CN110199878A - 一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法 - Google Patents

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闫晓明
程福如
朱加保
於春
路献勇
王红娟
胡积送
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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Abstract

本发明公开了一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法，包括以下步骤：（1）无菌胚芽培养；（2）愈伤组织诱导；（3）愈伤组织增殖培养；（4）胚性愈伤转化培养。本发明建立了科学的薏苡胚性愈伤组织的诱导方法，其较快的操作周期能满足对薏苡高质量种质资源的建立和研究，对加快薏苡资源的研究及应用具有显著的促进作用，具有巨大的使用前景。

Description

一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法
技术领域
本发明属于植物培育技术领域，尤其涉及一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法。
背景技术
胚性愈伤组织的诱导是实现形态建成、再分化的关键，致密型胚性愈伤组织诱导分化形成新植株是多数植物再生体系建立的重要途径。当前，薏苡种植在生产应用的技术水平和研究深度上全面落后于其他禾本科作物，尤其在种质资源上，栽培应用品种在驯化程度、优质高产等经济性状上未曾深入研究。应用现代细胞工程技术可较快的通过遗传转化进行资源改良，加快薏苡资源的研究及应用。
发明内容
本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法。
为了实现上述的目的，本发明提供以下技术方案：
一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法，包括以下步骤：
（1）无菌胚芽培养：去除总苞的薏苡种子经75%酒精浸泡2min，无菌水冲洗3次，无菌水纸床培养，发芽后0.1%升汞消毒8min，无菌水冲洗5-8次，切下胚芽，接于N6培养基无菌培养，温度21-23℃，光照强度2000lx；
（2）愈伤组织诱导：芽长达3cm后，斜切薄片，转接于培养基中，条件为PH5.8，温度21-23℃，光照13h，1200lx，出愈后原培养基继代2-3次；
（3）愈伤组织增殖培养：继代2-3次后，接入培养基，条件为PH5.8，温度21-23℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2-3次；
（4）胚性愈伤转化培养：获得的愈伤组织再次继代N6培养基，条件为PH5.8，温度21-23℃，光照13h，3000lx培养，获得生长致密、易于诱导分化的胚性愈伤组织。
优选的，所述步骤2中愈伤组织诱导所用培养基为：N6＋2.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋1.0mg/L AgNO3＋30g/L蔗糖。
优选的，所述步骤3中愈伤组织增殖培养所用培养基为：N6＋1.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋0.5mg/L AgNO3＋30g/L蔗糖。
本发明的优点是：
本发明建立了科学的薏苡胚性愈伤组织的诱导方法，其较快的操作周期能满足对薏苡高质量种质资源的建立和研究，对加快薏苡资源的研究及应用具有显著的促进作用，具有巨大的使用前景。
具体实施方式
以下结合具体的实例对本发明的技术方案做进一步说明：
一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法，包括以下步骤：
1、无菌胚芽培养
去除总苞的薏苡种子经75%酒精浸泡2min，无菌水冲洗3次，无菌水纸床培养。发芽后0.1%升汞消毒8min，无菌水冲洗5～8次，切下胚芽，接于N6培养基无菌培养，温度（22±1）℃，光照强度2000lx。
2、愈伤组织诱导
芽长达3cm后，斜切薄片，转接于培养基（N6＋2.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋1.0mg/L AgNO3＋30g/L蔗糖），PH5.8，温度（22±1）℃，光照13h，1200lx，出愈后原培养基继代2～3次。
3、愈伤组织增殖培养
继代2～3次后，接入培养基（N6＋1.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋0.5mg/L AgNO3＋30g/L蔗糖），PH5.8，温度（22±1）℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2～3次。
4、胚性愈伤转化培养
获得的愈伤组织再次继代N6培养基，PH5.8，温度（22±1）℃，光照13h，3000lx培养，获得生长致密、易于诱导分化的胚性愈伤组织。

Claims (3)

1.一种薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）无菌胚芽培养：去除总苞的薏苡种子经75%酒精浸泡2min，无菌水冲洗3次，无菌水纸床培养，发芽后0.1%升汞消毒8min，无菌水冲洗5-8次，切下胚芽，接于N6培养基无菌培养，温度21-23℃，光照强度2000lx；
（2）愈伤组织诱导：芽长达3cm后，斜切薄片，转接于培养基中，条件为PH5.8，温度21-23℃，光照13h，1200lx，出愈后原培养基继代2-3次；
（3）愈伤组织增殖培养：继代2-3次后，接入培养基，条件为PH5.8，温度21-23℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2-3次；
（4）胚性愈伤转化培养：获得的愈伤组织再次继代N6培养基，条件为PH5.8，温度21-23℃，光照13h，3000lx培养，获得生长致密、易于诱导分化的胚性愈伤组织。
2.根据权利要求1所述的薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述步骤2中愈伤组织诱导所用培养基为：N6＋2.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋1.0mg/L AgNO3＋30g/L蔗糖。
3.根据权利要求1所述的薏苡的胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述步骤3中愈伤组织增殖培养所用培养基为：N6＋1.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋0.5mg/L AgNO3＋30g/L蔗糖。
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