CN110187131B - 一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法 - Google Patents

一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法，通过全血细胞计数，得到红细胞计数测定值、血红蛋白浓度测定值、血细胞比积测定值和平均红细胞血红蛋白量测定值，分离红细胞与血浆，得到血浆中的血红蛋白浓度测定值，得到对应的校正值，评估结果。本发明采用所述方法获得的发生溶血的血液的红细胞系列参数数值准确性高，与真实值的差异平均小于±0.5％。本发明方法操作简单，使用的检测仪器和离心机为实验室常规设备，因而便于在各种医院推广应用。本发明方法所需时间短，能快速得到检测结果，即节约时间也节约成本。

Description

一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法
技术领域
本发明属于生物测定领域，涉及血液的红细胞及其相关参数测定，特别涉及一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法，是一种校正溶血对红细胞计数及相关参数测定影响的方法。
背景技术
溶血是一种因血液中部分红细胞破坏后，血红蛋白释放入血浆的现象。溶血发生后，血常规检测中的红细胞计数会假性减低，相关参数如平均血红蛋白浓度(MCHC)会假性升高。实验表明，可以用血浆游离血红蛋白(PHB)评价溶血程度，当PHB达到1.4g/L，即会对红细胞及相关参数测定值产生显著的影响。从临床抽样调查数据来看，达到及超过上述溶血程度的样本约占总抗凝样本数的1.42％。我国大多数三级综合性医院每天抗凝样本量高达数百至上千，按此比例推测，医院每日会有十余份样本的检测数据产生未能察觉的偏差，给患者带去极大的潜在风险。
目前，血常规检测虽然已经基本实现全自动化，但溶血样本的识别并无自动化解决方案，同时国内外也尚无成熟方法可以去除溶血对血常检测结果的影响。为了避免发布错误结果，实验室一般建议重新采集患者血液进行检测。不仅增加了患者的身体负担和精神压力，浪费检测资源，而且可能因检验报告延误影响临床诊疗。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法。此方法不仅能够提高溶血样本的血常规检测的准确性，而且操作简便，所需设备为实验室常规设备，便于推广。
本发明所述纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法，通过以下步骤实现：
(1)将发生溶血的血液进行全血细胞计数，得到溶血后的红细胞计数测定值“实测RBC”，血红蛋白浓度测定值“实测HB”，血细胞比积测定值“实测HCT”，平均红细胞血红蛋白量测定值“实测MCH”；
(2)将步骤(1)所述发生溶血的血液进行低速离心操作，使该血液中的红细胞与血浆分离；
(3)吸出步骤(2)分离出的血浆，将所述血浆进行全血细胞计数，得到血浆中的血红蛋白浓度测定值“PHB”；
(4)对步骤(1)得到的红细胞计数测定值“实测RBC”和平均红细胞血红蛋白浓度“实测MCHC”进行校正，得到对应的校正值“校正RBC”和“校正MCHC”；校正式如下：
Figure BDA0002054054910000021
Figure BDA0002054054910000022
(5)所述发生溶血的血液是指血液溶血后血浆内血红蛋白浓度≥1.4g/L(干扰RBC的差异为≥1.0％，MCHC的差异为≥1.2％，见实施例2)，根据CNAS-TRL-001：2012《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》文件，对本实验室红细胞计数和平均血红蛋白浓度两项目扩展不确定度U和合成标准不确定度u的评估结果为：RBC：U＝2.01％，u＝1.01％；MCHC：U＝2.40％，u＝1.20％。以溶血干扰后检测结果偏差超过合成标准不确定度u的限值作为差异在本实验室检测系统中有意义的评判标准。
上述方法中，对发生溶血的血液进行低速离心操作时，离心力可选择500-800g，时间至少3分钟。
本发明采用所述方法获得的发生溶血的血液的红细胞系列参数数值准确性高，与真实值的差异平均小于±0.5％。本发明方法操作简单，使用的检测仪器和离心机为常规设备，因而便于在各种医院推广。本发明方法所需时间短，能快速得到检测结果，即节约时间也节约成本。
附图说明
图1是血常规分析样本溶血严重程度目视法判别标准。
图2是对照样本和溶血样本实测MCHC与溶血样本的校正MCHC差值分布。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
下述实施例中使用的离心机为具有定时和调节离心速度的BY-400C型低速台式水平离心机，有白洋仪器厂提供；血液分析仪为日本sysmex公式生产的XN2800型全自动血液分析仪和XN-L 330型血液分析仪，仪器使用的所有试剂均由sysmex公司提供原装配套试剂；新鲜全血样本来源于浙江大学医学院附属儿童医院临床血液常规标本。
数据处理时，计量资料以均值(X)±标准差(SD)表示；两均数的比较采用t检验进行分析，P<0.05为差异具有统计学意义；所有数据处理应用MicrosoftExcel软件。
实施例1
将EDTAK2(乙二酸四乙酸钾盐)抗凝(血常规专用浓度)的正常新鲜全血(无溶血，肉眼观察，红细胞沉降后血浆为淡黄色透明状)，40份分成4组，每组10份，每份2ml。
(1)将各份正常新鲜全血进行全血细胞计数
在XN-L 330血液分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将装有正常新鲜全血的试管颠倒8—10次使血液混匀，然后拔开试管盖，将正常新鲜全血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入血液中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测定值。经数据处理，得各组正常新鲜全血的红细胞及相关参数的测定值，见表1。
(2)将各份正常新鲜全血低速离心
对各份新鲜全血进行全血细胞计数后，用BY-400C型低速台式水平离心机进行低速离心，第1组的离心转速1500转/分钟(离心力400g)、离心时间5分钟，第2组的离心转速2000转/分钟(离心力715g)、离心时间3分钟，第3组的离心转速3000转/分钟(离心力715g)、离心时间5分钟，第4组的离心转速3000转/分钟(离心力1609g)、离心时间3分钟。
(3)将血浆进行全血细胞计数
低速离心后，将各试管中的血浆吸出分别进行全血细胞计数(所用仪器和操作与步骤(1)相同)，得到各份新鲜全血所分离出的血浆中红细胞(RBC)和血红蛋白浓度(HGB)的检测值，经数据处理，得各组正常新鲜全血分离出的血浆中的红细胞和血红蛋白浓度的检测值，见表1。
表1新鲜全血及其低速离心后分离出的血浆中的RBC和HGB
Figure BDA0002054054910000031
根据CNAS-TRL-001：2012《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》文件，对本实验室红细胞计数和平均血红蛋白浓度两项目扩展不确定度U和合成标准不确定度u的评估结果为：RBC：U＝2.01％，u＝1.01％；MCHC：U＝2.40％，u＝1.20％。以两次检测结果偏差超过合成标准不确定度u的限值作为差异在本实验室检测系统中有意义的评判标准。
从表1可以看出，4组新鲜全血的RBC完全沉降到试管底部，即血浆内RBC和HGB接近0，证明可以通过低速离心的方法(转速为2000—3000转/分钟、离心力为700—1500g、时间为3—5分钟)使新鲜全血中的红细胞RBC与血浆分离。
实施例2
选取某儿童医院2018年6月中连续七天里临床送检的静脉血常规样本，排除血液凝固、样本量不足等异常样本。所有实验在收集样本当天完成。
(1)对所有临床样本进行全血细胞计数
所有临床EDTA-K2抗凝静脉血样本使用XN2800型血液分析仪进行自动检测，将装有全血样本的试管顺序放置于专用试管架上，待仪器准备就绪(绿色Ready灯亮)，将试管架置于进样区，仪器自动进样、混匀、吸样和完成检测，自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测定值。
(2)分选出溶血样本
上述临床样本待全自动血液分析仪完成血常规检测后，静置1—2小时，然后目视挑出上清血浆疑似存在溶血现象的样本，共计83份。
(3)对各份疑似溶血样本进行低速离心
用BY-400C型低速台式水平离心机对疑似溶血样本进行低速离心，离心转速2000转/分钟(离心力715g)，离心时间3分钟。通过低速离心，红细胞与血浆分离，沉降到试管底部。
(4)对血浆进行全血细胞计数
低速离心后，将各试管中临床血液样本的血浆吸出分别进行全血细胞计数。血浆血红蛋白通过sysmex XN-L350仪器上的前稀释模式进行测定，增加7倍的吸样量以便获得更为准确的结果。测定结果需按照1:7稀释度复原，得到最终的血浆血红蛋白结果。
在XN-L 330血液分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，点击“模式切换”图标，在对话框选择“前稀释”后按“OK”键，仪器完成冲洗后绿色Ready灯亮准备就绪。将分离出的血浆置于仪器吸样针下，确认吸样针进入液体中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)的测定值。因前稀释模式的输出结果已按照默认7倍稀释倍数进行纠正，因此所有结果均需除以7以恢复实际的数值。
(5)红细胞计数“校正RBC”和平均红细胞血红蛋白浓度“校正MCHC”的校正采用如下校正公式进行校正：
Figure BDA0002054054910000041
Figure BDA0002054054910000051
各例临床血液样本的测定值及校正值见表2。
表2溶血样本血浆血红蛋白浓度及RBC、MCHC校正结果
Figure BDA0002054054910000052
Figure BDA0002054054910000061
Figure BDA0002054054910000071
(6)溶血程度对红细胞相关参数检测结果影响的判定
根据CNAS-TRL-001：2012《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》文件，对本实验室红细胞计数和平均血红蛋白浓度两项目扩展不确定度U和合成标准不确定度u的评估结果为：RBC：U＝2.01％，u＝1.01％；MCHC：U＝2.40％，u＝1.20％。以溶血干扰后检测结果偏差超过合成标准不确定度u的限值作为差异在本实验室检测系统中有意义的评判标准。
依据表中数据，选择PHB≥1.4g/L作为判定溶血导致红细胞参数检测产生差异的截断值。
(7)血常规分析样本溶血严重程度目视法判别标准见图1
利用溶血程度判别图，通过目视比对可将需要纠正的溶血样本分拣出来。
(8)同一患者溶血样本校正结果与未溶血样本结果比较
本实施实验共检出中度及以上溶血样本44例，经查询，其中有32名患者在近五天内检测过血常规。上述样本红细胞计数及相关参数经血浆血红蛋白校正后与同一患者近期未溶血样本血常规结果(以MCHC为例)比较结果见表3，校正MCHC和对照样本MCHC与原溶血样本MCHC差值分布见图2。
表3同一患者溶血样本校正结果与未溶血样本结果比较
Figure BDA0002054054910000072
Figure BDA0002054054910000081
实施例3
选取某儿童医院2018年6月中某一天临床检测血常规废弃静脉全血样本15份，无溶血(肉眼观察，红细胞沉降后血浆为淡黄色透明状)。
(1)对各份临床样本进行全血细胞计数
上述EDTA-K2抗凝静脉血样本使用XN2800型血液分析仪进行自动检测，将装有全血样本的试管顺序放置于专用试管架上，待仪器准备就绪(绿色Ready灯亮)，将试管架置于进样区，仪器自动进样、混匀、吸样和完成检测，自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测定值。
(2)血液体外人工溶血
准备好连接针头的5mL注射器，打开血液样本试管帽，将针头伸入血液内，然后快速抽吸及推送注射器并连续重复5次，完成后排空注射器，盖回试管帽，静置1小时后确定已产生中度及以上溶血现象。
(3)对各份人工溶血后血液样本进行全血细胞计数
在XN-L 330血液分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将将溶血后样本试管颠倒20次使血液混匀，然后拔开试管盖，将全血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入血液中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测定值。
(4)对各份人工溶血样本进行低速离心
用BY-400C型低速台式水平离心机对溶血样本进行低速离心，离心转速2000转/分钟(离心力715g)，离心时间3分钟。通过低速离心，红细胞与血浆分离，沉降到试管底部。
(5)对血浆进行全血细胞计数
低速离心后，将各试管中血液样本的血浆吸出分别进行全血细胞计数。血浆血红蛋白通过sysmex XN-L350仪器上的前稀释模式进行测定，增加7倍的吸样量以便获得更为准确的结果。测定结果需按照1:7稀释度复原，得到最终的血浆血红蛋白结果。
在XN-L 330血液分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，点击“模式切换”图标，在对话框选择“前稀释”后按“OK”键，仪器完成冲洗后绿色Ready灯亮准备就绪。将分离出的血浆置于仪器吸样针下，确认吸样针进入液体中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)的测定值。因前稀释模式的输出结果已按照默认7倍稀释倍数进行纠正，因此所有结果均需除以7以恢复实际的数值。
(6)红细胞计数“校正RBC”和平均红细胞血红蛋白浓度“校正MCHC”的校正采用如下校正公式进行校正：
Figure BDA0002054054910000091
Figure BDA0002054054910000092
各例人工溶血样本的溶血前后测定值及校正值见表4。
表4：人工溶血前后及校正后血液分析参数比较
Figure BDA0002054054910000093
Figure BDA0002054054910000101

Claims (1)

1.一种纠正溶血对红细胞系列参数检测影响的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
（1）将发生溶血的血液进行全血细胞计数，得到溶血后的红细胞计数测定值实测RBC，血红蛋白浓度测定值实测HB，血细胞比积测定值实测HCT，平均红细胞血红蛋白量测定值实测MCH和平均红细胞血红蛋白浓度实测MCHC；
（2）将步骤（1）所述发生溶血的血液进行低速离心操作，使该血液中的红细胞与血浆分离；离心力选择500-800g，时间至少3分钟；
（3）吸出步骤（2）分离出的血浆，将所述血浆进行全血细胞计数，得到血浆中的血红蛋白浓度测定值PHB；
（4）对步骤（1）得到的红细胞计数测定值“实测RBC”和平均红细胞血红蛋白浓度“实测MCHC”进行校正，得到对应的校正值“校正RBC”和“校正MCHC”；校正式如下：
Figure 792211DEST_PATH_IMAGE002
Figure 859524DEST_PATH_IMAGE004
；
（5）所述发生溶血的血液是指血液溶血后血浆内血红蛋白浓度≥1.4g/L，干扰RBC的差异为≥1.0%，MCHC的差异为≥1.2%，对红细胞计数和平均血红蛋白浓度两项目扩展不确定度U和合成标准不确定度u的评估结果为：RBC：U=2.01%，u=1.01%；MCHC：U=2.40%，u=1.20%，以溶血干扰后检测结果偏差超过合成标准不确定度u的限值作为差异在实验室检测系统中有意义的评判标准。
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