CN110234332A - 包含具有增加的人参皂苷量的人参花提取物作为活性成分的组合物 - Google Patents

包含具有增加的人参皂苷量的人参花提取物作为活性成分的组合物 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种组合物，其包含具有增加的人参皂苷含量的人参花提取物作为活性成分，所述组合物具有增强皮肤屏障功能的用途；本发明还公开了一种制备所述组合物的方法。所述组合物增加基因hBD2、hBD3及牛皮癣素的表达，所述hBD2、hBD3及牛皮癣素为抗菌肽基因，其在皮肤表面上起到抗微生物屏障的作用，由此具有增强皮肤屏障功能的效应。

Description

包含具有增加的人参皂苷量的人参花提取物作为活性成分的 组合物
【技术领域】
本发明公开了一种组合物，其包含具有增加的人参皂苷含量的人参花提取物作为活性成分，所述组合物用于增强皮肤屏障功能；本发明还公开了一种制备所述组合物的方法。
【现有技术】
人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是刺五加(Eleutherococcus senticosus)科人参属的植物。其在韩国、中国及日本等已被用作为草药超过2000年。根据经验，其用于预防疾病及延长寿命。迄今为止，人参的功效已知包括对中枢神经系统的效应、抗肿瘤(anticarcinogenic)活性、抗癌(anticancer)活性、免疫功能调节、抗糖尿病活性、肝功能改善效应、对心血管疾病的改善、抗动脉粥状硬化活性、血压控制活性、对更年期病症的改善、对骨质疏松症的效应、抗应激活性、抗疲劳活性、抗氧化活性及抗衰老效应。
作为人参的代表性生理活性成分的人参皂苷均匀地分布在人参的地上及地下部分中。然而，已知人参皂苷的含量和组成会依据人参的各部分(诸如根、叶、果等)而不同。
近来，随着消费者对天然化妆品的兴趣增加及推出许多使用中草药的化妆品，已对于作为对皮肤具有重要功效的化妆品植物材料的人参进行了研究。然而，大部分的研究仅针对人参根部提取物或者人参根部的人参皂苷及人参多醣体而进行，而没有对诸如果实等人参各部分的成分功效进行研究。此外，长期以来一直人参花的价值都未知，而大部分人参花被丢弃，不如人参种子。最近，具有鲜明清新气味的人参花作为芳香植物的价值已被注意，而开始开发表现出人参花香气的香料组合物。然而，人参花对皮肤的功效(诸如增强皮肤屏障)仍然未知，且对此缺乏研究。
同时，由人参获取提取物的常规方法存在着问题，其不适于在保留人参的药理成分的同时降低细胞毒性。
【发明内容】
[技术问题]
在一方面，本发明的目的之一是提供具有增加的人参皂苷Re含量的人参花提取物的新用途。
在另一方面，本发明的目的之一是提供一种组合物，其包含作为活性成分的人参花提取物，且其具有增强皮肤屏障功能的作用。
在另一方面，本发明的目的之一是提供一种制备所述组合物的方法。
[技术方案]
在一方面，本发明提供一种用于增强皮肤屏障功能的组合物，其包含作为活性成分的人参花提取物，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。
在另一方面，本发明提供一种制备所述组合物的方法，其包括以下步骤：将水、有机溶剂或者水与有机溶剂的混合溶剂加入到人参花中，然后重复进行加压-减压提取过程(pressurized and decompressed extraction)以进行提取。
[有益效果]
在一方面，本发明的组合物(其包含作为活性成分的人参花提取物，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re)增加抗菌肽基因hBD2、hBD3及牛皮癣素(psoriasin)(所述抗菌肽基因起到皮肤表面上的抗微生物屏障的作用)的表达，由此增强皮肤屏障功能。
【附图简述】
图1为对用一般提取过程(大气压条件)提取的人参花提取物的人参皂苷(比较例3)与用根据本发明的一个实施方案的提取过程(加压提取压力80MPa)提取的人参花提取物的人参皂苷(实施例3)进行比较的图表。
图2为显示在未处理组(对照)、用热水提取法提取的人参花提取物(比较例4)、用一般提取过程(大气压条件)提取的人参花提取物(比较例3)、以及用根据本发明的一个实施方案的提取过程(加压提取压力80MPa)提取的人参花提取物(实施例3)之间的hBD2(图2A)、hBD3(图2B)及牛皮癣素(图2C)基因表达的比较结果的图表。
【实施方案描述】
[实施方案]
下文将详细描述本发明。
在一方面，本发明提供一种用于增强皮肤屏障功能的组合物，其包含作为活性成分的人参花提取物，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。
本发明的人参花(Panax ginseng C.A.Meyer)属于人参的地上部分。相较于人参根而言，其含有更多的人参皂苷，并且人参皂苷的类型与人参根类似。未收集种子的人参花会被去除以促进人参根的生长。
本发明的人参皂苷是一种皂苷(其为一种醣苷)，其源自植物的根、茎、叶、皮、种子等。有多种种类的人参皂苷，包括人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1等。人参皂苷的种类及含量随着植物种类、栽培条件、加工条件、提取方法、人参部位等而有所不同。根据结构，人参皂苷可被分类成PPT(Re、Rg1)及PPD(Rb1、Rb2、Rc、Rd)。Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re及Rg1为水溶性极性物质，其具有天然人参的组成，亦即其未经历为制备红参而进行的去除糖的变性作用。
基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，本发明的人参花提取物可包含以下量的人参皂苷Re：至少2.30重量份、至少2.32重量份、至少2.34重量份、至少2.36重量份、至少2.38重量份、至少2.40重量份、至少2.42重量份、至少2.44重量份、至少2.46重量份、至少2.48重量份、至少2.49重量份、至少2.50重量份、至少2.52重量份、至少2.54重量份、至少2.56重量份、至少2.58重量份、至少2.60重量份、至少2.62重量份、至少2.63重量份、至少2.64重量份、至少2.66重量份、至少2.68重量份、至少2.70重量份、至少2.72重量份、至少2.74重量份、至少2.76重量份、至少2.78重量份、至少2.8重量份、至少2.82重量份、至少2.84重量份、至少2.86重量份、至少2.88重量份、至少2.90重量份、至少2.92重量份、至少2.94重量份、至少2.96重量份、2.98重量份或至少3.0重量份。
基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，本发明的人参花提取物可包含：至少0.25重量份、至少0.26重量份、至少0.27重量份、至少0.28重量份、至少0.29重量份或至少0.30重量份的人参皂苷Rb1，至少0.20重量份、至少0.21重量份、至少0.22重量份、至少0.23重量份、至少0.24重量份或至少0.25重量份的人参皂苷Rb2，或至少0.20重量份、至少0.22重量份、至少0.24重量份、至少0.26重量份、至少0.28重量份、至少0.30重量份、至少0.31重量份、至少0.32重量份、至少0.33重量份或至少0.34重量份的人参皂苷Rc。并且，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，本发明的人参花提取物可包含：至少0.60重量份、至少0.62重量份、至少0.64重量份、至少0.66重量份、至少0.68重量份、至少0.70重量份、至少0.72重量份、至少0.74重量份、至少0.76重量份、至少0.78重量份、至少0.80重量份、至少0.81重量份、至少0.82重量份、至少0.83重量份或至少0.84重量份的人参皂苷(ginsenoside)Rd，或至少0.25重量份、至少0.26重量份、至少0.27重量份、至少0.28重量份、至少0.29重量份、至少0.30重量份或至少0.31重量份的人参皂苷Rg1。在本发明的一个实施方案中，发现相较于用一般提取过程(比较例1至3)制备的人参花提取物而言，用在以下条件(实施例1至3)下的加压-减压提取过程制备的人参花提取物具有较高的收率和增加的人参皂苷Re绝对量(基于100g人参花粉末)，且含有较多的人参皂苷(试验例1至3及图1)：24小时、水温30℃、加压提取压力为80Mpa、及减压提取压力为大气压。
本发明的皮肤屏障(角质层)由角质细胞和细胞间脂质构成。其保护皮肤不受外界刺激、防止皮肤水汽蒸发，并在皮肤健康中起到重要作用。
本发明的抗菌肽为与皮肤表面的抗微生物屏障有关的抗菌肽。当抗菌肽基因的表达水平增加时，可进一步增强皮肤屏障功能。本发明的抗菌肽基因可为选自以下基因中的一种或多种：人β防御素2(hBD2)、人β防御素3(hBD3)及牛皮癣素。hBD2及hBD3属于哺乳动物的防御素家族。β-防御素具有抗菌肽功能，因此表现出对大量革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌、真菌等的抗性。牛皮癣素(也被称为S100A7)属于S100蛋白质家族。其是由皮肤上皮细胞分泌的，并沉积以有助于形成抗微生物屏障。在本发明的一个实施方案中，发现当用在以下条件(实施例3)下制备的人参花提取物处理角质细胞时，hBD2、hBD3及牛皮癣素基因的表达量高于其在未处理组(对照)、热水提取物(比较例4)以及在大气压通过一般提取过程制备的提取物的表达量(比较例3)：24小时、水温30℃、加压提取压力为80Mpa、及减压提取压力为大气压。因此，发现本发明的包含至少一个特定量的人参皂苷Re的人参花提取物通过增加抗菌肽的表达来增强皮肤屏障功能(试验例4及图2)。
可使用任何方法来制备本发明的人参花提取物，只要其能够制备包含至少2.30重量份的人参皂苷Re的人参花提取物(基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花)。而且，该方法可使用加压-减压提取过程。所述加压-减压提取过程可以是进行加压过程或减压过程以在提取过程中改变压力的过程。具体地，本发明的人参花提取物可通过交替进行加压过程及减压过程的压力循环提取过程来制备，且所述加压过程及减压过程可连续进行。所述压力循环提取过程可通过将水、有机溶剂或其混合溶剂加入到人参花中以及以规律间隔重复进行加压过程及减压过程来进行。更具体地，所述加压-减压提取过程可重复进行18小时或更长、19小时或更长、20小时或更长、21小时或更长、22小时或更长、23小时或更长、或24小时或更长，以及30小时或更短、29小时或更短、28小时或更短、27小时或更短、26小时或更短、25小时或更短、或24小时或更短。在所述加压-减压提取过程中的提取温度可为25℃或更高、26℃或更高、27℃或更高、28℃或更高、29℃或更高、或30℃或更高，以及35℃或更低、34℃或更低、33℃或更低、32℃或更低、31℃或更低、或30℃或更低。在加压提取过程中的压力可为60MPa或更高、65MPa或更高、70MPa或更高、75MPa或更高、或80MPa或更高，以及100MPa或更低、95MPa或更低、90MPa或更低、85MPa或更低、或80MPa或更低。而且，在减压提取过程中的压力可为大气压。
在本发明的一个实施方案中，发现用于制备具有最佳收率及最高人参皂苷Re绝对量的人参花提取物的加压-减压提取过程的最佳条件为：24小时处理时间、水温30℃、及加压提取压力80MPa(试验例2)。
基于所述组合物的总重，本发明的组合物可包含以下量的人参花提取物：0.0001wt％至99wt％，特别是0.1wt％至99wt％，更特别是1wt％至50wt％。
在此方面，所述组合物可为药物组合物、化妆品组合物或食品组合物。
可通过将常用的无机或有机载体加入到作为活性成分的组分中，将药物组合物配制成固体、半固体或液体的口服或肠胃外剂型。
口服剂型的实例包括片剂、丸剂(pills)、颗粒剂、软或硬胶囊剂、散剂、微粒剂(fine granules)、粉剂(dusts)、乳剂、糖浆剂、丹剂(pellets)等。肠胃外剂型的实例包括注射剂、滴剂、软膏剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、乳剂、栓剂等。本发明的活性成分可容易地根据常规方法配制。可适当地使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、助悬剂及其他常用辅剂。
本发明的药物组合物在增强皮肤屏障方面具有优异作用，因此可有用地用于治疗及预防皮肤屏障损伤导致的皮肤病。皮肤屏障损伤导致的皮肤病包括但不限于特应性皮炎、干皮病、银屑病、鱼鳞病、痤疮等。
该药物组合物可通过口服、肠胃外、直肠、局部、透皮、静脉内、肌内、腹膜内、皮下等途径给药。
此外，活性成分的剂量会随着待治疗个体的年龄、性别及体重，欲治疗的具体疾病或病况，疾病或病况的严重程度，给药途径及处方者判断而改变。基于这些因素确定剂量在本领域技术人员的知识范围内。典型剂量为0.001mg/kg/日至2000mg/kg/日，更特别是0.5mg/kg/日至1500mg/kg/日。
可以任何适合用于局部施用的制剂形式提供化妆品组合物。例如，可以下制剂形式提供：液体、通过将油相分散在水相中获得的乳剂、通过将水相分散在油相中获得的乳剂、混悬剂、固体、凝胶、散剂、糊剂、泡沫或气雾剂组合物。可根据本领域的常规方法制备这些制剂形式的组合物。
除了上述材料外，所述化妆品组合物可包含能够提供协同效应而不会负面影响主要效果的其他成分。本发明的化妆品组合物可包含选自以下的材料：维生素、高分子量肽、高分子量多醣及鞘脂。而且，本发明的化妆品组合物可包含湿润剂、润滑剂、表面活性剂、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、pH调节剂、有机及无机色素、香料、冷却剂或止汗剂。本领域技术人员可容易地在对本发明目的及效果没有负面影响的范围内确定这些成分的量。基于所述组合物的总重，该成分的含量可为0.001wt％至5wt％，特别是0.01wt％至3wt％。
在此方面，药物组合物或化妆品组合物可为皮肤外用组合物，例如乳膏剂或软膏剂。
食品组合物可为健康食品组合物。其可为需要发酵的发酵食品组合物，诸如茶叶、乳制品、泡菜及酿造食品。所述食品组合物的制剂未受特别限制，但其可为片剂、丸剂、软或硬胶囊剂、颗粒剂、饮料(drinks)、焦糖(caramels)、能量棒(diet bars)、茶包等。除了活性成分外，各制剂形式的食品组合物可进一步包含常用于相关领域的成分。本领域技术人员可毫无困难地根据期望的制剂或目的选择或添加该成分。其他成分的添加可能会产生协同效应。对活性成分剂量的确定在本领域技术人员的知识范围内。活性成分的剂量可能随着多种因素而改变，包括个体的年龄及健康条件、并发症等。
在另一方面，本发明可涉及用于预防、改善或治疗皮肤屏障损伤导致的皮肤病的方法，其包括向需要预防、改善或治疗皮肤屏障损伤导致的皮肤病的个体给药有效量的人参花提取物，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。在本发明的一方面，该方法的给药可根据本文所述的给药方法及给药剂量进行。
在另一方面，本发明可涉及人参花提取物在制备用于增强皮肤屏障功能的化妆品组合物中的用途，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。
在另一方面，本发明可涉及人参花提取物在制备用于增强皮肤屏障功能的食品组合物中的用途，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。
在另一方面，本发明可涉及用于增强皮肤屏障功能的人参花提取物，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。
在另一方面，本发明提供了一种制备所述组合物的方法，其包括以下步骤：将作为第一溶剂的水或醇加入到人参花中，然后重复进行加压-减压提取过程以进行第一提取。而且，所述制备方法还包括以下步骤：用含氯有机溶剂将生成的第一提取物分级，去除含氯有机溶剂层，然后用作为第二溶剂的醇提取水层。当所述第一溶剂为醇时，所述方法可包括在用含氯有机溶剂分级前将所述第一提取物溶于水中。
所述醇可为具有1至5个碳原子的低级醇，包括甲醇、乙醇、丁醇、丙醇及异丙醇等。而且，其可为有机溶剂，例如，极性溶剂(诸如乙酸乙酯)、非极性溶剂(诸如己烷或二氯甲烷)、或其混合物。特别地，所述醇可为10％(v/v)至90％(v/v)乙醇，更特别为80％(v/v)乙醇。本发明的第一溶剂可为水或醇，而第二溶剂可为醇。特别地，所述第一溶剂可为水，而所述第二溶剂可为乙醇。
所述含氯有机溶剂(其为含有氯的有机溶剂)可为选自以下溶剂中的一种或多种：二氯甲烷、氯仿、氯甲烷及四氯化碳。特别地，其可为二氯甲烷。
所述第一溶剂、第二溶剂及含氯有机溶剂可能彼此相同或不同。
当如上所述进行加压-减压提取过程时，可最小化人参花的热变性从而最小化人参皂苷的变性。因此，相较于使用不进行加压-减压的常规简单提取装置提取人参花的情况，可将提取收率提高10％或更多。
此外，使用含氯有机溶剂(如二氯甲烷)能够去除叶绿素，而用有机溶剂(如乙醇)二次提取水层可最大化人参皂苷的含量。
下文将参考以下实施例及试验例来描述本发明。然而，提供以下实施例及试验例仅用于说明目的以便于理解本发明，而本发明的范围并未受限于此。
[比较例]使用一般提取过程制备人参花提取物
[比较例1及2]使用一般提取过程制备人参花提取物粉末
用纯水清洗由韩国尚州及安东收集的人参花，用热空气干燥或自然干燥，然后粉碎以获得细颗粒的人参花粉末。然后在低温下储存该粉末。然后，将10L水加入到0.5kg人参花粉末中，于30℃下提取该混合物。将所得的提取物过滤并浓缩至固体含量为50％。进行二氯甲烷(MC)分级，以从所得的浓缩物中去除叶绿素。然后取水层，向其中加入乙醇直至成为80％乙醇。浸渍12小时以去除糖，然后将溶液过滤并丢弃沉淀物。然后，将滤液浓缩直到去除乙醇，以制得125g人参花提取物粉末(比较例1及2)。
[比较例3]根据一般提取过程制备人参花提取物以分析人参皂苷并确定抗菌肽的表达
通过与比较例1及2的制备方法相同的方法，在以下条件下处理人参花(紫茎变种(violet-stem variant))以制备125g人参花提取物(比较例3)：24小时、水温30℃、及大气压。
[比较例4]根据热水提取法制备人参花提取物以确定抗菌肽的表达
将10L水加入到0.5kg人参花(紫茎变种)粉末中，于95℃下提取该混合物。将所得的提取物过滤并浓缩至固体含量为50％。然后，进行与上述比较例1及2相同的方法(如二氯甲烷分级、添加乙醇、过滤及浓缩)以制备125g人参花提取物(比较例4)。
[实施例]根据加压-减压提取过程制备人参花提取物
[实施例1及2]根据加压-减压提取过程制备人参花提取物粉末
用纯水清洗由韩国尚州及安东收集的人参花，用热空气干燥或自然干燥，然后粉碎以获得细颗粒的人参花粉末。然后在低温下储存该粉末。然后，将10L水加入到0.5kg人参花粉末中，然后以重复加压-减压提取过程进行提取24小时，各提取使用压力循环提取装置进行15分钟。加压提取压力为80Mpa，且减压提取压力为大气压。提取温度被设定为30℃。将通过上述过程获得的人参花提取物过滤并浓缩至固体含量为50％。进行二氯甲烷(MC)分级以从所得的浓缩物中去除叶绿素。然后取水层，向其中加入乙醇直到成为80％乙醇。浸渍12小时以去除糖，然后将溶液过滤并丢弃沉淀物。然后，将滤液浓缩直到去除乙醇以制得125g人参花提取物粉末(实施例1及2)。
[实施例3]根据加压-减压提取过程制备人参花提取物以分析人参皂苷并确定抗菌肽的表达
通过与实施例1及2的制备方法相同的方法，在以下条件下处理人参花(紫茎变种)以通过加压-减压提取过程制备125g人参花提取物(实施例3)，用以分析通过加压-减压提取过程获得的提取物的人参皂苷：24小时、水温30℃、加压提取压力为80Mpa、且减压提取压力为大气压。
[试验例1]对各提取过程的人参皂苷Re的收率及绝对量的比较
对获得的人参花提取物粉末(比较例1及2与实施例1及2)进行HLPC分析，条件如下：
人参皂苷Re的HPLC分析条件
-柱:CAPCELL PAK C18(SHISEIDO)
-检测器(测量波长):UV吸收检测器(203nm)
-进样量，流速:20uL,1.0mL/min
-流动相:HPLC梯度条件(A:去离子水,B:50％BeCN)
表1
时间 泵A 泵B
0 50 50
15 35 65
16 0 100
20 0 100
21 50 50
35 50 50
35 停止
下表2显示人参花提取物粉末(比较例1及2与实施例1及2)的人参皂苷Re的收率及绝对量(g)的结果。以100g人参花粉末为基础计算人参皂苷Re的绝对量。
表2:对各提取条件下人参皂苷Re的收率及绝对量的比较
*以100g人参花粉末为基础计算人参皂苷Re的绝对量。
如表2所示，相较于通过一般提取过程提取的相同种类的人参花提取物(比较例1及2)，发现通过加压-减压提取过程提取的人参花提取物(实施例1及2)的收率分别增加11％及10％。而且，相较于通过一般提取过程提取的相同种类的人参花提取物(比较例1及2)，发现通过加压-减压提取过程提取的人参花提取物的人参皂苷Re量(实施例1及2)分别增加0.66g及0.73g(以100g人参花粉末为基础)。
[试验例2]确定加压-减压提取过程的最佳条件
在试验例1中，发现加压-减压提取过程在人参皂苷Re的收率及绝对量方面很优异。为了确定加压-减压提取过程的最佳条件，按序改变处理时间、温度及压力条件，比较人参皂苷Re的收率及绝对量(g；以100g人参花粉末为基础)。
确认最佳时间条件
使用与实施例1及2的制备方法相同的方法，在以下条件下根据加压-减压提取过程制备人参花提取物粉末：水温30℃，加压提取压力为80MPa，减压提取压力为大气压，分别持续1小时、6小时、12小时及24小时。在与试验例1相同的分析条件下进行HPLC分析。结果如表3所示。
表3:对随时间改变的人参花提取物的人参皂苷Re的收率及绝对量的比较
时间 收率(％) Re绝对量(g；以100g人参花提取物为基础)
1小时 33.11 2.48
6小时 27.51 2.15
12小时 33.08 2.48
24小时 33.67 2.76
确认最佳温度条件
使用与实施例1及2的制备方法相同的方法，在以下条件下根据加压-减压提取过程制备人参花提取物粉末：24小时，加压提取压力为80MPa，减压提取压力为大气压，分别在从20℃至30℃及40℃的不同水温下。在与试验例1相同的分析条件下进行HPLC分析。结果如表4所示。
表4:对不同水温下的人参花提取物的人参皂苷Re的收率及绝对量的比较
温度 收率(％) Re绝对量(g；以100g人参花提取物为基础)
20℃ 29.10 2.15
30℃ 33.67 2.76
40℃ 35.98 2.59
确认最佳压力条件
使用与实施例1及2的制备方法相同的方法，在以下条件下根据加压-减压提取过程制备人参花提取物粉末：24小时，30℃水温，减压提取压力为大气压，从大气压(与对照组、比较例1及2的人参花提取物粉末的制备过程中的压力相同)至10MPa、20MPa、40MPa及80MPa的不同加压提取压力。在与试验例1相同的分析条件下进行HPLC分析。结果如表5所示。
表5:对不同加压提取压力下的人参花提取物的人参皂苷Re的收率及绝对量的比较
如表3至5所示，发现在以下条件下获得人参皂苷Re的最佳收率及最高绝对量：24小时、30℃水温、加压提取压力为80MPa。
[试验例3]分析人参皂苷
试验例2中确认了加压-减压提取过程的最佳条件。为了分析通过加压-减压提取过程获得的提取物的人参皂苷，在此测试中分析通过一般提取过程制备的人参花提取物(比较例3)以及通过加压-减压提取过程制备的人参花提取物(实施例3)的人参皂苷含量。
在与试验例1相同的分析条件下对比较例3及实施例3的人参花提取物进行HPLC分析。结果如图1所示。下表6显示由以上结果获得的在人参花提取物中所含的人参皂苷各成分的绝对量(g；以100g人参花粉末为基础)。
[表6]对通过一般提取过程及加压-减压提取过程制备的人参花提取物的人参皂苷各成分的绝对量(单位:g)的比较分析
如表6所示，发现相较于通过一般提取过程获得的人参花提取物(比较例3)，通过加压-减压提取过程获得的人参花提取物(实施例3)所包含的人参皂苷成分多出约30％至112％。也发现实施例3的人参花提取物所含的人参皂苷的总重显著高于比较例3。
[试验例4]确认抗菌肽基因的表达
为了确认在试验例2的最佳条件下制备的人参花提取物对抗菌肽基因表达的效应，进行以下测试。于该测试中使用的抗菌肽基因为hBD2(人β防御素2)、hBD3(人β防御素3)及牛皮癣素。
使用KGM-gold(Lonza,#00192151)培养基使角质细胞生长，然后将25,000个角质细胞加入到六孔板中并培养24小时。将通过95℃热水提取法获得的人参花提取物(比较例4)、通过一般提取法在大气压下获得的人参花提取物(比较例3)以及通过80MPa加压提取压力下的加压-减压提取获得的人参花提取物(实施例3)在培养基中稀释至40ppm，然后施用至角质细胞。对照组(无处理组)未经处理。在反应24小时后，将1mL的trizol加入到细胞中以提取RNA，并于室温下进行均质化5分钟。将该混合物移至1.5mL管中，向其中加入0.1mL氯仿。将混合物手动振摇15秒，使其于室温下反应15分钟，然后于4℃下以13,000rpm离心15分钟。将0.4mL澄清上清液转移置新管中，向其中加入0.5mL异丙醇，将混合物手动振摇15秒。于室温下反应8分钟，然后于4℃下以13,000rpm将该混合物离心8分钟。丢弃上清液，将0.5mL的75％乙醇加入到所获得的团块中，接着于4℃下以10,000rpm离心5分钟。丢弃上清液，将22μL去离子水加入到所获得的团块中以溶解纯RNA。通过使用分光光度计测量260nm下的吸光度以确定RNA的量。然后，将4μg的RNA、3.5μL的10×RT缓冲液(Invitrogen,#18080-051)、2μL的50μM寡核苷酸dT、3.5μL的0.1M DTT、7μL的25mM MgCl2、3μL的10mMdNTP、1μL的RNAaseOutTM及1μL的Superscript III混合以合成cDNA。然后，加入去离子水以达到35μL。使用PCR仪器于50℃下进行RT反应60分钟。将165μL去离子水加入到35μL所得的cDNA混合物中以达到总计200μL。为了进行实时定量聚合酶链反应(real-time qPCR)，将5μL的cDNA混合物、4μL去离子水、10μL的Taqman 2X Universal PCR Master Mix(ABI,#4304437)及1μL的Taqman引物(对照组基因:RPLP0，测试组基因:hBD2、hBD3、牛皮癣素)混合以达到总计20μL。然后，将该溶液加入到一96孔PCR管的各孔中，然后将其加载至实时聚合酶链反应仪器(ABI,model:7500fast)中。该反应设定如下：1.保持阶段:95℃(10分钟)；2.循环阶段:95℃(15秒)及60℃(60秒)，重复40次循环。于此测试中使用的Taqman引物为商购引物，其是由报告子荧光分子(reporter fluorescent molecule)FAM及淬灭剂NFQ-MGB构成。hBD2、hBD3及牛皮癣素基因表达量的比较结果如图2所示。
如图2所示，发现相较于未处理组(对照)、热水提取物(比较例4)及通过一般提取方式在大气压下获得的提取物(比较例3)，通过在80MPa加压提取压力下的加压-减压提取过程获得的人参花提取物(实施例3)表现出抗菌肽基因hBD2、hBD3及牛皮癣素表达水平的增加。因此，发现通过加压-减压提取在最佳条件下制备的含有特定量的人参皂苷的人参花提取物通过增加抗菌肽的表达来增强皮肤屏障功能。
以下描述根据本发明一方面的组合物的制剂实施例。然而，其可被配制成各种其他形式。这些实施例仅用于说明目的而非有意限制本发明的范围。
[制剂实施例1]保湿剂(moisturizer)
根据常规方法，以下表7所示组成制备保湿剂。
表7
[制剂实施例2]滋润乳液(lotion)
根据常规方法，以下表8所示组成制备滋润乳液。
表8
成分 含量(wt％)
纯水 余量
甘油 3.0
丁二醇 3.0
液体石蜡 5.0
β-葡聚醣 7.0
卡波姆 0.1
实施例3的人参花提取物 1.0
辛酸/癸酸甘油三酯 3.0
角鲨烷 5.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷(cetearyl glucoside) 1.5
脱水山梨糖醇硬脂酸酯 0.4
聚山梨酯60 1.5
防腐剂 q.s.
香料 q.s.
色素 q.s.
三乙醇胺 0.1
总计 100
[制剂实施例3]滋润霜
根据常规方法，以下表9所示组成制备滋润霜。
表9
[制剂实施例4]发膜(Hair pack)
根据常规方法，以下表10所示组成制备发膜。
表10
[制剂实施例5]软膏剂
根据常规方法，以下表11所示的组成制备软膏剂。
表11
成分 含量(wt％)
实施例3的人参花提取物 2.0
β-1,3-葡聚醣 10.0
蜡 10.0
聚山梨酯 5.0
PEG 60氢化蓖麻油 2.0
脱水山梨糖醇倍半油酸酯 0.5
凡士林 5.0
液体石蜡 10.0
角鲨烷 5.0
雪亚脂(shea butter) 3.0
辛酸/癸酸甘油三酯 5.0
甘油 10.0
丙二醇 10.2
三乙醇胺 0.2
防腐剂，色素，香料 q.s.
纯水 余量
总计 100
制剂实施例6:供局部施用的药品(贴剂)
根据常规方法，以下表12所示的组成制备供局部施用的药品(贴剂)。
表12
[制剂实施例7]散剂的制备
实施例3的人参花提取物 2g
乳糖 1g
将以上成分混合并装入气密囊袋以制备散剂。
[制剂实施例8]片剂的制备
将以上成分混合并根据制备片剂的常规方法压片以制备片剂。
[制剂实施例9]胶囊剂的制备
将以上成分混合并根据制备胶囊剂的常规方法装入明胶胶囊中以制备胶囊剂。
[制剂实施例10]丸剂的制备
将以上成分混合并根据常规方法制备成重4g的丸剂。
[制剂实施例11]颗粒剂的制备
将以上成分混合，加入100mg的30％乙醇，并在60℃下干燥以形成颗粒，并将所得的颗粒装入囊袋中。
[制剂实施例12]饮料
将50mg实施例3的人参花提取物、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸及25g液体寡糖混合，并加入300ml纯水。将200ml所得混合物装入各瓶中。在装入瓶中之后，将混合物在130℃下灭菌4至5秒以制备饮料。
[制剂实施例13]焦糖制剂
可通过将50mg实施例3的人参花提取物、1.8g玉米糖浆、0.5g脱脂牛奶、0.5g大豆卵磷脂、0.6g黄油、0.4g氢化植物油、1.4g糖、0.58g人造黄油及20mg食盐混合来形成焦糖制剂。

Claims (17)

1.用于增强皮肤屏障功能的组合物，其包含作为活性成分的人参花提取物，基于100重量份的作为提取原料的干燥人参花，所述人参花提取物包含至少2.30重量份的人参皂苷Re。
2.如权利要求1所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，其还包含以下成分中的一种或多种：至少0.25重量份的人参皂苷Rb1、至少0.20重量份的人参皂苷Rb2、至少0.20重量份的人参皂苷Rc、至少0.60重量份的人参皂苷Rd和至少0.25重量份的人参皂苷Rg1。
3.如权利要求1所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述组合物增加抗菌肽基因的表达。
4.如权利要求3所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述抗菌肽基因为选自以下基因中的一种或多种：人β防御素2(hBD2)、人β防御素3(hBD3)和牛皮癣素。
5.如权利要求1所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中基于所述组合物的总重，所述组合物包含0.0001wt％至99wt％的人参花提取物。
6.如权利要求1所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述人参花提取物是重复加压-减压提取的提取物。
7.如权利要求1至6中任一项所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述组合物为药物组合物。
8.如权利要求1至6中任一项所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述组合物为化妆品组合物。
9.如权利要求1至6中任一项所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述组合物为食品组合物。
10.制备权利要求1至6中任一项所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物的方法，其包括以下步骤：
将作为第一溶剂的水或醇加入到人参花中，然后重复进行加压-减压提取过程以进行第一提取。
11.如权利要求10所述的制备组合物的方法，其还包括以下步骤：
用含氯有机溶剂将生成的第一提取物分级，去除含氯有机溶剂层，然后用作为第二溶剂的醇提取水层，
其中，当所述第一溶剂为醇时，所述方法包括在分级前将所述第一提取物溶于水中。
12.如权利要求10所述的制备组合物的方法，
其中所述加压-减压提取过程重复进行18至30小时以进行提取。
13.如权利要求10所述的制备组合物的方法，
其中所述加压-减压提取过程于25℃至35℃下进行。
14.如权利要求10所述的制备组合物的方法，
其中加压提取压力为60MPa至100MPa，并且减压提取压力为大气压。
15.如权利要求10所述的制备组合物的方法，
其中所述第一溶剂为水。
16.如权利要求11所述的制备组合物的方法，
其中所述含氯有机溶剂为二氯甲烷，并且所述第二溶剂为乙烯。
17.如权利要求1所述的用于增强皮肤屏障功能的组合物，
其中所述组合物是通过权利要求10至16中任一项所述的方法制备的。
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