CN112964864B - 基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及血液抗凝方法技术领域，公开了基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，包括以下步骤：1)仪器和材料、2)采集标本、3)抗凝剂配制、4)标本的采集、5)观察对比、6)标本统计、7)检测结果、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂作用，比较两组未发生PTCP 100例数据，根据数值的变化情况可知，观察组与对照组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异(P>0.05)，与手工法比较，无显著差异。本发明通过二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝对血液有良好的抗凝效果，能准确计数血细胞及血小板，有效避免了EDTA‑PTCP。

Description

基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法

技术领域

本发明涉及血液抗凝方法技术领域，具体为基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法。

背景技术

在当前医学水平不断提升的形势下，医学界学者和广大患者认识到血小板数目准确计数的重要性,因此对EDTA依赖性假性血小板减少(EDTA-dependetpseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP)极为重视，现有的对血液抗凝的方式较少，使用的方法较少，具有很大的局限性，本发明了一种针对二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝对血液抗凝的方法。

发明内容

本发明提供了基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，该基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，解决了上述提出的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，包括以下步骤：

1)仪器和材料：

选用血液细胞分析仪以及相关的配套试剂、EDTA、柠檬酸钠9:1及无添加剂真空采血管、双目显微镜、瑞氏-姬姆萨染色液、二乙烯三胺五乙酸和二水柠檬酸钠，备用；

2)采集标本：

选取患者的血液并放置在无添加剂真空采血管内部，备用；

3)抗凝剂配制：

将1-5份二水柠檬酸钠和1-6份二乙烯三胺五乙酸加入到100-500份水中，达到溶解的目的，并取出20ul放入到无添加剂并硅化过的管材中，加盖并抽真空，抽血后混匀抗凝血样，备用；

4)标本的采集：

给予观察组血液实施对照组未发生PTCP样本用EDTA抗凝管、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝管采样，发生PTCP样本用EDTA抗凝管、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝、柠檬酸钠9:1管(所得结果乘以稀释倍数1.1)标准采样，必要时用手工法计数，每例未发生EDTA依赖性血小板聚集样本在同一时间抽取，每例发生EDTA依赖性血小板聚集样本在同一天抽取,严格2ml量，摇晃均匀，及时检测，也可将已经发生EDTA-PTCP的样本取出部分放入二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝管中进行混匀后解聚，上机对EDTA依赖性假性血小板聚集情况进行检测；

5)观察对比：

对血液样本1小时内实施检测后，医护人员深入对两组样本的白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板情况进行记录，并将两组结果进行对比分析；

6)标本统计：

采用统计软件进行分析本次研究当中的所有数据，数据采用均数±标准差(x±s)表示，P>0.05表示无显著差异；

7)检测结果：

S1、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂作用，比较两组未发生PTCP100例数据，根据数值的变化情况可知，观察组与对照组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异(P>0.05)，与手工法比较，无显著差异；

S2、比较两组发生EDTA-PTCP8例数据：根据数值的变化情况可知，观察组与柠檬酸钠9:1组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异(P>0.05)；观察组与EDTA-K2组在白细胞、红细胞、血红蛋白数值上的对比无显著差异(P>0.05)。

优选的，步骤1)中的血液细胞分析仪为型号为BC-6800的迈瑞五分类血液细胞分析仪。

优选的，步骤4)中的手工法计数血小板时严格按照《全国临床检验操作规程(第四版)》操作。

优选的，步骤4)中的手工法的观察方式采用双目显微镜进行观察。

优选的，步骤6)中的统计软件为SPSS17.0统计软件。

优选的，步骤4)中的上机检测机械为BC-6800的迈瑞五分类血液细胞分析仪。

借由上述技术方案，本发明提供了基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法。至少具备以下有益效果：

该基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，通过二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝对血液有良好的抗凝效果，能准确计数血细胞及血小板，有效避免了EDTA-PTCP。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分：

图1为100例未发生EDTA-PTCP时2种抗凝剂检测结果比较表格图；

图2为8例发生EDTA-PTCP时3种抗凝剂检测结果比较表格图；

图3为二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝血在BC-6800血细胞分析仪的血细胞图形变化图；

图4为EDTA抗凝血在BC-6800血细胞分析仪的血细胞图形变化图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

本发明提供一种技术方案：

基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，包括以下步骤：

1)仪器和材料：

选用血液细胞分析仪(型号为BC-6800的迈瑞五分类血液细胞分析仪)以及相关的配套试剂、EDTA、柠檬酸钠9:1及无添加剂真空采血管、双目显微镜、瑞氏-姬姆萨染色液、二乙烯三胺五乙酸和二水柠檬酸钠，备用；

2)采集标本：

选取患者的血液并放置在无添加剂真空采血管内部，备用；

3)抗凝剂配制：

将1-5份二水柠檬酸钠和1-6份二乙烯三胺五乙酸加入到100-500份水中，达到溶解的目的，并取出20ul放入到无添加剂并硅化过的管材中，加盖并抽真空，抽血后混匀抗凝血样，备用；

4)标本的采集：

给予观察组血液实施对照组未发生PTCP样本用EDTA抗凝管、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝管采样，发生PTCP样本用EDTA抗凝管、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝、柠檬酸钠9:1管(所得结果乘以稀释倍数1.1)标准采样，必要时用手工法计数，手工法计数血小板时严格按照《全国临床检验操作规程(第四版)》操作，手工法的观察方式采用双目显微镜进行观察，每例未发生EDTA依赖性血小板聚集样本在同一时间抽取，每例发生EDTA依赖性血小板聚集样本在同一天抽取,严格2ml量，摇晃均匀，及时检测，也可将已经发生EDTA-PTCP的样本取出部分放入二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝管中进行混匀后解聚，上机对EDTA依赖性假性血小板聚集情况进行检测，上机检测机械为BC-6800的迈瑞五分类血液细胞分析仪；

5)观察对比：

对血液样本1小时内实施检测后，医护人员深入对两组样本的白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板情况进行记录，并将两组结果进行对比分析；

6)标本统计：

采用SPSS17.0统计软件进行分析本次研究当中的所有数据，数据采用均数±标准差(x±s)表示，P>0.05表示无显著差异；

7)检测结果：

S1、如图1所示：二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂作用，比较两组未发生PTCP 100例数据，根据数值的变化情况可知，观察组与对照组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异(P>0.05)，与手工法比较，无显著差异；

S2、比较两组发生EDTA-PTCP8例数据：根据数值的变化情况可知，观察组与柠檬酸钠9:1组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异(P>0.05)；观察组与EDTA-K2组在白细胞、红细胞、血红蛋白数值上的对比无显著差异(P>0.05)，如图2所示：两种抗凝法与EDTA-K2抗凝法的血小板计数结果差异显著(P<0.01)。

采用迈瑞BC-6800血液分析仪，对使用不同抗凝剂抗凝血进行血细胞计数分析，并进行瑞姬氏染色进行形态学比较，结果：用二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂检测抗凝管与未发生EDTA依赖性血小板聚集EDTA-K2抗凝计数的白细胞、红细胞、血红蛋白及血小板无显著差异(P>0.05)，与发生EDTA依赖性血小板聚集计数的白细胞、红细胞、血红蛋白无显著差异(P>0.05)，血小板有显著差异(P<0.01)。

请参阅图3-4：

DIFF通道散点图，二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂血样(见图①)；EDTA抗凝血样散点(见图⑤)经过对比使用两种抗凝剂图形无明显差别。

BASO通道散点图，二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂血样(见图④)，EDTA抗凝血样散点(见图⑧)经过对比使用两种抗凝剂图形无明显差别。

红细胞直方图，经过对比使用两种抗凝剂图形无明显差别(见图②⑥)。

血小板直方图，经过对比使用两种抗凝剂图形无明显差别(见图③⑦)。

由于EDTA应用十分广泛，如日化领域及食品领域等，这也许致敏了少数人引起EDTA-PTCP，但EDTA-PTCP的发生无病理和生理意义，然而EDTA-PTCP样本要求检验者要有精益求精的技术进行复检，一些专家学者研究了很多EDTA-PTCP出现时纠正方法,但一些方法依然不能100％解决相关聚集问题且一些所使用的成分会影响白细胞的结果，然而由于操作略显繁琐，在一些基层医院操作比较困难，不同程度增加了执业风险和患者的负担，甚至EDTA发生氧化也可以造成更多健康人发生EDTA-PTCP，不得不说这种情况属于实验前质量控制，由免疫复合物形成条件及影响因素可知更换新的抗凝剂是避免EDTA-PTCP发生的有效方法。

本发明的有益效果，通过二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝对血液有良好的抗凝效果，能准确计数血细胞及血小板，有效避免了EDTA-PTCP。

用二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂与EDTA均有良好的抗凝作用，但用二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂不会引起EDTA依赖性血小板聚集，推片染色形态稳定，更加适合应用与血小板的测定，具有临床应用价值。

以上对本发明所提供的基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法进行了详细介绍。本发明应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (5)

1.基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)仪器和材料：

选用血液细胞分析仪以及相关的配套试剂、EDTA、柠檬酸钠9:1及无添加剂真空采血管、双目显微镜、瑞氏-姬姆萨染色液、二乙烯三胺五乙酸和二水柠檬酸钠，备用；所述血液细胞分析仪为型号为BC-6800的迈瑞五分类血液细胞分析仪；

2)采集标本：

选取患者的血液并放置在无添加剂真空采血管内部，备用；

3)抗凝剂配制：

将1-5份二水柠檬酸钠和1-6份二乙烯三胺五乙酸加入到100-500份水中，达到溶解的目的，并取出20ul放入到无添加剂并硅化过的管材中，加盖并抽真空，抽血后混匀抗凝血样，备用；

4)标本的采集：

给予观察组血液实施对照组未发生PTCP样本用EDTA抗凝管、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝管采样，发生PTCP样本用EDTA抗凝管、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝、柠檬酸钠9:1管标准采样，所述柠檬酸钠9:1管所得结果乘以稀释倍数1.1；必要时用手工法计数，每例未发生EDTA依赖性血小板聚集样本在同一时间抽取，每例发生EDTA依赖性血小板聚集样本在同一天抽取,严格2ml量，摇晃均匀，及时检测，或者将已经发生EDTA-PTCP的样本取出部分放入二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂抗凝管中进行混匀后解聚，上机对EDTA依赖性假性血小板聚集情况进行检测；

5)观察对比：

对血液样本1小时内实施检测后，医护人员深入对两组样本的白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板情况进行记录，并将两组结果进行对比分析；

6)标本统计：

采用统计软件进行分析本次研究当中的所有数据，数据采用均数±标准差(x±s)表示，P>0.05表示无显著差异；

7)检测结果：

S1、二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸混合抗凝剂作用，比较两组未发生PTCP100例数据，根据数值的变化情况可知，观察组与对照组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异，与手工法比较，无显著差异；

S2、比较两组发生EDTA-PTCP8例数据：根据数值的变化情况可知，观察组与柠檬酸钠9:1组在白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数值上的对比无显著差异；观察组与EDTA-K2组在白细胞、红细胞、血红蛋白数值上的对比无显著差异。

2.根据权利要求1所述的基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，其特征在于：步骤4)中的手工法计数血小板时严格按照《全国临床检验操作规程(第四版)》操作。

3.根据权利要求1所述的基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，其特征在于：步骤4)中的手工法的观察方式采用双目显微镜进行观察。

4.根据权利要求1所述的基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，其特征在于：步骤6)中的统计软件为SPSS17.0统计软件。

5.根据权利要求1所述的基于二水柠檬酸钠和二乙烯三胺五乙酸的血液抗凝方法，其特征在于：步骤4)中的上机检测机械为BC-6800的迈瑞五分类血液细胞分析仪。