CN114929683A - 作为钙激活氯化物通道调节剂的吡啶衍生物 - Google Patents

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J·D·哈格瑞夫
T·B·施菲尔德
M·史密斯
C·史汀生
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Abstract

本发明提供通式(I)的化合物：
Figure DDA0003486135140000011
其中R1、R2、R3、R4、R5、X1、X2和X3如本文所定义，所述化合物可用于治疗呼吸系统疾病和由TMEM16A调节的其他疾病和病症。

Description

作为钙激活氯化物通道调节剂的吡啶衍生物
技术领域
本发明涉及具有作为钙激活氯通道(CaCC)、TMEMl6A的正调节剂的活性的新化合物。本发明还涉及制备所述化合物和含有它们的药物组合物的方法，以及这些化合物在治疗其中TMEM16A起作用的疾病和病症，特别是呼吸系统疾病和病症中的用途。
背景技术
人类每天可以吸入多达12,000L的空气，随之而来的是空气传播的病原体(如细菌、病毒和真菌孢子)进入呼吸道的可能性。为了防止这些空气传播的病原体，肺已经进化出先天防御机制，以最大限度地减少呼吸道感染和定殖的可能性。一种这样的机制是粘液清除系统，分泌的粘液通过纤毛的协调跳动和咳嗽清除由此被向上推出气道。这种持续的肺部“清洁”不断清除吸入的颗粒和微生物，从而降低感染风险。
近年来，粘液凝胶的水合作用对于清除粘液至关重要(Boucher 2007；Matsui etal，1998)已经变得很明显。在正常、健康的气道中，粘液凝胶通常含有97％w/v的水和3％w/v的固体，在这种情况下，粘液会通过粘液纤毛作用清除。气道黏膜的水合作用受许多离子通道和转运蛋白的协同活性调节。通过囊性纤维跨膜传导调节因子(CFTR)和钙激活氯化物传导(CaCC；TMEM16A)介导的阴离子(Cl-/HCO3 -)分泌和通过上皮Na+通道(ENaC)的Na+吸收之间的平衡决定气道粘膜的水合状态。当离子通过上皮运输时，水在渗透压上必须跟随，因此液体被分泌或被吸收。
在呼吸系统疾病如慢性支气管炎和囊性纤维化中，随着水合作用减少和粘液清除降低，粘液凝胶的固体百分比增加(Boucher，2007)。在囊性纤维化中，在CFTR功能丧失突变减弱气道分泌液体能力的位置，固体百分比可以增加到15％，据信这会导致小气道堵塞和粘液清除失败。增加气道粘液水合作用的策略包括刺激阴离子从而分泌液体或抑制Na+吸收。为此，刺激TMEM16A通道的活性将增加阴离子分泌，从而增加气道粘膜中的积液，水合粘液并增强粘液清除机制。
TMEM16A，也称为Anoctamin-1(Ano1)，是钙激活氯离子通道的分子鉴定(Caputoet al，2008；Yang et al，2008)。TMEM16A通道响应细胞内钙离子水平的升高而打开，并允许氯离子、碳酸氢根离子和其他阴离子通过细胞膜双向流动。已经提出功能性TMEM16A通道以调节跨上皮离子转运、胃肠蠕动、伤害感受和细胞迁移/增殖(Pedemonte&Galietta，2014)。
TMEM16A通道由不同器官，包括肺、肝、肾、胰腺和唾液的上皮细胞所表达。在气道上皮中，TMEM16A在产生粘液的杯状细胞、纤毛细胞和粘膜下腺中高水平表达。从生理上讲，TMEM16A被调动细胞内钙的刺激，特别是嘌呤能激动剂(ATP、UTP)激活，所述嘌呤能激动剂由呼吸道上皮响应由呼吸和其他机械刺激(如咳嗽)引起的周期性剪切应力而释放。除了增加阴离子分泌导致气道水合作用增强外，TMEM16A的激活在碳酸氢盐分泌中也起着重要作用。据报道，碳酸氢盐分泌是粘液特性和控制气道腔pH值的重要调节剂，因此可以控制天然抗菌剂(如防御素)的活性(Pezzulo et al，2012)。
通过细胞内钙的升高间接调节TMEM16A，已经在临床上进行了探索，例如denufosol(Kunzelmann&Mall，2003)。尽管在小型患者队列中观察到了令人鼓舞的初步结果，但这种方法在较大的患者队列中并未带来临床益处(Accurso et al 2011；Kellermanet al 2008)。这种缺乏临床效果的原因只是阴离子分泌的短暂升高，这是由于地纽福索在上皮细胞表面的半衰期短和受体/通路脱敏，以及升高细胞内钙的不良影响，例如增加释放来自杯状细胞的粘液(Moss，2013)。在低钙升高水平下直接作用于TMEM16A以增强通道开放的化合物有望持久增强患者的阴离子分泌和粘液纤毛清除并改善先天防御。由于TMEM16A活性与CFTR功能无关，TMEM16A正调节剂可能为所有CF患者和以粘液充血为特征的非CF呼吸系统疾病(包括慢性支气管炎和严重哮喘)提供临床益处。
TMEM16A的调节被认为是一种治疗口干(口干症)的方法，口干是由斯耶格伦氏综合征和放射疗法中的唾液腺功能障碍、干眼症、胆汁淤积和胃肠动力障碍引起的。
我们的申请WO2019/145726涉及作为TMEM16A正调节剂的化合物，因此可用于治疗TMEM16A在其中起作用的疾病和病症，特别是呼吸系统疾病和病症。
本发明人开发了另外的具有作为TMEM16A正调节剂的优异活性的化合物。此外，与WO2019/145726中例示的化合物相比，至少一些化合物具有一种或多种优点。本发明的一些化合物具有增加的代谢稳定性，这表现为它们从人微粒体和肝细胞的低清除率。这使得它们特别适合口服施用，因为较低的首关代谢，导致增加的口服生物利用度和给定药理作用的较低剂量。本发明的其他化合物具有与WO2019/145726中例举的化合物相比降低的代谢稳定性，降低的程度使它们特别适合吸入施用。血液中体内半衰期的缩短确保了直接施用于肺部的化合物与身体其他部位的TMEM16A相互作用的机会减少，因此潜在的副作用将被最小化。本发明的化合物还具有由log D值表示的足够的水溶性，还导致适度的亲脂性，这在制备药物制剂时是有利的。
发明内容
在本发明的第一方面，提供一种通式(I)的化合物，包括其所有互变异构形式所有对映异构体、同位素变体以及盐和溶剂化物：
Figure BDA0003486135130000031
其中：
R1选自H、乙炔基、CN、甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯二氟甲基、二氯氟甲基和羟基甲基；
R2选自甲基和CH2OH；
R3选自H和甲基；或者
R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成任选地在R1基团之外还被一个或多个选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、卤代和OH的取代基取代的3至10元碳环或含氧杂环系统之一；或者
R1、R2和R3与它们所连接的碳原子一起结合形成任选地被一个或多个选自OH、卤代、C1-4烷基和C1-4卤代烷基的取代基取代的5至8元桥碳环或杂环系统；
R4为H或卤代；
R5选自H、卤代、CN和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的C1-4烷基；
X1为CR6或N；
R6选自H、卤代、CN和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的C1-4烷基；
X2为CR7或N；
R7为H、卤代、CN、任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的3至7元碳环或杂环系统、或任选地被一个或多个选自卤代、OH和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的3至7元碳环或杂环系统的取代基取代的C1-4烷基；
X3为CR8或N；
R8选自H、卤代、CN和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的C1-4烷基。
由于通式(I)的化合物是TMEM16A的正调节剂，它们可用于治疗其中TMEM16A的调节起作用的疾病和病症，尤其是呼吸系统疾病和病症。
具体实施方式
在本说明书中，除非上下文因表达语言或必要的暗示而另有要求，否则“包含”一词或其变体(comprises、comprising)均以包容性的方式使用，即指定所述特征的存在但不排除在本发明的各种实施例中其他特征的存在或添加。
在此引用的所有文献和专利文件都尽可能完整地以引用方式并入。
在本说明书中，对“药物用途”的提及是指用于向人或动物，特别是人或哺乳动物，例如家养或家畜哺乳动物施用以治疗或预防疾病或医学病症的用途。术语“药物组合物”是指适用于药物用途的组合物，而“药用的”是指适用于药物组合物的药剂。其他类似术语应作相应解释。
通式(I)的化合物的盐和溶剂化物(如水合物)是合适的药用的。合适的药用盐是本领域技术人员公知的，并且例如由Gupta等人(2018)描述。通式(I)的化合物的一些特别合适的盐包括碱性加成盐，如钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、锌盐、镁盐和其他金属盐，以及胆碱、二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺和葡甲胺盐。可替代地，可以形成酸加成盐，例如盐酸盐、甲磺酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐和富马酸盐。合成中间体的盐不需要是药用的。
在本说明书中，术语“C1-4”烷基是指具有1至4个碳原子的直链或支链的完全饱和烃基。该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。其他烷基，例如C1-6烷基如上所定义，但包含所述数目的碳原子。
术语“3至10元碳环”是指包含3至10个环碳原子的非芳族烃环系统。碳环系统可以是单环或可以包含两个可以稠合或呈螺排列或桥接的环，其中桥中的碳原子包括在环碳原子数中。实例包括环烷基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基，以及螺系统和桥接系统，如双环[1.1.1]戊基。碳环系统可以包含指定的其他数量的环原子，例如5至8个环原子或3至7个环原子。
在本说明书的上下文中，术语“环烷基”是指如上定义的完全饱和的碳环系统。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基，以及桥接的环烷基体系，如双环[1.1.1]戊基。
在本说明书的上下文中，术语“3至10元杂环”和“3至10元杂环基”是指包含3至10个环原子的非芳族环系统，所述环原子包括至少一者选自N、O和S的杂原子。杂环系统可以包含一个或多个碳-碳双键，但优选完全饱和。杂环系统可以是单环或可以包含两个或三个可以稠合或呈螺排列或桥接的环，其中桥原子包括在环原子数中。含氧杂环系统包含至少一者氧作为环原子和任选的一个或两个选自O、N和S的其他杂原子。3至10元杂环系统的实例包括氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基和2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基。杂环系统可以包含指定的其他数量的环原子，例如5至8个环原子或3至7个环原子。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，而术语“卤代”是指氟、氯、溴或碘基团。类似地，“卤化物”是指氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。
如本文所用，术语“C1-4卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤代基替代的如上定义的C1-4烷基。任何数量的氢原子都可以被替换，直至全卤取代。实例包括三氟甲基、氯乙基和1，1-二氟乙基。氟代烷基是其中卤素是氟的卤代烷基。其他卤代烷基，例如C1-3卤代烷基如上所定义，但包含所述数目的碳原子。
术语“同位素变体”是指同位素标记的化合物，其与式(I)中所述的那些相同，但事实上，一个或多个原子被具有原子质量或质量数不同于自然界中最常见的原子质量或质量数的原子所取代，或其中具有在自然界中不太常见的原子质量或质量数的原子的比例已经增加(后一概念被称为“同位素富集”)。可并入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素，如2H(氘)、3H、11C、13C、14C、18F、123I或125I(例如3H、11C、14C、18F、123I或125I)，它们可以是天然存在的或非天然存在的同位素。
在通式(I)的化合物的特别合适的同位素变体中，一些或所有甲基被CD3替代。例如，R1、R2和R3中的一个、两个或全部可以是CD3。
在本发明的一些合适的化合物中，R1为H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙炔基或Cn，尤其是甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙炔基或CN。
在本发明的一些化合物中，R2为甲基。在本发明的其他化合物中，R2为是CH2OH；
合适地，R3为甲基。
在本发明的一些合适的化合物中，R2为甲基并且R3为甲基。
在一些此类化合物中，R1不是H并且合适地是CN、乙炔基或甲基，任选地被一个或多个选自氟和OH的取代基取代。
更合适地，在这些化合物中，R1为甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙炔基或CN。
在本发明的其他合适的化合物中，R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成如上述所定义任选地被取代的3至10元碳环或含氧杂环系统。这些环的更合适的取代基(不包括R1基团)包括氟、氯、甲基、乙基、三氟甲基和OH。更合适地，由R2和R3以及它们所连接的碳原子形成的未被取代(R1基团除外)或在R1基团之外还被一个或多个，例如一个或两个选自甲基和氟的取代基取代的环系统。
由R2和R3以及它们所连接的碳原子形成的环系统包括C3-6环烷基环，特别是环丙基、环丁基和环戊基，它们中的任何一个都可以未被取代或如上所述被取代。
由R2和R3以及它们所连接的碳原子形成的其他环包括3至8元含氧杂环系统，其可以是单环系统，如四氢吡喃基、四氢呋喃基和氧杂环丁烷基，或者可替代地可以是稠合或螺环-连接的环系统，如氧杂螺[3.3]庚烷-6-基。如上所述，这些环系可以未被取代或被取代。
在通式(I)的其它化合物中，R1、R2和R3与它们所连接的碳原子一起结合形成5至8元桥碳环或杂环系统。在这种情况下，R1、R2和R3所连接的碳是桥头原子。这种环系统的实例包括双环[1.1.1]戊基。
由R1、R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成的环系统可以未被取代或如上所述被取代，但更合适的未被取代。
在一些合适的通式(I)的化合物中，R4为H。
在一些合适的通式(I)的化合物中，R5为H或卤代，尤其是H、氟或氯。更合适地，R5为H。
在一些合适的通式(I)的化合物中，X1为N。然而，更合适地，X1为CR6。R6合适地为H或卤代，例如H、氟或氯。更合适地，R6为H。
在通式(I)的化合物中，X2可以为CR7或N。更合适地，X2为CR7，在这种情况下，R7合适地为H、任选地被OH取代的C1-3烷基、任选地被OH取代的C1-3卤代烷基、被3至6元碳环或杂环系统取代的甲基；或3至6元碳环或杂环系统。
在一些情况下，R7为H、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、被OH取代的C1-3烷基、被OH取代的C1-3卤代烷基、3至6元碳环或杂环系统或CH2-R11，其中R11为通过环氮原子与CH2部分连接的含氮3至6元杂环。
当R7是被OH取代的C1-3烷基或被OH取代的C1-3卤代烷基时，它可以采用-C(CH3)(OH)-R12的形式，其中R12为C1-2烷基或C1-2卤代烷基。
更合适的R7为H、甲基、乙基、异丙基、三氟甲基、吗啉基甲基、四氢呋喃基或1-羟基-1-三氟甲基(乙基)，尤其是H、甲基、乙基、异丙基和三氟甲基。
在特别合适的化合物中，R7为H。
在本发明的化合物中，X3为CR8或N。
在一些合适的通式(I)的化合物中，X3为CR8。在这些化合物中，R8合适地为H、甲基或三氟甲基，尤其是H或三氟甲基，更尤其是H。
然而，在其他合适的化合物中，R8为N。
在本发明的一些合适的化合物中，X1为CR6，并且X2为CR7，使得化合物具有通式(Ia)：
Figure BDA0003486135130000081
其中X3、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如针对通式(I)所定义。
在本发明的一些合适的化合物中，X1为CR6，X2为7，并且X3为N，使得化合物具有通式(Ib)：
Figure BDA0003486135130000082
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如针对通式(I)所定义。
在本发明的一些合适的化合物中，X1为CR6，X2为CR7，并且X3为CR8，使得化合物具有通式(Ic)：
Figure BDA0003486135130000091
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如针对通式(I)所定义。
合适地在通式(Ia)、(Ib)和(Ic)的化合物中，R5、R6和R7中的至少一者为H。
合适地在通式(Ia)、(Ib)和(Ic)的化合物中，当R5是卤代时，R6是H，当R6是卤代时，R5是H。
在通式(Ia)、(Ib)和(Ic)的一些化合物中，当R5是卤代时，R6和R7均为H。
在通式(Ia)、(Ib)和(Ic)的一些化合物中，当R6是卤代时，R5和R7均为H。
在通式(Ia)、(Ib)和(Ic)的一些化合物中，当R7不是H时，R5和R6均为H。
通式(I)的化合物的具体实例包括以下：
N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1)；
4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1.1)
N-叔丁基-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物2)；
N-(1-氰基-1-甲基-乙基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物2.1)；
N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物3)；
N-(1-乙炔基环戊基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物4)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺(化合物4.1)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物4.2)；
N-(3，3-二氟-1-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物4.3)；
N-(2，2-二氟-1，1-二甲基-乙基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丁基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.1)；
N-(3-氟-3-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.2)；
N-(2，2-二氟环戊基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.3)；
N-(4-氰基四氢吡喃-4-基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.4)；
N-叔丁基-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6)；
4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6.1)；
N-(2，2-二氟环戊基)-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6.2)；
4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6.3)；
4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(1-乙炔基环戊基)吡啶-2-甲酰胺(化合物6.4)；
N-叔丁基-4-[[2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物7)；
N-叔丁基-4-[[2-(5-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物7.1)；
N-叔丁基-4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物7.2)；
N-叔丁基-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物8)；
N-[1-(三氟甲基)环丙基]-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]
吡啶-2-甲酰胺(化合物8.1)；
N-叔丁基-4-[[2-(3-异丙基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物9)；
4-[[2-(3-四氢呋喃-2-基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物9.1)；
4-[[2-[3-(吗啉代甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺(化合物10)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物11)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物11.1)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[4-(三氟甲基)四氢吡喃-4-基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.2)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)氧杂环丁烷-3-基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.3)；
N-[1-(二氟甲基)环丙基]-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.4)；
N-(3-氟-1-双环[1.1.1]戊烷基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.5)；
4-[[2-[3-(2，2，2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物12)；
4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺；(化合物13)；
N-(3，3-二氟-1-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物13.1)；
N-(4-氰基四氢吡喃-4-基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物13.2)；
以及上述者的盐和溶剂化物。
本发明的化合物可以通过下述方法制备，这些方法是新颖的并且构成本发明的另一方面。
通式(I)的化合物可以通过使通式(II)的化合物：
Figure BDA0003486135130000121
其中R1、R2、R3和R4如针对通式(I)所定义；
与通式(III)的化合物反应来制备：
Figure BDA0003486135130000122
其中R5、X1、X2和X3如针对通式(I)所定义。
合适地，反应在偶联剂存在下和在碱性条件下进行，例如在胺(如二异丙基乙胺(DIPEA))的存在下和在有机溶剂(如DMF)中进行。
合适的偶联剂包括已知的肽偶联剂，如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TATU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，碳二亚胺，如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)和三唑，如1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)或羟基苯并三唑(HOBt)。
合适地，当使用这些偶联剂时，反应在碱性条件下进行，例如在胺(如二异丙基乙胺(DIPEA))和有机溶剂(如DMF)的存在下进行。
可替代地，偶联剂可以是丙基膦酸酐
Figure BDA0003486135130000133
当T3P用作偶联剂时，反应可以在碱性条件下进行，例如在胺(如二异丙基乙胺(DIPEA)或三乙胺(TEA))和有机溶剂(如1，4-二噁烷)的存在下进行。
通式(III)的化合物是已知的并且可商购获得或可通过已知方法获得。
通式(II)的化合物可以通过使通式(IV)的化合物：
Figure BDA0003486135130000131
其中R1、R2和R3如针对通式(I)所定义；
与通式(V)的化合物反应来制备：
Figure BDA0003486135130000132
其中R4如针对通式(I)所定义。
再次，该反应适合在如上所述的偶联剂(例如TBTU)的存在下和在碱(如三乙胺)的存在下进行。
通式(IV)和(V)的化合物是已知的并且容易获得或可以通过已知方法制备。
可替代地，通式(I)的化合物可以通过对通式(Iz)的受保护化合物脱保护来制备：
Figure BDA0003486135130000141
其中R1、R2、R3、R4、R5、X1、X2和X3如针对通式(I)所定义，R15是胺保护基团，例如环醚，如四氢吡喃-2-基或苄基或取代的苄基，如4-甲氧基苄基。
可以通过用酸，例如三氟乙酸处理来实现脱保护。
通式(Iz)的受保护化合物可以通过使通式(II)的化合物与通式(IIIz)的受保护的化合物反应来制备：
Figure BDA0003486135130000142
其中R5、X1、X2和X3如针对通式(I)所定义，并且R15如针对通式(Iz)所定义。
该反应可以在用于通式(II)和(III)的化合物之间反应的如上所述偶联剂的存在下进行。粗产物无需进一步纯化即可用于随后的脱保护步骤。
一些通式(IIIz)的化合物可以根据保护基的性质通过已知方法由通式(III)的化合物制备。
例如，当基团R15是四氢吡喃-2-基时，通式(III)的化合物可以在对甲苯磺酸吡啶盐的存在下与3，4-二氢-2H-吡喃反应。当基团R15是苄基或苄基衍生物时，通式(III)的化合物可以与氯甲基苯或其取代衍生物(如1-氯甲基-4-甲氧基苯)反应。该反应通常产生所需的受保护的通式(IIIz)的化合物的混合物，作为与式(IIIz)的化合物的酯的混合物。通过使用碱水溶液(如氢氧化锂或氢氧化钠)水解，可以将酯转化为通式(IIIz)的化合物。当X2和/或X3是N时，可能会产生不需要分离的异构体混合物，因为保护基团的最终去除将产生所需的产物。
制备其他通式(IIIz)的化合物的方法如下所述(参见制备式(IIIaz)的化合物的方法)。
制备通式(Iz)的化合物的一种替代方法是使如上定义的通式(IV)的化合物与受保护的通式(XIIz)的化合物反应：
Figure BDA0003486135130000151
其中R4、R5、X1、X2和X3如针对通式(I)所定义，并且R15如针对通式(Iz)所定义。
合适地，该反应在偶联剂的存在下在与上述通式(II)的化合物与通式(III)的化合物的反应相似的条件下进行。
通式(XIIz)的化合物可以通过通式(XIIIz)的化合物的水解来制备：
Figure BDA0003486135130000152
其中R4、R5、X1、X2和X3如针对通式(I)所定义，R15如针对通式(Iz)所定义，并且R16为C1-6烷基或苄基，例如甲基。
合适地，水解在碱性条件下进行，例如在氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾的存在下以及在包含醇(如甲醇)、水和有机溶剂(如四氢呋喃)的混合溶剂中进行。反应可以在约15至25℃的温度下进行，通常在室温下进行。
通式(XIIIz)的化合物可以通过使如上定义的通式(IIIz)的化合物与通式(XIV)的化合物反应来制备：
Figure BDA0003486135130000161
其中X4如针对通式(I)所定义，并且R16如针对通式(XIIIz)所定义。
合适地，反应在如上所述的偶联剂存在下进行。
通式(XIV)的化合物是已知的并且可商购或可以通过已知的方法制备，例如通过上述通式(V)的羧酸的酯化来制备。
其中X1为CR6，并且X2为CR7的通式(XIIz)的化合物被指定为通式(XIIaz)的化合物：
Figure BDA0003486135130000162
其中X3，、R4、R5、X6和R7如针对通式(I)所定义，R15如针对通式(Iz)所定义，并且R16如针对通式(XIIIz)所定义。
通式(XIIaz)的化合物特别适用于制备其中5和R6之一为H，并且R5和R6中的另一个为卤代的通式(I)的化合物和其中R7不是H的化合物。
通式(XIIaz)的化合物可通过使其中X1为CR6，并且X2为CR7的通式(IIIz)的化合物(即通式(IIIaz)的化合物)：
Figure BDA0003486135130000171
其中X3、R5、R6和R7如针对通式(I)所定义，并且R15如针对通式(Iz)所定义；
与如上所定义的通式(XIV)的化合物反应来制备。
通式(IIIaz)的化合物可以通过通式(XXI)的化合物的羰基化来制备：
Figure BDA0003486135130000172
其中X3、R5、R6和R7如针对通式(I)所定义；R15如针对通式(Iz)所定义；并且R20为卤代，例如溴。
羰基化可以通过与丙二酸单酯的碱金属盐(如丙二酸甲酯钾)在Pd催化剂(如[Pd(allyl)Cl)]2)、膦配体(如2，2′-双(二苯基膦)-1，1′-联萘(BINAP))和有机碱(如DMAP)的存在下反应，然后用碱水溶液例如碱金属氢氧化物(如氢氧化锂)水解所得酯来实现。
合适地，反应在惰性气氛(如氮气)和升高的温度下进行，通常为120℃至160℃。
制备通式(IIIaz)的化合物的种替代方法是在膦配体(如SPhos)和钯催化剂(如[Pd(allyl)Cl)]2二氯化物)存在下，使如上定义的通式(XXI)的化合物与氰基乙酸的碱金属盐(如2-氰基乙酸钾)反应，然后用碱水溶液，例如碱金属氢氧化物(如氢氧化钠)水解所得腈。合适地，反应在惰性气氛(如氮气)和升高的温度下进行，通常为120℃至160℃。
通式(XXI)的化合物可以通过保护通式(XXII)的化合物来制备：
Figure BDA0003486135130000181
其中X3、R5、R6和R7如针对通式(I)所定义；并且R20如针对通式(XXI)所定义。
可以使用上述从通式(III)的化合物制备通式(IIIz)的化合物的方法实现保护。
通式(XXII)的化合物是已知的并且可商购获得或可通过已知方法制备。
一种制备通式(XXI)的化合物的替代方法，该方法特别适用于其中R7为CH2-R11的化合物(其中R11是含氮的3至6元杂环，所述杂环通过环氮原子连接到CH2部分)，通过通式(XXX)的化合物：
Figure BDA0003486135130000182
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义；R15如针对通式(Iz)所定义；并且R20如针对通式(XXI)所定义；
与通式(XXXI)的化合物反应来制备：
R11-H
(XXXI)
其中R11为通过环氮原子与H原子连接的含氮3至6元杂环。
该反应可以在还原条件下，例如在氢化物(如三乙酰氧基硼氢化钠)的存在下，在有机溶剂(如四氢呋喃)中，在约15至25℃的温度下(通常在室温)和酸(如醋酸)的存在下进行。
通式(XXXI)的化合物是已知的并且可商购获得或可通过已知方法制备。
通式(XXX)的化合物可以通过上述制备通式(IIIz)的化合物的方法通过保护通式(XXXII)的化合物来制备：
Figure BDA0003486135130000191
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义；并且R20如针对通式(XXI)所定义。
通式(XXXII)的化合物是已知的并且可商购获得或可通过已知方法制备。
制备特别适用于其中R7为-C(CH3)(OH)-R12，并且其中R12为CF3或CHF2的通式(XXI)的化合物的一种替代方法是通过通式(XXXV)：
Figure BDA0003486135130000192
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义；R15如针对通式(Iz)所定义；并且R20如针对通式(XXI)所定义；
与通式(XXXVI)的化合物反应来制备：
(R25)3Si-R12
(XXXVI)
其中每个R25独立地为C1-6烷基，并且12为C1-2烷基或C1-2卤代烷基。
该反应可以在氟离子源(如四丁基氟化铵(TBAF))的存在下进行。
其中R7为-C(CH3)(OH)-R12，其中R12不是CF3或CHF2的通式(XXI)的化合物，可以通过使通式(XXXV)的化合物与合适的格氏试剂在合适的反应条件下反应来合成。
通式(XXXVI)的化合物是已知的并且可商购获得或可通过已知方法制备。
通式(XXXV)的化合物可以通过通式(XXXVII)的化合物的氧化来制备：
Figure BDA0003486135130000201
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义；R15如针对通式(Iz)所定义；并且R20如针对通式(XXI)所定义。
合适的氧化剂包括戴斯-马丁高碘烷。在这种情况下，氧化适合在有机溶剂(如二氯甲烷)中进行。
通式(XXXVII)的化合物可以通过使如上定义的通式(XXX)的化合物与甲基格氏试剂反应来制备。
其中R7为-C(CH3)(OH)-R12的通式(XXI)的化合物的OH基团，在羰基化产生通式(IIIaz)的化合物之前，通常被保护，例如作为苄醚。当通式(Iaz)的化合物转化为通式(Ia)的化合物时，保护基团可保留在通式(XIIaz)和(Iaz)的化合物中并与保护基团R15同时除去。
通式(IIIaz)的化合物是X1为CR6，并且X2为CR7的通式(III)的受保护化合物，因此它可以与上述通式(II)的化合物反应得到通式(Iaz)化合物：
Figure BDA0003486135130000211
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如针对通式(I)所定义，并且R15如针对通式(Iz)所定义；
其可脱保护得到通式(Ia)的化合物。
制备通式(I)的化合物的一种进一步替代方法是使如上定义的通式(IV)的化合物与通式(XII)的化合物反应：
Figure BDA0003486135130000212
其中R4、R5、X1、X2和X3如针对通式(I)所定义。
合适地，该反应在偶联剂的存在下在与上述通式(II)的化合物与通式(III)的化合物的反应相似的条件下进行。
通式(XII)的化合物可以通过与酸(如三氟乙酸)反应使上述通式(XIIz)的化合物脱保护来制备。
其中R7是烷基或杂环基的通式(Ia)的化合物可以从通式(XXVaz)的化合物来制备：
Figure BDA0003486135130000213
Figure BDA0003486135130000221
其中X3、R1、R2、R3、R4、R5和R6如针对通式(I)所定义；R15如针对通式(Iz)所定义；并且R21为卤代，例如溴或碘；
所述制备通过在碱性条件下，例如在K2PO4存在下，和在钯催化剂(如乙酸钯)存在下与合适的二氧杂环戊硼烷反应，接着通过钯催化剂进行催化氢化。当保护基R15是苄基或衍生物(如对甲氧基苄基)时，它会通过氢化过程除去。否则，可能需要额外的脱保护步骤，例如用酸(如TFA)处理。
对于其中R7为异丙基的通式(Ib)的化合物，第一步所用的氧杂环戊硼烷可以是2-异丙烯基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷，而对于其中R7为四氢呋喃-2-基的化合物，可以使用2-(2，3-二氢呋喃-4-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷。可以选择其他二氧杂氧杂环戊硼烷用于引入替代的R7基团。
通式(XXVaz)的化合物可以通过使如上定义的通式(II)的化合物与通式(XXVI)的化合物反应来制备。
Figure BDA0003486135130000222
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义；R15如针对通式(Iz)所定义；并且R21如针对通式(XXVaz)所定义。
该反应可以在偶联试剂的存在下在与上述通式(II)的化合物与通式(III)的化合物的反应的条件下发生。
通式(XXVI)的化合物可以通过与上述制备通式(IIIz)和(IIIaz)的化合物的方法类似的方法由通式(XXVII)的化合物来制备：
Figure BDA0003486135130000231
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义；并且R21如针对通式(XXVaz)所定义。
通式(XXVII)的化合物可以通过卤化通式(XXVIII)的化合物来制备：
Figure BDA0003486135130000232
其中X3、R5和R6如针对通式(I)所定义
所述制备根据Tang et al，J.Org.Chem.2018，83(2)，930-938来进行。
通式(XXVIII)的化合物是已知的并且可商购获得或可通过已知方法制备。
通式(I)的化合物是TMEM16A的正调节剂，因此，在本发明的另一方面，提供了如上定义的通式(I)的化合物用于医药中，特别是用于治疗或预防受TMEM16A的调节影响的疾病和病症。
还提供了通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防受TMEM16A的调节影响的疾病和病症的药物中的用途。
还提供了治疗或预防受TMEM16A的调节影响的疾病和病症的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
受TMEM16A的调节影响的疾病和病症包括呼吸系统疾病和病症、口干(口干症)、肠过度活动、胆汁淤积和眼部病症。
还提供：
·用于治疗或预防呼吸系统疾病和病症的通式(I)的化合物。
·用于治疗或预防口干(口干症)的通式(I)的化合物。
·用于治疗或预防肠过度活动的通式(I)的化合物。
·用于治疗或预防胆汁淤积的通式(I)的化合物。
·用于治疗或预防眼部病症的通式(I)的化合物。
本发明还提供：
·通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防呼吸系统疾病和病症的药物中的用途。
·通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防口干(口干症)的药物中的用途。
·通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防肠过度活动的药物中的用途。
·通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防胆汁淤积的药物中的用途。
·通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防眼部病症的药物中的用途。
进一步提供：
·治疗或预防呼吸系统疾病和病症的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
·治疗或预防口干(口干症)的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
·治疗或预防肠过度活动的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
·治疗或预防胆汁淤积的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
·治疗或预防眼部病症的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
可由通式(I)的化合物治疗或预防的呼吸系统疾病和病症包括囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性支气管炎、肺气肿、包括非囊性纤维化支气管扩张在内的支气管扩张、哮喘和原发性纤毛运动障碍。
可由通式(I)的化合物治疗或预防的口干(口干症)可由斯耶格伦氏综合征、放射疗法治疗和引起口腔干燥的药物引起。
可由通式(I)的化合物治疗或预防的肠过度活动可能与胃消化不良、胃轻瘫、慢性便秘和肠易激综合征有关。
可由通式(I)的化合物治疗或预防的眼部病症包括干眼症。
本发明的化合物通常作为药物组合物的一部分施用，因此本发明进一步提供包含通式(I)的化合物和药用赋形剂的药物组合物。
药物组合物可以配制用于口服、直肠、鼻腔、支气管(吸入)、局部(包括皮肤、透皮、滴眼液、口腔和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)施用，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。
该组合物可以通过将上述定义的活性药剂与赋形剂结合来制备。一般而言，制剂的制备方法是使活性药剂与液态载体或细分的固体载体或二者均匀而紧密地结合，然后，如有必要，将产物成型。本发明涉及制备药物组合物的方法，所述方法包括将通式(I)的化合物与药用载体或媒介物结合或联合。
本发明中用于口服施用的制剂可以表示为：离散单元，如胶囊、小袋或片剂，每一个都含有预定量的活性药剂；作为粉末或颗粒；作为活性药剂在水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳液或油包水液体乳液；或作为丸剂等。
对于口服施用的组合物(例如片剂和胶囊)，术语“药用载体”包括媒介物，例如常见的赋形剂，例如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填充剂和载体，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和海藻酸；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其他硬脂酸金属盐、硬脂酸甘油酯、硬脂酸、硅油、滑石蜡、油和胶体二氧化硅。也可以使用调味剂如薄荷、冬青油、樱桃调味品等。可能需要添加着色剂以使剂型易于识别。片剂也可以通过本领域公知的方法进行包衣。
片剂可任选地与一种或多种辅助成分通过压缩或模塑制成。可通过在合适的机器中压缩以自由流动形式(诸如粉末或颗粒)可选地与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合的活性药剂而制备压缩片剂。模制片剂可通过在合适的机器中塑模用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物而制成。所述片剂可以可选地被包衣或刻痕，并可经配制使得可从中缓释或控释活性药剂。
适用于口服施用的其他制剂包括在调味基料(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中包含活性药剂的锭剂；在惰性基料(例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性药剂的含片；以及在合适的液体载体中包含活性药剂的漱口水。
对于皮肤局部应用，通式(I)的化合物可制成乳膏、软膏、凝胶、溶液或混悬液等。可用于药物的乳膏或软膏配制剂是本领域公知的常规配制剂，例如，如药剂学标准教科书所述，如英国药典。
可以通过使用气雾剂配制剂实现对肺的局部施用。气雾剂配制剂通常包含悬浮或溶解在合适的气雾剂推进剂，如氯氟烃(CFC)或氢氟烃(HFC)中的活性成分。合适的CFC推进剂包括三氯一氟甲烷(推进剂11)、二氯四氟甲烷(推进剂114)和二氯二氟甲烷(推进剂12)。合适的HFC推进剂包括四氟乙烷(HFC-134a)和七氟丙烷(HFC-227)。推进剂通常包含占总吸入组合物重量的40％-99.5％，例如40％-90％。配制剂可包含赋形剂，包括共溶剂(例如乙醇)和表面活性剂(例如卵磷脂、失水山梨醇三油酸酯等)。其他可能的赋形剂包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甘油等。气雾剂配制剂包装在罐中，并通过计量阀(例如由Bespak、Valois或3M或可替代地由Aptar、Coster或Vari提供)递送合适的剂量。
也可以通过使用非加压配制剂(如水溶液或悬浮液)来实现对肺的局部施用。这些可以通过雾化器施用，例如一种可以手持和便携或供家庭或医院使用(即非便携)的雾化器。配制剂可包含赋形剂，如水、缓冲剂、张力调节剂、pH调节剂、表面活性剂和共溶剂。悬浮液和气雾剂配制剂(无论是加压的还是未加压的)通常会包含细碎形式的本发明化合物，例如具有0.5-10μm的D50，例如约1-5μm。粒度分布可以使用D10、D50和D90值表示。粒度分布的D50中值定义为将分布一分为二的以微米计的粒度。来自激光衍射的测量更准确地描述为体积分布，因此使用此程序获得的D50值更有意义地称为Dv50值(体积分布的中值)。如本文所用，Dv值是指使用激光衍射测量的粒度分布。类似地，在激光衍射上下文中使用的D10和D90值被认为是指Dv10和Dv90值，并且指的是粒度，其中10％的分布低于D10值，而90％的分布低于D90值。
也可以通过使用干粉配制剂实现对肺的局部施用。干粉配制剂将包含细碎形式的本公开的化合物，通常具有1-10μm的质量平均直径(MMAD)或0.5-10μm(例如约1-5μm)的D50。细碎形式的本发明化合物的粉末可以通过微粉化方法或类似的尺寸减小方法制备。微粉化可以使用气流粉碎机，如由Hosokawa Alpine制造的气流粉碎机进行。可以使用激光衍射(例如使用Malvem Mastersizer 2000S仪器)测量所得粒度分布。配制剂通常含有局部可接受的稀释剂，如乳糖、葡萄糖或甘露醇(优选乳糖)，通常具有较大的粒径，例如50μm或更大(例如100μm或更大)的质量平均直径(MMAD)，或D50为40-150μm。如本文所用，术语“乳糖”是指含乳糖的组分，包括α-乳糖一水合物、β-乳糖一水合物、α-无水乳糖、无水β-乳糖和无定形乳糖。乳糖组分可通过微粉化、筛分、研磨、压缩、聚集或喷雾干燥进行加工。还包括各种形式的市售乳糖形式，例如
Figure BDA0003486135130000271
(吸入级乳糖；DFE Pharma)、
Figure BDA0003486135130000272
70(用于干粉吸入器的筛分乳糖；Meggle)、
Figure BDA0003486135130000273
(DFE Pharma)和
Figure BDA0003486135130000274
(筛分吸入级乳糖；DFE Pharma)产品。在一个实施例中，乳糖组分选自由α-乳糖一水合物、α-无水乳糖和无定形乳糖组成的组。优选地，乳糖是α-乳糖一水合物。
干粉制剂也可能含有其他赋形剂。因此，在一个实施例中，根据本公开的干粉配制剂包含硬脂酸镁或硬脂酸钙。此类配制剂可具有优异的化学和/或物理稳定性，尤其是当此类配制剂还包含乳糖时。
通常使用干粉吸入器(DPI)装置递送干粉配制剂。干粉递送系统实例包括
Figure BDA0003486135130000275
Figure BDA0003486135130000276
知
Figure BDA0003486135130000277
干粉递送系统的其他实例包括ECLIPSE、NEXT、ROTAHALER、HANDIHALER、AEROLISER、CYCLOHALER、BREEZHALER/NEOHALER、MONODOSE、FLOWCAPS、TWINCAPS、X-CAPS、TURBOSPIN、ELPENHALER、MIATHALER、TWISTHALER、NOVOLIZER、PRESSAIR、ELLIPTA、ORIEL干粉吸入器、MICRODOSE、PULVINAL、EASYHALER、ULTRAHALER、TAIFUN、PULMOJET、OMNIHALER、GYROHALER、TAPER、CONIX、XCELOVAIR和PROHALER。
在一个实施例中，通式(I)的化合物作为微粉化干粉配制剂，例如包含合适等级的乳糖提供。
因此，作为本发明的一个方面，提供了包含颗粒形式的通式(I)的化合物与颗粒乳糖组合的药物组合物，所述组合物任选地包含硬脂酸镁。
在一个实施例中，通式(I)的化合物作为微粉化干粉配制剂提供，所述干粉配制剂包含合适等级的乳糖和硬脂酸镁，填充到装置如DISKUS中。合适地，这样的装置是多剂量装置，例如将配制剂填充到泡罩中以用于多单位剂量装置如DISKUS。
在另一个实施例中，通式(I)的化合物作为微粉化干粉配制剂提供，所述干粉配制剂例如包含合适等级的乳糖酸镁，填充到硬壳胶囊中以用于单剂量装置如AEROLISER。
在另一个实施例中，通式(I)的化合物作为微粉化干粉配制剂提供，所述干粉配制剂包含合适等级的乳糖和硬脂酸镁，填充到硬壳胶囊中以用于单剂量装置如AEROLISER。
在另一个实施例中，通式(I)的化合物以细粉形式提供，用于吸入剂型，其中所述粉末是D50为0.5-10μm的细颗粒，例如约1-5μm，通过除气流粉碎机微粉化以外的尺寸减小工艺，例如喷雾干燥、喷雾冷冻、微流化、高压均化、超临界流体结晶、超声结晶或这些方法的组合，或本领域已知的用于生产空气动力学粒径为0.5-10μm的细颗粒的其他合适的颗粒形成方法生产。可以使用激光衍射(例如使用Malvem Mastersizer 2000S仪器)测量所得粒度分布。颗粒可包含单独的化合物或与可有助于加工的合适的其他赋形剂组合。所得细颗粒可形成用于递送给人类的最终配制剂或可任选地与其他合适的赋形剂进一步配制以促进以可接受的剂型递送。
本发明的化合物也可以直肠施用，例如以栓剂或灌肠剂的形式施用，其包括水性或油性溶液以及悬浮液和乳液和泡沫。这种组合物按照本领域技术人员公知的标准程序制备。例如，栓剂可以通过将活性成分与常规栓剂基质(如可可脂或其他甘油酯)混合来制备。在这种情况下，将药物与合适的无刺激性赋形剂混合，该赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此会在直肠中熔化以释放药物。这种材料是可可脂和聚乙二醇。
通常，对于打算以滴眼剂或眼膏的形式局部施用于眼睛的组合物，通式(I)的化合物的总量将为约0.0001％(w/w)至小于4.0％(w/w)。
优选地，对于局部眼部施用，施用的根据通式(I)的组合物将被配制成溶液、悬浮液、乳液和其他剂型。基于配制的容易性以及患者通过将一到两滴溶液滴入受影响的眼睛容易地施用此类组合物的能力，通常优选水溶液。然而，组合物也可以是悬浮液、粘性或半粘性凝胶、或其他类型的固体或半固体组合物。对于微溶于水的化合物，悬浮液可能是优选的。
对眼睛施用的替代方法是玻璃体内注射通式(I)的化合物的溶液或悬浮液。此外，通式(I)的化合物也可以通过眼部植入物或插入物引入。
施用的根据通式(I)组合物还可包括各种其他成分，包括但不限于张度剂、缓冲剂、表面活性剂、稳定聚合物、防腐剂、共溶剂和增粘剂。合适的通式(I)药物组合物包括用张力剂和缓冲剂配制的本发明化合物。通式(I)药物组合物还可任选地包括表面活性剂和/或缓和剂和/或稳定聚合物。
可以使用各种张度剂来调节组合物的张度，优选调节眼用组合物的天然泪液的张度。例如，可将氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、单糖，如右旋糖、果糖、半乳糖和/或简单的多元醇，如糖醇、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、乳糖醇、异麦芽糖醇、麦芽糖醇和氢化淀粉水解物添加到组合物中以接近生理张力。这种张度剂的量将根据要添加的特定药剂而变化。然而，组合物通常具有足以使最终组合物具有眼科可接受的渗透压(通常约150-450mOsm，优选250-350mOsm，最优选约290mOsm)的量的张力剂。本发明的张度剂通常以2-4％w/w的范围存在。本发明优选的张力剂包括单糖或糖醇，如D-甘露醇。
可将合适的缓冲系统(例如磷酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠或硼酸)加入到组合物中以防止储存条件下的pH值漂移。具体浓度将根据所使用的药剂而变化。然而，优选地，将选择缓冲液以将目标pH值维持在pH 5至8的范围内，并且更优选地目标pH值维持在pH 5至7。
可以任选地使用表面活性剂来递送更高浓度的通式(I)的化合物。表面活性剂起到溶解化合物和稳定胶体分散体(例如胶束溶液、微乳液、乳液和悬浮液)的作用。可任选使用的表面活性剂的实例包括聚山梨醇酯、泊洛沙姆、聚乙二醇40硬脂酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、泰洛沙泊、Triton和脱水山梨糖醇单月桂酸酯。用于本发明的优选表面活性剂具有12.4至13.2范围内的亲水/亲油/平衡“HLB”并且对于眼科用途是可接受的，如TritonX114和泰洛沙泊。
可以添加到通式(I)的化合物的眼科组合物中的另外的药剂是用作稳定聚合物的缓和剂。稳定聚合物应该是一种离子/带电实例，优先用于局部眼部用途，更具体地，一种在其表面带有负电荷的聚合物，其可以表现出(-)10-50mV的zeta电位以实现物理稳定性，并且能够在水中形成分散体(即水溶性)。本发明优选的稳定聚合物是0.1-0.5％w/w的来自交联聚丙烯酸酯家族，如卡波姆和Pemulen(R)，特别是卡波姆974p(聚丙烯酸)的聚电解质，或多于一种的聚电解质。
还可以将其他化合物加入通式(I)的化合物的眼科组合物中以增加载体的粘度。粘度增强剂的实例包括但不限于：多糖，如透明质酸及其盐、硫酸软骨素及其盐、葡聚糖、纤维素家族的各种聚合物；乙烯基聚合物；和丙烯酸聚合物。
局部眼科产品通常以多剂量形式包装。因此需要防腐剂来防止使用过程中的微生物污染。合适的防腐剂包括：苯扎氯铵、氯丁醇、溴化苯并十二烷、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯乙醇、依地酸二钠、山梨酸、聚季铵盐-1，或本领域技术人员已知的其他药剂。此类防腐剂通常以0.001-1.0％w/v的水平使用。通式(I)单位剂量组合物将是无菌的，但通常未防腐。因此，此类组合物通常不含防腐剂。
肠胃外配制剂通常是无菌的。
医生或其他技术人员将能够确定通式(I)的化合物的合适剂量，并因此确定应包含在任何特定药物配制剂中的本发明化合物的量(无论是单位剂量形式或其他)。
通式(I)的化合物可以与一种或多种用于治疗或预防呼吸系统疾病和病症的其他活性药剂组合使用。
这种类型的另外的活性药剂可以包含在上述药物组合物中，但可选地，它可以与通式(I)的化合物同时或在更早或更晚的时间单独施用。
因此，本发明的另一方面提供了一种产品，其包含通式(I)的化合物和用于治疗或预防呼吸系统病症的另外的药剂，作为同时、按顺序或分开用于治疗受TMEM16A的调节影响的疾病或病症，尤其是呼吸系统疾病或病症，例如上述疾病和病症之一的组合制剂。
还提供了通式(I)的化合物与用于治疗或预防呼吸系统疾病的另外的药剂组合，作为同时、按顺序或分开用于治疗受TMEM16A的调节影响的疾病或病症，尤其是呼吸系统疾病或病症，例如上述疾病和病症之一的组合制剂。
可包含在药物组合物或与通式(I)、(Ix)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)或(IE)的化合物的组合制剂中的合适的另外的活性药剂包括：
B2肾上腺素受体激动剂，诸如间羟异丙肾上腺素、异丙肾上腺素、喘息定、舒喘宁、沙丁胺醇、福莫特罗、沙美特罗、茚达特罗、特布他林、奥西那林、甲磺酸比托特罗、吡布特罗、奥达特罗、维兰特罗和阿贝特罗；
抗组胺药，例如组胺H1受体拮抗剂，诸如氯雷他定、西替利嗪、地氯雷他定、左西替利嗪、非索非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀和氯苯那敏或H4受体拮抗剂；
阿尔法链道酶；
皮质类固醇，诸如泼尼松、泼尼松龙、氟尼缩松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松、布地奈德、丙酸氟替卡松、糠酸莫米松和糠酸氟替卡松；
白三烯拮抗剂，诸如孟鲁司特和扎鲁司特；
抗胆碱能化合物，特别是毒蕈碱拮抗剂，诸如异丙托溴铵、噻托溴铵、格隆溴铵、阿地溴铵和芜地溴铵；
CFTR修复疗法(例如CFTR增效剂、校正剂或增幅剂)，诸如Ivacaftor、QBW251、Bamacaftor(VX659)、Elexacaftor(VX445)、VX561/CPT-656、VX152、VX440、GLP2737、GLP2222、GLP2451、PTI438、PTI801、PTI808、FDL-169和FDL-176，以及CFTR校正剂，诸如Lumacaftor和Tezacaftor或其组合(例如Ivacaftor、Tezacaftor和Elexacaftor的组合)；
ENaC调节剂，尤其是ENaC抑制剂；
抗生素；
抗病毒剂，诸如利巴韦林和神经氨酸酶抑制剂，诸如扎那米韦；
抗真菌药，诸如PUR1900；
气道保湿剂(渗压剂)，诸如高渗盐水和甘露醇
Figure BDA0003486135130000321
和
粘液溶解剂，诸如N-乙酰半胱氨酸。
当另外的活性药剂是ENaC调节剂时，它可以是ENaC抑制剂，如阿米洛利、VX-371、AZD5634、QBW276、SPX-101、BI443651、BI1265162和ETD001。在我们的申请WO 2017/221008、WO 2018/096325、WO 2019/077340和WO 2019/220147中公开了其他合适的ENaC阻断剂，并且这些申请的任何示例化合物可以与通式(I)的化合物组合使用。与通式(I)的化合物组合使用的特别合适的化合物包括具有阳离子和合适的阴离子的化合物，所述阳离子选自：
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)乙基]-6-(4-{双[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1，3-二乙基-11H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-6-{[2-(4-{双[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1，3-二乙基-1H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-5-[4-({双[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}甲基)哌啶-1-羰基]-1，3-二乙基-1H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-6-[(3R)-3-{双[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1，3-二乙基-1H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-6-[(3S)-3-{双[(2S，R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1，3-二乙基-1H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-1，3-二乙基-6-{[(1r，4r)-4-{双[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基甲酰基}-1H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-1，3-二乙基-6-{[(1s，4s)-4-{双[(2S，3R，4R，5R)-2，3，4，5，6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基甲酰基}-1H-1，3-苯并二唑-3-鎓；
合适的阴离子为例如卤离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、甲酸根、乙酸根、三氟乙酸根、富马酸根、柠檬酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、扁桃酸根、甲烷磺酸根或对甲苯磺酸根。
本发明通过以下非限制性实例和附图进行说明，其中：
附图说明
图1是生物实例14中使用的全细胞膜片钳(Qpatch)TMEM16A增强剂测定的示例迹线，并说明了该测定中使用的方法。
通过以下实例说明本发明。
实例
通用条件：
使用电喷雾电离在LC-MS系统上运行质谱。这些使用带有Waters PDA和ELS检测器的Waters Acquity uPLC系统或Shimadzu LCMS-2010EV系统运行。[M+H]+是指单同位素分子量。
使用溶剂作为内部氘锁，在带有5mm宽带反向探头的Bruker Avance III HD500MHz、Bruker Avance III HD 250MHz、装有5mm宽带观察智能探头的400MHz Avance IIIHD Nanobay上记录NMR光谱。除非另有说明，光谱在室温下记录，并使用溶剂峰作为参考。
参考以下实例，优选实施例的化合物使用本文所述的方法或本领域已知的其他方法合成。
优选实施例的各种起始材料、中间体和化合物可以在适当时使用常规技术，如沉淀、过滤、结晶、蒸发、蒸馏和色谱法分离和纯化。除非另有说明，所有起始材料均从商业供应商处获得，无需进一步纯化即可使用。盐可以通过已知的成盐程序由化合物制备。
使用适当的SNAP管柱和梯度，在
Figure BDA0003486135130000341
Isolera系统上通过正相硅胶快速柱色谱法纯化化合物。可替代地，使用带有适当SNAP C18管柱和反相洗脱液的
Figure BDA0003486135130000342
Isolera系统在反相硅胶上或通过制备型HPLC(如果另有说明)纯化化合物。
使用酸性pH值的制备型HPLC，早期洗脱方法
使用Waters Sunfire C18色谱柱(30mm x 100mm，10μM；温度：室温)和10-95％B的梯度(A＝0.1％甲酸水溶液；B＝0.1％甲酸MeCN溶液)，14.44分钟，然后95％B，2.11分钟，进样量为1500μL，流速为40mL/min，在Gilson LC系统上进行纯化。使用Gilson检测器在215nm处记录UV光谱。
使用酸性pH值的制备型HPLC，标准洗脱方法
使用Waters Sunfire C18色谱柱(30mm x 100mm，10μM；温度：室温)和30-95％B的梯度(A＝水中的0.1％甲酸；B＝MeCN中的0.1％甲酸)，11分钟，然后95％B，2.11分钟，进样量为1500μL，流速为40mL/min，在Gilson LC系统上通过制备型HPLC(酸性pH，标准洗脱方法)进行纯化。使用Gilson检测器在215nm处记录UV光谱。
使用碱性pH值的制备型HPLC，早期洗脱方法
使用Waters Xbridge C18色谱柱(30mm x 100mm，10μM；温度：室温)和10-95％的梯度(A＝0.2％氢氧化铵水溶液；B＝0.2％氢氧化铵MeCN溶液)，14.44分钟，然后95％B，2.11分钟，进样量为1500μL，流速为40mL/min在Gilson LC系统上通过制备型HPLC(碱性pH，早期洗脱方法)进行纯化。使用Gilson检测器在215nm处记录UV光谱。
使用碱性pH值的制备型HPLC，标准洗脱方法
使用Waters Xbridge C18色谱柱(30mm x 100mm，10μM；温度：室温)和30-95％的梯度(A＝水中的0.2％氢氧化铵；B＝MeCN中的0.2％氢氧化铵)，11分钟，然后95％B，2.11分钟，进样量为1500μL，流速为40mL/min，在Gilson LC系统上通过制备型HPLC(碱性pH，标准洗脱方法)进行纯化。使用Gilson检测器在215nm处记录UV光谱。
如果没有另外说明，分析HPLC条件如下：
方法A
柱：Phenomenex Kinetix-XB C18 2.1x100mm，1.7μm
柱温40℃
洗脱液：A：H2O，0.1％甲酸，B：MeCN，0.1％甲酸
流速：0.6mL/min
梯度：0-5.3分钟5-100％B，5.3-5.8分钟100％B，5.8-5.82分钟100-5％B，5.82-7.00分钟5％B
方法B
柱：Waters
Figure BDA0003486135130000351
CSHTM C18 2.1x100mm 1.7μm
柱温40℃
洗脱液：A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH 10，B：MeCN
流速：0.6mL/min
梯度：0-5.3分钟5-100％B，5.3-5.8分钟100％B，5.8-5.82分钟100-5％B，5.82-7.00分钟5％B
方法C
柱：Waters
Figure BDA0003486135130000352
BEHTM C18 2.1x100mm 1.7μm
柱温40℃
洗脱液：A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH 10，B：MeCN
流速：0.6mL/min
梯度：0-5.3分钟5-100％B，5.3-5.8分钟100％B，5.8-5.82分钟100-5％B，5.82-7.00分钟5％B
方法D
柱：Waters Atlantis dC18 2.1x100mm 3μm
柱温40℃
洗脱液：A：H2O+0.1％甲酸，B：MeCN+0.1％甲酸
流速：0.6mL/min
梯度：0-5分钟5-100％B，5-5.4分钟100％B，5.4-5.42分钟100-5％B，5.42-7.00分钟5％B
方法E
柱：Kinetex Core-Shell C18 2.1x50mm 5μm
柱温40℃
洗脱液：A：H2O+0.1％甲酸，B：MeCN+0.1％甲酸
流速：1.2mL/min
梯度：0-1.20分钟5-100％B，1.20-1.30分钟100％B，1.30-1.31分钟100-5％B
方法F
柱：Phenomenex Gemini-NX C18 2x50mm 3μm
柱温40℃
洗脱液：A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH 10，B：MeCN
流速：1mL/min
梯度：0-1.80分钟1-100％B，1.80-2.10分钟100％B，2.10-2.30分钟100％-1％B
以下实施例旨在说明本发明而不应解释为对其的限制。温度以摄氏度表示。如果没有另外提及，所有蒸发都在真空中进行，优选在约15mm Hg和100mm Hg(＝20-133mbar)之间。最终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法，例如微量分析和光谱特征，例如MS、IR和NMR确认。所用的缩写是本领域常规的缩写。如果未定义，这些术语具有其普遍接受的含义。
缩写
aq. 水性
br 宽峰
d 双重峰
dd 双重峰的双重峰
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMF N，N-二甲基甲酰胺
EDCl 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
EtOAc 乙酸乙酯
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HATU 2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HPLC 高压液相色谱
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MS 质谱
m 多重峰
min 分钟
mL 毫升
m/z 质荷比
NCS N-氯代琥珀酰亚胺
NMR 核磁共振
PTFE 聚四氟乙烯
Rt 保留时间
s 单峰
sPhos 2-二环己基膦基-2′，6′-二甲氧基联苯
t 三重峰
TBME 甲基叔丁基醚
TBTU N，N，N′，N′-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)脲四氟硼酸盐
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
Figure BDA0003486135130000371
丙基膦酸酐
实例1
N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000372
向2-(1H-吲哚-6-基)乙酸(70mg，0.40mmol)、4-氨基-N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)吡啶-2-甲酰胺(中间体A)(70mg，0.36mmol)和TEA(95μL，0.54mmol)在1，4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液加入在EtOAc(0.32mL，0.54mmol)中的
Figure BDA0003486135130000382
的50％溶液，混合物在室温下搅拌2小时。所得混合物用EtOAc(5mL)稀释并依次用1M Hcl(5mL)、饱和NaHCO3溶液(5mL)和盐水(5mL)洗涤。将有机物分离，经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。粗残余物通过硅胶(10g，KP-Sil)色谱纯化，用在庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为淡粉色粉末。
LC-MS(方法A)：Rt 3.01mins；MS m/z361.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.03(s，1H)，10.76(s，1H)，8.46(d，J＝5.5Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.48(d，J＝8.1Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.30(t，J＝2.7Hz，1H)，6.98(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)，6.40-6.37(m，1H)，3.76(s，2H)，3.21(s，1H)，1.65(s，6H).
实例1.1
4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000381
类似于实例1，由4-氨基-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(中间体AD)和2-(1H-吲哚-6-基)乙酸制备标题化合物。
LC-MS(方法A)：Rt 3.08mins；MS m/z403.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.04(s，1H)，10.76(s，1H)，9.38(s，1H)，8.48(d，J＝5.5Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0 Hz，1H)，7.86(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.1Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.30(t，1H)，6.97(dd，J＝8.1，1.4Hz，1H)，6.39-6.36(m，1H)，3.75(s，2H)，1.31-1.27(m，2H)，1.20-1.16(m，2H).
实例2
N-叔丁基-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000391
使用TEA(0.17mL，0.98mmol)和50％
Figure BDA0003486135130000393
在EtOAc中的溶液(1.17mL，0.98mmol)处理2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸(中间体B)(154mg，0.59mmol)和4-氨基-N-叔丁基-吡啶-2-甲酰胺(中间体AB)(95mg，0.49mmol)在1，4-二噁烷(4.9mL)中的的混合物，并在室温下搅拌温度2小时。真空浓缩所得混合物并将残余物溶解在EtOAc(10mL)中。有机物用饱和碳酸氢钠水溶液(2x10mL)洗涤，合并的水性洗涤液用EtOAc(2x10mL)再萃取。合并的有机物经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。将所得残余物溶于DCM(4.9mL)并冷却(0℃)，然后用TFA(0.94mL，12.29mmol)处理。使混合物升温至室温并搅拌3小时。真空浓缩所得混合物并将粗残余物溶解在EtOAc(10mL)中。溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(酸性pH，早期洗脱方法)纯化，得到标题化合物，为淡黄色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 2.71mins；MS m/z 352.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.99(s，1H)，10.79(s，1H)，8.44(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03-8.01(m，2H)，7.82(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.84(s，2H)，1.39(s，9H).
实例2.1
N-(1-氰基-1-甲基-乙基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000392
类似于实例2，由4-氨基-N-(1-氰基-1-甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺(中间体AC)和2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸(中间体B)制备标题化合物。
LC-MS(方法A)：Rt 2.32mins；MS m/z 363.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.99(s，1H)，10.84(s，1H)，8.83(s，1H)，8.51(d，J＝5.5Hz，1H)，8.24(d，J＝2.1Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.87(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.09(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.85(s，2H)，1.72(s，6H).
实例3
N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000401
步骤1：N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000402
类似于实例1，由4-氨基-N-(1，1-二甲基丙基-2-炔基)吡啶-2-甲酰胺(中间体A)和2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸(中间体B)制备标题化合物。
LC-MS(方法E)：Rt 1.15mins；MS m/z 446.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.84(s，1H)，8.47(d，J＝5.5Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.21(d，J＝1.5Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.84(dd，J＝5.5，1.7Hz，1H)，7.72(d，J＝8.3Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.16(d，J＝8.3Hz，1H)，5.81(d，J＝9.6Hz，1H)，3.92-3.86(m，3H)，3.78-3.68(m，1H)，3.20(s，1H)，2.46-2.37(m，1H)，2.09-1.93(m，2H)，1.82-1.69(m，1H)，1.64(s，6H)，1.60-1.55(m，2H).
步骤2：N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
用TFA(1.74mL，22.79mmol)处理N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(步骤1)(83％，950mg，1.77mmol)在DCM(12mL)中的冷却溶液(0℃)。使混合物升温至室温并搅拌3小时。加入另外的TFA(0.87mL，11.40mmol)并使反应继续3小时。真空浓缩所得混合物。将粗残余物溶解在EtOAc(30mL)中并用饱和NaHCO3溶液(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过C18反相色谱纯化，用10-100％MeCN(0.1％甲酸)和水(0.1％甲酸)洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 2.52mins；MS m/z 362.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.99(s，1H)，10.82(s，1H)，8.47(d，J＝5.5Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.21(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.84(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.09(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.84(s，2H)，3.21(s，1H)，1.64(s，6H).
实例4
N-(1-乙炔基环戊基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000411
步骤1：4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰]氨基]吡啶-2--甲酸甲酯的混合物
Figure BDA0003486135130000421
类似于实例1，由4-氨基吡啶-2-甲酸甲酯和2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸(中间体B1)制备标题化合物。
LC-MS(方法E)：Rt 0.97，0.99mins；MS m/z 395.2＝[M+H]+：2个区域异构体峰
步骤2：4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物
Figure BDA0003486135130000422
向4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯(步骤1)(80％，1.76g，3.57mmol)在THF(6mL)、MeOH(6mL)和水(6mL)中的混合物加入LiOH.H2O(180mg，4.28mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的LiOH.H2O(45mg，1.07mmol)，并将混合物在室温下再搅拌1小时。使用1M HCl将所得混合物酸化至pH 5，然后用盐水(15mL)和EtOAc(15mL)稀释，由此形成的沉淀物通过真空过滤收集。分离滤液各相，水相用EtOAc(15mL)萃取，然后真空浓缩合并的有机物。将所得残余物在乙醚(10mL)中研磨并过滤，并将固体与来自先前过滤的固体合并。将水相冷却至2-8℃并静置3天。过滤所得悬浮液并将固体与来自先前过滤的固体合并。合并的固体在真空烘箱中干燥，得到标题化合物，为无色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 0.86mins；MS m/z 381.1＝[M+H]+
步骤3：N-(1-乙炔基环戊基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
向4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(步骤2)(99％，150mg，0.39mmol)的混合物和1-乙炔基环戊胺盐酸盐(68mg，0.47mmol)在DMF(2mL)中的溶液加入DIPEA(136μL，0.78mmol)，然后是HATU(163mg，0.43mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。所得混合物用EtOAc(10mL)稀释并用饱和NaHCO3溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并真空浓缩。将粗物质溶解在DCM(2mL)中，用TFA(1.0mL，13.07mmol)处理并在室温下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物并将残余物溶解在EtOAc中。有机混合物用饱和NaHCO3溶液洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(酸性pH，早期洗脱方法)纯化粗残留物，得到标题化合物，为无色粉末。
LC-MS(方法A)：Rt 2.83mins；MS m/z 388.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，10.82(s，1H)，8.52-8.44(m，2H)，8.21(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.71(d，J＝8.3Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.09(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.85(s，2H)，3.17(s，1H)，2.30-2.21(m，2H)，2.13-2.06(m，2H)，1.77-1.65(m，4H).
以下列表实例(表1)的化合物类似于实例4步骤3由4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物(实例4步骤2)和合适的市售胺制备。
Figure BDA0003486135130000441
Figure BDA0003486135130000451
实例5
N-(2，2-二氟-1，1-二甲基-乙基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000461
使用
Figure BDA0003486135130000462
在EtOAc中的50％溶液(235μL，0.39mmol)处理4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例4步骤2)(60mg，0.16mmol)的混合物，1，1-二氟-2-甲基-丙-2-胺盐酸盐(28mg，0.19mmol)和DIPEA(69μL，0.39mmol)在1，4-二噁烷(1.2mL)中的悬浮液，并在室温下搅拌2小时。所得混合物在DCM(5mL)和水(5mL)之间分配，有机部分通过疏水性PTFE烧结管过滤分离。真空浓缩滤液并将残余物溶解在TFA(在DCM中50％)(2.0mL，0.16mmol)中。将所得混合物搅拌4小时，然后用DCM(10mL)稀释。缓慢加入饱和NaHCO3(10mL)水溶液，通过疏水性PTFE烧结管过滤分离游离基混合物。真空浓缩有机部分，残余物通过碱性二氧化硅色谱纯化，依次用庚烷中的0至100％EtOAc和EtOAc中的0至100％MeOH洗脱。所得材料通过C18反相色谱进一步纯化，用含有0.1％甲酸改性剂的水中的10-100％MeCN洗脱。合并含有产物的级分，并真空浓缩以除去挥发性溶剂，然后用饱和NaHCO3(10mL)和DCM (10mL)处理。通过疏水性PTFE烧结管过滤分离有机部分并真空浓缩，得到标题化合物，为白色结晶固体。
LC-MS(方法A)：Rt 2.83mins；MS m/z 388.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，10.83(s，1H)，8.48(d，J＝5.5Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.23(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.83(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，6.46(t，J＝57.0Hz，1H)，3.84(s，2H)，1.44(s，6H).
以下列表实例(表2)的化合物类似于实例5由4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物(实例4步骤2)和合适的市售胺制备。
Figure BDA0003486135130000481
Figure BDA0003486135130000491
实例6
N-叔丁基-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000501
步骤1：6-溴-5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑和6-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑的混合物
Figure BDA0003486135130000502
使用1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(694μL，5.12mmol)处理在丙酮(100mL)中的6-溴-5-氟-1H-吲唑(1.0g，4.65mmol)、K2CO3(964mg，6.98mmol)和碘化钾(849mg，5.12mmol)，并将混合物加热至45℃4小时，然后在室温下搅拌2天。真空浓缩所得混合物并将残余物溶解在EtOAc(50mL)中。有机混合物用水(2x50mL)、盐水(2x50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化粗物质，用庚烷中的0至100％EtOAc梯度洗脱，得到标题区域异构混合物，为黄色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.22，1.26mins；MS m/z 335.0，337.0＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.47(d，J＝0.7Hz，0.4H)，8.25(d，J＝5.6Hz，0.6H)，8.10(d，J＝0.9Hz，0.6H)，8.04(d，J＝6.2Hz，0.4H)，7.74(d，J＝8.8Hz，0.6H)，7.66(d，J＝9.3Hz，0.4H)，7.34-7.29(m，0.8H)，7.25-7.19(m，1.2H)，6.93-6.89(m，0.8H)，6.89-6.84(m，1.2H)，5.58(s，1.2H)，5.55(s，0.8H)，3.72(s，1.2H)，3.70(s，1.8H).(区域异构体的比例为0.4∶0.6)
步骤2：2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸和2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸的混合物
Figure BDA0003486135130000511
向6-溴-5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑和6-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑的混合物(步骤1)(1200mg，3.58mmol)和3-乙氧基-3-氧代-丙酸钾(914mg，5.37mmol)在均三甲苯(30mL)中的溶液，加入DMAP(44mg，0.36mmol)，并将所得混合物用氮气鼓泡5分钟并在室温下搅拌。加入二烯丙基二钯二氯化物(26mg，0.07mmol)和BINAP(134mg，0.21mmol)，并将混合物继续用氮气鼓泡5分钟。将所得混合物在140℃搅拌16小时。冷却至室温后，混合物用MeOH(50mL)稀释，用2M LiOH (25mL)处理并在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物并将粗物质在水和EtOAc之间分配。分离各层，有机部分用水萃取。使用2M HCl将合并的水性部分酸化至pH 4，然后用EtOAc(2x50mL)再萃取。有机萃取物用经Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，以得到标题区域异构混合物，为黄色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.02，1.04mins；MS m/z 315.1＝[M+H]+；两种区域异构体
步骤3：4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯的混合物
Figure BDA0003486135130000512
Figure BDA0003486135130000521
向2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸和2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸(步骤2)(975mg，3.1mmol)的混合物在1，4-二噁烷(25mL)中的溶液加入4-氨基吡啶-2-甲酸甲酯(472mg，3.1mmol)、DIPEA(1.08mL，6.2mmol)，然后加入
Figure BDA0003486135130000522
在EtOAc(1.02mL，3.41mmol)中的50％溶液，并将反应混合物在惰性气氛下在室温下搅拌16小时。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并用水(2x50mL)洗涤。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。粗物质通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0至100％EtOAc梯度洗脱，得到标题区域异构混合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.04，1.06mins；MS m/z 449.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.85(s，0.75H)，10.80(s，0.25H)，8.57-8.54(m，1H)，8.38(s，0.25H)，8.30(d，J＝2.0 Hz，1H)，8.06-8.05(m，0.75H)，7.78(dd，J＝5.5，2.1Hz，1H)，7.74(d，J＝5.9Hz，0.75H)，7.62(d，J＝6.6Hz，0.25H)，7.54(d，J＝9.9Hz，0.75H)，7.42(d，J＝10.5Hz，0.25H)，7.31-7.27(m，0.5H)，7.21-7.17(m，1.5H)，6.92-6.88(m，0.5H)，6.86-6.81(m，1.5H)，5.55(s，1.5H)，5.54(s，0.5H)，3.91(s，2H)，3.86(s，2.25H)，3.86(s，0.75H)，3.72(s，0.75H)，3.68(s，2.25H).区域异构体的比例为0.75∶0.25。
步骤4：4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物
Figure BDA0003486135130000531
向4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯的混合物(步骤3)(830mg，1.85mmol)在THF(20mL)中的溶液添加1M LiOH(4.63mL，4.63mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。真空浓缩所得混合物并将残余物重新溶解在水(20mL)中。使用6MHCl将水性部分酸化至pH 4。过滤所得白色沉淀，用水(20mL)洗涤并在40℃真空干燥，得到标题区域异构混合物，为白色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 0.95mins；MS m/z 435.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.84(s，0.7H)，10.79(s，0.3H)，8.54-8.49(m，1H)，8.38-8.36(m，0.3H)，8.25-8.23(m，1H)，8.04(d，J＝0.8Hz，0.7H)，7.80-7.77(m，1H)，7.74(d，J＝5.9Hz，0.7H)，7.61(d，J＝6.5Hz，0.3H)，7.53(d，J＝9.9Hz，0.7H)，7.41(d，J＝10.5Hz，0.3H)，7.30-7.26(m，0.6H)，7.21-7.14(m，1.4H)，6.91-6.88(m，0.6H)，6.85-6.81(m，1.4H)，5.54(s，1.4H)，5.54(s，0.6H)，3.90(s，1.4H)，3.86(s，0.6H)，3.71(s，0.9H)，3.67(s，2.1H).区域异构体的比例为0.3∶0.7
步骤5：N-叔丁基-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
向4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物(步骤4)(200mg，0.46mmol)在DMF(5mL)中的溶液加入HATU(193mg，0.51mmol)，然后加入DIPEA(161μL，0.92mmol)。搅拌5分钟后，加入2-甲基丙-2-胺(37mg，0.51mmol)，并将混合物在惰性气氛下于室温搅拌2小时。所得混合物用EtOAc(20mL)稀释并用水(2x20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将粗物质溶解在DCE(5mL)中，加入TFA(1.76mL，23.02mmol)，并将混合物在75℃下搅拌16小时。真空浓缩所得混合物，与甲苯(2mL)共沸。通过C18反相色谱纯化粗物质，用含有0.1％甲酸改性剂的在水中的10-100％MeCN洗脱，得到标题化合物，为淡黄色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 2.76mins；MS m/z 370.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.12(br.s，1H)，10.84(s，1H)，8.46(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06-8.02(m，2H)，7.82(dd，J＝5.6，2.2Hz，1H)，7.57(d，J＝6.1Hz，1H)，7.52(d，J＝10.1Hz，1H)，3.93(s，2H)，1.40(s，9H).
实例6.1
4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000541
类似于实例6步骤5，标题化合物由4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物(实例6，步骤4)和1-(三氟甲基)环丙胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.68mins；MS m/z 422.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.12(s，1H)，10.85(s，1H)，9.38(s，1H)，8.50(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.57(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52(d，J＝10.1Hz，1H)，3.93(s，2H)，1.33-1.27(m，2H)，1.21-1.17(m，2H).
实例6.2
N-(2，2-二氟环戊基)-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000551
类似于实例6步骤5，标题化合物由4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物(实例6，步骤4)和2，2-二氟环戊盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.73mins；MS m/z 418.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.12(s，1H)，10.85(s，1H)，8.61(d，J＝9.3Hz，1H)，8.52(d，J＝5.5Hz，1H)，8.25(d，J＝2.1Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.58(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52(d，J＝10.1Hz，1H)，4.67-4.52(m，1H)，3.94(s，2H)，2.24-2.05(m，3H)，1.91-1.65(m，3H).
实例6.3
4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000552
步骤1-4：4-[[2-[4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸
Figure BDA0003486135130000553
类似于4-[[2-[5-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-[5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸的混合物(实例6，步骤1-4)，通过用6-溴-4-氯-1H-吲唑代替6-溴-5-氟-1H-吲唑(步骤1)来制备标题化合物。
LC-MS(方法E)：Rt 1.00mins；MS m/z 451.1，453.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.98(s，1H)，8.55(d，J＝5.6Hz，1H)，8.30(d，J＝2.0Hz，1H)，8.12(d，J＝0.8Hz，1H)，7.84(dd，J＝5.6，2.1Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.22(d，J＝0.8Hz，1H)，7.22-7.18(m，2H)，6.85-6.81(m，2H)，5.57(s，2H)，3.89(s，2H)，3.67(s，3H).
步骤5：4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
类似于步骤6步骤5，标题化合物由4-[[2-[4-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(步骤1-4)和1-(三氟甲基)环丙胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 3.03mins；MS m/z 438.1，440.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.38(s，1H)，10.83(s，1H)，9.39(s，1H)，8.50(d，J＝5.5Hz，1H)，8.20(d，J＝2.0Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.86(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.19(d，J＝0.9Hz，1H)，3.87(s，2H)，1.32-1.27(m，2H)，1.21-1.15(m，2H).
实例6.4
4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(1-乙炔基环戊基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000561
步骤1：4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸
Figure BDA0003486135130000571
将TFA(0.5mL，6.53mmol)添加到4-[[2-[4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例6.3步骤1-4)(80mg，0.18mmol)在DCE(1mL)中的溶液，并将混合物加热至75℃40小时。所得混合物用DCM(2mL)稀释并真空浓缩，与DCM(3x5mL)共沸。将粗残余物悬浮在MeCN(1mL)中，过滤，用MeCN(3x1mL)洗涤并干燥，得到标题化合物，为浅棕色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 0.86mins；MS m/z 331.0，333.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.40(s，1H)，10.96(s，1H)，8.55(d，J＝5.7Hz，1H)，8.30(d，J＝2.0Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.86(dd，J＝5.7，2.1Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.19(s，1H)，1H)，3.89(s，2H).
步骤2：4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(1-乙炔基环戊基)吡啶-2-甲酰胺
类似于步骤6步骤5，标题化合物由4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(步骤1)和1-乙炔基环戊胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 3.22mins；MS m/z 422.2，424.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.38(s，1H)，10.82(s，1H)，8.50-8.44(m，2H)，8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.84(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.19(s，1H)，3.87(s，2H)，3.16(s，1H)，2.28-2.20(m，2H)，2.13-2.05(m，2H)，1.77-1.63(m，4H).
实例7
N-叔丁基-4-[[2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000572
步骤1：6-溴-4-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑和6-溴-4-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑的混合物
Figure BDA0003486135130000581
类似于步骤6步骤1，标题化合物由6-溴-4-氟-1H-吲唑和1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯制备。
LC-MS(方法E)：Rt 1.31，1.35mins；MS m/z 335.0，337.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.73(d，J＝0.7Hz，0.4H)，8.24(d，J＝0.8Hz，0.6H)，8.00-7.97(m，0.6H)，7.75-7.71(m，0.4H)，7.36-7.31(m，0.8H)，7.25-7.21(m，1.2H)，7.19(dd，J＝9.6，1.2Hz，0.6H)，7.03(dd，J＝9.9，1.2Hz，0.4H)，6.93-6.89(m，0.8H)，6.89-6.85(m，1.2H)，5.60(s，1.2H)，5.56(s，0.8H)，3.72(s，1.2H)，3.70(s，1.8H).区域异构体的比例为0.4∶0.6
步骤2：2-[4-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸和2-[4-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸的混合物
Figure BDA0003486135130000582
类似于步骤6步骤2，标题化合物由6-溴-4-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑和6-溴-4-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑(步骤1)的混合物和3-乙氧基-3-氧代-丙酸钾制备。
LC-MS(方法E)：Rt 1.07，1.10mins；MS m/z 315.0＝[M+H]+；两种区域异构体
步骤3：N-叔丁基-4-[[2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
向2-[4-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸和2-[4-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸的混合物(步骤2)(87％，114mg，0.32mmol)、4-氨基-N-叔丁基-吡啶-2-甲酰胺(中间体AB)(61mg，0.32mmol)和DIPEA(110μL，0.63mmol)在1，4-二噁烷(5mL)中的溶液加入
Figure BDA0003486135130000591
在EtOAc(103μL，0.35mmol)中的50％溶液，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。真空浓缩所得混合物并将残余物溶解在EtOAc(20mL)中。有机混合物用水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将粗物质溶解在DCE(2mL)中，然后加入TFA(1.21mL，15.78mmol)，并将混合物加热至75℃48小时。真空浓缩所得混合物并通过C18反相色谱纯化粗残余物，用含有0.1％甲酸改性剂的在水中的10-100％MeCN洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 2.91mins；MS m/z 370.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.35(s，1H)，10.81(s，1H)，8.45(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.1Hz，1H)，8.13(s，1H)，8.02(s，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.1Hz，1H)，7.34(s，1H)，6.88(d，J＝11.2Hz，1H)，3.86(s，2H)，1.39(s，9H).
实例7.1
N-叔丁基-4-[[2-(5-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000592
类似于N-叔丁基-4-[[2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(实例7，(步骤1-3))，通过用6-溴-5-氯-1H-吲唑代替6-溴-5-氟-1H-吲唑(步骤1)来制备标题化合物。
LC-MS(方法A)：Rt 2.96mins；MS m/z 386.1，388.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.22(s，1H)，10.86(s，1H)，8.46(d，J＝5.5Hz，1H)，8.20(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(d，J＝7.3Hz，2H)，7.88(s，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.64(s，1H)，4.03(s，2H)，1.40(s，9H).
实例7.2
N-叔丁基-4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000601
步骤1：6-溴-4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑
Figure BDA0003486135130000602
使用1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(0.35mL，2.59mmol)处理6-溴-4-氯-1H-吲唑(500mg，2.16mmol)和Cs2CO3(1.06mg，3.24mmol)在DMF(10mL)中的混合物，所得混合物在室温下搅拌16小时。所得混合物用EtOAc(50mL)和水(50mL)稀释并分离各相。有机部分用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化粗物质，用庚烷中的0-80％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为橙色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.40mins；MS m/z 350.9，352.9，354.9＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.18(d，J＝0.9Hz，1H)，8.13(t，J＝1.1Hz，1H)，7.43(d，J＝1.3Hz，1H)，7.24-7.20(m，2H)，6.89-6.85(m，2H)，5.60(s，2H)，3.70(s，3H).
步骤2：2-[4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸
Figure BDA0003486135130000603
类似于步骤6步骤2，标题化合物由6-溴-4-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑(步骤1)和3-乙氧基-3-氧代-丙酸钾制备。
LC-MS(方法E)：Rt 1.16mins；MS m/z 331.0，333.0＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.44(s(br)，1H)，8.10(d，J＝0.8Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.22-7.19(m，2H)，7.15(d，J＝0.9Hz，1H)，6.88-6.84(m，2H)，5.56(s，2H)，3.71(s，2H)，3.70(s，3H).
步骤3：N-叔丁基-4-[[2-[4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000611
使用
Figure BDA0003486135130000612
在EtOAc中的50％溶液(50％，0.093mL，0.16mmol)处理4-氨基-N-叔丁基-吡啶-2-甲酰胺(中间体AB)(28mg，0.14mmol)、2-[4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸(步骤2)(99％，43mg，0.13mmol)和DIPEA(0.045mL，0.26mmol)在1，4-二噁烷(1mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌30分钟。所得混合物用EtOAc(15mL)和1∶1水/盐水(15mL)稀释并分离各相。有机部分经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。通过硅胶色谱纯化粗物质，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为淡黄色蜡状固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.34mins；MS m/z 506.2，508.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.80(s，1H)，8.46(d，J＝5.5Hz，1H)，8.18(dd，J＝1.8，0.4Hz，1H)，8.12(d，J＝0.9Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.68(s，1H)，7.23-7.18(m，3H)，6.86-6.81(m，2H)，5.58(s，2H)，3.87(s，2H)，3.67(s，3H)，1.40(s，9H).
步骤4：N-叔丁基-4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
使用TFA(0.3mL，3.91mmol)处理N-叔丁基-4-[[2-[4-氯-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺在DCE(1mL)中的溶液(步骤3)(100％，40mg，0.08mmol)，并将混合物加热至75℃过夜。添加另外的TFA(0.3mL，3.91mmol)，并在75℃下继续搅拌另外24小时。将所得混合物真空浓缩，与DCM(2x5mL)共沸，并通过C18反相色谱纯化粗物质，用含有0.1％甲酸改性剂的水中的10-100％MeCN洗脱，得到标题化合物，为淡黄色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 3.12mins；MS m/z 386.2，388.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.38(s，1H)，10.80(s，1H)，8.45(d，J＝5.5Hz，1H)，8.18(d，J＝2.0Hz，1H)，8.09(s，1H)，8.03(s，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.19(d，J＝0.7Hz，1H)，3.87(s，2H)，1.39(s，9H).
实例8
N-叔丁基-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000621
步骤1：6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(三氟甲基)吲唑
Figure BDA0003486135130000622
向6-溴-3-(三氟甲基)-1H-吲唑(1.0g，3.77mmol)、K2CO3(782mg，5.66mmol)和碘化钾(689mg，4.15mmol)的混合物，加入丙酮(100mL)，然后加入1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(0.56mL，4.15mmol)，并将混合物加热至40℃2小时。真空浓缩所得混合物。将干燥的粗残余物溶解在EtOAc(30mL)中并用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过硅胶(50gKP-Sil)色谱纯化粗物质，用庚烷中的0-6％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.44mins；MS m/z未观察到离子
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.35(dd，J＝1.6，0.6Hz，1H)，7.76(dt，J＝8.7，0.8，1H)，7.49(dd，J＝8.7，1.6Hz，1H)，7.31-7.25(m，2H)，6.93-6.88(m，2H)，5.70(s，2H)，3.71(s，3H).
步骤2：2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(三氟甲基)吲唑-6-基]乙酸
Figure BDA0003486135130000631
将6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(三氟甲基)吲唑(步骤1)(250mg，0.65mmol)、2-氰基乙酸钾(120mg，0.97mmol)、二烯丙基二氯化钯(10mg，0.03mmol)和SPhos(16mg，0.04mmol)在甲苯(5mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。将所得混合物使用微波辐射在140℃加热1.5小时。冷却至室温后，将混合物真空浓缩并将残余物溶解在1，4-二噁烷(5mL)和1M NaOH水溶液(5mL)中。将所得混合物回流加热(130℃)2小时，然后真空除去挥发性有机溶剂。剩余的碱性水溶液用EtOAc(2x10mL)萃取并弃去有机物。使用1M HCl将水相酸化至pH 2，然后用EtOAc(3x15mL)萃取，合并的有机萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.17mins；MS m/z 365.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.83(s，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.29-7.23(m，3H)，6.92-6.87(m，2H)，5.66(s，2H)，3.75(s，2H)，3.70(s，3H).
步骤3：N-叔丁基-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
类似于实例7步骤3，标题化合物由2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(三氟甲基)吲唑-6-基]乙酸(步骤2)和4-氨基-N-叔丁基-吡啶-2-甲酰胺(中间体AB)制备。
LC-MS(方法A)：Rt 3.44mins；MS m/z 420.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.96(s，1H)，10.86(s，1H)，9.39(s，1H)，8.50(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝1.6Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.4，1.9Hz，1H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，3.91(s，2H)，1.32-1.27(m，2H)，1.21-1.16(m，2H).
实例8.1
N-[1-(三氟甲基)环丙基]-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000641
类似于实例7步骤3，标题化合物由2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(三氟甲基)吲唑-6-基]乙酸(实例8步骤2)和4-氨基-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(中间体AD)制备。
LC-MS(方法A)：Rt 3.44mins；MS m/z 472.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.96(s，1H)，10.86(s，1H)，9.39(s，1H)，8.50(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝1.6Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.4，1.9Hz，1H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，3.91(s，2H)，1.30(t，J＝6.8Hz，2H)，1.18(s，2H).
实例9
N-叔丁基-4-[[2-(3-异丙基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000642
步骤1：2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸
Figure BDA0003486135130000651
使用1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(830mg，5.3mmol)处理2-(3-碘-1H-吲唑-6-基)乙酸(中间体C)(728mg，2.41mmol)、碘化钾(880mg，5.3mmol)和碳酸钾(999mg，7.23mmol)在丙酮(12.0mL)中的混合物，并将混合物加热至45℃24小时，然后在室温下搅拌2天。过滤所得混合物，用EtOAc(30mL)洗涤。用水(30mL)稀释滤液并分离各相。有机物用盐水(30mL)洗涤，然后真空浓缩。残余物用1M LiOH(7.23mL，7.23mmol)和THF(8mL)处理。在室温下搅拌2小时后，真空除去挥发性溶剂，并用1M HCl将pH值调节至约5-6，导致沉淀。过滤固体，用水洗涤并干燥，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.16mins；MS m/z 422.9＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.58(s，1H)，7.29(d，J＝8.3Hz，1H)，7.23-7.16(m，2H)，7.12(dd，J＝8.4，1.2Hz，1H)，6.91-6.83(m，2H)，5.52(s，2H)，3.69(s，3H)，3.56(s，2H).
步骤2：N-叔丁基-4-[[2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000652
依次使用TEA(0.30mL，1.7mmol)和
Figure BDA0003486135130000662
在EtOAc中的50％溶液(1.01mL，1.7mmol)处理在2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸(步骤1)(84％，428mg，0.85mmol)和4-氨基-N-叔丁基-吡啶-2-甲酰胺(中间体AB)(181.09mg，0.94mmol)在1，4-二噁烷(8.5mL)中的混合物，并将反应混合物在室温下搅拌18小时。真空除去挥发性溶剂并将残余物溶解在EtOAc(20mL)中。有机溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(2x15mL)洗涤，合并的洗涤水溶液用EtOAc(3x10mL)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，标题化合物为无色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.33mins；MS m/z 598.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.82(s，1H)，8.45(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.38(d，J＝8.3Hz，1H)，7.24-7.17(m，3H)，6.87-6.82(m，2H)，5.56(s，2H)，3.87(s，2H)，3.68(s，3H)，1.39(s，9H).
步骤3：N-叔丁基-4-[[2-[3-异丙烯基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000661
在氮气氛下，向N-叔丁基-4-[[2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(步骤2)(158mg，0.26mmol)、Pd(OAc)2(12mg，0.05mmol)、P(Cy)3(30mg，0.11mmol)和磷酸三钾(225mg，1.06mmol)的混合物加入甲苯(2.7mL)，然后加入2-异丙烯基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(0.10mL，0.53mmol)，并将反应混合物在100℃下加热4小时。冷却至室温后，所得混合物通过硅胶色谱纯化，用在庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为淡黄色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.35mins；MS m/z 512.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.79(s，1H)，8.45(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.1Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.23-7.18(m，2H)，7.16(dd，J＝8.5，1.2Hz，1H)，6.86-6.77(m，2H)，5.76(s，1H)，5.54(s，2H)，5.37-5.30(m，1H)，3.84(s，2H)，3.67(s，3H)，2.23(s，3H)，1.40(s，9H).
步骤4：N-叔丁基-4-[[2-(3-异丙基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
将N-叔丁基-4-[[2-[3-异丙烯基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(步骤3)(98％，113mg，0.22mmol)和10％Pd-C(23mg，0.02mmol)溶解在EtOH(2.2mL)中，置于氢气下并搅拌4h。所得混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩。将残余物依次用DCE(2.16mL)和TFA(0.017mL，0.22mmol)处理，并将混合物在70℃加热过夜。添加另外的TFA(1.2mL)，并在70℃下继续搅拌24小时。将所得混合物真空浓缩并通过制备型HPLC(酸性pH，早期洗脱方法)纯化粗物质，得到标题化合物，为无色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 3.27mins；MS m/z 394.3＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.51(s，1H)，10.78(s，1H)，8.44(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.1Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.81(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.71(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.03(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.81(s，2H)，1.39(s，9H)，1.35(d，J＝6.9Hz，6H).
实例9.1
4-[[2-(3-四氢呋喃-2-基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000671
步骤1：4-[[2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000681
类似于实例9步骤2，标题化合物由2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸(实例9步骤1)和4-氨基-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(中间体AD)制备。
LC-MS(方法E)：Rt 1.30mins；MS m/z 650.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.83(s，1H)，9.39(s，1H)，8.50(d，J＝5.5Hz，1H)，8.20(d，J＝2.0 Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.38(d，J＝8.3Hz，1H)，7.24-7.16(m，3H)，6.86-6.81(m，2H)，5.56(s，2H)，3.87(s，2H)，3.67(s，3H)，1.32-1.27(m，2H)，1.21-1.16(m，2H).
步骤2：4-[[2-[3-(2，3-二氢呋喃-4-基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000682
类似于实例9步骤3，标题化合物由4-[[2-[3-碘-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(步骤1)和2-(2，3-二氢呋喃-4-基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷制备。
LC-MS(方法E)：Rt 1.25mins；MS m/z 592.3＝[M+H]+
步骤3：4-[[2-(3-四氢呋喃-2-基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
类似于步骤9步骤4，标题化合物由4-[[2-[3-(2，3-二氢呋喃-5-基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(步骤2)和10％Pd/C制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.83mins；MS m/z 474.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.78(s，1H)，10.83(s，1H)，9.38(s，1H)，8.49(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝2.0 Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.1Hz，1H)，7.72(d，J＝8.3Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.06(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，5.17(t，J＝7.2Hz，1H)，3.94(q，J＝7.2Hz，1H)，3.84-3.81(m，3H)，2.29-2.15(m，2H)，2.10-1.93(m，2H)，1.32-1.26(m，2H)，1.21-1.14(m，2H).
实例10
4-[[2-[3-(吗啉代甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000691
步骤1：6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-甲醛
Figure BDA0003486135130000692
将1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(0.49mL，3.67mmol)添加到6-溴-1H-吲唑-3-甲醛(750mg，3.33mmol)和Cs2CO3(1629mg，5.0mmol)在DMF(12mL)中的混合物，并将反应混合物在室温下搅拌2小时30分钟。将所得混合物用EtOAc(60mL)和盐水(60mL)稀释。分离各相，并用EtOAc(60mL)萃取水性部分。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。通过硅胶色谱纯化粗物质，用庚烷中的0-80％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为橙色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.30mins；MS m/z 345.0，347.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.14(s，1H)，8.31(d，J＝1.2Hz，1H)，8.06(d，J＝8.6Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.6，1.6Hz，1H)，7.33-7.30(m，2H)，6.92-6.88(m，2H)，5.74(s，2H)，3.71(s，3H).
步骤2：4-[[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]甲基]吗啉
Figure BDA0003486135130000701
向6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-甲醛(步骤1)(600mg，1.74mmol)和AcOH(0.15mL，2.61mmol)在THF(10mL)中的溶液，添加吗啉(0.30mL，3.48mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(442mg，2.09mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16h。所得混合物用EtOAc(80mL)和饱和碳酸氢钠溶液(80mL)稀释并分离各相。有机萃取物用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化粗物质，依次用庚烷中的0-100％EtOAc和EtOAc中的0-5％MeOH洗脱，得到标题化合物，为橙色油。
LC-MS(方法E)：Rt 0.98mins；MS m/z 416.0，418.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.00(d，J＝1.2Hz，1H)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H)，7.25(dd，J＝8.6，1.6Hz，1H)，7.21-7.16(m，2H)，6.88-6.84(m，2H)，5.52(s，2H)，3.80(s，2H)，3.69(s，3H)，3.57-3.52(m，4H)，2.42-2.37(m，4H).
步骤3：2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(吗啉-4-鎓-4-基甲基)吲唑-6-基]乙酸盐
Figure BDA0003486135130000702
类似于步骤6步骤2，标题化合物由4-[[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]甲基]吗啉(步骤2)和3-乙氧基-3-氧代-丙酸钾制备。
LC-MS(方法E)：Rt 0.81mins；MS m/z 396.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.65(d，J＝8.3Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.17-7.13(m，2H)，7.03(dd，J＝8.4，1.0Hz，1H)，6.87-6.82(m，2H)，5.45(s，2H)，3.77(s，2H)，3.70(s，3H)，3.58-3.53(m，4H)，3.26(s，2H)，2.43-2.38(m，4H).
步骤4：4-[[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(吗啉代甲基)吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯
Figure BDA0003486135130000711
类似于步骤6步骤3，标题化合物由2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(吗啉-4-鎓-4-基甲基)吲唑-6-基]乙酸盐(步骤3)和4-氨基吡啶-2-甲酸甲酯制备标题化合物。
LC-MS(方法E)：Rt 0.88mins；MS m/z 530.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.81(s，1H)，8.55(d，J＝5.7Hz，1H)，8.29(d，J＝1.9Hz，1H)，7.82-7.77(m，2H)，7.56(s，1H)，7.18-7.13(m，2H)，7.09(dd，J＝8.4，1.2Hz，1H)，6.84-6.78(m，2H)，5.49(s，2H)，3.86(s，3H)，3.82(s，2H)，3.79(s，2H)，3.66(s，3H)，3.55-3.52(m，4H)，2.41-2.38(m，4H).
步骤5：4-[[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(吗啉-4-鎓-4-基甲基)吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸盐
Figure BDA0003486135130000712
类似于步骤6步骤4，标题化合物由4-[[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(吗啉代甲基)吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸甲酯(步骤4)和1MLiOH制备。
LC-MS(方法E)：Rt 0.80mins；MS m/z 516.3＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.79(s，1H)，8.49(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝1.7Hz，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(dd，J＝5.6，2.2Hz，1H)，7.58(s，1H)，7.19-7.13(m，2H)，7.09(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，6.83-6.80(m，2H)，5.49(s，2H)，3.82(s，2H)，3.79(s，2H)，3.66(s，3H)，3.55-3.53(m，4H)，2.41-2.38(m，4H).
步骤6：4-[[2-[3-(吗啉代甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺
类似于步骤6步骤5，标题化合物由4-[[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-(吗啉-4-鎓-4-基甲基)吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸盐(步骤5)和1，1，1-三氟-2-甲基-丙-2-胺盐酸盐制备标题化合物。
LC-MS(方法A)：Rt 1.91mins；MS m/z 505.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.78(s，1H)，10.84(s，1H)，8.49(d，J＝5.6Hz，1H)，8.33(s，1H)，8.23(d，J＝2.0 Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.6，2.2Hz，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.07(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.83(s，2H)，3.79(s，2H)，3.56-3.52(m，4H)，2.42-2.37(m，4H)，1.65(s，6H).
实例11
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000721
步骤1：4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸
Figure BDA0003486135130000731
使用TFA(1.91mL，24.97mmol)处理4-[[2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸和4-[[2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸在DCM(100mL)中的混合物(实例4步骤2)(50％，1.9g，2.5mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物真空浓缩，并将粗残余物悬浮在DCM(50mL)中。将悬浮液超声10分钟，过滤，用DCM(20mL)洗涤并干燥，得到标题化合物，为米色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 0.78mins；MS m/z 297.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.10(s，1H)，11.96(s，1H)，8.58(d，J＝6.0 Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.08(d，J＝6.3Hz，1H)，8.02(d，J＝0.8Hz，1H)，7.69(d，J＝8.3Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.13(dd，J＝8.3，1.0 Hz，1H)，3.96(s，2H).
步骤2：4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-甲酰胺
将HATU(83mg，0.22mmol)加入4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(步骤1)(40％，125mg，0.17mmol)、3-甲基氧杂环丁烷-3-胺盐酸盐(42mg，0.34mmol)和DIPEA(88μL，0.51mmol)在DMF(1mL)中的混合物，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物用EtOAc(10mL)和水(10mL)稀释并分离各相。水性部分用EtOAc(10mL)萃取，合并的有机萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩。粗物质通过C18反相色谱纯化，用在H2O中的10％至100％MeCN(+0.1％甲酸)洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 1.90mins；MS m/z 366.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，8.46(d，J＝5.5Hz，1H)，8.17(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.83(dd，J＝5.5，2.1Hz，1H)，7.69(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.1Hz，1H)，4.72(d，J＝6.5Hz，2H)，4.35(d，J＝6.5Hz，2H)，3.83(s，2H)，1.58(s，3H).
实例11.1
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000741
类似于步骤11步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例11步骤1)和2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.01mins；MS m/z 392.3＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.88(d，J＝8.3Hz，1H)，8.46(d，J＝5.5Hz，1H)，8.18(d，J＝1.9Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.82(dd，J＝5.5，2.1Hz，1H)，7.69(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.1Hz，1H)，4.62(s，2H)，4.48(s，2H)，4.25(1H，J＝8.3Hz，1H)，3.83(s，2H)，2.57-2.50(m，2H)，2.38-2.30(m，2H).
实例11.2
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[4-(三氟甲基)四氢吡喃-4-基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000742
类似于步骤11步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例11步骤1)和4-(三氟甲基)四氢吡喃-4-胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.72mins；MS m/z 448.3＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.03(s，1H)，10.89(s，1H)，8.52(d，J＝5.5Hz，1H)，8.44(s，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.86(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.88-3.81(m，4H)，3.45-3.39(m，2H)，2.71(d，J＝13.1Hz，2H)，1.79(td，J＝12.9，4.5Hz，2H).
实例11.3
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)氧杂环丁烷-3-基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000751
类似于步骤11步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例11步骤1)和3-(三氟甲基)氧杂环丁烷-3-胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.38mins；MS m/z420.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，10.84(s，1H)，9.88(s，1H)，8.53(d，J＝5.5Hz，1H)，8.22(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.88(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，4.92(d，J＝8.0Hz，2H)，4.72(d，J＝8.4Hz，2H)，3.84(s，2H).
实例11.4
N-[1-(二氟甲基)环丙基]-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000752
类似于步骤11步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例11步骤1)和1-(二氟甲基)环丙胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.41mins；MS m/z 386.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，10.82(s，1H)，9.09(s，1H)，8.48(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝2.0 Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，6.07(t，J＝57.1Hz，1H)，3.84(s，2H)，1.11-1.04(m，2H)，1.06-0.97(m，2H).
实例11.5
N-(3-氟-1-双环[1.1.1]戊烷基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000761
类似于步骤11步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例11步骤1)和3-氟双环[1.1.1]戊-1-胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.56mins；MS m/z 380.2＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，10.83(s，1H)，9.37(s，1H)，8.47(d，J＝5.5Hz，1H)，8.16(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，3.84(s，2H)，2.41(d，J＝2.2Hz，6H).
实例12
4-[[2-[3-(2，2，2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000762
步骤1：6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-甲醛
Figure BDA0003486135130000763
将4-甲氧基苄基氯(1.45mL，10.75mmol)添加到6-溴-1H-吲唑-3-甲醛(2.2g，9.78mmol)和Cs2CO3(4.78g，14.66mmol)在DMF(44.4mL)中的混合物，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物用EtOAc(100mL)和水(100mL)稀释并分离各相。有机物用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为红色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.31mins；MS m/z 344.9，347.0＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.15(s，1H)，8.32(d，J＝1.0Hz，1H)，8.07(d，J＝8.5Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.6，1.6Hz，1H)，7.36-7.29(m，2H)，6.94-6.88(m，2H)，5.75(s，2H)，3.71(s，3H).
步骤2：1-[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]乙醇
Figure BDA0003486135130000771
将THF(64.76mL)中的6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-甲醛(步骤1)(73％，3.06g，6.48mmol)冷却至-78℃，并用乙醚中的3M溴(甲基)镁(2.37mL，7.12mmol)逐滴处理。使混合物升温至室温并搅拌4小时。用饱和氯化铵(50mL)淬灭反应，真空除去挥发性溶剂。所得悬浮液用EtOAc(50mL)稀释并分离各相。水相用EtOAc(3x50mL)萃取，合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为橙色油。
LC-MS(方法E)：Rt 1.24mins；MS m/z 360.9，363.0＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00-7.96(m，1H)，7.88-7.84(m，1H)，7.24-7.18(m，3H)，6.89-6.84(m，2H)，5.52(d，J＝15.5Hz，1H)，5.47(d，J＝15.5Hz，1H)，5.41(d，J＝4.8Hz，1H)，5.08(qd，J＝6.5，4.9Hz，1H)，3.70(s，3H)，1.51(d，J＝6.5Hz，3H).
步骤3：1-[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]乙酮
Figure BDA0003486135130000772
在0℃，使用戴斯-马丁试剂(3.0g，7.08mmol)处理在DCM(28mL)中的1-[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]乙醇(步骤2)(87％，2.45g，5.9mmol)的混合物。使混合物升温至室温并搅拌18小时。添加饱和亚硫酸钠水溶液(20mL)并分离各相。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(2x20mL)洗涤，合并的洗涤水溶液用DCM(2x30mL)再萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并且在真空浓缩。通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为橙色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 1.36mins；MS m/z 358.8，360.8＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.23(d，J＝1.3Hz，1H)，8.09(d，J＝8.6Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.6，1.6Hz，1H)，7.32-7.26(m，2H)，6.92-6.87(m，2H)，5.71(s，2H)，3.70(s，3H)，2.63(s，3H).
步骤4：2-[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]-1，1，1-三氟-丙-2-醇
Figure BDA0003486135130000781
在-78℃，依次用三甲基(三氟甲基)硅烷(411μL，2.78mmol)和THF中的1M TBAF(14μL，0.014mmol)处理在THF(10mL)中的1-[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]乙酮(步骤3)(500mg，1.39mmol)，并搅拌30分钟。使混合物升温至室温并搅拌2小时。加入在THF中的1MTBAF(2.78mL，2.78mmol)并继续搅拌另外2小时。真空浓缩所得混合物并将残余物溶解在EtOAc(10mL)中，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2x10mL)洗涤。合并的水洗液用EtOAc(2x10mL)萃取，合并的有机萃取液经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到标题化合物，为棕色油。
LC-MS(方法E)：Rt 1.37mins；MS m/z 429.0，431.0＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.04(d，J＝1.2Hz，1H)，7.89(d，J＝8.7Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.7，1.6Hz，1H)，7.22-7.17(m，2H)，6.98-6.89(m，1H)，6.89-6.85(m，2H)，5.60(d，J＝15.6Hz，1H)，5.56(d，J＝15.6Hz，1H)，3.70(s，3H)，1.83(s，3H).
步骤5：3-(1-苄氧基-2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)-6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑
Figure BDA0003486135130000791
使用在矿物油中的NaH 60％分散体(123mg，3.07mmol)和溴甲苯(0.36mL，3.07mmol)处理在DMF中(15.3mL)的2-[6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-3-基]-1，1，1-三氟-丙-2-醇(步骤4)(658mg，1.53mmol)，并搅拌18小时。反应用盐水(20mL)猝灭，混合物用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0-35％EtOAc洗脱，得到标题化合物，为无色油。
LC-MS(方法E)：Rt 1.64mins；MS m/z 519.1，521.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.12(d，J＝1.4Hz，1H)，7.73(d，J＝8.7Hz，1H)，7.36-7.27(m，6H)，7.24-7.20(m，2H)，6.91-6.86(m，2H)，5.67(d，J＝15.6Hz，1H)，5.63(d，J＝15.6Hz，1H)，4.58(d，J＝11.2Hz，1H)，4.14(d，J＝11.2Hz，1H)，3.70(s，3H)，2.01(s，3H).
步骤6：2-[3-(1-苄氧基-2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸
Figure BDA0003486135130000792
将3-(1-苄氧基-2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)-6-溴-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑(步骤5)(632mg，1.22mmol)、3-乙氧基-3-氧代-丙酸钾(414mg，2.43mmol尔)、DMAP(15mg，0.12mmol)、BINAP(76mg，0.12mmol)和二烯丙基二氯化钯(22mg，0.06mmol)加入到密封管中并置于氮气氛下。加入甲苯(6.1mL)，混合物用氮气鼓泡10分钟，然后在140℃搅拌20小时。所得混合物通过硅胶色谱纯化，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到醚中间体。将中间体溶解在MeOH和2M LiOH (12mL)的1∶1混合物中并搅拌18小时。真空除去挥发性溶剂并用3MHCl将含水混合物酸化至pH 1。水性悬浮液用EtOAc(3x50mL)萃取，合并的有机萃取液经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到标题化合物，为淡黄色胶状物。
LC-MS(方法E)：Rt 1.40mins；MS m/z 499.2＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.39-7.26(m，6H)，7.24-7.15(m，2H)，7.07(dd，J＝8.5，1.2Hz，1H)，6.91-6.83(m，2H)，5.61(s，2H)，4.56(d，J＝11.3Hz，1H)，4.17(d，J＝11.3Hz，1H)，3.71-3.65(m，5H)，2.01(s，3H).
步骤7：4-[[2-[3-(2，2，2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
使用DIPEA(0.19mL，1.06mmol)和
Figure BDA0003486135130000801
在EtOAc中的50％溶液(1.27mL，1.06mmol)处理2-[3-(1-苄氧基-2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]吲唑-6-基]乙酸(步骤6)(85％，312mg，0.53mmol)和4-氨基-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(中间体AD)(143mg，0.58mmol)在1，4-二噁烷(5.3mL)中的混合物，并将反应混合物搅拌2小时。所得混合物用EtOAc(15mL)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。将残余物溶解在DCE(5.3mL)中，用TFA(2.5mL，32.67mmol)处理并将反应混合物在75℃加热18小时。真空浓缩所得混合物并将残余物溶解在EtOAc(20mL)中，并用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤。水项用EtOAc(2x20mL)萃取，合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，通过二氧化硅塞过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC(酸性pH，早期洗脱方法)纯化，得到标题化合物，为无色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 2.97mins；MS m/z 516.3＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.04(s，1H)，10.81(s，1H)，9.38(s，1H)，8.49(d，J＝5.5Hz，1H)，8.21(d，J＝2.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.09(dd，J＝8.5，1.3Hz，1H)，6.74(s，1H)，3.83(s，2H)，1.82(s，3H)，1.32-1.27(m，2H)，1.21-1.15(m，2H).
实例13
4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000811
步骤1：4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸
Figure BDA0003486135130000812
使用DIPEA(1.57mL，8.97mmol)和
Figure BDA0003486135130000813
在EtOAc(5.33mL，8.97mmol)中的50％溶液处理4-氨基吡啶-2-甲酸甲酯(751mg，4.93mmol)和2-(1H-吲哚-6-基)乙酸(786mg，4.48mmol)在1，4-二噁烷(5mL)中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌90分钟。真空浓缩反应混合物并将所得残余物溶解在EtOAc(50mL)中，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2x50mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。将残余物溶解在1，4-二噁烷(10mL)和1M LiOH(10mL)中并搅拌2小时。真空除去挥发性溶剂，所得水溶液用3M HCl酸化至pH约为3。过滤收集所得沉淀，得到标题化合物，为橙色固体。
LC-MS(方法E)：Rt 0.86mins；MS m/z 296.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.04(s，1H)，10.74(s，1H)，8.47(d，J＝5.5Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.80(dd，J＝5.6，2.1Hz，1H)，7.47(d，J＝8.1Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.32-7.29(m，1H)，6.97(dd，J＝8.1，1.4Hz，1H)，6.40-6.37(m，1H)，3.75(s，2H).没有观察到COOH的信号。
步骤2：4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺
使用DIPEA(0.094mL，0.54mmol)和HATU(112mg，0.29mmol)处理在DMF(3mL)中的4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(步骤1)(79％，100mg，0.27mmol)和1，1，1-三氟-2-甲基-丙-2-胺盐酸盐(48mg，0.29mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。所得混合物用EtOAc(10mL)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2x10mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。通过制备型HPLC(酸性pH，早期洗脱方法)纯化，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法A)：Rt 3.46mins；MS m/z 405.4＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.04(s，1H)，10.79(s，1H)，8.48(d，J＝5.5Hz，1H)，8.33(s，1H)，8.24(d，J＝2.0Hz，1H)，7.85(dd，J＝5.6，2.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.1Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.32-7.27(m，1H)，6.97(dd，J＝8.1，1.4Hz，1H)，6.40-6.35(m，1H)，3.75(s，2H)，1.64(s，6H).
实例13.1
N-(3，3-二氟-1-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000821
类似于步骤13步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例13步骤1)和3，3-二氟-1-甲基-环丁胺盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 3.12mins；MS m/z 399.4＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.03(s，1H)，10.74(s，1H)，9.02(s，1H)，8.47(d，J＝5.5Hz，1H)，8.19(d，J＝2.0Hz，1H)，7.84(dd，J＝5.5，2.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.1Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.33-7.28(m，1H)，6.97(dd，J＝8.1，1.4Hz，1H)，6.40-6.35(m，1H)，3.75(s，2H)，3.11-2.98(m，2H)，2.73-2.62(m，2H)，1.51(s，3H).
实例13.2
N-(4-氰基四氢吡喃-4-基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000831
类似于步骤13步骤2，标题化合物由4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酸(实例13步骤1)和4-氨基四氢吡喃-4-甲腈盐酸盐制备。
LC-MS(方法A)：Rt 2.61mins；MS m/z 404.4＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.04(s，1H)，10.79(s，1H)，9.01(s，1H)，8.52(d，J＝5.5Hz，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，7.88(dd，J＝5.6，2.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.1Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.32-7.27(m，1H)，6.97(dd，J＝8.1，1.4Hz，1H)，6.41-6.35(m，1H)，3.86(dt，J＝12.3，3.8Hz，2H)，3.76(s，2H)，3.62-3.54(m，2H)，2.40-2.31(m，2H)，2.06(ddd，J＝13.8，12.0，3.9Hz，2H).
中间体的制备
中间体A
4-氨基-N-(1，1-二甲基丙-2-炔基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000832
向4-氨基吡啶-2-甲酸(2g，14.48mmol)、TBTU(5.58g，17.38mmol)和TEA(2.42mL，17.38mmol)在DMF(36mL)中的混合物中加入2-甲基丁-3-炔-2-胺(22.82mL，17.38mmol)，并将混合物在室温下搅拌3天。过滤反应混合物，并且将滤液在真空中浓缩。将粗残余物溶解在EtOAc(40mL)中并用饱和NaHCO3溶液(40mL)洗涤。水相用EtOAc(40mL)进一步萃取，合并的有机部分用盐水(2x40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。在0℃下用最小体积的乙醚研磨粗物质，得到标题化合物，为灰白色结晶固体。
LC-MS(方法F)：Rt 1.28mins；MS m/z 204.3＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.23(s，1H)，7.99(d，J＝5.6Hz，1H)，7.19(d，J＝2.3Hz，1H)，6.59(dd，J＝5.6，2.4Hz，1H)，6.36(s，2H)，3.19(s，1H)，1.62(s，6H).
中间体AB
4-氨基-N-叔丁基-吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000841
与中间体A类似，由4-氨基吡啶-2-甲酸和2-甲基丙-2-胺制备标题化合物。
LC-MS(方法E)：Rt 0.48mins；MS m/z 194.0＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.99(s，1H)，7.97(d，J＝5.6Hz，1H)，7.18(d，J＝2.2Hz，1H)，6.56(dd，J＝5.6，2.4Hz，1H)，6.32(s，2H)，1.37(s，9H).
中间体AC
4-氨基-N-(1-氰基-1-甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000842
向4-氨基吡啶-2-甲酸(15g，108.6mmol)、TBTU(41.84g，130.32mmol)和三乙胺(37.84mL，271.5mmol)在DMF(271.52mL)中的混合物中加入2-氨基-2-甲基-丙腈盐酸盐(14.4g，119.46mmol)，并将混合物在室温下搅拌3天。过滤反应混合物并用DMF(2x30mL)洗涤固体。真空浓缩合并的滤液，将粗残余物溶解在EtOAc(300mL)中并用饱和NaHCO3溶液(2x300mL)洗涤。含水部分用EtOAc(30mL)再萃取，合并有机层，用盐水(160mL x 2)洗涤，经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化所得固体，用庚烷中的0-100％EtOAc洗脱，得到固体，将其用冰冷的TBME：庚烷(3∶1混合物)滴定，得到标题化合物，为无色结晶固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.60(s，1H)，8.03(d，J＝5.6Hz，1H)，7.21(d，J＝2.3Hz，1H)，6.62(dd，J＝5.6，2.4Hz，1H)，6.40(s，2H)，1.70(s，6H).
LCMS(方法E)：Rt 0.35mins；MS m/z 205.0＝[M+H]+
中间体AD
4-氨基-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003486135130000851
依次使用TEA(3.68mL，26.43mmol)、1-(三氟甲基)环丙胺盐酸盐(1.29g，7.96mmol)和TBTU(3.14g，9.77mmol)处理在DMF(36.2mL)中的4-氨基吡啶-2-甲酸(1g，7.24mmol)，并在室温下搅拌4天。过滤所得混合物并用DMF(2x30mL)洗涤固体。真空浓缩滤液，粗残余物溶解在EtOAc(300mL)中并用饱和NaHCO3溶液(2x300mL)洗涤。水性部分用EtOAc(30mL)再萃取，合并的有机萃取物用盐水(2x160mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过C18反相柱色谱纯化，用水中的10-100％MeCN洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体。
LC-MS(方法F)：Rt 1.31mins；MS m/z 246.1＝[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.13(s，1H)，8.02(d，J＝5.6Hz，1H)，7.20(d，J＝2.3Hz，1H)，6.61(dd，J＝5.6，2.4Hz，1H)，6.36(s，2H)，1.33-1.20(m，2H)，1.19-1.06(m，2H).
中间体B
2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸
Figure BDA0003486135130000852
向2-(1H-吲唑-6-基)乙酸(750mg，4.26mmol)和3，4-二氢-2H-吡喃(1.17mL，12.77mmol)在DCE(14.2mL)中的溶液中加入对甲苯磺酸吡啶嗡(1.18g，4.68mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。添加另外的3，4-二氢-2H-吡喃(1.17mL，12.77mmol)和对甲苯磺酸吡啶鎓(1.18g，4.68mmol)，并继续搅拌另外8小时。所得混合物用DCM(10mL)稀释并用水和盐水洗涤。分离有机部分，经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。将粗混合物溶解在THF(10mL)中并用1M LiOH(10mL)处理。在室温下搅拌1小时后，用1M HCl(2.5mL)将pH值调节至pH 5。用水(30mL)稀释混合物，并用EtOAc(30mL)萃取。有机萃取物用经Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到标题化合物，为黄色粘稠油。
LC-MS(方法E)：Rt 0.94mins；MS m/z 261.1＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMF-d7)δ12.28(s，1H)，8.06(s，1H)，7.69(d，J＝8.3Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.08(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，5.80(dd，J＝9.7，2.5Hz，1H)，3.95-3.84(m，1H)，3.78-3.68(m，3H)，2.47-2.36(m，1H)，2.09-2.00(m，1H)，1.98-1.91(m，1H)，1.80-1.69(m，1H)，1.62-1.53(m，2H).
中间体B1
2-(1-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸和2-(2-四氢吡喃-2-基吲唑-6-基)乙酸的混合物
Figure BDA0003486135130000861
向2-(1H-吲唑-6-基)乙酸(1.2g，6.81mmol)和3，4-二氢-2H-吡喃(1864uL，20.43mmol)在DCE(35mL)中的溶液加入对甲苯磺酸吡啶鎓(1.88g，7.49mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。所得混合物用DCM(80mL)稀释并用水(80mL)和盐水(80mL)洗涤。有机物经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。将粗混合物溶解在THF(35mL)中并加入2M LiOH (3.4mL)，并将混合物在室温搅拌1小时。使用1M HCl将所得混合物酸化至pH 5，然后用水(100mL)稀释并用EtOAc(100mL)萃取。分离有机物，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到标题化合物，为黄色粘稠油。
LC-MS(方法E)：Rt 0.94，0.97mins；MS m/z 261.00＝[M+H]+
中间体C
2-(3-碘-1H-吲唑-6-基)乙酸
Figure BDA0003486135130000862
该化合物根据J.Org.Chem.2018，83，2，930-938的程序制备。
LC-MS(方法E)：Rt 0.94mins；MS m/z 302.9＝[M+H]+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.44(s，1H)，12.39(s，1H)，7.44(s，1H)，7.35(d，J＝8.3Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，3.72(s，2H).
生物学实例
在以下实例中，将本发明的化合物与我们较早的申请WO2019/145726的实例79.2和79.3(分别指定为化合物A和B)进行比较。这些化合物如下：
化合物A(WO2019/145726的实例79.2)：
Figure BDA0003486135130000871
化合物B(WO2019/145726的实例79.3)
Figure BDA0003486135130000872
实例14-自动全细胞膜片钳测定以检测重组细胞中的TMEM16A活性细胞培养和制备
将稳定表达人TMEM16A(TMEM16Aabc变体；Luis Galietta博士，意大利Giannina研究所)的Fisher大鼠甲状腺(FRT)细胞培养在T-75烧瓶中的Hams F-12培养基中，Hams F-12培养基具有Coon氏改进(Sigma)补充了10％(v/v)胎牛血清、青霉素-链霉素(10,000U/mL/10000μg/mL)、G-418(750μg/mL)、L-谷氨酰胺(2mM)和碳酸氢钠溶液(7.5％v/v)。在约90％汇合时，通过使用Detachin(BMS Biotechnology)和0.25％(w/v)胰蛋白酶-EDTA的2：1(v/v)混合物分离，收获细胞用于实验。使用由CHO-S-SFM II(Sigma)、25mM HEPES(Sigma)和大豆胰蛋白酶抑制剂(Sigma)组成的培养基将细胞稀释至3.5-4.5x106个细胞/mL的密度。
全细胞膜片钳记录
使用自动平面膜片钳系统(Qpatch，Sophion)对FRT-TMEM16A细胞进行全细胞膜片钳。简而言之，一旦在细胞和平面记录阵列之间建立了高电阻(GOhm)密封，就使用抽吸脉冲使贴片破裂，以建立膜片钳技术的全细胞记录配置。该测定采用以下溶液(所有试剂均为Sigma)：
细胞内溶液(mM)：带有蔗糖的N-甲基-D-葡糖胺130、CaCl218.2、MgCl2 1、HEPES10、EGTA 10、BAPTA 20、Mg-ATP 2，pH 7.25，325mOsm。
细胞外溶液(mM)：带有蔗糖的N-甲基-D-葡糖胺130、CaCl2 2、MgCl2 1、HEPES 10，pH 7.3，320mOsm。
细胞内溶液缓冲细胞内钙离子所需的水平，使最大TMEM16A介导的电流(钙离子的EC20)激活约20％。将细胞电压钳位在-70mV的保持电位，并在0.05Hz下施加组合电压阶跃(至+70mV)/斜坡(-90mV至+90mV)。在电流稳定一段时间后，将溶解在100％(v/v)DMSO中并随后稀释到细胞外溶液中的测试化合物用于生成累积浓度响应曲线。在加入下一浓度之前，将每个浓度的测试化合物孵育5分钟。在测试最终浓度后，添加已知活性正调节剂或TMEM16A抑制剂，CaCCinhA01(Del La Fuente et al，2008)的超最大浓度以定义测定的上限和下限。
通过测量添加化合物后电流的增加并将其表示为基线TMEM16A电流水平的增加百分比来量化化合物活性。确定每个浓度的电流增加百分比，并使用Qpatch软件或GraphpadPrism v6.05将数据绘制为浓度的函数，提供产生其最大效应(EC50)的50％和最大功效(基线增加百分比)的浓度。
计算结果的方法如图1所示，其中显示了来自Qpatch TMEM16A测定的实例跟踪。在图1中，IBL等于基线电流，I[#1]等于测试化合物浓度1孵育期的峰值电流，依此类推。
将+70mV处的峰值TMEM16A电流绘制为测定期间时间的函数。在稳定一段时间后测量基线电流(IBL)。每次添加化合物的电流增加是通过在孵育期间取峰值电流，并从以前记录期间减去电流，然后将其表示为基线电流的百分比(％增强)来确定的。对于图1中的测试化合物浓度1，这是：
(I[#1]-IBL/IBL)x100
对于每个另外的测试浓度，电流的增加是通过从以前孵育期间减去电流并标准化基线值来确定的-对于图1中的测试浓度2，这是：
(I[#2]-I[#1}/IBL)x100
将每个测试浓度的值绘制为浓度的累积函数，例如，对于测试浓度二，这将是在浓度一加上浓度二期间测得的峰值变化的总和。
实例化合物的所得结果如表3所示，从中可以看出本发明的化合物能够显著提高TMEM16A电流水平。
表3：QPatch TMEM16A EC50
Figure BDA0003486135130000891
Figure BDA0003486135130000901
表3中显示的结果表明，本发明的化合物具有与化合物A相似且优于化合物B的优异EC50值。
与化合物B(比较化合物中更有效的化合物)相比，本发明的许多化合物具有显著改善的TMEM16A的最大增强作用，例如在3.3mM浓度下所示。
化合物1、1.1、13、13.1和13.2是吲哚，因此可以与化合物B进行比较。可以看出，化合物1、2.2、13.1和13.2的EC50值低于化合物B，化合物1.1、13.1和13.2提高了TMEM16A的最大增强作用。
其余的实例化合物是吲唑，因此可以与化合物A进行比较。所有的吲唑实例化合物的EC50显著低于化合物A，并且都具有相似或改进的TMEM16A最大增强，特别是在370nM浓度下。
实例15-物理化学测定
Log D(pH 7.4摇瓶)
所有化合物都在包含4种测试化合物的混合物的“盒”中进行测试，每种化合物最初以5mmol溶解在DMSO中。磷酸盐缓冲液(1M)用去离子水稀释至20mM，并用磷酸或氢氧化钠调节至pH 7.4。1-辛醇和磷酸盐缓冲液(20mM)通过翻滚饱和过夜。使用分液漏斗分离两相。在96孔板(最高浓度50μM)中，将5μL的5mM化合物盒添加到495μL辛醇饱和缓冲液和495μL缓冲液饱和辛醇中。将板振摇1小时，然后在25℃下离心5分钟。将200μL的每个相转移到单独的板上。首先对辛醇层取样以避免交叉污染。将5μL溶液转移至495μL淬灭溶液*(最大浓度0.5μM)。此外，将40μL缓冲溶液添加到360μL淬灭溶剂(最大浓度5μM)中。通过LC-MS/MS分析样本。针对每种化合物的校准曲线进行基准测试，并参考对照化合物舒必利、双氯芬酸、氯丙嗪和他莫昔芬。
*淬灭溶液是含有0.1％甲酸和丙咪嗪/拉贝洛尔的1∶3∶1乙腈混合物(v/v/v)，200nM：乙腈：水。
Log D测定的结果显示在表4中。在pH7.4下mLog D值为5或更低的化合物对于药物配制剂通常是足够可溶的并且优选mLog D值为4.2或更低。所有实例化合物都在此范围内。
表4：Log D数据
Figure BDA0003486135130000911
Figure BDA0003486135130000921
实例16-微粒体稳定性
微粒体(人)获自Bioreclamation。
溶解所有测试和参考对照化合物(雷洛昔芬、双氯芬酸、特非那定、普萘洛尔、右美沙芬和美托洛尔)以制备100μM储备液(最终浓度；91.5％乙腈：8.5％DMSO)。孵育中的最终测试化合物浓度为1μM(＜0.1％DMSO)。
测定缓冲液由磷酸钾溶液1和2通过在37℃下组合形成pH 7.42溶液制备。溶液1：17.4g无水磷酸氢二钾(K2HPO4，0.1M)溶于1L去离子水中。溶液2：13.6g无水磷酸二氢钾(KH2PO4，0.1M)溶解在1L去离子水中。pH7.4，含2mM氯化镁。NADPH(10mM)在去离子水中制备。
微粒体(所有物种)从-80℃中取出，在37℃下解冻。微粒体在测定缓冲液中稀释以达到0.5mg/mL和1mM NADPH的最终蛋白质浓度。
以下程序是在Perkin Elmer Janus机器人平台上以96孔格式完成的：将微粒体孵育板转移到300rpm的加热器振荡器中，并将溶液加热至37℃预热10分钟。在0分钟和45分钟时的无辅因子对照以及每个测试化合物的一个重复包括在每个测定中。在整个测定过程中，微粒体在37℃下在设置为300rpm的振荡器上孵育。在每个时间点(0、5、15、30、45分钟)，从96孔中取出50μL样品并添加到200μL淬灭溶液中(含0.1％甲酸和丙咪嗪/拉贝洛尔的乙腈，200nM)。使用Janus Robot将样品用水按1∶1稀释，并通过LC-MS/MS进行分析。获得的结果根据为每个测试样品准备的标准校准曲线进行量化，结果由参考对照化合物的分析控制。
微粒体清除数据如表5所示。
表5：微粒体清除数据
Figure BDA0003486135130000931
Figure BDA0003486135130000941
尽管不是必需的，但优选用于口服施用的化合物具有低微粒体清除率。在微粒体稳定性测定中，此类化合物的Clint目标值小于30μL/min/mg，优选小于20μL/min/mg，特别优选小于10μL/min/mg。
清除率在此范围内的化合物特别适合口服施用，因为它们具有较低的代谢倾向，导致首过清除率降低，从而导致更高的全身暴露和增加的口服生物利用度，也导致给定药理作用的剂量较低。
尽管不是必需的，但优选的是通过吸入施用的化合物具有高清除率。在微粒体稳定性测定中，此类化合物的Clint目标值大于35μL/min/mg，优选大于40μL/min/mg，特别优选大于50μL/min/mg。
高微粒体清除率，对应于吸收进入体循环后的体内半衰期低，确保了直接施用于肺部的化合物与身体其他部位的TMEM16A相互作用的机会减少，因此潜在的副作用将被最小化。
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Claims (29)

1.一种通式(I)的化合物，包括所有互变异构形式、所有对映异构体、同位素变体及其盐和溶剂化物：
Figure FDA0003486135120000011
其中：
R1选自H、乙炔基、CN、甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯二氟甲基、二氯氟甲基和羟基甲基；
R2选自甲基和CH2OH；
R3选自H和甲基；或者
R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成任选地在R1基团之外还被一个或多个选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、卤代和OH的取代基取代的3至10元碳环或含氧杂环系统；或者
R1、R2和R3与它们所连接的碳原子一起结合形成任选地被一个或多个选自OH、卤代、C1-4烷基和C1-4卤代烷基的取代基取代的5至8元桥碳环或杂环系统；
R4为H或卤代；
R5选自H、卤代、CN和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的C1-4烷基；
X1为CR6或N；
R6选自H、卤代、CN和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的C1-4烷基；
X2为CR7或N；
R7为H、卤代、CN、任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的3至7元碳环或杂环系统、或任选地被一个或多个选自卤代、OH和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的3至7元碳环或杂环系统的取代基取代的C1-4烷基；
X3为CR8或N；
R8选自H、卤代、CN和任选地被一个或多个选自卤代和OH的取代基取代的C1-4烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙炔基或CN。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为甲基，并且R3为甲基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中R1为甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙炔基或CN。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成如权利要求1中所定义任选地被取代的3至10元碳环或含氧杂环系统。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成未被取代(R1基团除外)或在R1基团之外还被一个或两个选自甲基和氟的取代基取代的3至10元碳环或含氧杂环系统。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中R1、R2和R3与它们所连接的碳原子一起结合形成5至8元桥碳环或杂环系统。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R4为H。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中：
R5为H、氟或氯；和/或
X1为CR6，并且R6为H或卤代；和/或
X2为CR7，并且R7为H、任选地被OH取代的C1-3烷基、任选地被OH取代的C1-3卤代烷基、被3至6元碳环或杂环系统取代的甲基、或3至6元碳环或杂环系统；和/或
X3为N。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其为通式(Ia)的化合物：
Figure FDA0003486135120000031
其中X3、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如权利要求1中所定义；或者
通式(Ib)的化合物：
Figure FDA0003486135120000032
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如权利要求1中所定义；或者
通式(Ic)的化合物：
Figure FDA0003486135120000033
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如权利要求1中所定义。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中R5、R6和R7中的至少一者为H。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中
R5为卤代，并且R6为H；或者
R6为卤代，并且R5为H；或者
R5为卤代，并且R6和R7均为H；或者
R6为卤代，并且R5和R7均为H；或者
R7不为H，并且R5和R6均为H。
13.根据权利要求1所述的化合物，其选自：
N-(1,1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1)；
4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1.1)
N-叔丁基-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物2)；
N-(1-氰基-1-甲基-乙基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物2.1)；
N-(1,1-二甲基丙-2-炔基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物3)；
N-(1-乙炔基环戊基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物4)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺(化合物4.1)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物4.2)；
N-(3,3-二氟-1-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物4.3)；
N-(2,2-二氟-1,1-二甲基-乙基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丁基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.1)；
N-(3-氟-3-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.2)；
N-(2,2-二氟环戊基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.3)；
N-(4-氰基四氢吡喃-4-基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物5.4)；
N-叔丁基-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6)；
4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6.1)；
N-(2,2-二氟环戊基)-4-[[2-(5-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6.2)；
4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物6.3)；
4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(1-乙炔基环戊基)吡啶-2-甲酰胺(化合物6.4)；
N-叔丁基-4-[[2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物7)；
N-叔丁基-4-[[2-(5-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物7.1)；
N-叔丁基-4-[[2-(4-氯-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物7.2)；
N-叔丁基-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物8)；
N-[1-(三氟甲基)环丙基]-4-[[2-[3-(三氟甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物8.1)；
N-叔丁基-4-[[2-(3-异丙基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物9)；
4-[[2-(3-四氢呋喃-2-基-1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物9.1)；
4-[[2-[3-(吗啉代甲基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺(化合物10)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物11)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物11.1)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[4-(三氟甲基)四氢吡喃-4-基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.2)；
4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)氧杂环丁烷-3-基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.3)；
N-[1-(二氟甲基)环丙基]-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.4)；
N-(3-氟-1-双环[1.1.1]戊烷基)-4-[[2-(1H-吲唑-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物11.5)；
4-[[2-[3-(2,2,2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基)-1H-吲唑-6-基]乙酰基]氨基]-N-[1-(三氟甲基)环丙基]吡啶-2-甲酰胺(化合物12)；
4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]-N-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)吡啶-2-甲酰胺(化合物13)；
N-(3,3-二氟-1-甲基-环丁基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物13.1)；
N-(4-氰基四氢吡喃-4-基)-4-[[2-(1H-吲哚-6-基)乙酰基]氨基]吡啶-2-甲酰胺(化合物13.2)；
以及上述者的盐和溶剂化物。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，其用于医药中。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，其用于治疗或预防受TMEM16A的调节影响的疾病和病症。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防受TMEM16A的调节影响的疾病和病症的药物中的用途。
17.一种用于治疗或预防受TMEM16A的调节影响的疾病和病症的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者施用有效量的根据权利要求1至13中任一项所述的化合物。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的供使用的化合物、用途或方法，其中受TMEM16A的调节影响的所述疾病和病症选自呼吸系统疾病和病症、口干(口干症)、肠过度活动、胆汁淤积和眼部病症。
19.根据权利要求18所述的供使用的化合物、用途或方法，其中：
所述呼吸系统疾病和病症选自囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性支气管炎、肺气肿、包括非囊性纤维化支气管扩张在内的支气管扩张、哮喘和原发性纤毛运动障碍；和/或
所述口干(口干症)由斯耶格伦氏综合征、放射治疗或引起口腔干燥的药物引起；和/或
所述肠过度活动与胃消化不良、胃轻瘫、慢性便秘或肠易激综合征有关；和/或
所述眼部疾病为干眼症。
20.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的化合物以及药用赋形剂。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其进一步包含用于治疗或预防呼吸系统病症的另外的活性药剂，作为同时、按顺序或分开用于治疗受TMEM16A的调节影响的疾病或病症的组合制剂。
22.一种产品，其包含根据权利要求1至13中任一项所述的化合物和用于治疗或预防呼吸系统病症的另外的药剂，作为同时、按顺序或分开用于治疗受TMEM16A的调节影响的疾病或病症的组合制剂。
23.根据权利要求21所述的药物组合物或根据权利要求22所述的产品，其中所述另外的活性药剂选自：
β2肾上腺素受体激动剂，诸如间羟异丙肾上腺素、异丙肾上腺素、喘息定、舒喘宁、沙丁胺醇、福莫特罗、沙美特罗、茚达特罗、特布他林、奥西那林、甲磺酸比托特罗、吡布特罗、奥达特罗、维兰特罗和阿贝特罗；
抗组胺药，例如组胺H1受体拮抗剂，诸如氯雷他定、西替利嗪、地氯雷他定、左西替利嗪、非索非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀和氯苯那敏或H4受体拮抗剂；
阿尔法链道酶；
皮质类固醇，诸如泼尼松、泼尼松龙、氟尼缩松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松、布地奈德、丙酸氟替卡松、糠酸莫米松和糠酸氟替卡松；
白三烯拮抗剂，诸如孟鲁司特和扎鲁司特；
抗胆碱能化合物，特别是毒蕈碱拮抗剂，诸如异丙托溴铵、噻托溴铵、格隆溴铵、阿地溴铵和芜地溴铵；
CFTR修复疗法(例如CFTR增效剂、校正剂或增幅剂)，诸如Ivacaftor、QBW251、Bamacaftor(VX659)、Elexacaftor(VX445)、VX561/CPT-656、VX152、VX440、GLP2737、GLP2222、GLP2451、PTI438、PTI801、PTI808、FDL-169和FDL-176，以及CFTR校正剂，诸如Lumacaftor和Tezacaftor或其组合(例如Ivacaftor、Tezacaftor和Elexacaftor的组合)；
ENaC调节剂，特别是ENaC抑制剂，诸如阿米洛利、VX-371、AZD5634、QBW276、SPX-101、BI443651、BI1265162和ETD001以及具有阳离子和合适的阴离子的化合物，所述阳离子选自：
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)乙基]-6-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-羰基)-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-6-{[2-(4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酰基}-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-5-[4-({双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}甲基)哌啶-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-6-[(3R)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-6-[(3S)-3-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}吡咯烷-1-羰基]-1,3-二乙基-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-1,3-二乙基-6-{[(1r,4r)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
2-[({3-氨基-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-基}甲酰胺基)甲基]-1,3-二乙基-6-{[(1s,4s)-4-{双[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}环己基]氨基甲酰基}-1H-1,3-苯并二唑-3-鎓；
合适的阴离子为例如卤离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、甲酸根、乙酸根、三氟乙酸根、富马酸根、柠檬酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、扁桃酸根、甲烷磺酸根或对甲苯磺酸根；
抗生素；
抗病毒剂，诸如利巴韦林和神经氨酸酶抑制剂，诸如扎那米韦；
抗真菌药，诸如PUR1900；
气道保湿剂(渗压剂)，诸如高渗盐水和甘露醇
Figure FDA0003486135120000092
和
粘液溶解剂，诸如N-乙酰半胱氨酸。
24.一种用于制备根据权利要求1至13中任一项所述的化合物的方法，所述方法包括：
A.使通式(II)的化合物：
Figure FDA0003486135120000091
其中R1、R2、R3和R4如针对通式(I)所定义；
与通式(III)的化合物反应：
Figure FDA0003486135120000101
其中R5、X1、X2和X3如权利要求1中所定义；或者
B.将通式(Iz)的受保护化合物脱保护：
Figure FDA0003486135120000102
其中R1、R2、R3、R4、R5、X1、X2和X3如权利要求1中所定义，并且R15为胺保护基团；或者
C.使通式(IV)的化合物：
Figure FDA0003486135120000103
其中R1、R2和R3如权利要求1中所定义；
与通式(XII)的化合物反应：
Figure FDA0003486135120000104
其中R4、R5、X1、X2和X3如权利要求1中所定义；或者
D.对于通式(Ib)的化合物，其中R7为烷基或杂环基：
使通式(XXVaz)的化合物：
Figure FDA0003486135120000111
其中R1、R2、R3、R4、R5和R6如权利要求1中所定义；R15如针对通式(Ib)所定义；并且R21为卤代；
与合适的二氧杂环戊硼烷，在钯催化剂如乙酸钯存在下，在碱性条件下反应，接着通过钯催化剂进行催化氢化。
25.如权利要求24所定义的通式(II)的化合物或其盐。
26.如权利要求24所定义的通式(III)的化合物或其盐。
27.如权利要求24所定义的通式(Iz)的化合物或其盐。
28.如权利要求24所定义的通式(XII)的化合物或其盐。
29.如权利要求24所定义的通式(XXVaz)的化合物或其盐。
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