验的合并结果(每组n＝9-10只小鼠)。显示了每个指定的治疗组和对照mAb治疗组之间的显著差异：*表示p<0.05。
图7是显示具有建立的MC38肿瘤的小鼠中治疗性B10细胞消耗延迟肿瘤进展并与免疫检查点抑制剂协同以促进排斥的图。在第0天具有40-100mm3的MC38肿瘤体积的小鼠如下处理：在第0、6和12天用MB22-10或对照(CTRL)mAb处理，在第0、3、6和9天用PD-1mAb处理，和/或第0、3和6天用CTLA-4 mAb处理。该图显示在第0天开始治疗后开始的平均(±SEM)肿瘤体积。值代表来自与图5并行进行的2个独立实验的合并结果(每组n＝9-10只小鼠)，因此对照处理组是相同的。显示了每个指定的治疗组和对照mAb治疗组之间的显著差异：***表示p<0.001。
图8是显示具有建立的MC38肿瘤的小鼠中治疗性B10细胞消耗延迟肿瘤进展并与免疫检查点抑制剂协同以促进排斥的图。在第0天MC38肿瘤体积为40-100mm3的小鼠如下处理：在第0、6和12天用MB22-10或对照(CTRL)mAb处理，在第0、3、6和9天用PD-1mAb处理，和/或在第0、3和6天用CTLA-4 mAb处理。图表显示在第0天治疗启动后开始的Kaplan-Meier存活图。值表示在图7中显示的2个独立实验(每组n＝9-10只小鼠)的合并结果。每个指定治疗组和对照mAb治疗组之间的显著差异表示为：*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001；并且就接受所有三种疗法的小鼠组相对于接受每种双重疗法组合的组而言，表示p<0.001。
图9是显示B10细胞消耗促进给予PD-1和CTLA-4检查点抑制剂的小鼠中的肿瘤排斥的组图。每条线代表给予PD-1和CTLA-4 mAb(左图)或MB22-10，PD-1和CTLA-4 mAb(右图)的个体小鼠中的肿瘤体积，如图8所示，并提供在第31天的肿瘤状态和个体小鼠的存活。
图10是显示具有MC38肿瘤的小鼠中B10细胞消耗的组图。如所示，在第0、7和14天给予小鼠MB22-10或对照(CTRL)mAb，在第0、3、6和9天给予PD-1mAb，或在第0、3和6天给予CTLA-4mAb。如所示，在第0天也给一些小鼠皮下MC38肿瘤细胞(2×106)。在第21天通过流式细胞术分析的免疫荧光染色评估单个存活的肿瘤引流淋巴结(图10A)和脾(图10B)淋巴细胞中的CD19+B细胞和B10细胞的频率。如所示，在处理后的个体小鼠中显示了肿瘤引流淋巴结和脾内的CD19+B细胞和B10细胞的总数量。水平条表示平均细胞数。所有数据汇总自2-4次实验(每组n＝共6-22只小鼠)，并显示对照组和治疗组之间的平均值的显著差异：**表示p<0.01；***表示p<0.001；表示p<0.001.
图11是显示B10细胞耗竭增强免疫检查点抑制剂驱动的T细胞活化的组图。对小鼠在第0、6和12天给予MB22-10或对照(CTRL)mAb，在第0、3、6和9天给予PD-1 mAb，和/或在第0、3和6天给予CTLA-4mAb。标记的小鼠在第0天也给予皮下MC38肿瘤细胞(2×106)。在第19天通过流式细胞术分析进行免疫荧光染色检查可存活的单淋巴结(图11A)和脾(图11B)淋巴细胞。如图所示，用mAb处理有或没有MC38肿瘤的个体小鼠后，显示淋巴结和脾中的CD4+和CD8+ T细胞数。水平条表示平均细胞数。所有数据汇集自2-5个独立实验(每组n＝6-16只小鼠)。示出对照组和治疗组之间的显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01；***表示p<0.001。
图12是显示B10细胞消耗增加免疫检查点抑制剂驱动的T细胞活化的组图。对小鼠在第0、6和12天给予MB22-10或对照(CTRL)mAb，在第0、3、6和9天给予PD-1 mAb，和/或在第0、3和6天给予CTLA-4mAb。标记的小鼠在第0天也给予皮下MC38肿瘤细胞(2×106)。来自图11中所示小鼠的可存活的单淋巴结(图12A)和脾(图12B)淋巴细胞在第19天通过对于用mAb处理后的具有或不具有MC38肿瘤的个体小鼠显示的针对淋巴结和脾中活化的CD44hiCD62LloCD4+和CD8+T细胞数目的免疫荧光染色来检查。水平条表示平均细胞数。所有数据汇集自2-5个独立实验(每组n＝6-16只小鼠)。示出对照组和治疗组之间的显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01；***表示p<0.001。
图13是显示B10细胞被消耗并用检查点抑制剂治疗且荷瘤的小鼠中的CD25+FoxP3+CD4+ Treg细胞的组图。小鼠在第-7、0和7天用MB22-10或对照(CTRL)mAb处理，在第1、4、7和10天用PD-1mAb处理，和/或在第1、4和7天用CTLA-4mAb处理。如所示，第0天对一些小鼠给予MC38肿瘤细胞(2×106)。然后在第14天通过流式细胞术分析免疫荧光染色评估肿瘤引流淋巴结和脾淋巴细胞。代表性的直方图显示了指定门内个体小鼠的CD25+ FoxP3+ CD4+ Treg细胞频率。数字是对照(左图)和MC38荷瘤小鼠(右图)的淋巴结和脾脏的组平均值(±SEM)。点图显示细胞编号，水平条表示组平均值。从2-3次实验合并数据(每组n＝6-12只小鼠)。
图14是显示B10细胞加Treg细胞消耗(Ontak)疗法协同抑制MC38肿瘤生长的图。MC38肿瘤(0.04-0.10cm3)在以下治疗之前6-9天开始：在第0、6和12天的MB22-10或对照mAb治疗和/或在第0、3和6天的Ontak治疗。该图表显示从2个独立实验合并的平均值(±SEM)肿瘤体积(每组n＝共9-12只小鼠)。显示对照组和治疗组之间的显著差异：**表示p<0.01；***表示p<0.001。显示单一治疗组平均值和双重治疗组平均值之间的显著差异：表示p<0.001。
图15是分别显示MB22-10mAb和Ontak独立消耗具有MC38肿瘤的小鼠中的B10细胞和Treg细胞的组图。图15A显示CD25+FoxP3+CD4+Treg细胞，图15B显示具有MC38肿瘤的小鼠的肿瘤引流淋巴结和脾脏内的B10细胞数在MB22-10或对照mAb和/或Ontakzh处理开始后9天的定量，如在图14中所示。水平条表示来自1个实验的平均细胞数(每组n＝4只小鼠)。显示对照组和治疗组之间的显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01；***表示p<0.001。
图16是一组FACScan散点图和显示在表达人CD22的转基因小鼠中使用抗人CD22mAb消耗B10细胞的图。使用人CD22基因及其内源调节元件产生的转基因小鼠在B细胞上表达的细胞表面人CD22与人血B细胞的程度相同。将这些转基因小鼠与小鼠CD22-/-小鼠杂交以产生hCD22-Tg+/+mCD22-/-转基因(hCD22-Tg)后代。在第0天给予hCD22-Tg小鼠HB22-103，HB22-107，HB22-115或同种型匹配(IgG1)mAb(250μg/小鼠)。7天之后定量在脾脏中的L-10感受态B10细胞，对来自IL-10-/-小鼠的脾淋巴细胞进行评估做为性对照。纯化的淋巴细胞用单独的莫能菌素培养或用LPS，PMA、离子霉素和莫能菌素(L+PIM)离体刺激5小时。所有淋巴细胞对细胞表面CD19和细胞内IL-10染色以定量B10细胞频率。图16A显示代表性流式细胞术点图，显示单个活CD19+B细胞的IL-10表达。数字表示指示门内B细胞的平均频率。图16B显示散点图，其显示个体小鼠的平均B10细胞频率和数量，每组6-10只小鼠，从3至4次独立实验汇集。条形表示平均值。显示组平均值之间的显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01。
图17显示了一组FACScan散点图和显示hCD22-Tg小鼠中B10细胞消耗性mAb不清除大多数脾B细胞的图。通过免疫荧光染色评估分离自图16中所示提前7天给予HB22-103，HB22-107，HB22-115或同种型匹配的(IgG1)mAb(250mg/小鼠)的hCD22-Tg小鼠的脾淋巴细胞的B220+B细胞(pan B细胞)频率。图18A显示代表性的流式细胞术点图，显示淋巴细胞中单个存活的B220+B细胞频率，其中数字表示指示门内的平均B细胞频率。图18B显示散点图，其显示个体小鼠的平均B细胞频率和数量，每组6-10只小鼠，从3至4次独立实验汇集。条形表示在所示组平均值之间的平均值显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01。
图18显示散点图和显示hCD22-Tg小鼠中的B10细胞消耗性mAb清除大部分边缘区(CD1dhiCD21hi)表型和来自脾的CD1dhiCD5+B细胞的图。通过免疫荧光染色评估分离自图16中所示提前7天给予HB22-103，HB22-107，HB22-115或同种型匹配(IgG1)mAb(250μg/小鼠)的hCD22-Tg小鼠的脾淋巴细胞的CD1d，CD21，CD5和CD19表达。图18A显示代表性流式细胞术直方图，其显示淋巴细胞中单个存活的CD1dhiCD21hi或CD1dhiCD5+B细胞频率，其中数字表示指示门内的平均细胞频率。图18B显示散点图，其显示个体小鼠的平均细胞频率，每组6-10只小鼠，从3至4次独立实验汇集。条形表示在所示组平均值之间的平均值显著差异：***表示p<0.001。
图19显示点图和散点图，表明hCD22-Tg小鼠中B10细胞消耗性mAb降低循环B细胞频率。通过免疫荧光染色评估分离自图16中所示提前7天给予HB22-103，HB22-107，HB22-115或同种型匹配的(IgG1)mAb(250μg/小鼠)的hCD22-Tg小鼠的血液淋巴细胞的相对B220+B细胞频率。图19A提供代表性的流式细胞术点图，显示淋巴细胞中单个存活的B220+B细胞频率，数字表示指示门内的细胞频率。图19B显示散点图，其显示个体小鼠的平均B220+B细胞频率，每组6-10只小鼠，从3至4次独立实验汇集。条形表示平均值，表示出组之间的显著差异：*表示p<0.05；**表示p<0.01。
图20是一组直方图和散点图，显示hCD22-Tg小鼠中B10细胞消耗性mAb结合B220+B细胞。通过用荧光染料偶联的抗小鼠IgG1同种型特异性抗体进行免疫荧光染色，评估分离自在图16中提前7天给予HB22-103，HB22-107，HB22-115或同种型匹配的(IgG1)mAb(250μg/小鼠)的hCD22-Tg小鼠的血液淋巴细胞的相对HB22mAb结合。图20A显示代表性流式细胞术直方图，其显示相对于来自对照mAb处理的小鼠的B细胞，HB22mAb处理的小鼠中单个存活的B220+B细胞的染色强度。图20B显示散点图，其显示个体小鼠的线性标度上IgG1的平均B220+B细胞染色(平均荧光强度)，每组6-10只小鼠，从3至4次独立实验汇集。条形表示平均值，表示出组之间的显著差异：**表示p<0.01；***表示p<0.001。
图21是直方图和散点图，显示hCD22-Tg小鼠中B10细胞消耗性mAb降低B细胞表面的CD19表达。通过免疫荧光染色评估分离自在图16中提前7天给予HB22-103，HB22-107，HB22-115或同种型匹配的(IgG1)mAb(250μg/小鼠)的hCD22-Tg小鼠的血液淋巴细胞的相对CD19mAb结合。图21A显示代表性流式细胞术直方图，其显示HB mAb处理的小鼠中相对于来自对照mAb处理的小鼠的B细胞的单个活CD19+B细胞染色强度。图21B显示散点图，其显示个体小鼠的线性标度上的平均CD19+B细胞染色(平均荧光强度)，每组6-10只小鼠，从3至4次独立实验汇集。条形表示平均值，表示出组之间的显著差异：**表示p<0.01；***表示p<0.001。
图22显示了所示抗体的可变重链和可变轻链的序列比对，并以灰色显示了每条链的CDR，并提供了对于每个序列的序列号(SEQ ID NO：)的参照。
本发明的详细描述
虽然本发明说明书中使用的术语被认为是药学领域普通技术人员完全理解的，但本文提供的定义是为了便于本发明的描述而提出的，并提供了使用所述术语的说明性实例。
如本文所用，术语“一”，“一个”和“所述”意指“一个或多个”，除非明确指定单数(例如，单数明确指定，例如，在短语“单个制剂”中))。
如本文所用，“优先消耗”，与本发明中使用的抗体的活性相关，意指所述抗体选择性地杀伤，抑制功能，或以其他方式功能性地改变或损害免疫反应期间针对靶免疫细胞(例如，T细胞或抗原呈递细胞)的B10细胞调节活性。此外，与大多数其他B细胞亚群相比，由于用这种抗体处理，所述抗体优先消耗更多的B10细胞。例如，当用于治疗时，所述优先消耗B10细胞的抗体，优先消耗至少55％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％来自所处理B细胞的B10细胞，而所处理B细胞群的大多数其他亚群的至少60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％保持完整(就一种或多种功能、活性、比例或相对数量而言)。如本文所用，与通过向使用免疫检查点抑制剂的治疗方案中添加优先消耗调节性B10细胞的抗体所贡献的治疗效果相关的“增强或改善或延长”是指所测定的治疗效果的改善。例如，增强或改善可以通过临床结果(例如，肿瘤大小或进展的减少)来测量或测量免疫反应(例如，CD4+ T细胞和/或CD8+ T细胞的活化，或抗肿瘤反应的持续时间)，所述免疫反应作为添加优先消耗调节性B10细胞的抗体至治疗方案的结果与没有这种添加的治疗(例如，仅用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗)相比，其中测定的反应改善5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％％，90％，95％，98％或更多。
术语“第一”和“第二”用于本文中的目的是区分两种化合物或两种组合物之间，这将从说明书中更清楚。
短语“治疗有效量”是指在给予需要组合物或组合的个体后产生治疗效果的所述组合物或组合的量。在免疫疗法中，治疗效果可以通过在用本文所述的方法治疗之前受抑制T细胞应答的活化来表示。所述活化的测量可以通过使用本领域已知的方法(例如，用可检测标记物标记，然后用流式细胞术分析)测定一种或多种T细胞亚群(例如，CD4+ T细胞，CD8+ T细胞)的增加，或者测定所述T细胞亚群的活化标志物的表达的诱导或增加(例如，CD44增加或CD62L表达降低)。或者，还可以通过调节性T细胞(例如，CD25+FoxP3+，CD4+细胞)的数量或功能的减少来测量活化。因此，在一个方面，可以通过临床结果评估治疗功效；与治疗前或不存在优先消耗调节性B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂的组合治疗相比，抗肿瘤T细胞或活化T细胞的数量增加。
在癌症治疗中，治疗效果可包括但不限于下述一种或多种：(a)免疫相关反应，如本领域技术人员已知相对于总肿瘤负荷(例如抗肿瘤免疫反应)而言的免疫相关完全反应或免疫相关部分反应；和(b)使用本领域技术人员已知的适当反应评估标准并且取决于所治疗的癌症类型的传统总体客观反应率(例如，对于淋巴瘤，参见Cheson等，2014，J.Clin.Oncology 32(27)：3059-3067；对于实体非淋巴组织肿瘤，实体瘤反应评估标准(RECIST))(例如，抗肿瘤反应)。
术语“药学上可接受的载体”在本文中用于表示可用于本文所述的组合物或组合的施用，递送，储存，稳定性中的任何一种或多种的任何化合物或组合物或载体介质。本领域已知这些载体包括但不限于稀释剂，水，盐水，合适的载体(例如，脂质体，微粒，纳米颗粒，乳液，胶囊)，缓冲液，医用肠胃外载体，赋形剂，水溶液，悬浮液，溶剂，乳液，洗涤剂，螯合剂，增溶剂，盐，着色剂，聚合物，水凝胶，表面活性剂，乳化剂，助剂，填充剂，防腐剂，稳定剂，油，粘合剂，崩解剂，吸收剂，调味剂等，如广泛地在制药领域中已知的那样。
术语“特异性结合”或“结合特异性”可任选其一使用并且与抗体相关，是指抗体通过抗体结合位点和抗原之间的非共价相互作用与用于诱导抗体形成的抗原(例如，本文举例说明的抗原包括CD20，CD22，PD-1，PD-L1，CTLA-4)之间形成一或多种非共价结合的能力。
如本领域技术人员所认识到的，术语“相同性”表示使用本领域已知的公开方法和软件进行的两个或更多个氨基酸序列之间的比较。例如，比较的氨基酸序列被最佳对齐，并计算氨基酸差异的数量并转换成百分比。例如，如果50个氨基酸的第一个氨基酸序列与50个氨基酸的第二个氨基酸序列最佳对齐，并且50个氨基酸中的5个与第二个氨基酸序列不同，则表示第一个氨基酸序列与第二个氨基酸序列具有10％的相同性。
术语“抗体”是指全长抗体的全长抗体，全长抗体的衍生物或片段，所述衍生物或片段包含的序列少于抗体全长序列但保留全长抗体的至少结合特异性(例如，轻链和重链的可变部分)，嵌合抗体，人源化抗体，合成抗体，重组产生的抗体，如本领域技术人员已知的那样，并使用本领域已知的方法制备。抗体片段的实例包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')2，scFv，Fv，二聚体scFv，Fd和Fd。可以使用本领域已知的方法通过酶促切割合成或产生片段。还可以使用本领域已知的方法在原核或真核体外翻译系统中产生抗体。抗体在本文中也可以通过其互补决定区(CDR)来指代，所述CDR是抗体中与其特异性抗原结合的可变链的一部分。因此，抗体在本文中为说明目的可以通过其重链的CDR(VH CDR 1，VH CDR 2和VH CDR 3)和轻链(VL CDR 1，VL CDR 2和VL CDR 3)来表示。同样，IgG类抗体可以通过其亚类(例如，IgG1，IgG2，IgG3和IgG4)来指代。相应IgG亚类的抗体的Fc部分的氨基酸序列是本领域技术人员已知的。
本文的抗体具体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，以及此类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物学活性(美国专利号4，816，567；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci。USA81：6851-6855(1984)；Oi等，Biotechnologies 4(3)：214-221(1986)；和Liu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3439-43(1987)))。
“人源化”或“CDR移植”形式的非人(例如鼠)抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的高变区残基被来自非人物种的高变区残基(供体抗体)替代，所述非人物种例如具有所需特异性，亲和力和容量的小鼠，大鼠，兔或非人灵长类动物。当在本文中使用时，术语“高变区”是指抗体中与其与抗原结合相关的氨基酸残基。高变区包括“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FW)残基也被相应的非人残基取代(所谓的“回复突变”)。此外，可以修饰人源化抗体以包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基，以进一步改善抗体性质，例如亲和力。通常，人源化抗体将包含基本上全部至少一个，通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。有关进一步的细节，参见Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；和Reichmann等，Nature 332：323-329(1988)。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。通常，所述Fv多肽还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成抗原结合所需的结构。关于sFv的综述参见Pluckthun in The Pharmacology of MonoclonalAntibodies，vol。113，Rosenburg和Moore编辑，Springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994)。
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包含与相同多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用太短而不允许相同链上的两个结构域之间配对的接头，该结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体更全面地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；和Hollingerel al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。
当在本申请中使用时，表述“线性抗体”是指Zapata等人描述的抗体。ProteinEng.8(10):1057-1062(1995)。简而言之，这些抗体包含一对串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，其形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。
本文所用的术语“治疗”包括预防性(防病性)或治疗性(姑息性)治疗中的一种或多种。
术语“癌症”在本文中用于指在哺乳动物(例如人)中发现的所有类型的癌症，肿瘤或恶性肿瘤，包括白血病，淋巴瘤，癌和肉瘤。可用本文提供的组合物，组合或方法治疗的示例性癌症包括实体非淋巴肿瘤，B细胞白血病，非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
出于说明书和权利要求的目的，术语“实体非淋巴组织肿瘤”在本文中用于表示上皮细胞来源的任何原发性肿瘤，包括源自器官或腺体的肿瘤，例如肝，肺，脑，肾上腺。，乳腺，结肠，膀胱，胰腺，胃，前列腺，胃肠道或生殖道(子宫颈，卵巢，子宫内膜等)或其转移。出于本发明的目的，“固体非淋巴肿瘤”还包括黑素瘤。
术语“个体”在本文中用于指哺乳动物，优选人；更优选地，需要用优先消耗人B10细胞的抗体或这种抗体与免疫检查点抑制剂的组合治疗的人。术语个体可以与受试者和/或患者互换使用。
术语“免疫检查点抑制剂”是指结合免疫检查点蛋白并阻断其活性和/或抑制免疫调节细胞(例如，Treg细胞，肿瘤相关巨噬细胞等)表达其结合的免疫检查点蛋白的功能的分子，化合物或组合物。免疫检查点蛋白可包括但不限于CTLA4(细胞毒T淋巴细胞相关蛋白4，CD152)，PD1(也称为PD-1；程序性死亡1受体)，PD-L1，PD-L2，LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)，OX40，A2AR(腺苷A2A受体)，B7-H3(CD276)，B7-H4(VTCN1)，BTLA(B和T淋巴细胞衰减子，CD272)，IDO(吲哚胺2，3-双加氧酶)，KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)，TIM 3(T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)，VISTA(T细胞活化的V结构域Ig抑制因子)和IL-2R(白细胞介素-2受体)。
免疫检查点抑制剂是本领域熟知的并且是商业上或临床上可获得的。这些包括但不限于抑制免疫检查点蛋白的抗体。由其靶免疫检查点蛋白参照的检查点抑制剂的说明性实例提供如下。包含CTLA-4抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于替西木单抗(tremelimumab)和伊匹木单抗(ipilimumab)(作为Yervoy销售)。包含PD-1抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于纳武利尤单抗(nivolumab)(BMS-936558/MDX-1106，Bristol-Myers Squibb)，pidilizumab(CureTech)，AMP-514(MedImmune)，pembrolizumab(Merck)，AUNP 12(肽，Aurigene and Pierre)。包含PD-L1抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于BMS-936559/MDX-1105(Bristol-Myers Squibb)，MPDL3280A(Genentech)，MED14736(MedImmune)，MSB0010718C(EMD Sereno)。包含B7-H3抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于MGA271(Macrogenics)。包含LAG3抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于IMP321(Immuntep)，BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)。包含KIR抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于IPH2101(lirilumab，Bristol-Myers Squibb)。包含OX40抑制剂的免疫检查点抑制剂包括但不限于MEDI-6469(MedImmune)。靶向IL-2R的免疫检查点抑制剂，用于优先消耗Treg细胞(例如，FoxP-3+CD4+细胞)，包含IL-2-毒素融合蛋白，其包括但不限于denileukin diftitox(Ontak；Eisai)。
术语“优先消耗B10细胞的抗体”在本文中用于指特异性结合CD20或CD22并优先消耗B10细胞的抗体亚组。似乎这种优先消耗B10细胞的抗体亚组的能力涉及一种或多种因子，其可包括但不限于其结合CD22或CD20的位置(例如，与细胞表面的距离，使得抗体依赖性细胞毒是低效的或不可检测的)，亲和力，高亲合力(avidity)，交联靶分子的能力，抗体的同种型，以及传递或抑制导致抗原内化并导致B10细胞消耗的细胞信号的能力。此类抗体还可以使用本领域已知的方法改造Fc部分(例如，氨基酸的缺失或取代)，使得其不能结合或无效结合表达Fc受体的免疫效应细胞的Fc受体。优先消耗B10细胞的抗体可能是非天然存在的，因为体外免疫或体内动物模型系统免疫是产生抗体所必需的，然后使用本领域已知的方法选择性筛选抗体结合特异性，以及优先消耗B10细胞的能力。在这种情况下，人们不会期望人类个体携带天然存在的由于克隆缺失而优先消耗B10细胞的抗体。实施例2-6和图1-15中所示的是优先消耗B10细胞的抗体的说明性实例，命名为MB22-10。MB22-10抗体描述于Horikawa等，J Immunol 2013vol 190：1158-1168；Haas等人，J.Immunology，2006，177：3063-3073；Poe等人，PLoS One 2011 6:e22464；Matsushita等人，J Immunology 2010185:2240-2252中。通过在抗体结合CD22或CD20后产生跨膜信号，抗体介导同型粘附(细胞聚集)的能力也可用作筛选优先消耗B10细胞的抗体的替代标记。在这方面，实施例1中显示的是使用B细胞同型粘附作为优先消耗B10细胞的抗体的标记。在使用这种标记物时，可以结合人CD20并优先消耗人B10细胞的抗体的实例包括包含以下部分的抗体：利妥昔单抗的CDR，以及IgG4Ab的Fc部分或经工程化既不激活补体也不参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)的FC部分。在使用这种标记物时，可以结合人CD20并优先消耗人B10细胞的抗体的实例包括包含以下的抗体：托西莫单抗的CDR，以及IgG4Ab的Fc部分或经工程化既不激活补体也不参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)的Fc区。利妥昔单抗和托西莫单抗是众所周知的抗体，并且是本领域技术人员充分了解的。
本文提供了治疗癌症或启动，增强或延长个体的抗肿瘤反应的方法。该方法可包括将优先消耗B10细胞的抗体给予受试者以治疗实体非淋巴组织肿瘤。在另一个实施方案中，该方法包括向患有癌症或肿瘤的任何个体施用优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂。可以以任何方式施用优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂组合。它们可以在给药方案中分别给药，其中所述组合分别给予个体，并且所述给药的时间过程最适合于实施例中的每种组分。或者，该组合可以作为单个组合物施用。本领域技术人员可以开发组合治疗方案。
还提供了在有需要的个体中启动，增强或延长T细胞活化的方法，包括给予优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂。该方法也可以通过任何方式完成，并且可以使用一种以上的组合物或包含两种治疗剂的单一组合物。
还提供了启动或增强或延长免疫检查点抑制剂的有效性，或使免疫检查点抑制剂的毒性或剂量减少的方法。该方法包括向个体在组合治疗方案中施用包含优先消耗B10细胞的抗体的组合物与包含免疫检查点抑制剂的组合物。
还提供了治疗通过刺激免疫应答而改善的疾病的方法。这些方法包括向有此需要的个体施用包含优先消耗B10细胞的抗体的组合物以及包含免疫检查点抑制剂的组合物。
在本文所述的方法中，优先消耗B10细胞的抗体可选自包括选自MB22-10，MB22-103，MB22-106，MB22-107，MB22-115的抗体的CDR部分的抗体，利妥昔单抗和托西莫单抗或本文所述的任何组合。优先消耗B10细胞的抗体适当地诱导B细胞的同型粘附。
在本文提供的任何治疗方法中，抗体或组合的剂量将取决于诸如给药方式，给药制剂，癌症类型，癌症阶段，接受所述组合物的个体的体积和健康，以及确定适当治疗剂量领域的医疗技术人员可以考虑的其他因素。例如，对于本文提供的治疗方法，优先消耗B10细胞或免疫检查点抑制剂的抗体可以以约0.1mg/kg至约50mg/kg，约0.5mg/kg至约20mg/kg，约0.5mg/kg至约10mg/kg，约0.5mg/kg至约5mg/kg，或0.5mg/kg至约1mg/kg的剂量范围(每个个体的体重)施用。本领域技术人员可以应用药物递送和药代动力学的已知原理和模型，以确定在临床前和临床研究中待测试的可能剂量范围，以确定本文提供的治疗方法中使用的组合物或组合的治疗有效量。可用于本文提供的治疗方法的组合物或组合可进一步包含药学上可接受的载体，以利于储存，稳定性，施用和递送中的一种或多种。所述载体可以是颗粒状的，因此组合物或组合可以是例如粉末或固体形式。所述载体可以是半固体，凝胶或液体配方，以便可以注射，施用或以其他方式施用所述的组合物或组合。可用于本文提供的治疗方法的组合物或组合给予需要其的个体(例如人)的方式可以是本领域已知的适于递送药物组合物并具体适合治疗癌症的任何方式。给药方式可包括但不限于静脉内，腹膜内，皮下，肌肉内，灌注和蠕动技术。可用于本文提供的治疗方法的组合物或组合还可以与本领域技术人员已知的其他癌症治疗组合，包括但不限于化学治疗和放射治疗。
所述组合治疗的频率，给药顺序，剂量和给药方案可由医生考虑以下因素确定：个体的医学历史，健康，年龄和性别，待治疗的疾病或病况或病症，所述组合物或组合或治疗的给药模式和给药方案，以及其他相关的考虑因素。在本文提供的治疗方法中，免疫检查点抑制剂可以以治疗有效的合适频率施用于个体。例如，免疫检查点抑制剂可以每周两次，每周一次，每两周一次，每三周一次，每月一次，每两个月一次，每三个月一次，每四个月一次，每五个月一次，或每6个月一次施用。在本文提供的治疗方法中，优先消耗B10细胞的抗体可以以治疗有效的合适频率施用于个体。例如，优先消耗B10细胞的抗体可以施用一次，以与免疫检查点抑制剂相同的频率施用，或以不同于免疫检查点抑制剂的频率施用。在使用本文提供的组合的治疗方法中，在一个实例中，施用免疫检查点抑制剂之前施用优先消耗B10细胞的抗体。在使用本文提供的组合的治疗方法的另一个实例中，施用免疫检查点抑制剂之后施用优先消耗B10细胞的抗体。
还提供了能够优先消耗人B10细胞的抗体。特异性结合人CD22的抗体可包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区(“VH”)包含三个互补决定区，VH CDR1，VH CDR2和VHCDR3，以及轻链可变区(“VL”)包含三个互补决定区，VL CDR1，VL CDR2和VL CDR3，并且其中VH CDR1选自SEQ ID NO：27，28和与SEQ ID NO：27和28具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列组成的组；VH CDR2选自SEQ ID NO：29，30和31，以及与SEQID NO：29，30和31具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列组成的组；VH CDR3选自SEQ ID NO：32和33，和与SEQ ID NO：32和33具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列组成的组；VL CDR1选自SEQ ID NO：34，37，40，43以及与SEQ ID NO：34，37，40，43具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列组成的组；VL CDR2选自SEQ ID NO:35，38，41和44以及与SEQ ID NO:35，38，41和44具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列组成的组；和VL CDR3选自SEQID NO:36，39，42和45以及与SEQ ID NO:36，39，42和45具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列组成的组。这些CDR可以用于产生人源化抗体，通过与人抗体的FW区和恒定区组合以产生人CD22特异性人源化抗体。将CDR置于FW区内，使得包含三个互补决定区VH CDR1，VH CDR2和VH CDR3的重链可变区(“VH”)以及四个框架区VH FW1，VHFW2，VH FW3和VH FW4按照VH FW1-VH CDR1-VH FW2-VH CDR2-VH FW3-VH CDR3-VH FW4的顺序存在，并且包含三个互补决定区VL CDR1，VL CDR2和VL CDR3的轻链可变区(“VL”)以及四个框架区VL FW1，VL FW2，VL FW3和VL FW4按照VL FW1-VL CDR1-VL FW2-VL CDR2-VL FW3-VL CDR3-VL FW4的顺序存在。本领域技术人员能够基于本文提供的CD22特异性CDR或重链和轻链可变区产生人源化抗体。
在一个实施方案中，所述抗体包含SEQ ID NO：27，29和32的VH CDR和SEQ ID NO：40，41和42(HB22-103)的VL CDR或与这些序列具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列。在一个实施方案中，所述抗体包含SEQ ID NO：27，30和32的VHCDR和SEQ ID NO：37，38和39(HB22-106)的VL CDR或与这些序列具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％相同性的序列。在一个实施方案中，所述抗体包含SEQ ID NO：28，31和33的VH CDR和SEQ ID NO：34，35和36(HB22-107)的VL CDR或与这些序列具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％的相同性的序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含SEQ ID NO：27，30和32的VH CDR和SEQ ID NO：43，44和45的VL CDR(HB22-115)或与这些序列具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％的相同性的序列。在又一个实施方案中，所述抗体包含选自SEQ ID NO：2，3，4和5的VH和与SEQ ID NO：2，3，4和5具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％的相同性的序列，以及选自SEQ ID NO：15，16，19和20的VL和与SEQ ID NO：15，16，19和20具有80％，85％，90％，92％，95％，96％，97％，98％的相同性的序列。适当地，所述抗体包括SEQ ID NO：2和19。所述抗体可以包括SEQ ID NO：3和16。所述抗体可包括SEQ ID NO：4和20。所述抗体可包括SEQ ID NO：5和15。本申请中鉴定的各种重链和轻链序列和各种CDR可互换使用，因为这些抗体是全部针对人CD22上的相同表位。我们已经证明VH和VL可以互换使用，并且我们预期CDR在这些鉴定的抗体之间同样可以互换。
提供的序列仅用于抗体的可变区。本领域技术人员将理解，这些区域决定抗体的特异性，但抗体的效应物功能通常取决于抗体的恒定区(和特定同种型)。基于本文提供的可变区，本领域技术人员可以针对具体目的设计抗体。如实施例中所述，能够优先消耗B10细胞的抗体通常是能够诱导B10细胞的同型粘附的抗体。在一些实施方案中，抗体包含人或人源化IgG4抗体的Fc部分。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，其已经被工程化从而既不激活补体也不参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)。
能够结合本文所述CD22的抗体可以在本文所述的任何方法中用作优先消耗B10细胞的抗体。
本公开不限于本文所述的组分的构建、排列或方法步骤的具体细节。本文公开的组合物和方法能够以各种方式制备，实践，使用，实施和/或形成，这些方式对于本领域技术人员而言根据下面的公开内容是显而易见的。这里使用的措辞和术语仅用于描述的目的，不应视为限制权利要求的范围。在说明书和权利要求中使用的诸如第一，第二和第三的顺序指示语指代各种结构或方法步骤并不意味着被解释为指示任何特定结构或步骤，或所述结构或步骤的任何特定顺序或配置。除非本文另有说明或上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以任何合适的顺序进行。除非另外声明，否则本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在有利于本公开，并不意味着对本公开的范围的任何限制。说明书中的语言以及附图中的结构不应被解释为表示任何未要求保护的要素对于所公开的主题的实践是必不可少的。本文中术语“包括”，“包含”或“具有”及其变体的用途旨在涵盖其后列出的要素及其等同物，以及其他要素。记载为“包括”，“包含”或“具有”某些要素的实施方案也涉及“基本上由那些某些要素......组成”和“由那些某些要素......组成”的实施方案。
除非本文另有说明，否则本文中对数值范围的描述仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的简写方法，并且每个单独的值并入本说明书中，如同其在本文中单独引用一样。例如，在说明书中如果浓度范围表示为1％至50％，则意图具体列举诸如2％至40％，10％至30％或1％至3％等的值。这些仅是具体意图的举例，并且在所列举的最低值和最高值之间并包括所列举的最高值的所有可能的数值组合将被认为在本公开中明确陈述。使用词语“约”来描述具体的所述量或量的范围意味着表示非常接近所述量的值包括在该量中，例如由于形成测量时制造公差，仪器和人为误差等而可能或自然会考虑的值。除非另有说明，否则所有涉及量的百分比均以重量计。
不承认任何参考文献，包括本说明书中引用的任何非专利或专利文献，构成现有技术。特别地，应理解，除非另有说明，否则本文中对任何文件的引用并不构成承认任何这些文件构成美国或任何其他国家的本领域公知常识的一部分。对参考文献的任何讨论均陈述其作者所声称的内容，并且申请人保留质疑本文引用的任何文献的准确性和相关性的权利。除非另外明确指出，否则本文引用的所有参考文献均通过援引全文并入，如果在引用的参考文献中找到的任何定义和/或描述之间存在任何差异，则以本申请为准。
以下实施例仅用于说明，并不意味着对本发明或所附权利要求的范围的限制。
实施例1
本实施例证明了使用体外替代标记物筛选或鉴定优先消耗B10细胞的抗体，而不是必须进行体内实验以鉴定和证明B10细胞的优先消耗。本实施例中，选择的CD20抗体或CD22抗体与它们各自的人细胞表面受体的结合具有通过Fcγ受体非依赖性信号传导途径在鼠B细胞和人B细胞中诱导快速且有效的同型粘附的能力。如前所述(Kansas和Tedder，1991，J.Immunol.，147(12)：4094-4102)进行评估抗体诱导同型粘附能力的试验。简而言之，在含有10％胎牛血清的细胞培养基中洗涤细胞，并将含有5×106个细胞的0.5ml加入15ml圆底管中。然后加入待筛选的抗体，其浓度为细胞受体(例如，CD20或CD22)饱和所需的浓度的5至10倍，如通过流式细胞术分析的间接免疫荧光染色所确定的。将细胞和抗体涡旋混合，将0.1ml每种处理过的细胞悬浮液置于平底96孔板的孔中。然后将板在37℃温育1至2小时。使用以下标准对细胞同型粘附进行半定量评分：“0”表示没有同型粘附(>90％的细胞未聚集)；“+”表示大多数细胞未聚集，但观察到一些10-20个细胞的簇；“++”表示约50％的细胞处于中等大小的聚集体中，其余为单细胞；“+++”表示几乎所有细胞都处于中到大的聚集体中，未聚集的细胞少于20％；“++++”表示超过90％的细胞处于大聚集体中。如表1中所示，在本发明实施例中，优先消耗B10细胞的抗体MB22-10显示出约++的半定量评分，这取决于所用的B细胞系。MB22-10是小鼠CD22特异性抗体。表1中还显示了托西莫单抗，根据所使用的B细胞系其显示了+++和++++的半定量评分，而利妥昔单抗显示出约++的半定量评分。因此，托西莫单抗和利妥昔单抗能够产生导致B细胞同型粘附的Fcγ受体非依赖性信号，还具有通过B10细胞消耗性CD22抗体如MB22-10诱导的分子途径消耗B10细胞的能力。
表1
B细胞受体 抗体 得分/B细胞系1 得分/B细胞系2
CD22 MB22-10 + ++
CD20 托西莫单抗 +++ ++++
CD20 利妥昔单抗 +/++ ++
实施例2
在该实施例中，在标准动物模型中显示免疫治疗的方法和通过给予优先消耗B10细胞作为单一疗法的抗体来治疗癌症的方法。在第0天，将在200μl PBS中的2×106个MC38(结肠腺癌)肿瘤细胞从剃毛背侧皮下注射入C57BL/6小鼠。在指定的天数，纯化组织淋巴细胞并单独用莫能菌素培养或用LPS，PMA，离子霉素和莫能菌素(L+PIM)离体刺激5小时。对细胞表面CD19和细胞内IL-10染色野生型淋巴细胞以定量B10细胞频率，同时对来自Tiger小鼠的淋巴细胞染色CD19，通过流式细胞术评估细胞质GFP表达。代表性的流式细胞术直方图显示淋巴结(图1)和脾(图2)中单个活CD19+B细胞的IL-10表达。图1和图2左侧的散点图显示B10细胞相对于总B细胞的比例在荷瘤小鼠的引流淋巴结中没有改变，但在荷瘤小鼠的脾脏中显着增加。右侧的散点图显示，与非荷瘤小鼠相比，特别是在肿瘤起始后的早期时间点，荷瘤小鼠的引流淋巴结和脾脏中B10细胞的总数明显增加。
在类似的实验中，纯化优先消耗B10细胞(IgG2c)的靶向CD22的抗体，并在第-7天，第0天和第7天经腹膜内(ip)(100μg/小鼠，在200μl PBS中)给予小鼠(总共300μg/小鼠)以消耗B10细胞(“测试组”)。第二组小鼠通过相同的给药方式接受泛B细胞消耗性抗体(IgG2c，250μg/小鼠)，与优先消耗B10细胞的抗体相比，因为其成熟B细胞持续消耗仅在第7天给予(“B细胞对照组”)。作为对照，与治疗抗体相比，以相同的剂量，施用方式和频率给予平行的小鼠组(“同种型对照组”)同种型匹配的对照单克隆抗体。使用以下等式监测和计算肿瘤体积：V＝(L×W×W)/2，其中V＝体积(cm3)，L＝长度，W＝宽度(cm)。在肿瘤注射后监测肿瘤大小达30天，在肿瘤体积超过2.0cm3之前使小鼠安乐死。如每组小鼠保留超过原始小鼠数量的一半，计算平均肿瘤体积并显示。Kaplan-Meier图用于显示小鼠存活。
与对照单克隆抗体治疗的小鼠相比，B10细胞消耗明显抑制肿瘤生长，由于用优先消耗B10细胞的抗体治疗，在每个时间点，平均肿瘤体积减少37％(P≤0.05)(图3)。相对于对照单克隆抗体治疗组，没有观察到由于总B细胞消耗而对肿瘤的生长明显作用(图4)。因此，在治疗方法中施用包含优先消耗B10细胞的抗体的组合物作为单一疗法对肿瘤生长具有明显的治疗效果，尽管研究的是相对高肿瘤剂量的侵袭性肿瘤系也如此。这首次证明了我们对CD22抗体给药导致实体非淋巴组织肿瘤的生长减少的认知。
实施例3
在本实施例中，使用标准动物模型和方法(a)治疗癌症或促进抗肿瘤免疫应答；(b)免疫疗法，其导致T细胞活化或在个体中预先存在的免疫应答的再激活，其中在所述个体中这种预先存在的免疫应答被抑制或抑制；(c)评估免疫检查点抑制剂的有效性(例如治疗功效)的开始或增强；(d)评估免疫检查点抑制剂的毒性降低，或用较低剂量获得的免疫检查点抑制剂的治疗效果的评估。该方法包括在组合治疗方案中，在已建立肿瘤的小鼠中施用包含优先消耗B10细胞的抗体和一种或多种免疫检查点抑制剂的组合。与如上文实施例2中所述的使用MC38肿瘤的模型相反，当开始治疗时(第0天)，在个体小鼠中建立的肿瘤体积为40-100mm3。在第0，6和12天(总共300μg/小鼠)给予优先消耗B10细胞的抗体(MB22-10单克隆抗体，IgG2c，100μg/小鼠)。在第0，3，6和9天(总共400μg/小鼠)给予抗PD-1抗体(单克隆抗体，100μg/小鼠)。在第0天给予抗-CTLA-4抗体(单克隆抗体，100μg/小鼠)，然后在第3天和第6天给予治疗(总共200μg/小鼠)。不同组的小鼠接受优先消耗B10细胞的抗体或免疫检查点抑制剂的单一疗法，或两种免疫检查点抑制剂，或包含优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂的组合，或包含优先消耗B10细胞的抗体和多种免疫检查点抑制剂的组合。
如图5所示，与接受同种型对照抗体治疗的小鼠相比，接受单一疗法的小鼠对MC38肿瘤生长有明显影响。如图6所示，与接受同种型对照抗体治疗的小鼠相比，接受单一疗法的小鼠的存活率也明显延长，但是在给予优先消耗B10细胞的抗体、抗PD-1抗体或抗-CTLA-4抗体的小鼠组之间没有明显差异。
与接受同种型对照抗体的小鼠相比，用(i)两种免疫检查点抑制剂，或(ii)包含优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂的组合，或(iii)包含优先消耗B10细胞的抗体和一种以上免疫检查点抑制剂的组合治疗小鼠显示出明显延迟的平均肿瘤进展和降低的平均肿瘤生长(图7)。图8显示，与单一疗法相比，联合疗法也提高了存活率。最引人注目的是在用包含优先消耗B10细胞的抗体和一种以上免疫检查点抑制剂的组合治疗中观察到的协同作用。
结果显示在图9中并且证明在用三种抗体组合治疗的小鼠中肿瘤进展最慢，其中与给予检查点抑制剂组合疗法的10只小鼠中的4只相比组合治疗的10只小鼠中的6只排斥其肿瘤。因此，包括B10消耗和免疫检查点抑制的三重抗体组合导致较慢的肿瘤进展，更多小鼠排斥其肿瘤并且总体存活增加。肿瘤进展缓慢，更多小鼠排斥肿瘤。
接下来在未患有和患有MC38肿瘤的小鼠中检查联合疗法的效果，以确定它们对免疫系统的协同作用，特别是这些抗体治疗是否改变总B细胞数量，其由被治疗的小鼠中的引流淋巴结和脾中表达CD19和B10细胞的细胞测量。如上所述并以与上述相同的剂量对小鼠在第0、7和14天给予MB22-10或对照(CTRL)mAb，在第0、3、6和9天给予PD-1mAb，或在第0、3和6天给予CTLA-4mAb。如所示，在第0天也皮下给予一些小鼠MC38肿瘤细胞(2×106)。在第21天通过流式细胞术分析的免疫荧光染色评估单个存活的肿瘤引流淋巴结(图10A)和脾(图10B)淋巴细胞中的CD19+B细胞和B10细胞频率。如所示，在治疗后的个体小鼠中显示了肿瘤引流淋巴结和脾内的总CD19+B细胞和B10细胞的数量。水平条表示平均细胞数，星号表示统计学显著性。在没有肿瘤的情况下，抗体治疗没有改变脾脏或引流淋巴结中的总CD19+B细胞数量。肿瘤引流淋巴结细胞构成在荷瘤小鼠中显明显增加，但在用B10细胞消耗性抗体治疗的小鼠中这种情况被逆转。
用单独的B10细胞消耗性抗体或与免疫检查点抑制剂组合处理正常的非肿瘤荷瘤小鼠减少了淋巴结和脾脏中B10细胞的数量。荷瘤小鼠相对于没有肿瘤的小鼠显示淋巴结和脾脏中B10细胞数量的明显增加，但是这种增加在用B10细胞消耗性CD22靶向抗体治疗的小鼠中完全逆转。因此证明B10细胞消耗性mAb作为单一疗法在消耗B10细胞和肿瘤存在方面是有效的，并且通过减轻的淋巴结肿大证明了所产生的治疗益处。
实施例4
在该实施例中，标准动物模型中显示的是用自身优先消耗B10细胞的抗体(单一疗法)治疗或在免疫检查点抑制剂的组合疗法方案中治疗，所述治疗可以增强(增强，启动和/或延长)CD4+和CD8+ T细胞活化，所述细胞活化在抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用。在一次治疗后第7天通过它们的细胞表面CD44和CD62L表达的模式定量脾和淋巴结CD4+和CD8+ T细胞的总数和活化。如图11A所示，对于没有肿瘤的小鼠，与单独接受对照抗体的小鼠相比，用单一疗法或联合疗法治疗的小鼠中淋巴结CD4+细胞和CD8+细胞的相对数量没有明显变化。如图11B所示，与接受对照抗体的小鼠相比，用抗PD-1或抗-CTLA-4单一疗法治疗的小鼠中脾CD4+细胞和CD8+细胞的相对数量减少，但不如在用优先消耗B10细胞的抗体、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体的组合疗法治疗的小鼠中减少程度高。然而，如图11A所示，在给予MC38肿瘤的小鼠的肿瘤引流淋巴结内，CD4+细胞和CD8+细胞均增加。
脾脏中活化的CD4+ T细胞和活化的CD8+ T细胞的数量在没有肿瘤的小鼠中通过每次单一疗法明显增加，其中具有低CD62L表达和高CD44表达(分别为CD62LloCD44hiCD4+，CD62LloCD44hiCD8+)；然而，与其他治疗相比，在活化的CD4+ T细胞和活化的CD8+ T细胞数量中观察到的最明显的增加是在包含优先消耗B10细胞的抗体和多于一种免疫检查点抑制剂的组合疗法之后(图12B)。与对照治疗相比，在包含优先消耗B10细胞的抗体和多于一种免疫检查点抑制剂的组合疗法后，淋巴结CD62LloCD4+T细胞数和CD62LloCD8+T细胞数也增加(图12A)。这些结果表明用优先消耗B10细胞的抗体处理可以自身或与免疫检查点抑制剂组合起作用以激活介导抗肿瘤免疫应答的T细胞(CD4+ T细胞和CD8+ T细胞)。因此，涉及本发明一个方面的技术解决方案是因为优先自身消耗B10细胞的抗体可以增强CD4和CD8 T细胞活化，它可以增强任何免疫检查点抑制剂的有效性，该抑制剂也用于促进T细胞激活。
还如上所述处理的小鼠中评估了调节性T细胞(CD25+FoxP3+CD4+细胞)的数量。如图13所示，用任何抗体的单一疗法对淋巴结或脾中的调节性T细胞的数量没有影响。相反，在用三种抗体的组合处理后，荷瘤小鼠在脾中具有显着更高水平的调节性T细胞。未治疗的荷瘤小鼠中CD4+调节性T细胞的数量在淋巴结中显着增加，但在脾中未观察到变化。当用能够消耗B10细胞的CD22抗体处理荷瘤小鼠时，在引流淋巴结中观察到的调节性T细胞的增加被逆转。这些结果表明，给予消耗B10细胞的CD22抗体可能有助于降低调节性T细胞应答并增加经被治疗动物的T细胞活化，从而支持更有效的抗肿瘤免疫应答。
实施例5
使用实施例2和3中描述的标准动物模型和方法，本实施例进一步说明在包含优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂的治疗中抗肿瘤反应的启动或增强。在这些实验中使用的免疫检查点抑制剂是denileukin diftitox(Ontak)。具有已建立的MC38肿瘤(40-100mm3)的小鼠在第0、6和12天(总共300μg/小鼠)接受优先消耗B10细胞的抗体或同种型匹配的对照抗体的治疗。在第0、3和6天(总共15μg/小鼠)施用Denileukin diftitox作为对一组小鼠的单一疗法，或作为对接受优先消耗B10细胞的抗体的小鼠的组合疗法。如图14所示，与接受包含IL-2-毒素融合蛋白(denileukin diftitox)的单一疗法的个体小鼠相比，接受组合疗法的个体小鼠的肿瘤进展(平均肿瘤体积)在治疗开始后16天明显(p<0.05)减少，其中所述组合疗法包括优先消耗B10细胞的抗体和IL-2-毒素融合蛋白(denileukindiftitox)。因此，与涉及免疫检查点抑制剂的单一疗法相比，涉及本发明一个方面的技术方案是优先消耗B10细胞的抗体可以与免疫检查点抑制剂协同作用以启动，增强或延长抗肿瘤反应。
进行类似的实验以评估CD22抗体和IL-2-毒素融合蛋白(denileukin diftitox)在小鼠中消耗B10细胞和调节性T细胞的相对作用。如上所述在具有建立的MC38肿瘤的小鼠中进行实验，结果如图15A(调节性T细胞)和图15B(B10细胞)所示。用CD22抗体，IL-2毒素融合蛋白或组合开始治疗后9天，显示脾和引流淋巴结的结果。仅在用CD22抗体单独或与IL-2毒素融合蛋白组合治疗的小鼠的脾和淋巴结中B10细胞的数量仅减少。如图15A所示，单独用IL-2毒素融合蛋白或与CD22抗体的组合治疗的小鼠脾脏中T调节细胞的数量明显减少，但调节性T细胞仅在用IL-2融合蛋白治疗的小鼠发淋巴结中明显减少。所述组合治疗不会导致淋巴结中调节性T细胞数量的减少。这些结果表明，给予消耗B10细胞的CD22抗体可能有助于降低调节性T细胞应答并增加经处理动物的T细胞活化，从而支持更有效的抗肿瘤免疫应答。
实施例6
在这些临床前实验中使用的CD22抗体对小鼠CD22具有特异性，但显示出其他抗小鼠CD22mAb不具有的功能特性。具体地，大多数CD22特异性抗体不能在体内消耗B10细胞。如上面更全面地讨论的，所述抗体在CD22中结合的表位可能是不同的，并且它们在细胞表面的诱导同型粘附而不是ADCC或CDC的空间相互作用是用于本发明所述方法的CD22特异性抗体的关键特征。因此，我们意图鉴定一种对人CD22特异的抗体，其具有模拟小鼠MB22-10抗体以优先消耗B10细胞的能力。完全人单克隆抗体，人源化单克隆抗体或嵌合的单克隆抗体可用作本文所述方法中的人治疗剂。
我们从充分表征的CD22抗体的大规模功能筛选(large functional screen)中选择的新型抗体称为HB22-103，HB22-106，HB22-107和HB22-115。图22提供了这些抗体的重链和轻链可变区与其他人CD22特异性抗体的序列比对。突出显示(灰色)并标记每个链的CDR。图16-21提供了我们对这些抗体优先消耗B10细胞的能力的初步表征。
在它们的体内评估中，通过向来自充分表征的CD22抗体的大规模功能筛选的人CD22转基因小鼠施用250μg的每种指定抗体来评估单克隆抗体消耗脾中B10细胞的能力。在抗体施用后7天收集脾单核细胞，并在体外用莫能菌素，LPS，PMA和离子霉素刺激5小时，然后使用CD19选择以鉴定B细胞和细胞质IL-10表达以鉴定IL-10感受态B细胞。双阳性细胞代表B10细胞。将用HB22-103，HB22-106，HB22-107，HB22-115抗体体内处理后(参见图16A)的转基因小鼠中发现的B10细胞数与对照处理小鼠中的数目进行比较，如图16B所示。与野生型小鼠中的MB22-10抗体情况一样，HB22-103和HB22-107CD22抗体能够明显消耗脾脏中IL-10感受态B10细胞的数量的60-80％(图16)。类似地，HB22-103，HB22-107和HB22-115抗体不消耗大部分脾B细胞(图17)，但确实有效地消除了脾脏中的CD1dhiCD21hi和CD1dhiCD5+细胞亚群(图18)。与小鼠中的MB22-10抗体一样，循环B细胞数减少(图19)，并且在用每种CD22抗体治疗后，循环B细胞上CD19和CD22的细胞表面密度下调(图20-21)。在抗体治疗的小鼠中剩余的B细胞上CD22水平下调，但细胞仍然能够结合mIgG1，表明抗体在体内结合B细胞。因此，HB22-103，HB22-107和HB22-115表现出MB22-10抗体的许多功能特征，并且代表了进入临床的潜在候选物。
图19-21提供了三种人CD22特异性抗体的进一步表征。如上所述用指定的抗体处理小鼠，并在施用抗体后7天收获脾脏。如图19A和19B所示，当对小鼠施用HB22-103或HB22-107时，与对照治疗相比，每种抗体治疗的小鼠脾脏中B220+B细胞的总数明显改变。如图20A和20B所示，在每种CD22抗体治疗的小鼠中，表达IgG1的细胞的百分比明显增加。如图21A和21B所示，在用每种CD22抗体处理后，CD19的水平和CD19+细胞的百分比均明显下调。最后用不同的CD22抗体(HB22-7)进一步治疗细胞表明，与来自对照治疗的小鼠的细胞相比，来自用体内CD22抗体治疗的小鼠的细胞中CD22阳性细胞的百分比明显更低。
序列表
<110> 杜克大学
T·F·特德
Y·藤泽
J·莱肯
<120> 用于消耗调节性B10细胞的抗体和方法以及与免疫检查点抑制剂的联用
<130> 5667-00417
<150> US 62/434,833
<151> 2016-12-15
<160> 45
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: LL2
<400> 1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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<213> 人工序列
<220>
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Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ser Glu Lys Phe
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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65 70 75 80
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50 55 60
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65 70 75 80
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Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
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Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
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100 105 110
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115 120
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-23
<400> 8
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1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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50 55 60
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Tyr Met His Trp Leu Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
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Ser Arg Val Asp Tyr Asp Asp Tyr Gly Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val
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<213> 人工序列
<220>
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1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
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Gly Leu Leu His Pro Phe Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
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Lys Gly Lys Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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<213> 人工序列
<220>
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Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-7
<400> 12
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ile Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Arg Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
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Ser Arg Leu Asn Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
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Lys Met Asn Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Ala Pro Gly Asn Arg Ala Met Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
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<400> 13
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Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
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Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Gly Ile Thr Val Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 14
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
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Glu Asn Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
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Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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<211> 113
<212> PRT
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<220>
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Asp Ile Val Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Arg Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
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His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 16
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 16
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
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65 70 75 80
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-33
<400> 17
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Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
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65 70 75 80
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85 90 95
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<210> 18
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: M5/44
<400> 18
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly
1 5 10 15
Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
20 25 30
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103
<400> 19
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<210> 20
<211> 107
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 20
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1 5 10 15
Asp Ser Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: RFB4
<400> 21
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50 55 60
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65 70 75 80
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-196
<400> 22
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly
1 5 10 15
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Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
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Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-23
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Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
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Tyr Tyr Ala Ser Lys Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Leu Thr Gly
50 55 60
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 24
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-7
<400> 24
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-5
<400> 25
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Thr Val Thr Asn Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Asn Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-13
<400> 26
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp
20 25 30
Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103 HB22-106, HB22-115 VH CDR1
<400> 27
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-107 VH CDR1
<400> 28
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103 VH CDR2
<400> 29
Ile His Pro Asn Arg Gly Thr Thr
1 5
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-106 and HB22-115 VH CDR2
<400> 30
Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-107 VH CDR2
<400> 31
Ile Thr Ser Gly Gly Asp Tyr Ile
1 5
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103, HB22-106 and HB22-115 VH CDR3
<400> 32
Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Pro Asp Tyr
1 5 10
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-107 VH CDR3
<400> 33
Thr Arg Asp Gln Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Arg Pro Thr Trp Phe Ala
1 5 10 15
Tyr
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-107 VL CDR1
<400> 34
Gln Ser Leu Leu Ser Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-107 VL CDR2
<400> 35
Phe Ala Ser
1
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-107 VL CDR3
<400> 36
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-106 VL CDR1
<400> 37
Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-106 VL CDR2
<400> 38
Leu Val Ser
1
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-106 VL CDR3
<400> 39
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 40
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103 VL CDR1
<400> 40
Gln Ser Ile Ser Asn Asn
1 5
<210> 41
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103 VL CDR2
<400> 41
Tyr Gly Tyr
1
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-103 VL CDR3
<400> 42
Gln Gln Ser Tyr Arg Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-115 VL CDR1
<400> 43
Gln Gly Ile Ser Asn Asn
1 5
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-115 VL CDR2
<400> 44
Phe Thr Ser
1
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成: HB22-115 VL CDR3
<400> 45
Gln Gln Ser Asn Arg Trp Pro Tyr Thr
1 5

Claims (27)

1.一种特异性结合人CD22的抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区(“VH”)包含三个互补决定区：VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，并且所述轻链可变区(“VL”)包含三个互补决定区：VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，并且其中VH CDR1选自SEQ IDNO：27，28以及与SEQ ID NO：27和28具有90％相同性的序列组成的组；VH CDR2选自SEQ IDNO：29，30和31以及与SEQ ID NO：29，30和31具有90％相同性的序列组成的组；VH CDR3选自SEQ ID NO：32和33以及与SEQ ID NO：32和33具有90％相同性的序列组成的组；VL CDR1选自SEQ ID NO：34，37，40，43以及与SEQ ID NO：34，37，40，43具有90％相同性的序列组成的组；VL CDR2选自SEQ ID NO：35，38，41和44以及与SEQ ID NO：35，38，41和44具有90％相同性的序列组成的组；VL CDR3选自SEQ ID NO：36，39，42和45，以及与SEQ ID NO：36，39，42和45具有90％相同性的序列组成的组。
2.权利要求1的抗体，其中所述抗体能够诱导B10细胞的同型粘附。
3.权利要求2的抗体，其中所述抗体包含人IgG4抗体的Fc部分或人源化IgG4抗体的Fc部分。
4.权利要求1-3中任一项的抗体，其中所述抗体包含Fc区，所述Fc区经工程改造既不激活补体也不参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)。
5.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO：27，29和32的VH CDR和SEQ ID NO：40，41和42的VL CDR(HB22-103)。
6.权利要求1-4中任一项的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO：27，30和32的VH CDR和SEQ ID NO：37，38和39的VL CDR(HB22-106)。
7.权利要求1-4中任一项的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO：28，31和33的VH CDR和SEQ ID NO：34，35和36的VL CDR(HB22-107)。
8.权利要求1-4中任一项的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO：27，30和32的VH CDR和SEQ ID NO：43，44和45的VL CDR(HB22-115)。
9.权利要求1-4中任一项的抗体，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO：2，3，4和5以及与SEQ ID NO：2，3，4和5具有90％相同性的序列组成的组的VH，以及选自SEQ ID NO：15，16，19和20以及与SEQ ID NO：15，16，19和20具有90％相同性的序列组成的组的VL。
10.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述重链可变区(“VH”)包含三个互补决定区VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3和四个框架区VH FW1、VH FW2、VH FW3和VH FW4，顺序为VHFW1-VH CDR1-VH FW2-VH CDR2-VH FW3-VH CDR3-VH FW4；其中所述轻链可变区(“VL”)包含三个互补决定区VL CDR1，VL CDR2和VL CDR3以及四个框架区VL FW1，VL FW2，VL FW3和VLFW4，顺序VL FW1-VL CDR1-VL FW2-VL CDR2-VL FW3-VL CDR3-VL FW4。
11.一种治疗癌症或启动，增强或延长个体抗肿瘤反应的方法，该方法包括给予优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述优先消耗B10细胞的抗体和所述免疫检查点抑制剂在组合治疗方案中施用。
13.一种在有需要的个体中启动，增强或延长T细胞活化的方法，包括给予优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述优先消耗B10细胞的抗体和所述免疫检查点抑制剂在组合治疗方案中施用。
15.一种启动或增强或延长免疫检查点抑制剂的有效性，或使免疫检查点抑制剂的毒性或剂量减少的方法，包括在组合治疗方案中向个体施用包含优先消耗B10细胞的抗体的组合物与包含免疫检查点抑制剂的组合物。
16.优先消耗B10细胞的抗体在治疗其中T细胞免疫应答被遏制或抑制的疾病中的用途，以促进或增强T细胞活化或抗肿瘤应答。
17.优先消耗B10细胞的抗体用于促进或增强由免疫检查点抑制剂的治疗所诱导的T细胞活化或抗肿瘤反应的用途。
18.优先消耗B10细胞的抗体和免疫检查点抑制剂用于治疗癌症的用途。
19.一种治疗可通过刺激免疫应答而改善的疾病的方法，包括向有此需要的个体施用包含优先消耗B10细胞的抗体的组合物和进一步的包含免疫检查点抑制剂的组合物。
20.一种治疗受试者中的实体非淋巴组织肿瘤的方法，包括向所述受试者施用包含优先消耗B10细胞的抗体的组合物。
21.权利要求20的方法，还包括施用包含免疫检查点抑制剂的组合物。
22.权利要求11-19和21中任一项的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是选自下组的免疫检查点的抑制剂：CTLA4(细胞毒T-淋巴细胞相关蛋白4，CD152)，PD1(也称为PD-1；程序性死亡1受体)，PD-L1，PD-L2，LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)，OX40，A2AR(腺苷A2A受体)，B7-H3(CD276)，B7-H4(VTCN1)，BTLA(B和T淋巴细胞衰减子，CD272)，IDO(吲哚胺2,3-双加氧酶)，KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)，TIM3(T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)，VISTA(T细胞活化的V结构域Ig抑制剂)和IL-2R(白细胞介素-2受体)。
23.权利要求11-22中任一项的方法，其中所述优先消耗B10细胞的抗体并非通过补体或抗体依赖性细胞毒消耗B10细胞。
24.权利要求11-23中任一项的方法，其中所述抗体具有IgG4 Fc部分。
25.权利要求11-24中任一项的方法，其中所述抗体包括选自下组的抗体的CDR部分：MB22-10，MB22-103，MB22-106，MB22-107，MB22-115，利妥昔单抗和托西莫单抗。
26.权利要求11-23中任一项的方法，其中所述优先消耗B10细胞的抗体诱导B细胞的同型粘附。
27.权利要求11-26中任一项的方法，其中所述抗体是权利要求1-10的抗体中的任一种。
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