CN110201015B - 锈腐病人参提取物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及锈腐病人参提取物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。本发明提供锈腐病人参提取物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明创造性地发现锈腐病人参提取物具有抗癌活性，与正常人参提取物相比，从锈腐病人参中提取得到的提取物对多种癌细胞均表现出更强的抗癌活性，能够有效诱导癌细胞凋亡并抑制癌变细胞增殖，可作为广谱的抗癌活性物质，用于制备抗癌药物，为治疗癌症提供新的用药方案。
Description
技术领域
本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及锈腐病人参提取物及其在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。
背景技术
在全球范围内，癌症的发病率和死亡率呈急剧上升趋势。在各种癌症中，肝癌恶性程度及发病率较高，被认为是世界上最常见的恶性肿瘤之一。目前，治疗癌症的主要方法是化疗和放疗，但是患者会出现不同程度的恶心、呕吐、疲劳、厌食等症状，严重影响生活质量。
人参为五加科人参属多年生宿根性草本植物，是驰名中外的珍贵中药和珍稀食材。人参历来被视为百草之王，在医药发展中有着不可或缺的地位和作用。因其具有抗疲劳、提高记忆力、调节免疫、降血糖、抗癌、减肥、治疗老年痴呆、防治心血管疾病的功效，人参备受研究人员的青睐。然而，对于锈腐病人参的抗癌作用却未见研究报道。
发明内容
为解决现有技术中的问题，本发明的目的在于一种锈腐病人参提取物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：在自然山地环境中，人参植物在栽培过程中容易受到细菌、真菌和线虫的侵袭，其中锈腐病是最常见的病害之一。然而，人们致力于研究治疗人参锈腐病的方法，而忽略锈腐病人参的药用价值。本发明意外地发现，患锈腐病的人参较正常人参具有更高的抗肿瘤活性，因此具有更好的药用价值。
具体地，本发明的技术方案如下：首先，本发明提供锈腐病人参提取物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
本发明中，所述锈腐病人参提取物为以患锈腐病的人参为原料，经溶剂提取得到。
作为优选，所述用于提取锈腐病人参提取物的溶剂为选自甲醇、乙醇和水中的一种或多种。进一步优选所述溶剂为乙醇。更进一步优选所述溶剂为95％的乙醇。
具体地，所述锈腐病人参提取物的制备方法包括：将患锈腐病的人参的参皮粉碎后加入乙醇，在90～130℃条件下回流提取6～10h，再经减压浓缩、干燥制得。
作为优选，所述回流提取采用索氏提取法。
作为本发明的优选方案，所述锈腐病人参提取物的制备方法包括：将患锈腐病的人参的参皮粉碎后加入3～5倍(质量体积比)95％浓度的乙醇，采用索氏提取法在110℃条件下回流提取6h获得提取液，再将所述提取液经减压浓缩后冻干，即得。
本发明提供的锈腐病人参提取物对多种癌细胞的增殖均表现出明显的抑制作用，可促进诱导癌细胞凋亡，降低癌细胞的存活率，因此可用于癌症的治疗。
本发明中，所述治疗肿瘤的药物包括具有如下任意一种或多种功能的药物：
(1)抑制肿瘤细胞的增殖、迁移或侵袭；
(2)诱导肿瘤细胞的凋亡；
(3)降低肿瘤细胞的存活率
(4)降低肿瘤细胞中β-actin的表达或含量。
作为优选，本发明所述肿瘤为恶性肿瘤。更优选地，所述恶性肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌或乳腺癌。
本发明进一步提供一种锈腐病人参提取物，其为以患锈腐病的人参为原料，经溶剂提取得到。
作为优选，上述用于提取锈腐病人参提取物的溶剂为选自甲醇、乙醇和水中的一种或多种。进一步优选所述溶剂为乙醇。更进一步优选所述溶剂为95％的乙醇。
进一步优选地，所述锈腐病人参提取物的制备方法包括：将患锈腐病的人参的参皮部位粉碎后加入乙醇，在90～130℃条件下回流提取6～10h，再经减压浓缩、干燥制得。
进一步优选地，所述回流提取采用索氏提取法。
本发明提供的上述锈腐病人参提取物可用于制备用于治疗癌症的药物。
本发明还提供一种用于治疗肿瘤的药物组合物，包含锈腐病人参提取物。
本发明所述的用于治疗肿瘤的药物组合物中，所述锈腐病人参提取物为以患锈腐病的人参为原料，经溶剂提取得到。
作为优选，所述溶剂为选自甲醇、乙醇和水中的一种或多种。
进一步优选地，所述锈腐病人参提取物的制备方法包括：将患锈腐病的人参的参皮部位粉碎后加入乙醇，在90～130℃条件下回流提取6～10h，再经减压浓缩、干燥制得。
进一步优选地，所述回流提取采用索氏提取法。
所述治疗肿瘤的药物组合物具有如下任意一种或多种功能：
(1)抑制肿瘤细胞的增殖、迁移或侵袭；
(2)诱导肿瘤细胞的凋亡；
(3)降低肿瘤细胞的存活率；
(4)降低肿瘤细胞中β-actin的表达或含量。
作为优选，本发明所述肿瘤为恶性肿瘤。更优选地，所述恶性肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌或乳腺癌。
本发明与现有技术相比，有益效果至少包括：
本发明创造性地发现锈腐病人参提取物具有抗癌活性(癌细胞形貌变化显著，发生明显的凋亡，癌细胞存活率大大降低，癌细胞中的β-actin蛋白含量降低)，与正常人参提取物相比，从锈腐病人参中提取纯化得到的提取物对多种癌细胞均表现出更强的抗癌活性，能够有效诱导癌细胞凋亡并抑制癌变细胞增殖。因此，可将锈腐病人参提取物作为广谱的抗癌活性物质，用于制备抗癌药物，并与常规的赋形剂或辅料制成胶囊、口服液、注射剂、等剂型，从而为治疗癌症提供新的用药方案。
附图说明
图1为本发明实施例4中向癌细胞培养液中加入100μg mL-1锈腐病人参提取物后细胞的扫描电镜图。
图2为本发明实施例4中向癌细胞培养液中加入200μg mL-1锈腐病人参提取物后细胞的扫描电镜图。
图3为本发明实施例5中向癌细胞培养液中加入0、100、150、200和250μg mL-1锈腐病人参提取物后细胞中β-actin蛋白的含量变化图。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明进一步阐述。应理解，这些实施例仅用于本发明而不用于限制本发明的范围。除非另有定义或说明，本发明所述的科学术语与本领域普通技术人员所理解具有相同的含义。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1锈腐病人参提取物的制备
首先，称取锈腐病人参参皮75.6g，将其洗净切碎；然后向500mL圆底烧瓶中加入95％乙醇300mL，采用索氏提取法在110℃条件下回流6h；最后，将提取液减压浓缩并采用冻干机冻干，得到锈腐病人参的提取物固体6.8g。
取正常人参参皮部位58.7g，采用与上述锈腐病人参提取物同样的方法提取，得到正常人参提取物固体5.9g。
实施例2锈腐病人参提取物降低癌细胞存活率
将处于对数生长期的肝癌细胞与正常细胞HL-7702分别接种于96孔板中，每孔细胞密度约为6×103个。待细胞贴壁后加药(实施例1制备得到的锈腐病人参提取物)，受试样品设为6个锈腐病人参提取物的添加浓度(0、30.75、61.5、125、250和500μg mL-1)，于37℃和5％CO2温箱内培养48h。然后向每孔加入20μL MTT溶液继续培养。4h后，弃去上清液，每孔加入150μL DMSO溶液，充分振荡后在490nm波长下测定吸光度。该实验重复三次。
结果显示，当向癌细胞和正常细胞的培养体系中分别添加锈腐病人参提取物浓度为0,30.75，61.5和125μg mL-1时，细胞存活率无明显变化。当浓度达到250μg mL-1时，细胞存活率下降，癌细胞的存活率为48％，正常细胞的存活率为62％，可见相较于正常细胞，癌细胞的存活率明显降低。
实施例3锈腐病人参提取物降低癌细胞数量
将处于对数生长期的肝癌细胞与正常细胞HL-7702分别接种于12孔板中，每孔细胞数量约为3×104个。待细胞贴壁后加药(实施例1制备得到的锈腐病人参提取物和正常人参提取物)，受试样品设分别为6个锈腐病人参提取物与6个正常人参提取物的添加浓度(分别为0、30.75、61.5、125、250和500μg mL-1)，于37℃和5％CO2温箱内培养48h。弃去上清液，经0.25％的胰酶消化后，计数。
当向细胞培养体系分别添加锈腐病人参提取物与正常人参提取物的浓度为0,30.75，61.5和125μg mL-1时，细胞数量无明显变化。当浓度达到250μg mL-1时，细胞数量开始减少，锈腐病人参提取物作用后的癌细胞数量约为1.3×104个，正常人参提取物作用后的癌细胞数量约为1.9×104个，可见，与正常人参提取物相比，锈腐病人参提取物作用后的癌细胞数量明显减少，减少20％。
实施例4锈腐病人参提取物促进癌细胞凋亡
将盖玻片置于12孔板中，并向每孔中加入处于对数生长期的肝癌细胞，细胞密度约为3×104个。待细胞贴壁后加药(实施例1制备得到的锈腐病人参提取物)，受试样品设为4个锈腐病人参提取物添加浓度(0、50、100和200μg mL-1)，于37℃和5％CO2温箱内培养24h。弃去上清液，每孔加入1mL 4％戊二醛溶液，在4℃条件下过夜。然后用PBS清洗盖玻片表面并脱水。随后将盖玻片置于叔丁醇中，在-20℃条件下过夜。最后，将盖玻片干燥并镀膜并用SEM进行观察。
随着锈腐病人参提取物添加浓度的增加，癌细胞的细胞膜逐渐塌陷，且空洞形成加剧(如图1和图2所示)。
实验例5锈腐病人参提取物降低癌细胞β-actin蛋白含量
将处于对数生长期的肝癌细胞接种于6孔板中，每孔细胞密度约为1×106个。待细胞贴壁后加药(实施例1制备得到的锈腐病人参提取物)，受试样品设为5个浓度(0、100、150、200和250μg mL-1)，于37℃和5％CO2温箱内培养24h。然后用0.25％的胰酶进行消化并反复冻融。用Western Blot法检测癌细胞中β-actin蛋白的含量，通过DAB法进行显色。
Western Blot结果显示，随着锈腐病人参提取物添加浓度的增加，癌细胞中β-actin蛋白的含量逐渐减少(如图3所示)。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.锈腐病人参提取物在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述锈腐病人参提取物的制备方法包括：将患锈腐病的人参的参皮粉碎后加入95%乙醇，采用索氏提取法在110℃条件下回流提取6~10h，再经减压浓缩、干燥制得；
所述肿瘤为肝癌。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述锈腐病人参提取物具有如下任意一种或多种功能：
（1）抑制肿瘤细胞的增殖、迁移或侵袭；
（2）诱导肿瘤细胞的凋亡；
（3）降低肿瘤细胞的存活率
（4）降低肿瘤细胞中β-actin的表达或含量。
3.一种锈腐病人参提取物，其特征在于，所述锈腐病人参提取物的制备方法包括：将患锈腐病的人参的参皮粉碎后加入95%乙醇，采用索氏提取法在110℃条件下回流提取6~10h，再经减压浓缩、干燥制得。
4.一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，包含权利要求3所述的锈腐病人参提取物，所述肿瘤为肝癌。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，其具有如下任意一种或多种功能：
（1）抑制肿瘤细胞的增殖、迁移或侵袭；
（2）诱导肿瘤细胞的凋亡；
（3）降低肿瘤细胞的存活率；
（4）降低肿瘤细胞中β-actin的表达或含量。
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