KR102362803B1 - 암 치료를 위한 항-ceacam1 및 항-pd 항체를 포함하는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 항-CEACAM1 항체를 포함하는 조성물, PD-1과 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제하거나 차단할 수 있는 항체를 포함하는 조성물, 및 암의 치료에서 이들의 조합된 사용 방법을 제공한다.

Description

암 치료를 위한 항-CEACAM1 및 항-PD 항체를 포함하는 조성물 {COMPOSITIONS COMPRISING ANTI-CEACAM1 AND ANTI-PD ANTIBODIES FOR CANCER THERAPY}
본 발명은 암 면역요법, 특히 항-CEACAM1 및 항-PD-1/PD-리간드 항체의 조합물 및 암 치료에서의 이들의 용도에 관한 것이다.
막관통 단백질 암배아성 항원-관련 세포 부착 분자 1[CEACAM1, 또한 담즙 당단백질(BGP), CD66a 및 C-CAM1으로 공지됨]은 면역글로불린 상과에 또한 속하는 암배아성 항원 계열(CEA)의 멤버이다. 인간 CEACAM1은 스위스프로트(SwissProt) 수탁번호 P13688로 지정되어 있다. CEACAM1은 자체 및, CD66e(CEACAM6) 및 CD66e(CEACAM5, CEA) 단백질을 포함하는 기타 공지된 CEACAM 단백질과 상호작용한다. 이는 상피 세포로부터 조혈 기원의 것들(예: 면역 세포)에 이르는 광범위한 세포 상에서 발현된다.
다수의 상이한 기능은 CEACAM1 단백질에 기인하여 왔다. CEACAM1 단백질은 흑색종 등의 다른 유형의 암 뿐만 아니라 결장, 전립선의 몇몇 암종에서 과발현되는 것으로 밝혀졌다. 추가의 데이터는 혈관신생 및 전이에서 CEACAM1의 중심적 관여를 뒷받침한다. CEACAM1은 또한 선천성 및 적응 면역 반응의 조절에 역할을 담당한다. 예를 들면, CEACAM1은 인간 장 상피 내에 함유된 활성화된 T-세포에 대한 억제 수용체인 것으로 밝혀졌다[참조: WO 99/52552 및 Morales et al. J. Immunol. 1999, 163, 1363-1370]. 추가의 보고서는 모노클로날 항체(mAb)와 가교-결합하는 T 세포 수용체 또는 네이세리아 임균 오파(Neisseria gonorrhea Opa) 단백질에 의한 CEACAM1 계합이 T 세포 활성화 및 증식을 억제하는 것을 나타냈다. CEACAM1 단백질에 대한 몇몇 모노클로날 항체, 예를 들면, 26H7, 5F4, TEC-11, 12-140-4, 4/3/17, COL-4, F36-54, 34B1, YG-C28F2, D14HD11, b18.7.7, D11-AD11, HEA81, B1.1, CLB-gran-10, F34-187, T84.1, B6.2, B1.13, YG-C94G7, 12-140-5, TET-2 및 scFv-DIATHIS1은 이미 공지되어 있다[참조: Watt et al., Blood, 2001, Vol. 98, pages 1469-1479]. 국제공개공보 제WO 2010/12557호는 인간 CEACAM1에 대한 마우스 모노클로날 항체를 기재한다. 국제공개공보 제WO 2013/054331호는 인간 CEACAM1 CM10에 대한 키메라 모노클로날 항체를 기재한다.
프로그램된 세포사 단백질 1(PD-1)은 면역 반응을 조절하는 신호를 매개하는 면역-수용체의 CD28/CTLA-4 계열에 속하는 유형 I 막관통 단백질이다. 인간 PD-1은 스위스프로트 수탁번호 Q15116로 지정되어 있다. CD28/CTLA-4 계열의 멤버는 T 세포 활성화를 상향-조절(CD28 및 ICOS)하거나 하향-조절(CTLA-4 및 PD-1)한다. PD-1은 활성화된 T 세포, B 세포, 골수성 세포 및 흉선세포의 서브세트 상에서 발현된다. PD-1 단백질에 대한 몇몇 모노클로날 항체, 예를 들면, MK-3475(인간화된 IgG4 mAb), AMP514, BMS-936558(완전 인간 IgG4 mAb), 및 CT-011로서 또한 공지된 피딜리주맙(인간화된 IgG1 mAb)은 이미 공지되어 있다[참조: Topalian et al., Curr. Opin. Immunol., 2012, Vol. 24(2), pages 207-212].
분화 274(CD274) 또는 B7 유사체 1(B7-H1)의 클러스터로서 또한 공지된 프로그램된 세포사-리간드 1(PD-L1)은 인간에서 CD274 유전자에 의해 코딩되는 단백질이다. PD-L1은 특정 사상, 예를 들면, 임신, 조직 동종이식편 및 간염 등의 기타 질환 상태 동안 면역계를 억제하는데 있어서 주요한 역할을 담당할 것으로 추측되는 40kDa 유형 1 막관통 단백질이다. 통상, 면역계는, 항원-특이적 CD8+ T 세포의 증식을 유발하는 림프절 또는 비장에서 일부 축적이 있는 외래 항원과 반응한다. PD-1/PD-L1 리간드 복합체의 형성은 림프절에서 이들 CD8+ T 세포의 증식을 감소시키는 억제 신호를 전달하고, 당해 PD-1에 대한 보충은 또한 유전자 Bcl-2의 보다 낮은 조절에 의해 추가로 매개되는 아폽토시스를 통해 림프절 중에 외래 항원 특이적 T 세포의 축적을 조절할 수 있다[참조: Chemnitz JM et al., 2004, Journal of Immunology, 173(2): 945-54]. PD-L1과, 활성화된 T 세포, B 세포 및 골수 세포 상에서 발견되는 이의 수용체와의 계합은 IL-2 생성 및 T 세포 증식의 TCR-매개된 활성화를 억제하는 신호를 전달한다. 프로그램된 세포사 1 리간드 2(또한 PD-L2, B7-DC로서 공지됨)은 인간에서 PDCD1LG2 유전자에 의해 코딩되는 단백질이다. PDCD1LG2는 또한 CD273으로 지정되어 있다(분화 273의 클러스터).
PD-1 및 이의 리간드, PD-L1 및 PD-L2는 T 세포 활성화, 내성 및 면역병리 사이의 균형을 조절하는 억제 신호를 전달한다. 외래 및 자가-항원에 대한 면역 반응은 병원체 및 종양을 소거하고 내성을 여전히 유지하기 위해 특정한 및 균형의 반응을 필요로 한다. 인간 PD-L1 및 PD-L2는 각각 스위스프로트 수탁번호 Q9NZQ7 및 Q9BQ51로서 지정되어 있다. T 세포 내성의 유도 및 유지는 PD-1을 필요로 하고, 비조혈 세포 상의 이의 리간드 PD-L1은 효과기 T 세포 반응을 제한하고 면역-매개된 조직 손상으로부터 조직을 보호할 수 있다. 또한, PD-1:PD-L 경로는 항균 또는 종양 면역성을 약화시키고 만성 감염 및 종양 생존을 촉진하기 위해 미생물 및 종양에 의해 찬탈되었다. PD-L1 단백질에 대한 몇몇 모노클로날 항체, 예를 들면, MEDI-4736, BMS-936559, MSB0010718C 및 MPDL3280A는 이미 공지되어 있다[참조: Lu et al., J. Oncol. Pharm. Pract., 2014]. PD-L2 단백질에 대한 다른 모노클로날 항체, 예를 들면, PCT 출원 공개번호 제WO/2010/027827호, 제WO/2010/036959호 및 제WO/2011/066342호에 기재된 것들은 이미 공지되어 있다. 국제공개공보 제WO/2014/059251호는 2종 이상의 CEACAM1, PD-1 및/또는 잠복 연관 펩티드(LAP)의 억제제를 투여함으로써 대상체에서 면역 반응을 증강시키고/시키거나 T 세포 내성을 감소시키는 조성물 및 방법에 관한 것이다.
암 면역요법은 암을 치료하기 위해 면역계를 사용하는 것이다. 면역요법에는 3개의 주요 그룹이 있다: 세포-기반 요법, 항체 요법 및 사이토킨 요법. 이들은 모두 암 세포가 종종 면역계에 의해 검출될 수 있는 이들의 표면 상에서 상이한 분자를 갖는다는 사실을 이용한다. 이들 분자는 암 항원으로 공지되어 있다. 면역요법은 이들 암 항원을 표적으로 사용함으로써 면역계가 종양 세포를 공격하도록 하기 위해 사용된다.
항체 요법은 광범위한 암을 위해 다수의 승인된 치료법으로 현재 가장 성공적인 형태의 면역요법이다. 항체는 세포의 표면 상에서 표적 항원에 결합하는 면역계에 의해 생성된 단백질이다. 정상 생리기능에서, 이들은 면역계에 의해 사용되어 병원체를 퇴치한다. 각각의 항체는 하나 또는 소수의 매우 유사한 단백질에 특이적이고, 암 항원에 결합하는 것들은 암의 치료에 사용된다. 암 항원에 결합하는 경우, 항체는 항체-의존성 세포-매개된 세포독성을 유도하고, 상보성 시스템을 활성화시키고, 이의 리간드와 상호작용하는 수용체를 예방하거나 화학요법 또는 방사선의 탑재를 전달할 수 있고, 이들 모두는 세포사를 유도할 수 있다. 미국 식품의약품국(FDA)에 의해 암의 치료를 위해 현재 승인된 항체가 있다: 리툭시맙(Rituximab)(1997), 트라스투주맙(Trastuzumab)(1998), 겜투주맙 오조가미신(Gemtuzumab ozogamicin)(2000), 알렘투주맙(Alemtuzumab)(2001), 이브리투모맙 티욱세탄(Ibritumomab tiuxetan)(2002), 토시투모맙(Tositumomab)(2003), 세툭시맙(Cetuximab)(2004), 베바시주맙(Bevacizumab)(2004), 파니투무맙(Panitumumab)(2006), 오파투무맙(Ofatumumab)(2009), 이필리무맙(Ipilimumab)(2011) 및 브렌툭시맙 베도틴(Brentuximab vedotin)(2011).
본래 항암 단독요법으로 승인되었지만, 몇몇 항체는 화학요법 등의 기타 항암 요법과 조합하여 사용하기 위해 추가로 승인되었다. 예를 들면, FDA는 만성 림프성 백혈병(CLL)을 갖는 이전에 치료되지 않은 및 이전에 치료된 환자 둘 다의 치료를 위해 플루다라빈 및 사이클로포스파미드와 조합하여 리툭시맙(Rituxan, Genentech, Inc.)을 승인했다. 최근에, FDA는 지속성, 재발성 또는 전이성 자궁경부암의 치료를 위해 파클리탁셀 및 시스플라틴 또는 토포테칸과 조합하여 베바시주맙(Avastin, Genentech, Inc.)을 승인했다.
암 진행의 명확한 또는 병행한 메커니즘을 표적화하는 항체의 다양성을 이용하여 개선된 병용 항체-기반 요법에 대한 충족되지 않은 필요성이 남아 있다.
본 발명은 암 진행의 명확한 또는 병행한 메커니즘을 표적화하는 복수의 항체를 사용하여 개선된 병용 항체-기반 요법을 제공한다. 본 발명은 항-CEACAM1 항체 및 이의 천연 리간드, PD-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 파괴하도록 지시된 항체의 조합물이 상이한 유형의 암에 대한 림프구 세포, 예를 들면, 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 및 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포의 세포독성을 현저히 및 상승작용적으로 상승시켰다는 놀라운 발견으로부터 유래한다. 현재, 동시 배양이 아닌, 이들 2종류의 항체와 림프구 세포의 단계적 예비-배양이 림프구 매개된 세포독성을 최대화하는 것을 최초로 개시하고 있다. 이러한 예상치 않은 발견은 유리하게는 상이한 항체가 유효성을 최대화하기 위해 암 환자에게 개별적으로 투여되는 개선된 임상 결과를 위해 이용할 수 있다. 또 다른 놀라운 발견은 항-CEACAM1 항체에 의한 CEACAM1의 차단이 암 세포 상에서 PD-L1 발현을 증가시킨다는 것이다. 추가로, 최초로, 항-CEACAM1 항체, 및 이의 천연 리간드, PL-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 파괴하도록 지시된 항체의 항체 조합물이 면역-경쟁 뮤린 모델에서 확립된 종양의 진행을 상승작용적으로 약화시키는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 본 발명은, 한 가지 측면에서, 별도의 투여에 의한 암의 치료에 사용하기 위한, 인간 암배아성 항원-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1)에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 적어도 하나의 인간 프로그램된 세포사 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
추가로, 본 발명은, 또 다른 측면에서, 별개의 투여에 의한 암의 치료에 사용하기 위한, 인간 암배아성 항원-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1)에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 프로그램된 세포사 단백질 1(PD-1) 및 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은, 또 다른 측면에서, 별개의 투여에 의한 암의 치료에 사용하기 위한, 인간 암배아성 항원-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1)에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 인간 프로그램된 세포사 단백질 1(PD-1) 및 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은, 여전히 또 다른 측면에서, 암을 갖는 환자의 치료 방법으로서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1, PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하여 상기 암을 치료하는 단계를 포함하는, 암을 갖는 환자의 치료 방법을 제공한다.
본 발명은, 또 다른 측면에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1, PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는, 키트를 제공한다.
본 발명은, 또 다른 측면에서, 암의 치료에 사용하기 위한, 상기 기재된 키트를 제공한다.
일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 약 10-8M의 친화성으로 인간 CEACAM1 단백질에 결합할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 약 5×10-7M의 친화성으로 인간 CEACAM3 및 인간 CEACAM5 단백질 중의 적어도 하나에 결합할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 CM-24, 26H7, 5F4, TEC-11, 12-140-4, 4/3/17, COL-4, F36-54, 34B1, YG-C28F2, D14HD11, b18.7.7, D11-AD11, HEA81, B1.1, CLB-gran-10, F34-187, T84.1, B6.2, B1.13, YG-C94G7, 12-140-5, scFv DIATHIS1, TET-2, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 CM-24 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 임의의 조합이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편은 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 CDR, 및 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편은 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 2개의 중쇄 CDR, 및 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편은 서열번호 19, 서열번호 20 및 서열번호 21로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열로부터 유래하는 적어도 5개의 연속 아미노산의 적어도 하나의 중쇄 CDR 서열, 및 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열로부터 유래하는 적어도 5개의 아미노산의 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6의 6개 CDR로 이루어진다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12의 6개 CDR로 이루어진다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18의 6개 CDR로 이루어진다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 19, 20, 21, 22, 23 및 24의 6개 CDR로 이루어진다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 1에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 2에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열번호 3에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열번호 4에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 5에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열번호 6에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3, 및 이의 유사체 및 유도체를 포함한다.
특정한 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 7에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열번호 8에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열번호 9에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열번호 14에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열번호 15에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 10에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열번호 11에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열번호 12에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 16에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열번호 17에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열번호 18에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 CDR 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 CDR 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열, 또는 상기 중쇄 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 26에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인 서열, 또는 상기 경쇄 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 26에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
i. 마우스 IgG2a, 마우스 IgG2b, 마우스 IgG3, 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 프레임워크 서열; 및
ii. 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR, 또는 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR, 및 상기 CDR 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 및 유도체를 포함하고, 여기서 상기 모노클로날 항체 또는 단편은 적어도 약 5×10-7M의 친화성으로 적어도 2개의 CEACAM 아형에 결합한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG1, 인간 IgG2 및 인간 IgG3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 인간 유래 불변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG1 아형의 불변 영역 아부류를 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR, 또는 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR, 및 상기 CDR 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 및 유도체를 포함하고, 여기서 모노클로날 항체는 적어도 약 10-8M의 친화성으로 CEACAM1에 결합한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 27에 기재된 중쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 28에 기재된 경쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 27에 기재된 중쇄 서열 및 서열번호 28에 기재된 경쇄 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 6개 CDR 서열 또는 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 6개 CDR 서열을 갖는 모노클로날 항체가 결합하는 CEACAM1 분자 상에서 동일한 에피토프에 결합할 수 있는 항원-결합 부분을 적어도 포함한다. 특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 32) 및 YPNASLLIQNVT(서열번호 33)을 갖는 인간 CEACAM1의 잔기 17-29 및 68-79 내의 에피토프와 반응성이다.
특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 29)의 적어도 4개의 아미노산을 포함하는 에피토프와 반응성이다. 특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 29) 및 YPNASLLIQNVT(서열번호 30) 내의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프와 반응성이다. 특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 29) 및 PNASLLI(서열번호 31) 내의 에피토프와 반응성이다.
특정 실시형태에서, 항원-결합 단편은 지시된 에피토프 또는 항원에 대해 상응하는 전장 항체 친화성의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90%를 보유한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 항원-결합 단편은 지시된 에피토프 또는 항원에 대해 상응하는 전장 항체 친화성의 적어도 50%를 보유한다. 특정 실시형태에서, 항원-결합 단편은 지시된 에피토프 또는 항원에 대해 상응하는 전장 항체 친화성의 적어도 90%를 보유한다.
특정 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체는 MK-3475, AMP514, BMS-936558, CT-011, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체는 MEDI-4736, BMS-936559, MSB0010718C, MPDL3280A, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 AMP-224이다.
일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 인간 항체는 단리된 인간 항체, 예를 들면, 인간 공여체로부터 단리된 인간 항체이다. 특정 실시형태에서, 인간 항체는 하이브리도마 세포주로부터 단리된 인간 항체이다. 특정 실시형태에서, 인간 항체는, 예를 들면, 재조합 DNA 기술에 의해 생산된 재조합 인간 항체를 지칭한다.
특정 실시형태에서, 상기 기재된 약제학적 조성물은 림프구 세포 또는 복수의 림프구 세포를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 세포는 CEACAM1, PD-1 또는 이들 둘 다를 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 CEACAM1 및 PD-1을 발현한다.
일부 실시형태에서, 림프구 세포는 종양-침윤-림프구(TIL) 세포, 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포, 사이토킨 유도된 킬러(CIK) 세포, T 세포, B 세포, NK 세포 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 및 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 또는 복수의 TIL 세포이다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포 또는 복수의 LAK 세포이다.
특정한 실시형태에서, 림프구 세포는 활성화된다. 일부 실시형태에서, 림프구 세포는 암 세포에 대해 세포독성이다.
일부 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1, PD-L1, PD-L2, 또는 이의 임의의 조합을 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1, PD-L1, 또는 이들 둘 다를 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1, PD-L2, 또는 이들 둘 다를 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 이러한 실시형태에서, CEACAM1 및 PD-L1 및 PD-L2를 발현한다.
일부 실시형태에서, 암은 흑색종, 림프종, 폐, 갑상선, 유방, 결장, 전립선, 간장, 방광, 신장, 자궁경부, 췌장, 백혈병, 골수, 난소, 자궁, 육종, 담관, 및 자궁내막 세포 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암은 흑색종 및 림프종 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시형태에서, 암은 림프종이다.
일부 실시형태에서, 인간 PD-1, PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체는 인간 PD-1과 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
상기 방법의 일부 실시형태에서, 2개 이상의 약제학적 조성물의 투여는 동시에 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 2개 이상의 약제학적 조성물의 투여는 순차로 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 전에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 동시에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 후에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 2개 이상의 약제학적 조성물의 투여는 동시에 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 2개 이상의 약제학적 조성물의 투여는 순차로 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 전에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 동시에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 후에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 전에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 동시에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 후에 투여된다.
일부 실시형태에서, 상기 기재된 방법은 림프구 세포를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 림프구 세포를 포함하는 약제학적 조성물의 투여는 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 적어도 하나와 동시에 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 2개 이상의 약제학적 조성물의 투여는 순차로 수행된다.
일부 실시형태에서, 림프구 세포는 투여 전에 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 예비-배양된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 투여 전에 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 예비-배양된다. 다른 이러한 특정 실시형태에서, 투여 전에, 림프구 세포는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 예비-배양된 다음, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 배양된다.
일부 실시형태에서, 항-CEACAM1, 항-PD-1, 항-PD-L1 및 항-PD-L2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 2개의 상이한 항체는 적어도 2개의 상이한 약제학적 조성물에 포함된다. 일부 실시형태에서, 항-CEACAM1, 항-PD-1, 항-PD-L1 및 항-PD-L2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 항체 및 적어도 하나의 림프구 세포는 동일한 약제학적 조성물에 포함된다.
일부 실시형태에서, 상기 키트는 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 키트는 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 키트는 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 각각의 약제학적 조성물은 키트 내의 별개의 용기에 함유된다.
특정 실시형태에서, 상기 키트는 림프구 세포를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 이러한 특정 실시형태에서, 상기 키트는 림프구 세포 및 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 상기 키트는 림프구 세포 및 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 이러한 특정 실시형태에서, 상기 키트는 림프구 세포 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 키트는 키트의 사용 설명서를 추가로 포함한다.
도 1A-B. 인간 흑색종 세포는 IFN -γ 활성화시 CEACAM1 및 PD-L1을 발현한다. MALME 3M 세포를 24시간 동안 IFN-γ와 함께 배양하고, PE-접합된 항-PD-L1 항체(텅빈 히스토그램) 또는 이소형 대조군 매칭된 항체(충전 히스토그램)(A), 또는 인간 CEACAM1에 대한 PE-접합된 모노클로날 항체(텅빈 히스토그램) 또는 이소형 대조군 매칭된 항체(충전 히스토그램)(B)로 FACS에 의해 분석했다.
도 2A-B. 인간 TIL 세포는 PD-1 및 CEACAM1을 발현한다. TIL 세포를 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체로 염색하고, FACS에 의해 분석했다. 매칭 이소형 대조군(충전 히스토그램)과 비교하여 PD-1(텅빈 히스토그램)의 발현이 제시되거나(A), 인간 CEACAM1에 대한 PE-접합된 모노클로날 항체(텅빈 히스토그램) 또는 이소형 대조군 매칭된 항체(충전 히스토그램)(B)가 제시된다.
도 3. 인간 흑색종 세포에 대한 인간 TIL 세포의 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과. 인간 흑색종 세포를 IFN-γ의 존재하에 성장시켜 PD-1 발현을 유도했다. TIL 세포를 다양한 농도의 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(흑색 점선, 구형 마커), 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(회색 실선, 직사각형 마커) 또는 양 항체의 조합(흑색 실선, 삼각형 마커)과 함께 배양했다. IFN-γ 처리된 흑색종 세포를 밤새 배양 동안 첨가했다. 결과는 처리당 삼중 웰로부터의 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)의 평균을 나타낸다. 인간 CEACAM1 단독에 대한 모노클로날 항체와 비교한 * P<0.05 페어링 T-시험.
도 4A-B. 항-PD-1 항체를 항-CEACAM1 항체의 첨가 전에 첨가하는 경우, 인간 흑색종 세포에 대한 인간 TIL 세포의 그랜자임 B 수준 및 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과. 인간 흑색종 세포를 IFN-γ의 존재하에 성장시켜 PD-L1 발현을 유도했다. 인간 TIL 세포를 배지 단독(흑색), 비-특이적 IgG 항체(백색), 다양한 농도의 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(수직선), 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(수평선) 또는 이들 두 항체의 조합(점)과 함께 배양했다.
인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체는 37℃에서 30분 동안 처음 첨가하고, 이어서 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 첨가했다. IFN-γ 처리된 MALME 3M 세포를 밤새 배양 동안 첨가했다. (A) 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)의 평균을 나타낸다. a-PD-1 단독과 비교한 * P≤0.05 페어링 T-시험. (B) 결과는 처리당 삼중 웰로부터 상업적 그랜자임 B ELISA 키트에 의해 측정된 그랜자임 B 수준±SE을 나타낸다.
도 5A-B. 항-PD-L1 항체를 항-CEACAM1 항체의 첨가 전에 첨가하는 경우, 인간 흑색종 세포에 대한 인간 TIL 세포의 그랜자임 B 수준 및 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-L1 항체의 상승작용 효과. 인간 흑색종 세포를 IFN-γ의 존재하에 성장시켜 PD-L1 발현을 유도했다. 인간 TIL 세포를 배지 단독(흑색), 비특이적 IgG 항체(백색), 다양한 농도의 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체(수평선), 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(수직선) 또는 두 항체의 조합(점)과 함께 배양했다. 항-PD-L1 항체는 먼저 30분 동안 37℃에서 첨가하고, 이어서 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 첨가했다. IFN-γ 처리된 MALME 3M 세포를 세포독성 평가 전에 밤새 배양 동안 첨가했다. (A) 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)를 나타낸다. (B) 결과는 처리당 삼중 웰로부터 상업적 그랜자임 B ELISA 키트에 의해 측정된 그랜자임 B 수준±SE을 나타낸다. a-PD-L1 단독과 비교한 * P≤0.05 페어링 T-시험.
도 6. 항-PD-1 항체를 항-CEACAM1 항체의 첨가 전에 첨가하는 경우, 인간 흑색종 세포에 대한 인간 LAK 세포의 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과. 인간 흑색종 세포를 IFN-γ의 존재하에 성장시켜 PD-L1 발현을 유도했다. IL-2를 사용하여 건강한 인간 공여체로부터 PBMC의 활성화에 의해 생성된 인간 LAK 세포를 배지 단독(흑색), 비특이적 IgG 항체(백색), 다양한 농도의 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(수직선), 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(수평선) 또는 두 항체의 조합(점)과 함께 배양했다. 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체를 37℃에서 30분 동안 먼저 첨가하고, 이어서 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 첨가했다. IFN-γ 처리된 SKMEL28 세포를 24시간 배양 동안 첨가했다. 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)를 나타낸다. a-PD-1 단독과 비교한 * P≤0.05 페어링 T-시험.
도 7A-B. 항- CEACAM1 항체를 사용한 치료는 표적 암 세포상에서 PD-L1 발현을 증가시킨다. NK 세포(NK92MI)를 인간 CEACAM1(CM-24)(10㎍/ml)에 대한 모노클로날 항체의 존재 또는 부재하에 배양하고, 이어서 인간 흑색종 세포(SKMEL28)를 첨가했다. 세포를 24, 48 및 72시간 동안 배양하고, PD-L1 수준을 각각의 시점에서 FACS 분석에 의해 측정했다. A. 상이한 시점에서 지시된 처리에 대해 적절한 이소형 대조군과 비교한 항-PD-L1의 평균 비율. B. 48시간 후 PD-L1 발현 수준의 대표적 FACS 분석.
도 8. 면역-경쟁 마우스에서 종양 진행에 미치는 항- CEACAM1 및 항-PD-1의 상승작용 효과. 뮤린 림프종 세포를 BALB/C 마우스의 복부에 피하 이식했다(1일차). 10일, 15일 및 20일차에, 마우스에게 PBS(흑색 점선, 텅빈 원형), 항-마우스 CEACAM1 항체(회색 실선, 회색 사각형), 항-뮤린 PD-1 항체(회색 실선, 회색 삼각형) 또는 두 항체의 조합(흑색 실선, 흑색 구형)를 정맥내 투여했다. 실험은 22일차에 종료했다.
도 9A-D. 개개 종양 진행 곡선. PBS(A), 항-마우스 CEACAM1 항체(B), 항-뮤린 PD-1 항체(C) 또는 두 항체의 조합(D)으로 처리한 마우스에 대한 개개 종양 진행 곡선.
본 발명은 항-CEACAM1 항체, 및 이의 천연 리간드, PD-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 파괴하도록 지시된 항체의 조합물이 상이한 유형의 암에 대해 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 및 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포 등의 림프구 세포의 세포독성을 현저히 상승시켰다는 놀라운 발견으로부터 유래한다. 추가로, 동시 배양이 아닌, 이들 항체와 림프구 세포의 단계적 예비-배양이 림프구 매개된 세포독성을 최대화하는 것을 놀랍게도 밝혀냈다. 또한, 암 세포에 대한 항-CEACAM1 항체의 결합이 PD-L1 발현을 증가시키기 때문에, 암 세포 상에서 CEACAM1 및 PD-리간드의 발현이 상호관련되는 것을 밝혀냈다. 추가로, 이러한 항체 조합물은 면역-경쟁 뮤린 모델에서 확립된 종양의 진행을 현저히 약화시켜 가령 마우스의 천연 림프구 환경을 이용하는 것으로 밝혀졌다.
어떠한 이론 또는 메커니즘에 구속되는 것은 아니지만, 본 발명의 발견에 따르면, CEACAM1 및/또는 PD-1을 발현하는 림프구는, 예를 들면, 암 세포에 의해 나타나는, 이들의 상응하는 리간드, CEACAM1 및/또는 PD-L1 및/또는 PD-L2와의 상호작용에 의해 실질적으로 억제될 수 있다. 한편, 이들 억제 상호작용이 차단되는 경우, 이들 림프구는 활성화시에 이들 암 세포에 대해 세포독성으로 될 수 있고, 악성 세포의 사멸을 유도할 수 있다.
따라서, 본 발명은 2개의 주요 면역-억제 동형 상호작용, CEACAM1림프구/CEACAM1암 세포,및 PD-1림프구/PD-리간드암 세포를 방해하고 암으로 진단된 환자의 체내에서 항-암 세포독성 세포의 수준을 증가시키도록 지시된 약제학적 조성물을 제공한다. 어떠한 이론 또는 메커니즘에 한정되는 것은 아니지만, 본 발명의 조성물은 "2-펀치" 조합을 생성하는 것으로 가정되고, 여기서 암 환자 내의 항-암 세포독성 림프구의 수준은 상승되고 이들의 세포독성은 림프구 자체, 암 세포에 의해 제시된 CEACAM1/PD-L1/PD-L2 분자 또는 이들 둘 다에 결합된 항-CEACAM1 항체 및/또는 항-PD-1/PD-L1/PD-L2 항체와의 보호적 상호작용에 의해 유지된다.
따라서, 본 발명은, 한 가지 측면에서, 별도의 투여에 의해 암의 치료에 사용하기 위한, 인간 암배아성 항원-관련된 세포 부착 분자 1(CEACAM1)에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 프로그램된 세포사 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로, 또 다른 측면에서, 별도의 투여에 의해 암의 치료에 사용하기 위한, 인간-암배아성 항원-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1)에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 프로그램된 세포사 단백질 1(PD-1) 및 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로, 또 다른 측면에서, 별도의 투여에 의해 암의 치료에 사용하기 위한, 인간-암배아성 항원-결합 세포 부착 분자 1(CEACAM1)에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 인간 프로그램된 세포사 단백질(PD-1) 및 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명은 추가로, 여전히 또 다른 측면에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1, PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 암을 갖는 환자에게 투여하여 암을 치료하는 것을 포함하는, 암을 갖는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
더욱이, 본 발명은, 또 다른 측면에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1, PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은, 또 다른 측면에서, 암의 치료에 사용하기 위한, 상기 기재된 키트를 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "별도의 투여"는 별개의 약제학적 조성물에 포함되는 항체와 같은 상이한 치료제를 지칭한다. 특정한 실시형태에서, 상이한 치료제 또는 상이한 약제학적 조성물은 암 환자에게 동시에 또는 순차로 투여된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 예를 들면, 문구 "별도의 투여에 의해 암의 치료에 사용하기 위한, 인간-CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체"란, 항-CEACAM1 항체가 항-PD-1 항체를 포함하는 조성물과 상이한 조성물에 포함되는 것을 의미한다.
용어 "CEACAM1"은 CEACAM1 유전자의 단백질 생성물, 예를 들면, NP_001020083.1, NP_001703.2를 지칭하기 위해 사용된다. 인간에 있어서, 상이한 CEACAM1 스플라이스 변이체가 지금까지 검출되었다. 개개 CEACAM1 이소형은 세포외 면역글로불린-유사 도메인의 수(예를 들면, 4개의 세포외 면역글로불린-유사 도메인을 갖는 CEACAM1은 CEACAM1-4로 공지되어 있다), 이들의 세포질 테일의 막 앵커 및/또는 길이(예를 들면, 긴 세포질 테일을 갖는 CEACAM1-4는 CEACAM1-4L로서 공지되어 있고, 짧은 세포질 테일을 갖는 CEACAM1-4는 CEACAM1-4S로서 공지되어 있다)와 관련하여 상이하다. CEACAM1의 N-말단 도메인은 신호 펩티드의 이후에 개시되고, 이의 구조는 IgV-형으로 간주된다. 예를 들면, CEACAM1 주석 P13688에 있어서, N-말단 IgV-형 도메인은 아미노산 35 내지 142의 108개 아미노산으로 구성되어 있다. 이 도메인은 동종친화성 결합 활성에 관여하는 것으로 동정되었다[참조: Watt et al., 2001, Blood. 98, 1469-79]. 이들 스플라이스 변이체를 포함하는 모든 변이체는 용어 "CEACAM1"에 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "약제학적 조성물"은 적어도 하나의 생물학적 활성 성분을 포함하는 조성물을 지칭한다. 항체, 이의 항원-결합 단편 및 림프구 세포는 생물학적 활성 성분의 비제한적 예이다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체(전장 또는 무손상 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다가 항체, 다중특이적 항체(예: 이중특이적 항체), 면역-조절제, 및 완전한 항체의 목적하는 생물학적 활성을 유지 및 나타내기에 충분한 크기의 항체 단편을 포함한다.
상호교환적으로 사용되는 용어 "면역-조절제" 또는 "면역-조절 단백질" 또는 "항체 단편"은 특이적 항원에 결합하여 복합체를 형성함으로써 항체와 같이 작용하는 합성 또는 유전자 조작된 단백질을 포함한다. 예를 들면, 항체 단편은 가변 영역으로 이루어진 단리된 단편, 예를 들면, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 및 재조합 단일쇄 폴리펩티드 분자로 이루어진 "Fv" 단편("scFv 단백질")(여기서, 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 펩티드 링커에 의해 연결되어 있다)을 포함한다. 상기 단편은 다가 및/또는 다중-특이적 결합 형태를 제공하기 위해 다양한 방식으로 작제될 수 있다. 본 발명에 따르는 항체 또는 항체들은 무손상 항체, 예를 들면, 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체(mAbs), 또는 이의 단백질분해 단편, 예를 들면, Fc, Fab 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. 추가로, 키메라 항체; 인간 및 인간화된 항체; 재조합 및 조작된 항체 및 이의 단편이 본 발명의 범위 내에 포함된다.
"인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체", "CEACAM1을 인식하는 항체", "CEACAM1에 대응하는 항체" 또는 "CEACAM1에 대한 항체"는 충분한 친화성 및 특이성으로 CEACAM1 단백질에 결합하는 항체이다. 전형적으로, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 약 10-8 또는 10-9M의 최소 친화성으로 CEACAM1에 결합할 수 있다. 모노클로날 항-CEACAM1 항체의 일부는 약 5×10-7M의 최소 친화성으로 CEACAM3, 5 및/또는 8에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 림프구에 의해 제시된 CEACAM1과 암 세포에 의해 제시된 CEACAM1 사이의 상호작용을 예방, 간섭 또는 해리할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "중화 항체"는, 명세서에 따라, 생체내 또는 시험관내 검정에 의해 측정된, 수용체를 통한 활성 또는 신호전달을 감소 또는 억제(차단)할 수 있는 특이적 수용체 또는 리간드 표적에 대한 항원-결합 부위를 갖는 분자를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균일한 항체의 모집단으로부터 수득한 항체를 지칭하고, 예를 들면, 모집단을 구성하는 개개 항체는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원에 대해 지시되어 있다. 추가로, 상이한 결정기(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 통상 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상에서 단일 결정기에 대해 지시되어 있다. 변형어 "모노클로날"은 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 모노클로날 Abs는 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 수득할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler et al., Nature 1975, 256, 495]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조할 수 있거나, 재조합 DNA 방법[참조: 미국 특허 제4,816,567호]에 의해 제조할 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한, 예를 들면, 문헌[참조: Clackson et al., Nature 1991, 352, 624-628 or Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "복수"는 지정된 대상체의 2개 이상을 지칭한다.
mAbs는 IgG, IgM, IgE, IgA를 포함하는 임의의 면역글로불린 부류의 것일 수 있다. mAb를 생산하는 하이브리도마는 시험관내 또는 생체내에서 배양할 수 있다. 높은 역가의 mAb는, 개개 하이브리도마로부터의 세포를 프리스틴-프라임 BALB/c 마우스 내로 복강내 주사하여 고농도의 목적하는 mAb를 함유하는 복수액을 생성하는 생체내 생성으로 수득될 수 있다. 이소형 IgM 또는 IgG의 모노클로날 Ab는 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 컬럼 크로마토그래피 방법을 사용하여 이러한 복수액으로부터 또는 배양 상청액으로부터 정제할 수 있다.
본 발명에 따르는 용어 "항원 결정기" 또는 "에피토프"는 특정 항체와 특이적으로 반응하는 항원 분자의 영역을 지칭한다. "항원"은 항체 형성을 유발할 수 있고 항체에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 부분이다. 항원은 하나 또는 복수의 에피토프를 가질 수 있다. 본 발명에 따르는 항원은 CEACAM1 단백질 또는 이의 단편이다.
항체 또는 면역글로불린은 디설파이드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하고, 각각의 경쇄는 "Y"자 형상으로 디설파이드 결합에 의해 각각의 중쇄에 연결된다. 항체의 단백질분해 소화는 Fv(단편 가변) 및 Fc(단편 결정성) 도메인을 생성한다. 항원 결합 도메인, Fab는 폴리펩티드 서열이 상이한 영역을 포함한다. 용어 F(ab')2는 디설파이드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 Fab' 암을 나타낸다. 항체의 중심 축은 Fc 단편으로 지칭된다. 각각의 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH), 이어서 다수의 불변 도메인(CH)를 갖는다. 각각의 경쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VL) 및 다른 말단에 불변 도메인(CL)을 갖고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 함께 정렬되고, 경쇄 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 함께 정렬된다. 경쇄 및 중쇄의 각 쌍의 가변 도메인은 항원-결합 부위를 형성한다. 경쇄 및 중쇄 상의 도메인은 동일한 일반 구조를 갖고, 각각의 도메인은 상보성 결정 영역(CDR1-3)으로 공지된 3개의 초가변 도메인에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역을 포함하며, 이의 서열은 비교적 보존되어 있다. 이들 도메인은 항원-결합 부위의 특이성 및 친화성에 기여한다. 중쇄의 이소형(감마, 알파, 델타, 엡실론 또는 뮤)는 면역글로불린 부류(각각 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM)를 결정한다. 경쇄는 모든 항체 부류에서 발견되는 2개의 이소형(카파, κ 또는 람다, λ) 중의 어느 하나이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체, "인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체", "항-PD-L1 항체" 및 "항-PD-L2 항체"는 완전한 면역글로불린 분자, 예를 들면, IgM, IgD, IgE, IgA 또는 IgG, 이러한 면역글로불린 분자의 항원-결합-도메인, 예를 들면, Fab-단편, Fab'-단편, F(ab)2-단편, 키메라 F(ab)2 또는 키메라 Fab' 단편, 키메라 Fab-단편 또는 단리된 VH- 또는 CDR-영역, 및 면역글로불린의 공지된 이소형 및 변형태, 예를 들면, 이들의 지시된 표적에 결합할 수 있는 단일쇄 항체 또는 단일쇄 Fv 단편(scAB/scFv) 또는 이중특이적 항체 작제물을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "항-인간-CEACAM1 항체", "항-인간-PD-1 항체", "인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체" 및 "인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체"는 이들의 지시된 표적에 결합할 수 있는 항체를 지칭하고, 여기서 이들 표적은 인간 기원의 것이다.
본원에서 사용교환적으로 사용되는 용어 "항체의 항원-결합 단편" 및 "항원-결합 단편"은 개시된 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 예를 들면, 항원-결합 단편은, 이로써 한정되지 않지만, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv 단편, dAb 단편, CDR-함유 단편 또는 단리된 CDR을 포함한다. 따라서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 화학적 및 효소적 절단에 의해, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체로부터 직접 수득되지 않고서, 예를 들면, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체의 Fab 단편, 또는 이러한 Fab 단편의 서열 및 구조를 모방하는 임의의 분자일 수 있다.
"항체 단편"은, 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 부위를 포함하고 따라서 항원에 결합하는 능력을 보유하는 무손상 항체의 일부만을 포함한다. 본 정의에 의해 포함되는 항체 단편의 예는 (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편; (ii) CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인 Fab' 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (iv) VH 및 CH1 도메인, 및 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편; (v) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편[참조: Ward et al., Nature 1989, 341, 544-546]; (vii) 단리된 CDR 영역; (viii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 이가 단편; (ix) 단일쇄 항체 분자(예: 단일쇄 Fv; scFv)[참조: Bird et al., Science 1988, 242, 423-426; and Huston et al., PNAS (USA) 1988, 85,5879-5883]; (x) 동일한 폴리펩티드 쇄에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)를 포함하는, 2개의 항원 결합 부위를 갖는 "디아바디"[참조: EP 404,097; WO 93/11161; 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 6444-6448]; (xi) 상보성 경쇄 폴리펩티드와 함께, 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 탠덤 Fd 세그먼트의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 "선형 항체"[참조: Zapata et al. Protein Eng., 1995, 8, 1057-1062; and U.S. Pat. No. 5,641,870]를 포함한다.
용어 "단일쇄 가변 단편(scFv)"이란, 짧은 (통상 세린, 글리신) 링커와 함께 연결된, 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 융합을 의미한다. 단일쇄 항체는, 항원 결합 능력을 갖고 면역글로불린 경쇄 및 중쇄(연결된 VH-VL 또는 단일쇄 Fv(scFv))의 가변 영역에 상보성 또는 유사성인 아미노산 서열을 포함하는 단일쇄 복합 폴리펩티드일 수 있다. VH 및 VL 둘 다는 천연 모노클로날 항체 서열을 복사할 수 있거나, 상기 쇄 둘 다는 전체 내용이 본원에서 참조로서 도입되는 미국 특허 제5,091,513호에 기재된 유형의 CDR-FR 작제물을 포함할 수 있다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역과 유사한 별개의 폴리펩티드는 폴리펩티드 링커에 의해 함께 유지된다. 이러한 단일쇄 항체, 특히 VH 및 VL 쇄의 폴리펩티드 구조를 코딩하는 DNA가 공지되어 있는 단일쇄 항체의 생산 방법은, 예를 들면, 각각의 전체 내용이 본원에서 참조로서 도입되는 미국 특허 제4,946,778호, 제5,091,513호 및 제5,096,815호에 기재된 방법에 따라 달성될 수 있다.
단일쇄 항체는, 항원 결합 능력을 갖고 면역글로불린 경쇄 및 중쇄, 즉 연결된 VH-VL 또는 단일쇄 Fv(scFv)의 가변 영역에 상동성 또는 유사성인 아미노산 서열을 포함하는 단일쇄 복합 폴리펩티드일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체의 항원-결합 부분을 갖는 분자"는 임의의 동물 세포주 또는 미생물에 의해 생성된 임의의 이소형의 무손상 면역글로불린 분자 뿐만 아니라, 이로써 한정되지 않지만, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 이의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분, Fab 미니-항체[참조: 국제공개공보 제WO 93/15210호, 제WO 96/13583호, 제WO 96/37621호, 이의 전체 내용은 본원에서 참조로서 도입된다], 이량체성 이중특이적 미니-항체[참조: Muller et al., 1998] 및 이러한 반응성 분획을 도입한 키메라 또는 단일쇄 항체, 및 이러한 항체 반응성 분획이 물리적으로 삽입될 수 있는 임의의 기타 형태의 분자 또는 세포, 예를 들면, 키메라 T-세포 수용체 또는 이러한 수용체를 갖는 T-세포, 또는 이러한 반응성 분획을 함유하는 분자의 부분에 의해 치료 잔기를 전달하도록 개발된 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 분자는, 이로서 한정되지 않지만, 효소적 절단, 펩티드 합성 또는 재조합 기술을 포함하는 임의의 공지된 기술에 의해 제공될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항원"은 항체 형성을 유도할 수 있고/있거나 항체에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 부분을 지칭한다. 항원은 하나 또는 복수의 에피토프를 가질 수 있다. 예를 들면, 단백질 CEACAM1, PD-1, PD-L1 및/또는 PD-L2는 각각 본 발명에 의한 항원으로 간주된다. 바람직한 실시형태에서, 항원은 인간 항원이다.
본원에서 사용되는 용어 "PD-1 및 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있는 항체"는, 임의로 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 PD-L2와 화학적으로 및/또는 물리적으로 상호작용함으로써, 예를 들면, 림프구 세포에 의해 제시된 PD-1 분자 및, 예를 들면, 암 세포에 의해 제시된 PD-L1 및/또는 PD-L2 분자 사이의 상호작용을 간섭, 억제, 감소, 제거 또는 예방하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "암의 치료"는 항체 및/또는 림프구 세포 등의 치료학적 유효량의 제제를 암으로 진단된 환자에게 투여하여 환자에서 악성 세포의 추가 성장을 억제하고, 환자에서 악성 세포의 확산을 억제하고/하거나 환자에서 악성 세포의 사멸을 유발하는 것을 지칭한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 암의 치료는, 종양 진행을 약화시키고, 환자에서 악성 세포의 확산을 억제하고, 환자에서 악성 세포의 사멸을 유발하는 것 및 이의 임의의 조합을 의미한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 암의 치료는 종양 진행을 약화시키고 환자에서 악성 세포의 사멸을 유발하는 것 또는 이들 둘 다를 의미한다.
용어 "치료학적 유효량"은 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 약물의 치료학적 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키고; 주변 기관으로 암 세포 침윤을 억제(즉, 어느 정도까지 지연 및 바람직하게는 중단)시키고; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도까지 지연 및 바람직하게는 중단)시키고; 종양 성장을 어느 정도까지 억제시키고/시키거나 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 완화시킬 수 있다. 약물이 성장을 방지 및/또는 기존의 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 이는 세포억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료를 위해, 생체내에서의 유효성은, 예를 들면, 생존 기간, 질환 진행까지의 시간(TTP), 반응 속도(RR), 반응 기간 및/또는 생활의 질을 평가함으로써 측정할 수 있다.
용어 "암" 및 "암성"은 조절되지 않은 세포 성장을 통상 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 암의 예는, 이로써 한정되지 않지만, 암종, 림프종, 아세포종, 육종 및 백혈병을 포함한다. 이러한 암의 보다 특정 예는 흑색종, 폐, 갑상선, 유방, 결장, 전립선, 간장, 방광, 신장, 자궁경부, 췌장, 백혈병, 림프종, 골수, 난소, 자궁, 육종, 담관 또는 자궁내막 암을 포함한다.
용어 "항-신생물 조성물"은 종양 성장 또는 기능을 억제 또는 방지할 수 있고/있거나 종양 세포의 파괴를 유발할 수 있는 적어도 하나의 치료제를 포함하는 암의 치료에 유용한 조성물을 지칭한다. 암을 치료하기 위한 항-신생물 조성물에 적합한 치료제는, 이로써 한정되지 않지만, 화학치료제, 방사활성 동위원소, 독소, 사이토킨, 예를 들면, 인터페론, 및 사이토킨, 사이토킨 수용체 또는 종양 세포와 연관된 항원을 표적화하는 길항제를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "키트"는 시약 및 다른 물질의 조합을 지칭한다. 키트는 항체, 항체 혼합물, 완충제, 희석제 및 기타 수용액 등의 시약, 및/또는 하나 이상의 저장 바이알 또는 기타 용기를 포함할 수 있는 것으로 의도된다. 용어 "키트"는 시약 및/또는 기타 물질의 특정 조합으로 제한되는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명은 또한 2개의 주요 면역-억제 상호작용: CEACAM1림프구/CEACAM1암 세포 및 PD-1림프구/PD-리간드암 세포를 동시에 방해하도록 지시된 약제학적 조성물을 제공한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
한 가지 측면에서, 본 발명은 항-인간-CEACAM1 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 항-인간-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-인간-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 항-인간-PD-L2 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 모노클로날 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
문구 "약제학적 조성물이 항체 A 및 항체 B를 포함한다"는 적어도 2개의 별개의 약제학적 조성물을 지칭하고, 각각의 하나는 다른 약제학적 조성물에 포함된 항체와 상이한 적어도 하나의 항체를 포함한다. 문구 "약제학적 조성물이 포함한다"는 적어도 2개의 상이한 항체를 포함하는 단일 약제학적 조성물을 지칭한다.
CEACAM1 단백질에 대한 다수의 모노클로날 항체가 이미 공지되어 있고, 이들 모두는 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용하기에 적절한 것으로 간주된다. 그럼에도 불구하고, 일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 CM-24, 26H7, 5F4, TEC-11, 12-140-4, 4/3/17, COL-4, F36-54, 34B1, YG-C28F2, D14HD11, b18.7.7, D11-AD11, HEA81, B1.1, CLB-gran-10, F34-187, T84.1, B6.2, B1.13, YG-C94G7, 12-140-5, scFv DIATHIS1 및 TET-2, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 CM-24, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
CM-24의 CDR 세그먼트는 2개의 상이한 알고리즘 방법을 사용하여 동정되었다:
1. IMGT 알고리즘[참조: Lefranc et al., 1999, Nucleic Acids Research, 27, 209-212];
2. KABAT 알고리즘[참조: Wu T.T. and Kabat E.A., 1970, J. Exp. Med. 132, 211-250].
표 1은 두 방법을 사용하여 동정된 서열의 최소 컨센서스 서열 및 조합 서열 뿐만 아니라 2개 방법을 사용하여 결정된 CDR 서열을 요약한 것이다.
CDR 서열
VH1 VH2 VH3 VL1 VL2 VL3
컨센서스 서열 X1NNLX2* (서열번호 1) INPGSGDT (서열번호 2) GDYYGGFAVDY (서열번호 3) QDIGNY (서열번호 4) YTSR (서열번호 5) QQGKSLP (서열번호 6)
KABAT NNLIE (서열번호 7) VINPGSGDTNYNEKFKG (서열번호 8) GDYYGGFAVDY (서열번호 9) RTSQDIGNYLN (서열번호 10) YTSRLHS (서열번호 11) QQGKSLP (서열번호 12)
IMGT GYAFTNNL (서열번호 13) INPGSGDT (서열번호 14) ARGDYYGGFAVDY (서열번호 15) QDIGNY (서열번호 16) YTSR (서열번호 17) QQGKSLPRT (서열번호 18)
조합 서열 GYAFTNNLIE (서열번호 19) VINPGSGDTNYNEKFKG (서열번호 20) ARGDYYGGFAVDY (서열번호 21) RTSQDIGNYLN (서열번호 22) YTSRLHS (서열번호 23) QQGKSLPRT (서열번호 24)
* 여기서, X1는 부재하거나 Thr(T)이고, X2는 부재하거나 Ile(I)이다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편은 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 CDR, 및 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편은 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 2개의 중쇄 CDR, 및 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편은 서열번호 19, 서열번호 20 및 서열번호 21로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열로부터 유래하는 적어도 5개의 연속 아미노산의 적어도 하나의 중쇄 CDR 서열, 및 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열로부터 유래하는 적어도 5개의 아미노산의 적어도 하나의 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6의 6개 CDR로 이루어진다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12의 6개 CDR로 이루어진다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18의 6개 CDR로 이루어진다. 일부 실시형태에서, CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편의 결합 부위는 서열번호 19, 20, 21, 22, 23 및 24의 6개 CDR로 이루어진다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 1에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 2에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열번호 3에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열번호 4에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 5에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열번호 6에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 및 이의 유사체 및 유도체를 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 7에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열번호 8에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열번호 9에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열번호 14에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열번호 15에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 10에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열번호 11에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열번호 12에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 16에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열번호 17에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열번호 18에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 CDR 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 CDR 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열, 또는 상기 중쇄 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 26에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인 서열, 또는 상기 경쇄 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 25에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 26에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
i. 마우스 IgG2a, 마우스 IgG2b, 마우스 IgG3, 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 프레임워크 서열 및
ii. 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR, 또는 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR 및 상기 CDR 서열과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 및 유도체를 포함하고, 여기서 모노클로날 항체 또는 단편은 적어도 약 5×10-7M의 친화성으로 적어도 2개의 CEACAM 아형에 결합한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG1, 인간 IgG2 및 인간 IgG3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 인간 유래된 불변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG1 아형의 불변 영역 아부류를 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR; 또는 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 서열을 갖는 6개 CDR; 및 상기 CDR 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 및 유도체를 포함하고, 여기서 모노클로날 항체는 적어도 약 10-8M의 친화성으로 CEACAM1에 결합한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 27에 기재된 중쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 28에 기재된 경쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 27에 기재된 중쇄 서열 및 서열번호 28에 기재된 경쇄 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 CEACAM1을 인식하는 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기재된 6개 CDR 서열 또는 서열번호 13, 14, 15, 16, 17 및 18에 기재된 6개 CDR 서열을 갖는 모노클로날 항체가 결합하는 CEACAM1 분자 상에서 동일한 에피토프에 결합할 수 있는 적어도 항원-결합 부분을 포함한다. 특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 32) 및 YPNASLLIQNVT(서열번호 33)를 각각 갖는 인간 CEACAM1의 잔기 17 내지 29 및 68 내지 79 내의 에피토프와 반응성이다.
특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 29)의 적어도 4개 아미노산을 포함하는 에피토프와 반응성이다. 특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 29) 및 YPNASLLIQNVT(서열번호 30) 내에 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프와 반응성이다. 특정 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 VLLLVHNLPQQLF(서열번호 29) 및 PNASLLI(서열번호 31) 내의 에피토프와 반응성이다.
일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 약 10-8M의 친화성으로 인간 CEACAM1 단백질에 결합할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 약 5×10-7M의 친화성으로 인간 CEACAM3 및 인간 CEACAM5 단백질 중의 적어도 하나에 결합할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
PD-1 단백질에 대한 몇몇 모노클로날 항체는 이미 공지되어 있고, 이들 모두는 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용하기에 적절한 것으로 간주된다. 그럼에도 불구하고, 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체는 MK-3475, AMP514, BMS-936558, CT-011, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
PD-L1 단백질에 대한 몇몇 모노클로날 항체는 이미 공지되어 있고, 이들 모두는 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용하기에 적절한 것으로 간주된다. 그럼에도 불구하고, 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체는 MEDI-4736, BMS-936559, MSB0010718C, MPDL3280A, 이의 항원-결합 단편 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 본 발명에 따르는 항체의 비제한적 예는 AMP-224이고, 이는 B7-DCIg로서 또한 공지되어 있으며, 국제공개공보 제WO/2010/027827호 및 제WO/2011/066342호에 기재된 PD-L1 가용성 수용체 및 항체의 Fc 도메인의 융합 단백질이다.
PD-L2 단백질에 대한 몇몇 모노클로날 항체, 예를 들면, PCT 공개특허공보 제WO/2010/036959호에 이미 기재된 것들은 이미 공지되어 있고, 이들 모두는 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용하기에 적절한 것으로 간주된다.
특이적 항체를 개발하는 과정이 비-인간 면역계(예를 들면, 마우스의 면역계)에서의 생성을 수반하는 경우, 생성된 항체의 단백질 서열은 인간에서 천연적으로 발생하는 상동성 항체와 부분적으로 상이하고, 따라서 인간 환자에게 투여하는 경우에 잠재적으로 면역원성이다.
따라서, 인간 환자에게 투여할 때에 면역원성을 회피하기 위해, 일부 실시형태에서, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체는 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래하는 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 인간 항체는, 예를 들면, CDR에서, 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기(예: 시험관내에서 랜덤 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이체)를 포함한다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 마우스 등의 또 다른 포유동물 종의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 내로 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 특정 실시형태에서, 용어 "인간 항체"는 단리된 인간 항체, 예를 들면, 인간 공여체로부터 단리된 인간 항체를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 용어 "인간 항체"는 하이브리도마 세포주로부터 단리된 인간 항체를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 용어 "인간 항체"는 재조합 인간 항체, 예를 들면, 재조합 DNA 기술에 의해 생산된 재조합 인간 항체를 지칭한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 것에 상응하고/하거나 본원에 개시된 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 구체적으로는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 배제한다. 인간 항체는 당해 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 한 가지 실시형태에서, 인간 항체는 파지 라이브러리로부터 선택되고, 여기서 파지 라이브러리는 인간 항체를 발현한다[참조: Vaughan et al. Nature Biotechnology 1996 14,309-314; Sheets et al. PNAS (USA), 1998, 95, 6157-6162); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 1991, 227, 381; Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222, 581]. 인간 항체는 또한 인간 면역글로불린 유전자좌를 유전자도입 동물, 예를 들면, 마우스에 도입함으로써 제조할 수 있고, 여기서 내인성 면역글로불린 유전자는 부분적 또는 완전히 불활성화된다. 챌린징시, 인간 항체 생성이 관찰되고, 이는 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 포함하여 모든 관점에서 인간에서 발견된 것과 밀접하게 유사하다. 이러한 접근법은, 예를 들면, 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,661,016호, 및 하기 과학적 공개문헌[참조: Marks et al, Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)]에 기재되어 있다. 또는, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지시된 항체를 생성하는 인간 B 림프구의 불멸화를 통해 제조될 수 있다(이러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나, 시험관내에서 면역화될 수 있다)[참조: Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147 (1):86-95 (1991); and U.S. Pat No. 5,750,373].
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "재조합체 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리되는 모든 인간 항체, 예를 들면, 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합체로부터 단리된 항체, 조합 인간 항체 라이브러리, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자도입된 동물(예: 마우스)로부터 단리된 항체[참조: Taylor, L. D., et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 또는 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱을 수반하는 임의의 기타 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 실시형태에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유발로 처리하고(또는 인간 Ig 서열에 대해 동물 유전자도입이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발), 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체내에서 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "인간화된 항체"는 비-인간 종 면역글로불린으로부터 유래되는 이들의 CDR(상보성 결정 영역) 및 주로 인간 면역글로불린으로부터 유래되는 항체 분자의 나머지를 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다.
"인간화된" 형태의 비-인간(예: 뮤린) 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래되는 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화된 항체는 인간 면역글로불린(수용체 항체)이고, 여기서 수용체의 초가변 영역으로부터의 잔기는 비-인간 종(공여체 항체), 예를 들면, 목적하는 특이성, 친화성 및 성능을 갖는 마우스, 랫트, 래빗 또는 비인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기로 치환된다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 치환된다. 더욱이, 인간화된 항체는 수용체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형체는 항체 성능을 추가로 정련하기 위해 수행된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 1개 및 통상적으로 2개의 가변 도메인을 포함하고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화된 항체는 임의로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 통상적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함한다. 추가의 상세에 대해서는 문헌[참조: Jones et al., Nature 1986, 321, 522-525; Riechmann et al., Nature 1988, 332, 323-329; and Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992 2, 593-596]을 참조한다.
본원에 사용되는 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리되는 모든 인간 항체, 예를 들면, 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합체로부터 단리된 항체, 조합 인간 항체 라이브러리, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자도입된 동물(예: 마우스)로부터 단리된 항체[참조: Taylor, L. D., et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 또는 기타 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱을 수반하는 임의의 기타 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 실시형태에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유발로 처리되고(또는, 인간 Ig 서열에 대한 동물 유전자도입이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발), 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되거나 관련되는 경우, 생체내에서 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
어떠한 메커니즘 또는 이론에 구속되는 것은 아니지만, 시험관내 및 생체내 둘 다에서 본 발명의 항체 조합에 의해 입증된 실질적 항암 세포독성 효과는 외인성 림프구 세포에 의해 강화될 수 있음을 시사한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 상기 기재된 약제학적 조성물은 림프구 세포 또는 복수의 림프구 세포들을 추가로 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "림프구 세포" 또는 "림프구"는 천연 킬러(NK) 세포(통상 세포-매개된 세포독성 선천성 면역에 관여함), T 세포(통상 세포-매개된 세포독성 적응 면역에 관여함), B 세포(통상 체액에서 항체-유래 적응 면역에 관여함), 이의 복수 및 이의 임의의 조합 중의 어느 하나를 지칭한다. 말초혈 단핵(PBMC) 세포, 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 및 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포(통상 종양 세포의 사멸에 관여함)은 또한 림프구 세포로 간주된다. 림프구의 비제한적 예는 세포독성 림프구(CTL, CD8+ 또는 CD4+), NK 세포(CD2+) 및 T 헬퍼 세포(CD4+)를 포함한다.
용어 "림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포", "림포카인-활성화된 킬러 세포" 및 "LAK 세포"는 상호교환적으로 사용되고, 종양 세포를 사멸시키기 위해, 예를 들면, 종양 세포에 대해 더욱 세포독성으로 되도록 자극 또는 활성화된 림프구 세포를 지칭한다. LAK 세포는 균일한 또는 불균일한 세포 모집단으로부터 생성될 수 있기 때문에, 상기 용어는 종양 세포에 대해 더욱 세포독성으로 되도록 자극되거나 활성화된 균일한 또는 불균일한 세포 모집단을 추가로 지칭한다. 특정 실시형태에서, LAK 세포는 IL-2에 의해 PBMC 세포로부터 생산된다.
IL-2, 인터페론-γ(IFN-γ) 및/또는 항-CD3 모노클로날 항체 등의 공지된 림프구 활성화제는 PBMC 세포 등의 림프구를 형질전환시켜 더욱 세포독성으로 되게 함으로써 시험관내 및 생체내에서 "활성화된 세포독성 림프구 세포", "활성화된 림프구 세포", "세포독성 림프구 세포" 또는 "활성화된 림프구"로 지칭되는 세포 모집단을 생산할 수 있다는 것이 이전에 잘 확립되어 있다. 본 발명 및 기타의 것은 유해한 부작용 없이 활성화된 세포독성 림프구 세포의 다양한 모집단을 생성하기 위해 PBMC를 어떻게 활성화시키는지에 대해 당해 기술분야의 숙련가에게 충분한 가이드를 제공한다. 예를 들면, 스테판 이. 에팅하우젠(Stephen E. Ettinghausen)과 공동 연구자는 재조합 IL-2의 전신 투여가 조직에서 생체내 림포이드 세포 증식을 자극하고[참조: Stephen E. Ettinghausen et al., The Journal of Immunology, 1985, Vol. 135, No. 2, pages 1488-1497], 재조합 IL-2가 적응 전이된 LAK 세포의 생체내 증식을 자극한다는 것을 확립했다[참조: Stephen E. Ettinghausen et al., The Journal of Immunology, 1985, Vol. 135, No. 5, pages 3623-3635]. 조세프 에이치. 필립스(Joseph H. Phillips)와 공동 연구자는 100,000U IL-2/kg/q 8의 연속 투여가 진행된 결장암, 악성 흑색종 또는 신장 세포 암을 갖는 환자에서 프라임 PBMC 세포를 LAK 세포로 되도록 하기에 충분하다는 것을 확립했다[참조: J. Clin. Oncol., 1987, Vol. 5, pp.1933-1941]. 사이토킨 유도된 킬러(CIK) 세포는 비-특이적 항-종양 세포독성을 필요로 하여 이중 T 세포 및 NK 세포 표현형을 갖는 세포 모집단을 나타내는 시험관내 활성화된 인간 CD8 T 세포이다. 이식 대 숙주(GVH) 반응성의 이들의 생체내 종양내 귀소성 및 결여는 자가 또는 동종이계 문맥에서 암 환자에서 광범위하게 사용되어 왔다. 엠. 인트라나 등[참조: M. Introna et al., Immunology Letters, 2013, Vol. 155, pages 27-30]은 이들의 가장 현저한 임상적 결과 뿐만 아니라 CIK 세포의 주요 생물학적 특징의 개요를 제공한다.
일부 실시형태에서, 림프구 세포는 CEACAM1, PD-1 또는 이들 둘 다를 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 CEACAM1 및 PD-1을 발현한다.
일부 실시형태에서, 림프구 세포는 종양-침윤-림프구(TIL) 세포, 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포, 사이토킨 유도된 킬러(CIK) 세포, T 세포, B 세포, NK 세포, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 및 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 종양-침윤-림프구(TIL) 세포 또는 복수의 TIL 세포이다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 림포카인-활성화된 킬러(LAK) 세포 또는 복수의 LAK 세포이다.
어떠한 메커니즘 또는 이론에 구속되는 것은 아니지만, 시험관내에서 본 발명의 림프구에 의해 입증된 목적하는 항암 세포독성 효과는 활성화된 림프구 세포를 사용함으로써 최대화될 수 있음을 시사한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 활성화된다.
본원에서 사용되는 용어 "활성화된"은, 예를 들면, 인간 흑색종 세포(MALME 3M 또는 SKMEL28) 등의 암 세포주에 대해 세포독성 활성을 나타내거나 상승된 그랜자임 B 생산 수준을 나타내는 임의의 림프구 세포를 지칭한다.
일부 실시형태에서, 림프구 세포는 암 세포에 대해 세포독성이다.
본원에서 사용되는 용어 "세포독성"은 세포(예: 암 세포)의 구조 및/또는 기능에 대해 유해한 제제(예: 림프구 세포)를 지칭한다. 예를 들면, 기능부전 체세포에 노출되는 경우, 세포독성 T 림프구(CTL)은 세포독소 페르포린, 그랜자임 및 그라눌리신을 방출한다. 페르포린의 작용을 통해, 그랜자임은 표적 세포의 세포질로 들어가고, 이들의 세린 프로테아제 기능은, 결국 아폽토시스(프로그램된 세포사)를 유도하는 일련의 시스테인 프로테아제인 카스파제 캐스케이드를 유발한다.
본 발명에 의해 제공된 조성물 및 방법은 기원에 의해 무관련된 몇몇 암 유형에 대해 효과적인 것으로 입증된다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1, PD-L1, PD-L2 또는 이의 임의의 조합을 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1, PD-L1 또는 이들 둘 다를 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1, PD-L2 또는 이들 둘 다를 발현한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 암 세포는 CEACAM1 및 PD-L1 및 PD-L2를 발현한다.
일부 실시형태에서, 암은 흑색종, 림프종, 폐, 갑상선, 유방, 결장, 전립선, 간장, 방광, 신장, 자궁경부, 췌장, 백혈병, 골수, 난소, 자궁, 육종, 담관 및 자궁내막 세포 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암은 흑색종 및 림프종 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시형태에서, 암은 림프종이다.
일부 실시형태에서, 인간 PD-1, PD-L1 및 PD-L2 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체는 인간 PD-1 및 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다.
상기 기재된 바와 같이, 본 발명은 2개의 주요 면역-억제 상호작용: CEACAM1림프구/CEACAM1암 세포 및 PD-1림프구/PD-리간드암 세포를 동시에 방해하도록 지시된 약제학적 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 상기 방법은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 전에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 동시에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 후에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물의 적어도 2개의 투여는 동시에 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물의 2개 이상의 투여는 순차로 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 전에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 동시에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 후에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 전에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 동시에 투여된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 후에 투여된다.
일부 실시형태에서, 상기 기재된 방법은 림프구 세포를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 림프구 세포를 포함하는 약제학적 조성물의 투여는 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 적어도 하나와 동시에 수행된다. 상기 방법의 일부 실시형태에서, 2개 이상의 약제학적 조성물의 투여는 순차로 수행된다.
놀랍게도, 림프구 세포 상의 이들 각각의 표적에 대한 항-CEACAM1 항체 및 항-PD-1 항체의 결합이 다소 상호-관련되는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 일부 실시형태에서, 림프구 세포는 투여 전에 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 예비-배양된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 림프구 세포는 투여 전에 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 예비-배양된다. 다른 이러한 특정 실시형태에서, 투여 전에, 림프구 세포는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 예비-배양되고, 이어서 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 배양된다.
본원에서 사용되는 문구 "~와 예비-배양된다"는, 하나 또는 두 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 특정한 방식으로 림프구 세포에 의해 제시된 이들의 표적에 결합하는 것을 가능하게 하는 조건하에, 동일한 약제학적 조성물에 포함되는 림프구 세포, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.
인간 백혈병 항원(HLA) 시스템은 인간에서 면역계의 조절에 관여하는 세포의 표면 상에서 단백질을 코딩하는 유전자의 유전자좌이다. HLA 유전자는 대부분의 척추동물에서 발견되는 주요 조직적합성 복합체(MHC) 유전자의 인간 버젼이다. HLA는 세포 또는 기관 이식을 위해 질환을 갖는 환자를 건강한 공여체에 일치시키기 위해 통상 사용된다. 최상의 이식 결과는, 환자의 HLA와 공여체의 HLA가 밀접하게 일치하는, 바람직하게는 동일한 경우에 발생한다. 본원에서 사용되는 용어 "자가 림프구 세포"는, 암 환자로부터 수득되거나 이로부터 유래되고, 임의로 항-CEACAM1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 함께 증식 또는 배양되고, 동일한 암 환자에게 투여되는 림프구 세포를 지칭한다. 본원에 사용되는 용어 "자가 림프구 세포"는 인간 백혈병 항원(HLA)-일치 공여체로부터 수득되거나 유래되는 림프구 세포를 지칭한다.
일부 실시형태에서, 항-CEACAM1, 항-PD-1, 항-PD-L1 및 항-PD-L2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 2개의 상이한 항체는 적어도 2개의 상이한 약제학적 조성물에 포함된다. 일부 실시형태에서, 항-CEACAM1, 항-PD-1, 항-PD-L1 및 항-PD-L2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 항체 및 적어도 하나의 림프구 세포는 동일한 약제학적 조성물에 포함된다.
일부 실시형태에서, 키트는 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 인간 PD-L2에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 각각의 약제학적 조성물은 키트 내의 별개의 용기에 함유된다.
특정 실시형태에서, 키트는 림프구 세포를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 이러한 특정 실시형태에서, 키트는 림프구 세포 및 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별도의 실시형태를 나타낸다. 이러한 특정 실시형태에서, 키트는 림프구 세포 및 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 이러한 특정 실시형태에서, 키트는 림프구 세포 및 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 특정 실시형태에서, 키트는 키트의 사용 설명서를 추가로 포함한다.
다음 실시예는 화합물을 제조하고 사용하는 방법 및 본 발명의 방법을 예시하고자 의도하고, 어떤 식으로든 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명이 하기 이의 구체적인 실시형태와 관련하여 설명되지만, 많은 수정 및 변형이 당업자에게 명백할 것임이 분명하다. 따라서, 첨부된 특허청구범위의 취지 및 광범위한 범위내에 속하는 이러한 수정 및 변형은 모두 포함되는 것으로 의도된다.
실시예
실시예 1 - 인간 흑색종 세포는 IFN-γ 활성화시 CEACAM1 및 PD-L1을 발현시킨다.
인간 흑색종 세포(MALME 3M)를 24시간 동안 IFN-γ(2000 단위/ml)와 함께 배양한 다음, PE-접합된 항-PD-L1 항체(클론 29E.2A3) 또는 인간 CEACAM1(CM-24, cCAM Biotherapeutics에 의해 개발됨)에 대한 PE-접합된 모노클로날 항체를 사용하여 FACS 분석을 수행했다. 유사한 검정은 이소형 대조군에 대해 수행했다.
도 1은 실험에 사용된 인간 흑색종 세포가 CEACAM1 및 PD-L1을 발현시킴을 입증한다.
실시예 2 - 인간 TIL 세포는 PD-1 및 CEACAM1을 발현시킨다.
인간 TIL 세포(종양 침윤성 림프구 팽창 형태 환자 # 14, Ella institute, 배치 14, TIL14)를 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(클론 E12.2H7) 또는 인간 CEACAM1에 대한 PE-접합된 모노클로날 항체(CM-24)로 염색한 다음, FACS 분석을 수행했다. 필적하는 이소형 대조군과 비교하여 PD-1(A) 및 CEACAM1(B)의 발현이 제시된다.
도 2는 실험에 사용된 인간 TIL 세포는 PD-1 및 CEACAM1을 모두 발현시킴을 입증한다.
실시예 3 - 인간 흑색종 세포에 대한 인간 TIL 세포의 세포독성에 대한 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과.
인간 흑색종 암 세포(MALME 3M)는 PD-L1 발현을 유도하기 위해 IFN-γ의 존재하에 성장시켰다. 인간 TIL 세포(TIL14)를 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(CM-24)(0.01㎍/ml, 0.05㎍/ml, 0.1㎍/ml, 0.5㎍/ml), 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(클론 E12.2H7) 또는 두 항체의 조합(각 항체 0.005, 0.025, 0.05 및 0.25㎍/ml)으로 37℃에서 30분 동안 배양했다.
IFN-γ 처리된 인간 흑색종 암 세포는 세포독성 평가 전에 밤새 배양용으로 첨가했다(도 3). 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)의 평균을 나타낸다. * P<0.05 페어링된 T-시험은 단지 CM-24와 비교했다. 조합 지수(CI)는 다음 방정식에 따라서 ≤0.2인 것으로 계산되었다:
Figure 112016056049083-pct00001
도 3은 항-CEACAM1 항체 및 항-PD-1 항체 모두가 인간 림프구, 예를 들면, TIL 세포 상에서 이들의 각각의 표적과 결합할 수 있었고, 이 결합은 각 단독요법 단독에 비해 인간 암 세포에 대해 인간 TIL 세포의 독성을 현저히 증가시켰다는 것을 입증한다. 따라서, 도 3에 제시된 데이터는 표적 암 세포로부터 면역-억제 신호로부터 림프구를 보호하면 이러한 암 세포에 대해 실질적인 세포독성을 유도한다는 것을 나타낸다.
실시예 4 - 항-PD-1 항체가 항-CEACAM1 항체의 첨가 전에 첨가될 경우, 인간 흑색종 세포에 대한 인간 TIL 세포의 그랜자임 B 수준 및 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과.
인간 흑색종 암 세포(MALME 3M)는 PD-L1 발현을 유도하기 위해 IFN-γ의 존재하에 성장시켰다. 인간 TIL 세포(TIL14)는 단지 배지(흑색), 비특이적 IgG 항체(0.8㎍/ml, 백색), 각종 농도(0.05㎍/ml, 0.1㎍/ml, 0.2㎍/ml, 0.4㎍/ml, 0.8㎍/ml)의 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(CM-24), 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(클론 E12.2H7) 또는 두 항체의 조합(각각 0.05㎍/ml, 각각 0.1㎍/ml, 각각 0.2㎍/ml, 각각 0.4㎍/ml, 각각 0.8㎍/ml)으로 배양했다.
인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체를 먼저 37℃에서 30분 동안 첨가한 다음, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 첨가했다. IFN-γ 처리된 인간 흑색종 암 세포를 세포독성 평가 전에 밤새 배양용으로 첨가했다(도 4A). 조합 지수(CI)는 0.15인 것으로 계산했다. 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)의 평균을 나타낸다. * P<0.05 페어링된 T-시험은 단지 a-PD-1과 비교했다. 동일한 검정에서, 세포독성 세포 활성화시 분비된 세포독성 단백질 그랜자임 B의 수준은 시판되는 그랜자임 B ELISA 키트에 의해 평가했다(도 4B). 결과는 처리당 삼중 웰로부터 평균 그랜자임 B 수준을 나타낸다.
도 4는 항-CEACAM1 항체 및 항-PD-1 항체가 인간 림프구, 예를 들면, TIL 세포 상에서 이들의 각각의 표적과 결합할 수 있고, 이 결합이 인간 암 세포에 대한 인간 TIL 세포의 그랜자임 B 분비 및 세포독성을 증가시킴을 입증한다. 도 4는 추가로 인간 TIL 세포에 대한 이러한 항체의 결합은 다소 상호관련되어 이들 결합 메커니즘의 추가 연구를 보장한다는 것을 입증한다. 도 3에 제시된 데이터와의 유사성에 있어서, 도 4는 표적 암 세포로부터 면역-억제 신호로부터 림프구를 보호하면 표적 암 세포에 대해 실질적인 세포독성을 유도함을 또한 나타내고, 타이밍이 병용 용법에서 중요한 인자일 수 있음을 시사한다.
실시예 5 - 항-PD-L1 항체가 항-CEACAM1 항체의 첨가 전에 첨가될 경우, 인간 흑색종 세포에 대한 인간 TIL 세포의 그랜자임 B 수준 및 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-L1 항체의 상승작용 효과.
인간 흑색종 암 세포(MALME 3M)는 PD-L1 발현을 유도하기 위해 IFN-γ의 존재하에 성장시켰다. 인간 TIL 세포(TIL14)는 단지 배지(흑색), 비특이적 IgG 항체(0.8㎍/ml, 백색), 각종 농도(0.05㎍/ml, 0.1㎍/ml, 0.2㎍/ml, 0.4㎍/ml, 0.8㎍/ml)의 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(CM-24), 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체(클론 29E.2A3) 또는 두 항체의 조합(각각 0.05㎍/ml, 각각 0.1㎍/ml, 각각 0.2㎍/ml, 각각 0.4㎍/ml, 각각 0.8㎍/ml)으로 배양했다. 항-PD-L1 항체를 먼저 37℃에서 30분 동안 첨가한 다음, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 첨가했다.
IFN-γ 처리된 인간 흑색종 암 세포를 세포독성 평가 전에 밤새 배양용으로 첨가했다(도 5A). 조합 지수(CI)는 0.67인 것으로 계산되었다. 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)의 평균을 나타낸다. * P≤0.05 페어링된 T-시험은 단지 a-PD-L1과 비교했다. 동일한 검정에서, 세포독성 세포 활성화시 분비된 세포독성 단백질 그랜자임 B의 수준은 시판되는 그랜자임 B ELISA 키트에 의해 평가했다(도 5B). 결과는 처리당 삼중 웰로부터 평균 그랜자임 B 수준을 나타낸다.
도 5는 항-CEACAM1 항체 및 항-PD-1 항체가 인간 림프구(예: TIL 세포) 및 인간 암 세포(예: 흑색종 세포) 상에서 이들 각각의 표적과 결합할 수 있고, 이 결합이 인간 암 세포에 대한 인간 TIL 세포의 그랜자임 B 분비 및 세포독성을 증가시킴을 입증한다. 도 5는 추가로 PD-1/PD-L1 및 CEACAM1/CEACAM1 상호작용을 차단하면 상승작용 효과를 유도할 수 있다는 것을 입증한다. 따라서, 도 5에 제시된 데이터는 PD-1림프구/PD-리간드암 세포 면역-억제 신호로부터 림프구를 보호하면, 표적화된 항원, PD-1, PD-L1 또는 PD-L2과 무관하게, 이러한 암 세포에 대해 실질적 세포독성을 유도한다는 것을 나타낸다.
실시예 6 - 항-PD-1 항체가 항-CEACAM1 항체의 첨가 전에 첨가될 경우, 인간 흑색종 세포에 대한 인간 LAK 세포의 세포독성에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과.
인간 흑색종 암 세포(SKMEL28, CEACAM1 양성, PD-L1 양성)는 PD-L1 발현을 유도하기 위해 IFN-γ의 존재하에 성장시켰다. 건강한 인간 공여자로부터의 PBMC 를 7일 동안 IL-2(500단위/ml)로 활성화시켜 생성된 인간 LAK(림포카인-활성화된 킬러) 세포는 단지 배지(흑색), 비특이적 IgG 항체(0.8㎍/ml, 백색), 각종 농도(0.05㎍/ml, 0.1㎍/ml, 0.2㎍/ml, 0.4㎍/ml, 0.8㎍/ml)의 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(CM-24), 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체(클론 E12.2H7) 또는 두 항체의 조합(각각 0.05㎍/ml, 각각 0.1㎍/ml, 각각 0.2㎍/ml, 각각 0.4㎍/ml, 각각 0.8㎍/ml)으로 배양했다. 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체를 먼저 37℃에서 30분 동안 첨가한 다음, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 첨가했다.
IFN-γ 처리된 인간 흑색종 암 세포를 세포독성 평가 전에 24시간 배양용으로 첨가했다(도 6). 조합 지수(CI)는 < 0.2인 것으로 계산되었다. 결과는 처리당 삼중 웰로부터 고전적 LDH 방출 검정에 의해 측정된 세포독성±SE(%)의 평균을 나타낸다. * P≤0.05 페어링된 T-시험은 단지 a-PD-1과 비교했다.
도 6은 항-CEACAM1 항체 및 항-PD-1 항체가 활성화된 인간 림프구, 예를 들면, LAK 세포 상에서 이들 각각의 표적과 결합할 수 있고, 이 결합이 인간 암 세포에 대한 인간 LAK 세포의 독성을 증가시킴을 입증한다. 도 6은 추가로 LAK 세포에 이러한 항체의 결합이 다소 상호관련되어 이들 결합 메커니즘의 추가 연구를 보장하고, 이 메커니즘이 다양한 활성화된 림프구에 존재한다는 것을 입증한다.
실시예 7 - 항-CEACAM1 항체에 의한 처리는 표적 암 세포 상에서 PD-L1 발현을 증가시킨다.
인간 NK 세포(NK92MI)를 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체(10㎍/ml CM-24)의 존재 또는 부재하에 배양한 다음, 인간 흑색종 암 세포(SKMEL28)를 첨가했다. 세포를 24, 48 및 72시간 동안 배양하고, PD-L1 수준을 각 시점에서 FACS 분석으로 측정했다. 도 7A는 상이한 시점에서 나타낸 처리에 대해 적합한 이소형 대조군과 비교한 항-PD-L1의 평균 비율 수준을 나타낸다. 도 7B는 48시간 후 PD-L1 수준의 대표적 FACS 분석을 나타낸다.
도 7은 암 세포 상의 CEACAM1 및 PD-L1의 발현이 실제로 상호관련된다는 것을 입증한다. 항-CEACAM1 항체의 첨가는 생존 암 세포 상에서 증가된 PD-L1 발현을 유도하여 두 제제에 의한 병용 처리를 위한 추가의 지지를 제공한다. 따라서, 암 세포 상에서 PD-L1 단백질의 수가 비교적 높게 유지되어 세포가 항 PD-1/PD-L1 항체 처리에 더욱 민감하게 하고, 조합 요법이 임상 결과를 향상시킬 수 있음을 암시하기 때문에, 먼저 항 CEACAM1 항체를 투여한 다음, 추가로 항-PD-L1 및/또는 항-PD-L2 항체를 투여하여 암을 치료하는 것이 유리할 수 있다.
실시예 4 내지 6에 제시된 데이터는 동시보다는 별개의 시간에서 상이한 항체의 투여가 암 세포에 대해 림프구의 세포독성 효과를 최대화한다는 놀라운 발견을 입증한다. 어떠한 이론 또는 메커니즘에 구속되는 것은 아니지만, 이러한 발견은 항-CEACAM1 항체에 의한 처리가 표적 암 세포 상에서 PD-L1 발현을 증가시킨다는 본 발명의 또 다른 놀라운 발견에 연결될 수 있다. 가정적으로, 이는 세포독성 림프구에 대한 향상된 효능을 수득하기 위해 다수의 항체의 필요성을 지지할 것이다. 항-PD-1 항체의 투여는 먼저 림프구 상의 PD-1 분자를 차단하고, 항-CEACAM1 항체의 후속 투여가 림프구 및/또는 표적 암 세포 상의 CEACAM1 분자를 차단하고, 표적 암 세포 상에서 PD-1 리간드의 발현을 증가시킨다는 것이 예상될 수 있다. 그러나, 림프구 상의 PD-1 분자가 이미 차단되기 때문에, 표적 암 세포 상에서 PD-1 리간드의 증가된 발현 수준은 림프구가 이들의 완전한 세포독성 잠재성을 효율적으로 발휘하는 것을 방지하지 않는다.
실시예 8 - 면역 경쟁 마우스에서 종양 진행에 미치는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 상승작용 효과.
마우스 림프종 세포(5*106, A20)는 1일차에 피하 주사에 의해 Balb/C 마우스의 복부에 동종이식했다. 10일차에, 종양은 평균 용적 45mm3에 도달했고, 마우스는 4개의 개별 그룹(그룹당 11 내지 12마리 마우스)으로 랜덤화하고, PBS(도 8, 흑색 점선, 텅빈 원), CC-1(항 뮤린 CEACAM1 항체, 6mg/kg, 도 8, 회색 실선, 회색 직사각형), PRM-1(항 뮤린 PD-1 항체, 6mg/kg, 도 8, 회색 실선, 회색 삼각형) 또는 CC-1 및 PRM-1의 조합(각각 6mg/kg, 도 8, 검은색 실선, 흑색 구)을 정맥내 투여했다. 처리는 15일 및 20일차에 반복했다. 실험은 22일째에 종료했다. 인간 CEACAM1 단독에 대한 모노클로날 항체, 인간 PD-1 단독에 대한 모노클로날 항체 및 두 항체의 조합의 종양 성장 억제에 미치는 효과가 계속되었다.
면역 경쟁 Balb/C 마우스는, 순수한 면역계를 갖는 마우스에서 항-뮤린-CEACAM1 및 항-뮤린-PD-1 항체의 생물학적 활성의 평가를 가능하게 하고, 뮤린 암 세포에 대해 완전한 면역계 반응을 평가하기 위해 이 실험용으로 선택했다. 전체적으로, 이 모델은 인간에서 요법을 가장하고, 여기서 암 환자는 항-인간-CEACAM1 및 항-인간-PD-1/PD-L1/PD-L2 항체의 조합을 수용할 것이다. 어떠한 이론 또는 메커니즘에 구속되는 것은 아니지만, 항-CEACAM1 및 항-PD-1/PD-L1/PD-L2 항체의 조합은 암 세포가 환자의 면역계의 활성화 및 세포독성을 우회하는 것을 금지하고, 따라서 현저한 항암 반응을 생성할 것으로 가정된다.
도 8은 항-CEACAM1 항체 및 항-PD-1/PD-L1/PD-L2 항체가 생체내 종양 세포 및/또는 면역 세포 상에서 이들 각각의 표적과 결합할 수 있고, 이 조합된 결합이 각각의 단독 요법과 비교하여 종양 진행을 현저히 약화시킨다는 것을 입증한다. 이 결과는 매우 중요한데, 이는 그것이 확립된 종양을 갖는 환자가 치료되는 임상 세팅을 모방하는 심지어 상당한 용적의 확립된 종양에서 조합된 항-CEACAM1 및 항-PD-1/PD-L1/PD-L2의 효능 및 사용 가능성을 입증하기 때문이다.
도 9는 이들 각각의 요법에 의해 그룹화된(대조군, 항-CEACAM1 항체, 항-PD-1 항체 또는 항-CEACAM1 및 항-PD-1 항체의 조합) 각각의 개별 마우스의 종양 진행 곡선을 제공한다.
실시예 9 - 항-CEACAM-1 항체 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 조합에 의한 암 이종이식 모델의 처리.
종양은 암 세포주(예: SKMEL5 등의 흑색종 세포주)의 피하(SC) 주사로 SCID NOD 마우스에 이종이식했다. TIL 세포의 존재 또는 부재하에 항-CEACAM-1 항체(예: CM-24) 단독의 효과, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체 또는 인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체 단독의 효과, 및 두 항체의 조합의 효과를 종양 제거, 종양 성장 억제 및/또는 마우스 사망율에 의해 시험한다.
예를 들면, SCID-NOD 마우스를 표 2에 개시된 그룹으로 무작위화한다.
SCID-NOD 마우스 그룹
그룹 시험 항목 동물의 수
1 대조군 IgG 10
2 항-CEACAM-1 항체 10
3 항 PD-1 항체 10
4 항-CEACAM-1 항체 + 항 PD-1 항체 10
5 대조군 IgG + TIL* 10
6 항-CEACAM-1 항체 + TIL* 10
7 항 PD-1 항체 + TIL* 10
8 항-CEACAM-1 항체 + 항 PD-1 항체 + TIL* 10
*TIL은 이 마우스 균주에서 면역계의 부재에 대해 보상하기 위해 양자적으로 투여된다.
종양 개시 - 각 마우스는 마우스 오른쪽 옆구리에 SC 주사로 PBS의 암 세포(예: 흑색종)를 투여한다. 치료 - 치료는 종양 접종일에 시작한다. 종양 성장 측정 - 측정은 실험 절차에 대한 개인 맹검에 의해 캘리퍼스를 사용하여 1주 2회 수행한다. 측정은 종양 개시일로부터 시작한다. 종점 - 종양 개시일로부터 약 60 내지 80일, 검정 종결일에, 전신 출혈 및 혈청 분리 후 모든 마우스를 희생시켰다. 종양은 마우스당 별도의 튜브에서 고정으로 전송시킨다.
실시예 10 - 무처리된 절제불능 또는 전이성 암을 갖는 인간 대상체에서 항-PD-1/항-PD-L1//항-PD-L2/항-CEACAM1 단독요법 대 항-CEACAM1 및 항-PD-1/항-PD-L1/항-PD-L2 요법의 조합.
Figure 112016056049083-pct00002
*실험은 독성, 대상체의 동의서 철회 또는 연구 종결에 기인하는 문서화된 질환 진행 중단까지 계속한다.
SEQUENCE LISTING <110> CCAM BIOTHERAPEUTICS LTD. <120> COMPOSITIONS COMPRISING ANTI-CEACAM1 AND ANTI-PD ANTIBODIES FOR CANCER THERAPY <130> IPA160382-IL <150> US 61/908,190 <151> 2013-11-25 <160> 31 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X is Absent or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X is Absent or Ile <400> 1 Xaa Asn Asn Leu Xaa 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asp Thr 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Phe Ala Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Gln Asp Ile Gly Asn Tyr 1 5 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Tyr Thr Ser Arg 1 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Gln Gln Gly Lys Ser Leu Pro 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Asn Asn Leu Ile Glu 1 5 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Phe Ala Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Gln Gln Gly Lys Ser Leu Pro 1 5 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Asn Leu 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 14 Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asp Thr 1 5 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Phe Ala Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 16 Gln Asp Ile Gly Asn Tyr 1 5 <210> 17 <211> 4 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 17 Tyr Thr Ser Arg 1 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 18 Gln Gln Gly Lys Ser Leu Pro Arg Thr 1 5 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 19 Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Asn Leu Ile Glu 1 5 10 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 21 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Gly Phe Ala Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Gln Gln Gly Lys Ser Leu Pro Arg Thr 1 5 <210> 25 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Recombinant polypeptide <400> 25 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Asn 20 25 30 Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly 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Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 28 <211> 214 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Recombinant polypeptide <400> 28 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Ser Leu Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 29 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln Gln Leu Phe 1 5 10 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Val Thr 1 5 10 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile 1 5

Claims (50)

  1. 별개의 투여에 의해 암의 치료에 사용하기 위한,
    1) 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 포함하는 약제학적 조성물; 및
    2) 인간 PD-1과 이의 리간드 사이의 상호작용을 억제 또는 차단할 수 있는, 인간 PD-1 및 PD-L1 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 조합을 포함하는, 의약으로서,
    상기 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체가 서열번호 1에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 2에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열번호 3에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열번호 4에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 5에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열번호 6에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가지며,
    인간 PD-1 또는 PD-L1에 대한 모노클로날 항체가 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 보다 먼저 또는 이후에 환자에게 투여되는 것인, 의약.
  2. 제1항에 있어서,
    인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체가 MK-3475, AMP514, BMS-936558, CT-011, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나; 또는
    상기 모노클로날 항체가 인간 또는 인간화된 모노클로날 항체인, 의약.
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체가 CM-24인, 의약.
  5. 제1항, 제2항, 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    인간 림프구 세포를 추가로 포함하는, 의약.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 림프구 세포가 CEACAM1, PD-1, 또는 이들 둘 다를 발현하거나;
    상기 림프구 세포가 종양-침윤-림프구(TIL) 세포, 림포카인-활성 살해(LAK) 세포, 사이토카인 유도 살해(CIK) 세포, T 세포, B 세포, NK 세포, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나;
    상기 림프구 세포가 활성화되거나; 또는
    상기 림프구 세포가 암 세포에 대하여 세포독성인, 의약.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 암 세포가 CEACAM1, PD-L1, 또는 이의 임의의 조합을 발현하는, 의약.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 암 세포가 CEACAM1 및 PD-L1을 발현하는, 의약.
  9. 제1항에 있어서,
    인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체가 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 보다 먼저 환자에게 투여되는, 의약.
  10. 제1항에 있어서,
    인간 PD-L1에 대한 모노클로날 항체가 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 이후에 환자에게 투여되는, 의약.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제6항에 있어서,
    상기 림프구 세포가 투여 전에, 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체, 인간 PD-1에 대한 모노클로날 항체, 또는 이들 둘 다와 함께 예비-배양되거나; 또는
    상기 림프구 세포가 자가 림프구 세포인, 의약.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 암이 흑색종암, 림프종암, 폐암, 갑상선암, 유방암, 결장암, 전립선암, 간암, 방광암, 신장암, 자궁경부암, 췌장암, 백혈병, 골수암, 난소암, 자궁암, 육종암, 담도암, 및 자궁내막 세포암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 의약.
  15. 별개의 투여에 의해 암의 치료에 사용하기 위한,
    (i) 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체를 포함하는 약제학적 조성물; 및
    (ii) 인간 PD-1 및 PD-L1 중의 적어도 하나에 대한 모노클로날 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는, 키트로서,
    상기 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체가 서열번호 1에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열번호 2에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열번호 3에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열번호 4에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열번호 5에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열번호 6에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 가지며,
    인간 PD-1 또는 PD-L1에 대한 모노클로날 항체가 인간 CEACAM1에 대한 모노클로날 항체 보다 먼저 또는 이후에 환자에게 투여되는 것인, 키트.
  16. 삭제
  17. 삭제
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