CN110214141B - 作为ENaC抑制剂的苯并二唑鎓化合物 - Google Patents

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Abstract

通式(I)化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5和X如本文中定义，其为上皮钠通道(ENaC)的抑制剂，并且可用于治疗或预防呼吸疾病和病症、皮肤病症以及眼病症。

Description

作为ENaC抑制剂的苯并二唑鎓化合物
本发明涉及新化合物，其具有作为上皮钠通道(ENaC)抑制剂的活性。 本发明还涉及以这些化合物在治疗由ENaC调节的疾病和病症，特别是呼 吸疾病和病症的用途，制备化合物的方法，以及包含它们的药物组合物。
人类每天可吸入高达12,000L的空气，并且也可能跟随吸入空气中的 病原体(细菌、病毒、真菌孢子)。为了保护而对抗这些空气中的病原体，肺 已发展出先天防御机制，以最小化气道感染和微生物生长的可能性。一种 此类机制为粘液清除系统，通过纤毛的协调摆动和咳嗽清除，将分泌的粘 液上推并且排出气道。肺的这种持续“清除作用”持续排除吸入的颗粒和 微生物，从而降低感染风险。
近年来，已经清楚粘液胶体的水合作用对粘液清除能力很重要 (Boucher 2007；Matsui等人，1998)。在正常的健康气道中，粘液胶体通常 为97％的水和3％的固体，在这些条件下，通过粘膜纤毛作用来清除粘液。 气道粘膜的水合作用通过许多离子通道和转运体的协调活性来调节。通过 囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)和钙活化的氯传导(CaCC；TMEM16A，还称为Ano1)以及通过上皮Na+通道(ENaC)的Na+吸收介导 的阴离子平衡(Cl-/HCO3 -)分泌的平衡决定了气道粘膜的水合状态。当离子 转运通过上皮时，水随渗透性被迫跟随转运，因此流体会分泌或被吸收。 当离子转运通过上皮时，水随渗透性被迫跟随转运，因此流体会分泌或被 吸收。
在呼吸疾病例如慢性支气管炎和囊性纤维化中，当水合作用下降时， 粘液胶体中的固体％增加，并且粘液清除下降(Boucher,2007)。在囊性纤 维化中，当出现CFTR的功能缺失突变时，会降低气道分泌流体的能力， 固体％可以上升到15％，认为会造成小气道阻塞和缺失粘液清除。此外， 已经在几个群体中报告囊性纤维化中的ENaC活性提高(Knowles等人， 1983；Middleton等人，1993)，并且这种ENaC功能提高已显示与疾病严 重性相关(Fajac等人，2004；Leal等人，2008)。提高气道粘液水合作用的 策略包括刺激阴离子，从而刺激流体分泌，或抑制Na+吸收。最后，阻断 ENaC的活性将会抑制Na+吸收，并且因此增加气道粘膜中的流体累积、 粘液水合以及加强粘液清除机制。
ENaC在肾、直肠、角膜、汗腺与呼吸上皮中表达，其中其形成低传 导通道(～4pS)，针对Na+的选择性是针对K+的约10倍(Kellenberger 2002)。 在通道中的功能缺失和获得的突变会引起人类的疾病，包括I型假性醛固 酮减少症(PHA1)(一种盐消耗疾病)(Chang等人，1996)，和Liddles综合征 (一种与盐滞留和高血压有关的疾病)(Botero-Velez等人，1994)。特别注意 在肺生理学上，在ENaC功能缺失突变的PHA1患者中观察到气道粘膜纤 毛清除(MCC)速率高于正常健康群体，通常快3-4倍(Kerem等人，1999)。 此外，这些患者的上气道似乎是“湿的”，与正常相比具有额外的水合作 用。这些观察进一步支持了ENaC在人类气道中调节水合作用的显著角色， 以及通过加强MCC和先天防御可以传递在气道中阻断ENaC的治疗益处。
阿米洛利(Amiloride)是ENaC的小化合物阻断剂，已证实了在健康对 照组和CF患者中提高MCC，进一步支持了此机制的生理重要性(App等 人，1990)。然而，吸入的阿米洛利对临床终点缺少可靠效应(Bowler等人， 1995；Graham等人，1993；Knowles等人，1990；Pons等人，2000)归因 于此化合物在肺中的作用时间短(Noone等人，1997)。因此特别设计用于在 气道中长时间作用的新ENaC阻断剂预期可快速提供扩大加强MCC，产 生长期临床益处。
用于治疗呼吸疾病的吸入的ENaC阻断剂的设计需挑战高钾血症的基 于肾的副作用的可能性(Perazela等人，2000)。ENaC在肾上皮的皮质集合 管中表达，并且在此阻断通道可以引起全身K+累积。因此，希望吸入的 ENaC阻断剂来避免肺吸入后的肾暴露。这可以通过ENaC阻断剂的肺高 滞留性来实现，因此仅需施用低剂量，或通过设计在到达肾之前快速转化 成非活性代谢物的化合物来实现。
ENaC阻断剂还涉及皮肤和眼表面的水合作用(Frateschi等人，2010； Thelin等人，2012)。
已知数种ENaC阻断剂。例如：WO 2011/113894涉及据说用于治疗 炎性或阻塞性气道疾病或促进粘膜水合作用的化合物。该化合物如下式：
Figure GDA0002817691790000031
其中A是N或CR4a，并且R2是卤代烷基。此文献没有列举出任何包 含苯并咪唑部分的化合物。
WO 2011/079087涉及下式化合物：
Figure GDA0002817691790000032
WO 2015/007516、WO 2015/007517和WO 2015/007519均涉及下式 化合物：
Figure GDA0002817691790000033
WO 2016/113168、WO 2016/113167和WO 2016/113169涉及下式化 合物：
Figure GDA0002817691790000034
WO 2016/113170涉及下式化合物：
Figure GDA0002817691790000041
这些文献中描述的化合物均包含6-卤代-3,5-二氨基吡嗪基，并且此基 团也是许多其它文献所公开的ENaC抑制剂的结构特色，这些文献包括 WO 2013/0664450、WO 2013/092674、WO 2014/044849、WO 2014/177469、 WO 2015/003958、WO 2015/018754、WO 2011/028740、WO 2007/071396、 WO 2007/071400、WO 2008/135557、WO 2009/074575、WO 2009/138378、 WO 2009/150137和WO 2012/035158。其它与具有ENaC抑制剂活性的吡 嗪衍生物有关的文献包括WO 2015/003083、WO 2004/073629、WO 03/070184、WO 03/070182、WO2006/022935、WO 2007/018640、WO 2008/124491、WO 2009/139948、WO 2005/044180、WO2005/016879、WO 2005/018644、WO 2005/025496、WO 2005/034847和WO 2013/181232。然而，这些文献所列举的每种化合物均包含6-卤代-3,5-二氨基吡嗪基，因此 在3-与5-位具有氨基取代基和6-卤代取代基的吡嗪环显然直到最近仍被认 为是ENaC阻断活性的必要条件。
有些最近文献涉及ENaC阻断化合物，其中没有5-氨基。例如WO 2017/028926涉及下式的ENaC抑制化合物：
Figure GDA0002817691790000042
并且WO 2017/028927涉及下式的ENaC抑制化合物：
Figure GDA0002817691790000043
我们的早期申请PCT/GB2017/051815还涉及包含吡嗪基的化合物，其 在3-位具有一个氨基取代基，这些化合物的大多数还在吡嗪6-位具有取代 基。
本发明人已经令人惊奇地发现，具有6-卤代-3,5-二氨基吡嗪或6-取代 的-3-氨基吡嗪的替代结构的化合物也具有ENaC阻断活性，并且与已知化 合物相比可能具有有益性质，特别是与ADME(吸收、排泄、分布和代谢) 相关的性质。
本发明提供了通式(I)化合物，包括其所有互变异构体、所有对映异构 体和同位素变体以及盐：
Figure GDA0002817691790000051
其中
X-是阴离子；
R1是：
i.H或卤代；或
ii.-L1R10，其中
L1是：
-Z1-、-Q1-、-Z1Q1-、-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-、-Q1Q2Z1Q3Z2-、 -Z1Q1OQ2OQ3-；
-OZ1-、-OQ1-、-OZ1Q1-、-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2-、-OQ1Q2Z1-、 -OQ1Q2Z1Q3Z2-、-OZ1Q1OQ2OQ3-；
-Z1N(R7)Z2-、-Q1Z1N(R7)Z2-、-Z1N(R7)Z2Q1-、-Q1Z1N(R7)Z2Q2Z3-；
-Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-Z1O(CH2CH2O)nQ1-、-Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1、 -Z1O(CH2CH2O)nQ1Z2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nQ1-、 -Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1、-Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1Z3-；
-C(O)Z1-、-C(O)Q1-、-C(O)Z1Q1-、-C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、- C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Q3-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-、-C(O)Z1Q1OQ2OQ3-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、 -C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、- C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、- C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、- C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；
-Z1C(O)N(R7)Z2-、-Z1C(O)N(R7)Q1-、-Z1C(O)N(R7)Z2Q1-、- Z1C(O)N(R7)Q1Z2-、-Z1C(O)N(R7)Q1Q2-、-Z1C(O)Q1-、-Z1C(O)Q1Z2-、- Z1C(O)Q1Q2-、-Z1C(O)N(R7)Q1Q2Z2-；
-C(O)OZ1-、-C(O)OQ1-、-C(O)OZ1Q1-、-C(O)OZ1Q1Z2-、-C(O)OQ1Z1-、 -C(O)OQ1Q2-、-C(O)OQ1Q2Z1-；
-Q1C(O)Q2-、Q1C(O)Z1-、-Q1C(O)Q2Z1-、Q1C(O)Q2Q3-、Q1C(O)Z1Q2-、 Q1C(O)Q2Q3Z1-；
-C(＝NR9)N(R7)Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Q1-、-C(＝NR9)N(R7)Z1Q1-、- C(＝NR9)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Q2-或 C(＝NR9)N(R7)Q1Q2Z1-；其中
Z1、Z2与Z3各自独立地是C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基， 其中任一个任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OH、 C(O)NR15R16、C(O)OR15和NR15R16；
R15和R16各自独立地是H或C1-6烷基，或者R15和R16与它们所连接 的氮原子一起可以形成5-或6-元杂环，其任选包含一个或多个选自N、O 和S的另外的杂原子；
Q1、Q2和Q3各自独立地是碳环基、杂环基、芳基或杂芳基，其中任 一个任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OH、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C(O)NR15R16、C(O)OR15和NR15R16，并且对于环烷基和杂环 基，则为氧代，其中R15和R16如上述定义；
n是1至6；
R7和R8各自独立地选自H和任选被一个或多个卤代或OH基团取代 的C1-12烷基，或者
当一个R7和一个R8或两个R8基团与氮原子连接时，它们可以一起与 氮原子组合形成5-或6-元杂环，其任选包含一个或多个选自N、O和S的 另外的杂原子；
R9是H或C1-6烷基；
R10是H、-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2、-N(R7)-C(O)OR8、OR7或 -C(O)OR7；或者
选自下列的阳离子：-N(R7)-C(O)-(C1-3亚烷基)-N+(R8)3和-N+(R8)3，在 该情况中，将需要另外的阴离子X-；并且
R7、R8和R9如上述定义；或者
iii.-R12、-OR12、-SO2R12、-C(O)OR12、-C(O)NR12R13、-C(＝NR9)NR12R13、 -Q1R12-、-Q1OR12、-Q1SO2R12、-Q1C(O)OR12、-Q1C(O)NR12R13、- Q1C(＝NR7)NR12R13、-Q1Q2OR12、-Q1SO2R12、-Q1Q2C(O)OR12、- Q1Q2C(O)NR12R13或-Q1Q2C(＝NR9)NR12R13；其中
Q1和Q2如上述定义；并且
R12和R13各自独立地是H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷 基或C3-8杂环基，其中任一个任选被一个或多个选自下列的取代基取代： 卤代、OR7、C(O)OR7、-N(R7)R8与C(O)N(R7)R8，并且在环烷基或杂环基 的情况下，则为氧代；其中
R7、R8和R9如上述定义；
R2和R3各自独立地是C1-10烷基，其中一个或多个-CH2-基团任选被- O-、-S-或-NR7-代替，条件是不能如此置换相邻的-CH2-基团并且其任选被 一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OH、SH、N(R7)R8、芳基、杂 芳基、环烷基、杂环基、-C(O)OR7、-C(O)N(R7)R8、OR7和-N(R7)R8，其 中R7和R8如上述定义；
R4为H、卤代、氰基、C1-6烷基、C(O)OR16或C(O)N(R16)R17；
其中烷基任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、-OR7和- N(R7)R8，其中R7和R8如上述定义；
R16和R17各自独立地是H或C1-6烷基，或者R16和R17与它们所连接 的氮原子一起可以形成5-或6-元杂环，其任选包含一个或多个选自O、N 和S的另外的杂原子；并且
R5是H或甲基。
通式(I)化合物具有ENaC阻断活性，并且另外预期具有下列一种或两 种有利性质。
·有效的体内粘膜纤毛清除。
·延长的肺滞留，从而减少产生与b.i.d.或q.d.给药相称而不引起高钾 血症的足够抑制ENaC所需剂量。
在本说明书中，除非上下文有语言或必要的暗示的需要，否则用语“包 含”或其变化，例如“包括”或“含有”是包括在内的含义，即指明存在 所述的特征，但不排除在本发明的多种实施方案中出现或增加其它特征。
在本说明书中，提及的“药物用途”指用于施用于人类或动物，特别 是人类或哺乳动物，例如驯养或畜养的哺乳动物，用于治疗或预防疾病或 医学病症。术语“药物组合物”指适合医药用途的组合物，并且“可药用 的”指适合用于药物组合物的活性剂。其它类似术语可因此同样解读。
在本说明书的上下文中，术语“复数”指两个或更多个。
阴离子X-可以具有任何负电荷，并且将被适当数量的阳离子平衡。因 此，例如通式(I)化合物，其中X-是具有单一负电荷的阴离子，将具有1:1 比例的阳离子:阴离子，而如果阴离子X-具有-2的电荷时，通式(I)化合物 中的阳离子:阴离子比例将为2:1。阴离子X-适合地是药理上可接受的阴离 子，但其它阴离子也可能是有用的，特别是在合成通式(I)化合物的前体中。 合适的阴离子X-包括卤离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、甲酸根、乙酸根、 三氟乙酸根、富马酸根、柠檬酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、扁桃 酸根、甲磺酸根和对甲苯磺酸根。如果R1取代基包含呈阳离子的部分R10时，将需要其它阴离子X-或具有另外的负电荷的阴离子，例如-2电荷，以 平衡通式(I)化合物的电荷。
所有通式(I)化合物是盐。在本说明书中，提及式(I)化合物的盐时，可 以指另外的碱性氮原子(例如R7与R8部分连接的氮原子)的盐。这些盐的 抗衡离子如X-的定义。
或者，当R1、R2或R3包含羧基C(O)OH时，可以形成盐。适合这些 盐的抗衡离子包括钠、钾、钙、铝、锌、镁和其它金属离子，以及胆碱、 二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺、甲基葡糖胺以及概括于Paulekuhn等人(2007) J.Med.Chem.50：6665-6672和/或本领域技术人员已知的其它众所周知的 碱加成盐。在一些情况中，R2或R3可以包含阴离子基团，例如C(O)O-， 其可以用作苯并咪唑鎓环中N+部分的抗衡离子。
在本说明书中，术语“C1-6”烷基指具有1至6个碳原子的直链或支链 完全饱和的烃基团。该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、 异丁基和叔丁基。其它烷基，例如C1-12烷基和C1-4烷基，如上述定义，但 包含不同数量的碳原子。
术语“C2-6烯基”指具有2至6个碳原子和至少一个碳-碳双键的直链 或支链烃基团。实例包括乙烯基、丙-1-烯基、己-2-烯基等。其它烯基，例 如C1-12烯基，除了包含指定碳原子数(例如1至12个)外，其它均如上述定 义。
术语“C2-6炔基”指具有2至6个碳原子和至少一个碳-碳三键的直链 或支链烃基团。实例包括乙炔基、丙-1-炔基、己-2-炔基等。其它炔基，例 如C2-12炔基，除了包含指定碳原子数(例如2至12个)外，其它均如上述定 义。
术语“C1-6亚烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链完全饱和的 烃链。亚烷基的实例包括-CH2-、-CH2CH2-、CH(CH3)-CH2-、CH2CH(CH3)-、 -CH2CH2CH2-、-CH2CH(CH2CH3)-和-CH2CH(CH2CH3)CH2-。其它亚烷基， 例如C1-12亚烷基，除了包含指定碳原子数(例如1至12个)外，其它均如上 述定义。
术语“C2-6亚烯基”指包含2至6个碳原子和至少一个碳-碳双键的直 链或支链烃链。亚烯基的实例包括-CH＝CH-、-CH＝C(CH3)-、-CH2CH＝CH-、 -CH＝CHCH2-、CH2CH2CH＝CH-、CH2CH＝C(CH3)-和- CH2CH＝C(CH2CH3)-。其它亚烯基，例如C2-12亚烯基，除了包含指定碳原 子数(例如2至12个)外，其它均如上述定义。
术语“C2-6亚炔基”指包含2至6个碳原子和至少一个碳-碳三键的直 链或支链烃链。亚烯基的实例包括-C≡C-、-CH2C≡C-、-C≡C-CH2-、 CH2CH2C≡C-、CH2C≡CCH2-和-CH2CH≡C-CH2CH2-)-。其它亚炔基，例如 C2-12亚炔基，除了包含指定碳原子数(例如2至12个)外，其它均如上述定 义。
术语“碳环”与“碳环基”指包含3至10个环碳原子的非芳族烃环 系，除非另有其它说明，并且任选包含一个或多个双键。碳环基可以是单 环或者可以包含可以稠合或桥连的两个或三个环。实例包括环丙基、环丁 基、环戊基、环己基、环戊烯基和环己烯基。
在本说明书的上下文中，术语“杂环”和“杂环基”指包含3至10个 环原子(包括至少一个选自N、O和S的杂原子)的非芳香环系。杂环基可 以是单环或者可以包含可以稠合或桥连的两个或三个环。实例包括四氢呋 喃基、四氢吡喃基、吡咯烷、哌啶基、吗啉基、哌嗪基和硫代吗啉基。
在本说明书的上下文中，术语“芳基”和“芳族的”指具有芳族特性 的含有5至14个环碳原子并且包含至多三个环的环系。当芳基包含超过 一个环时，并非所有环必需为完全芳族特性。芳族部分的实例为苯、萘、 芴、茚满和茚。
在本说明书的上下文中，术语“杂芳基”和“杂芳族的”指具有芳香 系特性的含有5至14个环原子，其中至少一个环原子是选自N、O和S的 杂原子并且包含至多三个环的环系。当杂芳基包含超过一个环时，并非所 有环必需为完全芳族特性。杂芳基的实例包括吡啶、嘧啶、吲哚、苯并呋 喃、苯并咪唑和indolene。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘，术语“卤代”指氟、氯、溴或碘基 团，并且“卤化物”指氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。
术语“C1-6卤代烷基”用于本文中指如上述定义的C1-6烷基，其中一 个或多个氢原子被卤代基团代替。任何数量的氢原子可以被代替，至多全 卤代取代。实例包括三氟甲基、氯乙基和1,1-二氟乙基。其它卤代烷基， 例如C1-12卤代烷基，除了包含指定碳原子数(例如1至12个)外，其它均如 上述定义。
术语“同位素变体”指同位素标记的化合物，其与式(I)所示的那些相 同，但其中一个或多个原子被具有与天然最常见的原子质量或质量数不同 的原子质量或质量数的原子代替，或其中具有天然较不常见的原子质量或 质量数的原子的比例已增加(后者的观念称为“同位素富集”)。可以掺入本 发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素， 例如2H(氘)、3H、11C、13C、14C、18F、123I或125I(例如3H、11C、 14C、18F、123I或125I)，其可以是天然存在的或非天然存在的同位素。
正则形式(canonical form)的概念是本领域技术人员很好理解的。因此 通式(I)化合物可以具有如下正则形式：
Figure GDA0002817691790000111
这两种正则形式均包括在本发明范围内。
R1取代基适合地在5-或6-位，因此通式(I)化合物可以是通式(IA)化合 物：
Figure GDA0002817691790000112
其中R1、R2、R3、R4、R5和X-如通式(I)的定义；
或通式(IB)化合物：
Figure GDA0002817691790000121
其中R1、R2、R3、R4、R5和X-如通式(I)的定义。
应注意，由于通式(I)化合物如上述具有不同的正则形式，因此如果R2和R3相同，则5-和6-位是相当的。
在一些适合的通式(I)化合物中，R1是：
H、卤代、-R12、-C(O)OR12或-OR12；特别是H、卤代或C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-O(C1-6烷基)、-O(C2-6烯基)或-O(C2-6炔基)，其中任何一 个任选被一个或多个卤代取代基取代。
在这些化合物中更适合的是，R1是H、卤代、C1-6烷基、C1-6卤代烷 基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基。
这些R1基团的实例包括H、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基和三氟甲氧 基。
在其它适合的通式(I)化合物中，R1是-L1R10。
在这些化合物中适合的是，L1是：
-Z1-、-Q1-、-Z1Q1-、-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-、-Q1Q2Z1Q3Z2-；
-OZ1-、-OZ1Q1-、-OZ1Q1Z2-；
-Z1N(R7)Z2-、-Q1Z1N(R7)Z2-；
-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、 -C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、- C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、- C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、- C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；
-C(O)OZ1-、-C(O)OZ1Q1-、C(O)OZ1Q1Z2-；
-Q1C(O)Q2-、Q1C(O)Z1-、-Q1C(O)Q2Z1-、Q1C(O)Q2Q3-、Q1C(O)Z1Q2- 或Q1C(O)Q2Q3Z1-。
在一些更适合的化合物中，L1是：
-Z1-、-Q1-、-Q1Z1-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-、-Q1Q2Z1Q3Z2-；
-OZ1-；
-Z1N(R7)Z2-、-Q1Z1N(R7)Z2-；
-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、 -C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、- C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；或
-Q1C(O)Q2-。
在其它更适合的化合物中，L1是：
-Z1-、-Q1-、-Q1Z1-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-；
-OZ1-；
-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、 -C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-或- C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-。
在一些适合的化合物中，其中R1是-LR10，环状基团Q1、Q2和Q3独 立地选自5-和6-元芳基和杂芳基以及4至8-元碳环基和杂环基。
更适合地，Q1、Q2和Q3选自苯基、5-和6-元杂芳基以及4-至7-元杂 环基，更适合的是苯基、5-和6-元含氮杂芳基以及4-至7-元含氮杂环基。
此类杂芳基Q1、Q2与Q3基团的实例包括吡啶基、嘧啶基、吡唑基、 咪唑基和
Figure GDA0002817691790000133
唑基，5-元环例如咪唑基和
Figure GDA0002817691790000134
唑基，并且特别是吡唑基特别适 合。当Q1、Q2或Q3是吡唑基时，其可以具有下列区域化学：
Figure GDA0002817691790000141
其中a和b表示与分子的其余部分的连接。
杂环基Q1、Q2和Q3基团的实例包括氮杂环丁烷基、哌啶基、哌嗪基 和氮杂环丙烷基，6-元环例如哌嗪基和哌啶基更适合。哌啶基是特别适合 的杂环基，特别是1,4-哌啶基。
其它更适合的Q1、Q2和Q3基团包括环己基和四氢吡喃基，其中一者 或它们可以被一个或多个选自OH或NR15R16，特别是OH、NH2或NHCH3的取代基取代。
当L1包含连接至Q部分的C(O)部分时，该Q部分可以是含氮杂环基 环，其中C(O)与氮原子连接。
例如在-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Q3-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-中，Q1适合地是通 过环氮原子连接至-C(O)部分的5-或6-元杂环基环。适合地，Q1是5-或6- 元含氮杂环基环，例如哌啶-1-基或吡咯烷-1-基，更适合地是哌啶-1-基。适 合地，当Q1是哌啶-1-基时，分子的其余部分连接至哌啶环的4-位。当Q1是吡咯烷-1-基时，分子的其余部分可以连接至吡咯烷环的3-位。
当L1是-Q1C(O)Q2-、-Q1C(O)Q2Z1-、Q1C(O)Q2Q3-、Q1C(O)Q2Q3Z1- 时，Q2适合地是5-或6-元杂环基环，其通过环氮原子连接至-C(O)部分。 适合地，Q2是哌啶-1-基或吡咯烷-1-基，更适合地是哌啶-1-基。适合地，当 Q1是哌啶-1-基时，分子的其余部分连接至哌啶环的4-位。当Q1是吡咯烷 -1-基时，分子的其余部分可以连接至吡咯烷环的3-位。
然而其它情况中，当L1包含连接至Q部分的C(O)部分时，该Q部分 可以是通过环碳原子连接至C(O)部分的杂环基。杂环基的实例包括5-和 6-元环，适合地是含氮环，例如哌啶基或吡咯烷基。适合地，在这种情况 中，当Q1是哌啶环时，其是哌啶-4-基，以便哌啶的4-位连接至C(O)部分。 适合地，哌啶氮原子连接至分子的其余部分。这种类型的L1部分的实例包 括C(O)Q1Z1，其中Q1可以是哌啶环，其中4-位连接至C(O)，并且1-位连 接至Z1。
当L1包含连接至Q部分的-C(O)N(R7)-部分时，该Q部分适合地是杂 环基环，例如5-或6-元含氮杂环基环，其通过环碳原子连接至-C(O)N(R7)- 部分。
例如，当L1是-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、 -C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、-Z1C(O)N(R7)Q1-、- Z1C(O)N(R7)Q1Z2-或-Z1C(O)N(R7)Q1Q2-时，Q1适合地是5-或6-元杂环基 环，其通过环碳原子连接至-C(O)N(R7)-部分，分子的其余部分连接至环氮 原子。适合地，Q1是哌啶-4-基或吡咯烷基。当Q1是哌啶-4-基时，分子的 其余部分适合地连接至哌啶环的1-位。
对于其它L1基团，其中Q1和/或Q2和/或Q2是哌啶基，它们适合地是 哌啶-1-基或哌啶-4-基。
当L1包含-Q1Q2-或-Q2Q3-部分时，其可能是例如：
Figure GDA0002817691790000151
其中a和b表示连接至分子的其余部分。
其它-Q1Q2-和-Q2Q3-部分的实例包括联苯基，适合地是1,1’-联苯-4-基 部分。这类-Q1Q2-或-Q2Q3-部分适合地在每一侧连接至Z部分，例如在- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-中。
在一些适合的化合物中，其中R1是-L1R10，并且L1包含Z1，任选包 含Z2和Z3，Z1、Z2和Z3各自独立地是C1-12亚烷基，任选被一个或多个卤 代或OH基团取代。
在一些本发明化合物中，R1是L1R10，并且L1包含Z1，任选包含Z2， 并且任选包含Z3部分。
在化合物中，其中L1是：
-Z1-、-Z1Q1-、-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2Z1-、-Q1Q2Z1Q3Z2-、- Z1Q1OQ2OQ3-；
-OZ1-、-OZ1Q1-、-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2Z1-、-OQ1Q2Z1Q3Z2-、 -OZ1Q1OQ2OQ3-；
-Z1N(R7)Z2-、-Q1Z1N(R7)Z2-、-Z1N(R7)Z2Q1-、-Q1Z1N(R7)Z2Q2Z3-；
-Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-Z1O(CH2CH2O)nQ1-、-Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1、 -Z1O(CH2CH2O)nQ1Z2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nQ1-、 -Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1、-Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1Z3-；
-C(O)Z1-、-C(O)Z1Q1-、-C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2Z1-、 -C(O)Q1N(R7)C(O)Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Q3-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-、- C(O)Z1Q1OQ2OQ3-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、- C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、- C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、- C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、-C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、- C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-、- C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；
-Z1C(O)N(R7)Z2-、-Z1C(O)N(R7)Q1-、-Z1C(O)N(R7)Z2Q1-、- Z1C(O)N(R7)Q1Z2-、-Z1C(O)N(R7)Q1Q2-、-Z1C(O)Q1-、-Z1C(O)Q1Z2-、- Z1C(O)Q1Q2-、-Z1C(O)N(R7)Q1Q2Z2-；
-C(O)OZ1-、-C(O)OZ1Q1-、-C(O)OZ1Q1Z2-、-C(O)OQ1Z1-、- C(O)OQ1Q2-、-C(O)OQ1Q2Z1-；
-Q1C(O)Z1-、-Q1C(O)Q2Z1-、-Q1C(O)Z1Q2-、Q1C(O)Q2Q3Z1-；
-C(＝NR9)N(R7)Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Q1-、-C(＝NR9)N(R7)Z1Q1-、- C(＝NR9)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Q2-、 C(＝NR9)N(R7)Q1Q2Z1-；
基团Z1和如果存在的Z2和Z3适合地包含C1-8亚烷基、C2-8亚烯基、 C2-8亚炔基，其任一个任选被一个或多个卤代、OH、C(O)NR15R16、 C(O)OR15或NR15R16取代；其中R15和R16如上述定义。
在一些更适合的化合物中，基团Z1和如果存在的Z2和Z3包含任选被 一个或多个卤代、OH、C(O)NR15R16、C(O)OR15或NR15R16取代的C1-6亚 烷基；其中R15和R16如上述定义。
更适合地，基团Z1和如果存在的Z2和Z3包含未取代的或被一个或多 个卤代、OH、C(O)NR15R16、C(O)OR15或NR15R16取代的C1-4亚烷基，其 中R15和R16各自是H。通常，Z1和如果存在的Z2和Z3包含未取代的或被 一个或多个OH、卤代、C(O)NH2或C(O)OH取代的C1-4亚烷基。
在一些特别适合的化合物中，Z1和如果存在的Z2和Z3是未取代的C1-4亚烷基。
在其它特别适合的化合物中，Z1是被一个或多个卤代、C(O)NH2或 C(O)OH取代的C1-4亚烷基。
当L1是：
-Z1-、-Q1Z1-(其中Q1通过环碳原子连接至Z1)、-Q1Q2Z1-(其中Q2通 过环碳原子连接至Z1)；
-OZ1-；
-C(O)Q1Z1-，其中Q1通过环氮原子连接至C(O)并且通过环碳原子连 接至Z1；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、- C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-时，
这些Z1、Z2和Z3部分特别适合。
在一些通式(I)化合物中，Z1、Z2或Z3可以通过环氮原子直接连接至环 状基团。这可以例如出现在化合物中，其中R1是L1R10，并且L1是：
-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2Z1-、-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2Z1-、- Z1O(CH2CH2O)nQ1Z2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1Z3-、 -C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-、 -C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-、Z1C(O)N(R7)Q1Z2-、 -Z1C(O)Q1Z2-、Z1C(O)N(R7)Q1Q2Z2-、-C(O)OZ1Q1Z2-、-C(O)OQ1Z1-、- C(O)OQ1Q2Z1-；Q1C(O)Q2Z1-、Q1C(O)Q2Q3Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Z1Q1Z2-、 -C(＝NR9)N(R7)Q1Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Q2Z1-。
在一些此类化合物中，Z1或Z2或Z3基团还连接至R10。在这种情况 中，Z1或Z2或Z3基团可以是被一个或多个OH基团，适合地是被多个OH 基团，例如2-11个OH基团取代的C1-12亚烷基。通常，OH基团的数量比 亚烷基中碳原子数少一个。
在这种情况中更适合地是Z1是被2-7个OH基团，例如5-7个OH基 团取代的C1-8亚烷基。
此类适合的Z1或Z2或Z3基团的实例包括-CH2[CH(OH)]n-，其中n适 合地是3-7。最适合地，Z1或Z2或Z3，其中适当是-CH2-CH(OH)-CH(OH)- CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)-。
在此类化合物中，R10适合地是H，以便Z1R10、Z2R10或Z3R10部分是 -CH2[CH(OH)]n-H，其中n适合地是3-7，例如-CH2-[CH(OH)]4-CH2OH。
在其中R1是-L1R10的化合物中，适合的R10基团包括H、-N(R7)R8、- N(R7)C(＝NR9)N(R8)2、-N(R7)C(O)OR8、-N(R7)-C(O)-(C1-3亚烷基)-N+(R8)3、 -N+(R8)3、OR7或-C(O)OR7。
更适合地，R10是H、-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2、-N(R7)C(O)OR8或-C(O)OR7。
当R10是H时，L1适合地是-Z1-、Q1、-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2、- Q1Q2Z1-；
-OZ1-、-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2Z1-；
-Z1O(CH2CH2O)nQ1Z2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2-、- Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1Z3-、-C(O)Z1-、-C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、- C(O)Q1Q2Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-、- C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-、Z1C(O)N(R7)Q1Z2-；
-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-Z1C(O)Q1Z2-、Z1C(O)N(R7)Q1Q2Z2-；
-C(O)OZ1-、-C(O)OZ1Q1Z2-、-C(O)OQ1Z1-、-C(O)OQ1Q2-、 C(O)OQ1Q2Z1-；
-C(O)OQ1Z1-、-C(O)OQ1Q2Z1-；Q1C(O)Q2Z1-、Q1C(O)Q2Q3Z1-、- C(＝NR9)N(R7)Z1-、C(＝NR9)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Z1-、 C(＝NR9)N(R7)Q1Q2Z1-。
在一些更适合的化合物中，当R10是H时，L1是-OZ1，其中Z1如上 述定义，但适合地是任选如上述被取代的C1-8亚烷基。这些化合物中更适 合地是，Z1是C1-4亚烷基，以便基团-OZ1R10是-O(C1-4烷基)，例如甲氧基、 乙氧基、异丙氧基或叔丁氧基。在一个实施方案中(例如用于实施例4、7- 14和19)，R1是甲氧基。
在其它更适合的化合物中，当R10是H时，L1是-Q1-、-Q1Q2-或- C(O)N(R7)Q1-，其中Q1基团，或-Q1Q2-的Q2基团是通过环氮原子连接至 R10基团的含氮杂环基。此类基团Q1R10或Q2R10基团的实例包括：
Figure GDA0002817691790000191
其中*代表基团与分子的其余部分的连接点。
在一个实施方案中(例如用于实施例30)，R1是-Q1-H。
在一个实施方案中(例如用于实施例31)，R1是-Q1Q2-H。
在一个实施方案中(例如用于实施例40)，R1是-C(O)N(R7)Q1-H。
在其它还更适合的化合物中，当R10是H时，L1是：
-Z1-、Q1、-Q1Z1-、-Q1Q2、-Q1Q2Z1-；
-OZ1-、-OQ1Z1-、-OQ1Q2Z1-；
-C(O)Z1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-；
-C(O)OZ1-、-C(O)OQ1Z1-、-C(O)OQ1Q2-、C(O)OQ1Q2Z1-；
-C(＝NR9)N(R7)Z1-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Z1-或C(＝NR9)N(R7)Q1Q2Z1-。
在其它更适合的化合物中，当R10是H，并且其包含连接至Z1或Z2或Z3的环状基团Q1、Q2或Q3时，该环状基团可以是通过环氮原子连接至Z1或Z2或Z3的含氮杂环基。这可以出现在化合物中，其中R1是L1R10，并 且L1是：
-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2Z1-；
-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2Z1-；
-Z1O(CH2CH2O)nQ1Z2-、-Q1Z1O(CH2CH2O)nZ2-、- Z1O(CH2CH2O)nZ2Q1Z3-；
-C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-、 -C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-；
-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、- C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；
Z1C(O)N(R7)Q1Z2-、-Z1C(O)Q1Z2-、Z1C(O)N(R7)7Q1Q2Z2-；
-C(O)OZ1Q1Z2-、-C(O)OQ1Z1-、-C(O)OQ1Q2Z1-；
Q1C(O)Q2Z1-、Q1C(O)Q2Q3Z1-；
-C(＝NR9)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(＝NR9)N(R7)Q1Z1-或- C(＝NR9)N(R7)Q1Q2Z1-。
此类特别适合的化合物是那些其中R10是H，并且L1是-Q1Z1-、- Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-或-C(O)Q1Z1-；或更适合地，-Q1Z1-、-Q1Q2Z1- 或-C(O)N(R7)Q1Z1-的。
其中R10是H并且其中L1包含直接连接至R10的部分Z1、Z2或Z3的 化合物中，该Z1、Z2或Z3部分适合地是被多个OH基团，例如2至11个 OH基团取代的C1-12亚烷基。通常，OH基团数量会比亚烷基中碳原子数 少一个；
在这种情况中更适合地是，Z1是被2-7个OH基团，例如5-7个OH 基团取代的C1-8亚烷基。
此类适合Z1基团的实例包括-CH2[CH(OH)]n-，其中n适合地是3-7。 最适合地，n是5，并且在这种情况中，Z1是-CH2[CH(OH)]4-CH(OH)-， 以便基团Z1R10、Z2R10或Z3R10是部分-CH2[CH(OH)]4-CH2OH。
其中Z1R10是部分-CH2[CH(OH)]4-CH2OH的化合物的实例包括那些 其中R1为：
-哌啶基-4-基-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)-CH2(OH)，
-吡唑-4-基-哌啶-4-基-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)- CH2(OH)，
-C(O)NH-哌啶-4-基-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)-CH(OH)- CH2(OH)的。
在一个实施方案中(例如用于实施例46)，R1是-Q1Z1-H。
在一个实施方案中(例如用于实施例47)，R1是-Q1Q2Z1-H。
在一个实施方案中(例如用于实施例49)，R1是C(O)N(R7)Q1Z1-H。
其它其中R10是H的适合的化合物包括那些其中R10连接至部分Q1、 Q2或Q3的环氮原子或L1基团的化合物。
当R10不是H时，存在的Z1、Z2和Z3可以是-(CH2)n-，其中n是1至 6或-O(CH2)m-，其中m是1至5。
在化合物中，当R10是-C(O)OR7时，L1适合地是：
-Q1-或-Q1Q2-，其中Q1，或-Q1Q2-中的Q2是碳环基或杂环基，并且通 过环碳原子连接至R10；或
C(O)N(R7)Q1，其中Q1是碳环基或杂环基，并且通过环碳原子连接至 R10。
在这些化合物中，R7适合地是C1-6烷基，更适合地是C1-4烷基，例如 叔丁基。
在一个实施方案中(例如用于实施例25)，R1是-Q1C(O)OR7，其中Q1是哌啶-4-基并且R7是叔丁基。
在一个实施方案中(例如用于实施例26)，R1是-Q1Q2C(O)OR7，其中 Q1是吡唑-4-基，Q2是哌啶-4-基，并且R7是叔丁基。
在一个实施方案中(例如用于实施例36)，R1是C(O)NHQ1C(O)OR7， 其中Q1是哌啶-1-基，并且R7是
当R10是-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2或-N(R7)C(O)OR8-时，L1适 合地是：
-Z1-、
-OZ1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3、- C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2；
-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-或-C(O)Q1-，其中Q1是碳环基或杂 环基，并且通过环碳原子连接至R10；或
C(O)Q1Z1-。
其中R10是-N(R7)R8的化合物是特别适合的。
通常，当R10是-N(R7)R8时，R7和R8各自独立地是H或任选被一个 或多个OH基团取代的C1-8烷基。在一些情况中，R7和R8均是H。在R7和R8其中一个或两个是C1-8烷基的情况中，其可能被多个OH基团，例如 2-7个OH基团取代。通常，OH基团的数目会比烷基中碳原子数少一个。 此类化合物中更适合地是R7和R8其中一个或优选两个可以是- CH2[CH(OH)]mCH2OH，其中m适合地是2-6。最适合地，m是4，并且 在这种情况中，R7和/或R8基团是部分-CH2[CH(OH)]4-CH2OH。
在特别适合的化合物中，R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例29)，L1是-Z1-，并且R10是NH2。
在一个实施方案中(例如用于实施例27和28)，L1是-OZ1-，并且R10是NH2。
在一个实施方案中(例如用于实施例39)，L1是-C(O)N(R7)Z1-，并且R10是NH2。
在一个实施方案中(例如用于实施例41)，L1是-C(O)Q1，并且R10是 NH2。
在一个实施方案中(例如用于实施例42)，L1是-C(O)N(R7)Z1Q1，并且 R10是NH2。
在一个实施方案中(例如用于实施例43和44)，L1是-OZ1-，并且R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例45)，L1是-Z1-，并且R10是- N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例48、57、58和61)，L1是- C(O)N(R7)Z1-，及R10为-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例50、53、54、65和66)，L1为- C(O)Q1，并且R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例51)，L1是-C(O)N(R7)Z1Q1，并且 R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例55和56)，L1是-C(O)N(R7)Q1，并 且R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例59)，L1是- C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-，并且R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例60)，L1是-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-， 并且R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
在一个实施方案中(例如用于实施例62)，L1是- C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-，并且R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
当R10是-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2时，R7和R9各自适合地是H或C1-4烷 基，特别是H或甲基，并且特别是H；并且R8各自独立地是H或任选被 一个或多个OH基团取代的C1-8烷基。在其中一个或两个R8基团是C1-8烷 基的情况中，其可以被多个OH基团，例如2-7个OH基团取代。通常， OH基团的数目会比烷基中碳原子数少一个。此类化合物中更适合地是一 个或优选两个R8基团可以是-CH2[CH(OH)]mCH2OH，其中m适合地是2- 6。最适合地，m是4，并且在这种情况中，一个或优选两个R8基团是部 分-CH2[CH(OH)]4-CH2OH。
在特别适合的化合物中，-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2是：
-NHC(＝NH)-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
当R10是-N(R7)C(O)OR8时，R7和R8各自适合地是H或C1-6烷基。 更适合地，R7是H，并且R8是C1-6烷基，更适适合地是C1-4烷基，例如 叔丁基。
在其它通式(I)化合物中，R1是-OR12、-SO2R12、-C(O)OR12、- C(O)NR12R13、-C(＝NR9)NR12R13、-Q1OR12-Q1SO2R12、-Q1C(O)OR12、- Q1C(O)NR12R13、-Q1C(＝NR7)NR12R14、-Q1Q2OR12、-Q1SO2R12、- Q1Q2C(O)OR12、-Q1Q2C(O)NR12R13或-Q1Q2C(＝NR9)NR12R13；
适合的基团Q1和Q2如上所示。
适合的R12和R13基团包括H和任选被一个或多个选自卤代和OR7的 取代基取代的C1-6烷基。
如上述，R2和R3各自独立地是C1-10烷基，其中一个或多个-CH2-基团 任选被-O-、-S-或-NR7-代替，并且其任选如上述定义被取代。可能例如没 有这些取代基或有单一取代基。
适合地，R2和R3各自独立地是C1-10烷基，其中一个或多个-CH2-基团 任选被-O-或-S-代替，并且其任选如上述定义被取代。
R2和R3基团的实例包括-(CH2)sCH3或(CH2CH2O)t-H，其均任选如上 述定义被取代；并且其中s是0-9，更适合地是0-6，并且更适合地是0-3； 并且t是1-3，特别是2或3。
特别适合的通式(I)化合物是那些其中R2和R3相同或不同的并且均是 未取代的C1-4烷基，例如甲基或乙基。在一些此类化合物中，R2和R3相 同并且均是甲基或均是乙基。在其它此类化合物中，R2和R3之一是甲基， 并且R2和R3中的另一个是乙基。
R2和R3的适合的取代基包括OH、SH、卤代、N(R7)R8、C(O)OR7、 C(O)N(R7)R8、苯基或吡啶基，其中R7和R8如上述定义。R2的特别适合 的取代基包括OH、SH、苯基或吡啶基，特别是OH、苯基、吡啶基、C(O)O- C1-6烷基、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)N(R7)R8，其中R7和R8各自是C1-3烷基，或R7和R8与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷、哌啶、哌嗪或 吗啉环。
在一些通式(I)化合物中，R2和R3中至少一个是-(CH2)sCH3，其中s如 上述定义，并且任选被如上述定义的单一取代基取代。
在一些此类通式(I)化合物中，R2和R3中至少一个是甲基、乙基、苄 基、吡啶基甲基、-CH2OH、-CH2NH2、-CH2CH2OH或CH2CH2NH2。
在其它特别适合的化合物中，R2和R3中至少一个是- CH2CH2OCH2CH2OH或-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OH。
在适合的通式(I)化合物中，R4是H、卤代、氰基或C1-3烷基。在更适 合的通式(I)化合物中，R4是H、氯、溴、氰基或甲基。在特别适合的通式 (I)化合物中，R4是H、氯或甲基，并且特别是H。
如上所示，R5是H或甲基，更适合地是H。
在一些通式(I)化合物中，R4和R5均是H。
在其它通式(I)化合物中，R4是H，并且R5是甲基。
在其它通式(I)化合物中，R4是甲基，并且R5是H。
在其它通式(I)化合物中，R4是卤代(例如氯或溴)，并且R5是H。
在其它通式(I)化合物中，R4是氰基，并且R5是H。
一些特别适合的本发明化合物包括那些化合物，其具有选自下列的阳 离子：
1. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-氟 -3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
3. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-氯-1-乙基 -3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
4. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
5. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
6. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
7. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
8. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
9. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
10. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-(甲酸根 基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
11. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-(氨基甲 酰基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
12. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6- 甲氧基-3-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
13. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
14. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
15. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-苄基-3- 甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
16. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
17. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-1- 乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
18. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-1-[2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
19. 2-[({3-氨基-6-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
20. 2-[({3-氨基-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
21. 2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
22. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
23. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
24. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
25. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{1-[(叔 丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
26. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3- 鎓；
27. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-氨基 乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
28. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-氨基 丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
29. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-氨基 丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
30. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-(哌啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
31. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
32. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-胍基(carbamimidamido)乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
33. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-胍基 丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
34. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基- 1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
35. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲 酸；
36. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-({1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
37. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
38. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯 并二唑-3-鎓；
39. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-氨基丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
40. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-[(哌啶-4-基)氨基甲酰基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
41. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-氨基 哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
42. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
43. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯 并二唑-3-鎓；
44. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯 并二唑-3-鎓；
45. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并 二唑-3-鎓；
46. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-{1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓；
47. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-(1-{1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
48. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
49. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-({1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}氨基甲酰基)-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓；
50. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓；
51. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰 基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
52. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-[4-({双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}甲基)哌啶-1-羰基]-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
53. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3R)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
54. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3S)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
55. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-{[(1r,4r)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基 甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
56. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-6-{[(1s,4s)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基 甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
57. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)(甲基)氨基甲酰基]-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
58. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
59. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙 基-5-{[(14S,15R,16R,17R)-14,15,16,17,18-五羟基-12-[(2S,3R,4R,5R)- 2,3,4,5,6-五羟基己基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十八烷-1-基]氨基甲酰基}-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓；
60. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-({2-[4’-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙 基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
61. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[(3S)-3-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]-3-氨基甲酰 基丙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
62. 2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[4-(4-{3-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]-3-氨基甲 酰基丙基}苯基)丁基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
63. 2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
64. 2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
65. 2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
66. 2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
67. 2-[({3-氨基-7-氰基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
和如通式(I)定义的阴离子X-。
通式(I)化合物可以通过如下制备：将通式(II)化合物或其盐或活化衍生 物：
Figure GDA0002817691790000311
其中R4和R5如通式(I)的定义；
与通式(III)的盐反应：
Figure GDA0002817691790000312
其中R1、R2和R3如通式(I)的定义；
并且X-如通式(I)的定义，并且其可以与通式(I)产物的X-相同或不同。
该反应适合地在碱性条件下，在偶联试剂的存在下进行，其可以产生 活化酸作为中间体。碱性条件可以由非亲核性碱提供，例如N,N-二异丙基 乙基胺(DIPEA)或三甲胺。适合的偶联试剂包括O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)- N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’- 四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基) 脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)与 1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)或羟基苯并三唑(HOBt)的组合。
在一些情况中，羰基二咪唑(CDI)可以用作偶联剂。
在其它情况中，可以使用咪唑或其盐(例如咪唑盐酸盐)。
该反应可以在约10至50℃的温度，更通常在15至30℃或室温，并 且在有机溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺中进行。
当使用CDI偶联剂时，通式(I)化合物可以通过以下制备：将如上述定 义的通式(III)化合物与通式(IV)的活化化合物反应：
Figure GDA0002817691790000321
其中R4和R5如通式(I)的定义。
如上讨论，该反应适合地在约10至50℃的温度，更通常在15至30℃ 或室温，并且在有机溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺中进行。
通式(IV)的活化化合物可以通过以下制备：将如上述定义的通式(II)化 合物或其盐与羰基二咪唑(CDI)反应。该反应适合地在有机溶剂，例如N,N- 二甲基甲酰胺中，并且在约10至30℃的温度，更通常在15至25℃或室 温进行。
在其中目标通式(I)化合物具有对所用条件敏感的R1、R2、R3、R4和/ 或R5取代基的情况中，当通式(III)化合物与通式(II)化合物或其活化衍生 物(例如通式(IV)化合物)反应时，该通式(III)化合物可以包含保护的R1、R2和/或R3取代基，和/或通式(II)和(IV)化合物可以包含保护的R4和/或R5取 代基。这在实施例46中说明，其中通式(IV)化合物与通式(III)化合物的保 护的衍生物(其中R1是基团LR10，其中L是基团-Q1-Z1-，其中Z1是- CH2[CH(OH)]5-，并且R10是H(中间体98))反应，得到通式(I)的保护的衍 生物(中间体99)。在中间体98和99中，两个OH基团通过形成取代的1,3- 二
Figure GDA0002817691790000323
烷基而保护。该保护基可以通过用酸水溶液(例如盐酸水溶液)处理而 除去(参见实施例46)。类似地，中间体89和93(它们是通式(III)化合物)通 过将中间体88和92分别脱保护而制备。
通式(II)化合物可以通过以下制备：将通式(V)化合物水解：
Figure GDA0002817691790000322
其中R4和R5如通式(I)的定义，并且R21是C1-6烷基或苄基。
适合地，该水解作用为碱水解作用，以便将通式(V)化合物与碱反应， 适合地是强碱水溶液，例如氢氧化锂、氢氧化钾或氢氧化钠。
通式(V)化合物，其中R4和R5是H，并且R21是C1-6烷基或苄基，可 以通过如下制备：将通式(XX)环化：
Figure GDA0002817691790000331
其中R21各自独立地是C1-6烷基或苄基。
适合地，该环化作用是酸介导的，适合的酸是乙酸，在升高的温度， 例如80℃。
通式(XX)化合物可以通过如下制备：钯介导的乙烯基硼酸酯与式(XXI) 化合物偶联：
Figure GDA0002817691790000332
其中R21如上述定义，并且R22是卤代，特别是Cl、Br或I。
通式(XXI)化合物是众所周知的，并且是可商购获得的，或者通过类似 于本领域技术人员熟悉的方法制备。
一些通式(V)化合物可以转化成其它通式(V)化合物。例如其中R4是卤 代的通式(V)化合物可以由其中R4是H的通式(V)化合物通过与卤化剂(例 如N-氯琥珀酰亚胺、N-溴琥珀酰亚胺或N-碘琥珀酰亚胺)反应而制备。适 合的反应条件在中间体10、14和161的制备中描述。在一些情况中，例如 如中间体161的合成中所示，吡咯并吡嗪环的5-位的氮可以用三甲基甲硅 烷基乙氧基甲基保护基保护。
其中R4是卤代的通式(V)化合物可以转化成其中R4是烷基或氰基的 通式(V)化合物。其中R4是烷基的化合物可以由其中R4是卤代的化合物通 过与有机金属试剂(例如二烷基锌)反应而制备，如下文中间体11的制备中 所述。
其中R4是氰基的通式(V)化合物可以其中由其中R4是卤代的通式(V) 化合物通过与亚铁氰化钾反应而制备，如中间体166的制备中所述。因此， 应当保护吡咯并吡嗪环的5-位的氮，例如用三甲基甲硅烷基乙氧基甲基保 护基。
其中R4是C1-6烷基并且R5是H的通式(V)化合物可以通过过渡金属 介导的适当的二烷基锌与其中R4是卤代的通式(V)化合物的偶联制备。适 合地，过渡金属是钯(0)络合物。
其中R4是H并且R5是甲基的通式(V)化合物可以通过过渡金属介导 的通式(XXII)化合物的环化制备。
Figure GDA0002817691790000341
其中R21如上述定义。
适合地，过渡金属是钯(0)络合物。适合地，环化在碘化亚铜(I)和碱的 存在下进行。
通式(XXII)化合物可以通过过渡金属催化的通式(XXI)化合物与炔丙 基硅烷的偶联制备。
通式(III)化合物可以由通式(VII)化合物制备
Figure GDA0002817691790000342
其中R1、R2和R3如通式(I)的定义，并且X-如通式(I)的定义，并且其 可以与通式(III)产物的X-相同或不同；
R23是任选被芳基取代的O(C1-6)烷基；或
任选被C(O)OH取代的芳基；并且
R24是H；或
R23和R24与它们所连接的碳和氮原子一起形成杂环，其任选与芳基或 杂芳基环稠合并且任选包含另外的＝O取代基。
在一些情况中，可以通过与酸反应除去保护基R23。这适用于烷氧基羰 基保护基，例如当R23是叔丁氧基时。与酸的反应可能引起阴离子X-的改 变。此外，与酸反应后，式(III)化合物通常以其酸加成盐形式存在。
其它保护基，例如：Fmoc(即当R23是芴基甲氧基时)，可以通过用碱 (例如哌啶或吗啉)处理而除去。
在一些适合的通式(VII)化合物中，R23是苄基氧基或芴-9-基甲氧基， 并且R1包含另外的保护基，例如叔丁氧基羰基(Boc)，以便两个保护基在 不同条件下稳定。
环状N(R24)C(O)R23基团的实例包括1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚- 2-基。
单个R23基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正 丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、苄基氧基、芴基甲氧基和苯基，其任选被 C(O)OH取代。
当R23和R24与它们所连接的碳和氮原子一起形成此类杂环时，通式 (IIIA)化合物可以通过通式(VII)化合物与肼水合物反应合成。适合地，该 反应在醇溶剂(例如甲醇)和升高的温度(例如约60-90℃，通常约75℃)进行。
一些通式(VII)化合物是已知的。例如中间体58可以根据US 2015/0018313中所述的方法合成。
其它通式(VII)化合物可以通过以下制备：由通式(VIII)化合物：
Figure GDA0002817691790000361
其中R1和R3如通式(I)的定义，并且R23和R24如通式(VII)的定义；
通过与通式(IX)化合物反应：
R2-X1 (IX)
其中R2如通式(I)的定义，并且X1是离去基团，例如卤代；或者与通 式(IXA)化合物反应：
R2a-X1 (IXA)
其中X1如以上通式(IX)的定义，并且R2a是保护的R2基团。例如当所 需R2基团包含一个或多个OH部分时，它们可以使用标准保护基保护，例 如甲硅烷基保护基，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基甲硅烷基 (TBDMS)等。
当使用通过通式(IXA)化合物的途径时，通式(VIII)化合物适合地是其 中R23是任选被芳基取代的-O(C1-6)烷基，或R23是任选被C(O)OH取代的 芳基；并且R24是H的化合物；因为在这种情况中，可以使用酸(例如盐酸 溶液)除去甲硅烷基和羰基氧基保护基。
在一些情况中，当通式(IX)化合物与其中N(R24)C(O)R23是环状基团 (例如1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)的通式(VIII)化合物反应时，该 反应可以伴随开环。因此，其中N(R24)C(O)R23是1,3-二氧代-2,3-二氢-1H- 异吲哚-2-基的通式(VIII)化合物可以产生其中N(R24)C(O)R23是下式的通 式(VII)产物：
Figure GDA0002817691790000362
一些通式(VIII)化合物是已知的。例如中间体23(参见以下实施例)可 以通过US2015/0018314 A1所述的途径合成。
一些通式(VII)和(VIII)化合物可以由其它通式(VII)和(VIII)化合物合 成。例如其中R1是C(O)OR5，其中R5不是H的通式(VIII)化合物可以通 过水解，例如用碱，适合地是碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂，转化成其 中R1是C(O)OH的通式(VIII)化合物。然后，其中R1是C(O)OH的化合 物可以与通式(X)化合物反应：
Figure GDA0002817691790000371
其中R12如通式(I)的定义，但其不是H，并且R25是C1-4烷基的化合 物，转化成其中R1是C(O)OR12，其中R12不是H的化合物。
该类型的转化示例于下文的中间体81的合成中。
通式(VIII)化合物还可以转化成具有不同R23和/或R24基团的其它通 式(VIII)化合物。例如当R23是任选被芳基取代的O(C1-6)烷基，或R23是任 选被C(O)OH取代的芳基；并且R24是H时，通式(VIII)化合物可以通过 例如与HCl在溶剂(如：二
Figure GDA0002817691790000373
烷)中反应而被水解，得到通式(XI)化合物：
Figure GDA0002817691790000372
其中R1和R3如通式(I)的定义。这通过由中间体78合成中间体79来 示例。
可以再保护通式(XI)化合物，以得到新的通式(VIII)化合物，例如通过 与通式(XII)化合物反应：
Figure GDA0002817691790000381
其中R23如通式(VII)的定义。该反应可以在碱(例如三甲胺)的存在下， 在极性有机溶剂(例如二氯甲烷)中，在10至30℃的温度，更通常在15至 25℃，通常在室温进行。此类制方法的实例是由中间体79合成中间体80。
通式(VII)和(VIII)化合物还可以由其它通式(VII)和(VIII)，使用下文的 中间体66、67、70、71、74、81、86、87、90、91、96、97、157和159的 制备中描述的方法合成。
因此例如其中R1是卤代(特别是溴)的通式(VII)或(VIII)化合物可以与 炔反应，得到其中R1是-L1R10的通式(VII)化合物，其中L1包含亚炔基。 该反应可以用亚铜(I)盐，例如碘化亚铜(I)催化。这在中间体66的合成中 说明。
其中R1是卤代(特别是溴)的通式(VII)或(VIII)化合物还可以与通式 (XX)化合物反应：
R1a-X2 (XX)
其中R1a如以上R1的定义，但其不是卤代，并且X2是有机硼烷基团， 例如4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基。此类反应可以用于制备 中间体70和74。
其中R1是-L1R10，其中L1包含亚烯基、亚炔基或部分饱和的碳环基或 杂环基部分的通式(VII)和(VIII)化合物可以适合地通过催化氢化还原，得 到其中L1包含亚烷基或饱和的碳环基或杂环基部分的式(VII)化合物。此 实例示于下文中间体67和71的合成中。
其中R1是C(O)OH的通式(VII)和(VIII)化合物可以被酯化，得到其中 R1是C(O)OR12，其中R12如上述定义，但不是H的通式(VII)和(VIII)化合 物。此实例是中间体81的制备，其中将羧酸衍生物中间体80与1,1-二-叔 丁氧基-N,N-二甲基甲胺反应。
其中R1或R3(对于通式(VIII)化合物)包含-C(O)OR12或-C(O)OR7基 团，其中R12或R7不是H；或-C(O)N(R7)R8基团的通式(VII)和(VIII)化合 物可以通过水解转化成其中R1或R3包含-C(O)OH基团的化合物。在一些 情况中，可以使用碱水解，例如使用碱，例如氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧 化钾。或者，该水解可以使用酸(例如盐酸)的酸水解进行水解。这特别适合 当R12或R7基团是烷基，例如叔丁基时。
其中R1是C(O)OH的通式(VII)和(VIII)化合物可以通过与适当的胺 或铵盐反应，转化成其中R1是-C(O)NR12R13的化合物，其中R12和R13如 上述定义，或其中R1是-L1R10，其中
L1是
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、 -C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、- C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、- C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、- C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-或-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；
特别是
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、 -C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-或-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-。
其中R1是L1R10，其中R10是-N(R7)-C(O)OR8的式(VII)和(VIII)化合 物可以通过水解例如使用盐酸的酸水解在溶剂(例如二
Figure GDA0002817691790000391
烷)中，转化成其 中R1是L1R10，其中R10是-NH2的通式(VII)和(VIII)化合物。该实例是中 间体86的合成。
这些化合物可以进一步转化成其中R10是N(H)R7或N(R7)R8的通式 (VII)和(VIII)化合物，其中R7是CH2-R7a，并且R8是CH2-R8a，并且R7a和R8a各自独立地选自：H和任选被一个或多个卤代或OH基团或保护的 OH基团取代的C1-11烷基。该转化可以通过还原性氨基化实现，使用还原 剂(例如氢化物，例如氰基硼氢化钠)，与如下所示的醛或缩醛：
Figure GDA0002817691790000401
其中L1如通式(I)的定义；
R7是-CH2R7a，其中R7a是H或任选被一个或多个卤代或OH基团取 代的C1-11烷基；并且
R19是C1-12烷基；并且
A是通式(VII)或(VIII)化合物的片段，但不包括如下R1：
Figure GDA0002817691790000402
在其它情况中，可以使用环状半缩醛代替醛或缩醛。以下方案显示使 用6-元半缩醛的实例，得到其中R1是L1-NHR7的化合物，其中R7是 (CH2)4CH2OH：
Figure GDA0002817691790000403
其中A和L1如上述定义。
如果使用大量过量的醛、缩醛或环状半缩醛时，两个胺氢原子均会被 代替。在一些情况中，其可能连续与不同的醛、缩醛或半缩醛反应，产生 其中R7和R8不同的化合物。
更适合地，在这些通式(VII)或(VIII)化合物中，R7a和R8a二者均为任 选被一个或多个卤代或OH或保护的OH基团取代的C1-11烷基；并且最适 合地是R7和R8各自是CH2[CH(OH)]4CH2OH，其中OH基团任选被保护， 例如形成缩醛，例如亚苄基缩醛。
此类反应的实例包括中间体86转化为中间体87以及中间体90转化 为中间体91。
类似地，其中R1是L1R10的通式(VII)和(VIII)化合物，其中：
类似地，其中L1包含通过环氮原子连接至R10的部分Q1、Q2或Q3， 并且其中R10是C(O)OR7的通式(VII)和(VIII)化合物；
可以通过水解，例如使用盐酸在溶剂例如二
Figure GDA0002817691790000411
烷中的酸水解，转化成 其中R10是H的化合物。
此类反应的实例是由中间体95制备中间体96。
其中L1包含通过环氮原子连接至R10的部分Q1、Q2或Q3，并且其中 R10是H的通式(VII)和(VIII)化合物可以转化成其中Q1、Q2或Q3部分连 接至Z1、Z2或Z3部分的通式(I)化合物，其中Z1、Z2或Z3是：
CH2-C1-11亚烷基、CH2-C2-11亚烯基、CH2-C2-11亚炔基，其中任一个任 选被一个或多个卤代、OH、C(O)NR15R16、C(O)OR15或NR15R16取代；并 且R15和R16各自独立地是H或C1-6烷基；
并且R10是H；
其通过类似上述其中R1是L1NH2的通式(VII)和(VIII)化合物转化成 其中R1是L1N(R7)R8，其中R7是CH2-R7a，并且R8是CH2-R8a并且R7a和 R8a各自独立地选自H和任选被一个或多个卤代或OH基团取代的C1-11烷 基的通式(VII)和(VIII)化合物的方法，与醛、缩醛或环状半缩醛等效化合 物进行还原氨基化进行。
更适合地，在这些通式(VII)或(VIII)化合物产物中，Z1、Z2或Z3是任 选被一个或多个卤代或OH基团取代的CH2-C1-11烷基；并且最适合地是 CH2[CH(OH)]4CH2OH，其中OH基团任选被保护，例如形成缩醛，例如 亚苄基缩醛。
该方法的实例显示于中间体97的制备中。
R1是L1R10，并且R10是NH2的通式(VII)和(VIII)化合物可以通过与 脒或其盐，例如1,2,4-三唑甲脒盐酸盐反应，转化成其中R10是- NHC(＝NR9)N(R8)2的化合物。
通式(VIII)化合物还可以由通式(XIII)化合物制备：
Figure GDA0002817691790000421
其中R1和R3如通式(I)的定义；
通过与通式(XIV)化合物反应：
Figure GDA0002817691790000422
其中R23如上述通式(VII)的定义。
该反应适合地在碱(通常是非亲核性碱，例如胺，例如N,N-二异丙基乙 基胺(DIPEA)或三乙胺)和肽偶联剂(例如HATU、TBTU、HBTU或EDC 与HOAt或HOBt的组合)的存在下进行。该反应适合地在约10至30℃的 温度，通常是15至25℃，例如室温进行。适合的反应溶剂包括有机溶剂， 例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。
通式(XIII)和(XIV)化合物是已知的，并且很容易获得，或者可以通过 本领域技术人员已知的方法制备。
或者，通式(XIII)化合物可以由通式(XV)化合物制备：
Figure GDA0002817691790000423
其中R1和R3如通式(I)的定义；
通过催化氢化，适合地应用钯催化剂。
该氢化适合地在1大气压并且约10至30℃的温度，通常是15至25℃， 例如室温进行。
通式(XIII)产物可以如上述，不需进一步分离或纯化步骤，可以直接与 通式(XIV)化合物反应。
通式(XV)化合物可以由通式(XVI)化合物制备：
Figure GDA0002817691790000431
其中R1如通式(I)的定义，并且X2是离去基团，特别是卤代基团，例 如氯或氟；
通过与通式(XVII)化合物反应：
R3-NH2 (XVII)
其中R3如通式(I)的定义。
该反应适合地在压力下，在约30-70℃的温度，更通常约40-60℃，通 常约50℃，并且在有机溶剂，例如四氢呋喃中进行。
通式(XVI)和(XVII)化合物是已知的，并且很容易获得或可以通过本领 域技术人员已知的方法制备。
另外的制备通式(I)化合物的方法是将通式(XVIII)化合物：
Figure GDA0002817691790000432
其中R1、R3、R4和R5如通式(I)的定义；
与如上述定义的通式(IX)或(IXA)化合物反应，其在类似上述那些用于 通式(VIII)化合物与通式(IX)或(IXA)化合物反应的条件下进行。
通式(I)化合物还可以由其它通式(I)化合物合成，例如应用下文实施例10、27-33、35-42和47-62中描述的方法。通常，将通式(VI)和(VIII)化合 物转化成其它通式(VI)和(VIII)化合物的方法还适用于通式(I)化合物，反之 亦然。
因此，例如其中R3包含-C(O)OR7基团，其中R7不是H或-C(O)N(R7)R8基团的通式(I)化合物可以通过水解转化成其中R3包含-C(O)OH或C(O)O-基团的化合物。在一些情况中，该水解可以是碱水解，例如使用碱，例如 氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾，如实施例10所示。或者，可以应用酸水 解，例如应用盐酸。
其中R1是L1R10，其中R10是-N(R7)-C(O)OR8的通式(I)化合物可以通 过水解，例如使用盐酸，在溶剂(例如二
Figure GDA0002817691790000443
烷)中的酸水解，转化成其中R1是L1R10，其中R10是-NHR7的通式(I)化合物。适合地，R7是H，以便在通 式(I)化合物产物中，R10是NH2。这在实施例27-29、39、41和42中说明。
其中R1是LR10，其中L1包含通过环氮原子连接至R10的部分Q1、Q2或Q3，并且其中R10是C(O)OR7的通式(I)化合物可以通过类似方法转化 成其中R10是H的式(I)化合物，即通过水解，例如使用盐酸，在溶剂(例如 二
Figure GDA0002817691790000444
烷)中进行酸水解。这在实施例30、31和40中说明。
其中R1是LR10，并且R10是NH2的式(I)化合物可以进一步转化成R10是N(R7)R8，其中R7是CH2-R7a，并且R8是CH2-R8a，并且R7a和R8a之 一是任选被一个或多个卤代或OH基团取代的C1-11烷基；并且R7a和R8a的另一个是H或任选被一个或多个卤代或OH基团取代的C1-11烷基的通 式(I)化合物。类似地，其中R1是LR10，并且L1包含通过环氮原子连接至 R10的部分Q1、Q2或Q3并且其中R10是H的通式(I)化合物可以转化成其 中Q1、Q2或Q3通过环氮原子连接至Z1、Z2或Z3部分，其中Z1、Z2或Z3是任选被一个或多个卤代或OH基团取代的CH2-C1-11烷基；并且R10是H的通式(I)化合物。这些转化反应可以应用类似上述通式(VII)和(VIII)化合 物描述的方法，与醛、缩醛或环状半缩醛等效化合物进行还原氨基化来进 行。此类反应的实例包括以下方法：
实施例45，其中实施例29化合物，其中L1是部分-Z1-，并且R10是 NH2，与4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖反应，得到产物，其中R10是- N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2；以及
实施例47，其中实施例31化合物，其中L1是部分-Q1Q2-，其中Q2通 过环氮原子连接至R10，并且R10是H，与4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖反 应，得到产物，其中L1是Q1Q2Z1，其中Z1是CH2[CH(OH)]4CH2O-；并 且R10是H。
其中R1是L1R10并且R10是NH2的化合物可以通过与脒或其盐，例如 1,2,4-三唑甲脒盐酸盐反应，转化成其中R10是-NHC(＝NR9)N(R8)2的化合 物。该方法在实施例32和33中显示。
其中R1是C(O)OH的化合物可以通过与适合的胺或铵盐反应，转化 成其中R1是-C(O)NR12R13的化合物，其中R12和R13如上述定义，或其中 R1是-L1R10的化合物，其中
L1是-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、- C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、- C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、 -C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、- C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、- C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；或
L1是-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2-、- C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Q3-或-C(O)Q1NR(R7)C(O)Z1Q2Z2-，其中Q1是通过 环氮原子连接至-C(O)部分的杂环基环。
适合地，该反应在碱性条件下，在偶联试剂的存在下进行。碱性条件 可以由非亲核性碱(例如N,N-二异丙基乙基胺(DIPEA)或三甲胺)提供。适 合的偶联试剂包括O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷 酸盐(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐 (TBTU)、N,N,N’,N’-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)， 或者1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)与1-羟基-7-氮杂苯并三 唑(HOAt)或羟基苯并三唑(HOBt)的组合。
此类反应在实施例35至38、48-60、65和66中说明。
在一些本发明化合物，例如实施例35中，L1是-C(O)N(R7)Z1-，其中 R7是H，并且Z1如上述定义；R10是-N(R7)-C(O)OR8；R7是H，并且R8如上述定义。
在一些本发明化合物，例如实施例36中，L1是-C(O)N(R7)Q1-，其中 R7是H，并且Q1是通过环氮原子连接至R10的杂环基；R10是-C(O)OR7， 其中R7如上述定义。
在一些本发明化合物，例如实施例37中，L1是-C(O)Q1-，其中Q1是 通过环氮原子连接至C(O)并且通过环碳原子连接至R10的杂环基；R10是- N(R7)-C(O)OR8；R7是H，并且R8如上述定义。
在一些本发明化合物，例如实施例38中，L1是-C(O)N(R7)Z1Q1-，其 中R7是H，Z1如上述定义，Q1是通过环碳原子连接至R10的杂环基；R10是-N(R7)-C(O)OR8；R7是H，并且R8如上述定义。
在一些本发明化合物，例如实施例48、57和58中，L1是C(O)N(R7)Z1， 其中R7是H或甲基，并且Z1如上述定义；R10是N(R7)R8，其中R7和R8二者均是被一个或多个OH基团取代的C1-12烷基。
在一些本发明化合物，例如实施例49中，L1是C(O)N(R7)Q1Z1，其中 R7是H，Q1通过环碳原子连接至-C(O)N(R7)-并且通过环氮连接至Z1，Z1是被一个或多个OH取代的C1-12亚烷基；R10是H。
在一些本发明化合物，例如实施例50、53、54、65和66中，L1是 C(O)Q1，其中Q1通过环氮原子连接至C(O)；R10是N(R7)R8，其中R7和 R8二者均是被一个或多个OH基团取代的C1-12烷基。
在一些本发明化合物，例如实施例51中，L1是-C(O)N(R7)Z1Q1-，其 中R7是H；Z1如上述定义，Q1通过环碳原子连接至R10，R10是N(R7)R8， 其中R7和R8二者均是被一个或多个OH基团取代的C1-12烷基。
在一些本发明化合物，例如实施例52中，L1是-C(O)Q1Z1-，其中Q1通过环氮原子连接至C(O)部分，并且Z1如上述定义；R10是N(R7)R8，其 中R7和R8二者均是被一个或多个OH基团取代的C1-12烷基。
在一些本发明化合物，例如实施例55和56中，L1是-C(O)N(R7)Q1-， 其中R7是H，Q1通过环碳原子连接至-C(O)N(R7)-并且通过环氮原子连接 至R10；R10是N(R7)R8，其中R7和R8二者均是被一个或多个OH基团取 代的C1-12烷基。
在一些本发明化合物，例如实施例59中，L1是- C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2，其中R7是H，Z1、n和Z2如上述定义；R10是N(R7)R8，其中R7和R8二者均是被一个或多个OH基团取代的C1-12烷 基。
在一些本发明化合物，例如实施例60中，L1是-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-， 其中R7是H，Z1、Q1、Q2和Z2如上述定义；R10是N(R7)R8，其中R7和 R8二者均是被一个或多个OH基团取代的C1-12烷基。
与其中R1是C(O)OH的通式(I)、(VII)或(VIII)化合物反应的胺或铵盐 描述如下。例如通式(XXX)的胺：
Figure GDA0002817691790000471
其中R7和R8如通式(I)的定义；
L1如通式(I)的定义，并且通过Z1部分的胺或Q1部分的环氮原子与H 连接；
可以由保护的通式(XXXI)化合物制备：
Figure GDA0002817691790000472
其中R7和R8如通式(I)的定义，L1如通式(XXX)的定义，并且R30是 胺保护基，例如芴基甲基氧基羰基(Fmoc)、丁基氧基羰基(Boc)或苄基氧基 羰基(Cbz)。对于其中R30是Cbz的化合物，可以通过氢化脱保护，或在R30是保护基例如Boc或Cbz的情况中，通过与酸例如盐酸或氢溴酸反应脱保 护，或者当R30是保护基例如Fmoc时，通过与弱碱例如吗啉或哌啶反应脱保护。
当R7和/或R8是基团-CH2[CH(OH)]4CH2OH时，其可以在通式(XXXI) 化合物中被保护，例如作为亚苄基缩醛。
其中R7和/或R8是基团-CH2[CH(OH)]4CH2OH(保护为亚苄基缩醛)的 通式(XXXI)的胺可以与通式(VII)或(VIII)化合物反应。在所得产物中，当 保护基R23是酸不稳定的基团例如Boc时，可以使用酸同时除去保护基R23和亚苄基缩醛保护基。然而在一些情况中，可能需要两个步骤脱保护方法， 其中R23基团通过氢化除去，随后亚苄基缩醛通过用酸处理除去。当保护 基R23是基团例如Fmoc时，其可以如上述用碱处理来除去。然后需要用 酸处理来除去亚苄基缩醛保护。
可以用于与通式(I)、(VII)或(VIII)化合物反应以转化成其它通式(I)、 (VII)或(VIII)化合物的其它中间体的制备在下文中描述。
通式(I)化合物是ENaC阻断剂，因此可用于治疗或预防呼吸疾病和病 症。
因此，在本发明的进一步的方面提供了用于医药的通式(I)化合物。
适合地，通式(I)化合物用于治疗或预防ENaC介导的疾病或病症。
还提供了：
·用于治疗或预防呼吸疾病和病症的通式(I)化合物。
·用于治疗或预防皮肤病症或眼病症的通式(I)化合物。
本发明进一步提供了：
·通式(I)化合物在制备用于治疗或预防呼吸疾病和病症的药物中的 用途。
·通式(I)化合物在制备用于治疗或预防皮肤病症或眼病症的药物中 的用途。
还提供了：
·治疗或预防呼吸疾病和病症的方法，该方法包括给需要此类治疗的 患者施用有效量的通式(I)化合物。
·治疗或预防皮肤病症和眼病症的方法，该方法包括给需要此类治疗 的患者施用有效量的通式(I)化合物。
可以用通式(I)化合物治疗的呼吸疾病和病症包括囊性纤维化、慢性阻 塞性肺病(COPD)、慢性支气管炎、肺气肿、支气管扩张(包括非囊性纤维 化支气管扩张)、哮喘和原发性纤毛运动障碍。
可以通过本发明化合物治疗的皮肤病症包括银屑病、特应性皮炎和鱼 鳞病。
可以通过本发明化合物治疗的眼病症包括干眼病。
本发明化合物具有良好的ENaC阻断活性。它们特别适合用于治疗呼 吸疾病，因为它们在肺中具有延长的滞留时间。此外，体内试验已显示， 用本发明化合物治疗显著提高了粘膜纤毛清除。
治疗的患者适合地是哺乳动物，并且更适合地是人类。
通式(I)化合物可以以药物组合物施用，因此在本发明进一步的方面提 供了包含通式(I)化合物和可药用赋形剂的药物组合物。当考虑适当的或建 议的用于治疗或预防的疾病或病症时，还可以存在其它药理学活性材料。
载体(或如果存在超过一种时的各载体)必需是可接受的，其意义为可 以与制剂的其它成分相容并且对受试者无害。
制剂包括那些适合口服、直肠、鼻、支气管(吸入)、局部(包括皮肤、 透皮、滴眼剂、口腔和舌下)、阴道或非肠道(包括皮下、肌内、静脉内和皮 内)施用，并且可以通过药学领域众所周知的任何方法制备。
施用途径将取决于治疗的病症，但优选的组合物是配置成用于口服、 鼻、支气管或局部施用。
该组合物可以通过将上文所定义的活性剂与载体组合来制备。通常， 制剂通过将活性剂与液体载体或细碎固体载体或二者均匀组合来制备，然 后如果需要，将产物塑形。本发明延伸至制备药物组合物的方法，其包括 将通式(I)化合物与可药用载体或媒介物结合或组合。
本发明的口服施用制剂可以作为以下存在：离散单元，例如胶囊剂、 小药囊或片剂，其各自包含预定量的活性剂；散剂或颗粒剂；活性剂在水 性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；或水包油液体乳剂或油包水液 体乳剂；或推注剂(bolus)等。
对于口服施用的组合物(例如片剂和胶囊剂)，术语“可接受的载体”包 括媒介物，例如常用赋形剂，例如结合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、 山梨醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、甲基纤维素、乙基纤维素、 羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填充剂和载体，例如 玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、 氯化钠和藻酸；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其它金属硬脂酸 盐、硬脂酸甘油酯、硬脂酸、硅油(silicone fluid)、滑石粉、蜡、油和胶体 二氧化硅。还可以使用矫味剂，例如薄荷、冬青油、樱桃矫味剂等。可能 需要添加着色剂，使剂型容易辨识。还可以通过本领域技术人员众所周知 的方法给片剂包衣。
片剂可以任选用一或多种附属成分，通过压制或模制而制备。压制片 剂可以通过将自由流动形式的活性剂，例如粉末或颗粒，任选与粘合剂、 润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合，在适合的机器 中压制。模制片剂可以通过将粉末化合物用惰性液体稀释剂润湿后的混合 物，在适合的机器中模制而制备。片剂可以任选被包衣或刻画，并且可以 配制成缓慢或控制释放的活性剂。
其它适合口服施用的制剂包括在矫味的基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶 或黄蓍胶)中包含活性剂的锭剂；在惰性基质(例如明胶和甘油)或蔗糖和阿 拉伯胶中包含活性剂的软锭剂；以及在适合的液体载体中包含活性剂的漱 口剂。
式(I)化合物更适合地局部施用于肺、眼或皮肤。因此，根据本发明提 供了药物组合物，其包含通式(I)化合物，任选与一种或多种局部可接受的 稀释剂或载体组合。
对于局部应用至皮肤，通式(I)化合物可以制成乳膏剂、软膏剂、胶冻 剂、溶液剂或混悬剂等。可以用于药物的乳膏剂活软膏剂是本领域技术人 员众所周知的常规制剂，例如描述于标准药学教科书，例如British Pharmacopoeia。
可以通过使用气雾剂制剂局部施用于肺。气雾剂制剂通常包含混悬或 溶解于适合的气雾剂抛射剂，例如氯氟碳(CFC)或氢氟碳(HFC)中的活性成 分。适合的CFC抛射剂包括三氯一氟甲烷(抛射剂11)、二氯四氟甲烷(抛 射剂114)和二氯二氟甲烷(抛射剂12)。适合的HFC抛射剂包括四氟乙烷 (HFC-134a)和七氟丙烷(HFC-227)。抛射剂通常占总吸入组合物重量的 40％-99.5％，例如40％-90％。制剂可以包含赋形剂，包括共溶剂(例如乙 醇)和表面活性剂(例如卵磷脂、三油酸山梨坦等)。其它可能的赋形剂包括 聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甘油等。气雾剂制剂包装在罐中，并且通过 计量阀(例如由Bespak、Valois或3M提供或由Aptar、Coster或Vari提 供)递送适合剂量。
还可以通过使用非加压制剂，例如水溶液剂或混悬剂达到局部施用至 肺。这些可以通过雾化器施用，例如可以是手持式和可携带式或家庭用或 医院用(即非可携带式)。制剂可以包含赋形剂，例如水、缓冲剂、张力调节 剂、pH调节剂、表面活性剂和共溶剂。混悬液体和气雾剂制剂(不论加压 或不加压)通常包含细粉形式的本发明化合物，例如D50为0.5-10μm，例 如约1-5μm。粒度分布可以应用D10、D50与D90值代表。粒度分布的D50中间值的定义为将分布分成一半时的微米粒度。来自激光衍射的测定以体 积分布更精确描述，因此应用该方法得到的D50值更有意义地以Dv50值表 示(体积分布的中间值)。本文所用的Dv值指应用激光衍射测定的粒度分 布。类似地，激光衍射使用的D10和D90值采用平均Dv10和Dv90值，并且分别指其中10％的分布在D10值以下的粒度，和90％的分布在D90值以下 的粒度。
还可以通过使用干粉制剂局部施用于肺。干粉制剂将包含细粉形式的 本公开的化合物，通常质量平均直径(MMAD)为1-10μm或D50为0.5-10 μm，例如约1-5μm。细粉形式的本发明化合物的粉末可以通过微粉化方 法或类似的粉碎法制备。可以应用气流粉碎机进行微粉化，例如那些由 Hosokawa Alpine制造的。可以使用激光衍射(例如MalvernMastersizer 2000S仪器)测量所得粒度分布。制剂通常包含局部用可接受的稀释剂，例 如乳糖、葡萄糖或甘露醇(优选乳糖)，通常粒度相当大，例如质量平均直径 (MMAD)为50μm或以上，例如100μm或以上或D50为40-150μm。本文 所用的术语“乳糖”指含乳糖的组分，包括α-乳糖一水合物、β-乳糖一水 合物、α-乳糖无水物、β-乳糖无水物和无定形乳糖。乳糖组分可以通过微粉 化、筛分、研磨、压制、聚集或喷雾干燥来加工。还包括商购可获得的多 种形式的乳糖，例如
Figure GDA0002817691790000511
(吸入级乳糖；DFE Pharma)、
Figure GDA0002817691790000512
70 (用于干粉吸入器的筛分乳糖；Meggle)、
Figure GDA0002817691790000513
(DFE Pharma)和
Figure GDA0002817691790000521
(筛分的吸入级乳糖；DFE Pharma)产品。在一个实施方案中， 乳糖组分选自α-乳糖一水合物、α-乳糖无水物和无定形乳糖。优选的乳糖 是α-乳糖一水合物。
干粉制剂还可以包含其它赋形剂。因此在一个实施方案中，根据本公 开的干粉制剂包含硬脂酸镁或硬脂酸钙。这些制剂可以具有优异的化学和 /或物理稳定性，特别是当这些制剂还包含乳糖时。
干粉制剂通常应用干粉吸入(DPI)装置递送。干粉递送系统的实例包括
Figure GDA0002817691790000524
Figure GDA0002817691790000525
和
Figure GDA0002817691790000523
其它干粉递送系统的实例包括ECLIPSE、NEXT、ROTAHALER、HANDIHALER、 AEROLISER、CYCLOHALER、BREEZHALER/NEOHALER、 MONODOSE、FLOWCAPS、TWINCAPS、X-CAPS、TURBOSPIN、 ELPENHALER、MIATHALER、TWISTHALER、NOVOLIZER、 PRESSAIR、ELLIPTA、ORIEL干粉吸入器、MICRODOSE、PULVINAL、 EASYHALER、ULTRAHALER、TAIFUN、PULMOJET、OMNIHALER、 GYROHALER、TAPER、CONIX、XCELOVAIR和PROHALER。
在一个实施方案中，通式(I)化合物作为微粉化干粉制剂提供，例如包 含适合等级的乳糖。
因此，本发明的一个方面提供了药物组合物，其包含颗粒形式的通式 (I)化合物与颗粒乳糖组合，所述组合物任选包含硬脂酸镁。
在一个实施方案中，通式(I)化合物作为微粉化干粉制剂提供，其包含 适合等级的乳糖和硬脂酸镁，填充入装置例如DISKUS中。适合地，此类 装置是多剂量装置，例如将制剂填充入泡罩中，用于多剂量装置，例如 DISKUS。
在另一个实施方案中，通式(I)化合物作为微粉化干粉制剂提供，例如 包含适合等级的乳糖，填充入硬壳胶囊中，用于单剂量装置，例如 AEROLISER。
在另一个实施方案中，通式(I)化合物作为微粉化干粉制剂提供，包含 适合等级的乳糖和硬脂酸镁，填充入硬壳胶囊中，用于单剂量装置，例如AEROLISER。
在另一个实施方案中，通式(I)化合物作为细粉提供，用于吸药剂型， 其中粉末是D50为0.5-10μm的细颗粒，例如约1-5μm，它们通过粉碎法 而非气流粉碎微粉化制备，例如喷雾干燥、喷雾冷冻、微流化、高压均质 化、超临界流体结晶、超声结晶或这些方法的组合，或本领域已知的用于 产生空气动力粒度为0.5-10μm的细粒的其它适合的颗粒形成方法。所得 粒度分布可以应用激光衍射(例如Malvern Mastersizer 2000S仪器)测定。 该颗粒可以仅包含化合物或包含化合物与有助于加工的其它适合赋形剂组 合。所得细颗粒可以形成最终制剂，用于递送给人类或可以任选进一步用 其它适合的赋形剂配制，以促进以可接受的剂型递送。
本发明化合物还可以直肠施用，例如为栓剂或灌肠剂形式，其包括水 性或油性溶液剂以及混悬剂和乳剂和泡沫剂。此类组合物按照本领域技术 人员众所周知的标准方法制备。例如栓剂可以通过将活性成分与常用的栓 剂基质(例如可可脂或其它甘油酯)混合。在这种情况中，药物与适合的无刺 激性赋形剂混合，所述赋形剂在常温是固体，但在直肠温度是液体，因此 在直肠中熔化而释出药物。此类材料为可可脂和聚乙二醇。
通常，旨在用于局部施用至眼的组合物是滴眼剂或眼膏剂，通式(I)化 合物的总量将是约0.0001至低于4.0％(w/w)。
优选地，对于局部眼施用，施用的通式(I)的组合物将配制成溶液剂、 混悬剂、乳剂和其它剂型。通常优选水溶液剂，基于配制容易，以及患者 有能力通过将一至两滴溶液滴至眼患处，很容易施用于此类组合物。然而， 组合物还可以是混悬剂、粘性或半粘性凝胶剂或其它类型的固体或半固体 组合物。对难溶于水的化合物而言，混悬剂可能是优选的。
适用于眼的另一种是玻璃体内注射通式(I)化合物的溶液剂或混悬剂。 此外，还可以通过眼植入物或插入物引入通式(I)化合物。
施用通式(I)的组合物还可以包括多种其它成分，包括但不限于张力剂、 缓冲剂、表面活性剂、稳定聚合物、防腐剂、共溶剂和粘度形成剂。通式 (I)的适合的药物组合物包括与张力剂和缓冲剂配制的本发明化合物。通式 (I)的药物组合物可以进一步任选包含表面活性剂和/或缓和剂和/或稳定聚 合物。
可以使用多种张力剂来调节组合物的张力，优选将眼用组合物调至天 然泪液的张力。例如可以将氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、简单糖例 如右旋糖、果糖、半乳糖和/或简单多元醇例如糖醇甘露醇、山梨醇、木糖 醇、乳糖醇、异麦芽糖醇、麦芽糖醇和氢化淀粉水解物添加至组合物中至 接近生理张力。此类张力剂的量将取决于添加的特定物质而变化。然而通 常组合物的张力剂的量将足以使最终组合物具有眼用可接受的重量克分子 渗透浓度(通常约150-450mOsm，优选250-350mOsm，并且最优选约290 mOsm)。通常，本发明的张力剂以2至4％w/w的范围存在。本发明优选 的张力剂包括简单糖或糖醇，例如D-甘露醇。
可以添加适当缓冲剂系统(例如磷酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠或 硼酸)至组合物中，以防止在pH在储存条件下偏移。特定的浓度将取决于 所用的物质而变化。然而优选地，选择缓冲剂以使目标pH维持在pH 5至 8的范围内，并且更优选目标pH为pH 5至7。
可以任选使用表面活性剂来递送更高浓度的通式(I)化合物。表面活性 剂用于溶解化合物和稳定胶体分散体，例如胶束溶液剂、微乳剂、乳剂和 混悬剂。可以任选使用的表面活性剂的实例包括聚山梨酯、泊洛沙姆、 polyosyl 40硬脂酸酯、聚氧基蓖麻油、泰洛沙泊、Triton和单月桂酸山梨 坦。本发明使用的优选的表面活性剂是亲水性/亲脂性/平衡“HLB”在12.4 至13.2范围的，并且是眼用可接受的，例如TritonX114和泰洛沙泊。
可以加入至通式(I)化合物的眼用组合物中的其它物质是缓和剂，其用 作稳定聚合物。稳定聚合物应当是优先局部用于眼的离子性/带电荷的实例， 更特别地，在其表面上带有负电荷的聚合物，其可以表现出ζ电位(-)10-50 mV的物理稳定性，并且可以在水中形成分散体(即水可溶的)。本发明的优 选的稳定聚合物是聚电解质或(如果超过一种)聚电解质群，来自交联聚丙 烯酸酯家族，例如卡波姆和Pemulen(R)，特别是Carbomer 974p(聚丙烯 酸)，0.1-0.5％w/w。
还可以在通式(I)化合物的眼用组合物中添加其它化合物，以提高载体 的粘度。粘度增强剂的实例包括但不限于：多糖，例如透明质酸及其盐、 硫酸软骨素及其盐、葡聚糖、纤维素家族的多种聚合物；乙烯基聚合物； 和丙烯酸聚合物。
局部眼用产品通常以多剂量型包装。因此，需要防腐剂来防止使用期 间的微生物污染。适合的防腐剂包括：苯扎氯铵、氯丁醇、苄基二甲基十 二烷基溴化铵(benzododecinium bromide)、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯 甲酸丙酯、苯基乙醇、乙二胺四乙酸二钠、山梨酸、聚季铵盐 (polyquaternium)-1或本领域技术人员已知的其它物质。此类防腐剂通常 以0.001至1.0％w/v水平应用。通式(I)的单位剂量组合物是无菌的，但通常不防腐。因此此类组合物通常不含防腐剂。
医学操作者或其它技术人员能够确定通式(I)化合物的适合剂量，以及 任何特别的药物制剂中应当包含的本发明化合物的量(不论是否是单位剂 型)。
通式(I)化合物可以与一种或多种其它可用于治疗或预防呼吸疾病和 病症的活性剂组合。
此类其它活性剂可以包括在上述药物组合物中，但还可以分开施用， 与通式(I)化合物同时或提早或延后均可。
因此，本发明另一方面提供了包含通式(I)化合物和其它可用于治疗或 预防呼吸病症的活性剂的产品，其作为组合制剂，同时、依次或分开用于 治疗ENaC介导的疾病或病症，并且特别是呼吸疾病或病症，例如上述疾 病和病症之一。
还提供通式(I)化合物与其它可用于治疗或预防呼吸病症的活性剂组 合，作为组合制剂，用于同时、依次或分开用于治疗ENaC介导的疾病或 病症，并且特别是呼吸疾病或病症，例如上述疾病和病症之一。
可以包含在药物组合物或与通式(I)化合物的组合制剂中的其它适合 的活性剂包括：
β2肾上腺素受体激动剂，例如间羟异丙肾上腺素(metaproterenol)、异 丙去甲肾上腺素(isoproterenol)、异丙肾上腺素(isoprenaline)、舒喘灵 (albuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、福莫特罗(formoterol)、沙美特罗 (salmeterol)、茚达特罗(indacaterol)、特布他林(terbutaline)、奥西那林(orciprenaline)、甲磺酸比托特罗(bitolterol mesylate)和吡布特罗 (pirbuterol)；
抗组胺剂，例如组胺H1受体拮抗剂，例如氯雷他定(loratadine)、西替 利嗪(cetirizine)、地氯雷他定(desloratadine)、左西替利嗪(levocetirizine)、 非索非那定(fexofenadine)、阿司咪唑(astemizole)、氮卓斯汀(azelastine)和 氯苯那敏(chlorpheniramine)或H4受体拮抗剂；
阿法链道酶(dornase alpha)；
皮质类固醇，例如波尼松(prednisone)、波尼松龙(prednisolone)、氟尼 缩松(flunisolide)、丙酮曲安奈德(triamcinolone acetonide)、二丙酸倍氯米 松(beclomethasone dipropionate)、布地奈德(budesonide)、丙酸氟替卡松 (fluticasonepropionate)、糠酸莫米松(mometasone furoate)和糠酸氟替卡松 (fluticasonefuroate)；
白三烯拮抗剂，例如孟鲁司特(montelukast)和扎鲁司特(zafirlukast)；
CFTR修复疗法，例如CFTR增效剂，例如伊维卡托(Ivacaftor)和 CFTR校正剂，例如鲁玛卡托(Lumacaftor)和特赛卡托(Tezacaftor)；
TMEM16A调节剂，特别是TMEM16A增效剂；
抗生素。
现将参考非限制性实施例和附图，更详细说明本发明，其中：
图1是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 14化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为107μg/kg(▲) 和 250μg/kg(●)和水(■)。
图2是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例4 化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为158μg/kg(●)与水(■) 比较。
图3是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的连续两个图，其显示用 实施例50化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除；A-化合物50， 剂量为6μg/kg(●)、3μg/kg(▲)和24μg/kg(◆)和水(■)；B-重复剂量的化 合物50，3μg/kg BiD(●)和13μg/kg(▲)和水(■)。
图4是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例47化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为28μg/kg(●)与水 (■)比较。
图5是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 48化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为26μg/kg(●)与水(■) 比较。
图6是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 49化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为31μg/kg(●)与水(■) 比较。
图7是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 45化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为26μg/kg(●)与水(■) 比较。
图8是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 46化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为25μg/kg(●)与水(■) 比较。
图9是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 51化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为25μg/kg(●)与水 (■)比较。
图10是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 31化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为25μg/kg(●)与水(■) 比较。
图11是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 41化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为25μg/kg(●)与水(■) 比较。
图12是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 52化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为15μg/kg(●)与水(■) 比较。
图13是显示实施例70的绵羊MCC试验结果的图，其显示用实施例 44化合物处理的绵羊的肺的99mTc-SC的清除，剂量为19μg/kg(●)与水(■) 比较。
实施例
所有涉及对湿度敏感的试剂的反应均在氮气气氛下，使用标准真空管 线技术和烘干的玻璃器皿进行。反应中使用商购的无水溶剂，并且后处理 和色谱中使用HPLC级溶剂。水使用Elix UV-5系统纯化。所有其它试剂 均由供货商直接提供，未先经纯化即使用。所报告的产率已经过LC/MS纯 度(由UV(215nm)或ELS检测法测定)校正，除非另有说明。密封管反应 在厚壁Ace加压管中进行。微波试验使用Biotage Initiator+螺旋密封 Biotage微波瓶进行。快速柱色谱使用Biotage Isolera 4，使用Biotage SNAP KP或SNAP Ultra柱进行。NMR谱在Bruker Avance III HD 500MHz或 Bruker Avance III HD 250MHz上记录，使用溶剂作为内部氘锁定物进行。 除非另有说明，否则在室温记录谱。
分析LC/MS在下列系统上进行：
系统A：固定相：Kinetex Core-Shell C18 2.1×50mm，5μm，40℃； 检测UV 215nm-ELS-MS；流动相：A，水+0.1％甲酸；B，MeCN+0.1％ 甲酸；梯度(A:B比例，时间)：95:5-0:100，1.20分钟；100:0，0.10分钟； 100:0-5:95，0.01分钟；流速：1.2mL/分钟；
系统B：固定相：Phenomenex Gemini-NX C18 2.0×50mm，3μm， 60℃；检测UV215nm-ELS-MS；流动相：A，2mM碳酸氢铵pH 10；B， MeCN；梯度(A:B比例，时间)：99:1-0:100，1.80分钟；100:0，0.30分钟； 100:0-1:99，0.20分钟；1:99，1.20分钟；流速：1.0mL/分钟；
系统C：固定相：Phenomenex Kinetex-XB C18 2.1×100mm，1.7μm， 40℃；检测UV215nm-ELS-MS；流动相：A，水+0.1％甲酸；B，MeCN+0.1％ 甲酸；梯度(A:B比例，时间)：95:5-0:100，5.30分钟；100:0，0.50分钟； 100:0-5:95，0.02分钟；5:95，1.18分钟；流速：0.6mL/分钟；
系统D：固定相：Waters CSH C18 2.1×100mm，1.7μm，40℃；检 测UV 215nm-ELS-MS；流动相：A，5mM乙酸铵pH 7；B，MeCN；梯 度(A:B比例，时间)：95:5-0:100，5.30分钟；100:0，0.50分钟；100:0-5:95， 0.02分钟；5:95，1.18分钟；流速：0.6mL/分钟。
制备HPLC纯化应用下列条件进行：
方法A：固定相：Waters Sunfire 30×100mm，10μm；检测UV 215 和254nm；流动相A：水+0.1％甲酸；B：MeCN+0.1％甲酸；梯度：5-95％ 溶剂B，历经14分钟；流速：40mL/分钟；
方法B：固定相：Waters Sunfire 30×100mm，5μm；检测UV 215和 254nm；流动相A：水+0.1％甲酸；B：MeCN+0.1％甲酸；梯度：2-12％ 溶剂B，历经12分钟；流速：40mL/分钟；
方法C：固定相：XSelect CSH C18 30×100mm，5μm；检测UV 220 nm；流动相A：水+0.1％TFA；B：MeCN+0.1％TFA；梯度：5-15％溶剂 B，历经21分钟；流速：42mL/分钟；
方法D：固定相：XSelect CSH C18 30×100mm，5μm；检测UV 220 nm；流动相A：水+0.1％TFA；B：MeCN+0.1％TFA；梯度：2-15％溶剂 B，历经12分钟；流速：42mL/分钟；
方法E：固定相：XSelect CSH C18 30×100mm，5μm；检测UV 220 nm；流动相A：水+0.1％TFA；B：MeCN+0.1％TFA；梯度：10-35％溶剂 B，历经10分钟；流速：42mL/分钟。
全文中的下列缩略语和术语具有指定定义：
AcOH 冰醋酸
br 宽
CDI 1,1’-羰基二咪唑
CV 柱体积
dd 双重双峰
DIPEA N,N-二异丙基乙基胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
dppf 1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁
EDC.HCl N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐
ELS 蒸发激光散射
ESI 电喷雾离子化
EtOAc 乙酸乙酯
FMOC 芴基甲基氧基羰基
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-
b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HBTU 3-[双(二甲基氨基)甲基鎓]-3H-苯并三唑-1-氧化
物六氟磷酸盐
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC 高效液相色谱
LC/MS 液相色谱-质谱
m 多重峰
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
NCS N-氯琥珀酰亚胺
NMR 核磁共振
Ph 苯基
q 四重峰
RT 室温
Rt 保留时间
s 单峰
SCX 强阳离子交换
SPhos 2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯
t 三重峰
t-Bu 叔丁基
TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟
硼酸盐
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
XPhos-Pd-G2 氯(2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联
苯)[2-(2’-氨基-1,1’-联苯)]钯(II)
A.中间体的合成
中间体1-3,5-二氨基-6-[(E)-2-乙氧基乙烯基]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000611
将3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(40.0g，197mmol)、2-[(E)-2-乙氧 基乙烯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(84mL，400mmol)、 SPhos(8.11g，19.7mmol)、乙酸钯(II)(2.22g，9.87mmol)和K3PO4(83.8 g，395mmol)在水:MeCN(2:3，350mL)中的混合物在80℃搅拌2小时， 然后使其冷却至RT。通过过滤收集固体，随后使用EtOAc(100mL)和水 (100mL)洗涤，然后真空干燥，得到产物，为棕色固体(36.7g，76％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.15(d,J＝12.2Hz,1H),6.79(s,4H), 5.97(d,J＝12.2Hz,1H),3.91(q,J＝7.0Hz,2H),3.72(s,3H),1.25(t,J＝7.0Hz, 3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝239[MH+]，Rt＝0.88分钟，UV纯度 ＝98％。
中间体2-3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000612
将3,5-二氨基-6-[(E)-2-乙氧基乙烯基]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体1(98％，36.6g，151mmol)的AcOH(360mL)溶液在80℃加热16小时。使反应冷 却至RT，然后真空浓缩。将残留物与甲苯(2×100mL)共沸。将所得残留物 溶于CH2Cl2:MeOH(4:1，600mL)，然后在50℃温热。加入活性炭(5g)， 然后将所得混合物在50℃搅拌0.5小时。使混合物冷却，然后通过Celite 垫过滤。将滤液真空浓缩，得到产物，为棕色固体(20.2g，68％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.48(s,1H),7.50(d,J＝3.8Hz,1H), 7.05(s,2H),6.42(d,J＝3.7Hz,1H),3.84(s,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝193[MH+]，Rt＝0.76分钟，UV纯度 ＝98％。
中间体3-锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790000621
将LiOH水溶液(1.0M，210mL，210mmol)加入至3-氨基-5H-吡咯并 [2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体2(20.2g，105mmol)在MeOH(300mL) 中的混合物中。将所得混合物在50℃加热16小时，然后使其冷却至RT。 通过过滤收集固体，然后用水和MeOH洗涤，然后真空干燥，得到产物， 为黄色固体(15.6g，79％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),8.62-6.43(m,3H),6.18 (d,J＝3.6Hz,1H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝179[MH+]，Rt＝0.96分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体4-2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺的合成
Figure GDA0002817691790000622
将锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(5.00 g，27.2mmol)、CDI(6.61g，40.7mmol)和1H-咪唑盐酸盐(1:1)(3.12g， 29.9mmol)在DMF(80mL)中的混合物在RT搅拌16小时。加入另外的 CDI(2.00g，12.3mmol)，并且将该反应再在RT搅拌1小时。将反应混合 物用水(350mL)稀释，然后在RT搅拌5分钟，然后在RT放置0.5小时。将所得混合物过滤，然后将收集的固体用水洗涤，然后真空干燥，得到产 物，为黄/橙色固体(3.30g，52％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H),8.74(t,J＝0.9Hz,1H), 7.94(t,J＝1.4Hz,1H),7.63(dd,J＝3.8,2.3Hz,1H),7.44(s,2H),7.08(dd, J＝1.5,0.8Hz,1H),6.52(dd,J＝3.8,1.3Hz,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝229[MH+]，Rt＝0.65分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体7-3,5-二氨基-6-[3-(三甲基甲硅烷基)丙-1-炔-1-基]吡嗪-2-甲酸 甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000631
将三甲基(丙-2-炔-1-基)硅烷(332mg，2.96mmol)加入至加压管中的 3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(500mg，2.47mmol)、PdCl2(PPh3)2(170 mg，0.25mmol)、CuI(47mg，0.25mmol)和三乙胺(520μL，3.7mmol)的 DMSO(5mL)溶液中。将管密封，然后在60℃加热2小时。使反应冷却 至RT，然后在RT搅拌16小时，再在60℃搅拌2小时。将反应混合物 用EtOAc(20mL)和水(20mL)稀释，然后通过Celite垫过滤。将滤液的相 分开，然后将有机相用水(2×50mL)和盐水(100mL)萃取，然后经Na2SO4干燥，并且真空浓缩成粘稠橙/棕色油状物。将粗物质通过二氧化硅柱(50g) 快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，使用下列梯度洗脱(％EtOAc，柱体 积)：0％，1CV；0-46％，6CV；46-67％，2CV；67％，1CV；67-100％， 3CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(330mg， 44％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.12(s,4H),3.72(s,3H),1.84(s,2H), 0.13(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝279[MH+]，Rt＝1.11分钟，UV纯度 ＝92％。
中间体8-3-氨基-6-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000632
将叔丁醇钾(141mg，1.26mmol)加入至3,5-二氨基-6-[3-(三甲基甲硅 烷基)丙-1-炔-1-基]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体7(92％，318mg，1.05mmol) 的THF(25mL)溶液中。将反应混合物在回流下搅拌1小时，加入叔丁醇 钾(141mg，1.26mmol)，然后将反应再在回流下加热1小时。将反应混合 物用EtOAc(100mL)稀释，然后用饱和NH4Cl水溶液(50mL)、水(50mL) 和盐水(50mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将粗物质通 过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，使用下列梯度 洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，1CV；0-7％，2CV；7-9％，1CV；9-41％， 4CV；41-83％，3CV；100％1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到 产物，为黄色固体(105mg，40％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ11.35(s,1H),6.97(s,2H),6.22-6.02 (m,1H),3.81(s,3H),2.35(d,J＝1.0Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝207[MH+]，Rt＝0.82分钟，UV纯度 ＝82％。
中间体9-3-氨基-6-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸的合成
Figure GDA0002817691790000641
将LiOH水溶液(1.0M，1.0mL，1.0mmol)加入至3-氨基-6-甲基-5H- 吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体8(82％，100mg，0.40mmol)的 MeOH(4mL)溶液中。将反应混合物在50℃搅拌1小时。加入LiOH水 溶液(1.0M，1.0mL，1.0mmol)，然后将反应混合物再在65℃搅拌1小 时。使反应混合物冷却，然后真空浓缩。将所得残留物溶于水(5mL)中， 然后使用稀HCl水溶液酸化至pH 3。将混合物在RT放置64小时，然后 过滤。将所得固体用水(2mL)洗涤，然后真空干燥，得到产物，为棕色固 体(85mg，>99％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),6.91(br.s,2H),6.14(s, 1H),2.36(s,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝193[MH+]，Rt＝0.64分钟，UV纯度 ＝90％。
中间体10-3-氨基-7-碘-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000651
将3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体2(98％，1.50g，7.65mmol)和NIS(1.84g，8.16mmol)在丙酮(30mL)中的混合物在RT搅 拌2小时。加入另外的NIS(350mg，1.56mmol)，并且将反应再在RT搅 拌0.5小时。将反应混合物真空浓缩成黑色固体。将粗物质通过二氧化硅 柱(100g)快速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，使用下列梯度洗脱 (％MeOH，柱体积)：0％，1CV；0-3.5％，4CV；3.5％，2CV；3.5-4.4％， 1CV。合并所需级分，并且真空浓缩。所得物质再通过制备HPLC纯化(方 法A)。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄/橙色固体(591mg， 24％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.89(s,1H),7.72(s,1H),7.21(s,2H), 3.88(s,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝319[MH+]，Rt＝0.94分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体11-3-氨基-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000652
历经2分钟滴加二甲基锌的甲苯溶液(2.0M，0.88mL，1.8mmol)至冷 却(0℃)的3-氨基-7-碘-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体10(280 mg，0.88mmol)和Pd(Pt-Bu3)2(45mg，0.09mmol)的THF(5mL)混悬液 中。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后使其温至RT。加入另外的二 甲基锌的甲苯溶液(2.0M，0.88mL，1.8mmol)和Pd(Pt-Bu3)2(45mg，0.09mmol)的THF(2mL)溶液，然后将所得混合物在RT搅拌10分钟。加入 饱和NaHCO3水溶液(10mL)，然后加入EtOAc(30mL)。将混合物通过 Celite垫过滤，然后分离各相。将有机相用水(3×80mL)和盐水(80mL)萃 取，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快 速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，以10CV，线性梯度从0上升至 100％EtOAc洗脱。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体 (85mg，46％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),7.25(dd,J＝2.3,1.2Hz, 1H),7.03(s,2H),3.85(s,3H),2.17(d,J＝1.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝207[MH+]，Rt＝0.85分钟，UV纯度 ＝99％。
中间体12-锂(1+)离子3-氨基-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐 的合成
Figure GDA0002817691790000661
将LiOH水溶液(1.0M，1.0mL，1.0mmol)加入至3-氨基-7-甲基-5H- 吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体11(110mg，0.53mmol)在MeOH(1 mL)中的混合物中。将反应在50℃加热1小时，然后使其冷却至RT。将 所得混合物过滤，然后将固体用水洗涤，并且真空干燥，得到产物，为黄 色固体(91mg，84％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),8.68-6.32(m,3H),2.12 (s,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝193[MH+]，Rt＝0.77分钟，UV纯度 ＝98％。
中间体13-2-(1H-咪唑-1-羰基)-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺的 合成
Figure GDA0002817691790000662
将锂(1+)离子3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体12 (90mg，0.45mmol)、CDI(110mg，0.67mmol)和1H-咪唑盐酸盐(1:1)(56 mg，0.53mmol)在DMF(2mL)中的混合物在RT搅拌1小时。加入另外 的CDI(50mg，0.31mmol)，并且使反应再继续1小时。将反应混合物用 水(4mL)稀释，然后过滤。将固体用水洗涤，然后真空干燥，得到产物， 为黄色固体(83mg，75％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.37(s,1H),8.84(s,1H),8.00(t,J＝1.4 Hz,1H),7.45(s,2H),7.41-7.37(m,1H),7.12-7.08(m,1H),2.22(d,J＝1.1 Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝243[MH+]，Rt＝0.78分钟，UV纯度 ＝98％。
中间体14-3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000671
将3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体2(98％，1.00g，5.10mmol)和NCS(0.561g，4.20mmol)在DMF(15mL)中的混合物在40℃ 搅拌2小时。加入另外的NCS(50mg，0.37mmol)，并且将反应再在40℃ 搅拌2小时。将反应混合物在水(100mL)和EtOAc(100mL)之间分配。分 离各相，然后将有机相用水(2×100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空 浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快速柱色谱纯化。柱用 CH2Cl2:MeOH，以8份柱体积，线性梯度从100:0上升至90:10，然后以 5份柱体积90:10等梯度洗脱。合并所需级分并且蒸发。将所得残留物混 悬于CH2Cl2:MeOH(9:1，20mL)，然后过滤。将滤液再通过C18(60g)快 速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，使用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-20％，8CV；20-37％，8CV；37-100％，5CV； 100％，1CV。将过滤的固体溶于DMSO:MeCN(2:1)，然后通过制备HPLC 纯化(方法A)。合并来自两柱的所需级分并且蒸发，得到产物，为黄色固体 (222mg，19％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),7.68(s,1H),7.24(s,2H), 3.87(s,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝227[MH+]，Rt＝0.88分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体15-锂(1+)离子3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐的 合成
Figure GDA0002817691790000681
将LiOH水溶液(1.0M，1.9mL，1.9mmol)加入至3-氨基-7-氯-5H-吡 咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体14(220mg，0.97mmol)在MeOH(3 mL)中的混合物中。将反应混合物加热至50℃达2小时，然后使其冷却至 RT。将所得混悬液过滤，然后将收集的固体用最少量的MeOH和水洗涤。 将所得固体真空干燥，得到产物，为黄色固体(191mg，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.37(s,1H),8.39-7.10(m,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝213[MH+]，Rt＝0.81分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体16-7-氯-2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺的合 成
Figure GDA0002817691790000682
将锂(1+)离子3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体15(190mg，0.869mmol)、CDI(211g，1.30mmol)和1H-咪唑盐酸盐(1:1)(100 mg，0.956mmol)在DMF(4mL)中的混合物在RT搅拌0.5小时。加入另 外的CDI(50mg，0.31mmol)，并且使反应在RT再搅拌0.5小时。将反 应混合物用水(6mL)稀释，然后在RT搅拌20分钟。将所得混悬液过滤， 然后将收集的固体用水洗涤，然后真空干燥，得到产物，为黄/橙色固体(164 mg，72％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.98(s,1H),8.80(s,1H),7.99(t,J＝1.4 Hz,1H),7.84(s,1H),7.58(s,2H),7.12(dd,J＝1.5,0.8Hz,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝263[MH+]，Rt＝0.82分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体17-N-[(1-乙基-6-氟-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁 酯的合成
Figure GDA0002817691790000691
将2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙酸(1.70g，9.73mmol)、HATU(4.07g， 10.7mmol)和DIPEA(3.39mL，19.5mmol)的DMF(20mL)溶液在RT搅 拌20分钟。加入1-N-乙基-5-氟苯-1,2-二胺(1.05g，9.73mmol)的THF(10 mL)溶液，并且将所得混合物在RT搅拌16小时。将反应混合物倾倒至饱 和NaHCO3水溶液(80mL)上。加入EtOAc(100mL)和水(50mL)，然后将 各相分离。将水相用EtOAc(2×50mL)萃取，然后将合并的有机相用水 (4×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发，产生 中间体，为黑色油状物(4g)。将中间体溶于乙酸(30mL)，然后在60℃加 热4小时。将反应混合物冷却至RT，然后在RT搅拌16小时。将所得混 合物蒸发，然后将所得残留物在EtOAc(150mL)和水(100mL)之间分配。 将水相用EtOAc(50mL)萃取，然后将合并的有机相用水(4×50mL)和盐水 (50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发成黑色固体(4g)。将固 体溶于最少量的CH2Cl2/MeOH中，然后在二氧化硅(9g)上蒸发。将粗物 质通过二氧化硅柱(120g)快速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，以10份 柱体积，从100:0线性梯度上升至95:5洗脱。合并所需级分，并且蒸发成 黑色固体(2.9g)。所得固体溶于EtOAc(100mL)，并且用饱和碳酸氢钠水 溶液(3×50mL)和水(50mL)萃取，然后经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发成黑 色固体(2.5g)。将固体溶于最少量的CH2Cl2/MeOH，然后在二氧化硅(10g) 上蒸发。将物质进一步通过二氧化硅柱(120g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc: 庚烷，以10份柱体积，从0:100线性梯度上升至100:0洗脱。合并所需级 分，并且蒸发，得到产物，为粉色固体(1.78g，62％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.56(dd,J＝8.8,4.9Hz,1H),7.50-7.41 (m,2H),7.01(ddd,J＝9.9,8.9,2.5Hz,1H),4.42(d,J＝5.9Hz,2H),4.24(q, J＝7.2Hz,2H),1.45-1.20(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝294[MH+]，Rt＝0.92分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体18-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-6-氟-3-甲基-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000701
将碘甲烷(497μL，7.98mmol)加入至加压管中N-[(1-乙基-6-氟-1H-1,3- 苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯，中间体17(780mg，2.66mmol)的 MeCN(12mL)混悬液中。将管密封，然后在75℃加热4小时。使反应混 合物冷却至RT，然后真空浓缩，得到产物，为浅黄色固体(1.16g，99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.14-8.04(m,2H),7.94(t,J＝5.2Hz, 1H),7.68-7.56(m,1H),4.73(d,J＝5.4Hz,2H),4.58(q,J＝7.2Hz,2H),4.08 (s,3H),1.38(d,J＝11.2Hz,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝308[M+]，Rt＝0.87分钟，UV纯度＝99％。
中间体19-2-(氨基甲基)-1-乙基-6-氟-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐 酸盐碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000702
将HCl的二
Figure GDA0002817691790000703
烷溶液(4.0M，3.3mL，13.2mmol)加入至2-({[(叔丁氧 基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-6-氟-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中 间体18(1.16g，2.66mmol)的MeCN(5mL)溶液中。将反应在RT搅拌0.5 小时，然后真空浓缩。将固体与MeCN(10mL)共沸，然后真空干燥，得 到产物，为黄/绿色固体(870mg，88％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,3H),8.25-8.14(m,2H),7.69 (td,J＝9.3,2.4Hz,1H),4.76(s,2H),4.70(q,J＝7.2Hz,2H),4.19(s,3H),1.42 (t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝208[M+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度＝100％。
中间体20-2-[(6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H- 异吲哚-1,3-二酮的合成
Figure GDA0002817691790000711
将N-邻苯二甲酰基甘氨酸(2.15g，10.5mmol)、TBTU(3.52g，11.0 mmol)和三乙胺(2.31mL，13.0mmol)在DMF(30mL)中的混合物在RT搅 拌45分钟。加入5-氯-1-N-乙基苯-1,2-二胺(1.70g，9.96mmol)的THF(20 mL)溶液，并且将所得混合物在RT搅拌18小时。将反应混合物加入至饱 和NaHCO3水溶液(100mL)中，引起浅棕色固体从溶液中沉淀。滤出固体，用水洗涤，并且真空干燥。将所得固体在MeCN中研磨，然后过滤，并且 真空干燥，得到中间体，为浅粉色固体(5.4g)。将所得固体分批加入至乙酸 (30mL)中。将所得混悬液在100℃加热45分钟，然后使其历经16小时 冷却至RT。将所得混悬液过滤，并且用EtOAc洗涤，然后真空干燥，得 到产物，为浅粉色固体(585mg)。将固体混悬于MeCN(5mL)中，然后加 入MeCN:水(1:1，1mL)。将所得混悬液过滤，然后将固体真空干燥，得到 产物，为浅粉色固体(430mg，13％)。将滤液再过滤一次，然后将固体用 EtOAc洗涤，并且真空干燥，得到第二批产物，为浅粉色固体(2.00g)。将 固体混悬于MeCN(20mL)中，然后加入MeCN:水(1:1，5mL)。将所得混悬液过滤，然后将固体真空干燥，得到第二批产物，为浅粉色固体(1.33g， 38％)。两批产物是在MeCN中的混悬液，然后真空浓缩，并且真空干燥， 得到产物，为浅粉色固体(1.76g，51％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ8.02-7.85(m,4H),7.76(d,J＝1.9Hz, 1H),7.49(d,J＝8.6Hz,1H),7.15(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),5.13(s,2H),4.39(q, J＝7.1Hz,2H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝340[M(35Cl)H+]，342[M(37Cl)H+]， Rt＝1.12分钟，UV纯度＝99％。
中间体21-6-氯-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基 -3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000721
将2-[(6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚- 1,3-二酮，中间体20(600mg，1.77mmol)和碘甲烷(330μL，5.30mmol)在 MeCN(6mL)中的混合物在75℃在密封管中加热1.5小时，然后使其冷却 至RT。加入碘甲烷(165μL，2.65mmol)，然后将反应在80℃加热5小 时。使反应冷却至RT，然后过滤，得到固体，将其用MeCN洗涤，并且 真空干燥，得到产物，为黄色固体(644mg，73％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝1.8Hz,1H),8.13(d,J＝8.9 Hz,1H),7.91(ddt,J＝18.3,5.8,3.1Hz,4H),7.79(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H),5.40 (s,2H),4.74(q,J＝7.2Hz,2H),4.14(s,3H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝354[M(35Cl)+]，356[M(37Cl)+]，Rt＝0.90 分钟，UV纯度＝97％。
中间体22-2-(氨基甲基)-6-氯-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘 化物的合成
Figure GDA0002817691790000722
将肼水合物(446μL，9.17mmol)加入至加压管中的6-氯-2-[(1,3-二氧 代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘 化物，中间体21(640mg，1.33mmol)的MeOH(8mL)混悬液中。将管密 封，在75℃加热3小时，然后使其冷却至RT。将所得混悬液过滤，并且 将固体用MeOH(10mL)洗涤。将滤液真空浓缩，得到橙色固体，将其混 悬于CH2Cl2(10mL)中，然后过滤，并且用CH2Cl2彻底清洗。将所得固体 混悬于CH2Cl2(10mL)。加入几滴MeOH，并且将混悬液超声。将所得混 悬液过滤，然后将固体真空干燥，得到产物，为灰白色固体(360mg，77％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝1.9Hz,1H),8.06(d,J＝8.9 Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H),4.60(q,J＝7.2Hz,2H),4.25(s,2H),4.06 (s,3H),2.52-2.10(s,2H+DMSO),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝224[M(35Cl)+]，226[M(37Cl)+]，Rt＝0.16 分钟，ELS纯度＝100％。
中间体23-2-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢 -1H-异吲哚-1,3-二酮的合成
Figure GDA0002817691790000731
中间体23根据文献方法(US 2015/0018314 A1)合成。
中间体24-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-6-甲 氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000732
将碘甲烷(590μL，9.47mmol)加入至加压管中的2-[(1-乙基-6-甲氧基- 1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮，中间体23(1.59 g，4.74mmol)的MeCN(13mL)混悬液中。将混合物在80℃加热4小时， 然后使其冷却至RT。将所得混悬液在氮气流下缩减至接近其原来的一半 体积。通过过滤收集固体，然后再用MeCN(3mL)洗涤，得到产物，为白 色固体(1.99g，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.01-7.84(m,5H),7.62(d,J＝2.2Hz, 1H),7.32(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),5.37(s,2H),4.71(q,J＝7.1Hz,2H),4.11(s, 3H),3.92(s,3H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝350[M+]，Rt＝0.87分钟，UV纯度＝99％。
中间体25-2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3- 鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000741
将肼水合物(1.17mL，24.0mmol)加入至2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H- 异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物， 中间体24(2.29g，4.80mmol)的MeOH(25mL)混悬液中。将混合物在75℃ 加热1小时。将反应真空浓缩，并且将所得固体混悬于CH2Cl2:MeOH(10:1)。 通过过滤收集固体，并且用CH2Cl2洗涤。将滤液真空浓缩，得到产物，为 浅棕色固体(1.60g，96％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,J＝9.1Hz,1H),7.57(d,J＝2.3 Hz,1H),7.26(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),4.58(q,J＝7.2Hz,2H),4.23(s,2H),4.03 (s,3H),3.91(s,3H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝220[M+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度＝100％。
中间体26-N-{[1-乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}氨基 甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790000742
中间体26根据文献方法(WO 2009019506 A1)合成。
中间体27-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲 基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000751
将碘甲烷(381μL，6.12mmol)加入至加压管中的N-{[1-乙基-6-(三氟甲 基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯，中间体26(700mg，2.04 mmol)的MeCN(10mL)混悬液中。将管密封，并且在75℃加热8小时， 然后使其冷却至RT。将反应混合物真空浓缩，得到产物，为浅黄色固体 (1.01g，>99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.64(s,1H),8.29(d,J＝8.7Hz,1H), 8.08(d,J＝8.7Hz,1H),7.98(t,J＝5.2Hz,1H),4.80(d,J＝5.6Hz,2H),4.73(q, J＝7.2Hz,2H),4.14(s,3H),1.40(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝358[M+]，Rt＝0.91分钟，UV纯度＝98％。
中间体28-2-(氨基甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑 -3-鎓盐酸盐碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000752
将HCl的二
Figure GDA0002817691790000753
烷溶液(4.0M，2.8mL，11mmol)加入至2-({[(叔丁氧 基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘 化物，中间体27(1.07g，2.21mmol)的MeCN(5mL)溶液中。将反应在RT 搅拌16小时，然后真空浓缩，得到产物，为灰白色固体(875mg，94％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,3H),8.74(s,1H),8.38(d,J＝8.8 Hz,1H),8.14(dd,J＝8.8,1.3Hz,1H),4.84(d,J＝5.5Hz,4H),4.24(s,3H),1.45 (t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝258[M+]，Rt＝0.17分钟，ELS纯度＝100％。
中间体29-N-乙基-2-硝基-5-(三氟甲氧基)苯胺的合成
Figure GDA0002817691790000761
如下文平行进行两次相同反应，然后合并用于后处理。将乙胺的THF 溶液(2.0M，4.1mL，8.2mmol)加入至加压管中的2-氯-1-硝基-4-(三氟甲 氧基)苯(1.00g，4.14mmol)和K2CO3(1.71g，6.21mmol)的THF(12mL) 混悬液中。将管密封，然后在50℃加热16小时，然后使其冷却至RT。 加入另外的乙胺的THF溶液(2.0M，2.1mL，4.2mmol)，然后将反应在 50℃加热24小时。将合并的反应过滤，然后将所得固体用EtOAc(100mL) 冲洗。将合并的滤液用饱和NaHCO3水溶液(2×100mL)、水(50mL)和盐水 (50mL)萃取，然后经Na2SO4干燥，然后过滤，并且蒸发成橙色油状物。 将粗物质通过C18(120g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水，使用下列梯度 洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-100％，20CV；100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩以除去大部分MeCN。将残留的水性混合物 用EtOAc(100mL)萃取。分离有机相，然后经Na2SO4干燥并且蒸发，得 到产物，为亮橙色油状物(1.42g，69％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.23(d,J＝9.4Hz,1H),8.04(s,1H),6.61 (d,J＝2.0Hz,1H),6.48(ddd,J＝9.4,2.4,1.2Hz,1H),3.33(qd,J＝7.2,5.1Hz, 2H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝251[MH+]，Rt＝1.32分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体30-N-{[1-乙基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}氨 基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790000762
将钯碳(10wt％，0.3g)和N-乙基-2-硝基-5-(三氟甲氧基)苯胺，中间体 29(1.42g，5.68mmol)的EtOH溶液(40mL)混悬液在氢气氛和RT搅拌16 小时。将反应混合物通过玻璃纤维滤纸过滤，并且用EtOAc彻底洗涤。将 滤液真空浓缩，然后用THF(10mL)稀释。将所得溶液加入至预先混合的 2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙酸(994mg，5.68mmol)、HATU(2.37g，6.24 mmol)和DIPEA(1.98mL，11.4mmol)的DMF(20mL)溶液中。将反应混 合物在RT搅拌68小时，然后倾倒至饱和NaHCO3水溶液(80mL)中。加 入EtOAc(50mL)和水(50mL)，并且分离各相。将水相用EtOAc(2×50mL) 萃取，然后将合并的有机相用水(4×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后经 Na2SO4干燥，过滤并且蒸发成黑色油状物。将所得油状物溶于乙酸(10mL)， 并且将所得溶液于70℃加热1.5小时。将反应溶液真空浓缩，然后将残留 物在EtOAc(50mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)之间分配。将有机相 用饱和NaHCO3水溶液(4×50mL)、水(50mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经 Na2SO4干燥，过滤并且蒸发成棕色固体(1.95g)。将粗物质溶于 CH2Cl2/MeOH，然后在二氧化硅(10g)上蒸发，并且通过二氧化硅柱(120g) 快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，以10份柱体积，从0:100线性梯度 上升至100:0洗脱。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为粉色固体(1.04 g，47％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.70-7.61(m,2H),7.49(d,J＝5.1Hz, 1H),7.19-7.10(m,1H),4.44(d,J＝5.9Hz,2H),4.29(q,J＝7.1Hz,2H),1.45 -1.23(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝360[MH+]，Rt＝1.11分钟，UV纯度＝92％。
中间体31-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲 氧基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000771
将碘甲烷(208μL，3.34mmol)加入至加压管中的N-{[1-乙基-6-(三氟甲 氧基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯，中间体30(92％，400 mg，1.02mmol)的MeCN(5mL)混悬液中。将管密封，然后在75℃加热 5小时，然后使其冷却至RT。将反应混合物真空浓缩，得到产物，为深绿 色固体(552mg，>99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.18(d,J＝9.1Hz,1H), 7.95(t,J＝5.2Hz,1H),7.76(d,J＝9.1Hz,1H),4.75(d,J＝5.4Hz,2H),4.64(q, J＝7.1Hz,2H),4.10(s,3H),1.44-1.25(m 12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝374[M+]，Rt＝0.96分钟，UV纯度＝93％。
中间体32-2-(氨基甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二 唑-3-鎓盐酸盐碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000781
将HCl的二
Figure GDA0002817691790000783
烷溶液(4.0M，1.4mL，5.6mmol)加入至2-({[(叔丁氧 基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 碘化物，中间体31(93％，550mg，1.02mmol)的MeCN(5mL)溶液中。 使反应在RT搅拌16小时，然后真空浓缩。将固体与MeCN(10mL)共沸， 然后真空干燥，得到产物，为棕色固体(480mg，94％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,3H),8.40(d,J＝1.6Hz,1H), 8.28(d,J＝9.1Hz,1H),7.83(dd,J＝9.1,1.2Hz,1H),4.80(s,2H),4.75(q,J＝7.2 Hz,2H),4.21(s,3H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝274[M+]，Rt＝0.37分钟，ELS纯度＝87％。
中间体33-6-氯-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000782
将2-[(6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚- 1,3-二酮，中间体20(850mg，2.50mmol)和碘甲烷(2.0mL，25mmol)在 MeCN(12mL)中的混合物在120℃微波照射下加热3小时。将所得溶液 在RT放置64小时，产生固体沉淀。通过过滤收集固体，然后用MeCN洗 涤，并且真空干燥，得到产物，为浅黄色固体(850mg，67％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝1.8Hz,1H),8.18(d,J＝8.9 Hz,1H),7.98-7.94(m,2H),7.93-7.89(m,2H),7.79(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H), 5.43(s,2H),4.74-4.66(m,4H),1.46-1.38(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝368[M(35Cl)+]，370[M(37Cl)+]，Rt＝0.93 分钟，UV纯度＝98％。
中间体34-2-(氨基甲基)-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化 物的合成
Figure GDA0002817691790000791
将肼水合物(787μL，16.2mmol)加入至加压管中的6-氯-2-[(1,3-二氧 代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化 物，中间体33(845mg，1.62mmol)的MeOH(6mL)混悬液中。将管密封， 并且在80℃加热4小时，然后使其冷却至RT。将反应混合物真空浓缩。 将所得残留物混悬于CH2Cl2:MeOH(9:1，20mL)，然后过滤。将滤液真空 浓缩，得到产物，为黄色固体(301mg，49％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.11(d,J＝8.9 Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H),4.65-4.56(m,4H),4.29(s,2H),1.46- 1.40(m,6H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝238[M(35Cl)+]，240[M(37Cl)+]，Rt＝2.00 分钟，UV纯度＝97％。
中间体35-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基- 6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000801
将碘乙烷(715μL，8.95mmol)加入至2-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并 二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮，中间体23(3.00g，8.95 mmol)的MeCN(20mL)混悬液中。将混合物在80℃加热4小时。加入碘 乙烷(715μL，8.95mmol)，并且将混合物在80℃搅拌16小时。加入碘乙 烷(715μL，8.95mmol)，并且将混合物再在80℃搅拌24小时，使其冷却 至RT。将混合物真空浓缩至原来的约三分之一体积。通过过滤收集沉淀， 然后用MeCN洗涤，得到灰色固体(2.6g)。将滤液浓缩，得到深灰色固体。 合并两批所得固体，并且混悬于MeCN(20mL)。加入碘乙烷(715μL，8.95 mmol)，然后将反应混合物在80℃搅拌18小时，然后在100℃搅拌4小 时。将反应混合物分成两等份加入至加压管中。在两份反应混合物中均加入碘乙烷(300μL，3.75mmol)，然后密封加压管，并且在100℃加热16小 时。使反应混合物冷却至RT，然后合并。将所得混合物真空浓缩至～5mL， 然后过滤。将收集的固体用最少量MeCN(0.5mL)洗涤，得到产物，为灰 色固体(2.37g)。将滤液减压浓缩，产生深棕色固体，将其用EtOAc(～10 mL)研磨并且过滤。将滤液放置16小时，然后再次过滤。合并来自EtOAc 过滤获得的固体并且干燥，再产生一批产物，为灰色固体(1.24g)。合并两 批所得产物，为EtOAc混悬液，然后蒸发，并且真空干燥，得到产物，为 灰色固体(3.61g，81％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ8.02(d,J＝9.2Hz,1H),7.98-7.86(m, 4H),7.63(d,J＝2.2Hz,1H),7.31(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),5.40(s,2H),4.74- 4.60(m,4H),3.92(s,3H),1.49-1.33(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝364[M+]，Rt＝0.93分钟，UV纯度＝99％。
中间体36-2-(氨基甲基)-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 碘化物的合成：
Figure GDA0002817691790000811
将肼水合物(1.18mL，24.1mmol)加入至2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H- 异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中 间体35(2.37g，4.82mmol)的MeOH(25mL)混悬液中。然后将混合物在 75℃加热2.5小时，然后使其历经16小时冷却至RT。将反应混合物真空 浓缩，并且将所得固体混悬于CH2Cl2:MeOH(10:1)，然后过滤。将收集的 固体用CH2Cl2洗涤。将滤液真空浓缩，得到产物，为灰色固体(1.89g， >99％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.58(d,J＝2.3 Hz,1H),7.25(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),4.65-4.50(m,4H),4.25(s,2H),3.91(s, 3H),1.50-1.39(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝234[M+]，Rt＝0.16分钟，ELS纯度＝92％。
中间体37-3-苄基-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙 基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000812
将2-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲 哚-1,3-二酮，中间体23(500mg，1.49mmol)和(溴甲基)苯(531μL，4.47 mmol)在MeCN(5mL)中的混合物在80℃在密封管中加热16小时。使反 应混合物冷却至RT，然后过滤。将固体用MeCN洗涤，然后真空干燥， 得到产物，为白色固体(665mg，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.84-7.79(m,3H),7.78-7.74(m,2H), 7.71(d,J＝2.3Hz,1H),7.29(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),7.09(t,J＝7.7Hz,2H), 7.00-6.94(m,3H),5.85(s,2H),5.50(s,2H),4.79(q,J＝7.2Hz,2H),3.94(s, 3H),1.51(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝426[M+]，Rt＝1.02分钟，UV纯度＝99％。
中间体38-2-(氨基甲基)-3-苄基-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3- 鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000821
将3-苄基-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-6-甲 氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，中间体37(665mg，1.31mmol)和肼水 合物(638μL，13.1mmol)在MeOH(5mL)中的混合物在密封管中在80℃ 搅拌2小时。使反应混合物冷却，然后真空浓缩成黄色固体。将残留物用 超声混悬于CH2Cl2(20mL)。将所得混悬液过滤，然后固体再次用超声混 悬于CH2Cl2:MeOH(1:1，30mL)。将所得混悬液过滤，然后将合并的滤液 真空浓缩，得到产物，为黄色固体(526mg，60％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.71(d,J＝9.1Hz,1H),7.62(d,J＝2.3 Hz,1H),7.41-7.31(m,5H),7.20(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),5.86(s,2H),4.63 (q,J＝7.2Hz,2H),4.34(s,2H),3.90(s,3H),1.48(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝296[M+]，Rt＝0.76分钟，UV纯度＝56％。
中间体39-N-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸 叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790000822
将HATU(8.53g，22.3mmol)和DIPEA(7.1mL，41mmol)加入至N- (叔丁氧基羰基)甘氨酸(3.93g，22.4mmol)的DMF(40mL)溶液中。将所得 溶液在RT搅拌0.5小时，然后加入1-N-乙基-5-甲氧基苯-1,2-二胺(3.39g， 20.4mmol)的THF(20mL)溶液。使反应在RT搅拌80分钟，然后将反应 混合物用EtOAc(200mL)和水(150mL)稀释。分离各相，然后将有机相用 水(3×150mL)和盐水(150mL)洗涤。将合并的有机相经Na2SO4干燥，然后 真空浓缩，得到粗中间体，为深红色粘稠油状物。将中间体溶于AcOH(40 mL)，并且将所得溶液在60℃搅拌18小时。使反应混合物冷却，然后真 空浓缩。然后将残留物溶于EtOAc(200mL)，然后通过加入饱和NaHCO3水溶液调节pH至9。分离各相，并且将有机相用水(2×150mL)和盐水(150 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到粗产物，为深红色油状 物。将粗物质通过二氧化硅柱(340g)快速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH， 以10份柱体积，线性梯度从100:0上升至92:8洗脱。合并所需级分，并 且蒸发成粘稠深红色油状物，将其在放置时固化，得到产物，为深红色固 体(5.02g，77％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.47-7.39(m,2H),7.06(d,J＝2.4Hz, 1H),6.78(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),4.39(d,J＝5.9Hz,2H),4.22(q,J＝7.1Hz, 2H),3.81(s,3H),1.39(s,9H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝306[MH+]，Rt＝0.88分钟，UV纯度＝96％。
中间体40-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲 氧基-2-氧代乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000831
将溴乙酸甲酯(395μL，4.18mmol)加入至加压管中的N-[(1-乙基-6-甲 氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯，中间体39(85％，500 mg，1.39mmol)的MeCN(4mL)混悬液中。将管密封，并且将所得混合物 在75℃搅拌4小时，然后使其冷却至RT。将所得混悬液过滤，然后将固 体用冷的MeCN洗涤，并且真空干燥，得到产物，为白色固体(454mg，71％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,J＝9.2Hz,1H),7.86(t,J＝5.3 Hz,1H),7.62(d,J＝2.2Hz,1H),7.29(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),5.58(s,2H),4.75 (d,J＝5.4Hz,2H),4.65(q,J＝7.2Hz,2H),3.92(s,3H),3.75(s,3H),1.43(t, J＝7.2Hz,3H),1.35(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝378[M+]，Rt＝0.88分钟，UV纯度＝100％。
中间体41-2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000841
将2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧 代乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，中间体40(454mg，0.990mmol)和 HCl的二
Figure GDA0002817691790000842
烷溶液(4.0M，2.5mL，10mmol)的混合物在RT搅拌0.5小 时。将反应混合物真空浓缩，得到产物，为浅橙色泡沫状物(580mg，96％- 针对NMR所观察到的35wt％残留二
Figure GDA0002817691790000843
烷校正的产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.86 (s,3H),7.97(d,J＝9.2Hz,1H),7.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.35(dd,J＝9.2,2.3Hz, 1H),5.77(s,2H),4.79(s,2H),4.72(q,J＝7.2Hz,2H),3.94(s,3H),3.77(s, 3H),1.47(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝278[M+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度＝95％。
中间体42-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-3-(氨基甲酰基甲基)-1-乙 基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000851
将2-溴乙酰胺(691mg，5.01mmol)加入至加压管中的N-[(1-乙基-6-甲 氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯，中间体39(85％，600 mg，1.67mmol)的MeCN(6mL)混悬液中。将管密封，然后将反应混合物 在80℃搅拌5小时。使反应冷却至RT，然后在RT搅拌64小时。将反 应混合物再在80℃加热2小时，然后使其冷却至RT。将所得混合物真空浓缩成粘稠红色油状物。将粗物质通过二氧化硅柱(50g)快速柱色谱纯化。 柱用CH2Cl2:MeOH，用下列梯度洗脱(％MeOH，柱体积)：0％，1CV； 0-9％，8CV；9％，3CV；9-14％，2CV；14％，1CV；14-20％，2CV。 合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为浅紫红色泡沫状物(638mg，84％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(s,1H),7.86-7.77(m,2H),7.63 (s,1H),7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.29(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),5.30(s,2H),4.70 (d,J＝5.4Hz,2H),4.62(q,J＝7.2Hz,2H),3.92(s,3H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H), 1.36(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝363[M+]，Rt＝0.83分钟，UV纯度＝98％。
中间体43-2-(氨基甲基)-3-(氨基甲酰基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3- 苯并二唑-3-鎓盐酸盐溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000852
将2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-3-(氨基甲酰基甲基)-1-乙基-6-甲氧 基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，中间体42(98％，638mg，1.41mmol)和 HCl的二
Figure GDA0002817691790000853
烷溶液(4.0M，3.5mL，14mmol)的混合物在RT搅拌0.5小 时。将反应混合物真空浓缩，得到产物，为紫色固体(719mg，97％-针对 NMR所观察到的28wt％残留二
Figure GDA0002817691790000862
烷校正的产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,3H),8.35(s,1H),7.98-7.89 (m,2H),7.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.38(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),5.45(s,2H),4.77 (s,2H),4.71(q,J＝7.2Hz,2H),3.94(s,3H),1.46(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝263[M+]，Rt＝0.15分钟，ELS纯度＝100％。
中间体44-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-6-甲 氧基-3-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000861
将2-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲 哚-1,3-二酮，中间体23(500mg，1.49mmol)、1-氯-2-(甲基硫烷基)乙烷(730 μL，7.45mmol)和NaI(1.12g，7.45mmol)在MeCN(8mL)中的混合物在 密封管中加热至100℃达5小时，然后使其冷却至RT。将反应混合物真 空浓缩成棕色固体。将所得固体用超声混悬于MeOH(8mL)中。将所得混 悬液过滤，然后将固体用MeOH洗涤，并且真空干燥，得到产物，为棕色 固体(1.13g，50％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.04(d,J＝9.2Hz,1H),7.99-7.88(m, 4H),7.64(t,J＝2.6Hz,1H),7.32(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),5.47-5.37(m,2H), 4.90-4.68(m,4H),4.11(s,1H),3.92(d,J＝1.4Hz,3H),3.03(t,J＝7.1Hz,2H), 2.15(s,2H),1.42(q,J＝6.9Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝410[M+]，Rt＝0.99分钟，UV纯度＝66％。
中间体45-2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000871
将2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3- [2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体44(66％，1.00 g，1.62mmol)和肼水合物(226μL，4.65mmol)在MeOH(5mL)中的混合 物在密封管中加热至80℃达80分钟。将反应混合物真空浓缩成橙色固体。 将所得固体用超声混悬于CH2Cl2(50mL)中。将混悬液过滤，然后将滤液 真空浓缩，得到产物，为浅橙色固体(395mg，48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.96(d,J＝9.1Hz,1H),7.60-7.56(m, 1H),7.27(dt,J＝9.1,2.1Hz,1H),4.76(t,J＝6.9Hz,2H),4.61(q,J＝6.1,4.9Hz, 2H),4.30(s,2H),3.92(d,J＝1.4Hz,3H),3.01(t,J＝6.9Hz,2H),2.41-2.30 (m,2H),2.13(s,3H),1.45(t,J＝7.3Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝280[M+]，Rt＝0.65分钟，UV纯度＝80％。
中间体46-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-3-(2-羟基乙基)-6- 甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000872
将(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.66g，6.96mmol)加入至加压管 中的N-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯，中 间体39(85％，500mg，1.39mmol)的MeCN(5mL)混悬液中。将管密封， 然后将反应混合物在80℃搅拌0.5小时，再在100℃搅拌16小时。使反 应冷却至RT，然后加入另外的(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.00g， 4.18mmol)。将管密封，然后将反应再在100℃搅拌24小时。使反应混合 物冷却，然后真空浓缩成红色油状物。将粗物质通过二氧化硅柱(25g)快速 柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，以10份柱体积，线性梯度从100:0上 升至90:10洗脱。合并所需级分，并且蒸发，产生粘稠深红色油状物(615 mg)。物质再通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-36％；36％，2CV； 36-50％，4CV；50-100％，3CV；100％，3CV。合并所需级分，并且蒸 发，得到产物，为粘稠深红色油状物(278mg，43％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),7.99-7.84(m,2H),7.57 (d,J＝2.2Hz,1H),7.28(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),4.76(d,J＝5.5Hz,2H),4.71- 4.65(m,2H),4.59(q,J＝7.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.77(t,J＝4.7Hz,2H),1.41 (t,J＝7.2Hz,3H),1.38(d,J＝2.8Hz,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝350[MH+]，Rt＝0.88分钟，UV纯度＝92％。
中间体47-2-(氨基甲基)-1-乙基-3-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-1H-1,3-苯并 二唑-3-鎓盐酸盐溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000881
将盐酸的二
Figure GDA0002817691790000882
烷溶液(4.0M，1.2mL，4.8mmol)加入至2-({[(叔丁氧 基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-3-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3- 鎓溴化物，中间体46(92％，227mg，0.49mmol)的MeCN(3mL)溶液中。 将所得混合物在RT搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，得到产物，为 深紫色固体(174mg，97％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.89(s,3H),8.03(d,J＝9.2Hz,1H), 7.66(d,J＝2.3Hz,1H),7.35(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),4.82-4.73(m,4H),4.69 (q,J＝7.2Hz,2H),3.94(s,3H),3.80(t,J＝4.6Hz,2H),1.45(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝250[MH+]，Rt＝1.58分钟，UV纯度＝99％。
中间体48-2-{[(2-羧基苯基)甲酰氨基]甲基}-1-乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙 氧基)乙氧基]乙基}-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000891
将2-[(1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲 哚-1,3-二酮，中间体23(2.00g，5.96mmol)和2-[2-(2-碘乙氧基)乙氧基]乙 烷-1-醇(90％，8.62g，29.8mmol)在MeCN(15mL)中的混合物在密封管中 在130℃加热16小时，然后使其冷却至RT。将反应混合物真空浓缩，然 后将粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-14％，2CV；14-18％，1CV；18-27％，2CV；27-31％，0.5CV；31-60％，0.5CV；60-100％， 1CV；100％，1CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为黄色无定 形固体(1.72g，47％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.97-12.91(m,1H),7.96(d,J＝9.2 Hz,1H),7.72(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.60(dd,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.57(d, J＝2.3Hz,1H),7.37(td,J＝7.5,1.4Hz,1H),7.30-7.24(m,2H),5.04(d,J＝5.0 Hz,2H),4.91(t,J＝4.8Hz,2H),4.77-4.62(m,3H),3.91(s,3H),3.83(t,J＝4.9 Hz,2H),3.51-3.46(m,2H),3.43-3.39(m,4H),3.36-3.28(m,2H+HDO), 1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝486[M+]，Rt＝0.80分钟，UV纯度＝100％。
中间体49-2-(氨基甲基)-1-乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基}- 6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000892
将肼水合物(639μL，13.2mmol)加入至加压管中的2-{[(2-羧基苯基)甲 酰氨基]甲基}-1-乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-甲氧基-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体48(1.52g，2.48mmol)的MeOH(12mL) 溶液中。将管密封，并且将反应溶液在75℃加热3.5小时。使反应冷却至 RT，然后在RT搅拌64小时。加入另外的肼水合物(639μL，13.2mmol)， 并且将反应再在75℃加热18小时，然后再在80℃加热24小时。使反应 混合物冷却至RT，然后真空浓缩成橙色固体。将所得固体混悬于 CH2Cl2:MeOH(9:1，30mL)，然后过滤。将滤液真空浓缩，得到产物，为 粘稠橙色油状物(1.21g，88％)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝338[M+]，Rt＝1.41分钟，UV纯度＝84％。
中间体50-3-苄基-6-氯-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲 基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000901
将苄基溴(88μL，0.74mmol)加入至加压管中的2-[(6-氯-1-乙基-1H- 1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮，中间体20(0.25g， 0.74mmol)的MeCN(5mL)混悬液中。将管密封，然后将反应在80℃搅 拌16小时，然后使其冷却至RT。加入苄基溴(88μL，0.74mmol)，然后 将反应再在80℃搅拌6小时。使反应冷却至RT，然后在RT放置64小 时。加入苄基溴(88μL，0.74mmol)，然后将反应再在80℃搅拌24小时。 使反应冷却至RT，然后过滤。将固体用MeCN洗涤，然后真空干燥，得 到产物，为白色固体(370mg，97％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝1.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.9 Hz,1H),7.85-7.68(m,5H),7.14-7.05(m,2H),6.99(t,J＝6.5Hz,3H),5.89 (s,2H),5.52(s,2H),4.82(q,J＝7.2Hz,2H),1.51(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝430[M+]，Rt＝0.98分钟，UV纯度＝99％。
中间体51-2-(氨基甲基)-3-苄基-6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴 化物的合成
Figure GDA0002817691790000911
将肼水合物(0.18mL，3.62mmol)加入至加压管中的3-苄基-6-氯-2- [(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 溴化物，中间体50(370mg，0.724mmol)的MeOH(4mL)混悬液中。将管 密封，然后将反应在75℃搅拌3小时。使反应混合物冷却至RT，然后过 滤。将滤液真空浓缩，得到橙色固体。将所得固体混悬于CH2Cl2:MeOH (9:1，10mL)，然后过滤。将固体真空干燥，然后混悬于MeOH中。将混 悬液过滤，然后将滤液真空浓缩。将所得残留物用超声混悬于 CH2Cl2:MeOH(9:1，10mL)中。将所得混悬液过滤，然后将滤液真空浓缩， 得到产物，为浅黄色固体(107mg，33％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,J＝1.8Hz,1H),7.83(d,J＝8.9 Hz,1H),7.66(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H),7.43-7.30(m,5H),5.89(s,2H),4.63 (q,J＝7.2Hz,2H),4.35(s,2H),1.46(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝300[M+]，Rt＝0.81分钟，UV纯度＝85％。
中间体52-3-苄基-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-6-(三氟甲 基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000912
将苄基溴(173μL，1.46mmol)加入至加压管中的N-{[1-乙基-6-(三氟甲 基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯，中间体26(250mg，0.73 mmol)的MeCN(3mL)混悬液中。将管密封，并且在80℃加热16小时， 然后将反应混合物真空浓缩，得到橙色油状物，将其放置固化。将所得固 体混悬于MeCN(2mL)。通过过滤收集固体，然后真空干燥，得到产物， 为白色固体(160mg)。将滤液真空浓缩。将残留物混悬于最少量MeCN， 然后过滤。将所得固体真空干燥，得到第二批产物，为灰白色固体(90mg)。 将2批产物合并在MeCN中，然后蒸发，得到产物，为灰白色固体(250mg， 64％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.03-7.87(m,3H),7.43- 7.36(m,3H),7.31-7.23(m,2H),5.92(s,2H),4.97-4.85(m,2H),4.78(q, J＝7.1Hz,2H),1.49(t,J＝7.1Hz,3H),1.30(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝435[M+]，Rt＝1.05分钟，UV纯度＝96％。
中间体53-2-(氨基甲基)-3-苄基-1-乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑 -3-鎓盐酸盐溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000921
将HCl的二
Figure GDA0002817691790000922
烷溶液(4.0M，0.61mL，2.4mmol)加入至3-苄基-2- ({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 溴化物，中间体52(250mg，0.49mmol)的MeCN(2.5mL)溶液中。将反 应在RT搅拌18小时，然后真空浓缩。将残留物与MeCN共沸，然后真 空干燥，得到产物，为浅黄色固体(209mg，95％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,3H),8.77(s,1H),8.10-7.99 (m,2H),7.51-7.46(m,2H),7.44-7.34(m,3H),6.05(s,2H),4.94-4.79(m, 4H),1.53(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝334[M+]，Rt＝0.86分钟，UV纯度＝100％。
中间体54-N-[(1-苄基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯的 合成
Figure GDA0002817691790000931
将苄基溴(1.29mL，10.8mmol)加入至N-(1H-1,3-苯并二唑-2-基甲基) 氨基甲酸叔丁酯(85％，3.15g，10.8mmol)和K2CO3(2.25g，16.3mmol)在 DMF(25mL)中的混合物中。将所得混合物在RT搅拌16小时。将反应混 合物在水(150mL)和EtOAc(150mL)之间分配。分离各相，然后将水相用 EtOAc(5×150mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，然后真空浓缩至约50mL。将所得浆液自最小体积的回流EtOAc中重结晶，得到产物， 为白色固体(2.22g，61％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.64-7.58(m,1H),7.51-7.45(m,1H), 7.40-7.34(m,1H),7.34-7.24(m,3H),7.20-7.11(m,4H),5.51(s,2H),4.44 (d,J＝5.8Hz,2H),1.32(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝338[MH+]，Rt＝1.02分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体55-1-苄基-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-3-(2-甲氧基-2-氧 代乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000932
将N-[(1-苄基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯，中间体54(500mg，1.48mmol)和溴乙酸甲酯(421μL，4.45mmol)的MeCN(5mL)混 合物在密封管中在70℃搅拌16小时。使反应混合物冷却，然后真空浓缩， 得到产物，为白色固体(717mg，96％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.06(d,J＝8.3Hz,1H),7.89(t,J＝5.4 Hz,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,1H),7.73-7.60(m,2H),7.42-7.32(m,3H),7.28 (d,J＝6.8Hz,2H),5.97(s,2H),5.69(s,2H),4.89(d,J＝5.4Hz,2H),3.77(s, 3H),1.32(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝410[M+]，Rt＝0.94分钟，UV纯度＝97％。
中间体56-1-苄基-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-3-[2-氧代-2-(哌啶- 1-基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000941
将1-苄基-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，中间体55(350mg，0.71mmol)的LiOH水 溶液(1.0M，1.4mL，1.4mmol)和MeOH(1.5mL)的混合物在RT搅拌16 小时。将反应混合物通过滴加HCl水溶液(1M)而酸化至pH 3，然后真空 浓缩，得到粗中间体，为米白色固体(469mg)。将所得粗中间体溶于DMF (4mL)，然后加入HATU(340mg，0.89mmol)和DIPEA(206μL，1.18 mmol)。将哌啶(88μL，0.89mmol)加入至反应溶液中，然后将所得混合物 在RT搅拌45分钟。加入另外的哌啶(150μL，1.52mmol)和HATU(300 mg，0.89mmol)，并且将反应再在RT搅拌64小时。将反应混合物真空浓 缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％ 甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10-45％，12CV；45％，2CV； 45-53％，3CV；53-100％，3CV；100％，1CV。合并所需级分，并且蒸 发，得到产物，为浅橙色泡沫状物(209mg，53％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.98(d,J＝8.3Hz,1H),7.83-7.76(m, 2H),7.70-7.58(m,2H),7.43-7.32(m,3H),7.25(d,J＝6.8Hz,2H),5.97(s, 2H),5.76(s,2H),4.78(d,J＝5.4Hz,2H),3.58-3.51(m,2H),3.47-3.42(m, 2H),1.76-1.62(m,4H),1.51(s(br),2H),1.32(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝463[M+]，Rt＝1.00分钟，UV纯度＝99％。
中间体57-2-(氨基甲基)-1-苄基-3-[2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-1,3- 苯并二唑-3-鎓盐酸盐溴化物的合成
Figure GDA0002817691790000951
将1-苄基-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-3-[2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，中间体56(205mg，0.377mmol)和HCl 的二
Figure GDA0002817691790000953
烷溶液(4.0M，1.1mL，4.4mmol)的混合物在RT搅拌0.5小时。 将反应混合物真空浓缩，得到产物，为粘稠橙色油状物(219mg，92％-针对 NMR所观察到的24wt％残留二
Figure GDA0002817691790000954
烷校正的产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.15-8.09(m,1H),7.91(d,J＝8.3Hz, 1H),7.74(t,J＝7.7Hz,1H),7.68(t,J＝7.8Hz,1H),7.44-7.33(m,3H),7.32 (d,J＝7.0Hz,2H),6.05(s,2H),5.97(s,2H),4.74(s,2H),3.63-3.58(m,2H), 3.48-3.45(m,2H),1.79-1.71(m,2H),1.71-1.63(m,2H),1.57-1.46(m, 2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝363[M+]，Rt＝0.82分钟，UV纯度＝93％。
中间体58-6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-2-({[(9H- 芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000952
中间体58根据文献方法(US 2015/0018313 A1)合成。
中间体59-2-(氨基甲基)-6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧基)-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000961
将吗啉(3.46mL，40.0mmol)加入至6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧 基)-1,3-二乙基-2-({[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}甲基)-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓碘化物，中间体58(95％，3.00g，4.00mmol)的THF(50mL)溶液中。 将反应混合物在RT搅拌25分钟，然后用乙醚(150mL)稀释。将所得混合 物搅拌，然后倾析出上清液。将残留的胶状物再用醚(2×60mL)洗涤，然后 真空干燥。将残留物溶于THF，然后真空浓缩，得到产物，为浅橙色固体(1.99g，83％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.65-7.61(m, 1H),7.25(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.11-7.05(m,1H),4.61-4.53(m,4H),4.25 (s,2H),4.11(t,J＝5.9Hz,2H),3.36(q,J＝5.9Hz,2H),1.45-1.41(m,6H),1.39 (s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝363[M+]，Rt＝0.76分钟，UV纯度＝82％。
中间体60-N-[3-(3-氟-4-硝基苯氧基)丙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790000962
将3-氟-4-硝基酚(2.50g，15.9mmol)、(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(3.98 g，16.7mmol)和K2CO3(2.64g，19.1mmol)的丙酮(15mL)混悬液在60℃ 搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，然后将残留物在EtOAc(50mL)和 水(50mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水(2×50mL)和盐水(50mL) 萃取，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到产物，为粘稠橙色油状物 (4.65g，84％)。
1H NMR(500MHz,Acetone-d6)δ8.14(t,J＝9.2Hz,1H),7.16(dd, J＝13.7,2.5Hz,1H),6.96(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),6.92(t,J＝5.5Hz,1H),4.13 (t,J＝6.2Hz,2H),3.07(q,J＝6.6Hz,2H),1.84(p,J＝6.5Hz,2H),1.37(s,9H)。
LC/MS(系统A)：Rt＝1.22分钟，UV纯度＝90％。
中间体61-N-{3-[3-(乙基氨基)-4-硝基苯氧基]丙基}氨基甲酸叔丁酯的 合成
Figure GDA0002817691790000971
将乙胺的THF溶液(2.0M，10mL，20mmol)加入至N-[3-(3-氟-4-硝 基苯氧基)丙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体60(90％，4.65g，13.3mmol)和 K2CO3(2.20g，16.0mmol)在THF(30mL)中的混合物中。将反应混合物在 RT搅拌16小时，然后加入另外的乙胺的THF溶液(2.0M，3.0mL，6.0 mmol)。将反应混合物在RT再搅拌70小时，然后过滤。将滤片用EtOAc 冲洗，然后将合并的滤液用水(2×150mL)和盐水(150mL)萃取，然后经 Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到产物，为粘稠黄/橙色油状物(4.69g，93％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(t,J＝5.0Hz,1H),8.02(d,J＝10.0 Hz,1H),6.92-6.86(m,1H),6.30-6.27(m,2H),4.09(t,J＝6.3Hz,2H),3.40 -3.35(m,2H),3.08(q,J＝6.7Hz,2H),1.84(p,J＝6.5Hz,2H),1.37(s,9H), 1.24(t,J＝7.1Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝340[MH+]，Rt＝1.30分钟，UV纯度＝90％。
中间体62-N-{[6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1-乙基-1H-1,3-苯 并二唑-2-基]甲基}氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯的合成
Figure GDA0002817691790000972
将钯碳(10wt％，662mg)加入至N-{3-[3-(乙基氨基)-4-硝基苯氧基]丙 基}氨基甲酸叔丁酯，中间体61(90％，4.69g，12.4mmol)的EtOH(60mL) 溶液中。将所得混合物在氢气氛下搅拌20小时。将反应混合物通过Celite 垫过滤，然后将滤液真空浓缩。将残留物溶于DMF(10mL)，得到苯二胺 中间体的溶液。将FMOC-甘氨酸(3.88g，13.1mmol)、HATU(5.20g，13.7 mmol)和DIPEA(4.3mL，25mmol)的DMF(20mL)溶液在RT搅拌0.5小 时。然后加入苯二胺的DMF溶液，并且将所得溶液在RT搅拌1小时。 加入另外的FMOC-甘氨酸(2.00g，6.73mmol)和HATU(2.50g，6.57mmol)， 然后使反应在RT再搅拌45分钟。将反应混合物在EtOAc(100mL)和水 (100mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水(2×100mL)和盐水(100 mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到红色固体。将所得固体 溶于AcOH(20mL)，然后在60℃加热16小时。使反应冷却至RT，然后 真空浓缩。将所得残留物用饱和NaHCO3水溶液处理至pH9，然后在 EtOAc(250mL)和水(250mL)之间分配。分离各相，然后将有机相经 Na2SO4干燥并且真空浓缩。
将粗物质通过二氧化硅柱(340g)快速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH， 用下列梯度洗脱(％MeOH，柱体积)：0％，1CV；0-3.3％，7CV；3.3％， 1CV；3.3-4.5％，2CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为浅橙色 固体(4.73g，53％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝571[MH+]，Rt＝1.18分钟，UV纯度＝80％。
中间体63-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-2-[({[(9H- 芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000981
将N-{[6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑- 2-基]甲基}氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯，中间体62(80％，1.50g，2.10mmol) 和碘乙烷(1.69mL，21.0mmol)在THF(15mL)中的混合物在120℃微波 照射下加热1.5小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过二氧化 硅柱(100g)快速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，用下列梯度洗脱 (％MeOH，柱体积)：0％，1CV；0-3.4％，7CV；3.4-4.3％，2CV；4.3- 6.0％，2CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为浅橙色泡沫状物(1.03 g，61％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.24(t,J＝5.1Hz,1H),7.95(d,J＝9.1 Hz,1H),7.86(d,J＝7.5Hz,2H),7.62(d,J＝7.5Hz,2H),7.56(s,1H),7.36(t, J＝7.4Hz,2H),7.30-7.22(m,3H),6.93-6.88(m,1H),4.74(d,J＝5.1Hz,2H), 4.55-4.47(m,6H),4.22(t,J＝5.8Hz,1H),4.13(t,J＝6.0Hz,2H),3.12(q, J＝6.4Hz,2H),1.94-1.85(m,2H),1.37-1.31(m,15H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝599[M+]，Rt＝1.15分钟，UV纯度＝90％。
中间体64-2-(氨基甲基)-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790000991
将吗啉(1.10mL，12.7mmol)加入至6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧 基)-1,3-二乙基-2-({[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}甲基)-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓碘化物，中间体63(90％，1.03g，1.27mmol)的THF(10mL)溶液中。 将反应混合物在RT搅拌2小时，然后用乙醚(40mL)稀释。将混合物搅 拌，然后倾析出上清液。再用乙醚(2×20mL)重复洗涤。将所得残留物真空 干燥，得到产物，为浅橙色泡沫状物(700mg，99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.94(d,J＝9.1Hz,1H),7.56(d,J＝2.1 Hz,1H),7.25(dd,J＝9.1,2.2Hz,1H),6.99-6.83(m,1H),4.56(q,J＝7.2Hz, 4H),4.24(s,2H),4.12(t,J＝6.2Hz,2H),3.12(q,J＝6.6Hz,2H),1.94-1.84 (m,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,6H),1.37(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝377[M+]，Rt＝0.82分钟，UV纯度＝91％。
中间体65-2-[(6-溴-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H- 异吲哚-1,3-二酮的合成
Figure GDA0002817691790001001
将N-邻苯二甲酰基甘氨酸(13.1g，63.8mmol)、TBTU(21.5g，67.0 mmol)和三乙胺(14.1mL，79.1mmol)在DMF(150mL)中的混合物在RT 搅拌45分钟。加入5-溴-1-N-乙基苯-1,2-二胺(13.1g，60.9mmol)的THF (50mL)溶液，并且将所得混合物在RT搅拌18小时。加入反应混合物至 饱和NaHCO3水溶液(400mL)上。通过过滤收集所得沉淀，然后用水洗涤， 并且真空干燥，得到中间体，为浅灰色固体。将所得固体分批加入至乙酸 (150mL)。将所得混悬液在100℃加热2.5小时，然后使其冷却至RT。将 反应混合物真空浓缩，然后将残留物在EtOAc(300mL)和水(300mL)之间 分配。通过过滤收集所得沉淀，并且用EtOAc(200mL)和水(200mL)洗涤， 然后真空干燥，得到产物，为粉色固体(17.9g，76％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.96(dd,J＝5.6,3.0Hz,2H),7.93-7.88 (m,3H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.27(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),5.12(s,2H),4.39 (q,J＝7.2Hz,2H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝384[M(79Br)H+]，386[M(81Br)H+]， Rt＝1.12分钟，UV纯度＝100％。
中间体66-N-(3-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙 基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001002
将CuI(0.25g，1.29mmol)加入至2-[(6-溴-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2- 基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮，中间体65(5.00g，13.0mmol)和 N-(丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.40g，15.5mmol)的DMF(60mL)溶液 中。将氮气鼓入通过反应混合物5分钟，然后加入Pd(PPh3)4(0.74g，0.64 mmol)，然后加入三乙胺(2.92mL，19.3mmol)。将反应混合物在65℃加 热24小时，真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快速柱色谱纯化。 柱用EtOAc:庚烷，以10份柱体积，线性梯度从0:100上升至50:50洗脱。 合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为黄色泡沫状物(2.45g，39％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ7.99-7.88(m,4H),7.71(s,1H),7.46 (d,J＝8.3Hz,1H),7.35(s,1H),7.16(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),5.13(s,2H),4.40 (q,J＝7.1Hz,2H),4.02-3.97(m,2H),1.41(s,9H),1.36(t,J＝7.1Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝459[MH+]，Rt＝1.17分钟，UV纯度＝95％。
中间体67-N-(3-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙 基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001011
将钯碳(10wt％，557mg)加入至N-(3-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异 吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁 酯，中间体66(2.4g，5.23mmol)的EtOH(120mL)溶液中。将反应混合物 在RT在氢气氛下搅拌48小时。再在反应中加入钯碳(10wt％，278mg)， 并且再在RT在氢气氛下搅拌24小时。再在反应中加入钯碳(10wt％，278 mg)，并且再在RT在氢气氛下搅拌24小时。将反应混合物通过Celite垫 过滤。将Celite垫用EtOH(100mL)、MeOH(100mL)、EtOAc(100mL) 和DMF(5mL)冲洗。将合并的滤液真空浓缩，然后将粗物质通过二氧化 硅柱(25g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，以10份柱体积，线性梯度 从0:100至75:25洗脱。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为淡黄色固 体(1.20g，43％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.98-7.93(m,2H),7.92-7.88(m,2H), 7.37-7.34(m,2H),6.97(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),6.84(t,J＝5.3Hz,1H),5.09 (s,2H),4.35(q,J＝7.2Hz,2H),2.96-2.90(m,2H),2.69-2.63(m,2H),1.71(p, J＝7.3Hz,2H),1.40-1.35(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝463[MH+]，Rt＝1.07分钟，UV纯度＝86％。
中间体68-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢 -1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001021
将碘乙烷(1.04mL，13.0mmol)加入至加压管中的N-(3-{2-[(1,3-二氧代 -2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}丙基)氨基 甲酸叔丁酯，中间体67(86％，1.20g，2.23mmol)的MeCN(18mL)溶液 中。将管密封，并且在110℃加热4小时。使反应冷却至RT，然后加入 碘乙烷(1.04mL，13.0mmol)，然后将反应再在110℃加热4小时。使反 应混合物冷却至RT，然后真空浓缩，得到产物，为棕色固体(1.52g，>99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.97-7.93(m, 3H),7.92-7.88(m,2H),7.58(d,J＝8.6Hz,1H),6.89(s,1H),5.42(s,2H),4.70- 4.66(m,4H),2.93(q,J＝6.2Hz,2H),2.79(t,J＝7.4Hz,2H),1.81-1.72(m, 2H),1.44-1.40(m,6H),1.37(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝491[M+]，Rt＝1.08分钟，UV纯度＝91％。
中间体69-2-(氨基甲基)-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)-1,3-二乙 基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001022
将肼水合物(609μL，12.5mmol)加入至加压管中的6-(3-{[(叔丁氧基) 羰基]氨基}丙基)-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙 基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体68(91％，1.52g，2.23mmol)的 MeOH(20mL)溶液中。将管密封，在75℃加热3小时。使反应混合物冷 却至RT，然后真空浓缩。将残留物混悬于CH2Cl2:MeOH(9:1，20mL)， 然后过滤。将滤液真空浓缩，得到产物，为黄色泡沫状物(1.21g，89％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.95(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(s,1H), 7.51(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),6.91(t,J＝5.5Hz,1H),4.60-4.52(m,4H),4.26(s, 2H),2.93(app.q,J＝6.6Hz,2H),2.78(t,J＝7.5Hz,2H),1.80-1.70(m,2H), 1.46-1.40(m,6H),1.37(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝361[M+]，Rt＝0.81分钟，UV纯度＝80％。
中间体70-4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基- 1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1,2,3,6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001031
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶- 1(2H)-甲酸叔丁酯(966mg，3.12mmol)加入至2-[(6-溴-1-乙基-1H-1,3-苯并 二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮，中间体65(1.00g，2.60 mmol)的二
Figure GDA0002817691790001032
烷(10mL)和水(2mL)溶液中。加入K2CO3(1.08g，7.81mmol)， 然后使氮气鼓入通过所得混悬液10分钟。加入Pd(dppf)2Cl2(190mg，0.26 mmol)，然后将反应混合物在85℃微波照射下加热2小时。将反应混合物 在EtOAc(100mL)和水(50mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用盐 水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩。将粗物质通过 二氧化硅柱(50g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，用下列梯度洗脱 (％EtOAc，柱体积)：0％，1CV；0-50％，7CV；50-79％，3CV；79％， 2CV；79-92％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得 到产物，为白色固体(670mg，50％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ7.99-7.87(m,4H),7.60(s,1H),7.42 (d,J＝8.5Hz,1H),7.25(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),6.16(s,1H),5.11(s,2H),4.49 -4.31(m,2H),4.05-3.97(m,2H),3.56(t,J＝5.6Hz,2H),2.54(s,2H),1.43(s, 9H),1.37(t,J＝7.1Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝487[MH+]，Rt＝1.18分钟，UV纯度＝95％。
中间体71-4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基- 1H-1,3-苯并二唑-6-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001041
将钯碳(10wt％，142mg)加入至4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚 -2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1,2,3,6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯， 中间体70(95％，660mg，1.29mmol)的EtOH(40mL)溶液中。将反应混 合物在RT在氢气氛下搅拌16小时。在反应中加入另外的钯碳(10wt％， 140mg)，并且在RT在氢气氛下再搅拌48小时。将反应混合物通过Celite 垫过滤，然后真空浓缩，得到产物，为无色油状物(635mg，94％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.96(dd,J＝5.6,2.9Hz,2H),7.91(dd, J＝5.6,3.0Hz,2H),7.45(s,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.02(dd,J＝8.4,1.4Hz, 1H),5.09(s,2H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),4.33(t,J＝5.1Hz,1H),4.10(d,J＝10.4 Hz,2H),2.84-2.75(m,2H),1.78(d,J＝12.8Hz,2H),1.58(qd,J＝12.7,4.3 Hz,2H),1.42(s,9H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝489[MH+]，Rt＝1.13分钟，UV纯度＝93％。
中间体72-6-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢- 1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001042
将碘乙烷(486μL，6.04mmol)加入至4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异 吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，中间体 71(93％，635mg，1.21mmol)的MeCN(10mL)溶液中。将反应混合物在 120℃微波照射下加热3小时。将反应混合物真空浓缩，得到产物，为棕 色固体(765mg，84％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ8.07-8.01(m,2H),7.98-7.88(m,4H), 7.64(d,J＝9.3Hz,1H),5.43(s,2H),4.69(q,J＝7.0Hz,4H),4.20-4.04(m, 2H),3.05-2.71(m,3H),1.85-1.75(m,2H),1.67(td,J＝12.3,3.5Hz,2H), 1.46-1.37(m,15H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝517[M+]，Rt＝1.06分钟，UV纯度＝86％。
中间体73-2-(氨基甲基)-6-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001051
将肼水合物(284μL，5.82mmol)加入至加压管中的6-{1-[(叔丁氧基)羰 基]哌啶-4-基}-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体72(86％，750mg，1.00mmol)的 MeOH(10mL)溶液中。将管密封，然后将反应混合物在75℃加热5小时。 使反应混合物冷却至RT，然后真空浓缩。将残留物混悬于CH2Cl2:MeOH (9:1，20mL)，然后过滤。将滤液真空浓缩，得到产物，为黄色泡沫状物 (605mg，85％)。
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ7.96(d,J＝8.7Hz,1H),7.95(s,1H), 7.58(d,J＝8.7Hz,1H),4.65-4.51(m,4H),4.27(s,2H),4.13(d,J＝13.3Hz,2H), 3.02-2.77(m,3H),1.89-1.76(m,2H),1.72-1.58(m,2H),1.47-1.39(m,15H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝387[M+]，Rt＝0.89分钟，UV纯度＝72％。
中间体74-4-(4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙 基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001052
将4-[4-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1- 甲酸叔丁酯(540mg，1.43mmol)加入至加压管中的2-[(6-溴-1-乙基-1H-1,3- 苯并二唑-2-基)甲基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮，中间体65(500mg， 1.30mmol)的二
Figure GDA0002817691790001062
烷(10mL)和水(0.5mL)溶液中。加入Cs2CO3(848mg， 2.60mmol)，然后将所得混悬液通过氮气流鼓入通过反应混合物脱气10分 钟。加入XPhos-Pd-G2(61mg，0.078mmol)，然后继续氮气流鼓入5分钟。将管密封，然后在100℃加热16小时。将反应混合物真空浓缩，然后 在EtOAc(100mL)和水(100mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水 (50mL)和盐水(2×50mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤并且蒸发。将粗 物质通过二氧化硅柱(50g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，以10份柱 体积，从0:100线性梯度上升至100:0洗脱。合并所需级分，并且蒸发，得 到产物，为淡黄色泡沫状物(226mg，31％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),7.98-7.94(m,2H),7.94- 7.89(m,3H),7.81-7.76(m,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(dd,J＝8.4,1.5 Hz,1H),5.11(s,2H),4.43-4.34(m,3H),4.04(dd,J＝15.8,8.8Hz,2H),2.93 (s,2H),2.09-2.02(m,2H),1.81(qd,J＝12.4,4.3Hz,2H),1.43(s,9H),1.42- 1.39(m,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝555[MH+]，Rt＝1.13分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体75-6-(1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)-2-[(1,3- 二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001061
将碘乙烷(159μL，1.98mmol)加入至4-(4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H- 异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲 酸叔丁酯，中间体74(220mg，0.397mmol)的MeCN(5mL)溶液中。将反 应混合物在120℃微波照射下加热2小时。加入碘乙烷(130μL，1.62mmol)， 然后将反应混合物在120℃微波照射下加热1小时。将反应混合物真空浓 缩，然后与乙醚共沸。将残留物真空干燥，得到产物，为淡黄色固体(280 mg，80％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50(s,1H),8.29(s,1H),8.12(s,1H), 8.10(d,J＝8.8Hz,1H),7.98-7.94(m,3H),7.94-7.89(m,2H),5.42(s,2H), 4.74-4.65(m,4H),4.48-4.35(m,1H),4.06(d,2H),2.95(br.s,2H),2.08(d, J＝6.7Hz,2H),1.81(qd,J＝12.7,4.7Hz,2H),1.49-1.40(m,15H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝583[M+]，Rt＝1.13分钟，UV纯度＝81％。
中间体76-2-(氨基甲基)-6-(1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1H-吡唑 -4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001071
将肼水合物(96μL，2.0mmol)加入至加压管中的6-(1-{1-[(叔丁氧基) 羰基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)-2-[(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基) 甲基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体75(81％，280mg， 0.32mmol)的MeOH(5mL)溶液中。将管密封，然后在75℃加热1小时。 使反应混合物冷却至RT，然后真空浓缩。将残留物混悬于CH2Cl2(9:1， 20mL)，然后过滤。将所得固体再经CH2Cl2(20mL)洗涤。合并滤液并且 蒸发至干，得到产物，为淡黄色固体(224mg，>99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),8.23(s,1H),8.10(s,1H), 8.03(d,J＝8.7Hz,1H),7.90(dd,J＝8.7,1.3Hz,1H),4.62-4.56(m,4H),4.44 -4.36(m,1H),4.28(s,2H),4.07(d,J＝10.4Hz,2H),2.94(br.s,2H),2.08(d, J＝10.4Hz,2H),1.82(tt,J＝12.2,6.2Hz,2H),1.46-1.40(m,15H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝453[M+]，Rt＝0.91分钟，UV纯度＝83％。
中间体77-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑- 6-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001081
将2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙酸(8.57g，48.9mmol)、HATU(20.5g， 53.8mmol)和DIPEA(17.0mL，97.8mmol)在DMF(200mL)中的混合物 在RT搅拌1小时。分批加入4-氨基-3-(乙基氨基)苯甲酸甲酯(9.59g，48.9 mmol)，然后用THF(20mL)冲洗至反应中。将反应混合物在RT搅拌18 小时。将2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙酸(0.857g，4.89mmol)、HATU(1.86g，4.89mmol)和DIPEA(1.70mL，9.78mmol)的DMF(3mL)溶液在RT 搅拌15分钟，然后加入至主反应中。将所得溶液在RT搅拌3小时。将2- {[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙酸(0.857g，4.89mmol)、HATU(1.86g，4.89mmol) 和DIPEA(1.70mL，9.78mmol)的DMF(3mL)溶液在RT搅拌15分钟， 然后加入至主反应中。将所得溶液在RT搅拌64小时。将反应混合物加入 至饱和NaHCO3水溶液(200mL)中。加入EtOAc(150mL)和水(100mL)， 然后分离各相。将水相用EtOAc(2×150mL)萃取，然后将合并的有机相用 水(4×100mL)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发， 得到粗中间体，为黑色油状物(18g)。将所得油状物溶于乙酸(80mL)，并 且在70℃搅拌1小时。使反应冷却至RT，然后蒸发，得到棕色固体。将 固体混悬于EtOAc(200mL)，然后过滤，并且用EtOAc洗涤，然后真空 干燥，得到浅粉色固体(6.5g)。将所得固体混悬于EtOAc(200mL)。将所 得混悬液在50℃加热15分钟，然后使其冷却至RT。通过过滤收集固体， 得到产物，为白色固体(2.43g)。将滤液再过滤一次，并且通过过滤收集固 体，用EtOAc:庚烷洗涤，然后真空干燥，得到第二批产物，为白色固体 (1.34g)。将滤液移至分液漏斗，然后用饱和NaHCO3水溶液(3×100mL)、 水(100mL)和盐水(50mL)萃取，然后经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发成黄 色固体，将其混悬于最少体积EtOAc:庚烷(1:4)并且过滤，然后真空干燥， 得到第三批产物，为白色固体(1.77g)。将第一次过滤的滤液移至分液漏斗， 然后用饱和NaHCO3水溶液(3×100mL)、水(100mL)和盐水(50mL)萃取， 然后经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发成深棕色固体。将固体混悬于EtOAc (50mL)，然后过滤。将固体真空干燥，得到第四批产物，为白色固体(3.4 g)。将滤液蒸发，得到深色固体(8g)。将所得固体溶于CH2Cl2，然后蒸发 在二氧化硅(16g)上。将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快速柱色谱纯化。柱 用EtOAc:庚烷，以10份柱体积，从0:100线性梯度上升至100:0洗脱。 合并所需级分，并且蒸发，得到棕色固体。将所得固体混悬于EtOAc:庚烷 (1:4，20mL)，然后过滤。将固体用EtOAc:庚烷洗涤，然后真空干燥，得 到第五批产物，为白色固体(1.45g)。将滤液真空浓缩，然后将残留物混悬 于EtOAc，过滤，并且真空干燥，得到第六批产物，为灰白色固体(0.32g)。 合并6批固体形成EtOAc混悬液，然后蒸发，并且真空干燥，得到产物， 为灰白色固体(10.7g，66％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.16(d,J＝1.1Hz,1H),7.82(dd,J＝8.4, 1.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(d,J＝5.3Hz,1H),4.47(d,J＝5.8Hz, 2H),4.35(q,J＝7.2Hz,2H),3.88(s,3H),1.46-1.22(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝334[MH+]，Rt＝0.98分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体78-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑- 6-甲酸
Figure GDA0002817691790001091
将LiOH水溶液(2.0M，16mL，32mmol)加入至2-({[(叔丁氧基)羰基] 氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸甲酯，中间体77(6.91g，20.7 mmol)的THF(100mL)混悬液中。将反应混合物在50℃搅拌16小时，然 后使其冷却至RT。将反应混合物真空浓缩，然后将所得固体混悬于水(50 mL)。滴加HCl水溶液(2M)直到pH 4。将所得混悬液过滤，然后用最少量的水和MeCN洗涤固体，然后真空干燥，得到产物，为白色固体(6.05g， 90％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),8.18-8.07(m,1H),7.80 (dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(s,1H),4.47(d,J＝5.8Hz, 2H),4.34(q,J＝7.2Hz,2H),1.46-1.21(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝320[MH+]，Rt＝0.84分钟，UV纯度＝99％。
中间体79-2-(氨基甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸二盐酸盐的 合成
Figure GDA0002817691790001101
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001103
烷溶液(4.0M，14mL，56mmol)加入至2-({[(叔丁氧 基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸，中间体78(3.55g， 11.1mmol)的MeCN(60mL)混悬液中。将反应混合物在RT搅拌4小时， 然后过滤。将固体真空干燥，得到固体，为白色固体(3.39g，98％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,3H),8.25(s,1H),7.88(dd, J＝8.5,1.2Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),4.50(d,J＝4.4Hz,2H),4.38(q, J＝7.2Hz,2H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝220[MH+]，Rt＝0.16分钟，ELS纯度 ＝94％。
中间体80-2-({[(苄基氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑- 6-甲酸的合成
Figure GDA0002817691790001102
将NaHCO3(4.83g，57.5mmol)分批加入至冷却(0℃)的2-(氨基甲基)- 1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸二盐酸盐，中间体79(4.20g，14.4mmol)的 水(40mL)混悬液中。使反应混合物温至RT，然后历经15分钟滴加碳酸苄 基酯2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(3.94g，15.8mmol)的THF(40mL)溶液。将 反应混合物在RT搅拌16小时。将所得混合物用EtOAc(50mL)萃取。分 离各相，然后将有机相用水(3×10mL)洗涤。将合并的水相通过加入HCl水溶液(2M)而酸化至pH 5，得到固体沉淀。将所得混悬液过滤，然后将固 体真空干燥，得到产物，为白色固体(3.5g，69％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.97(t,J＝5.8Hz,1H), 7.80(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.42-7.09(m,5H),5.06 (s,2H),4.54(d,J＝5.9Hz,2H),4.33(q,J＝7.0Hz,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝354[MH+]，Rt＝0.89分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体81-2-({[(苄基氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑- 6-甲酸叔丁酯
Figure GDA0002817691790001111
将1,1-二-叔丁氧基-N,N-二甲基甲胺(6.77mL，28.3mmol)加入至2- ({[(苄基氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸，中间体80 (2.50g，7.08mmol)的α,α,α-三氟甲苯(50mL)混悬液中。将反应混合物在 100℃加热1小时。使反应混合物冷却至RT，然后历经15分钟滴加1,1- 二-叔丁氧基-N,N-二甲基甲胺(6.77mL，28.3mmol)。将所得混合物在100℃ 加热45分钟。将反应混合物冷却至50℃，然后历经5分钟滴加1,1-二-叔 丁氧基-N,N-二甲基甲胺(3.38mL，14.15mmol)。将所得混合物在100℃加 热0.5小时，然后使其冷却至RT。将反应混合物在EtOAc(50mL)和水(50 mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水(2×30mL)、饱和NaHCO3水 溶液(20mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩， 产生米白色固体(2.5g)。将所得固体混悬于MeCN(10mL)。通过过滤收集 固体，然后真空干燥，得到产物，为灰白色固体(2.30g，79％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.07(s,1H),7.97(m,1H),7.76(dd, J＝8.4,1.5Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(m,5H),5.07(s,2H),4.55(d, J＝6.0Hz,2H),4.38-4.25(m,2H),1.57(s,9H),1.29(m,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝410[MH+]，Rt＝1.17分钟，UV纯度＝99％。
中间体82-2-({[(苄基氧基)羰基]氨基}甲基)-6-[(叔丁氧基)羰基]-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001121
如下独立进行三个反应，然后合并进行后处理。反应1：将2-({[(苄基 氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸叔丁酯，中间体81 (800mg，1.95mmol)与碘乙烷(629μL，7.82mmol)的MeCN(10mL)混悬 液于120℃微波照射下加热2小时。反应再经碘乙烷(629μL，7.82mmol) 处理，然后将反应混合物在120℃微波照射下再加热2小时。反应2：将 2-({[(苄基氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸叔丁酯，中 间体81(800mg，1.95mmol)和碘乙烷(629μL，7.82mmol)的MeCN(10 mL)混悬液在120℃微波照射下加热1小时45分钟。将反应再用碘乙烷 (629μL，7.82mmol)处理，然后将反应混合物在120℃微波照射下再加热 1.5小时。反应3：将2-({[(苄基氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并 二唑-6-甲酸叔丁酯，中间体81(700mg，1.71mmol)和碘乙烷(591μL，6.84 mmol)的MeCN(10mL)混悬液在120℃微波照射下加热1.5小时。将反应 再用碘乙烷(629μL，7.82mmol)处理，然后将反应混合物在120℃微波照 射下再加热1.5小时。合并三个反应，并且真空浓缩。将粗物质通过C18 (60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-31％，5CV；31％，4CV；31-59％， 6CV；59-100％，3CV；100％1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得 到产物，为白色泡沫状物(2.13g，67％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),8.43(t,J＝5.1Hz,1H), 8.22-8.12(m,2H),7.42-7.27(m,5H),5.06(s,2H),4.90(d,J＝5.3Hz,2H), 4.79-4.59(m,4H),1.61(s,9H),1.47-1.36(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝438[M+]，Rt＝1.07分钟，UV纯度＝100％。
中间体83-2-(氨基甲基)-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氢 溴酸盐溴化物的合成
Figure GDA0002817691790001131
将HBr的AcOH溶液(33wt％，4.28mL，18.8mmol)加入至2-({[(苄 基氧基)羰基]氨基}甲基)-6-[(叔丁氧基)羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓碘化物，中间体82(2.13g，3.77mmol)的AcOH(10mL)溶液中。将反 应混合物在RT搅拌0.5小时。将所得混悬液真空浓缩，然后与MeCN共 沸。将所得固体混悬于最小体积MeCN中，然后过滤，并且真空干燥，得 到产物，为白色固体(1.52g，99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.31-8.20(m,2H),4.85- 4.63(m,6H),1.53-1.40(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝248[M+]，Rt＝0.15分钟，ELS纯度＝100％。
中间体84-3-氨基-N-[(1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-5H-吡咯并 [2,3-b]吡嗪-2-甲酰胺的合成
Figure GDA0002817691790001132
将(1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲铵氯化物(380mg，1.79mmol)加入 至锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(300mg， 1.63mmol)、HBTU(927mg，2.44mmol)和DIPEA(852μL，4.89mmol) 的DMF(4mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌20小时。加入另外的 HBTU(450mg，1.18mmol)，使反应在RT再搅拌5小时。将反应混合物 在水(100mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离各相，然后将水相用EtOAc (2×80mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，然后真空浓缩。将粗物 质通过C18(60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％NH4OH，用下列 梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-45％，15CV；45-90％， 4CV；90％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固 体(78mg，11％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,1H),9.08(t,J＝5.6Hz,1H), 7.60(d,J＝7.7Hz,1H),7.55(d,J＝7.9Hz,1H),7.48(d,J＝3.7Hz,1H),7.38- 7.10(m,4H),6.44(d,J＝3.7Hz,1H),4.80(d,J＝5.6Hz,2H),4.33(q,J＝7.2Hz, 2H),1.32(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝336[MH+]，Rt＝0.87分钟，UV纯度＝79％。
中间体85-3-氨基-N-[(1-苄基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-5H-吡咯并 [2,3-b]吡嗪-2-甲酰胺的合成
Figure GDA0002817691790001141
将锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(50mg，0.27mmol)、HBTU(113mg，0.272mmol)和DIPEA(142μL，0.815mmol) 在DMF(1mL)中的混合物在RT搅拌1小时。加入(1-苄基-1H-1,3-苯并二 唑-2-基)甲铵氯化物(82mg，0.30mmol)，然后将所得混合物在RT搅拌4 小时。加入另外的HBTU(60mg，0.16mmol)，并且将反应在RT再搅拌 16小时。将反应混合物在水(10mL)和EtOAc(10mL)之间分配。分离各 相，然后将水相用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干 燥，然后真空浓缩。
将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％NH4OH，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-33％， 11CV；33-58％，6CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄 色固体(39mg，35％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.43(s,1H),9.06(t,J＝5.6Hz,1H), 7.66-7.59(m,1H),7.51-7.45(m,2H),7.31-7.12(m,9H),6.43(d,J＝3.7Hz, 1H),5.60(s,2H),4.77(d,J＝5.6Hz,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝398[MH+]，Rt＝0.97分钟，UV纯度＝96％。
中间体86-5-(2-氨基乙氧基)-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰 基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001151
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001153
烷溶液(4.0M，14mL，56mmol)加入至6-(2-{[(叔丁氧 基)羰基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-2-({[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}甲 基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体58(4.28g，6.01mmol)在MeCN (50mL)中的混合物中。将所得混合物在RT搅拌20分钟，然后真空浓缩， 得到产物，为棕/橙色泡沫状物(3.87g，98％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30(t,J＝5.3Hz,1H),8.15(s(br),3H), 7.99(d,J＝9.1Hz,1H),7.86(d,J＝7.5Hz,2H),7.69-7.60(m,3H),7.38-7.30 (m,3H),7.25(t,J＝7.3Hz,2H),4.75(d,J＝5.2Hz,2H),4.58-4.45(m,6H), 4.34(t,J＝4.9Hz,2H),4.22(t,J＝6.0Hz,1H),1.37-1.30(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝485[M+]，Rt＝0.84分钟，UV纯度＝85％。
中间体87-5-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001154
烷-4-基]丙基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基} 氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001152
将4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(95％，6.67g，23.6mmol)、5-(2-氨基 乙氧基)-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯 并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物，中间体86(85％，3.87g，5.91mmol)和AcOH (1.35mL，23.6mmol)在MeOH(100mL)中的混合物在RT搅拌0.5小时。 加入NaCNBH3(1.48g，23.6mmol)，然后将所得混合物在RT搅拌20小 时。加入另外的MeOH(40mL)，然后使反应在RT再搅拌24小时。加入 另外的MeOH(80mL)，然后将反应再用4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(95％， 1.60g，5.67mmol)、AcOH(0.34mL，5.94mmol)和NaCNBH3(0.38g， 6.05mmol)处理。使反应在RT再搅拌92小时，然后加入至饱和NaHCO3水溶液(250mL)中。将所得混悬液在RT搅拌20分钟。通过过滤收集固 体，然后用水洗涤，并且真空干燥，得到产物，为浅粉色固体(6.43g，89％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝990[M+],496[(M+)+H+]，Rt＝0.93分钟， UV纯度＝84％。
中间体88-2-(氨基甲基)-5-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟 基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001162
烷-4-基]丙基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二 唑-3-鎓氯化物
Figure GDA0002817691790001161
将吗啉(4.77mL，55.1mmol)加入至5-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001163
烷-4-基]丙基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-2- [({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物，中 间体87(84％，6.42g，5.26mmol)在THF(60mL)中的搅拌混合物中。将 所得混合物在RT搅拌4小时。将反应混合物用乙醚(150mL)稀释。将所 得混悬液搅拌，然后倾析出混悬液，留下粘稠油状物。加入另外的乙醚(80 mL)至油状残留物中，然后将混合物超声。将所得混悬液再次倾析，留下 粘稠油状物。再用乙醚(80mL)重复一次操作，然后将所得粘稠油状物真空 干燥，得到产物，为浅紫色泡沫状物(4.39g，85％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝767[M+]，384[(M+)+H+]，Rt＝0.75分钟， UV纯度＝82％。
中间体89-2-(氨基甲基)-5-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基] 氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓二盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001171
将2-(氨基甲基)-5-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基 -1,3-二
Figure GDA0002817691790001173
烷-4-基]丙基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯 化物，中间体88(82％，1.50g，1.53mmol)和HCl水溶液(2.0M，25mL， 50mmol)的混合物在RT搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，然后将残 留物溶于水(10mL)并且冷冻干燥，得到产物，为浅紫色泡沫状物(1.53g， >99％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝591[M+]，296[(M+)+H+]，Rt＝0.13分钟， UV纯度＝70％。
中间体90-5-(3-氨基丙氧基)-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰 基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001172
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001174
烷溶液(4.0M，3.3mL，13mmol)加入至6-(3-{[(叔丁氧 基)羰基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-2-({[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}甲 基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体63(95％，1.00g，1.31mmol)在 MeCN(15mL)中的混合物中。将反应混合物在RT搅拌0.5小时，然后真 空浓缩，得到产物，为粘稠黄色油状物(875mg，>99％-针对NMR所观察 到的15wt％残留二
Figure GDA0002817691790001175
烷校正的产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30(t,J＝5.3Hz,1H),8.00-7.85(m, 6H),7.65-7.59(m,3H),7.37(t,J＝7.4Hz,2H),7.31(dd,J＝9.1,2.1Hz,1H), 7.27(t,J＝7.4Hz,2H),4.76(d,J＝5.4Hz,2H),4.58-4.46(m,6H),4.27-4.19 (m,3H),3.05-2.95(m,2H),2.12-2.06(m,2H),1.34(t,J＝7.1Hz,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝499[M+]，Rt＝0.89分钟，UV纯度＝98％。
中间体91-5-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001182
烷-4-基]丙基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基} 氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001181
将4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.43g，5.32mmol)、5-(3-氨基丙氧基)- 1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3- 鎓盐酸盐氯化物，中间体90(85％，875mg，1.30mmol)和AcOH(305μL， 5.32mmol)在MeOH(25mL)中的混合物在RT搅拌0.5小时。加入 NaCNBH3(334mg，5.32mmol)，然后将所得混合物在RT搅拌64小时。加入另外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(500mg，1.86mmol)和AcOH(110 μL，1.92mmol)。将混合物搅拌0.5小时，然后加入NaCNBH3(115mg， 1.83mmol)。将所得混合物在RT再搅拌16小时。历经5分钟时间加入饱 和NaHCO3水溶液(40mL)，此时有白色沉淀形成。将所得混悬液过滤，并 且将收集的固体用水洗涤，然后真空干燥，得到产物，为白色固体(1.39g， 60％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝503[(M+)+H+]，Rt＝1.00分钟，UV纯度 ＝60％。
中间体92-2-(氨基甲基)-5-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟 基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001183
烷-4-基]丙基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二 唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001191
将吗啉(659μL，7.62mmol)加入至5-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001193
烷-4-基]丙基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-2- ({[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物盐酸 盐，中间体91(60％，1.32g，0.762mmol)在THF(10mL)中的混合物中。 将混合物在RT搅拌2.5小时。将反应混合物用乙醚(20mL)稀释。将所得 混悬液超声，然后将混悬液倾析，留下粘稠油状物。加入另外的乙醚(20mL) 至油状残留物中，然后将混合物超声。将所得混悬液再次倾析，留下粘稠 油状物。再用乙醚(20mL)重复一次操作，然后将所得粘稠油状物真空干燥， 得到产物，为浅橙色固体(639mg，79％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝781[M+],391[(M+)+H+]，Rt＝0.78分钟， UV纯度＝80％。
中间体93-2-(氨基甲基)-5-(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基] 氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001192
将2-(氨基甲基)-5-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基 -1,3-二
Figure GDA0002817691790001194
烷-4-基]丙基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐 酸盐氯化物，中间体92(80％，375mg，0.367mmol)和HCl水溶液(2.0M， 8.0mL，16mmol)的混合物在RT搅拌40分钟。将反应混合物真空浓缩， 然后用水稀释并且冷冻干燥，得到产物，为浅橙色固体(305mg，98％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝605[M+]，303[(M+)+H+]，Rt＝0.13分钟， UV纯度＝80％。
中间体94-4-{1-乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H- 1,3-苯并二唑-6-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001201
步骤1：将肼水合物(1.27mL，1.31mmol)和4-{2-[(1,3-二氧代-2,3-二 氢-1H-异吲哚-2-基)甲基]-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-基}哌啶-1-甲酸叔丁 酯，中间体71(2.56g，5.24mmol)的MeOH(30mL)混悬液在回流下加热 2.5小时，然后使其冷却至RT。将所得混悬液在RT放置16小时，然后过 滤。将收集的固体用CH2Cl2洗涤，然后将滤液真空浓缩，并且与MeCN 共沸，得到中间体，为白色固体(1.24g)。步骤2：将碳酸(2,5-二氧代吡咯 烷-1-基)酯9H-芴-9-基甲酯(1.16g，3.43mmol)的MeCN(20mL)溶液历经 10分钟滴加至步骤1中间体和NaHCO3(576mg，6.86mmol)在MeCN(40 mL)和水(30mL)中的混合物中。将反应混合物在RT搅拌21小时，然后 在EtOAc(100mL)和水(100mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水 (2×50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩。 将所得固体用超声在不同时间间隔处理而混悬于回流的MeCN(150mL) 中。使所得混悬液冷却至RT，然后过滤。将收集的固体真空干燥，得到产 物，为白色固体(1.52g，两个步骤50％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.88(d,J＝7.5Hz,2H), 7.72(d,J＝7.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.44-7.37(m,3H),7.31(t, J＝7.4Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,1H),4.48(d,J＝5.7Hz,2H),4.32(d,J＝7.1 Hz,2H),4.23(t,J＝6.9Hz,3H),4.15-4.05(m,2H),2.95-2.75(m,3H),1.80(d, J＝12.0Hz,2H),1.65-1.52(m,2H),1.42(s,9H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝581[MH+]，Rt＝1.12分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体95-6-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴- 9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001211
将4-{1-乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并 二唑-6-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，中间体94(1.55g，2.67mmol)和碘乙烷(1.07 mL，13.4mmol)的MeCN(20mL)混悬液在120℃微波照射下加热2.5小 时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过二氧化硅柱(25g)快速柱色 谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，用下列梯度洗脱(％MeOH，柱体积)：0％， 1CV；0-2.3％，5CV；2.3％，2CV；2.3-10％，7CV；10％，7CV。合并 所需级分，并且蒸发，得到产物，为淡粉色泡沫状物(1.60g，75％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(t,J＝5.2Hz,1H),7.98(d,J＝9.1 Hz,2H),7.86(d,J＝7.5Hz,2H),7.62(d,J＝7.7Hz,3H),7.35(t,J＝7.4Hz, 2H),7.25(t,J＝7.3Hz,2H),4.76(d,J＝5.2Hz,2H),4.59-4.44(m,6H),4.22(t, J＝5.6Hz,1H),4.16-4.10(m,2H),3.00-2.80(m,3H),1.83(d,J＝12.1Hz,2H), 1.66(qd,J＝12.5,4.0Hz,2H),1.44(s,9H),1.34(t,J＝7.0Hz,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝609[M+]，Rt＝1.11分钟，UV纯度＝92％。
中间体96-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-6- (哌啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001212
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001213
烷溶液(4.0M，2.0mL，8.0mmol)加入至6-{1-[(叔丁氧 基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体95(1.59g，1.99mmol)的MeCN(50 mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌2小时，然后真空浓缩，并且与MeCN (3×25mL)共沸，得到产物，为黄色固体(1.34g，>99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.00(br.s,1H),8.87(br.s,1H),8.35(t, J＝5.1Hz,1H),8.04(d,J＝8.6Hz,1H),7.88(s,1H),7.85(d,J＝7.6Hz,2H), 7.62(d,J＝7.5Hz,2H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(t,J＝7.4Hz,2H),7.24(t, J＝7.4Hz,2H),4.77(d,J＝5.1Hz,2H),4.61-4.50(m,4H),4.48(d,J＝5.9Hz, 2H),4.21(t,J＝5.8Hz,1H),3.42(d,1H),3.15-2.96(m,4H),2.04-1.91(m, 4H),1.34(t,J＝7.1Hz,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝509[M+]，Rt＝0.85分钟，UV纯度＝100％。
中间体97-6-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001222
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨 基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001221
将1,3-二乙基-2-[({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-6-(哌啶-4- 基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐碘化物，中间体96(1.33g，1.98mmol)、 4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.06g，3.95mmol)和AcOH(226μL，3.95 mmol)的MeOH(50mL)溶液在RT搅拌0.5小时。加入NaCNBH3(248 mg，3.95mmol)，然后将所得溶液在RT搅拌24小时。在反应混合物中加入另外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.06g，3.95mmol)和AcOH(226μL， 3.95mmol)，然后在RT搅拌0.5小时。加入NaCNBH3(150mg，2.37mmol)， 然后所得溶液在RT再搅拌16小时。历经5分钟加入饱和NaHCO3水溶 液(50mL)，然后使所得混悬液在RT放置0.5小时，然后过滤。将收集的 固体用水(100mL)洗涤，然后真空干燥，得到产物，为米白色固体(1.24g， 57％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝381[(M+)+H+]，Rt＝0.94分钟，UV纯度 ＝81％。
中间体98-2-(氨基甲基)-6-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基- 2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001233
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001231
将吗啉(370μL，11.3mmol)加入至6-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001234
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-2- [({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)甲基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中 间体97(81％1.00g，0.90mmol)的THF(10mL)混悬液中。将所得混悬液 超声10分钟，然后在RT搅拌2.5小时。将反应混合物用乙醚(25mL)稀 释。将所得白色沉淀过滤，并且用乙醚(25mL)洗涤，然后真空干燥，得到 产物，为白色固体(615mg，92％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝539[M+]，Rt＝0.73分钟，UV纯度＝90％。
中间体99-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- {1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001235
烷-4-基]丙基]哌 啶-4-基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001232
将咪唑盐酸盐(55mg，0.53mmol)加入至2-(氨基甲基)-6-{1-[(2S,3R)- 2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001236
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}- 1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体98(352mg，0.475mmol) 和2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(181mg，0.790 mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌20小时，然后真 空浓缩。将所得粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-6％，4 CV；6-20％，7CV；20-24％，1CV；24-33％，1CV；33％，1CV；33- 43％，1CV；43-100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物， 为黄色固体(401mg，99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 9.16(s,1H),8.04(d,J＝8.7Hz,1H),7.87(s,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.52 (dd,J＝3.7,2.6Hz,1H),7.49-7.45(m,2H),7.42-7.35(m,3H),6.42(dd, J＝3.8,1.7Hz,1H),5.57(s,1H),5.06(d,J＝5.2Hz,2H),4.77-4.63(m,4H), 4.23-4.10(m,3H),3.87(d,J＝5.9Hz,1H),3.85-3.64(m,4H),3.59(dt,J＝20.8, 10.7Hz,4H),3.38(d,J＝12.5Hz,1H),3.25(d,J＝10.2Hz,2H),3.07(t,J＝11.4 Hz,2H),2.19-1.85(m,4H),1.41(td,J＝7.2,2.4Hz,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝350[(M+)+H+]，Rt＝0.81分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体100-N-[3-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)丙基]氨基甲酸叔 丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001241
将碳酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯9H-芴-9-基甲酯(3.87g，11.5mmol) 的MeCN(30mL)溶液，历经20分钟滴加至NaHCO3(1.93g，23.0mmol) 和N-(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯(2.00g，11.5mmol)在MeCN(40mL)和 水(40mL)中的混合物中。将所得混合物在RT搅拌1小时，然后过滤。将 收集的固体用水(2×20mL)然后用MeCN(2×20mL)洗涤，然后真空干燥，得到白色固体(1.28g)。将所得固体混悬于EtOAc(10mL)，然后过滤。将 收集的固体真空干燥，得到第一批产物，为白色固体(1.24g)。将MeCN/水 滤液真空浓缩，然后将所得残留物在EtOAc(100mL)和水(50mL)之间分 配。分离各相，然后将有机相用水(2×50mL)、盐水(20mL)洗涤，然后经 Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩，得到白色固体(2.30g)。将所得固体与来 自EtOAc研磨的滤液合并，然后将合并的物质通过二氧化硅柱(25g)快速 柱色谱纯化。柱用庚烷:EtOAc:MeOH，用下列梯度洗脱：100:0:0，3CV； 100:0:0-81:19:0，3CV；81:19:0％，2CV；81:19:0-61:39:0，3CV；61:39:0， 5CV；61:39:0-12:88:0，8CV；12:88:0-0:100:0，2CV；0:100:0，1CV； 0:100:0-0:93:7，4CV；0:93:7，3CV；0:93:7-0:91:9，1CV。合并所需级 分，并且蒸发，得到第二批产物，为白色固体(2.60g)，其在分析上与第一 批一致。总产量＝3.84g(84％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.73-7.59(m, 2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.36-7.29(m,2H),7.22(t,J＝5.6Hz,1H),6.74(s, 1H),4.29(d,J＝6.9Hz,2H),4.21(t,J＝6.8Hz,1H),3.04-2.78(m,4H),1.56- 1.43(m,2H),1.37(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝419[(M+Na)+]，Rt＝1.25分钟，UV纯度 ＝99％。
中间体101-N-(3-氨基丙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001251
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001252
烷溶液(4.0M，8.0mL，32mmol)加入至N-(3-{[(9H-芴 -9-基甲氧基)羰基]氨基}丙基)氨基甲酸叔丁酯，中间体100(2.60g，6.56 mmol)的MeCN(40mL)混悬液中。将反应混合物在RT搅拌1小时，然后 过滤。将收集的固体用MeCN冲洗，然后真空干燥，得到产物，为白色固 体(1.89g，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.95-7.77(m,5H),7.68(d,J＝7.4Hz, 2H),7.48-7.38(m,3H),7.37-7.29(m,2H),4.33(d,J＝6.8Hz,2H),4.26- 4.17(m,1H),3.10-2.99(m,2H),2.81-2.71(m,2H),1.76-1.64(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝297[MH+]，Rt＝0.91分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体102-N-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基- 1,3-二
Figure GDA0002817691790001253
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯；甲酸的合成
Figure GDA0002817691790001261
将N-(3-氨基丙基)氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯盐酸盐，中间体101(900 mg，2.70mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.45g，5.41mmol)在MeOH (40mL)中的混合物在RT搅拌1.5小时。加入AcOH(0.31mL，5.4mmol) 和NaCNBH3(340mg，5.41mmol)，然后将反应在RT搅拌18小时。然后 在反应中加入4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.45g，5.41mmol)，然后将反 应在RT搅拌1小时。加入NaCNBH3(340mg，5.41mmol)，然后使反应 在RT再搅拌114小时。历经10分钟滴加饱和NaHCO3水溶液(50mL)， 然后将所得混合物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配。分离各相，然 后将有机相用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(20mL) 洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩，得到白色固体(2.25g)。 将所得粗物质通过C18(120g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲 酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-29％，4CV； 29-39％，2CV；39％，2CV；39-47％，1CV；47-73％，1CV；73-100％， 1CV；100％，1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为白色 固体(1.12g，49％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.16(m,1H),7.88(d,J＝7.5Hz,2H), 7.67(d,J＝7.4Hz,2H),7.45-7.37(m,6H),7.36-7.25(m,8H),7.24-7.16(m, 1H),5.49-5.39(m,2H),5.27-5.01(m,2H),4.32-4.25(m,2H),4.23-4.16 (m,1H),4.16-4.09(m,2H),3.84-3.74(m,4H),3.73-3.66(m,2H),3.64- 3.56(部分遮挡的m,2H),3.53-3.45(遮挡的m,2H),2.99-2.89(遮挡的m, 2H),2.68-2.54(遮挡的m,6H),1.60-1.48(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝801[MH+]，Rt＝1.01分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体103-(1R,2S)-3-[(3-氨基丙基)[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5- 羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001272
烷-4-基]丙基]氨基]-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001273
烷-4-基]丙烷-1,2二醇；双(甲酸)的合成
Figure GDA0002817691790001271
将二乙胺(1.44mL，14.0mmol)加入至N-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001274
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)氨基甲酸9H-芴- 9-基甲酯；甲酸，中间体102(1.32g，1.40mmol)的THF(20mL)溶液中。 将反应混合物在RT搅拌16小时，然后真空浓缩。将所得粗物质通过C18 (60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-18％，3CV；18％，2CV；18-26％， 2CV；26-100％，2CV；100％1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得 到产物，为白色固体(710mg，80％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36-8.24(m,2H),7.44-7.38(m,4H), 7.38-7.29(m,6H),5.44(s,2H),4.18-4.08(遮挡的m,2H),3.87-3.75(遮挡 的m,4H),3.73-3.65(遮挡的m,2H),3.63-3.56(遮挡的m,2H),3.53-3.44 (遮挡的m,2H),2.90-2.78(m,2H),2.75-2.55(遮挡的m,6H),1.78-1.65 (m,1H),1.55(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝579[MH+]，Rt＝0.74分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体104-(2R,3R,4R,5S)-6-[(3-氨基丙基)[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6- 五羟基己基]氨基]己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001281
将(1R,2S)-3-[(3-氨基丙基)[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001283
烷-4-基]丙基]氨基]-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001284
烷-4-基] 丙烷-1,2二醇；双(甲酸)，中间体103(335mg，0.50mmol)和HCl水溶液 (2M，5mL，10mmol)的混合物在RT搅拌3小时。将反应混合物真空浓 缩，然后将残留物与MeCN(3×10mL)共沸，得到产物，为无色粘稠油状 物(235mg，99％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ4.25-4.18(m,2H),3.91-3.83(m,2H), 3.81-3.76(m,2H),3.74-3.64(m,6H),3.62-3.51(m,2H),3.50-3.39(m, 4H),3.10-3.03(m,2H),2.22-2.13(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝403[MH+]，Rt＝0.12分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体105-4-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的 合成
Figure GDA0002817691790001282
将碳酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯9H-芴-9-基甲酯(5.05g，15.0mmol) 的MeCN(50mL)溶液历经20分钟滴加至4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.00 g，15.0mmol)和NaHCO3(2.52g，30.0mmol)在MeCN(50mL)和水(50 mL)中的混合物中。将所得混合物在RT搅拌16小时，然后在EtOAc(100 mL)和水(100mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水(100mL)和盐水 (100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到产物，为白色泡沫 状物(6.20g，95％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.69(d,J＝7.4 Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(td,J＝7.4,0.9Hz,2H),7.27(d,J＝7.7Hz, 1H),4.31(d,J＝6.7Hz,2H),4.21(t,J＝6.6Hz,1H),3.84(br.d,J＝11.7Hz, 2H),3.52-3.40(m,1H),2.80(br.s,2H),1.70(d,J＝10.8Hz,2H),1.39(s,9H), 1.20-1.29(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝445[(M+Na)+]，Rt＝1.38分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体106-N-(哌啶-4-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001291
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001292
烷溶液(4.0M，11mL，44mmol)加入至4-({[(9H-芴-9- 基)甲氧基]羰基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，中间体105(6.20g，14.7mmol) 的MeCN(100mL)溶液中。将所得溶液在RT搅拌2小时。再在反应中加 入HCl的二
Figure GDA0002817691790001293
烷溶液(4.0M，2.0mL，8.0mmol)，然后将反应混合物在 RT再搅拌1小时。将反应混合物过滤，然后将收集的固体用MeCN洗涤， 然后真空干燥，得到产物，为白色固体(4.60g，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.85(s,1H),8.69(s,1H),7.89(d,J＝7.5 Hz,2H),7.69(d,J＝7.4Hz,2H),7.50(d,J＝7.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H), 7.36-7.31(m,2H),4.33(d,J＝6.6Hz,2H),4.22(t,J＝6.4Hz,1H),3.62-3.54 (m,1H),3.21(d,J＝12.0Hz,2H),2.96-2.88(m,2H),1.88(d,J＝12.1Hz,2H), 1.67-1.50(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝323[MH+]，Rt＝0.89分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体107-N-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001294
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001301
将4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(2.99g，11.2mmol)加入至N-(哌啶-4- 基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐，中间体106(2.00g，5.57mmol)的 MeOH(75mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌20分钟，然后加入AcOH (670μL，11.7mmol)和NaCNBH3(700mg，11.2mmol)。将反应混合物在 RT搅拌22小时。历经10分钟滴加饱和NaHCO3水溶液(50mL)。将所得 混合物在EtOAc(200mL)和水(100mL)之间分配。分离各相，然后将有机 相用饱和NaHCO3水溶液(100mL)、水(2×100mL)和盐水(2×100mL)洗涤。 将合并的有机相经Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到产物，为白色固体(3.13 g，92％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.78(d,J＝7.4Hz,2H),7.63(d,J＝7.1Hz, 2H),7.52-7.45(m,2H),7.39-7.27(m,7H),5.55(s,1H),4.34(d,J＝6.4Hz,2H), 4.25(dd,J＝10.7,5.4Hz,1H),4.21-4.17(m,1H),4.07-4.00(m,1H),3.97- 3.92(m,1H),3.90-3.87(d,J＝6.4Hz,1H),3.82(d,J＝9.3Hz,1H),3.61(t, J＝10.5Hz,1H),3.39-3.32(m,1H),2.97-2.94(m,1H),2.77-2.64(m,2H), 2.47(dd,J＝11.8,6.7Hz,1H),2.14(t,J＝10.5Hz,1H),2.06-2.02(m,1H),1.75 (dd,J＝59.2,11.6Hz,2H),1.53-1.36(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝575[MH+]，Rt＝0.96分钟，UV纯度＝94％。
中间体108-(1R,2S)-3-(4-氨基哌啶-1-基)-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基- 1,3-二
Figure GDA0002817691790001303
烷-4-基]丙烷-1,2二醇的合成
Figure GDA0002817691790001302
将二乙胺(2.64mL，25.6mmol)加入至N-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001312
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}氨基甲酸(9H-芴- 9-基)甲酯，中间体107(94％，3.13g，5.12mmol)的THF(40mL)溶液中。 将反应混合物在RT搅拌1小时。再在反应混合物中加入二乙胺(2.64mL， 25.6mmol)，然后使反应在RT再搅拌20小时。将反应混合物真空浓缩， 然后将所得残留物混悬于EtOAc(10mL)和水(10mL)。然后加入乙醚(50 mL)，然后将混合物超声。将所得混悬液过滤，然后将收集的固体用乙醚 (20mL)冲洗，然后真空干燥，得到产物，为白色固体(1.98g，>99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.41(dd,J＝6.5,3.1Hz,2H),7.38-7.31 (m,3H),5.49(s,1H),4.11(dd,J＝10.5,4.9Hz,1H),3.81(q,J＝6.2Hz,1H), 3.79-3.69(m,3H),3.52-3.48(m,1H),2.83(d,J＝11.3Hz,1H),2.58-2.52(m, 1H),2.45 2.45(m,2H+DMSO),2.24(dd,J＝12.4,6.1Hz,1H),1.93-1.73(m, 2H),1.61(d,J＝12.5Hz,1H),1.49(d,J＝12.1Hz,1H),1.17-1.14(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝353[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体109-(2R,3R,4R,5S)-6-(4-氨基哌啶-1-基)己烷-1,2,3,4,5-五醇二 盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001311
将HCl水溶液(2.0M，11mL，22mmol)加入至(1R,2S)-3-(4-氨基哌啶 -1-基)-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001313
烷-4-基]丙烷-1,2-二醇，中间体 108(400mg，1.13mmol)的水(5mL)混悬液中。将反应混合物在RT搅拌 2小时，然后真空浓缩。将所得残留物溶于水(20mL)，然后用EtOAc(20 mL)萃取。将水相真空浓缩，得到产物，为灰白色泡沫状物(279mg，73％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ4.26-4.18(m,1H),3.87-3.74(m,4H), 3.74-3.62(m,4H),3.61-3.42(m,2H),3.29-3.12(m,2H),2.28(t,J＝13.2Hz, 2H),2.15-1.92(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝265[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体110-4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001322
烷-4-基]丙基]氨基}哌啶-1-甲酸苄基酯的合成
Figure GDA0002817691790001321
将4-氨基哌啶-1-甲酸苄基酯(1.50g，6.40mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡 喃葡萄糖(3.44g，12.8mmol)在MeOH(40mL)中的混合物在RT搅拌2小 时。加入AcOH(733μL，12.8mmol)，然后分批加入NaCNBH3(805mg， 12.8mmol)。将反应在RT搅拌16小时。在反应中再加入4,6-O-亚苄基-D- 吡喃葡萄糖(3.44g，12.8mmol)，然后将反应在RT再搅拌1小时。加入 NaCNBH3(805mg，12.8mmol)，然后将反应混合物在RT再搅拌64小时。 在反应中再加入AcOH(733μL，12.8mmol)，然后将反应在RT再搅拌4 小时。加入4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(3.44g，12.8mmol)，然后将反应 在RT搅拌0.5小时。加入AcOH(733μL，12.8mmol)和NaCNBH3(805 mg，12.8mmol)，然后使反应在RT再搅拌16小时。历经5分钟滴加饱和 NaHCO3水溶液(20mL)。将所得混合物在EtOAc(60mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用饱和NaHCO3水溶 液(2×50mL)、水(2×50mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并 且蒸发，得到白色固体(4.8g)。将所得固体溶于MeOH:MeCN(1:1，10mL)， 然后将一半该溶液保留粗物质，供稍后纯化，另一半则通过C18(60g)快 速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％NH4OH，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：5％，2CV；5-23％，4CV；23％，3CV；23-49％，5CV；49％， 2CV；49-100％，10CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩， 得到白色固体(1.39g)。将所得物质再通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱 用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-32％，5CV；32％，2CV；32-59％，6CV；59-81％，1CV；100％，1 CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到白色固体(1.12g)。将所得固体溶 于EtOAc(50mL)，并且用饱和NaHCO3水溶液(2×20mL)和水(10mL)萃 取，然后经MgSO4干燥，过滤并且蒸发，得到产物，为白色固体(0.95g， 20％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.44-7.24(m,15H),5.49-5.41(m, 2H),5.15-5.09(m,2H),5.08-4.99(m,2H),4.47-4.43(m,2H),4.41-4.35 (m,2H),4.17-4.08(m,2H),4.01-3.90(m,2H),3.83-3.74(m,2H),3.75- 3.66(m,4H),3.64-3.56(m,2H),3.54-3.42(m,2H),2.70-2.33(m, 7H+DMSO),1.72-1.59(m,2H),1.39-1.27(m,1H),1.16-1.08(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝739[MH+]，Rt＝0.94分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体111-(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基 -1,3-二
Figure GDA0002817691790001332
烷-4-基]丙基](哌啶-4-基)氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001333
烷-4-基]丙烷-1,2二醇的合成
Figure GDA0002817691790001331
将4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001334
烷-4-基]丙基]氨基}哌啶-1-甲酸苄基酯，中间体110(950mg，1.29mmol)和钯碳 (10wt％，137mg)在EtOH(15mL)和AcOH(1.5mL)中的混合物在氢气氛 下在RT搅拌18小时。将反应混合物通过Celite垫过滤，然后真空浓缩。 将所得残留物用超声混悬于MeCN(20mL)中，然后真空浓缩。再用MeCN (20mL)重复操作一次。将所得残留物再次用超声混悬于MeCN(20mL)中， 然后使其沉降。用吸管倾析出上清液。再用MeCN(2×20mL)重复研磨操 作，然后将残留物真空干燥，得到白色固体(770mg)。将所得固体溶于MeOH，然后加入至预先平衡的SCX柱(10g)。将SCX柱用MeOH洗脱， 然后通过用氨的MeOH溶液(7M)洗脱释放出碱性组分。将碱性洗脱液真空浓缩，然后将所得油状物混悬于MeCN(15mL)，并且真空浓缩。将残 留物再与MeCN(2×15mL)共沸，然后真空干燥，得到产物，为白色固体 (595mg，77％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.48-7.22(m,11H),5.49-5.45(m, 2H),5.17-5.06(m,2H),4.52-4.30(m,4H),4.18-4.06(m,2H),3.86-3.76 (m,2H),3.73-3.66(m,4H),3.64-3.55(m,2H),3.54-3.44(m,2H),2.96- 2.77(m,2H),2.69-2.60(m,2H+DMSO),2.58-2.44(m,1H+DMSO),2.44- 2.35(m,2H),2.34-2.26(m,1H),2.21-2.13(m,1H),1.65-1.50(m,2H),1.40 -1.27(m,1H),1.22-1.06(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝605[MH+]，Rt＝0.75分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体112-(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基](哌啶-4-基)氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001341
将(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001342
烷-4-基]丙基](哌啶-4-基)氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001343
烷-4-基] 丙烷-1,2二醇，中间体111(315mg，0.520mmol)和HCl水溶液(2M，5 mL，10mmol)的混合物在RT搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，然后 与MeCN共沸，得到产物，为白色固体(259mg，99％)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.35-4.26(m,2H),4.13-3.98(m,1H),3.96 -3.41(m,16H),3.30-3.14(m,2H),2.56-2.35(m,2H),2.28-2.15(m,1H), 2.10-2.04(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝429[MH+]，Rt＝0.75分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体113-N-[1-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基]氨基甲酸 苄基酯的合成
Figure GDA0002817691790001351
将三乙胺(515μL，3.69mmol)加入至加压管中的N-(4-哌啶基)氨基甲 酸苄基酯盐酸盐(500mg，1.85mmol)和N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(500 mg，2.22mmol)的MeCN(4mL)溶液中。将管密封，然后将反应混合物在 85℃加热16小时。加入另外的N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.67 mmol)，然后将反应再在85℃加热1小时。将反应混合物真空浓缩，然后 将所得固体溶于最少量的回流MeCN中，然后使其冷却至RT。将所得混 悬液过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(25g)快速柱色 谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，以10份柱体积，线性梯度从0上升至 15％MeOH洗脱。合并所需级分，并且蒸发，得到粘稠红色油状物(254mg)。 将所得物质在EtOAc(15mL)和饱和NaHCO3水溶液(15mL)之间分配。分 离各相，然后将有机相用水(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩，得到产物，为浅红色固体(140mg，20％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.39-7.28(m,5H),7.21(d,J＝7.6Hz, 1H),6.59(t,J＝5.3Hz,1H),5.00(s,2H),3.29-3.22(m,1H),3.00(q,J＝6.4Hz, 2H),2.76(d,J＝11.5Hz,2H),2.28(t,J＝6.9Hz,2H),1.95(t,J＝11.0Hz,2H), 1.69(d,J＝10.5Hz,2H),1.43-1.32(m,11H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝378[MH+]，Rt＝0.85分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体114-N-[2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001352
将N-[1-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基]氨基甲酸苄基酯， 中间体113(140mg，0.370mmol)和钯碳(10wt％，20mg)在EtOH(5mL) 中的混合物在氢气氛在RT搅拌2小时。将反应混合物通过Celite垫过滤， 然后将滤液真空浓缩，得到产物，为无色油状物(124mg，96％-针对NMR 所测得70％纯度校正的产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.61-6.53(m,1H),4.37(s,2H),3.00 (q,J＝6.5Hz,2H),2.76-2.71(m,2H),2.49-2.45(m,1H),2.27(t,J＝7.0Hz, 2H),1.91(t,J＝10.6Hz,2H),1.67-1.60(m,2H),1.37(s,9H),1.22-1.15(m, 2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝244[MH+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体115-双(甲酸)；N-[2-(4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5- 羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001362
烷-4-基]丙基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯 的合成
Figure GDA0002817691790001361
将N-[2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体114(70％， 725mg，2.08mmol)、4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(3.57g，12.7mmol)和 AcOH(725uL,12.7mmol)在MeOH(20mL)中的混合物在RT搅拌0.5小 时。加入NaCNBH3(795mg，12.7mmol)，然后将所得混合物在RT搅拌 5天。将反应再用4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.80g，6.29mmol)和AcOH(362uL，6.32mmol)处理，然后使反应在RT搅拌0.5小时。加入NaCNBH3 (396mg，6.30mmol)，然后使反应在RT再搅拌18小时。将反应再用4,6- O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.80g，6.29mmol)和AcOH(362uL,6.32mmol) 处理，然后使反应在RT搅拌0.5小时。加入NaCNBH3(396mg，6.30 mmol)，然后使反应在RT再搅拌18小时。将反应混合物在氮气流下浓缩， 然后滴加饱和NaHCO3水溶液直到停止起泡为止。将所得混合物在饱和 NaHCO3水溶液(150mL)和EtOAc(150mL)之间分配。分离各相，然后将 有机相用NaHCO3(150mL)、水(2×150mL)和盐水(150mL)洗涤，然后经 Na2SO4干燥，并且真空浓缩，得到浅黄色固体。将粗物质通过C18(120g) 快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-16％，11CV；16％-100％，4CV；100％，1CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为无色油状物(383mg，18％)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝375[(M+)+H+]，748[MH+]，Rt＝0.82分 钟，UV纯度＝83％。
中间体116-(2R,3R,4R,5S)-6-{[1-(2-氨基乙基)哌啶-4- 基][(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇三盐酸盐 的合成
Figure GDA0002817691790001371
将N-[2-[4-[双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001372
烷-4-基]丙基]氨基]-1-哌啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体115(83％，360 mg，0.356mmol)和HCl水溶液(4.0M，3.6mL，14.4mmol)的混合物在RT 搅拌0.5小时，然后真空浓缩。将残留物溶于水:MeCN(9:1，12mL)，然 后冷冻干燥，得到产物，为白色泡沫状物(220mg，94％)。
1H NMR(500MHz,氧化氘)δ4.34-4.26(m,2H),4.16-4.05(m,1H), 3.95-3.88(m,4H),3.87(d,J＝2.9Hz,1H),3.84(d,J＝3.0Hz,1H),3.83-3.78 (m,2H),3.73-3.67(m,4H),3.64-3.46(m,8H),3.40-3.31(m,2H),2.58(d, J＝14.0Hz,1H),2.51(d,J＝13.7Hz,1H),2.35-2.24(m,1H),2.23-2.12(m, 1H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝472[MH+]，Rt＝0.29分钟，ELS纯度 ＝88％。
中间体117-4-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)哌啶-1-甲酸(9H-芴-9-基) 甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001381
历经1分钟分批加入NaHCO3(2.35g，28.0mmol)至N-(4-哌啶基甲 基)氨基甲酸叔丁酯(3.00g，14.0mmol)的MeCN(50mL)和水(50mL)搅拌 溶液中。历经1小时滴加碳酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯9H-芴-9-基甲酯 (4.72g，14.0mmol)的MeCN(50mL)溶液，然后使反应在RT搅拌18小 时。将反应混合物在EtOAc(100mL)和水(100mL)之间分配。加入盐水以 促进相分离。分离各相，然后将水相用EtOAc(50mL)萃取。将合并的有 机萃取物用盐水(70mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且真空浓缩，得到 产物，为灰白色固体(7.02g，96％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.62(d,J＝7.4 Hz,2H),7.41(t,J＝7.3Hz,2H),7.33(td,J＝7.4,0.9Hz,2H),6.85(t,J＝5.8Hz, 1H),4.53-4.29(m,2H),4.26(t,J＝6.3Hz,1H),3.97-3.67(m,2H),2.78(t, J＝6.1Hz,2H),2.75-2.61(m,2H),1.60-1.44(m,3H),1.38(s,9H),0.93-0.73 (m,2H)。5wt％残留溶剂。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝459[M+Na+]，Rt＝1.40分钟，UV纯度 ＝89％。
估计总纯度＝84％。
中间体118-4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001382
历经8分钟滴加HCl的二
Figure GDA0002817691790001383
烷溶液(4.0M，12mL，48mmol)至4- ({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)哌啶-1-甲酸(9H-芴-9-基)甲酯，中间体117 (7.00g，16.0mmol)的MeCN(100mL)搅拌溶液中。将所得溶液在RT搅 拌17小时，然后真空浓缩，得到产物，为白色固体(5.56g，82％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.04-7.82(m,5H),7.62(d,J＝7.4Hz, 2H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H),7.34(td,J＝7.4,0.9Hz,2H),4.42-4.32(m,2H), 4.27(t,J＝6.3Hz,1H),4.04-3.71(m,2H),2.84-2.69(m,2H),2.67(d,J＝6.8 Hz,2H),1.80-1.70(m,1H),1.70-1.58(m,2H),1.04-0.87(m,2H)。7wt％ 残留二
Figure GDA0002817691790001392
烷。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝337[MH+]，Rt＝0.86分钟，UV纯度＝95％。
估计总纯度＝88％。
中间体119-4-({双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001393
烷-4-基]丙基]氨基}甲基)哌啶-1-甲酸(9H-芴-9-基)甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001391
将AcOH(3.11mL，54.3mmol)加入至4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸(9H- 芴-9-基)甲酯盐酸盐，中间体118(5.56g，14.9mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡 喃葡萄糖(14.6g，54.3mmol)的MeOH(100mL)溶液中。将反应在RT搅 拌40分钟，然后历经50分钟分批加入NaCNBH3(3.41g，54.3mmol)。将 所得溶液在RT搅拌17小时。将反应混合物再用4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡 萄糖(7.29g，27.2mmol)和AcOH(1.56mL，27.2mmol)处理，然后在RT 搅拌30分钟。历经1小时分批加入NaCNBH3(1.71g，27.2mmol)。将所 得溶液在RT再搅拌70小时，然后历经30分钟分批加入至饱和NaHCO3水溶液(200mL)中。将所得混悬液在RT搅拌1小时，然后过滤。将固体 用水(100mL)洗涤，然后真空干燥，产生白色固体(13.8g)。将一份(5.55g) 所得粗物质通过C18(400g)快速柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+0.1％NH4OH，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2 CV；10-57％，16CV；57％，9CV；59-63％，2CV；100％，3CV。合并 所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为米白色固体(2.99g，23％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD-d4)δ7.86-7.75(m,2H),7.65-7.55(m, 2H),7.53-7.44(m,4H),7.43-7.37(m,2H),7.36-7.27(m,8H),5.51(m,2H), 4.64-4.36(m,5H),4.27-4.20(m,3H),4.04-3.92(m,4H),3.86(m,2H),3.71 (m,2H),3.64-3.57(m,2H),2.73-2.58(m,3H),2.54-2.44(m,2H),2.36- 2.23(m,2H),1.81-1.42(m,3H),0.89-0.58(m,2H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝841[MH+]，Rt＝4.78分钟，UV纯度＝95％。
中间体120-(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基 -1,3-二
Figure GDA0002817691790001402
烷-4-基]丙基][(哌啶-4-基)甲基]氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基- 1,3-二
Figure GDA0002817691790001403
烷-4-基]丙烷-1,2-二醇；双(甲酸)的合成
Figure GDA0002817691790001401
将哌啶(3.30mL，33.4mmol)加入至4-({双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001404
烷-4-基]丙基]氨基}甲基)哌啶-1-甲酸(9H- 芴-9-基)甲酯，中间体119(2.81g，3.34mmol)的THF(40mL)搅拌溶液中。 将反应混合物在RT搅拌18小时，然后真空浓缩。将残留物用超声混悬于 Et2O(30mL)中，然后将所得混悬液过滤。将收集的固体用Et2O(20mL) 冲洗，然后真空干燥，得到白色固体(3.07g)。将粗固体样品(1.78g)通过C18(120g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-16％，1.5CV；16％，2.5CV；16- 39％，6CV；39-100％，1.5CV；100％2CV。将残留的粗固体物质通过C18 (120g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-14％，2CV；14％，2CV；14-17％， 1CV；17-55％，7CV；55-100％，1CV；100％，4CV。合并来自两支柱 的所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为灰白色固体(1.58g，67％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.33(s,2H),7.53-7.45(m,4H),7.41- 7.31(m,6H),5.53(m,2H),4.25(m,2H),4.02(m,2H),3.96(m,2H),3.89(m, 2H),3.74(m,2H),3.62(m,2H),3.30-3.20(m,2H),2.96-2.80(m,4H),2.78 -2.68(m,2H),2.65-2.58(m,2H),2.09-2.00(m,1H),1.92-1.68(m,2H), 1.33-1.18(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝619[MH+]，Rt＝0.73分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体121-(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基][(哌啶-4-基)甲基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001411
将(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001412
烷-4-基]丙基][(哌啶-4-基)甲基]氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001413
烷 -4-基]丙烷-1,2二醇；双(甲酸)，中间体120(1.52g，2.14mmol)在HCl水 溶液(2M，23mL，46mmol)中的溶液在RT搅拌4.5小时。将反应真空浓 缩，得到粘稠黄色胶状物(1.18g，基于93％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.32-4.21(m,2H),3.89-3.81(m,4H),3.81 -3.75(m,2H),3.72-3.59(m,4H),3.56-3.48(m,6H),3.39(m,2H),3.09(m, 2H),2.40-2.27(m,1H),2.21-2.13(m,1H),2.06-1.99(m,1H),1.66-1.53 (m,2H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝443[MH+]，Rt＝0.32分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体122-甲酸；(3R)-3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基- 2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001414
烷-4-基]丙基]氨基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001421
将2-甲基吡啶硼烷络合物(0.86g，8.05mmol)加入至(3R)-3-氨基吡咯 烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，2.68mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(2.88 g，10.7mmol)的MeOH(5mL)混悬液中。将混合物在60℃加热17小时。 使反应混合物冷却至RT，然后真空浓缩。将残留物在EtOAc(15mL)和水 (15mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水(15mL)和盐水(15mL)洗 涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将粗物质通过C18(60g，Ultra)快 速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-40％，10CV；40-100％，2CV；100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，然后将残留的水溶液冷冻干燥，得到产物， 为白色固体(1.39g，70％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD-d4)δ8.27(s,1H),7.47(dd,J＝7.2,2.3Hz, 4H),7.34(qd,J＝4.7,1.8Hz,6H),5.51(s,2H),4.24(dd,J＝10.6,5.4Hz,2H), 4.04(s,2H),3.95(td,J＝9.9,5.4Hz,2H),3.89(dd,J＝5.3,2.2Hz,2H),3.75 (dd,J＝9.4,2.2Hz,2H),3.69(d,J＝6.2Hz,1H),3.59(q,J＝11.4,11.0Hz,3H), 3.34-3.29(m,1H+CD3OD),3.24-3.15(m,1H),2.92(d,J＝48.5Hz,5H),1.96 (d,J＝31.5Hz,1H),1.75(s,1H),1.45(s,9H)。LC/MS(系统A)：m/z (ESI+)＝691[MH+]，Rt＝0.93分钟，UV纯度＝100％。
中间体123-(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基][(3R)-吡咯烷-3-基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001431
将甲酸；(3R)-3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001433
烷-4-基]丙基]氨基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，中间体122(1.39g，1.89 mmol)在HCl水溶液(2M，30mL，60mmol)中的混悬液在RT搅拌18小 时。将反应混合物真空浓缩，然后再溶于水(20mL)并且冷冻干燥，得到产 物，为乳膏状泡沫状物(1.11g，基于83％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.67(p,J＝8.4Hz,1H),4.33-4.28(m,2H), 3.99-3.92(m,1H),3.88(dd,J＝5.0,2.3Hz,2H),3.83(dd,J＝11.8,3.0Hz,2H), 3.81-3.76(m,2H),3.75-3.64(m,6H),3.63-3.58(m,2H),3.52-3.46(m,2H), 3.47-3.39(m,1H),2.75-2.67(m,1H),2.37-2.28(m,1H)。LC/MS(系统A)： m/z(ESI+)＝415[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度＝100％。
中间体124-甲酸；(3S)-3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基- 2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001434
烷-4-基]丙基]氨基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001432
将2-甲基吡啶硼烷络合物(861mg，8.05mmol)加入至(3S)-3-氨基吡咯 烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，2.68mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(2.88 g，10.7mmol)的MeOH(5mL)混悬液中。将所得混合物在60℃加热16 小时。使反应混合物冷却至RT，在EtOAc(20mL)和水(20mL)之间分配。 分离各相，然后将水相用EtOAc(20mL)萃取。将合并的有机相用水(20mL)和1:1水:盐水(20mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将粗物质 通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯 度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-40％，10CV；40-100％，2 CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为浅黄色泡沫状物(1.73g，87％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.25(s,1H),7.54-7.46(m,4H),7.41- 7.30(m,6H),5.54(s,2H),4.30-4.22(m,2H),4.14-4.07(m,2H),4.01-3.92 (m,2H),3.91(dd,J＝5.3,2.2Hz,2H),3.82-3.72(m,3H),3.68-3.53(m,3H), 3.41-3.33(m,1H),3.25-3.04(m,4H),3.04-2.89(m,2H),2.17-2.07(m, 1H),1.99-1.83(m,1H),1.56-1.36(m,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝691[MH+]，Rt＝0.93分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体125-(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基][(3S)-吡咯烷-3-基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001441
将甲酸；(3S)-3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001442
烷-4-基]丙基]氨基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，中间体124(1.72g，2.33 mmol)在HCl水溶液(2M，30mL，60mmol)和MeOH(1mL)中的混悬液 在RT搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩，然后再溶于水，并且冷冻干 燥，得到产物，为乳膏状泡沫状物(1.05g，92％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ4.72(p,J＝8.2Hz,1H),4.30(s,2H),3.98 -3.36(m,18H),2.76-2.66(m,1H),2.48-2.36(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝415[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体126-甲酸；N-[(1r,4r)-4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5- 羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001443
烷-4-基]丙基]氨基}环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001451
将2-甲基吡啶硼烷络合物(939mg，8.78mmol)加入至N-(4-氨基环己 基)氨基甲酸叔丁酯(627mg，2.93mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖 (3.14g，11.7mmol)的MeOH(6mL)混悬液中。将混合物在60℃加热16 小时，然后真空浓缩。将残留物在EtOAc(15mL)和水(15mL)之间分配。 分离各相，然后将有机相用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV； 10-40％，10CV；40-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真 空浓缩，然后将残留的水溶液冷冻干燥，得到产物，为白色固体(914mg， 41％产率)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),7.54-7.48(m,4H),7.44- 7.32(m,6H),5.56(s,2H),4.31-4.23(m,2H),4.18-4.06(m,2H),4.02-3.92 (m,4H),3.82-3.75(m,2H),3.64(t,J＝10.5Hz,2H),3.30-3.01(m,6H),2.00 -1.76(m,4H),1.56-1.39(m,10H),1.36-1.15(m,2H),1.09-0.97(m,1H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝719[MH+]，Rt＝2.29分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体127-(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基][(1r,4r)-4-氨基环己基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001461
将甲酸；N-[(1r,4r)-4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基 -1,3-二
Figure GDA0002817691790001463
烷-4-基]丙基]氨基}环己基]氨基甲酸叔丁酯，中间体126(910mg， 1.19mmol)在HCl水溶液(2M，20mL，40mmol)中的混悬液在RT搅拌 18小时。
将反应混合物真空浓缩，然后将残留物溶于水(20mL)，并且冷冻干燥， 得到产物，为乳膏状泡沫状物(718mg，基于85％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.19-4.09(m,2H),3.81-3.66(m,6H),3.63 -3.51(m,6H),3.39-3.14(m,4H),2.24-2.13(m,3H),2.11-2.04(m,1H), 1.87-1.76(m,1H),1.69-1.45(m,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝443[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体128-N-[(1s,4s)-4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}环己基]氨基甲酸(9H- 芴-9-基)甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001462
将氯甲酸9H-芴-9-基甲酯(4.04g，15.6mmol)的THF(30mL)溶液历 经5分钟滴加至冷却(0℃)的N-[(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基甲酸叔丁酯(3.35 g，15.6mmol)和碳酸钠水溶液(1M，30mL，30mmol)在THF(60mL)中 的混合物中。使反应温至RT，然后在RT搅拌16小时。将反应混合物用 水(100mL)稀释，然后用EtOAc(100mL)萃取。将有机相用水(100mL)和 盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，并且真空浓缩，得到产物，为浅 米色泡沫状物(6.71g，91％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92-7.83(m,2H),7.74-7.56(m,2H), 7.45-7.36(m,2H),7.36-7.28(m,2H),7.17(d,J＝5.4Hz,1H),6.70-6.58(m, 1H),4.44-4.19(m,3H),3.43-3.33(m,2H),1.65-1.21(m,17H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝459[M+Na+]，Rt＝1.35分钟，UV纯度 ＝93％。
中间体129-N-[(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸 盐的合成
Figure GDA0002817691790001471
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001472
烷溶液(4.0M，77mL，310mmol)加入至N-[(1s,4s)-4- {[(叔丁氧基)羰基]氨基}环己基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯，中间体128 (6.71g，15.4mmol)的二
Figure GDA0002817691790001473
烷(80mL)混悬液中。使反应在RT搅拌20小 时。
将反应混合物真空浓缩，得到产物，为白色固体(6.04g，92％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.95-7.81(m,5H),7.78-7.62(m,2H), 7.46-7.40(m,2H),7.36-7.32(m,2H),7.28-7.20(m,1H),4.36-4.16(m, 3H),3.54-3.44(m,1H),3.12-2.99(m,1H),1.86-1.41(m,8H)。估计的残 留溶剂：6.8wt％
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝337[MH+]，Rt＝0.90分钟，UV纯度＝94％。
中间体130-N-[(1s,4s)-4-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001474
烷-4-基]丙基][(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001475
烷-4-基]丙基]氨基}环己基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001481
将N-[(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐，中间体 129(4.70g，12.6mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(10.1g，37.8mmol) 的MeOH(100mL)溶液在RT搅拌0.5小时。加入NaCNBH3(3.17g，50.4 mmol)，然后将反应混合物在60℃加热4.5小时。加入另外的4,6-O-亚苄 基-D-吡喃葡萄糖(10.1g，37.8mmol)，然后将反应在60℃加热20小时。 加入另外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(10.1g，37.8mmol)，然后将反应 在60℃加热19小时。使反应冷却至RT，然后加入至饱和NaHCO3水溶 液(100mL)和EtOAc(100mL)中。将所得混悬液在RT搅拌2小时，然后 通过Celite垫过滤。用EtOAc(50mL)彻底洗涤垫，然后将滤液移至分液 漏斗。加入饱和NaHCO3水溶液(50mL)，然后分离各相。加入水(150mL) 至有机相中，将所得混合物在RT再搅拌1小时。将所得混合物移至分液 漏斗，然后分离各相。将有机相用水(150mL)和盐水(100mL)洗涤，然后 经Na2SO4干燥，并且真空浓缩，得到金色粘稠油状物(19.1g)。将粗物质 溶于回流的异丙醇(200mL)中。将混合物在回流下搅拌0.5小时，然后使 其冷却至RT。通过过滤收集固体，然后用IPA冲洗，并且真空干燥，得 到产物，为乳膏状固体(7.68g)。将所得固体样品(3.0g)通过C18(120g)快 速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：20％，2CV；20-50％，10CV；50-100％，2CV；100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为白色固体(1.46g，13％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.35(s,1H),7.85-7.77(m,2H),7.67- 7.58(m,2H),7.53-7.43(m,4H),7.41-7.26(m,10H),5.52(s,2H),4.58-4.35 (m,2H),4.31-4.23(m,2H),4.23-4.13(m,3H),4.00-3.89(m,4H),3.75(m, 2H),3.71-3.65(m,1H),3.62(m,2H),3.44-3.32(m,4H),1.89-1.26(m,8H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝841[MH+]，Rt＝1.09分钟，UV纯度＝99％。
中间体131-(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基 -1,3-二
Figure GDA0002817691790001492
烷-4-基]丙基][(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯 基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001493
烷-4-基]丙烷-1,2二醇；双(甲酸)的合成
Figure GDA0002817691790001491
将哌啶(615uL，6.23mmol)加入至N-[(1s,4s)-4-{[(2S,3R)-2,3-二羟基- 3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001494
烷-4-基]丙基][(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001495
烷-4-基]丙基]氨基}环己基]氨基甲酸(9H-芴- 9-基)甲酯，中间体130(1.46g，1.74mmol)的THF(10mL)溶液中。使反 应在RT搅拌21小时，然后真空浓缩。将残留物混悬于MeOH(10mL)， 然后过滤。将滤液真空浓缩，然后混悬于MeOH(5mL)中，并且过滤。将 滤液通过C18(60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下 列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-32％，7CV；32-40％， 1CV；12CV；40-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，然后真空 浓缩。将残留的水溶液冷冻干燥，得到产物，为白色固体(388mg，31％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.40(s,2H),7.51-7.43(m,4H),7.40- 7.28(m,6H),5.51(s,2H),4.29-4.20(m,2H),4.08-4.02(m,2H),4.00-3.92 (m,2H),3.88(dd,J＝5.0,2.5Hz,2H),3.72(dd,J＝9.3,2.5Hz,2H),3.61(t, J＝10.5Hz,2H),3.39-3.34(m,1H),3.07-2.89(m,5H),1.97-1.62(m,8H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝619[MH+]，Rt＝0.76分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体132-(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基][(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇的合成
Figure GDA0002817691790001501
将(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001502
烷-4-基]丙基][(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001503
烷-4-基]丙烷-1,2二醇；双(甲酸)，中间体131(385mg，0.622mmol)在 HCl水溶液(2M，6mL，12mmol)中的溶液在RT搅拌4小时，然后真空 浓缩。将所得油状物溶于水(10mL)中，然后冷冻干燥，得到白色泡沫状物 (323mg)。将所得物质溶于水/MeOH，然后加入至预先润湿的SCX柱(5g)。 柱用MeOH洗脱，然后通过用7M氨的MeOH溶液强力洗脱而释出产物。 将氨洗脱液真空浓缩。将残留物溶于水/MeCN中，然后冷冻干燥，得到产 物，为白色固体(212mg，77％)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.30-4.20(m,2H),3.90-3.62(m,12H), 3.57-3.49(m,1H),3.43-3.31(m,2H),2.21-2.09(m,3H),2.06-1.90(m, 4H),1.85-1.70(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝443[MH+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体133-甲酸；N-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2- 苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001504
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001511
将α-甲基吡啶硼烷(0.861g，8.05mmol)加入至N-(3-氨基丙基)-N-甲基 氨基甲酸叔丁酯(0.505g，2.68mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(2.88 g，10.7mmol)的MeOH(5mL)混悬液中。将混合物在60℃加热16小时。 使反应混合物冷却至RT，然后在EtOAc(20mL)和水(20mL)之间分配。 分离各相，然后将水相用EtOAc(20mL)萃取。将合并的有机相用水(20mL) 和1:1水:盐水(20mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将粗物质 通过C18(60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯 度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-40％，10CV；40-100％，2 CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为浅黄色 泡沫状物(1.19g，60％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.40(s,1H),7.57-7.44(m,4H),7.44- 7.32(m,6H),5.55(s,2H),4.31-4.23(m,2H),4.24-4.15(m,2H),4.00-3.90 (m,4H),3.79(dd,J＝9.4,2.2Hz,2H),3.64(t,J＝10.5Hz,2H),3.41-3.31(m, 3H),3.25-3.08(m,4H),2.76-2.64(m,3H),1.88-1.75(m,2H),1.50-1.39 (m,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝693[MH+]，Rt＝0.94分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体134-(2R,3R,4R,5S)-6-{[3-(甲基氨基)丙基][(2S,3R,4R,5R)- 2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001521
将甲酸；N-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001523
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯，中间体133(1.18g， 1.60mmol)在HCl水溶液(2M，30mL，60mmol)和MeOH(1mL)中的混 悬液在RT搅拌4小时，然后真空浓缩。将残留物溶于水(30mL)，然后冷 冻干燥，得到产物，为乳膏状泡沫状物(770mg，99％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ4.29-4.20(m,2H),3.96-3.86(m,2H), 3.83-3.77(m,2H),3.77-3.65(m,6H),3.63-3.39(m,6H),3.18-3.10(m, 2H),2.77(s,3H),2.28-2.18(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝417[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体135-甲酸；N-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2- 苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001524
烷-4-基]丙基]氨基}乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001522
将4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(10.05g，37.45mmol)加入至N-(2-氨基 乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.50g，9.36mmol)的MeOH(50mL)溶液中。将反 应在RT搅拌15分钟，然后加入AcOH(2.14mL，37.5mmol)。将反应在 RT再搅拌15分钟，然后历经5分钟分批加入NaCNBH3(2.35g，37.5 mmol)。将反应在RT搅拌16小时，然后历经15分钟滴加饱和NaHCO3水溶液(50mL)。加入另外的饱和NaHCO3水溶液(50mL)，然后加入EtOAc (50mL)。将反应在RT搅拌15分钟，然后移至分液漏斗。加入另外的 EtOAc(100mL)，然后分离各相。将水相用EtOAc(150mL)萃取，然后将 合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(4×200mL)和盐水(50mL)洗涤，然 后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩。将粗物质通过C18(400g，Ultra) 快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-49％，8CV；49-54％，0.5CV；54-100％，1CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，然后将残留的水溶液冷冻干燥，得到产物， 为白色固体(2.77g，42％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.34(s,1H),7.53-7.43(m,4H),7.40- 7.26(m,6H),5.52(s,2H),4.25(dd,J＝10.7,5.4Hz,2H),4.14(q,J＝5.7Hz, 2H),3.94(td,J＝10.0,5.4Hz,2H),3.89(dd,J＝5.0,2.3Hz,2H),3.75(dd,J＝9.4, 2.2Hz,2H),3.61(t,J＝10.5Hz,2H),3.26-2.99(m,8H),1.42(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝665[MH+]，Rt＝0.94分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体136-(2R,3R,4R,5S)-6-[(2-氨基乙基)[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6- 五羟基己基]氨基]己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001531
将甲酸；N-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001532
烷-4-基]丙基]氨基}乙基)氨基甲酸叔丁酯，中间体135(1.50g，2.11mmol) 在HCl水溶液(2M，21mL，42mmol)中的混悬液在RT搅拌68小时。将 反应真空浓缩，然后再溶于MeCN/水，并且真空浓缩。将残留物再溶于 MeCN/水中，然后冷冻干燥，得到产物，为白色固体(1.03g，99％，基于 94％估计纯度)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.30(dt,J＝8.9,4.7Hz,2H),3.88(dd,J＝4.9, 2.2Hz,2H),3.86-3.71(m,6H),3.71-3.66(m,4H),3.61-3.50(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝389[MH+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体137-N-[2-(2-{2-[2-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)乙氧基]乙 氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001541
在RT，历经2分钟分批加入NaHCO3(0.574g，6.84mmol)至N-[2- [2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.00g，3.42 mmol)在MeCN(15mL)和水(15mL)中的搅拌溶液中。历经30分钟滴加碳 酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯9H-芴-9-基甲酯(1.15g，3.42mmol)的MeCN (15mL)溶液。将所得溶液在RT搅拌18小时。加入EtOAc(30mL)和盐 水(10mL)，然后分离各相。将水相用EtOAc(20mL)萃取。将合并的有机 萃取物用盐水(45mL)洗涤，经MgSO4干燥，然后真空浓缩，得到产物， 为黄色胶状物(1.61g，76％产率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.72-7.61(m, 2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.37-7.27(m,3H),6.74(t,J＝5.4Hz,1H),4.29 (d,J＝6.9Hz,2H),4.21(t,J＝6.9Hz,1H),3.55-3.44(m,8H),3.40(t,J＝6.0 Hz,2H),3.36(t,J＝6.1Hz,2H),3.13(q,J＝5.9Hz,2H),3.05(q,J＝6.0Hz,2H), 1.36(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝537[M+Na+]，Rt＝1.28分钟，UV纯度 ＝83％。
中间体138-N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基甲酸 (9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001542
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001543
烷溶液(4M，2mL，8mmol)加入至N-[2-(2-{2-[2-({[(9H- 芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酸叔丁酯， 中间体137(83％，1.61g，2.61mmol)的MeCN(16mL)搅拌溶液中。将所 得溶液在RT搅拌22小时，然后真空浓缩，得到产物，为黄色胶状物(1.57 g，基于75％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.83(s,3H), 7.69(d,J＝7.4Hz,2H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H),7.37-7.29(m,3H),4.30(d, J＝6.9Hz,2H),4.21(t,J＝6.8Hz,1H),3.60-3.57(m,2H),3.56-3.48(m,8H), 3.40(t,J＝6.0Hz,2H),3.13(q,J＝5.9Hz,2H),2.98-2.92(m,2H)。20wt％残 留溶剂。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝415[MH+]，Rt＝0.89分钟，UV纯度＝92％。
中间体139-N-[(14S,15R)-12-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基- 2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001552
烷-4-基]丙基]-14,15-二羟基-15-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基- 1,3-二
Figure GDA0002817691790001553
烷-4-基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷-1-基]氨基甲酸(9H-芴-9-基) 甲酯；甲酸的合成
Figure GDA0002817691790001551
将AcOH(737μL，12.9mmol)加入至N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧 基]乙氧基}乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐，中间体138(75％，1.57 g，3.22mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(3.46g，12.9mmol)的MeOH (30mL)溶液中。将反应在RT搅拌45分钟。历经50分钟分批加入 NaCNBH3(809mg，12.9mmol)。将所得溶液在RT搅拌40小时。将反应 混合物用4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.73g，6.45mmol)、AcOH(368μL， 6.43mmol)和MeOH(10mL)处理。将反应在RT搅拌1小时，然后历经 20分钟分批加入NaCNBH3(403mg，6.41mmol)。加入MeOH(10mL)， 然后将反应混合物在RT搅拌70小时。历经5分钟分批加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)，然后加入EtOAc(100mL)。分离各相，然后将水相用 EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)、 盐水(50mL)洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤并且真空浓缩，产生棕色胶 状物(3.86g)。将部分(2g)粗物质通过C18(120g，Ultra)快速柱色谱纯化。 柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％， 2CV；10-31％，8CV；31％，4.5CV；31-35％，1.5CV；35-47％，1CV； 47-61％，1.5CV；100％，2CV。将残留的粗物质通过C18(120g，Ultra) 快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-27％，4CV；27％，0.5CV；27-68％，9CV； 68％，0.5CV；68-78％，2CV；78-100％，1.5CV；100％，1CV。合并 来自两支柱的所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为淡棕色树脂状物(1.30 g，48％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.44(s,1H),7.81(d,J＝7.5Hz,2H),7.68 -7.59(m,2H),7.52-7.44(m,4H),7.44-7.37(m,2H),7.37-7.30(m,8H), 5.52(s,2H),4.36(d,J＝6.8Hz,2H),4.28-4.15(m,5H),3.98-3.88(m,4H), 3.75(dd,J＝9.4,2.3Hz,2H),3.67-3.44(m,14H),3.40-3.33(m,4H),3.31- 3.21(m,4H)。LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝919[MH+]，Rt＝1.02分钟，UV 纯度＝93％。
中间体140-(14S,15R)-1-氨基-12-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟 基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001565
烷-4-基]丙基]-15-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001566
烷- 4-基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷-14,15-二醇；双(甲酸)的合成
Figure GDA0002817691790001561
将哌啶(1.34mL，13.6mmol)加入至N-[(14S,15R)-12-[(2S,3R)-2,3-二羟 基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001564
烷-4-基]丙基]-14,15-二羟基-15- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001572
烷-4-基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷-1- 基]氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯；甲酸，中间体139(93％，1.25g，1.20mmol) 的THF(15mL)搅拌溶液中。将所得溶液在RT搅拌6小时，然后真空浓 缩。将所得残留物用超声混悬于Et2O(10mL)。倾析出上清液，然后再用 Et2O(10mL)重复操作。将所得残留物通过C18(120g，Ultra)快速柱色谱 纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 10％，2CV；10-13％，1.5CV；13％，2.5CV；13-22％，5.5CV；22-60％， 5.5CV；60-83％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩， 得到产物，为黄色固体(849mg，89％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.40(s,2H),7.54-7.43(m,4H),7.41- 7.28(m,6H),5.53(s,2H),4.26(dd,J＝10.7,5.4Hz,2H),4.20-4.12(m,2H), 3.97-3.87(m,4H),3.74(dd,J＝9.4,2.6Hz,2H),3.70-3.54(m,14H),3.29- 3.19(m,3H),3.16-3.08(m,2H),3.07-2.99(m,1H),2.98-2.86(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝697[MH+]，Rt＝0.74分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体141-(14S,15R,16R,17R)-1-氨基-12-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五 羟基己基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十八烷-14,15,16,17,18-五醇二盐酸盐的合 成
Figure GDA0002817691790001571
将(14S,15R)-1-氨基-12-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001573
烷-4-基]丙基]-15-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001574
烷-4-基]-3,6,9- 三氧杂-12-氮杂十五烷-14,15-二醇；双(甲酸)，中间体140(845mg，1.07 mmol)在HCl水溶液(2M，10mL，20mmol)中的溶液在RT搅拌5.5小 时，然后真空浓缩。将所得残留物再溶于水(15mL)中，然后冷冻干燥，得 到浅黄色胶状物(660mg，基于96％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.30-4.22(m,2H),3.96-3.91(m,2H),3.88 -3.82(m,4H),3.81-3.63(m,17H),3.59-3.48(m,5H),3.26-3.20(m,2H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝521[MH+]，Rt＝0.33分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体142-N-[2-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001581
将二碳酸二-叔丁酯(3.93g，18.0mmol)加入至冷却(0℃)的2-(4-溴苯 基)乙胺(3.00g，15.0mmol)的THF(20mL)搅拌溶液中。将所得溶液温至 RT，然后在RT搅拌18小时。将反应混合物在EtOAc(30mL)和饱和 NaHCO3水溶液(50mL)之间分配。分离各相，然后将水相用EtOAc(15mL) 萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，然后真空浓 缩。将粗物质溶于最少体积的CH2Cl2中，预先吸附在二氧化硅上，然后通 过二氧化硅柱(25g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，用下列梯度洗脱 (％EtOAc，柱体积)：0％，1CV；0-8％，2.5CV；8-12％，1CV；12％， 3.5CV；12-27％，5.5CV；27-30％，0.5CV；30％，2CV；30-90％，4CV； 100％，1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为白色固体(3.99 g，88％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.50-7.42(m,2H),7.19-7.11(m,2H), 6.86(t,J＝5.3Hz,1H),3.12(q,J＝6.6Hz,2H),2.70-2.63(m,2H),1.41-1.26 (m,9H)。
LC/MS(系统A)：Rt＝1.27分钟，UV纯度＝99％。
中间体143-N-{2-[4’-(氰基甲基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁 酯的合成
Figure GDA0002817691790001582
将N-[2-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体142(4.09g，13.6 mmol)、[4-氰基甲基)苯基]硼酸(2.63g，16.4mmol)和K2CO3(5.65g，40.9 mmol)在1,4-二
Figure GDA0002817691790001591
烷(105mL)中的混合物通过用氮气流鼓入通过混合物脱 气5分钟。加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(445mg，0.545mmol)，并且再继续 脱气5分钟。将反应混合物在80℃加热15小时，然后在100℃加热7小 时。使反应冷却至RT，然后再用K2CO3(3.76g，27.2mmol)处理并且脱气 5分钟。加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(445mg，0.545mmol)，然后将混合物再 脱气5分钟。将所得混合物在100℃加热24小时，然后使其冷却至RT。 将反应再用K2CO3(1.88g，13.6mmol)和[4-氰基甲基)苯基]硼酸(0.88g， 5.5mmol)处理，然后脱气10分钟。加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(445mg，0.545mmol)，然后将混合物再脱气5分钟。将反应在100℃加热18小时， 然后使其冷却至RT。将反应混合物过滤，然后将收集的固体用EtOAc(50 mL)洗涤。将合并的滤液真空浓缩。将残留物再溶于EtOAc:庚烷(1:1)，然 后通过二氧化硅垫过滤。将垫用EtOAc:庚烷(1:1，200mL)冲洗。将滤液 真空浓缩，得到灰白色固体(3.94g)。再用EtOAc(200mL)彻底冲洗二氧化 硅垫，得到棕色固体(1.68g)。将来自EtOAc滤液的棕色固体预先吸附在 二氧化硅上，然后通过二氧化硅柱(50g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚 烷，用下列梯度洗脱(％EtOAc，柱体积)：0％，1CV；0-30％，11CV； 30％，20CV；30-45％，4.5CV；45％，7.5CV；45-50％，1CV；50％，15CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到灰白色固体(1.00g，21％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.59(d,J＝8.2 Hz,2H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),7.28(d,J＝8.1Hz,2H),6.90(t,J＝5.5Hz,1H), 4.07(s,2H),3.17(q,J＝6.5Hz,2H),2.73(t,J＝7.4Hz,2H),1.44-1.29(m,9H)。
LC/MS(系统A)：Rt＝1.27分钟，UV纯度＝97％。
中间体144-N-{2-[4’-(2-氨基乙基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}氨基甲酸叔 丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001601
将N-{2-[4’-(氰基甲基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯，中间体 143(570mg，1.69mmol)、氨水溶液(35％，0.5mL)和Raney镍的含水浆 液(50％，2mL)在EtOH(15mL)和DMF(5mL)中的混合物在氢气氛下搅 拌18小时。将反应混合物通过Celite垫过滤。将垫用EtOH(50mL)和 MeOH(100mL)冲洗，然后将合并的滤液真空浓缩。将残留物与庚烷共沸 (3×100mL)，然后真空干燥，得到产物，为灰白色固体(515mg，84％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.60-7.50(m,4H),7.31-7.22(m,4H), 6.89(t,J＝5.3Hz,1H),3.19-3.13(m,2H),2.78(t,J＝7.2Hz,2H),2.72(t,J＝7.4 Hz,2H),2.66(t,J＝7.2Hz,2H),1.43-1.29(m,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝341[MH+]，Rt＝0.93分钟，UV纯度＝94％。
中间体145-N-{2-[4’-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2- 苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001603
烷-4-基]丙基]氨基}乙基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}氨基甲酸叔 丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001602
将AcOH(0.33mL，5.8mmol)加入至N-{2-[4’-(2-氨基乙基)-[1,1’-联 苯]-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯，中间体144(94％，515mg，1.42mmol)和 4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.58g，5.89mmol)的MeOH(50mL)溶液中。 使反应在RT搅拌50分钟，然后历经25分钟分批加入NaCNBH3(370mg， 5.89mmol)。将所得溶液在RT搅拌24小时。加入另外的4,6-O-亚苄基-D- 吡喃葡萄糖(790mg，2.94mmol)、AcOH(0.17mL，3.0mmol)和MeOH(50 mL)，然后使反应在RT搅拌40分钟。历经20分钟分批加入NaCNBH3 (185mg，2.94mmol)，然后使反应在RT搅拌68小时。加入另外的4,6-O- 亚苄基-D-吡喃葡萄糖(790mg，2.94mmol)、AcOH(0.17mL，3.0mmol)和 MeOH(50mL)，然后使反应在RT搅拌30分钟。历经20分钟分批加入 NaCNBH3(185mg，2.94mmol)，然后使反应在RT搅拌18小时。加入另 外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(790mg，2.94mmol)和MeOH(25mL)， 然后将反应在40℃加热18小时。使反应混合物冷却至RT，然后历经15 分钟分批加入饱和NaHCO3水溶液(40mL)。将所得混合物在RT搅拌30 分钟，然后通过过滤收集固体，用水(10mL)冲洗，然后真空干燥。将所得 粗固体物质通过C18(120g)快速柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+0.1％NH4OH，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2 CV；10-59％，10CV；59％，2CV；59-100％，8CV；100％，2CV。合 并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为白色固体(932mg，78％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.57-7.49(m,2H),7.46-7.37(m,6H), 7.34-7.29(m,6H),7.28-7.23(m,2H),7.09-7.01(m,2H),6.90(t,J＝5.6Hz, 1H),5.48(s,2H),5.14(d,J＝5.8Hz,2H),4.50-4.40(m,4H),4.12(dd,J＝10.5, 5.3Hz,2H),3.87-3.75(m,4H),3.75-3.69(m,2H),3.67-3.60(m,2H),3.50 (t,J＝10.4Hz,2H),3.21-3.10(m,2H),2.82-2.65(m,8H),2.57(dd,J＝12.9, 8.9Hz,2H),1.43-1.29(m,9H)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝845[MH+]，Rt＝4.80分钟，UV纯度＝100％。
中间体146-(2R,3R,4R,5S)-6-({2-[4’-(2-氨基乙基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐 的合成
Figure GDA0002817691790001611
将N-{2-[4’-(2-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001622
烷-4-基]丙基]氨基}乙基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯，中间 体145(932mg，1.10mmol)在HCl水溶液(2M，8.5mL，17mmol)中的混 悬液在RT搅拌24小时，然后加入另外的HCl水溶液(2M，8.5mL，17 mmol)。使反应在RT再搅拌24小时。将反应混合物再在40℃加热4小 时，然后真空浓缩。将所得残留物溶于水(15mL)，然后冷冻干燥，得到产 物，为白色树脂状物(753mg，基于94％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ7.77-7.70(m,4H),7.53-7.48(m,2H),7.48 -7.43(m,2H),4.30-4.19(m,2H),3.87-3.61(m,12H),3.61-3.45(m,4H), 3.33(t,J＝7.4Hz,2H),3.29-3.16(m,2H),3.07(t,J＝7.4Hz,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝569[MH+]，Rt＝0.15分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体147-(2S)-2-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基} 丁酸的合成
Figure GDA0002817691790001621
将NaHCO3(3.13g，37.3mmol)加入至(2S)-4-氨基-2-{[(苄基氧基)羰基] 氨基}丁酸(4.70g，18.6mmol)在THF(50mL)和水(50mL)中的溶液中。将 反应在RT搅拌5分钟，然后历经10分钟滴加二碳酸二-叔丁酯(4.88g， 22.4mmol)的THF(50mL)溶液。将反应在RT搅拌16小时，然后真空浓 缩以除去大部分THF。将残留的水溶液通过滴加入2M HCl水溶液酸化 至pH 2，然后用EtOAc(100mL，然后50mL)萃取。将合并的有机相用 水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩， 得到产物，为无色油状物(6.65g，98％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H), 7.41-7.24(m,5H),6.87-6.76(m,1H),5.03(s,2H),4.00-3.92(m,1H),3.06 -2.90(m,2H),1.92-1.77(m,1H),1.71-1.59(m,1H),1.37(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝375[M+Na+]，Rt＝1.06分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体148-N-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-3-氨基甲酰基丙基]氨 基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001631
滴加氯甲酸异丁酯(2.94mL，22.7mmol)至冷却(0°)的(2S)-2-{[(苄基氧 基)羰基]氨基}-4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丁酸，中间体147(6.15g，17.5 mmol)和N-甲基吗啉(2.88mL，26.2mmol)的THF(100mL)溶液中。使反 应温至RT，然后在RT搅拌17小时。将溶液冷却至0℃，然后历经5分 钟滴加氨的MeOH溶液(7M，12mL，84mmol)。使反应混合物温至RT， 然后在RT搅拌3小时。将所得混悬液过滤，然后将滤液真空浓缩。将残 留物在EtOAc(200mL)和饱和NaHCO3水溶液(100mL)之间分配。分离各 相，然后将有机层用水(50mL)洗涤。将有机相经真空浓缩，得到灰白色固 体。将所得固体混悬于MeCN(50mL)，然后过滤。将固体真空干燥，得 到产物，为白色固体(2.56g，40％)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.42-7.24(m,7H),7.08-6.97(m,1H), 6.80-6.68(m,1H),5.09-4.92(m,2H),3.98-3.86(m,1H),3.03-2.88(m, 2H),1.82-1.68(m,1H),1.67-1.54(m,1H),1.44-1.30(m,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝374[M+Na+]，Rt＝1.52分钟，UV纯度 ＝97％。
中间体149-N-[(3S)-3-氨基-3-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯的合 成
Figure GDA0002817691790001632
将N-[(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-3-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁 酯，中间体148(2.06g，5.85mmol)和10％Pd/C(50％湿，0.31g)(50％湿) 在THF(12mL)和EtOH(12mL)中的混合物在氢气氛下搅拌18小时。将 反应通过玻璃纤维滤纸过滤，然后真空浓缩，得到产物，为白色固体(1.27 g，定量)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.26(s,1H),6.91(s,1H),6.83-6.69 (m,1H),3.11-2.92(m,3H),1.80-1.59(m,3H),1.46-1.32(m,10H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝218[MH+]。
中间体150-N-[(3S)-3-[(3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)氨基]-3-氨基 甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001641
历经5分钟分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.37g，11.2mmol)至N- [(3S)-3-氨基-3-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体149(1.62g，7.46 mmol)和N-(3-氧代丙基)氨基甲酸苄基酯(1.55g，7.46mmol)的THF(40mL) 溶液中。将反应在RT搅拌16小时，然后加入水(50mL)。将混合物用 EtOAc(4×50mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3水溶液(2×50mL) 和盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩，得到产物， 为无色油状物(2.89g，85％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.39-7.22(m,5H),5.06(s,2H),3.25- 3.06(m,5H),2.69-2.45(m,2H),1.85-1.61(m,4H),1.42(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝409[MH+]，Rt＝0.87分钟，UV纯度＝90％。
中间体151-N-(3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)-N-[(1S)-3-{[(叔丁氧基) 羰基]氨基}-1-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001642
历经5分钟滴加二碳酸二-叔丁酯(1.85g，8.49mmol)的THF(10mL) 溶液至N-[(3S)-3-[(3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)氨基]-3-氨基甲酰基丙基] 氨基甲酸叔丁酯，中间体150(2.89g，7.07mmol))和三乙胺(1.47mL，10.6 mmol)的THF(30mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌16小时，然后真 空浓缩。将所得油状物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配。分离各相， 然后将有机相用饱和NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(20mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩。将所得粗物质通过二氧化硅柱(50g)快 速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH，以15CV，线性梯度从100:0上升至 92:8洗脱。合并所需级分，并且真空浓缩。将所得物质再通过C18(120g) 快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：5％，2CV；5-100％，20CV；100％，2CV。合并所需级分，并 且真空浓缩，得到产物，为橙色油状物(0.42g，12％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.42-7.28(m,5H),7.27-6.96(m,3H), 6.92-6.61(m,1H),5.08-4.93(m,2H),4.43-3.93(m,1H),3.21-2.78(m, 6H),2.03-1.52(m,4H),1.46-1.30(m,18H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝509[MH+]，Rt＝1.16分钟，UV纯度＝95％。
中间体152-N-(3-氨基丙基)-N-[(1S)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-氨基 甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001651
将N-(3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}丙基)-N-[(1S)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨 基}-1-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体151(780mg，1.47mmol) 和10％Pd/C(50％湿，80mg)在EtOH(20mL)中的混合物在氢气氛在RT 搅拌40小时。将反应混合物通过玻璃纤维滤纸过滤，然后真空浓缩，得到 产物，为白色泡沫状物(580mg，基于95％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.19(s,1H),7.01(s,1H),6.89-6.66 (m,1H),4.40-3.85(m,1H),3.18-2.83(m,5H),2.49-2.37(m,2H+溶剂), 2.05-1.82(m,1H),1.74-1.30(m,22H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝375[MH+]，Rt＝0.80分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体153-甲酸；N-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2- 苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001662
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)-N-[(1S)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}- 1-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001661
将4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(1.60g，5.96mmol)加入至N-(3-氨基丙 基)-N-[(1S)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-氨基甲酰基丙基]氨基甲酸叔丁酯， 中间体152(0.558g，1.49mmol)的MeOH(25mL)溶液中。将反应混合物 在RT搅拌15分钟，然后加入AcOH(0.341mL，5.96mmol)。将反应混 合物在RT再搅拌15分钟，然后历经5分钟分批加入NaCNBH3(0.375g， 5.96mmol)。将反应混合物在RT搅拌64小时。反应再用4,6-O-亚苄基-D- 吡喃葡萄糖(1.6g，5.96mmol)处理，并且再在RT搅拌24小时。历经5分 钟滴加饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)。加入EtOAc(20mL)，然后将所得混 合物在RT搅拌15分钟。分离各相，然后将有机相用饱和碳酸氢钠水溶液 (4×50mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓 缩。将粗物质通过C18(120g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲 酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-46％，8CV； 46-52％，1CV；52％，2CV；52-97，2CV。合并所需级分，并且真空浓 缩，得到产物，为白色固体(690mg，50％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.39(s,1H),7.54-7.42(m,4H),7.41- 7.26(m,6H),5.59-5.47(m,2H),4.33-4.13(m,4H),4.02-3.87(m,5H),3.81 -3.70(m,2H),3.67-3.55(m,2H),3.42-3.34(m,6H+溶剂),3.20-2.99(m, 4H),1.98-1.78(m,4H),1.52-1.33(m,18H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝879[MH+]，Rt＝0.95分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体154-(2S)-4-氨基-2-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]丁酰胺三盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001671
将甲酸；N-(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001672
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)-N-[(1S)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-氨基甲酰 基丙基]氨基甲酸叔丁酯，中间体153(690mg，0.746mmol)在HCl水溶液 (2.0M，7.5mL，15mmol)中的混悬液在RT搅拌16小时。将反应混合物 真空浓缩。将残留物溶于MeCN/水，然后冷冻干燥，得到产物，为白色固 体(500mg，基于91％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ4.31-4.21(m,2H),4.15-4.08(m,1H),3.91 -3.74(m,6H),3.73-3.61(m,4H),3.58-3.42(m,6H),3.29-3.10(m,4H), 2.43-2.20(m,4H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝503[MH+]，Rt＝0.13分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体155-4-[4-(4-氨基丁基)苯基]-2-[(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001673
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)氨基]丁酰胺；四 (乙酸)的合成
Figure GDA0002817691790001681
中间体155根据文献方法(WO2014/099673 A1)合成。
中间体156-4-[4-(4-氨基丁基)苯基]-2-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]丁酰胺三盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001682
将4-[4-(4-氨基丁基)苯基]-2-[(3-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001683
烷-4-基]丙基]氨基}丙基)氨基]丁酰胺；四(乙酸)，中 间体155(96％，140mg，0.13mmol)在HCl水溶液(2M，5mL，10mmol) 中的溶液在RT搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，然后冷冻干燥，得 到产物，为米白色固体(107mg，基于88％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.22-7.14(m,4H),4.27-4.18(m,2H), 4.06-3.99(m,1H),3.91-3.85(m,2H),3.83-3.75(m,2H),3.75-3.63(m, 6H),3.63-3.39(m,6H),3.23-3.08(m,2H),2.96-2.88(m,2H),2.76-2.60 (m,4H),2.39-2.13(m,4H),1.75-1.62(m,4H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝635[MH+]，Rt＝0.16分钟，ELS纯度 ＝100％。
中间体157-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑 -6-甲酸叔丁酯的合成
Figure GDA0002817691790001691
将N,N-二甲基甲酰胺二-叔丁基缩醛(3.00mL，12.5mmol)加入至2- ({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸，中间体78 (1.00g，3.13mmol)的甲苯(10mL)混悬液中。将反应在80℃加热2小时， 然后使其冷却至RT。加入N,N-二甲基甲酰胺二-叔丁基缩醛(3.00mL，12.5 mmol)，然后将反应在80℃加热16小时。加入N,N-二甲基甲酰胺二-叔丁 基缩醛(3.00mL，12.5mmol)，然后将反应在100℃加热6小时，然后使 其冷却至RT。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，然后用水(2×20mL)、 饱和NaHCO3水溶液(2×20mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥， 并且真空浓缩，产生橙色固体(1.6g)。将粗物质通过二氧化硅柱(25g)快速 柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，用下列梯度洗脱(％EtOAc，柱体积)：0％， 3CV；0-53％，10.5CV；53％，4.5CV；53-100％，9.5CV。合并所需级 分，并且蒸发，得到产物，为灰白色固体(460mg，37％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.08-8.05(m,1H),7.76(dd,J＝8.4, 1.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.51(t,J＝5.4Hz,1H),4.46(d,J＝5.8Hz, 2H),4.33(q,J＝7.2Hz,2H),1.57(s,9H),1.45-1.23(m,12H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝376[MH+]，Rt＝1.14分钟，UV纯度＝94％。
中间体158-6-[(叔丁氧基)羰基]-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001692
将碘乙烷(219μL，2.67mmol)加入至2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)- 1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸叔丁酯，中间体157(250mg，0.670mmol) 的MeCN(2.5mL)混悬液中。将反应在120℃微波照射下加热2小时。在 另一个瓶中，加入碘乙烷(175μL，2.14mmol)至2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基} 甲基)-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-6-甲酸叔丁酯，中间体157(200mg，0.532 mmol)的MeCN(2mL)混悬液中。将所得混合物在120℃微波照射下加热 2小时。合并两个反应，然后真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(25g)快 速柱色谱纯化。柱用MeOH:CH2Cl2，以12CV，线性梯度从0:100上升至 8:92洗脱。合并所需级分，并且蒸发，得到粉色泡沫状物(550mg)。将所 得物质再通过二氧化硅柱(25g)快速柱色谱纯化。柱用MeOH:CH2Cl2，以 14CV，线性梯度从0:100上升至5:95洗脱。合并所需级分，并且蒸发， 得到产物，为粉色泡沫状物(240mg，38％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),8.18(s,2H),8.01(t,J＝5.2 Hz,1H),4.81(d,J＝5.3Hz,2H),4.71(q,J＝7.2Hz,2H),4.64(q,J＝7.2Hz,2H), 1.61(s,9H),1.51-1.18(m,15H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝404[M+]，Rt＝2.56分钟，UV纯度＝100％。
中间体159-2-(氨基甲基)-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐 酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001701
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001702
烷溶液(4.0M，1.1mL，4.4mmol)加入至6-[(叔丁氧基) 羰基]-2-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}甲基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘 化物，中间体158(465mg，0.870mmol)的MeCN(5mL)溶液中。将反应 在RT搅拌16小时。加入HCl的二
Figure GDA0002817691790001703
烷溶液(4.0M，0.20mL，0.80mmol)， 然后使反应在RT搅拌24小时。将反应混合物真空浓缩，然后与MeCN 共沸(2×10mL)。将残留物混悬于MeCN(5mL)，然后过滤，并且真空干 燥，得到产物，为深棕色固体(335mg，基于84％估计纯度定量)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.24-8.50(m,4H),8.32-8.21(m, 2H),4.88-4.66(m,6H),1.56-1.41(m,6H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝248[M+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度＝100％。
中间体160-3-氨基-5-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001711
历经10分钟分批加入在矿物油中的NaH分散体(60％，458mg，11.5 mmol)至冷却(0℃)的3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体2 (2.00g，10.4mmol)在DMF(30mL)中的混合物中。将所得混合物在0℃ 搅拌20分钟，然后历经3分钟滴加2-(氯甲氧基)乙基-三甲基-硅烷(2.21 mL，12.5mmol)的DMF(5mL)溶液。将所得反应混合物在0℃搅拌15分 钟，然后加入水(100mL)。将混合物用EtOAc(100mL)萃取，然后将有机 相用水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓 缩。将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷， 用下列梯度洗脱(％EtOAc，柱体积)：0％，1CV；0-60％，10CV；60-100％， 1.5CV；100％，1CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为黄色固体 (1.87g，56％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.67(d,J＝3.9Hz,1H),7.24(s,2H), 6.53(d,J＝3.9Hz,1H),5.42(s,2H),3.85(s,3H),3.52-3.47(m,2H),0.85- 0.79(m,2H)、-0.07--0.11(m,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝323[MH+]，Rt＝1.21分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体161-3-氨基-7-溴-5-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-5H-吡 咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001721
历经5分钟分批加入NBS(0.773g，4.34mmol)至冷却(0℃)的3-氨基 -5-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯， 中间体160(1.56g，4.82mmol)的MeCN(30mL)溶液中。将所得混合物在 0℃搅拌50分钟。加入另外的NBS(0.100g，0.562mmol)，然后将反应在 0℃再搅拌90分钟。将反应混合物在EtOAc(100mL)和水(100mL)之间 分配。分离各相，然后将有机相用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后 经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快速柱色 谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，用下列梯度洗脱(％EtOAc，柱体积)：0％，1 CV；0-44％，7CV。合并所需级分，并且蒸发。将所得物质再通过C18(120 g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-76％，18CV；76-96％，2CV。合并所需级分， 并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(584mg，30％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(s,1H),7.42(s,2H),5.40(s,2H), 3.88(s,3H),3.54-3.48(m,2H),0.86-0.80(m,2H)、-0.08(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝401[M(79Br)H+]，403[M(81Br)H+]， Rt＝1.33分钟，UV纯度＝100％。
中间体162-3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001722
将TFA(2.97mL，38.9mmol)加入至3-氨基-7-溴-5-{[2-(三甲基甲硅烷 基)乙氧基]甲基}-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体161(520mg， 1.30mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌2.5小时， 然后真空浓缩。将所得残留物溶于CH2Cl2:MeOH:NH4OH(2:1:0.5，5mL)， 然后在RT搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩。
将粗物质通过二氧化硅柱(100g)快速柱色谱纯化。柱用CH2Cl2:MeOH， 用下列梯度洗脱(％MeOH，柱体积)：0％，1CV；0-7.5％，9CV；7.5-100％， 0.5CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为黄/橙色固体(309mg， 83％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),7.72(s,1H),7.24(s,2H), 3.87(s,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝271[M(79Br)H+]，273[M(81Br)H+]， Rt＝0.89分钟，UV纯度＝94％。
中间体163-锂(1+)离子3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐 的合成
Figure GDA0002817691790001731
将LiOH水溶液(1.0M，2.7mL，2.7mmol)加入至3-氨基-7-溴-5H-吡 咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体162(361mg，1.33mmol)的MeOH(5 mL)混悬液中。将反应混合物在50℃搅拌2.5小时，然后使其冷却至RT。 将所得混悬液过滤。将收集的固体用水冲洗，然后抽吸干燥，得到黄色固 体(195mg)。将滤液真空浓缩，然后将残留物混悬于水(3mL)中。通过过滤 收集固体，与第一批固体合并，然后真空干燥，得到产物，为黄色固体(243 mg，67％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.45(s,1H),8.35-6.86(m,3H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝257[M(79Br)H+]，259[M(81Br)H+]， Rt＝0.82分钟，UV纯度＝96％。
中间体164-7-溴-2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺的合 成
Figure GDA0002817691790001741
将锂(1+)离子3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体163(243mg，0.924mmol)、CDI(300mg，1.85mmol)和咪唑盐酸盐(116mg， 1.11mmol)在DMF(3mL)中的混合物在RT搅拌1小时15分钟。加入另 外的CDI(100mg，0.617mmol)，然后使反应在RT再搅拌1小时。将反 应混合物用水(5mL)稀释，然后在RT搅拌10分钟。将所得混悬液过滤，然后将收集的固体用水(2×5mL)洗涤，然后真空干燥，得到产物，为黄色 固体(218mg，77％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.89-8.82(m,1H),8.03 -7.99(m,1H),7.86(s,1H),7.58(s,2H),7.13-7.09(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝307[M(79Br)H+]，309[M(81Br)H+]， Rt＝0.81分钟，ELS纯度＝100％。
中间体165-3-氨基-7-碘-5-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-5H-吡 咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001742
历经5分钟分批加入在矿物油中的NaH分散体(60％，240mg，6.00 mmol)至冷却(0℃)的3-氨基-7-碘-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间 体10(95％，1.82g，5.44mmol)的DMF(25mL)溶液中。将所得混合物在 0℃搅拌20分钟，然后历经5分钟滴加2-(氯甲氧基)乙基-三甲基-硅烷 (1.01mL，5.72mmol)的DMF(8mL)溶液。将反应混合物在0℃搅拌5分 钟，然后加入水(1mL)。将反应混合物真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅 柱(340g)快速柱色谱纯化。柱用EtOAc:庚烷，用下列梯度洗脱(％EtOAc， 柱体积)：0％，1CV；0-40％，6.5CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产 物，为黄色固体(1.85g，75％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.98(s,1H),7.47(s,2H),5.48(s,2H), 3.97(s,3H),3.62-3.56(m,2H),0.94-0.88(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝449[MH+]，Rt＝1.37分钟，UV纯度＝99％。
中间体166-3-氨基-7-氰基-5-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-5H- 吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯的合成
Figure GDA0002817691790001751
将脱气的二
Figure GDA0002817691790001752
烷(3mL)和水(3mL)加入至含3-氨基-7-碘-5-{[2-(三甲 基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸甲酯，中间体165 (316mg，0.705mmol)、亚铁氰化钾(149mg，0.353mmol)、Xphos(17mg， 0.035mmol)、XPhos Pd G3(30mg，0.035mmol)和KOAc(14mg，0.14 mmol)的烧瓶中。将所得混合物在100℃加热2小时20分钟，然后使其冷 却至RT。将反应混合物在水(20mL)和EtOAc(20mL)之间分配，然后分 离各相。将有机相用水(2×20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥 并且真空浓缩。将粗物质通过二氧化硅柱(25g)快速柱色谱纯化。柱用 EtOAc:庚烷，用下列梯度洗脱(％EtOAc，柱体积)：0％，1CV；0-60％， 10CV；60-100％，1.5CV。合并所需级分，并且蒸发，得到产物，为黄色固体(183mg，72％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),7.56(s,2H),5.47(s,2H), 3.90(s,3H),3.57-3.52(m,2H),0.88-0.79(m,2H)、-0.08(s,9H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝348[MH+]，Rt＝1.25分钟，UV纯度＝97％。
中间体167-4-[双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001753
烷-4-基]丙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯；甲酸的合成
Figure GDA0002817691790001761
将α-甲基吡啶硼烷络合物(0.801g，7.49mmol)加入至4-氨基哌啶-1- 甲酸叔丁酯(0.500g，2.50mmol)和4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(2.68g，9.99 mmol)的MeOH(5mL)混悬液中。将混合物在60℃加热18小时，然后使 其冷却至RT。将反应混合物真空浓缩，然后将残留物在EtOAc(15mL)和 水(15mL)之间分配。分离各相，然后将有机相用水(10mL)和盐水(10mL) 洗涤，然后经Na2SO4干燥并且真空浓缩。
将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲 酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-40％，10CV； 40-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，然后将残 留的水溶液冷冻干燥，得到产物，为白色固体(1.07g，57％)。
LC/MS(系统B)：m/z(ESI+)＝705[MH+]，Rt＝2.28分钟，ELS纯度 ＝100％
1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.42(s,1H),7.54-7.43(m,4H),7.40- 7.29(m,6H),5.53(m,2H),4.25(m,2H),4.14-3.89(m,8H),3.76(m,2H), 3.61(m,2H),3.27-2.96(m,5H),2.74-2.34(m,2H),1.86-1.74(m,2H),1.60 -1.40(m,10H),1.37-1.26(m,1H)。
中间体112(方法B)-(2R,3R,4R,5S)-6-[[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟 基己基]-(4-哌啶基)氨基]己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001771
将4-[双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001773
烷-4-基]丙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯；甲酸(290mg，0.38mmol)在HCl水溶 液(2M，10mL，20mmol)中的混悬液在RT搅拌3小时。将反应混合物 真空浓缩，得到产物，为黄色吸湿性固体(225mg)。因为有残留的水，因此 产率>100％。考虑残留的水而调节纯度为85％。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝429[MH+]，Rt＝0.14分钟，ELS纯度 ＝100％
1H NMR(500MHz,氧化氘)δ4.31-4.20(m,2H),4.09-3.97(m,1H), 3.92-3.74(m,6H),3.74-3.38(m,10H),3.25-3.13(m,2H),2.53-2.33(m, 2H),2.24-1.97(m,2H)。
中间体168-4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二
Figure GDA0002817691790001774
烷-4-基]丙基]氨基}哌啶-1-甲酸(9H-芴-9-基)甲酯；甲酸的合成
Figure GDA0002817691790001772
将4-氨基哌啶-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯盐酸盐(7.80g，21.7mmol)和4,6- O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(23.3g，86.9mmol)在MeOH(110mL)中的混合物 在RT搅拌0.5小时。加入NaCNBH3(5.46g，86.9mmol)，然后将反应在60℃加热。将反应在60℃搅拌18小时。在反应中加入另外的4,6-O-亚苄 基-D-吡喃葡萄糖(23.3g，86.9mmol)，然后在60℃再搅拌6小时。使反应 冷却至RT，然后加入至饱和NaHCO3水溶液(200mL)和EtOAc(200mL) 中。将所得混合物通过Celite垫过滤，然后将滤液移至分液漏斗。分离各 相，然后将有机相用盐水:水(1:1，2×200mL)、盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且真空浓缩。将残留物混悬于MeCN(200mL)和tBME(250 mL)中，过滤。将所得固体混悬于MeOH，然后过滤。将合并的滤液真空浓缩。将所得粗物质通过C18(400g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％ 甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：20％，1CV；20-50％，10CV； 50-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩以除去大部 分MeCN和一些水，然后将残留的水溶液冷冻干燥，得到产物，为灰白色 固体(12.6g，66％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.16(s,1H),7.90(d,J＝7.4Hz,2H), 7.64-7.54(m,2H),7.45-7.27(m,14H),5.46(s,2H),5.23-5.07(m,2H),4.88 -4.21(m,6H),4.13(dd,J＝10.5,5.3Hz,2H),4.02-3.67(m,9H),3.61(d, J＝9.2Hz,2H),3.50(t,J＝10.5Hz,2H),2.64-2.56(m,3H),2.42-2.31(m,2H), 1.69-1.51(m,2H),1.31-0.90(m,2H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝827[MH+]，Rt＝1.08分钟，UV纯度 ＝100％。
中间体111(方法B)-(1R,2S)-3-{[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟 基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001782
烷-4-基]丙基](哌啶-4-基)氨基}-1-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯 基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001783
烷-4-基]丙烷-1,2二醇的合成
Figure GDA0002817691790001781
将哌啶(9.01mL，91.2mmol)加入至4-{双[(2S,3R)-2,3-二羟基-3- [(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790001792
烷-4-基]丙基]氨基}哌啶-1-甲酸(9H-芴-9- 基)甲酯；甲酸，中间体112(12.6g，14.4mmol)的THF(150mL)溶液中。 使反应在RT搅拌16小时，然后真空浓缩。将粗固体物质混悬于MeOH (100mL)，然后加热至溶解。使溶液冷却，然后真空浓缩直到观察到固体 为止。将所得混悬液在RT搅拌15分钟，然后过滤。将滤液真空浓缩直到 观察到固体为止。将所得混悬液在RT搅拌15分钟，然后过滤。将滤液通 过C18(400g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％甲酸，用下列梯度 洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，1CV；10-25％，6CV；25％，2CV；25- 50％，1CV；50-100％，1CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空 浓缩以除去大部分溶剂。将所得残留溶液冷冻干燥，得到浅黄色固体(6.35 g)。将所得固体在EtOAc(100mL)和饱和NaHCO3水溶液(100mL)之间分 配。分离各相，然后将水相用CHCl3:IPA(2:1，100mL)和n-BuOH(2×100 mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，然后真空浓缩。将残留物溶于 1:2MeCN:水，然后冷冻干燥，得到产物，为白色固体(5.81g，67％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.48(dd,J＝7.5,2.0Hz,4H),7.38-7.28 (m,6H),5.50(s,2H),4.23(dd,J＝10.6,5.4Hz,2H),4.00-3.88(m,4H),3.85 (dd,J＝5.5,2.4Hz,2H),3.70(dd,J＝9.3,2.4Hz,2H),3.60(t,J＝10.5Hz,2H), 3.09-3.02(m,1H),3.00-2.91(m,1H),2.78(dd,J＝13.4,3.7Hz,2H),2.75- 2.65(m,1H),2.59(dd,J＝13.4,8.8Hz,2H),2.54-2.47(m,1H),2.37-2.28(m, 1H),1.81-1.70(m,2H),1.55-1.49(m,1H),1.42-1.35(m,1H)。
LC/MS(系统A)：m/z(ESI+)＝605[MH+]，Rt＝0.77分钟，UV纯度 ＝100％。
实施例化合物的合成
实施例1-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001791
将碘甲烷(26μL，0.42mmol)加入至3-氨基-N-[(1-乙基-1H-1,3-苯并二 唑-2-基)甲基]-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酰胺，中间体84(79％，35mg， 0.082mmol)的DMSO(1mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌48小时。 加入另外的碘甲烷(30μL，0.48mmol)，并且将反应在RT再搅拌48小时。 加入另外的碘甲烷(40μL，0.64mmol)，并且将反应在RT再搅拌72小时。将反应混合物用MeCN稀释至最终体积1.5mL，然后通过制备HPLC纯 化(方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(12mg， 36％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.59(s,1H),9.68(t,J＝5.3Hz,1H), 8.47(s,1H),8.10-7.98(m,2H),7.74-7.65(m,2H),7.51(d,J＝3.6Hz,1H), 7.19(s,2H),6.41(d,J＝3.7Hz,1H),5.05(d,J＝5.4Hz,2H),4.69(q,J＝7.2Hz, 2H),4.16(s,3H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝350[M+]，Rt＝1.46分钟，UV纯度＝98％。
实施例2-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-6-氟-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001801
将2-(氨基甲基)-1-乙基-6-氟-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐碘化 物，中间体19(182mg，0.489mmol)和DIPEA(170μL，0.98mmol)的DMF (1.5mL)溶液加入至锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中 间体3(90mg，0.49mmol)、HBTU(204mg，0.538mmol)和DIPEA(170 μl,0.98mmol)的DMF(0.5mL)溶液中。将反应在RT搅拌72小时，然后 真空浓缩。将所得粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-69％，13 CV；69-100％，2CV；100％，1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得 到绿/棕色固体(30mg)。将所得固体溶于2:1DMSO:MeCN，然后通过制备 HPLC纯化(方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固 体(11mg，6％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.51(s,1H),9.66(t,J＝5.3Hz,1H), 8.12-8.07(m,2H),7.62(td,J＝9.3,2.4Hz,1H),7.51(dd,J＝3.7,1.7Hz,1H), 7.20(s,2H),6.41(d,J＝3.6Hz,1H),5.02(d,J＝5.4Hz,2H),4.65(q,J＝7.2Hz, 2H),4.16(s,3H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝368[M+]，Rt＝1.48分钟，UV纯度＝99％。
实施例3-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- 氯-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001811
将锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(90mg，0.49mmol)、2-(氨基甲基)-6-氯-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物， 中间体22(172g，0.489mmol)、EDC.HCl(187mg，0.978mmol)和HOAt (66mg，0.49mmol)的DMF(2mL)混悬液在RT搅拌16小时，然后真空 浓缩。将粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲 酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，6CV；10-100％，20CV； 100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(38 mg，18％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),9.67(t,J＝5.3Hz,1H), 8.38(s,1H),8.32(d,J＝1.8Hz,1H),8.08(d,J＝8.9Hz,1H),7.76(dd,J＝8.9, 1.8Hz,1H),7.51(dd,J＝3.6,1.8Hz,1H),7.19(s,2H),6.40(d,J＝3.5Hz,1H), 5.03(d,J＝5.3Hz,2H),4.68(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(s,3H),1.37(t,J＝7.2Hz, 3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝384[M(35Cl)+]，386[M(37Cl)+]，Rt＝1.69 分钟，UV纯度＝100％。
实施例4-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成：
Figure GDA0002817691790001821
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(230mg，1.01mmol)和2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 碘化物，中间体25(350mg，1.01mmol)的DMF(3mL)混悬液在RT搅拌 16小时。将所得混悬液真空过滤。将所得固体用MeCN洗涤。将合并的滤 液真空浓缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN: 水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-20％， 5CV；20％1CV；20-25％，2CV；25-39％，1CV；39-100％，1CV；100％， 1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色粉末(173mg， 40％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),9.65(t,J＝5.3Hz,1H), 8.35(s,1H),7.92(d,J＝9.1Hz,1H),7.56(d,J＝2.2Hz,1H),7.50(dd,J＝3.7, 2.4Hz,1H),7.32-7.26(m,1H),7.20(s,2H),6.44-6.36(m,1H),5.00(d, J＝5.4Hz,2H),4.64(q,J＝7.1Hz,2H),4.12(s,3H),3.90(s,3H),1.37(t,J＝7.2 Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝380[M+]，Rt＝1.61分钟，UV纯度＝100％。
实施例5-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-3-甲基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001822
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(64mg，0.28mmol)和2-(氨基甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓盐酸盐碘化物，中间体28(94％，120mg，0.27mmol)的DMF(1mL) 溶液在RT搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，通过C18(12g)快速柱 色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-24％，4CV；24％，3CV；24-52％，6CV；52-100％，4 CV；100％3CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为橙色固体 (60mg，48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),9.68(t,J＝5.3Hz,1H), 8.62(s,1H),8.41(s,1H),8.28(d,J＝8.8Hz,1H),8.06(dd,J＝8.8,1.1Hz,1H), 7.51(dd,J＝3.7,1.8Hz,1H),7.19(s,2H),6.40(d,J＝3.6Hz,1H),5.08(d,J＝5.3 Hz,2H),4.79(q,J＝7.1Hz,2H),4.20(s,3H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝418[M+]，Rt＝1.84分钟，UV纯度＝100％。
实施例6-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-3-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001831
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(55mg，0.24mmol)和2-(氨基甲基)-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二唑 -3-鎓盐酸盐碘化物，中间体32(87％，105mg，0.209mmol)的DMF(1mL) 溶液在RT搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后通过C18(12g)快 速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱 体积)：5％，2CV；5-28％，5CV；28％，2CV；28-43％3CV；43-92％， 2CV；100％，3CV。合并所需级分，并且真空浓缩。将残留物混悬于MeCN (5mL)，然后过滤。滤液真空浓缩，然后通过C18(12g)快速柱色谱纯化。 柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2 CV；5-9％，1CV；9％1CV；9-23％，3CV；23％，4CV；23-32％1CV； 32-100％，2CV；100％2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物， 为棕色固体(38mg，38％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),9.69(t,J＝5.3Hz,1H), 8.50(s,1H),8.34-8.26(m,1H),8.19(d,J＝9.1Hz,1H),7.79-7.70(m,1H), 7.51(d,J＝3.8Hz,1H),7.20(s,2H),6.40(d,J＝3.8Hz,1H),5.05(d,J＝5.3Hz, 2H),4.72(q,J＝7.2Hz,2H),4.18(s,3H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝434[M+]，Rt＝1.97分钟，UV纯度＝100％。
实施例7-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3- 二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001841
将锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(40mg，0.22mmol)、2-(氨基甲基)-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化 物，中间体36(92％，78mg，0.20mmol)、EDC.HCl(83mg，0.43mmol) 和HOAt(30mg，0.22mmol)的DMF(1mL)混悬液在RT搅拌72小时， 然后真空浓缩。将粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，6CV；10-100％， 20CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为绿色 固体(52mg，58％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),9.69(t,J＝5.3Hz,1H), 8.40(s,1H),7.99-7.90(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.52-7.48(m,1H),7.32 -7.12(m,3H),6.40(d,J＝3.2Hz,1H),5.08-4.98(m,2H),4.65(q,J＝7.1Hz, 4H),3.90(s,3H),1.39(td,J＝7.1,1.6Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝394[M+]，Rt＝1.75分钟，UV纯度＝98％。
实施例8-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3- 苄基-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001842
将锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(90mg，0.49mmol)、2-(氨基甲基)-3-苄基-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴 化物，中间体38(56％，260mg，0.39mmol)、EDC.HCl(190mg，0.98mmol) 和HOAt(67mg，0.49mmol)的DMF(2mL)混悬液在RT搅拌5小时。加 入DMF(2mL)，然后将反应再搅拌16小时，然后真空浓缩。将粗物质溶 于2:1DMSO:MeCN，然后通过制备HPLC纯化(方法A)。合并所需级分， 并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(91mg，47％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.59(t,J＝5.4Hz,1H), 8.44(s,1H),7.64(d,J＝9.2Hz,1H),7.61(d,J＝2.3Hz,1H),7.49(dd,J＝3.7, 2.3Hz,1H),7.30-7.04(m,8H),6.36(dd,J＝3.7,1.3Hz,1H),5.91(s,2H), 5.13(d,J＝5.4Hz,2H),4.72(q,J＝7.2Hz,2H),3.90(s,3H),1.44(t,J＝7.2Hz, 3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝456[M+]，Rt＝2.13分钟，UV纯度＝100％。
实施例9-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合 成
Figure GDA0002817691790001851
将2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1H-1,3-苯 并二唑-3-鎓盐酸盐溴化物，中间体41(65％，165mg，0.272mmol)加入至 锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(50mg，0.27 mmol)、DIPEA(189μL，1.09mmol)和HBTU(134mg，0.353mmol)的 DMF(1mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌1.5小时，然后真空浓缩。 将粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用 下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-21％，7CV；21％， 1CV；21-31％，7CV；31-100％，6CV；100％，2CV。合并所需级分， 并且冷冻干燥，得到棕色固体(16mg)。将所得固体溶于2:1CH2Cl2/MeOH (5mL)中，然后与Dowex 1X2氯化物形式搅拌5分钟。通过过滤除去树脂 状物，然后用2:1CH2Cl2:MeOH冲洗。将滤液真空浓缩，得到产物，为黄/橙色固体(10mg，7％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.52(s,1H),9.56(t,J＝5.5Hz,1H), 7.89(d,J＝9.2Hz,1H),7.63(d,J＝2.3Hz,1H),7.51(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H), 7.27(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.17(s,2H),6.41(dd,J＝3.7,1.6Hz,1H),5.65(s, 2H),5.03(d,J＝5.5Hz,2H),4.77(q,J＝7.2Hz,2H),3.92(s,3H),3.37(s,3H), 1.47(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝438[M+]，Rt＝1.69分钟，UV纯度＝98％。
实施例10-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3- (甲酸根基(carboxylato)甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓的合 成
Figure GDA0002817691790001861
将1.0M LiOH水溶液(86μL，0.086mmol)加入至2-[({3-氨基-5H-吡 咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧代 乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例9(32mg，0.062mmol)的MeOH (0.5mL)溶液中。将所得溶液在RT搅拌15分钟。将反应混合物在氮气流 下浓缩。将残留物混悬于1:1DMSO:MeCN，然后通过注射器滤器过滤。 然后用MeOH彻底洗涤滤器。将合并的MeOH洗涤液浓缩成橙色油状物。 将所得粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-23％，6CV；23％， 1CV；23-29％，3CV；29-100％，5CV；100％，3CV。合并所需级分， 并且冷冻干燥，得到产物，为浅黄色固体(3mg，12％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.47(s,1H),9.53(t,J＝5.7Hz,1H), 7.91(d,J＝9.2Hz,1H),7.52(d,J＝2.3Hz,1H),7.48(dd,J＝3.8,2.1Hz,1H), 7.32-7.16(m,3H),6.36(dd,J＝3.8,1.5Hz,1H),4.97-4.91(m,4H),4.60(d, J＝7.4Hz,2H),3.89(s,3H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝424[MH+]，Rt＝1.56分钟，UV纯度 ＝100％。
实施例11-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3- (氨基甲酰基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790001871
将2-(氨基甲基)-3-(氨基甲酰基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二 唑-3-鎓盐酸盐溴化物，中间体43(78％，265mg，0.544mmol)加入至锂(1+) 离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(60mg，0.33mmol)、 DIPEA(230μL，1.3mmol)和HBTU(160mg，0.42mmol)的DMF(2mL) 溶液中。将所得混合物在RT搅拌16小时，然后真空浓缩成浓稠红色油状 物。将所得粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％ 甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-34％，13CV； 34-100％，6CV；100％，3CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物， 为浅棕色固体(36mg，21％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.50(s,1H),9.56(t,J＝5.5Hz,1H), 7.89(s,1H),7.80(d,J＝9.2Hz,1H),7.64-7.57(m,2H),7.50(dd,J＝3.7,2.4 Hz,1H),7.29(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.21(s,2H),6.39(dd,J＝3.7,1.5Hz, 1H),5.40(s,2H),4.99(d,J＝5.5Hz,2H),4.71(q,J＝7.1Hz,2H),3.91(s,3H), 1.40(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝423[M+]，Rt＝1.39分钟，UV纯度＝94％。
实施例12-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-6-甲氧基-3-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合 成
Figure GDA0002817691790001872
将2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并 二唑-3-鎓碘化物，中间体45(80％，370mg，0.73mmol)的DMF(1mL)溶 液加入至锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3(100 mg，0.54mmol)、DIPEA(380μL，2.2mmol)和HBTU(270mg，0.71mmol) 的DMF(1mL)溶液。将所得混合物在RT搅拌21小时，然后真空浓缩成 粘稠红色油状物。将粗物质溶于2:1DMSO:MeCN至最终体积1.5mL，然 后通过制备HPLC纯化(方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩成米白色 固体(47mg)。将所得物质混悬于CH2Cl2(2mL)。通过吸管从固体上倾析 出上清液。再重复研磨操作三次，然后将固体真空干燥，得到产物，为棕 色固体(23mg，7％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.52(s,1H),9.68(t,J＝5.4Hz,1H), 7.96(d,J＝9.2Hz,1H),7.57(d,J＝2.3Hz,1H),7.51(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H), 7.38-7.11(m,3H),6.40(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),5.07(d,J＝5.4Hz,2H),4.84 (t,J＝7.2Hz,2H),4.67(q,J＝7.1Hz,2H),3.91(s,3H),2.97(t,J＝7.2Hz,2H), 2.13(s,3H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝440[M+]，Rt＝1.96分钟，UV纯度＝96％。
实施例13-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-3-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001881
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(92％， 70mg，0.28mmol)和2-(氨基甲基)-1-乙基-3-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-1H-1,3- 苯并二唑-3-鎓盐酸盐溴化物，中间体47(125mg，0.341mmol)在DMF(2 mL)中的混合物在RT搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后将所得 固体用超声混悬于MeCN(5mL)。通过过滤收集固体，然后用MeCN(15 mL)洗涤，并且真空干燥，得到黄色固体(85mg)。将所得固体溶于DMSO， 然后通过制备HPLC纯化(方法A，分4次注射)。合并所需级分，并且真 空浓缩，得到产物，为黄色固体(43mg，33％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),9.63(t,J＝5.4Hz,1H), 8.52(s,1H),7.97(d,J＝9.2Hz,1H),7.55(d,J＝2.3Hz,1H),7.50(d,J＝3.8Hz, 1H),7.34-7.04(m,3H),6.39(d,J＝3.8Hz,1H),5.07(d,J＝5.4Hz,2H),4.79 (t,J＝4.9Hz,2H),4.65(q,J＝7.1Hz,2H),3.91(s,3H),3.80(t,J＝4.9Hz,2H), 1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝410[M+]，Rt＝1.51分钟，UV纯度＝99％。
实施例14-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 甲酸盐的合成：
Figure GDA0002817691790001891
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(92％， 200mg，0.806mmol)和2-(氨基甲基)-1-乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基] 乙基}-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体49(84％，554mg， 1.00mmol)在DMF(5mL)中的混合物在RT搅拌1.5小时。将反应混合物 真空浓缩，然后将粗物质通过C18(60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-36％， 17CV；36-100％，1CV；100％，3CV。合并所需级分，并且真空浓缩， 得到棕/黄色油状物。将所得物质再通过制备HPLC，用下列方法纯化：溶 剂A：水+0.1％甲酸；溶剂B：MeCN+0.1％甲酸；柱：Waters Sunfire 30 mm×100mm，5μm；流速＝40mL/分钟；梯度(时间，溶剂B)：0分钟， 2％；2.5分钟，2％；20.5分钟，15％；21分钟，100％；23分钟，100％；23.5分钟，5％。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄/橙色固体 (79mg，18％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),9.61(t,J＝5.4Hz,1H), 8.53(s,1H),7.96(d,J＝9.2Hz,1H),7.55(d,J＝2.3Hz,1H),7.51(d,J＝3.8Hz, 1H),7.32-7.13(m,3H),6.40(d,J＝3.7Hz,1H),5.06(d,J＝5.5Hz,2H),4.90 (t,J＝5.0Hz,2H),4.66(q,J＝7.0Hz,2H),3.91(s,3H),3.82(d,J＝4.9Hz,2H), 3.53-3.46(m,2H),3.41-3.38(m,4H),3.38-3.20(m,2H+HDO),1.36(t, J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝498[M+]，Rt＝1.63分钟，UV纯度＝98％。
实施例15-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1- 苄基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001901
将碘甲烷(22μL，0.35mmol)加入至3-氨基-N-[(1-苄基-1H-1,3-苯并二 唑-2-基)甲基]-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酰胺，中间体85(35mg，0.088 mmol)的DMSO(1mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌5小时。加入另 外的碘甲烷(40μL，0.64mmol)，并且将反应混合物再在RT搅拌16小时。 将反应混合物用MeCN稀释至最终体积1.5mL，然后通过制备HPLC纯化(方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(9.1mg， 22％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.59(t,J＝5.4Hz,1H), 8.43(s,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝8.3Hz,1H),7.69(t,J＝7.8Hz, 1H),7.61(t,J＝7.8Hz,1H),7.49(dd,J＝3.6,2.4Hz,1H),7.27-7.11(m,7H), 6.36(dd,J＝3.7,1.3Hz,1H),5.96(s,2H),5.14(d,J＝5.4Hz,2H),4.23(s,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝412[M+]，Rt＝1.82分钟，UV纯度＝98％。
实施例16-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3- 苄基-6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790001911
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(60mg，0.26mmol)和2-(氨基甲基)-3-苄基-6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化 物，中间体51(85％，110mg，0.25mmol)的DMF(2mL)溶液在RT搅拌 72小时。将所得混悬液过滤，然后将收集的固体真空干燥。将固体再混悬 于MeCN(5mL)中，然后通过过滤收集，并且真空干燥，得到固体(70mg)。 将固体再次混悬于MeOH/MeCN/水(1:1:1，3mL)，然后过滤。将所得固体真空干燥，得到橙色固体(40mg)。将所得固体混悬于DMSO:MeCN(2:1， 0.5mL)中，然后加入MeOH(0.5mL)。通过过滤收集固体，并且真空干燥， 得到橙色固体(11mg)。将所得固体溶于MeCN:水(1:1，1mL)中，然后冷 冻干燥，得到产物，为黄色固体(9mg，7％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.47(s,1H),9.57(t,J＝5.3Hz,1H), 8.38(d,J＝1.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,1H),7.68(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H), 7.48(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H),7.26-7.08(m,7H),6.35(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H), 5.95(s,2H),5.15(d,J＝5.3Hz,2H),4.74(q,J＝7.2Hz,2H),1.44(t,J＝7.2Hz, 3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝460[M(35Cl)+]，462[M(37Cl)+]，Rt＝2.23 分钟，UV纯度＝98％。
实施例17-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3- 苄基-1-乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001912
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(50mg，0.22mmol)和2-(氨基甲基)-3-苄基-1-乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓盐酸盐溴化物，中间体53(110mg，0.24mmol)的DMF(1mL)溶液在 RT搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后溶于MeCN:水(1:1，2mL)。 通过过滤收集所形成的沉淀，用MeCN:水(1:1)洗涤，然后真空干燥，得到 产物，为橙色固体(45mg，39％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.48(s,1H),9.58(t,J＝5.3Hz,1H), 8.69(s,1H),7.98(s,2H),7.48(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H),7.28-7.02(m,7H), 6.35(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),6.01(s,2H),5.20(d,J＝5.3Hz,2H),4.86(d,J＝7.3 Hz,2H),1.47(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝494[M+]，Rt＝2.34分钟，UV纯度＝100％。
实施例18-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3- 苄基-1-[2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001921
将2-(氨基甲基)-1-苄基-3-[2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑 -3-鎓盐酸盐溴化物，中间体57(76％，191mg，0.303mmol)的DMF(1mL) 溶液加入至锂(1+)离子3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体3 (60mg，0.33mmol)、DIPEA(230μL，1.3mmol)和HBTU(160mg，0.42 mmol)的DMF(2mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌16小时，然后真 空浓缩成粘稠红色油状物。将粗物质溶于2:1DMSO:MeCN至最终体积1.5 mL，然后通过制备HPLC纯化(方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩， 得到产物，为浅米白色固体(48mg，26％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,1H),9.45(t,J＝5.6Hz,1H), 7.98(d,J＝8.3Hz,1H),7.86(d,J＝7.9Hz,1H),7.70-7.58(m,2H),7.49(dd, J＝3.7,2.5Hz,1H),7.39-7.00(m,7H),6.36(dd,J＝3.7,1.7Hz,1H),6.07(s, 2H),5.79(s,2H),5.11(d,J＝5.6Hz,2H),3.55-3.49(m,2H),3.17-3.12(m, 2H),1.75-1.64(m,2H),1.61-1.48(m,2H),1.25-1.17(m,2H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝523[M+]，Rt＝2.21分钟，UV纯度＝99％。
实施例19-2-[({3-氨基-6-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基) 甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001931
将CDI(61mg，0.37mmol)加入至3-氨基-6-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡 嗪-2-甲酸，中间体9(90％，60mg，0.28mmol)的DMF(2mL)溶液中。将 反应混合物在RT搅拌1小时。加入2-(氨基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基 -1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体25(108mg，0.312mmol)，然后将 反应再搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后通过C18(12g)快速柱 色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 0％，3CV；0-20％，14CV；20-60％，3CV；60-100％，1CV；100％， 2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(35mg，28％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.42(s,1H),9.57(t,J＝5.4Hz,1H), 8.51(s,1H),7.92(d,J＝9.1Hz,1H),7.55(d,J＝2.3Hz,1H),7.28(dd,J＝9.1, 2.3Hz,1H),7.10(s,2H),6.11(s,1H),4.98(d,J＝5.4Hz,2H),4.64(q,J＝7.2 Hz,2H),4.11(s,3H),3.90(s,3H),2.37-2.34(m,3H),1.36(t,J＝7.2Hz,3H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝394[M+]，Rt＝1.80分钟，UV纯度＝100％。
实施例20-2-[({3-氨基-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基) 甲基]-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001932
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体13 (95％，83mg，0.33mmol)和2-(氨基甲基)-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二 唑-3-鎓碘化物，中间体34(97％，140mg，0.37mmol)在DMF(3mL)中的 混合物在RT搅拌64小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过 C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-34％，16CV；34-65％，4CV；65- 100％，2CV；100％，1CV。合并所需级分，并且真空浓缩以除去大部分 MeCN，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(44mg，25％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.21-11.16(m,1H),9.49(t,J＝5.5 Hz,1H),8.49(s,1H),8.34(d,J＝1.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.9Hz,1H),7.75(dd, J＝8.9,1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝2.2,1.2Hz,1H),7.13(s,2H),5.11(d,J＝5.4 Hz,2H),4.75-4.67(m,4H),2.24(d,J＝1.1Hz,3H),1.43-1.38(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝412[M(35Cl)+]，414[M(37Cl)+]，Rt＝2.07 分钟，UV纯度＝96％。
实施例21-2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲 基]-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的合成
Figure GDA0002817691790001941
将7-氯-2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体16 (95％，160mg，0.58mmol)和2-(氨基甲基)-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二 唑-3-鎓碘化物，中间体34(97％，220mg，0.58mmol)在DMF(4mL)中的 混合物在RT搅拌64小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过 C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-33％，13CV；33-41％，2CV；41- 70％，5CV；70％，3CV。合并所需级分，并且真空浓缩以除去大部分MeCN， 然后冷冻干燥，得到产物，为黄/橙色固体(161mg，48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.80(s,1H),9.51(t,J＝5.3Hz,1H), 8.34(d,J＝1.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.9Hz,1H),7.75(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H), 7.69(s,1H),7.37(s,2H),5.12(d,J＝5.4Hz,2H),4.77-4.61(m,4H),1.44- 1.37(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝432[M(35Cl2)+]，434[M(35Cl37Cl)+]， 436[M(37Cl2)+]，Rt＝2.14分钟，UV纯度＝97％。
实施例22-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸 盐的合成
Figure GDA0002817691790001951
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(98％， 369mg，1.59mmol)和2-(氨基甲基)-6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧基)- 1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体59(82％，819mg，1.37 mmol)在DMF(8mL)中的混合物在RT搅拌90小时。将反应混合物真空 浓缩，然后将粗物质通过C18(120g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％ 甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-32％，11CV； 32-100％，3CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩以除去大部 分MeCN，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(382mg，47％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.57(s,1H),9.70(t,J＝5.2Hz,1H), 8.44(s,1H),7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.63(s,1H),7.54-7.49(m,1H),7.31- 7.13(m,3H),7.08(t,J＝5.4Hz,1H),6.42(d,J＝3.5Hz,1H),5.04(d,J＝5.3Hz, 2H),4.66(q,J＝7.0Hz,4H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.36(m,2H+HDO),1.41 -1.37(m,15H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝523[M+]，Rt＝2.26分钟，UV纯度＝95％。
实施例23-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸 盐的合成
Figure GDA0002817691790001961
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(98％， 295mg，1.27mmol)和2-(氨基甲基)-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)- 1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体64(91％，710mg，1.28 mmol)在DMF(5mL)中的混合物在RT搅拌16小时。加入另外的DMF(3 mL)，然后将反应再搅拌72小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质 通过C18(60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度 洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-34％，16CV；34-100％，3CV； 100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为粘稠橙色油状 物(345mg，46％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),9.69(t,J＝5.4Hz,1H), 8.46(s,1H),7.94(d,J＝9.1Hz,1H),7.56(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(dd,J＝3.6, 1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝9.1,2.2Hz,1H),7.20(s,2H),6.93-6.88(m,1H), 6.41(d,J＝3.2Hz,1H),5.03(d,J＝5.4Hz,2H),4.72-4.58(m,4H),4.12(t, J＝6.1Hz,2H),3.11(q,J＝6.6Hz,2H),1.89(p,J＝6.4Hz,2H),1.41-1.35(m, 15H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝537[M+]，Rt＝2.39分钟，UV纯度＝100％。
实施例24-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐 的合成
Figure GDA0002817691790001962
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(252mg，1.11mmol)加入至2-(氨基甲基)-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体69(80％，540mg，0.884mmol) 的DMF(12mL)溶液中。将所得溶液在RT搅拌16小时，然后在30℃搅 拌2小时。将所得溶液真空浓缩。将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯 化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％， 2CV；10-34％，16CV；34-100％，3CV；100％，2CV。合并所需级分， 并且真空浓缩，得到产物，为淡棕色固体(235mg，40％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.70(t,J＝5.3Hz,1H), 8.35(s,1H),7.96(d,J＝8.6Hz,1H),7.89(s,1H),7.55-7.50(m,2H),7.19(s, 2H),6.89(t,J＝5.3Hz,1H),6.41(d,J＝3.6Hz,1H),5.05(d,J＝5.2Hz,2H), 4.66(dd,J＝7.1,2.5Hz,4H),2.94(q,J＝6.6Hz,2H),2.78(t,J＝7.5Hz,2H), 1.79-1.71(m,2H),1.40(dt,J＝7.1,3.7Hz,6H),1.38(s,9H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝521[M+]，Rt＝2.34分钟，UV纯度＝97％。
实施例25-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- {1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物的 合成
Figure GDA0002817691790001971
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(251mg，1.10mmol)加入至2-(氨基甲基)-6-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙 基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体73(72％，605mg，0.847mmol) 的DMF(15mL)溶液中。将所得溶液在RT搅拌24小时。将反应混合物 真空浓缩，然后将粗物质通过C18(60g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-17％，5 CV；17-39％，6CV；39％，2CV；39-100％，4CV；100％，1CV。合并 所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(315mg，52％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),9.70(t,J＝5.2Hz,1H), 7.97(d,J＝8.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.65-7.57(m,1H),7.51(dd,J＝3.7,1.7 Hz,1H),7.19(s,2H),6.41(d,J＝3.5Hz,1H),5.05(d,J＝5.3Hz,2H),4.73- 4.62(m,4H),4.19-4.09(m,2H),3.00-2.90(m,1H),2.85(br.s,2H),1.81(d, J＝12.2Hz,2H),1.65(qd,J＝12.8,4.3Hz,2H),1.47-1.36(m,15H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝547[M+]，Rt＝2.66分钟，UV纯度＝95％。
实施例26-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并 二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790001981
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(312mg，1.33mmol)加入至2-(氨基甲基)-6-(1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1H-吡 唑-4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体76(83％，880 mg，1.26mmol)的DMF(10mL)溶液中。将所得溶液在RT搅拌64小时。 将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过C18(60g)快速柱色谱纯化。 柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2 CV；0-11％，5CV；11-40％，9CV；40％，2CV。合并所需级分，并且 真空浓缩，得到产物，为黄色固体(525mg，60％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 8.50(s,1H),8.33(s,1H),8.24(s,1H),8.11(s,1H),8.04(d,J＝8.7Hz,1H), 7.95-7.89(m,1H),7.52(dd,J＝3.6,2.3Hz,1H),7.23(s,2H),6.41(d,J＝2.7 Hz,1H),5.06(d,J＝5.2Hz,2H),4.68(q,J＝7.0Hz,4H),4.39(ddt,J＝11.4,7.8, 3.9Hz,1H),4.06(br.s,2H),2.94(br.s,2H),2.11-2.03(m,2H),1.82-1.78 (m,2H),1.47-1.38(m,15H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝613[M+]，Rt＝2.59分钟，UV纯度＝94％。
实施例27-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (2-氨基乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001991
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001993
烷溶液(4.0M，140μL，0.56mmol)加入至2-[({3-氨基 -5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基} 乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐，实施例22(95％，39mg， 0.065mmol)的MeCN(1mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌50分钟， 然后在氮气流下浓缩。将所得残留物混悬于MeCN(1mL)。通过过滤收集 固体，然后用MeCN洗涤，并且真空干燥，得到产物，为橙色固体(20mg，64％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.71(d,J＝5.6Hz,1H), 8.13(s,3H),8.00(d,J＝9.2Hz,1H),7.66(d,J＝2.1Hz,1H),7.53(dd,J＝3.7, 2.5Hz,1H),7.32(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.21(s,2H),6.42(dd,J＝3.8,1.7Hz, 1H),5.05(d,J＝5.4Hz,2H),4.72-4.56(m,5H),4.40-4.31(m,3H),1.42-1.38 (m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝423[M+]，Rt＝0.94分钟，ELS纯度＝100％。
实施例28-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (3-氨基丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790001992
将HCl的二
Figure GDA0002817691790001994
烷溶液(4.0M，1.6mL，6.4mmol)加入至2-[({3-氨基- 5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基} 丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐，实施例23(382mg，0.656 mmol)的MeCN(10mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌45分钟，然后 真空浓缩，得到产物，为橙色固体(292mg，84％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.70(t,J＝5.3Hz,1H), 8.07(s,3H),7.97(d,J＝9.1Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.51(dd,J＝3.7, 2.5Hz,1H),7.29(m,3H),6.41(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),5.04(d,J＝5.3Hz,2H), 4.70-4.63(m,4H),4.24(t,J＝6.2Hz,2H),3.03-2.92(m,2H),2.09(p,J＝6.4 Hz,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝437[M+]，Rt＝1.02分钟，UV纯度＝96％。
实施例29-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (3-氨基丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物的合成
Figure GDA0002817691790002001
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002002
烷溶液(4.0M，31μL，0.12mmol)加入至2-[({3-氨基- 5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基} 丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，实施例24(40mg，0.06 mmol)的MeCN(1mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌30分钟，然后加 入另外的HCl的二
Figure GDA0002817691790002003
烷溶液(4.0M，15μL，0.060mmol)。将反应混合物 在RT再搅拌20分钟，然后在氮气流下浓缩。将所得残留物真空干燥，得 到产物，为黄色固体(27mg，84％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.88(s,1H),7.61 (dd,J＝8.6,1.3Hz,1H),7.40(d,J＝3.8Hz,1H),6.45(d,J＝3.8Hz,1H),5.12 (s,2H),4.82-4.75(m,4H),3.04-2.96(m,4H),2.08(p,J＝7.8Hz,2H),1.60- 1.52(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝421[M+]，Rt＝1.03分钟，UV纯度＝95％。
实施例30-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-(哌啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合 成
Figure GDA0002817691790002011
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002012
烷溶液(4.0M，0.27mL，1.1mmol)加入至2-[({3-氨基 -5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4- 基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，实施例25(95％，300mg， 0.42mmol)的MeCN(15mL)溶液中。将所得溶液在RT搅拌16小时，然 后加入HCl的二
Figure GDA0002817691790002013
烷溶液(4.0M，0.27mL，1.1mmol)。将反应在RT再 搅拌4小时，然后真空浓缩，然后将残留物与MeCN(2×30mL)共沸。将 所得固体混悬于MeCN(30mL)，然后过滤，用MeCN冲洗，并且真空干 燥，得到产物，为棕色固体(90mg)。将残留在滤纸上的物质溶于MeOH， 并且与滤液合并，然后真空浓缩，得到棕色粘稠油状物(125mg)。将所得油 状物再通过制备HPLC纯化(方法B)。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到棕色固体(35mg)。将所得物质与通过过滤所得固体(90mg)合并，然后将 合并的物质溶于MeCN:水(1:9，3mL)并且冷冻干燥，得到棕色固体(125 mg)。将物质再溶于MeCN:水(1:9，3mL)，并且再冷冻干燥一次，得到棕 色固体(110mg)。将所得物质再通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN: 水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-5％，2CV；5-15％，3CV；15-25％，3CV；25-51％，3CV；51-100％，2CV； 100％，1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到黄色固体(70mg)。将 所得物质再通过HPLC纯化(方法C)。合并所需级分，并且冷冻干燥，得 到橙色固体(63mg)。将所得物质再通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用 MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，3CV； 5-14％，7CV；14％，4CV；14-20％，5CV；20-26％，1CV；26-100％， 2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色 固体(27mg，9％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 8.73(d,J＝9.5Hz,1H),8.46(d,J＝10.4Hz,1H),8.04(d,J＝8.7Hz,1H),7.88 (s,1H),7.57(dd,J＝8.7,1.2Hz,1H),7.53(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H),7.22(s,2H), 6.42(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),5.07(d,J＝5.3Hz,2H),4.75-4.65(m,4H),3.49- 3.40(m,2H+HDO),3.16-2.99(m,3H),2.10-2.01(m,2H),1.90(qd,J＝13.4, 3.8Hz,2H),1.40(t,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝447[M+]，Rt＝0.98分钟，UV纯度＝100％。
实施例31-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐碘 化物的合成
Figure GDA0002817691790002021
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002022
烷溶液(4.0M，420μL，1.7mmol)加入至2-[({3-氨基- 5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶- 4-基}-1H-吡唑-4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐，实施例26 (94％，500mg，0.71mmol)的MeCN溶液中。将反应混合物在RT搅拌40 小时，然后加入另外的HCl的二
Figure GDA0002817691790002023
烷溶液(4.0M，200μL，0.80mmol)。 将反应混合物在RT再搅拌2小时，然后真空浓缩。将残留物与MeCN共沸，然后真空干燥。将所得残留物再混悬于MeCN(20mL)中，然后加入 HCl的二
Figure GDA0002817691790002024
烷溶液(4.0M，420μL，1.7mmol)。将反应在RT搅拌88小 时。将所得混悬液过滤，然后将固体真空干燥，再溶于1:1MeCN:水(4mL)， 然后冷冻干燥，得到产物，为棕色固体(450mg，90％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.57(s,1H),9.71(t,J＝5.3Hz,1H), 9.40-9.31(m,1H),9.30-9.20(m,1H),8.49(s,1H),8.30(s,1H),8.16(s,1H), 8.04(d,J＝8.7Hz,1H),7.97-7.92(m,1H),7.51(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H),6.41 (dd,J＝3.7,1.7Hz,1H),5.07(d,J＝5.2Hz,2H),4.73-4.66(m,4H),4.57-4.50 (m,1H),3.38(d,J＝12.3Hz,2H),3.10(dd,J＝10.7Hz,2H),2.31-2.18(m, 4H),1.43(dt,J＝12.1,7.2Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝513[M+]，Rt＝1.20分钟，UV纯度＝97％。
实施例32-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (2-胍基乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002031
将DIPEA(18μL，0.10mmol)加入至2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡 嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-氨基乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3- 鎓盐酸盐氯化物，实施例27(18mg，0.036mmol)和1H-1,2,4-三唑-1-甲脒 盐酸盐(1:1)(5.5mg，0.037mmol)在DMF(1mL)中的混合物中。将所得混 合物在RT搅拌3.5小时。加入另外的1H-1,2,4-三唑-1-甲脒盐酸盐(1:1)(5.5 mg，0.037mmol)，并且将反应继续搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩， 然后将粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-1％，1CV；1-70％， 6CV；70％，1CV；70-100％，3CV；100％，2CV。合并所需级分，并 且真空浓缩，得到橙色固体(17mg)。将所得物质再通过制备HPLC纯化 (方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(1.7mg， 9％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.70(t,J＝5.3Hz,1H), 8.59(s,1H),8.44(s,1H),7.97(d,J＝9.1Hz,1H),7.75-7.62(m,4H),7.51(d, J＝3.8Hz,1H),7.35-7.09(m,3H),6.41(d,J＝3.8Hz,1H),5.04(d,J＝5.1Hz, 2H),4.70-4.62(m,4H),4.21(t,J＝5.1Hz,2H),3.60-3.54(m,2H),1.43-1.35 (m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝465[M+]，Rt＝1.07分钟，UV纯度＝100％。
实施例33-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (3-胍基丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物的合成
Figure GDA0002817691790002041
取1H-1,2,4-三唑-1-甲脒盐酸盐(1:1)(13mg，0.090mmol)加入至2-[({3- 氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-氨基丙基)-1,3-二乙 基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物，实施例29(50mg，0.10mmol)的 CH2Cl2(4mL)混悬液中。加入DIPEA(22μL，0.13mmol)，然后将所得混 悬液在RT搅拌1小时。将反应在氮气流下浓缩，然后加入DMF(4mL)。 将所得溶液在RT搅拌3小时。加入另外部分1H-1,2,4-三唑-1-甲脒盐酸盐(1:1)(13mg，0.090mmol)，并且加入DIPEA(22μL，0.13mmol)，然后将 反应混合物再搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过 C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：0％，5CV；0-42％，17CV；42-65％，3CV；65-100％， 1CV；100％，1CV。合并所需级分，并且真空浓缩。将所得物质再通过 制备HPLC纯化(方法A)。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为 黄色固体(10mg，19％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),9.73(t,J＝5.3Hz,1H), 8.82(s,1H),8.42(s,1H),7.98(d,J＝8.5Hz,1H),7.94(s,1H),7.60-7.54(m, 3H),7.52(dd,J＝3.7,2.4Hz,1H),7.21(s,2H),6.44-6.39(m,1H),5.05(d, J＝5.2Hz,2H),4.68(q,J＝6.9Hz,4H),3.10(d,J＝5.8Hz,2H),2.87-2.81(m, 2H),1.89-1.81(m,2H),1.40(td,J＝7.2,4.0Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝463[M+]，Rt＝1.16分钟，UV纯度＝98％。
实施例34-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- 羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790002042
将2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体4(1.26g，5.52mmol)和2-(氨基甲基)-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氢溴 酸盐溴化物，中间体83(2.26g，5.52mmol)的DMF(11mL)混悬液在RT 搅拌16小时。将反应混合物过滤，然后将所得固体用MeCN洗涤，并且 真空干燥，得到黄色固体(0.89g)。将滤液过滤，然后将所得固体真空干燥， 得到黄色固体(0.42g)。将滤液真空浓缩，然后将残留物混悬于MeCN/水 (4:1，5mL)，然后过滤，并且将所得固体真空干燥，得到黄色固体(1.15g)。 合并所得固体，是MeCN混悬液，然后真空浓缩，并且真空干燥，得到产 物，为黄色固体(2.46g，91％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),11.52(s,1H),9.72(t, J＝5.3Hz,1H),8.60(s,1H),8.22(dd,J＝8.7,1.3Hz,1H),8.17(d,J＝8.7Hz, 1H),7.52(dd,J＝3.8,2.5Hz,1H),7.20(s,2H),6.42(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H), 5.10(d,J＝5.3Hz,2H),4.80(q,J＝7.2Hz,2H),4.73(q,J＝7.2Hz,2H),1.42(t, J＝7.2Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝408[M+]，Rt＝1.39分钟，UV纯度＝100％。
实施例35-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- [(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑 -3-鎓甲酸甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002051
将N-(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯(89mg，0.51mmol)加入至2-[({3-氨 基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3- 苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(250mg，0.51mmol)、HBTU(210mg， 0.56mmol)和4-甲基吗啉(0.13mL，1.0mmol)的DMF(2.5mL)溶液中。将 反应在RT搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过C18 (30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-21％，3CV；21％，1CV；21-29％，2CV；29％，3CV；29-100％，14CV。合并所需级分，并且真空浓缩， 得到产物，为黄色固体(205mg，60％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 8.73(t,J＝5.5Hz,1H),8.47(s,1H),8.23(s,2H),8.19-8.09(m,2H),7.57- 7.47(m,1H),7.20(s,2H),6.84(t,J＝5.6Hz,1H),6.47-6.38(m,1H),5.09(d, J＝5.3Hz,2H),4.81-4.61(m,4H),3.37-3.21(m,2H+HDO),3.09-2.96(m, 2H),1.75-1.62(m,2H),1.51-1.31(m,15H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝564[M+]，Rt＝2.35分钟，UV纯度＝98％。
实施例36-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- ({1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790002061
将4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(82mg，0.41mmol)加入至2-[[(3-氨基- 5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-羰基)氨基]甲基]-1,3-二乙基-苯并咪唑-1-鎓-5-甲 酸溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)、HBTU(171mg，0.450mmol) 和4-甲基吗啉(104μL，0.820mmol)的DMF(2mL)溶液中。将反应在RT 搅拌64小时，然后真空浓缩。将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。 柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，3 CV；5-20％，3CV；20％，4CV；20-46％，5CV；46％，3CV；46-56％， 2CV；56-94％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为橙色 固体(240mg，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 8.51(d,J＝7.8Hz,1H),8.45(s,1H),8.17-8.11(m,2H),7.55-7.48(m,1H), 7.32-7.07(m,2H),6.45-6.39(m,1H),5.10(d,J＝5.3Hz,2H),4.80-4.65(m, 4H),4.13-3.86(m,3H),2.97-2.78(m,2H),1.91-1.79(m,2H),1.52-1.36 (m,17H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝590[M+]，Rt＝2.75分钟，UV纯度＝100％。
实施例37-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 溴化物的合成
Figure GDA0002817691790002071
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)、 HBTU(171mg，0.451mmol)和4-甲基吗啉(104μL，0.819mmol)的DMF (2mL)溶液在RT搅拌5分钟。加入N-(哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(82mg， 0.41mmol)，然后将反应混合物在RT搅拌16小时。将反应混合物真空浓 缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-25％，4 CV；25％，1CV；25-48％，5CV；48％，1CV；48-57％，2CV；57-100％， 2CV；100％，1CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色 固体(135mg，48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),9.78-9.65(m,1H),8.52 (d,J＝7.7Hz,1H),8.45(s,1H),8.15(s,2H),7.57-7.46(m,1H),7.20(s,2H), 6.46-6.36(m,1H),5.16-5.01(m,2H),4.80-4.65(m,4H),4.13-3.86(m, 3H),2.89(s,2H),1.90-1.78(m,2H),1.52-1.34(m,17H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝590[M+]，Rt＝2.20分钟，UV纯度＝98％。
实施例38-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- {[2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002081
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(220mg，0.45mmol)和 CDI(100mg，0.68mmol)的DMF(5mL)溶液在RT搅拌0.5小时。加入 另外的CDI(40mg，0.25mmol)，并且将反应在RT再搅拌0.5小时。加 入N-[1-(2-氨基乙基)-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(139mg，0.57mmol)的 DMF(5mL)溶液，然后将所得混合物在RT搅拌10分钟。将反应混合物 真空浓缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水 +0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，2CV；10-27％， 13CV；27-34％，3CV；34-59％，4CV；59-100％，1CV；100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，得到产物，为黄色固体(261mg，85％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 8.84(t,J＝5.4Hz,1H),8.49(s,1H),8.24(s,2H),8.14(s,2H),7.51(dd,J＝3.7, 2.2Hz,1H),7.20(s,2H),6.45-6.38(m,1H),5.09(d,J＝5.3Hz,2H),4.79- 4.65(m,4H),3.82(d,J＝12.4Hz,2H),3.48-3.41(m,2H+HDO),2.84-2.74(m, 4H),2.68-2.64(m,1H),1.82-1.74(m,2H),1.47-1.40(m,6H),1.37(s,9H), 1.18-1.08(m,2H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝633[M+]，Rt＝1.43分钟，UV纯度＝99％。
实施例39-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- [(3-氨基丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物 的合成
Figure GDA0002817691790002091
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002093
烷溶液(4.0M，0.35mL，1.4mmol)加入至2-[({3-氨基 -5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基} 丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸甲酸盐，实施例35 (180mg，0.275mmol)的MeCN(3mL)溶液中。将反应在RT搅拌1小时， 然后真空浓缩。将残留物与MeCN(×2)共沸，得到橙色固体。将所得固体 溶于1:1MeCN:水中，然后冷冻干燥，得到黄色固体。将冷冻干燥的固体 用超声混悬于MeCN(1mL)中。将所得混悬液放置沉降，然后用吸管倾析 出上清液。再重复一次研磨操作，然后将固体真空干燥，得到产物，为橙 色固体(110mg，75％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.73(t,J＝5.3Hz,1H), 9.18-9.08(m,1H),8.63(s,1H),8.23-8.12(m,2H),8.05-7.81(m,3H),7.59 -7.46(m,1H),7.46-6.95(m,1H),6.48-6.38(m,1H),5.21-5.02(m,2H), 4.87-4.62(m,4H),3.47-3.27(m,2H+HDO),2.98-2.81(m,2H),1.96-1.83 (m,2H),1.54-1.36(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝464[M+]，Rt＝1.17分钟，UV纯度＝100％。
实施例40-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-[(哌啶-4-基)氨基甲酰基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物 的合成
Figure GDA0002817691790002092
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002094
烷溶液(4.0M，0.37mL，1.5mmol)加入至2-[({3-氨基 -5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-({1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶- 4-基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例36(210 mg，0.313mmol)的MeCN(3mL)溶液中。将反应在RT搅拌1小时。将 反应混合物真空浓缩，然后与MeCN(×2)共沸。将残留物再溶于MeCN: 水，然后冷冻干燥。将所得物质用超声混悬于MeCN(1mL)。倾析出上清 液，然后再用MeCN(1mL)重复操作。将所得固体真空干燥，得到产物， 为橙色固体(85mg，48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.73(t,J＝5.3Hz,1H), 9.00-8.80(m,3H),8.63(s,1H),8.24-8.09(m,2H),7.56-7.47(m,1H),7.47 -6.91(m,1H),6.46-6.37(m,1H),5.16-5.04(m,2H),4.82-4.66(m,4H), 4.20-4.04(m,1H),3.56-3.19(m,2H+HDO),3.11-2.94(m,2H),2.07-1.96 (m,2H),1.94-1.80(m,2H),1.52-1.36(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝490[M+]，Rt＝1.34分钟，UV纯度＝100％。
实施例41-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (4-氨基哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐碘化物的合 成
Figure GDA0002817691790002101
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002102
烷溶液(4.0M，0.25mL，1.0mmol)加入至2-[({3-氨基 -5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基} 哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例37(135mg， 0.201mmol)的MeCN(3mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌20分钟， 然后真空浓缩。将残留物与MeCN(×2)共沸，然后再溶于水，并且冷冻干 燥，得到产物，为橙色固体(123mg，99％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.73(t,J＝5.3Hz,1H), 8.99-8.76(m,3H),8.62(s,1H),8.25-8.10(m,2H),7.52(dd,J＝3.8,2.5Hz, 1H),7.18(s,1H),6.47-6.37(m,1H),5.10(d,J＝5.3Hz,2H),4.74(m,4H), 4.12(m,1H),3.40-3.25(m,2H+HDO),3.14-2.94(m,2H),2.07-1.98(m, 2H),1.93-1.80(m,2H),1.43(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝490[M+]，Rt＝0.98分钟，UV纯度＝97％。
实施例42-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- {[2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002111
将HCl的二
Figure GDA0002817691790002112
烷溶液(4.0M，1.6mL，6.4mmol)加入至2-[({3-氨基- 5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨 基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐， 实施例38(99％，250mg，0.36mmol)的二
Figure GDA0002817691790002113
烷(4mL)混悬液中。将所得 混合物在RT搅拌30分钟，然后加热至40℃达45分钟。加入MeCN(10 mL)，然后将反应在40℃加热45分钟，然后真空浓缩。将残留物混悬于二
Figure GDA0002817691790002114
烷(4mL)，然后加入HCl的二
Figure GDA0002817691790002115
烷溶液(4.0M，1.6mL，6.4mmol)。 滴加MeOH直到混悬液转为均匀溶液为止。将所得溶液在RT搅拌1小 时，然后真空浓缩。将残留物用超声混悬于MeCN(15mL)，然后将固体 放置沉降。用吸管倾析出上清液，然后再重复研磨操作(×3)。将残留的固体 真空干燥，然后通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-20％，20CV；20-30％， 2CV；30-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩。 将残留物再溶于水:MeCN(9:1)，然后冷冻干燥，得到产物，为橙色固体(190 mg，68％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.73(t,J＝5.3Hz,1H), 9.25-9.11(m,3H),8.95(d,J＝10.0Hz,1H),8.79-8.65(m,1H),8.54(s,1H), 8.21-8.15(m,2H),7.80-6.80(m,2H),6.42(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),5.11(d, J＝5.3Hz,2H),4.77-4.68(m,4H),3.65(q,J＝6.2Hz,2H),3.41(d,J＝12.5Hz, 3H),3.25-3.15(m,2H),2.94(q,J＝12.4Hz,2H),2.20(d,J＝12.5Hz,2H),1.81 -1.68(m,2H),1.49-1.38(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝533[M+]，Rt＝1.31分钟，UV纯度＝99％。
实施例43-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5- (2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002121
将2-(氨基甲基)-5-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙 氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓二盐酸盐氯化物，中间体89(70％， 1.53g，1.53mmol)、(3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基)-咪唑-1-基-甲酮， 中间体4(734mg，3.22mmol)和咪唑盐酸盐(336g，3.22mmol)的DMF(14 mL)溶液在RT搅拌44小时。加入另外的(3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2- 基)-咪唑-1-基-甲酮，中间体4(150mg，0.657mmol)，然后将反应在RT再 搅拌72小时。将反应混合物用水(30mL)稀释并且过滤。将固体用水(2×10 mL)彻底冲洗。将滤液真空浓缩成棕/黄色油状物。将粗物质通过C18(60 g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：10％，2CV；10-18％，15CV；18-25％，2CV；25-30％，1CV； 30％，1CV；30-36％，1CV；36-40％，1CV；40-100％，4CV；100％， 1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到黄色固体(524mg)。将所得物 质样品(120mg)进一步通过HPLC纯化(方法D)。合并所需级分，并且冷 冻干燥，得到橙色固体(54mg)。将所得物质再通过C18(60g)快速柱色谱 纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 0％，7CV；0-20％，17CV；20％，3CV；20-100％，3CV；100％，1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为橙色固体(14mg，1％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.89(d,J＝9.1Hz,1H),7.57(d,J＝1.9Hz, 1H),7.43(dd,J＝9.1,2.1Hz,1H),7.39(d,J＝3.8Hz,1H),6.44(d,J＝3.8Hz, 1H),5.09(s,2H),4.76(q,J＝7.2Hz,4H),4.57(s(br),2H),4.22(s(br),2H), 4.01-3.41(m,16H),1.58-1.51(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝751[M+]，Rt＝1.42分钟，UV纯度＝98％。
实施例44-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5- (3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H- 1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002131
将2-(氨基甲基)-5-(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙 氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物，中间体93(80％， 200mg，0.24mmol)、2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中 间体4(95％，120mg，0.50mmol)和1H-咪唑盐酸盐(1:1)(52mg，0.50mmol) 在DMF(2.5mL)中的混合物在RT搅拌64小时。将反应混合物用水(5mL) 稀释，然后通过过滤收集固体，并且用水(2×5mL)洗涤。将合并的滤液真 空浓缩，得到粗产物，为黄/棕色油状物。将粗物质通过C18(60g)快速柱 色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 10％，2CV；10-19％，11CV；19-25％，3CV；25-100％，2CV；100％， 1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(40mg，15％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.88(d,J＝9.2Hz,1H),7.51(d,J＝2.1Hz, 1H),7.44-7.38(m,2H),6.46(d,J＝3.8Hz,1H),5.10(s,2H),4.78(q,J＝7.3 Hz,4H),4.38-4.30(m,2H),4.25(s(br),2H),3.86(s,2H),3.81-3.75(m,2H), 3.74-3.51(m,10H),3.50-3.40(m,2H),2.38(s(br),2H),1.56(t,J＝7.1Hz, 6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝765[M+]，Rt＝1.36分钟，UV纯度＝95％。
实施例45-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5- (3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3- 苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002141
步骤1：将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (3-氨基丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物，实施例29 (350mg，0.55mmol)、4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(571mg，2.13mmol)和 AcOH(122μL，2.13mmol)在MeOH(30mL)中的混合物在RT搅拌0.5小 时。加入NaCNBH3(134mg，2.13mmol)。将所得混合物在RT搅拌16小 时。在反应混合物中加入另外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(591mg，2.20mmol)和NaCNBH3(138mg，2.20mmol)，然后在RT再搅拌24小时。在 反应混合物中加入另外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(295mg，1.10mmol) 和NaCNBH3(69mg，1.1mmol)，然后在RT再搅拌96小时。历经5分钟 滴加饱和NaHCO3水溶液(30mL)，然后将所得混悬液超声并且过滤。将 收集的固体用水(20mL)洗涤，然后真空干燥。将所得粗固体通过C18(60 g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 0％，2CV；0-100％，12CV；100-5％，2CV。柱再用MeCN:水，+0.1％TFA， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-50％，8CV；50％， 3CV；50-100％，5CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到保护的产物， 为黄色油状物(85mg)。步骤2：将2.0M HCl水溶液(0.53mL)加入至步骤 1中间体：2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(3-{双 [(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790002142
烷-4-基]丙基]氨基} 丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物(80％，70mg，0.053mmol) 的EtOH:水(1:1，2mL)溶液中。将反应混合物在RT搅拌4小时。将反应 混合物真空浓缩。将粗物质通过制备HPLC纯化(方法E)。合并所需级分， 并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(20mg，2个步骤38％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.93(d,J＝8.6Hz,1H),7.89(s,1H),7.65 (dd,J＝8.6,0.8Hz,1H),7.41(d,J＝3.8Hz,1H),6.46(d,J＝3.8Hz,1H),5.17- 5.09(m,2H),4.82-4.76(m,4H),4.21-4.10(m,2H),3.84(dd,J＝4.5,1.6Hz, 2H),3.79(dd,J＝11.0,3.4Hz,2H),3.75-3.62(m,6H),3.52-3.37(m,4H), 3.10-2.92(m,2H),2.22(s,2H),1.57(q,J＝7.1Hz,6H),1.32(d,J＝7.3Hz, 2H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝749[M+]，Rt＝1.43分钟，UV纯度＝98％。
实施例46-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-{1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}-1H-1,3-苯 并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002151
将2.0M HCl水溶液(4.7mL，9.4mmol)加入至2-[({3-氨基-5H-吡咯并 [2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟 基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790002152
烷-4-基]丙基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑- 3-鎓碘化物，中间体99(390mg，0.470mmol)的水(3mL)溶液中。将所得 溶液超声5分钟，然后在RT搅拌1.5小时。将反应混合物真空浓缩，然 后通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯 度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-6％，4CV；6-13％，4CV；13- 25％，8CV；25-42％，2CV；42-52％，1CV；52-100％，1CV；100％， 2CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(120mg，30％)。
1H NMR(250MHz,353K,5％D2O，在DMSO-d6中)δ7.97(d,J＝8.7 Hz,1H),7.83(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝3.8Hz,1H),6.40(d, J＝3.8Hz,1H),5.08(s,2H),4.75-4.60(m,4H),4.18-4.10(m,1H),3.77-3.41 (m,8H),3.36-3.00(m,4H+HDO),2.11(s,4H),1.44(dt,J＝7.1,3.5Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝611[M+]，Rt＝0.91分钟，UV纯度＝100％。
实施例47-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-(1-{1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}-1H-吡 唑-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002161
步骤1：将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3- 二乙基-6-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐碘化 物，实施例31(360mg，0.53mmol)在MeOH(20mL)、4,6-O-亚苄基-D-吡 喃葡萄糖(417mg，1.55mmol)和AcOH(89μL，1.56mmol)中的溶液在RT 搅拌20分钟。加入NaCNBH3(98mg，1.56mmol)，然后将所得混合物在 RT搅拌48小时。在反应中加入另外的4,6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖(142 mg，0.53mmol)和AcOH(81μL，0.53mmol)，然后将反应在RT再搅拌 4小时。历经5分钟滴加饱和NaHCO3水溶液(40mL)，然后将所得混悬液 过滤。将收集的固体用水(40mL)洗涤，然后真空干燥，得到保护的中间体， 为黄色固体。步骤2：将HCl水溶液(2.0M，10mL，20mmol)加入至步骤 1中间体：2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(1-{1-[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二
Figure GDA0002817691790002162
烷-4-基]丙基]哌啶- 4-基}-1H-吡唑-4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物(70％，275 mg，0.251mmol)的水(5mL)溶液中。将反应在RT搅拌5分钟，然后加入 THF(5mL)。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速 柱色谱纯化。柱用MeCN:水，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％， 3CV；2-10％，2CV；10-21％，3CV；21-42％，1CV；42-50％，1CV。 然后，将柱用MeCN:水+0.1％甲酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 0％，2CV；0-10％，4CV；10-29％，1CV；29-57％，1CV；29-57％， 1CV；100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，产生黑色胶状物(280 mg)。将所得物质再通过制备HPLC纯化(方法E)。合并所需级分，然后冷 冻干燥，得到产物，为黄色固体(18mg，8％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),9.72(t,J＝5.3Hz,1H), 9.23(s,1H),8.57-8.43(m,1H),8.45(s,0.75H),8.25(s,1H),8.18(d,J＝12.1 Hz,1H),8.06(dd,J＝8.7,4.8Hz,1H),7.94(dd,J＝8.6,1.2Hz,1H),7.52(dd, J＝3.7,2.5Hz,1H),7.22(s,2H),6.42(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),5.50(s,1H),5.07 (d,J＝5.2Hz,2H),4.81(d,J＝45.4Hz,1H),4.69(q,J＝6.8Hz,4H),4.61(s,2H), 4.54-4.38(m,2H),4.09-3.95(m,1H),3.73-3.57(m,4H),3.56-3.39(m,4H), 3.28-3.13(m,5H),2.34-2.20(m,2H),1.43(dt,J＝10.8,7.2Hz,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝677[M+]，Rt＝1.20分钟，UV纯度＝100％。
实施例48-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- [(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基甲酰基]-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002171
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)和 CDI(100mg，0.614mmol)的DMF(2mL)溶液在RT搅拌4小时。将所得 溶液加入至(2R,3R,4R,5S)-6-[(3-氨基丙基)[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基]氨基]己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体104(234mg，0.490mmol) 中，并且用DMF(2×1mL)冲洗至反应烧瓶中。将所得溶液在RT搅拌18 小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱 纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)： 5％，2CV；5-25％，11CV；25％，2CV；25-34％，1CV；34-100％，2 CV；100％，1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固 体(160mg，38％)。
δ(ppm)：1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.47(s,1H),8.18(dd,J＝8.8, 1.4Hz,1H),8.08(d,J＝8.8Hz,1H),7.39(d,J＝3.8Hz,1H),6.44(d,J＝3.8Hz, 1H),5.19-5.10(m,2H),4.94-4.74(m,4H+HDO),4.26-4.15(m,2H),3.88 -3.81(m,2H),3.81-3.73(m,2H),3.73-3.38(m,14H),2.24-2.10(m,2H), 1.67-1.51(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝792[M+]，Rt＝1.24分钟，UV纯度＝100％。
实施例49-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-({1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}氨基甲酰 基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002181
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(150mg，0.31mmol)和 CDI(75mg，0.46mmol)在DMF(8mL)中的混合物在RT搅拌1小时，然 后加入(2R,3R,4R,5S)-6-(4-氨基哌啶-1-基)己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中 间体109(140mg，0.42mmol)。使反应在RT搅拌64小时，然后真空浓 缩。将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA， 用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，2CV；0-8％，6CV；8-9％， 1CV；9-20％，5CV；20-25％，2CV；25-44％，3CV；44-51％，1CV；51-100％，1CV；100％，1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物， 为黄色固体(46mg，17％)。
1H NMR(500MHz,5％D2O，在DMSO-d6中)δ8.37(s,1H),8.08(s, 2H),7.46(d,J＝3.8Hz,1H),6.43(d,J＝3.8Hz,1H),5.06(s,2H),4.75-4.61 (m,4H),4.19-3.97(m,2H),3.68--3.30(m,8H),3.20-2.99(m,3H)(m,3H), 2.19-1.74(m,4H),1.40(dt,J＝15.9,7.4Hz,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝654[M+]，Rt＝1.38分钟，UV纯度＝100％。
实施例50-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- (4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基- 1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002191
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(210mg，0.43mmol)和 CDI(105mg，0.65mmol)的DMF(2mL)溶液在RT搅拌1.5小时。将反 应混合物加入至(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基](哌 啶-4-基)氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体112(260mg，0.52mmol) 中。反应混合物在RT搅拌16小时，然后真空浓缩。将粗物质通过C18 (30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-12％，6CV；12％，3CV；12-20％， 6CV；20-51％，3CV；25-93％，2CV。合并所需级分，并且冷冻干燥， 得到产物，为黄色固体(114mg，25％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.74(t,J＝5.3Hz,1H), 8.34-8.07(m,3H),7.73(d,J＝9.3Hz,1H),7.57-7.48(m,1H),7.32-7.06(m, 2H),6.46-6.38(m,1H),5.64-5.44(m,2H),5.14-5.02(m,2H),4.94-4.33 (m,12H),4.12-3.93(m,2H),3.90-3.78(m,1H),3.77-3.69(m,2H),3.33 (15H+HDO),2.95-2.74(m,1H),2.27-1.55(m,4H),1.49-1.36(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝818[M+]，Rt＝1.33分钟，UV纯度＝100％。
实施例51-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- {[2-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基 甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002201
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(210mg，0.43mmol)和 CDI(98mg，0.60mmol)的DMF(5mL)溶液在RT搅拌45分钟。将所得 溶液加入至(2R,3R,4R,5S)-6-{[1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基][(2S,3R,4R,5R)- 2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇三盐酸盐，中间体116(88％， 500mg，0.76mmol)中，并且用DMF(0.5mL)冲洗至烧瓶中。将所得反应 混合物在RT搅拌64小时。将反应混合物真空浓缩，然后通过C18(30g) 快速柱色谱纯化。柱用MeCN:水+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：0％，2CV；0-20％，20CV；20％，2CV；20-100％，2CV； 100％，2CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(216 mg，46％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.24(d,J＝8.7Hz,1H),8.12 (d,J＝8.8Hz,1H),7.43(d,J＝3.8Hz,1H),6.48(d,J＝3.8Hz,1H),5.19(s,2H), 4.93-4.84(m,4H+HDO),4.22(s,2H),4.10-3.63(m,16H),3.55-3.38(m, 5H),3.22-3.05(m,2H),2.50-2.09(m,4H),1.68-1.56(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝431.5[(M+)+H+]，Rt＝1.31分钟，UV纯 度＝100％。
实施例52-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5- [4-({双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}甲基)哌啶-1-羰基]-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002211
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(196mg，0.402mmol)和 CDI(98mg，0.60mmol)的DMF(1.5mL)溶液在RT搅拌3.5小时。加入 (2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基][(哌啶-4-基)甲基] 氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体121(93％，248mg，0.448mmol)， 然后使反应在RT搅拌16小时。将反应混合物通过C18(30g)快速柱色谱 纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，1.5CV；5-25％，10.5CV；25％，2CV；25-34％，1CV；34-100％， 2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色 固体(72mg，17％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),9.75(t,J＝5.3Hz,1H), 8.20-8.09(m,2H),7.83(s,1H),7.73-7.62(m,1H),7.58-7.48(m,1H),7.21 (s,2H),6.48-6.38(m,1H),5.73-5.48(m,2H),5.18-5.01(m,2H),4.97-4.40 (m,13H),4.09-3.87(m,2H),3.77-3.66(m,2H),3.65-3.06(m,16H),2.97- 2.73(m,1H),2.27-2.08(m,1H),2.04-1.52(m,2H),1.52-1.36(m,6H),1.35 -1.13(m,2H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝832[M+]，Rt＝1.33分钟，UV纯度＝99％。
实施例53-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3R)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002221
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)和 CDI(100mg，0.61mmol)的DMF(2mL)混悬液在RT搅拌1小时。加入 (2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基][(3R)-吡咯烷-3-基] 氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体123(83％，289mg，0.492mmol)， 然后使反应在RT搅拌64小时。将反应混合物在氮气流下浓缩，然后将粗 物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度 洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-25％，15CV；25-100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到黄色固体(140mg)。将 所得物质再通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下 列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，1CV；2-20％，10CV；20-100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到黄色固体(65mg， 15％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),9.74(t,J＝4.7Hz,1H), 9.33-8.80(m,1H),8.29-8.21(m,1H),8.20-8.11(m,1H),7.85-7.76(m, 1H),7.53(dd,J＝3.7,2.6Hz,1H),7.39-7.05(m,2H),6.42(dd,J＝3.8,1.8Hz, 1H),5.62-5.21(m,2H),5.09(d,J＝4.9Hz,2H),4.94-3.45(m,33H),2.34- 2.04(m,2H),1.46-1.35(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝804[M+]，Rt＝1.27分钟，UV纯度＝98％。
实施例54-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3S)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002231
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)和 CDI(100mg，0.61mmol)的DMF(2mL)混悬液在RT搅拌1小时。加入 (2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基][(3S)-吡咯烷-3-基] 氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体125(240mg，0.492mmol)，然 后使反应在RT搅拌16小时。将反应混合物在氮气流下浓缩，然后将粗物 质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗 脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-20％，10CV；20-100％，2CV。合 并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到黄色固体(140mg)。将所 得物质再通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列 梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，1CV；2-20％，10CV；20-100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到黄色固体(232mg， 54％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6+D2O)δ9.79-9.68(m,1H),8.18-8.11 (m,1H),8.11-8.04(m,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.46(d,J＝3.8Hz,1H), 6.43(d,J＝3.8Hz,1H),5.12-4.97(m,2H),4.77-4.59(m,4H),4.41-4.19(m, 1H),4.13-3.95(m,2H),3.79-3.20(m,17H),2.47-2.34(m,2H),2.29-2.12 (m,1H),1.45-1.32(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝804[M+]，Rt＝1.27分钟，UV纯度＝99％。
实施例55-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-{[(1r,4r)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环 己基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002241
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(400mg，0.819mmol)和 CDI(199mg，1.23mmol)的DMF(4mL)混悬液在RT搅拌1小时。加入 (2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基][(1r,4r)-4-氨基环己 基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体127(90％，550mg，0.960 mmol)，然后使反应在RT搅拌16小时。将反应混合物在氮气流下浓缩， 然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用 下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-25％，15CV；25-100％， 2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，得到黄/橙色固体(292mg)。将所得 物质溶于水(3mL)，然后取一等份(1mL)通过C4(12g)柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-22％，10CV；22-100％，2CV；100％，2CV。将第二等份(1mL)通过氰基柱(13 g)柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体 积)：2％，2CV；2-4％，2CV；4-8％，2CV；8-100％，2CV；100％， 2CV。再将一等份(1mL)通过C18(12g)柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-15％， 11CV；15-20％，1CV；20-100％，2CV；100％，2CV。合并来自三个 柱的所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到两批黄色固体(77mg 与163mg)。所得两批固体再通过C18(12g)柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-15％， 10CV；15-100％，2CV；100％，2CV。合并来自两个柱的所需级分，并 且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到黄色固体(53mg)。将所得物质再在下列 条件，通过HPLC纯化：固定相：XSelect CSH C18 30×100mm，5μm； 检测UV 220nm；流动相A：水+0.1％TFA；B：MeCN+0.1％TFA；梯度： 1-15％溶剂B，历经18分钟；流速：42mL/分钟。合并所需级分，并且真 空浓缩，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(26mg，3.0％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6+D2O)δ9.73(t,J＝5.4Hz,1H),8.65-8.54 (m,1H),8.40(s,1H),8.10(s,2H),7.49(d,J＝3.8Hz,1H),6.42(d,J＝3.8Hz, 1H),5.07(d,J＝4.5Hz,2H),4.79-4.62(m,4H),4.29-3.76(m,6H),3.56- 3.10(m,11H),2.23-1.56(m,7H),1.50-1.32(m,8H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝832[M+]，Rt＝1.38分钟，UV纯度＝99％。
实施例56-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-6-{[(1s,4s)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环 己基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002251
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(185mg，0.379mmol)和 CDI(92mg，0.57mmol)的DMF(1.5mL)混悬液在RT搅拌2小时。将反 应混合物加入至(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基][(1s,4s)-4-氨基环己基]氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇，中间体132(210mg， 0.475mmol)中，并且冲洗入DMF(1mL)。使反应在RT搅拌16小时。将 反应混合物真空浓缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱 用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV； 2-20％，15CV；20-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，并且冷 冻干燥，得到黄色固体(42mg)。将所得物质的样品(31mg)再通过C18(12 g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：2％，2CV；2-20％，10CV；20-100％，2CV；100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(30 mg，7.4％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.59-11.50(m,1H),9.74(t,J＝5.3 Hz,1H),8.40(s,1H),8.16-8.11(m,1H),7.93-7.84(m,1H),7.53(dd,J＝3.7, 2.6Hz,1H),7.35-7.02(m,2H),6.45-6.40(m,1H),5.77-5.47(m,2H),5.19 -5.07(m,2H),5.01-3.68(m,25H),3.26-3.12(m,4H),2.14-1.36(m,16H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝832[M+]，Rt＝1.38分钟，UV纯度＝99％。
实施例57-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- [(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)(甲基)氨基甲酰基]- 1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002261
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)和 CDI(100mg，0.61mmol)的DMF(2mL)混悬液在RT搅拌1小时。加入 (2R,3R,4R,5S)-6-{[3-(甲基氨基)丙基][(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基] 氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体134(241mg，0.492mmol)，然 后使反应在RT搅拌16小时。将反应混合物在氮气流下浓缩，然后将粗物 质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗 脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-20％，10CV；20-100％，2CV； 100％，2CV。合并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到产物， 为黄色固体(35mg，8.0％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6+D2O)δ9.79-9.71(m,1H),8.13-8.05 (m,2H),7.74-7.59(m,1H),7.49(d,J＝3.8Hz,1H),6.43(d,J＝3.8Hz,1H), 5.13-4.98(m,2H),4.80-4.63(m,4H),4.09-3.81(m,2H),3.66-3.14(m, 17H),3.05-2.85(m,3H),2.58-2.54(m,1H),2.13-1.83(m,2H),1.47-1.33 (m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝806[M+]，Rt＝1.30分钟，UV纯度＝97％。
实施例58-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- [(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙基)氨基甲酰基]-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002271
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)和 CDI(100mg，0.61mmol)的DMF(3mL)混悬液在RT搅拌1.5小时。将 所得溶液加入至(2R,3R,4R,5S)-6-[(2-氨基乙基)[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五 羟基己基]氨基]己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体136(94％，227mg， 0.462mmol)，并且用DMF(1.5mL)冲洗至烧瓶中。将反应在RT搅拌16 小时，然后真空浓缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-25％， 10.5CV；25％，2CV；25-34％，1CV；34-100％，2CV；100％，2CV。 合并所需级分，并且真空浓缩，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(101 mg，24％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.51-8.43(m,1H),8.19(dd,J＝8.7,1.3 Hz,1H),8.09(d,J＝8.8Hz,1H),7.39(d,J＝3.8Hz,1H),6.45(d,J＝3.8Hz,1H), 5.19-5.08(m,2H),4.86-4.75(m,4H),4.29-4.19(m,2H),3.99-3.47(m, 18H),1.67-1.49(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝778[M+]，Rt＝1.32分钟，UV纯度＝98％。
实施例59-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]- 1,3-二乙基-5-{[(14S,15R,16R,17R)-14,15,16,17,18-五羟基-12- [(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十八烷-1-基]氨 基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002281
将CDI(99mg，0.61mmol)加入至2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪- 2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实 施例34(217mg，0.444mmol)的DMF(1.5mL)混悬液中。使反应在RT搅 拌4小时，然后加入至(14S,15R,16R,17R)-1-氨基-12-[(2S,3R,4R,5R)- 2,3,4,5,6-五羟基己基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十八烷-14,15,16,17,18-五醇二 盐酸盐，中间体141(96％，289mg，0.467mmol)中，并且用DMF(1mL) 冲洗。反应在RT搅拌16小时。将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。 柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV； 2-6％，3CV；6％，1CV；6-13％，6CV；13％，5CV；13-20％，5CV； 20％，2CV；20-100％，2CV；100％，1CV。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到黄色固体(101mg)。将所得物质再通过C18(12g)快速柱色谱纯 化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％， 1.5CV；2-10％，3CV；10-12％，1CV；12％，6CV。合并所需级分，并 且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(77mg，15％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.58-11.46(m,1H),9.73(t,J＝5.2 Hz,1H),8.85(t,J＝5.6Hz,1H),8.50(s,1H),8.29-8.03(m,3H),7.52(dd, J＝3.7,2.6Hz,1H),7.33-7.12(m,2H),6.42(dd,J＝3.8,1.7Hz,1H),5.50- 5.28(m,1H),5.10(d,J＝5.2Hz,2H),4.90-4.62(m,5H),4.61-4.34(m,5H), 4.03-3.90(m,2H),3.81-3.33(m,33H),1.50-1.34(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝910[M+]，Rt＝1.50分钟，UV纯度＝99％。
实施例60-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- ({2-[4’-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙基)-[1,1’-联苯]- 4-基]乙基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙 酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002291
将CDI(93mg，0.57mmol)加入至2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪- 2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实 施例34(187mg，0.38mmol)的DMF(1.5mL)混悬液中。使反应在RT搅 拌5小时，然后加入(2R,3R,4R,5S)-6-({2-[4’-(2-氨基乙基)-[1,1’-联苯]-4-基] 乙基}[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸 盐，中间体146(94％，459mg，0.672mmol)和DMF(0.5mL)。使反应在 RT再搅拌17小时。将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用 MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：2％，2CV；2-9％， 6CV；9％，3CV；9-16％，6CV；16-17％，1CV；17％，16CV。合并 所需级分，并且冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(156mg，33％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.61-11.47(m,1H),9.73(t,J＝5.4 Hz,1H),8.92(t,J＝5.4Hz,1H),8.82-8.65(m,1H),8.49(s,1H),8.22-8.09 (m,2H),7.66-7.58(m,4H),7.52(dd,J＝3.7,2.5Hz,1H),7.41-7.03(m,6H), 6.42(dd,J＝3.8,1.8Hz,1H),5.70-5.30(m,2H),5.17-5.00(m,3H),4.77- 4.67(m,5H),4.14-4.00(m,4H),3.75-3.25(m,22H+HDO),3.10-3.01(m, 2H),2.94(t,J＝7.3Hz,2H),1.49-1.38(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝480[(M+H)2+]，Rt＝1.50分钟，UV纯度 ＝99％。
实施例61-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[(3S)-3-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]-3-氨 基甲酰基丙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓双(三氟乙酸) 三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002301
将2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例34(200mg，0.410mmol)和 CDI(100mg，0.614mmol)的DMF(2mL)混悬液在RT搅拌1.5小时，然 后加入至(2S)-4-氨基-2-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基} 丙基)氨基]丁酰胺三盐酸盐，中间体154(91％，323mg，0.480mmol)中， 并且用DMF(1mL)冲洗。将反应在RT搅拌16小时，然后真空浓缩。将 粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯 度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，2CV；5-25％，10.5CV；25％，2CV； 25-34％，1CV；34-100％，1CV；100％，2CV。合并所需级分，真空浓 缩，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(95mg，18％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.53-8.45(m,1H),8.21(dd,J＝8.8,1.4 Hz,1H),8.10(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(d,J＝3.8Hz,1H),6.45(d,J＝3.8Hz,1H), 5.15(s,2H),4.86-4.77(m,4H),4.26-4.17(m,2H),4.02-3.97(m,1H),3.89 -3.84(m,2H),3.80-3.74(m,2H),3.73-3.38(m,14H),3.24-3.11(m,2H), 2.33-2.21(m,4H),1.65-1.53(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝447[(M+H)2+]，Rt＝1.32分钟，UV纯度 ＝95％。
实施例62-2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6- {[4-(4-{3-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]-3-氨 基甲酰基丙基}苯基)丁基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓 双(三氟乙酸)三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002311
将CDI(30mg，0.19mmol)加入至2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪- 2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实 施例34(61mg，0.12mmol)的DMF(1mL)混悬液中。使反应在RT搅拌 1.5小时，然后加入另外的CDI(4mg，0.02mmol)。使反应在RT再搅拌 1小时，然后加入至4-[4-(4-氨基丁基)苯基]-2-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)- 2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]丁酰胺三盐酸盐，中间体156(88％， 106mg，0.125mmol)的DMF(1mL)混悬液中。再用DMF(1mL)冲洗反 应混合物至烧瓶中。使反应在RT搅拌16小时，然后真空浓缩。将粗物质 通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱 (％MeCN，柱体积)：2％，4CV；2-20％，30CV；20-100％，4CV；100％， 4CV。合并所需级分，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(11mg，6.2％)。
1H NMR(500MHz,D2O)δ8.28-8.24(m,1H),8.04-7.96(m,2H),7.54 (d,J＝3.9Hz,1H),7.28(d,J＝8.1Hz,2H),7.23(d,J＝8.1Hz,2H),6.56(d, J＝3.9Hz,1H),5.23(s,2H),4.77-4.71(m,4H),4.29-4.22(m,2H),4.04-3.97 (m,1H),3.89-3.83(m,2H),3.87-3.80(m,2H),3.82-3.74(m,2H),3.71- 3.63(m,4H),3.54-3.28(m,8H),3.24-3.09(m,2H),2.78-2.63(m,4H),2.33 -2.14(m,4H),1.77-1.64(m,4H),1.57-1.48(m,6H)。
LC/MS(系统D)：m/z(ESI+)＝513[(M+H)2+]，Rt＝1.32分钟，UV纯度 ＝95％。
实施例63-2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲 基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物的合成
Figure GDA0002817691790002321
将2-(氨基甲基)-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化 物，中间体159(84％，257mg，0.674mmol)和7-氯-2-(1H-咪唑-1-羰基)- 5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体16(85％，248mg，0.803mmol)的DMF (2.5mL)混悬液在RT搅拌20小时。加入另外的2-(氨基甲基)-6-羧基-1,3- 二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓盐酸盐氯化物，中间体159(84％，60mg， 0.16mmol)，然后使反应在RT搅拌6小时。将反应混合物真空浓缩，然 后将粗物质通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+甲酸，用下 列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：10％，1.5CV；10-26％，15CV；26-100％， 6CV；100％，1CV。合并所需级分，然后冷冻干燥，得到产物，为黄/绿 色固体(98mg，25％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.89(s,1H),9.54(t,J＝5.4Hz,1H), 8.40-8.36(m,1H),8.22-8.16(m,1H),7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.68(s,1H), 7.39(s,2H),5.13(d,J＝5.4Hz,2H),4.77-4.62(m,4H),1.46-1.35(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝442[M(35Cl)+]，444[M(37Cl)+]，Rt＝1.61 分钟，UV纯度＝99％。
实施例64-2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲 基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物的合成
Figure GDA0002817691790002322
将2-(氨基甲基)-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氢溴酸盐溴 化物，中间体83(388mg，0.950mmol)加入至7-溴-2-(1H-咪唑-1-羰基)-5H- 吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-胺，中间体164(243mg，0.791mmol)在DMF(2.5mL) 中的混合物中。将所得混合物在RT搅拌19小时。将反应混合物真空浓 缩，然后将粗物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+甲 酸，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，1.5CV；5-27％，12CV； 27-50％，3CV；50-83％，1.5CV；83-100％，0.5CV；100％，1CV。合 并所需级分，然后真空浓缩，得到产物，为黄/橙色固体(391mg，87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.91(s,1H),9.49(t,J＝5.4Hz,1H), 8.49-8.42(m,1H),8.20(dd,J＝8.6,1.2Hz,1H),8.01(d,J＝8.6Hz,1H),7.72 (s,1H),7.37(s,2H),5.15(d,J＝5.4Hz,2H),4.76(q,J＝7.2Hz,2H),4.70(q, J＝7.1Hz,2H),1.45-1.40(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝486[M(79Br)+]，488[M(81Br)+]，Rt＝1.67 分钟，UV纯度＝100％。
实施例65-2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲 基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002331
将2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧 基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓氯化物，实施例63(92mg，0.19mmol) 和CDI(47mg，0.29mmol)在DMF(2mL)中的混合物在RT搅拌1.5小 时。加入另外的CDI(40mg，0.25mmol)和DMF(1mL)，然后将反应在 RT搅拌15分钟。然后将反应混合物加入至(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基](哌啶-4-基)氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇 二盐酸盐，中间体112(145mg，0.289mmol)中，并且用DMF(0.5mL)冲 洗。将所得混合物在RT搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗 物质通过C18(30g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度 洗脱(％MeCN，柱体积)：5％，1.5CV；5-32％，28CV；52-100％，2CV；100％，2CV。合并所需级分，然后冷冻干燥，得到黄/棕色固体(29mg)。 将所得物质再通过C18(12g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用 下列梯度洗脱(％MeCN，柱体积)：0％，1.5CV；0-23％，13CV；23-40％， 5CV。合并所需级分，然后冷冻干燥，得到黄/橙色固体(16mg，7.6％)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.18-8.15(m,1H),8.11(d,J＝8.6Hz, 1H),7.82-7.77(m,1H),7.43(s,1H),5.20(s,2H),4.86-4.81(m,4H+HDO), 4.37-3.36(m,20H),3.08-2.92(m,1H),2.40-1.66(m,4H),1.64-1.55(m, 6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝852[M(35Cl)+]，854[M(37Cl)+]，Rt＝0.99 分钟，UV纯度＝99％。
实施例66-2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲 基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二 乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓三氟乙酸三氟乙酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002341
将2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧 基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓溴化物，实施例64(190mg，0.335 mmol)和CDI(81mg，0.50mmol)在DMF(2mL)中的混合物在RT搅拌2 小时。加入另外的CDI(60mg，0.37mmol)，然后使反应在RT搅拌0.5小 时。将反应混合物加入至(2R,3R,4R,5S)-6-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基](哌啶-4-基)氨基}己烷-1,2,3,4,5-五醇二盐酸盐，中间体112(90％，224 mg，0.402mmol)中，并且用DMF(1mL)冲洗。将所得混合物在RT搅拌 18小时。将反应混合物真空浓缩，然后将粗物质分两批通过C18(30g)快 速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN，柱体 积)：2％，1.5CV；2-22％，15CV；22-45％，6CV；45-100％，2CV。合 并来自两支柱的所需级分，然后冷冻干燥，得到产物，为黄色固体(36mg， 10％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.90(d,J＝2.4Hz,1H),9.51(t,J＝5.3 Hz,1H),8.31-8.09(m,3H),7.76-7.71(m,2H),7.37(s,2H),5.69-5.43(m, 2H),5.16(d,J＝5.3Hz,2H),4.93-4.37(m,14H),4.10-3.91(m,2H),3.87- 3.76(m,1H),3.75-3.56(m,6H),3.53-3.40(m,8H),3.20-3.14(m,1H),2.91 -2.76(m,1H),2.26-1.55(m,4H),1.47-1.41(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝896[M(79Br)+]，898[M(81Br)+]，Rt＝1.02 分钟，UV纯度＝100％。
实施例67-2-[({3-氨基-7-氰基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基) 甲基]-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸盐的合成
Figure GDA0002817691790002351
将TFA(991μL，13.0mmol)加入至3-氨基-7-氰基-5-{[2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧基]甲基}-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-甲酸盐，中间体166(150mg， 0.43mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中。将所得混合物在RT搅拌4.5小时。 将反应混合物真空浓缩，与甲苯(2×5mL)共沸，然后真空干燥，得到红/橙 色固体(114mg)。将部分(83mg)所得固体溶于MeOH(3mL)。加入NaOH 水溶液(5.0M，0.67mL，3.4mmol)，然后将所得混合物在60℃加热1小 时，然后在80℃加热1.5小时。使反应混合物冷却至RT，然后过滤。将 收集的固体用水洗涤，然后真空干燥，得到棕色固体(60mg)。将所得固体 溶于DMF(1mL)，然后加入CDI(78mg，0.48mmol)和咪唑盐酸盐(25mg， 0.24mmol)。将反应在RT搅拌10分钟。加入水(3mL)，然后将反应在RT 搅拌5分钟。通过过滤收集固体，用水洗涤，然后真空干燥，得到棕色固 体(39mg)。将所得固体溶于DMF(1mL)，然后加入2-(氨基甲基)-1,3-二 乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓碘化物，中间体36(45mg，0.13mmol)。 将所得混合物在RT搅拌2.5小时，然后真空浓缩。将粗物质通过C18(12 g)快速柱色谱纯化。柱用MeCN:H2O+0.1％TFA，用下列梯度洗脱(％MeCN， 柱体积)：2％，2CV；2-37％，18CV；37-48％，1CV；48-89％，3CV； 89-100％，1CV；100％，2CV。合并所需级分，并且冷冻干燥。将所得物 质再通过制备HPLC纯化(方法A)。合并所需级分，并且冷冻干燥，得到 产物，为黄色固体(3.5mg，1.7％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.41(t,J＝5.0Hz,1H),8.34(s,1H), 8.23(s,1H),7.89(d,J＝9.1Hz,1H),7.51(d,J＝2.3Hz,1H),7.21(dd,J＝9.1, 2.3Hz,1H),7.09(s,2H),5.01(d,J＝5.4Hz,2H),4.66-4.56(m,4H),3.84(s, 3H),1.38-1.28(m,6H)。
LC/MS(系统C)：m/z(ESI+)＝419[M+]，Rt＝1.85分钟，UV纯度＝99％。
C.生物实施例
实施例68-测定ENaC阻断剂在人支气管上皮细胞中效力的短路电 流分析法
细胞培养
将人支气管上皮细胞(HBEC)(Lonza,UK)用Coote等人，(2008)描述 的方法的修改方法培养。将细胞接种在塑料T-75烧瓶中，在补充牛垂体提 取物(52ng/mL)、氢化可的松(0.5μg/mL)、人重组表皮生长因子(0.5ng/mL)、 肾上腺素(0.5ng/mL)、转铁蛋白(10ng/mL)、胰岛素(5ng/mL)、视黄酸(0.1 ng/mL)、三碘甲状腺原氨酸(6.5ng/mL)、庆大霉素(50μg/mL)和两性霉素 B(50ng/mL)的支气管上皮细胞生长培养基(BEGM)(Lonza,UK)中生长。每48小时更换培养基，直到细胞达90％汇合为止。然后细胞进行传代并 且接种(8.25×105个细胞/杯(insert))至聚碳酸酯SnapwellTM杯(Costar,UK) 的分化培养基中，其中包含含有50％DMEM的BGEM和如上的相同补充 物，但没有三碘甲状腺原氨酸，并且最终视黄酸浓度为50nM(全反式视黄 酸；Sigma-Aldrich,UK)。开始7天将细胞保持浸没在培养物中，然后在其 余的培养时间将其暴露于顶部空气界面。从建立ALI的第一天开始，在 HBEC中加入包含已补充庆大霉素(50μg/mL)和两性霉素B(50ng/mL)的 2％Ultroser G(Pall BioSepra,France)的DMEM：HAMS F-12(1:1)培养基。 在建立ALI后第14-21天，用该细胞进行短路电流分析。在所有培养阶段， 细胞均保持在空气培养箱的37℃和5％CO2中。
短路电流(ISC)测定法
将Snapwell杯放入Costar垂直扩散箱(Costar Vertical Diffusion Chambers)(Costar,UK)并且浸入维持37℃的连续通气的林格氏溶液中(含 5％CO2的O2；pH 7.4)，其中包含(mM)：120NaCl，25NaHCO3，3.3KH2PO4， 0.8K2HPO4，1.2CaCl2，1.2MgCl2和10葡萄糖。所有用的生理盐溶液的 溶液重量克分子渗透浓度为280-300mOsm/kg H2O。细胞的箝制电压为0mV(EVC4000型，WPI)。通过以30秒间隔施加2mV脉冲测定跨上皮电 阻(RT)，并且通过Ohm定律计算RT。用PowerLab工作站(ADInstruments, UK)记录数据。
从1000-倍储备溶液(在DMSO中制备)加入ENaC阻断剂化合物至顶 室中，使针对基础ISC的抑制达到累积浓度响应。浓度响应完成时，加入 超过最大浓度的阿米洛利(amiloride)(10μM)。用GraphPad Prism v6.05 计算诱导总阿米洛利敏感性ISC抑制50％时的试验化合物浓度(IC50)。结 果示于表2，从其中可见本发明化合物具有ENaC抑制活性。
表2
Figure GDA0002817691790002371
Figure GDA0002817691790002381
Figure GDA0002817691790002391
NR-未记录
实施例69-支气管肺泡灌洗(BAL)方法
对体重225-250g的大鼠经气管内施用在5％右旋糖中的0.1mg/mL ENaC抑制剂溶液。用体积1mL/Kg。6小时后，用3×4mL无菌盐水灌洗 肺。随后取1mL等份急速冷冻。切下肺，称重并且急速冷冻。随后用 LC/MS/MS生物分析法测定BAL和肺组织中的化合物水平。
结果示于表3并且证实在施用后6小时有显著量的本发明化合物存在 于肺。
表3
实施例编号 BAL@6小时(ng/mL)
50 260
52 302
54 139
55 284
56 283
57 283
58 256
59 197
60 176
61 167
62 140
实施例70-绵羊粘膜纤毛清除(MCC)
如上述，在有意识的绵羊中测定MCC(Coote等人，2009；Hirsh等 人，2008)。简言之，在经过修改的推车上，用特制全身式安全带将成年绵 羊(25-45kg)固定在垂直向上位置。将动物头固定，并且经过鼻孔用2％利 多卡因(lidaine)诱导局部麻醉后，在动物鼻插入标准气管内插管(直径7.5 mm，Mallinckrodt,St.Louis,MO)。将试验化合物和载体作为雾化水溶液， 通过气管内插管递送体积3mL。所有气雾剂均用Raindrop雾化器(NellcorPuritan Bennett,Carlsbad,CA)产生，其产生质量中间空气动力直径 (MMAD)约1.1μm的液滴。雾化器的出口连接T型接头，一端连接呼吸 器(Harvard Apparatus Inc.,Holliston,MA)。在呼吸器的吸器循环开始时 启动系统1秒，设定吸气/呼气比例1:1和呼吸速率每分钟20次。用气雾 化的标记锝的硫胶体(99mTc-SC)测定多种剂量的试验化合物或对照对 MCC的作用。将在总体积2mL无菌盐水中的约20毫居里的99mTc-SC 的置入雾化器中。用潮气量500mL来递送99mTc-SC达3分钟。由伽马 相机(Dyna Cam,Picker Corp.,Nothford,CT)连接计算机来记录和分析 99mTc-SC的清除，历时2小时。99mTc-SC雾化后，立即抽出动物的插管，并且以其自然垂直向上位置放置在伽马相机下方，以便使影像视野与 动物脊柱垂直。取得基线影像后，历经2小时，第一小时每间隔5分钟， 然后下一个小时每间隔15分钟，获得一系列影像。获得所有影像并且存放 在计算机中用于分析。在对应于动物右肺的影像追踪“热点区(area of interest)”，并且记录计数。分析中不包括左肺，因为其对应影像与胃部重 迭，并且吞下的放射性标记的粘液可能影响计数。校正衰退的计数，并且 以相对于基线影像清除的放射活性的百分比表示(清除％)。比较施用放射 性气雾剂后60分钟和120分钟时的99mTc-SC清除的差异。
结果示于图1-13，其均显示，所有试验化合物均在施用试验化合物后 4小时，历经120分钟的99mTc-SC清除量显著高于接受水处理的绵羊的 清除量。重复施用实施例50化合物。在这种情况中，施用的化合物以12 小时间隔，一天两次(BiD)剂量3μg/kg，共7剂(即历经3.5天)。在施用最 后一剂试验化合物后4小时，开始测定历经120分钟的99mTc-SC清除量。 结果示于图3的B，其与单剂13μg/kg、3μg/kg BiD剂量和单剂水比较。
上述绵羊粘膜纤毛清除模型是研究粘液清除的模型，因此是一种研究 试验化合物在特征为在肺产生粘液的疾病和病症(例如囊性纤维化、慢性支 气管炎、支气管扩张、严重哮喘和原发性纤毛运动障碍)中的作用的模型。 因此，图1-13所示的结果显示试验化合物可能用于治疗此类病症以及其它 ENaC介导的疾病和病症。
本发明人还在该模型中比较了某些本发明化合物与其中吡咯并吡嗪部 分被常见的6-氯-3,5-二氨基吡嗪部分(其出现在如上述讨论的大多数现有 技术化合物中)代替，但其它结构均相同的化合物。它们还在绵羊MCC模 型中显示，与相应的6-氯-3,5-二氨基吡嗪化合物相比，试验的通式(I)化合 物的粘膜纤毛清除显著升高。这表明本发明化合物与现有技术化合物相比 具有更优良的体内活性。
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Claims (35)

1.通式(I)化合物及其盐：
Figure FDA0003489491530000011
其中
X-是阴离子；
R1是：
i.H或卤代；或
ii.-L1R10，其中
L1是：
-Z1-、-Q1-、-Z1Q1-、-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-、-Q1Q2Z1Q3Z2-、-Z1Q1OQ2OQ3-；
-OZ1-、-OQ1-、-OZ1Q1-、-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2-、-OQ1Q2Z1-、-OQ1Q2Z1Q3Z2-、-OZ1Q1OQ2OQ3-；
-C(O)Z1-、-C(O)Q1-、-C(O)Z1Q1-、-C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、-C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；其中
Z1、Z2和Z3各自独立地是C1-12亚烷基，其任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OH和NR15R16；
R15和R16各自独立地是H或C1-6烷基；
Q1、Q2和Q3各自独立地选自苯基、具有至少一个选自N、O和S的环杂原子的5和6-元杂芳基、4至8-元碳环基和具有至少一个选自N、O和S的环杂原子的4至8-元杂环基；
R7和R8各自独立地选自H和任选被一个或多个卤代或OH基团取代的C1-12烷基，或
当一个R7与一个R8或两个R8基团连接至氮原子时，它们可以与氮原子一起组合形成5-或6-元杂环，其除了与R7和R8连接的氮原子外任选包含一个或多个选自N、O和S的杂原子；
R10是H、-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2、-N(R7)-C(O)OR8、OR7或-C(O)OR7；
R9是H或C1-6烷基；并且
R7和R8如本权利要求上述定义；或
iii.-R12、-OR12、-C(O)OR12或-C(O)NR12R13；其中
R12和R13各自独立地是H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或C3-8杂环基，其中C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OR7、C(O)OR7、-N(R7)R8和C(O)N(R7)R8，并且其中C3-8环烷基和C3-8杂环基任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OR7、C(O)OR7、-N(R7)R8、C(O)N(R7)R8和氧代；其中
R7、R8和R9如本权利要求上述定义；
R2和R3各自独立地是C1-10烷基，其中一个或多个-CH2-基团任选被-O-、-S-或-NR7-代替，条件是相邻-CH2-基团不被-O-、-S-或-NR7-代替，并且其任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤代、OH、SH、N(R7)R8、芳基、杂芳基、-C(O)OR7、-C(O)N(R7)R8、OR7和-N(R7)R8，其中R7和R8如本权利要求上述定义；
R4是H、卤代、氰基或C1-3烷基；并且
R5是H或甲基。
2.权利要求1的化合物，其是通式(IA)化合物：
Figure FDA0003489491530000031
其中R1、R2、R3、R4、R5和X-如通式(I)的定义；
或通式(IB)化合物：
Figure FDA0003489491530000032
其中R1、R2、R3、R4、R5和X-如通式(I)的定义。
3.权利要求1或权利要求2的化合物，其中R1是：
H、卤代、-R12、-C(O)OR12或-OR12。
4.权利要求3的化合物，其中R1是H、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
5.权利要求1或权利要求2的化合物，其中R1是-L1R10。
6.权利要求5的化合物，其中L1是：
-Z1-、-Q1-、-Z1Q1-、-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-、-Q1Q2Z1Q3Z2-；
-OZ1-、-OZ1Q1-、-OZ1Q1Z2-；
-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、-C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-或-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-。
7.权利要求6的化合物，其中L1是：
-Z1-、-Q1-、-Q1Z1-、-Q1Q2-、-Q1Q2Z1-；
-OZ1-；
-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2-或-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-。
8.权利要求5的化合物，其中R10是H、-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2、-N(R7)C(O)OR8、-N(R7)-C(O)-(C1-3亚烷基)-N+(R8)3、-N+(R8)3、OR7或-C(O)OR7。
9.权利要求8的化合物，其中R10是H、-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2、-N(R7)C(O)OR8或-C(O)OR7。
10.权利要求5的化合物，其中R10是H，并且：
a)L1是-OZ1，其中Z1是C1-4亚烷基；或
b)L1是-Q1-、-Q1Q2-或-C(O)N(R7)Q1-，其中Q1基团或针对-Q1Q2-的Q2基团是通过环氮原子连接至R10基团的含氮杂环基；或
c)L1是：
-Z1-、Q1、-Q1Z1-、-Q1Q2、-Q1Q2Z1-；
-OZ1-、-OQ1Z1-、-OQ1Q2Z1-；
-C(O)Z1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2Z1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-；或
d)L1是：
-Q1Z1-、-Z1Q1Z2-、-Q1Q2Z1-；
-OQ1Z1-、-OZ1Q1Z2-、-OQ1Q2Z1-；
-C(O)Z1Q1Z2-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2Z1-、-C(O)Q1N(R7)C(O)Z1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-；
-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；并且
环状基团Q1、Q2或Q3是通过环氮原子连接至Z1或Z2的4至8-元含氮杂环基；或
e)L1包含部分Z1、Z2或Z3，其直接连接至R10并且是被2至11个OH基团取代的C1-12亚烷基。
11.权利要求9的化合物，其中R10是H，并且L1包含部分Z1、Z2或Z3；其中Z1、Z2或Z3直接连接至R10并且是-CH2[CH(OH)]4-CH(OH)-，以便基团Z1R10、Z2R10或Z3R10是部分-CH2[CH(OH)]4-CH2OH。
12.权利要求5的化合物，其中：
a)R10是-C(O)OR7；并且
L1是：
-Q1-或-Q1Q2-，其中Q1或针对-Q1Q2-的Q2是4至8-元碳环基或4至8-元杂环基，并且通过环碳原子连接至R10；或
C(O)N(R7)Q1，其中Q1是4至8-元碳环基或4至8-元杂环基，并且通过环氮原子连接至R10；或
b)R10是-N(R7)R8、-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2或-N(R7)C(O)OR8-；并且
L1是：
-Z1-、
-OZ1-；
-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2；
-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-或-C(O)Q1-，其中Q1是4至8-元碳环基或4至8-元杂环基并且通过环碳原子连接至R10；或
C(O)Q1Z1-。
13.权利要求12的化合物，其中R10是-N(R7)R8；并且
R7和R8各自独立地是H或任选被一个或多个OH基团取代的C1-8烷基。
14.权利要求13的化合物，其中R7和/或R8是部分-CH2[CH(OH)]4-CH2OH。
15.权利要求13或权利要求14的化合物，其中R10是-N{CH2[CH(OH)]4-CH2OH}2。
16.权利要求12的化合物，其中R10是-N(R7)C(＝NR9)N(R8)2；并且
R7和R9各自是H或C1-4烷基；并且
一个或两个R8基团是-CH2[CH(OH)]4-CH2OH。
17.权利要求16的化合物，其中R2和R3各自独立地是C1-10烷基，其中一个或多个-CH2-基团任选被-O-或-S-代替，并且其如权利要求1定义任选被取代。
18.权利要求17的化合物，其中R2和R3相同或不同，并且均是未取代的C1-4烷基。
19.权利要求1的化合物，其中R4和/或R5是H。
20.权利要求1的化合物，其具有选自下列的阳离子：
1.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-氟-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
3.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-氯-1-乙基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
4.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
5.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
6.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
7.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
8.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
9.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
10.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-(甲酸根基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
11.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-(氨基甲酰基甲基)-1-乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
12.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
13.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-(2-羟基乙基)-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
14.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基}-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
15.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-苄基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
16.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-6-氯-1-乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
17.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-1-乙基-6-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
18.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-3-苄基-1-[2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
19.2-[({3-氨基-6-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1-乙基-6-甲氧基-3-甲基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
20.2-[({3-氨基-7-甲基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
21.2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-氯-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
22.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
23.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
24.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
25.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
26.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(1-{1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
27.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-氨基乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
28.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-氨基丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
29.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-氨基丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
30.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-(哌啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
31.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-[1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
32.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(2-胍基乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
33.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(3-胍基丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
34.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
35.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓甲酸；
36.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-({1-[(叔丁氧基)羰基]哌啶-4-基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
37.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
38.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
39.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-氨基丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
40.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-[(哌啶-4-基)氨基甲酰基]-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
41.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-氨基哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
42.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
43.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
44.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙氧基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
45.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
46.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-{1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
47.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-(1-{1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}-1H-吡唑-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
48.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
49.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-({1-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]哌啶-4-基}氨基甲酰基)-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
50.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
51.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[2-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
52.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-[4-({双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}甲基)哌啶-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
53.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3R)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
54.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3S)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
55.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-{[(1r,4r)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
56.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-{[(1s,4s)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
57.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)(甲基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
58.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-[(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙基)氨基甲酰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
59.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-5-{[(14S,15R,16R,17R)-14,15,16,17,18-五羟基-12-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十八烷-1-基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
60.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-({2-[4’-(2-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}乙基)-[1,1’-联苯]-4-基]乙基}氨基甲酰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
61.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[(3S)-3-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]-3-氨基甲酰基丙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
62.2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-{[4-(4-{3-[(3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙基)氨基]-3-氨基甲酰基丙基}苯基)丁基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
63.2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
64.2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-羧基-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
65.2-[({3-氨基-7-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
66.2-[({3-氨基-7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
67.2-[({3-氨基-7-氰基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-1,3-二乙基-6-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
和权利要求1所定义的阴离子X-。
21.权利要求1的化合物，其具有下列阳离子：2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓。
22.权利要求1的化合物，其具有下列阳离子：2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰氨基)甲基]-5-[4-({双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}甲基)哌啶-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓。
23.权利要求1的化合物，其中X-是氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、甲酸根、乙酸根、三氟乙酸根、富马酸根、柠檬酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、扁桃酸根、甲磺酸根和对甲苯磺酸根。
24.制备权利要求1至23中任一项的通式(I)化合物的方法，其包括：
A.将通式(II)化合物或其盐：
Figure FDA0003489491530000121
其中R4和R5如权利要求1中的定义；
或通式(IV)的活化化合物：
Figure FDA0003489491530000122
其中R4和R5如权利要求1中的定义；
与通式(III)的盐反应：
Figure FDA0003489491530000131
其中R1、R2和R3如通式(I)的定义；
并且X-如权利要求1中的定义，并且其可以与通式(I)产物的X-相同或不同；或者
B.将通式(XVIII)化合物：
Figure FDA0003489491530000132
其中R1、R3、R4和R5如通式(I)的定义；
与通式(IX)化合物反应：
R2-X1 (IX)
其中R2如通式(I)的定义，并且X1是卤代；或者
与通式(IXA)化合物反应：
R2a-X1 (IXA)
其中X1如通式(IX)的定义，并且R2a是保护的R2基团；或者
C.将其中R3包含-C(O)OR7基团，其中R7不是H，或-C(O)N(R7)R8基团的通式(I)化合物通过水解转化为其中R3包含-C(O)OH或C(O)O-基团的通式(I)化合物；或者
D.将其中R1是L1R10，其中R10为-N(R7)-C(O)OR8的通式(I)化合物通过水解转化为其中R10是-NHR7的通式(I)化合物；或者
E.将其中R1是L1R10，并且L1包含通过环氮原子连接至R10的部分Q1、Q2或Q3；并且R10是C(O)OR7的通式(I)化合物通过水解转化为其中R1是L1R10并且R10是H的通式(I)化合物；或者
F.将其中R1是L1R10并且R10是-NH2的通式(I)化合物，通过与醛、缩醛或环状半缩醛化合物进行还原氨基化，转化为通式(I)化合物，其中R1是L1R10并且R10是N(R7)R8，其中R7是CH2-R7a，并且R8是CH2-R8a，并且R7a和R8a之一是任选被一个或多个卤代或OH基团取代的C1-11烷基；并且R7a和R8a中另一个是H或任选被一个或多个卤代或OH基团取代的C1-11烷基；或者
G.将其中R1是L1R10；并且L1包含通过环氮原子连接至R10的部分Q1、Q2或Q3；并且R10是H的通式(I)化合物，通过与醛、缩醛或环状半缩醛等效化合物进行还原氨基化，转化成通式(I)化合物，其中R1是L1R10；并且L1包含通过环氮原子连接至Z1、Z2或Z3部分的部分Q1、Q2或Q3，其中Z1、Z2或Z3是任选被一个或多个卤代或OH基团取代的CH2-C1-11烷基；并且R10是H；或者
H.将其中R1是L1R10并且R10是NH2的通式(I)化合物通过与脒或其盐反应转化为其中R1是L1R10并且R10是-NHC(＝NR9)N(R8)2的通式(I)化合物；或者
I.将其中R1是C(O)OH的通式(I)化合物通过与胺或铵盐反应转化为：
通式(I)化合物，其中R1是-C(O)NR12R13，其中R12和R13如权利要求1中的定义；或
通式(I)化合物，其中R1是L1R10并且
L1是-C(O)N(R7)Z1-、-C(O)N(R7)Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1-、-C(O)N(R7)Q1Q2-、-C(O)N(R7)Q1Q2Z1-、-C(O)N(R7)Z1Q1Q2Z2-、-C(O)N(R7)Z1O(CH2CH2O)nZ2--C(O)N(R7)Z1O(CH2O)nZ2-、-C(O)N(R7)Z1Q1Z2N(R8)Z3-、-C(O)N(R7)Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Q1Z1N(R8)Z2-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3-、-C(O)N(R7)Z1Q1OQ2OQ3Z2-；或
L1是-C(O)Q1-、-C(O)Q1Z1-、-C(O)Q1Q2-、-C(O)Q1Q2Z1-，其中Q1是通过环氮原子连接至-C(O)部分的杂环基环。
25.权利要求1的化合物，其用于医药。
26.权利要求1的化合物，其用于治疗或预防呼吸疾病和病症、皮肤病症或眼病症。
27.权利要求1至23中任一项的化合物在制备用于治疗或预防呼吸疾病和病症、皮肤病症或眼病症的药物中的用途。
28.权利要求26所用的化合物，其中：
呼吸疾病和病症选自囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、肺气肿、支气管扩张、哮喘和原发性纤毛运动障碍；
皮肤病症选自银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病；并且
眼病症是干眼病。
29.权利要求27的用途，其中：
呼吸疾病和病症选自囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、肺气肿、支气管扩张、哮喘和原发性纤毛运动障碍；
皮肤病症选自银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病；并且
眼病症是干眼病。
30.药物组合物，其包含权利要求1至23中任一项的化合物和可药用赋形剂。
31.权利要求30的药物组合物，其配制为用于吸入的干粉、气雾剂或喷雾剂，用于鼻、支气管或口腔施用。
32.权利要求30或权利要求31的药物组合物，其还包含选自下列的另外的活性剂：
β2肾上腺素受体激动剂；
组胺H1受体拮抗剂或H4受体拮抗剂；
阿法链道酶；
皮质类固醇；
白三烯拮抗剂；
伊维卡托和CFTR校正剂，其选自鲁玛卡托和特赛卡托；
TMEM16A增效剂；和
抗生素。
33.产品，其包含权利要求1至23中任一项的化合物和另外的可用于治疗或预防呼吸病症的活性剂，作为组合的制剂用于同时、依次或分开用于治疗呼吸疾病或病症，其中另外的活性剂选自：
β2肾上腺素受体激动剂；
组胺H1受体拮抗剂或H4受体拮抗剂；
阿法链道酶；
皮质类固醇；
白三烯拮抗剂；和
抗生素。
34.权利要求26所用的化合物，其与选自下列的另外的活性剂组合：
β2肾上腺素受体激动剂；
组胺H1受体拮抗剂或H4受体拮抗剂；
阿法链道酶；
皮质类固醇；
白三烯拮抗剂；和
抗生素。
35.权利要求32的药物组合物或 权利要求33的产品或 权利要求34所用的化合物，其中另外的活性剂是：
β2肾上腺素受体激动剂，其选自间羟异丙肾上腺素、异丙去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、舒喘灵、沙丁胺醇、福莫特罗、沙美特罗、茚达特罗、特布他林、奥西那林、甲磺酸比托特罗和吡布特罗；
组胺H1受体拮抗剂，其选自氯雷他定、西替利嗪、地氯雷他定、左西替利嗪、非索非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀和氯苯那敏；
皮质类固醇，其选自波尼松、波尼松龙、氟尼缩松、丙酮曲安奈德、二丙酸倍氯米松、布地奈德、丙酸氟替卡松、糠酸莫米松和糠酸氟替卡松；
白三烯拮抗剂，其选自孟鲁司特和扎鲁司特；或者
伊维卡托或CFTR校正剂，其选自鲁玛卡托和特赛卡托。
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