CN110241030A - 一种灵芝菌丝体的培养方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种灵芝菌丝体的培养方法及其应用，所述的灵芝菌丝体的培养方法，包含以下步骤：(1)将灵芝菌种接种到斜面培养基上，进行斜面培养；将经过斜面培养的灵芝菌种接种到液体培养基中，进行一级摇瓶培养，发酵结束后，转入液体培养基中进行二级摇瓶培养；(2)将生产摇瓶二级种接入发酵培养基中，进种子罐培养，得到一级灵芝菌种；(3)发酵罐扩大培养。通过该方法生产的灵芝菌丝体生长周期短，菌丝浓密，产量较高。利用该方法生产的灵芝菌丝复合饮品，具有生产效率高，适用于大规模工业化生产等优点，且明显降低饮品中增稠剂及稳定剂的使用，减少饮品中沉淀的发生，且可降低企业生产成本。

Description

一种灵芝菌丝体的培养方法及其应用

技术领域

本发明涉及菌丝体培养方法及其应用，特别涉及一种灵芝菌丝体的培养方法及其应用。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)，属担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，又称“仙草”、“瑞草”，有研究证明，灵芝具有多种有效成分，如：多糖类、三萜类、蛋白质类、氨基酸多肽类、核苷类、微量成分等。多糖类是其主要生物活性成分之一，对抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、神经衰弱、增强免疫力、降低高血压、延缓衰老等都具有良好的协同治疗作用。

传统栽培灵芝易受环境、人工种植方式等外在因素影响比较大，且生长周期长，难以实现大规模工业化生产。液体发酵灵芝菌丝体是在适当培养基及培养参数控制下，通入无菌空气于摇瓶或发酵罐，能保证菌丝体质量、数量及多糖含量的增加、且快速产生大量次级代谢产物的一种培养方式。与传统农业法栽培灵芝子实体相比，液体深层发酵技术不仅能显著提高灵芝多糖的含量，而且还能有效控制发酵条件，以保证液体培养始终在最佳条件进行。其生产方式具有产量高、周期短、成本低、适于工业化生产等优点。

有研究表明，液体发酵灵芝菌丝体含有的灵芝多糖、三萜含量显著高于相应的野生和栽培灵芝子实体，还具有大量次生代谢产物，且药理活性也相近。因此，液体灵芝发酵菌丝体代替子实体在灵芝药用开发上具有更大的潜力。

此外，金针菇多糖是金针菇的主要活性成分，主要是由10个以上的单糖通过糖苷键连接而成的多聚物，金针菇中还含有十八种氨基酸，多为脑部需要，具有促进智力开发、增强记忆力的优点，金针菇还具有降血脂、降胆固醇、抗疲劳、抗炎、护肝脏、增进食欲、帮助消化等优点。

此外，随着灵芝的液体发酵技术的逐渐完善，产量将大幅上升，但灵芝菌丝产品的开发还处于初中期，需在保健和医药方面努力做出进步，才能更好的造福人类，保护人类的健康。

发明内容

发明目的：本发明通过对灵芝菌丝培养方法进行摸索，通过摇床培养和液体深层发酵得到大量灵芝菌丝体。本发明的另一个目的是提供了一种灵芝菌丝饮品，使产品中的营养成分、活性物质、酶活性都较少丢失或受到破坏，保证产品的质量和提高人体免疫力增强体质的保健效果。

技术方案：本发明所述一种灵芝菌丝体的培养方法，包含以下步骤：(1)摇瓶扩大培养：将灵芝菌种接种到斜面培养基上，进行斜面培养；将经过斜面培养的灵芝菌种接种到摇瓶培养基中，进行一级摇瓶培养；将经过一级摇瓶培养灵芝菌种的接种到摇瓶培养基中进行二级摇瓶培养，所得灵芝菌种为生产摇瓶二级种；

(2)种子罐扩大培养：步骤(1)中培养的生产摇瓶二级种接入发酵培养基中，进行扩大培养，得到一级灵芝菌种；

(3)发酵罐扩大培养：将步骤(2)得到的一级灵芝菌种接入装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵罐培养，过滤，得灵芝菌丝体。

优选地，步骤(1)中，所述斜面培养为在将接种有灵芝菌种的斜面培养基在18-22℃条件下暗培养5-8d，待斜面长满菌丝体。

优选地，所述斜面培养基由以下质量百分含量的组分组成：5-8％玉米粉、2-2.5％葡萄糖、1.5-2％蛋白胨、3-4％小麦粉、0.2-0.4％豆粕、3-4％酵母膏、2-3％琼脂、0.6-0.8％维生素B₁、0.15-0.2％K₂HPO₄、0.1-0.2％MgSO₄以及0.02-0.04％消泡剂，余量为水。

上述斜面培养基、摇瓶培养基和发酵培养基的pH值自然。

步骤(1)中，所述一级摇瓶培养条件为接入经过斜面培养的灵芝菌种1.5-2cm²，通气量控制为1：0.3-0.4v/v.min，以100-140rpm转速，在28-30℃条件下，振荡培养5-8d。待培养瓶种长出浓稠的菌液，作二级摇床培养的菌种。

步骤(1)中，所述二级摇瓶培养为将经过一级摇瓶培养的灵芝菌种与摇瓶培养基体积比为10-15％的接种量接种到摇瓶培养基中，通气量控制为1：0.3-0.4v/v.min，150-200rpm转速，在20-30℃条件下，培养5-8d。

步骤(2)中，所述扩大培养为生产摇瓶二级种与发酵培养基体积比为10-16％的接种量接种于发酵培养基中，控制罐温25-27℃，搅拌速度100-150rpm，通气量1:0.4-0.8v/v.min，发酵培养4-6d。

其中，上述摇瓶培养基的组分3-3.5％葡萄糖，1.5-2％蛋白胨，2-3％酵母膏，0.4-0.6％维生素B₁，0.15-0.2％K₂HPO₄，0.1-0.15％MgSO₄，余量为水。

发酵罐扩大培养所用的培养基组分为18-20％麦麸粉，2-3％葡萄糖，1.5-2.5％黄豆饼粉，0.5-0.6％维生素B₁，0.1-0.15％K₂HPO₄，0.1-0.15％MgSO₄，余量为水。

上述的培养方法培养的灵芝菌丝体。

上述灵芝菌丝体在饮料中的应用。

所述应用具体方法：(1)将发酵一天的发酵液，放罐，发酵醪料经两层纱布过滤，得新鲜的灵芝菌丝体，清洗过滤后的灵芝菌丝体，得灵芝菌丝体，随后将得到的灵芝菌丝体酶解，得到灵芝菌丝体酶解滤液；

(2)金针菇汁为将金针菇烘干、粉碎、过筛后，加入质量百分数为0.7-1％纤维素酶溶液中，在50-60℃条件下酶解2-4h，溶液pH为6-6.5，金针菇与纤维素酶溶液料液比为1:10-15g/ml，得金针菇汁；

(3)将步骤(1)中得到的灵芝菌丝体酶解滤液以及步骤(2)中得到的金针菇汁制备成灵芝饮品；所述灵芝饮品由以下质量百分含量的组分组成：35-40％灵芝菌丝体酶解液、5-6％鲜柚浓缩汁、4-6％金针菇汁、1-2％蜂蜜、0.01-0.015％山梨酸钾、0.3-0.4％柠檬酸、0.03-0.04％柠檬酸钠、0.03-0.04％果胶、0.05-0.06％黄原胶、0.02-0.03％食盐，余量为水。

所述灵芝菌丝体酶解滤液的制备方法为：将灵芝菌丝体加入质量百分数为0.7-1％纤维素酶溶液中，在50-60℃条件下酶解2-4h，溶液pH为6-6.5，灵芝菌丝体与纤维素酶溶液料液比为1:10-15g/ml，得灵芝菌丝体酶解滤液；

进一步地，制备上述灵芝饮品的制备方法，包含以下步骤：

(1a)将灵芝菌丝体酶解滤液及金针菇汁进行均质研磨，均质为采用二级均质工艺，将料液预热至60-65℃，20-35MPa下均质处理10-15min，随后在15-18MPa均质压力下均质5-10min。采用二级均质工艺的主要目的在于进一步降低灵芝饮品中的粒径，使饮品体系更稳定，口感更加顺滑；

(1b)将步骤(1a)中得到的混合料在100℃下杀菌10min，以破坏或杀灭致病及其他不良的微生物，精滤后得澄清透明的酶解滤液，以提高产品细腻度；

(1c)先将食盐用少量软水溶解过滤，然后分别加入灵芝菌丝体酶解滤液、金针菇汁、溶化的果胶及黄原胶、柠檬酸、柠檬酸钠、鲜柚浓缩汁、蜂蜜、山梨酸钾搅拌均匀，最后补水至配方规定的量；

(1d)将定容后的料液加热至沸，趁热加灌入已灭菌的饮料瓶、压盖后105℃下杀菌10min、冷却后得灵芝菌丝发酵饮品。

除非另有说明，本发明所述“％”为质量百分浓度。

有益效果：(1)本发明通过对灵芝培养基的改进和培养方法的改进，进行液体深层发酵及摇床培养得到灵芝菌丝体，此方法易于大量获得灵芝菌丝体。清洗过滤后的菌丝体与金针菇汁后经混合胶磨，加入其它辅料，澄清灭菌后，得到菌丝发酵饮品。在处理过程中，营养成分和活性物质得到保留，可提高灵芝保健功能，增强功效；(2)本发明灵芝菌丝发酵饮品，在保留灵芝菌丝及金针菇原有的营养基础之上，添加浓缩柚子汁，使灵芝饮品的营养更加丰富，风味独特，口感更加细腻。由于金针菇汁的加入及少量复配饮品稳定剂的使用，减少了饮品在后期贮藏过程中的分层、褐变等现象。

具体实施方式

实施例1：制备斜面培养基，斜面培养基组分为5％玉米粉、2.5％葡萄糖、2％蛋白胨、4％小麦粉、0.2％豆粕、3％酵母膏、3％琼脂、0.8％维生素B₁、0.15％K₂HPO₄、0.1％MgSO₄、0.02％消泡剂山梨糖醇，余量为水；将灵芝菌接种到斜面培养基上，灵芝菌丝在暗光22℃条件下，振荡培养6d，待斜面长满菌丝体；

将1.5cm²灵芝菌种接种到摇瓶培养基中，进行一级摇瓶培养，得到生产摇瓶一级种，摇瓶培养基与摇瓶的体积比为200:1000，摇瓶培养基的组分为：3％葡萄糖、1.5％蛋白胨、3％酵母膏、0.6％维生素B₁、0.15％K₂HPO₄以及0.1％MgSO₄，余量为水；灭菌后接入1.0cm²的经斜面培养的菌种，通气量控制为1：0.3v/v.min，140rpm振荡培养7d，温度28℃；将经过一级摇瓶培养灵芝菌种与摇瓶培养基按体积比为0.15:1进行接种，进行二级摇瓶培养，通气量控制为1：0.3v/v.min，160rpm转速，在27℃条件下，再次扩大培养6d，得到生产摇瓶二级种；

生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的种子罐进行扩大培养得到发酵一级种，发酵培养基组分为：18％麦麸粉、2％葡萄糖、1.5％黄豆饼粉、0.6％维生素B₁、0.15％K₂HPO₄以及0.1％MgSO₄，余量为水；培养条件为接种量与发酵培养基的体积比为0.1:1，控制罐温26℃，搅拌速度100rpm，通气量1:0.4v/v.min，发酵培养4d；按种子罐扩大培养所述的发酵培养基和培养条件，将发酵一级种转接入装有发酵培养基的发酵罐培养(体积比为1：10)，发酵一天放罐，发酵醪料经过滤，得新鲜的灵芝菌丝体。

灵芝菌丝体酶解滤液的制备：将所得的新鲜的灵芝菌丝体加入质量百分数为1％纤维素酶溶液中，在60℃条件下酶解4h，溶液pH为6.5，灵芝菌丝体与纤维素酶溶液料液比为1:15g/ml；

金针菇汁制备：金针菇烘干、粉碎、过筛后，加入质量百分数为0.7％纤维素酶溶液中，在55±1℃条件下酶解3h，溶液pH为6.5，金针菇与纤维素酶溶液料液比为1:10g/mL。

将灵芝菌丝体酶解滤液及金针菇汁进行均质研磨，均质为采用二级均质工艺，将料液预热至65℃，30MPa下均质处理13min，随后在18MPa均质压力下均质5min。将得到的混合料在100℃下杀菌10min，备用。

先将配方中的食盐用少量软水溶解过滤，然后分别加入灵芝菌丝体酶解滤液与金针菇汁制备的混合液、蜂蜜、鲜柚浓缩汁、溶化的果胶及黄原胶、柠檬酸、柠檬酸钠、山梨酸钾搅拌均匀，最后补水至配方规定的量，得到组分为：38％灵芝菌丝体酶解滤液、5％鲜柚浓缩汁、6％金针菇汁、2％蜂蜜、0.012％山梨酸钾、0.3％柠檬酸、0.04％柠檬酸钠、0.04％果胶、0.05％黄原胶、0.03％食盐，余量为水的饮料，将定容后的料液加热至沸，趁热加灌入已灭菌的饮料瓶、压盖后105℃下杀菌10min、冷却后得灵芝发酵菌丝复合饮品。

实施例2：灵芝菌接种到斜面培养基上，斜面培养基组分为：6％玉米粉、2％葡萄糖、1.8％蛋白胨、4％小麦粉、0.3％豆粕、3.5％酵母膏、3％琼脂、0.6％维生素B₁、0.2％K₂HPO₄、0.2％MgSO₄以及0.02％消泡剂山梨糖醇，余量为水；灵芝菌丝在暗光22℃条件下，振荡培养8d。将2cm²灵芝菌种接种到摇瓶培养基中，进行一级摇瓶培养，得到生产摇瓶一级种，摇瓶培养基与摇瓶的体积比为200:1000，摇瓶培养基的组分为：3.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨、2％酵母膏、0.5％维生素B₁、0.2％K₂HPO₄以及0.1％MgSO₄，余量为水；灭菌后接入1.5cm²的经斜面培养的菌种，通气量控制为1：0.4v/v.min，120rpm振荡培养7d，温度28℃；将经过一级摇瓶培养灵芝菌种与摇瓶培养基按体积比为0.15:1进行接种，进行二级摇瓶培养，通气量控制为1：0.4v/v.min，200rpm转速，在20℃条件下，培养8d，得到生产摇瓶二级种；

生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的种子罐进行扩大培养得到发酵一级种，发酵培养基组分为20％麦麸粉、2％葡萄糖、2％黄豆饼粉、0.5％维生素B₁、0.1％K₂HPO₄以及0.1％MgSO₄，余量为水；培养条件为接种量与发酵培养基的体积比为0.1:1，控制罐温25℃，搅拌速度130rpm，通气量1:0.6v/v.min，发酵培养4d；按种子罐扩大培养所述的发酵培养基和培养条件，将发酵一级种转接入装有发酵培养基的发酵罐培养(体积比为1：10)，发酵一天放罐，发酵醪料经过滤，得新鲜的灵芝菌丝体。

灵芝菌丝体酶解滤液的制备：将所得的新鲜的灵芝菌丝体加入质量百分数为0.9％纤维素酶溶液中，在55℃条件下酶解3h，溶液pH为6.3，灵芝菌丝体与纤维素酶溶液料液比为1:12g/ml；

金针菇汁制备：金针菇烘干、粉碎、过筛后，加入质量百分数为1％纤维素酶溶液中，在55±5℃条件下酶解3h，溶液pH为6.5，金针菇与纤维素酶溶液料液比为1:10g/mL。

将灵芝菌丝体酶解滤液及金针菇汁进行均质研磨，均质为采用二级均质工艺，将料液预热至65℃，30MPa下均质处理13min，随后在18MPa均质压力下均质5min。将得到的混合料在100℃下杀菌10min，备用。

先将配方中的食盐用少量软水溶解过滤，然后分别加入灵芝菌丝体酶解滤液与金针菇汁制备的混合液、蜂蜜、鲜柚浓缩汁、溶化的果胶及黄原胶、柠檬酸、柠檬酸钠、山梨酸钾搅拌均匀，最后补水至配方规定的量，得到组分为：40％灵芝菌丝体酶解滤液、6％鲜柚浓缩汁、5％金针菇汁、1.5％蜂蜜、0.015％山梨酸钾、0.3％柠檬酸、0.03％柠檬酸钠、0.03％果胶、0.06％黄原胶、0.03％食盐，余量为水的饮料，将定容后的料液加热至沸，趁热加灌入已灭菌的饮料瓶、压盖后105℃下杀菌10min、冷却后得灵芝发酵菌丝复合饮品。

实施例3：灵芝菌接种到斜面培养基上，斜面培养基组分为：7％玉米粉、2.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨、3％小麦粉、0.3％豆粕、4％酵母膏、2％琼脂、0.7％维生素B₁、0.15％K₂HPO₄、0.2％MgSO₄以及0.02％消泡剂山梨糖醇，余量为水。在黑暗中18℃条件下培养数5d，待斜面长满灵芝菌丝；

将灵芝菌种接种到摇瓶培养基中，进行一级摇瓶培养，得到生产摇瓶一级种，培养条件为摇瓶培养基与摇瓶的体积比为200:1000，接入1.5cm²的经斜面培养的菌种，摇瓶培养基组分为：3％葡萄糖、1.5％蛋白胨、2％酵母膏、0.4％维生素B₁、0.2％K₂HPO₄、以及0.15％MgSO₄，余量为水；通气量控制为1：0.3v/v.min，在100rpm振荡培养7d，温度30℃；

将经过一级摇瓶培养灵芝菌种与摇瓶培养基按体积比为0.15:1进行接种，进行二级摇瓶培养，通气量控制为1：0.4v/v.min，200rpm转速，在25℃条件下，再次扩大培养6d，得到生产摇瓶二级种；

生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的种子罐进行扩大培养得到发酵一级种，培养条件为接种量与发酵培养基的体积比为0.14:1，发酵培养基组分为：19％麦麸粉、3％葡萄糖、2％黄豆饼粉、0.6％维生素B₁、0.15％K₂HPO₄以及0.1％MgSO₄，余量为水；控制罐温26℃，搅拌速度150rpm，通气量1:0.6v/v.min，发酵培养5d；

按种子罐培养所述的发酵培养基和培养条件，将发酵一级种转接入装有发酵培养基的发酵罐培养(体积比为1：10)，发酵一天放罐，发酵醪料经过滤，得新鲜的灵芝菌丝体。

灵芝菌丝体酶解滤液的制备：将所得的新鲜的灵芝菌丝体加入质量百分数为0.7％纤维素酶溶液中，在50℃条件下酶解2h，溶液pH为6，灵芝菌丝体与纤维素酶溶液料液比为1:10g/ml。

金针菇汁制备：金针菇烘干、粉碎、过筛后，加入质量百分数为0.8％纤维素酶溶液中，在50℃条件下酶解3h，溶液pH为6.5，金针菇与纤维素酶溶液料液比为1:10g/mL。

将灵芝菌丝体酶解滤液及金针菇汁进行均质研磨，均质为采用二级均质工艺，将料液预热至65℃，30MPa下均质处理13min，随后在18MPa均质压力下均质5min。将得到的混合料在100℃下杀菌10min，备用。

先将配方中的食盐用少量软水溶解过滤，然后分别加入灵芝菌丝体酶解滤液与金针菇汁制备的混合液、蜂蜜、鲜柚浓缩汁、溶化的果胶及黄原胶、柠檬酸、柠檬酸钠、山梨酸钾搅拌均匀，最后补水至配方规定的量，得到组分为：35％灵芝菌丝体酶解滤液、5％鲜柚浓缩汁、4％金针菇汁、1％蜂蜜、0.01％山梨酸钾、0.3％柠檬酸、0.03％柠檬酸钠、0.03％果胶、0.05％黄原胶、0.02％食盐，余量为水的饮料，将定容后的料液加热至沸，趁热加灌入已灭菌的饮料瓶、压盖后105℃下杀菌10min、冷却后得灵芝发酵菌丝复合饮品。

Claims (10)

1.一种灵芝菌丝体的培养方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)摇瓶扩大培养：将灵芝菌种接种到斜面培养基上，进行斜面培养；将经过斜面培养的灵芝菌种接种到摇瓶培养基中，进行一级摇瓶培养；将经过一级摇瓶培养灵芝菌种的接种到摇瓶培养基中进行二级摇瓶培养，所得灵芝菌种为生产摇瓶二级种；

(2)种子罐扩大培养：步骤(1)中培养的生产摇瓶二级种接入发酵培养基中，进行扩大培养，得到一级灵芝菌种；

(3)发酵罐扩大培养：将步骤(2)得到的一级灵芝菌种接入装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵罐培养，过滤，得灵芝菌丝体。

2.根据权利要求1所述的灵芝菌丝体的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述斜面培养为在将接种有灵芝菌种的斜面培养基在18-22℃条件下暗培养5-8d，待斜面长满菌丝体。

3.根据权利要求2所述的灵芝菌丝体的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述斜面培养基由以下质量百分含量的组分组成：5-8％玉米粉、2-2.5％葡萄糖、1.5-2％蛋白胨、3-4％小麦粉、0.2-0.4％豆粕、3-4％酵母膏、2-3％琼脂、0.6-0.8％维生素B₁、0.15-0.2％K₂HPO₄、0.1-0.2％MgSO₄以及0.02-0.04％消泡剂，余量为水。

4.根据权利要求1所述的灵芝菌丝体的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述一级摇瓶培养条件为接入经过斜面培养的灵芝菌种1.5-2cm²，通气量控制为1：0.3-0.4v/v.min，以100-140rpm转速，在28-30℃条件下，振荡培养5-8d。

5.根据权利要求1所述的灵芝菌丝体的培养方法，其特征在于步骤(1)中，所述二级摇瓶培养为将经过一级摇瓶培养的灵芝菌种与摇瓶培养基的体积比为10-15％的接种量接种到摇瓶培养基中，通气量控制为1：0.3-0.4v/v.min，以150-200rpm转速，在20-30℃条件下，培养5-8d。

6.根据权利要求1所述的灵芝菌丝体的培养方法，其特征在于步骤(2)中，所述扩大培养为生产摇瓶二级种与发酵培养基的体积比为10-16％的接种量接种于发酵培养基中，控制罐温25-27℃，搅拌速度100-150rpm，通气量1:0.4-0.8v/v.min，发酵培养4-6d。

7.一种由权利要求1-6任一所述的培养方法培养的灵芝菌丝体。

8.根据权利要求7所述的灵芝菌丝体在饮料中的应用。

9.根据权利要求8所述的灵芝菌丝体在饮料中的应用，其特征在于，所述应用具体方法为：

(1)将权利要求1所制得的灵芝菌丝体，酶解，得灵芝菌丝体酶解滤液；

(2)金针菇汁:将金针菇烘干、粉碎、过筛后，加入质量百分数为0.7-1％纤维素酶溶液中，在50-60℃条件下酶解2-4h，溶液pH为6-6.5，金针菇与纤维素酶溶液料液比为1:10-15g/ml；

(3)将步骤(1)中得到的灵芝菌丝体酶解滤液与步骤(2)中得到的金针菇汁制备成灵芝饮品；所述灵芝饮品由以下质量百分含量的组分组成：35-40％灵芝菌丝体酶解滤液、5-6％鲜柚浓缩汁、4-6％金针菇汁、1-2％蜂蜜、0.01-0.015％山梨酸钾、0.3-0.4％柠檬酸、0.03-0.04％柠檬酸钠、0.03-0.04％果胶、0.05-0.06％黄原胶、0.02-0.03％食盐，余量为水。

10.一种灵芝饮品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1a)将灵芝菌丝体酶解滤液与金针菇汁进行均质研磨，均质为采用二级均质工艺，将料液预热至60-65℃，20-35MPa下均质处理10-15min，随后在15-18MPa均质压力下均质5-10min；

(1b)将步骤(1a)中得到的混合料在100℃下杀菌10min；

(1c)先将食盐食盐用少量软水溶解过滤，然后加入步骤(1b)制得的混合液、溶化的果胶及黄原胶、柠檬酸、柠檬酸钠、鲜柚浓缩汁、蜂蜜、山梨酸钾搅拌均匀，最后补水至配方规定的量；

(1d)将定容后的料液加热至沸，趁热加灌入已灭菌的饮料瓶、压盖后105℃下杀菌10min、冷却后得灵芝菌丝发酵饮品。