CN101398422A - 高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法 - Google Patents
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Abstract
一种高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法，步骤如下：(1)将含高甘油三脂的血液进行全血细胞计数，得到其血红蛋白浓度的测定值HGB脂血和红细胞压积HCT脂血，(2)将步骤(1)所述含高甘油三脂的血液进行低速离心，使该血液中的红细胞与血浆分离，(3)吸出步骤(2)分离出的血浆，将所述血浆进行全血细胞计数，得到血浆中的血红蛋白浓度测定值HGB脂血血浆，(4)对步骤(1)得到的血红蛋白浓度测定值HGB脂血进行校正，得到血红蛋白浓度校正值，校正式如下：HGB校正值＝HGB脂血－(HGB脂血血浆－HGB脂血血浆×HCT脂血)，式中，HGB脂血血浆×HCT脂血为含高甘油三脂的血液中红细胞所占比例。
Description
技术领域
本发明属于含高甘油三脂的血液的血红蛋白浓度的测定领域，特别涉及一种高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法。
背景技术
试验表明，当血液中的甘油三脂(TG)含量>4.76mmol/L时，会严重干扰血常规检验的血红蛋白浓度测定，甘油三脂(TG)浓度越高，则干扰程度越大，其结果是导致血红蛋白(HGB)浓度的测定结果假性增高。
为了准确获得含高甘油三脂的血液的血红蛋白浓度，目前国内外主要采用两种方法，即高速离心法和间接测量法。高速离心法的操作是：1、以3500转/分钟的转速离心5分钟，然后吸出分离出的血浆，再将血浆以10000转/分钟的转速离心20分钟使脂肪颗粒悬浮在血浆表面；2、吸出脂肪颗粒后，向血浆中补入同体积稀释液，然后将血浆与步骤1分离出的血细胞混合均匀再上机检测。此种方法不仅受到特殊设备(高速离心机)的限制，而且操作烦琐，费时，在操作过程中发现，经过高速离心后的脂肪颗粒凝集成块漂浮在血浆上面，很难完全吸出和准确测量其吸出的体积，因而准确度差。间接测量法(见Kalache GR，Sartor MM，Hughes WG.The indirect estimation of hemoglobinconcentration in whole blood.Pathology.1991 Apr；23(2)：115-7.)通过标准电子计数得到平均红细胞体积(MCV)，计算出MCV与平均血红蛋白含量(MCH)的指数比值，再通过公式校正HGB，该方法受大部分血液细胞分析仪没有标准电子计数MCV功能的限制，亦很难被推广和实用化。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法，此种方法不仅能提高含高甘油三脂血液的血红蛋白浓度测定的准确性，而且操作简单，所用设备为常规设备，便于推广。
本发明所述高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法，步骤如下：
(1)将含高甘油三脂的血液进行全血细胞计数，得到其血红蛋白浓度的测定值HGB脂血和红细胞压积的测定值HCT脂血，
(2)将步骤(1)所述含高甘油三脂的血液进行低速离心操作，使该血液中的红细胞与血浆分离，
(3)吸出步骤(2)分离出的血浆，将所述血浆进行全血细胞计数，得到血浆中的血红蛋白浓度测定值HGB脂血血浆，
(4)对步骤(1)得到的血红蛋白浓度测定值HGB脂血进行校正，得到血红蛋白浓度的校正值，校正式如下：
HGB校正值＝HGB脂血—(HGB脂血血浆—HGB脂血血浆×HCT脂血)，式中，HGB脂血血浆×HCT脂血为含高甘油三脂的血液中红细胞所占比例；
所述含高甘油三脂的血液是指血液中甘油三脂的含量>4.76mmol/L(干扰HGB的差异为4.56％，见实施例3)，根据美国临床实验室改进法案(CLIA88)和日本临床实验室标准委员会(JCCLS)的要求，HGB的检测允许差异分别为7％和4％，为了提高准确性，本发明将HGB的允许差异定为5％。
上述方法中，对含高甘油三脂的血液进行低速离心操作时，转速为1500-3000转/分钟(离心力310-1685g)，时间至少为3分钟。转速优选1500-2000转/分钟(离心力310-550g)，时间优选3-5分钟。
本发明具有以下有益效果：
1、采用本发明所述方法获得的含高甘油三脂的血液的血红蛋白浓度的准确性高，与血红蛋白浓度真实值的差异小于±2.0％。
2、本发明所述方法操作简单，使用的检测仪器和离心机为常规设备，因而便于在各种医院推广。
3、本发明所述方法所需时间短，能很快得到检测结果。
具体实施方式
下述实施例中使用的离心机为具有定时和调节离心速度的TDZ4-WS型低速台式普通离心机，由湘仪器材厂提供；血细胞分析仪为日本Sysmex公司生产的XE-2100型血细胞分析仪，仪器使用的所有试剂均由Sysmex公司提供的原装配套试剂；新鲜全血标本来源于四川大学华西医院临床血液常规标本和正常献血员；脂肪乳液用质量分数30％的无菌脂肪乳注射液配制。
数据处理时，计量资料以均值(x)±标准差(sd)表示；两均数比较采用t检验进行分析，P<0.05为差异有统计学意义；所有数据处理应用Microsoft Excel软件。
实施例1
将EDTAK2(乙二酸四乙酸钾盐)抗凝(血常规专用浓度)的正常新鲜全血(TG<1.83mmol/L，TG正常参考范围为0.29-1.83mmol/L，无溶血，肉眼观察，红细胞沉降后血浆为淡黄色透明状)，40份分成4组，每组10份，每份2ml。
(1)将各份正常新鲜全血进行全血细胞计数
在XE-2100血液细胞分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将装有正常新鲜全血的试管颠倒8-10次使血液混匀，然后拔开试管盖，将正常新鲜全血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入血液中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出红细胞(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)和红细胞压积(HCT)的测定值。经数据处理，得各组正常新鲜全血的红细胞和血红蛋白的测定值，见表1。
(2)将各份正常新鲜全血低速离心
对各份新鲜全血进行全血细胞计数后，用TDZ4-WS型低速台式离心机进行低速离心，第1组的离心转速1500转/分钟(离心力310g)、离心时间5分钟，第2组的离心转速2000转/分钟(离心力550g)、离心时间3分钟，第3组的离心转速2000转/分钟(离心力550g)、离心时间5分钟，第4组的离心转速3000转/分钟(离心力1685g)、离心时间5分钟。
(3)将血浆进行全血细胞计数
低速离心后，将各试管中的血浆吸出分别进行全血细胞计数(所用仪器和操作与步骤(1)相同)，得到各份新鲜全血所分离出的血浆中红细胞(RBC)和血红蛋白浓度(HGB)的检测值，经数据处理，得各组正常新鲜全血分离出的血浆中的红细胞和血红蛋白浓度的检测值，见表1。
表1 新鲜全血及其低速离心后分离出的血浆中的RBC和HGB
| 组号 | 每组份数n | 离心转速转/分钟 | 离心力g | 离心时间分钟 | 正常新鲜全血中的RBC(×1012/L) | 血浆中的RBC(×1012/L) | 正常新鲜全血中的HGB(g/L) | 血浆中的HGB(g/L) |
| 1 | 10 | 1500 | 310 | 5 | 4.17±0.90 | 0.00±0.00 | 120.9±22.82 | 0.40±0.52 |
| 2 | 10 | 2000 | 550 | 3 | 4.40±0.77 | 0.00±0.00 | 131.5±28.72 | 0.70±0.48 |
| 3 | 10 | 2000 | 550 | 5 | 4.35±0.55 | 0.00±0.00 | 128.0±15.83 | 0.80±0.63 |
| 4 | 10 | 3000 | 1685 | 5 | 4.82±0.73 | 0.01±0.01 | 136.3±20.31 | 0.30±0.48 |
根据美国临床实验室改进法案(CLIA88)和日本临床实验室标准委员会(JCCLS)的要求，HGB的检测允许差异分别为7％和4％，为了提高准确性，本发明将HGB的允许差异定为5％。从表1可以看出，4组新鲜全血的RBC完全沉降到试管底部，即血浆内RBC和HGB接近0(4组HGB浓度>0，因血浆本底所致)，证明可以通过低速离心的方法(转速为1500-3000转/分钟、时间为3-5分钟)使新鲜全血中的红细胞RBC与血浆分离。
实施例2
用质量分数30％的无菌脂肪乳注射液与正常血浆(TG<1.83mmol/L，淡黄色透明状)配制4组脂肪乳液，每组10份(浓度从4.76到53.28mmol/L不等)，每份2ml。
(1)将各份脂肪乳液进行全血细胞计数(CBC)
在XE-2100血液细胞分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，拔开试管盖，将脂肪乳液置于仪器吸样针下，确认吸样针进入脂肪乳液中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB)的检测值。经数据处理，得各组脂肪乳液的红细胞和血红蛋白浓度的测定值，见表2。
(2)将各份脂肪乳液低速离心
将各份脂肪乳液进行全血细胞计数(CBC)后，用TDZ4-WS型低速台式离心机进行低速离心，第1组的离心转速1500转/分钟(离心力310g)、离心时间5分钟，第2组的离心转速2000转/分钟(离心力550g)、离心时间3分钟，第3组的离心转速2000转/分钟(离心力550g)、离心时间5分钟，第4组的离心转速3000转/分钟(离心力1685g)、离心时间5分钟。
(3)将低速离心后的脂肪乳液进行全血细胞计数
将低速离心后的脂肪乳液进行全血细胞计数，所用仪器和操作与步骤(1)相同，所获低速离心后各份脂肪乳液中的假红细胞(RBC)和假血红蛋白浓度(HGB)的测定值经数据处理，得低速离心后各组脂肪乳液中假红细胞和假血红蛋白浓度的测定值，见表2。
表2 低速离心前和低速离心后各组脂肪乳液中的假RBC和假HGB
| 组号 | 每组份数n | 离心转速转/分钟 | 离心力g | 离心时间分钟 | 低速离心前脂肪乳液中的假RBC(×1012/L) | 低速离心后脂肪乳液中的假RBC(×1012/L) | 低速离心前脂肪乳液中的假HGB(g/L) | 低速离心后脂肪乳液中的假HGB(g/L) |
| 1 | 10 | 1500 | 310 | 5 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 | 29.5±23.20 | 30.0±23.05 |
| 2 | 10 | 2000 | 550 | 3 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 | 30.5±21.59 | 29.9±22.24 |
| 3 | 10 | 2000 | 550 | 5 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 | 31.4±24.28 | 30.7±22.92 |
| 4 | 10 | 3000 | 1685 | 5 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 | 32.3±26.31 | 32.1±25.68 |
从表2可以看出，4组脂肪乳液低速离心前后的假的RBC均为0(不受干扰)；假HGB均值分别是29.5与30.0，30.5与29.9，31.4与30.7，32.3与32.1，P>0.05，其差异无统计学意义，证明脂肪乳液不受以上离心时间和离心转速(离心力)的影响。
实施例3
将EDTAK2抗凝的正常新鲜全血(TG<1.83mmol/L，无溶血，肉眼观察，红细胞沉降后血浆为淡黄色透明状)120ml分成60份，每份2ml，每组10份，共6组。
(1)将各份正常新鲜全血进行全血细胞计数
在XE-2100血液细胞分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将装有正常新鲜全血的试管颠倒8-10次使血液混匀，然后拔开试管盖，将正常新鲜全血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入血液中部，按绿色计数键进行吸样(吸样130μl)，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出血红蛋白浓度(HGB)的测定值。经数据处理，得各组正常新鲜全血的血红蛋白浓度测定值，见表4。
(2)对各份正常新鲜全血(无溶血和脂血)低速离心
对正常新鲜全血进行全血细胞计数后，用TDZ4-WS型低速台式离心机进行低速离心，6组正常新鲜全血的离心转速均为3000转/分钟(离心力1685g)、离心时间均为5分钟。
(3)配制含不同TG浓度的脂血样品
低速离心后，轻轻取出试管，用浓度为483.96mmol/L的脂肪乳液置换出血浆，配制含不同TG浓度的脂血样品，具体操作见表3。
表3 脂血样品的配制
*血液的总TG浓度(mmol/L)＝血液自身的TG浓度(1.52)+配制的TG浓度。
(4)对配制的脂血样品进行全血细胞计数
在XE-2100血液细胞分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将装有脂血样品的试管颠倒10次使脂血混匀，然后拔开试管盖，将脂血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入脂血中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出血红蛋白浓度(HGB)测定值。经数据处理，得各组脂血的血红蛋白浓度测定值，见表4。
表4 正常新鲜全血和脂血样品的HGB
| 组号 | 每组份数n | TG浓度(mmol/L) | 正常新鲜全血的HGB(g/L) | 脂血样品的HGB(g/L) |
| 1 | 10 | 4.02 | 107.7±0.46 | 112.1±0.30 |
| 2 | 10 | 4.76 | 107.5±0.50 | 112.4±1.02 |
| 3 | 10 | 7.99 | 107.5±0.50 | 115.3±0.64 |
| 4 | 10 | 14.46 | 107.7±0.90 | 121.4±0.80 |
| 5 | 10 | 27.40 | 108.7±2.49 | 134.7±1.90 |
| 6 | 10 | 53.28 | 107.0±0.46 | 160.6±1.02 |
P值均<0.05，有显著性差异。
从表4看出，当TG浓度>4.02mmol/L时，正常新鲜全血与脂血样品的HGB有显著差异(P值均<0.05)，说明HGB受到干扰。
表5 不同TG浓度对HGB干扰的程度
| 组号 | 每组份数n | TG浓度(mmol/L) | 正常新鲜全血与脂血样品HGB的差异百分率(％) |
| 1 | 10 | 4.02 | 4.09 |
| 2 | 10 | 4.76 | 4.56 |
| 3 | 10 | 7.99 | 7.26 |
| 4 | 10 | 14.46 | 12.72 |
| 5 | 10 | 27.40 | 24.72 |
| 6 | 10 | 53.28 | 49.12 |
根据美国临床实验室改进法案(CLIA88)和日本临床实验室标准委员会(JCCLS)的要求，HGB的检测允许差异分别为7％和4％，为了提高准确性，本发明将HGB的允许差异定为5％。从表5可以看出，当TG浓度为4.02和4.76mmol/L时，真实值与加脂后的HGB的差异百分率分别为4.09％和4.56％，因此将高甘油三脂的临界值定为4.76mmol/L；同时表明HGB受干扰的程度与TG的浓度成正比，TG浓度越高，干扰程度越大，其差异百分率随着TG浓度的增大而增大。
实施例4
EDTAK2抗凝的正常新鲜全血(TG<1.83mmol/L，TG正常参考范围为0.29-1.83mmol/L，无溶血，肉眼观察，红细胞沉降后血浆为淡黄色透明状)102份，每份2ml。
(1)对各份正常新鲜全血进行全血细胞计数(CBC)
在XE-2100血液细胞分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将装有正常新鲜全血的试管颠倒8-10次使血液混匀，然后拔开试管盖，将正常新鲜全血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入血液中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出血红蛋白浓度(HGB)测定值。经数据处理，正常新鲜全血的血红蛋白浓度测定均值＝110.7±17.25g/L。
(2)对各份正常新鲜全血低速离心
对各份正常新鲜全血进行全血细胞计数后，用TDZ4-WS型低速台式离心机进行低速离心，离心转速均为3000转/分钟(离心力1685g)、离心时间均为5分钟。
(3)配制脂血样品
低速离心后，轻轻取出试管，用浓度为483.96mmol/L的脂肪乳液置换出血浆，配制TG浓度为4.76-53.28mmol/L之间的任意TG浓度的脂血样品102份。
(4)对配制的脂血样品进行全血细胞计数
与步骤(1)使用同一仪器、同一工作模式，将装有脂血样品的试管颠倒10次使脂血混匀，然后拔开试管盖，将脂血置于仪器吸样针下，确认吸样针进入脂血中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出血红蛋白浓度(HGB)测定值和红细胞压积(HCT)测定值。经数据处理，脂血样品的血红蛋白浓度测定均值HGB脂血＝132.8±24.77g/L，红细胞压积测定均值HCT脂血＝0.352±0.050L/L。
(5)对配制的脂血样品低速离心
对各份脂血样品进行全血细胞计数后，用TDZ4-WS型低速台式离心机进行低速离心，离心转速均为2000转/分钟(离心力550g)、离心时间均为3分钟。
(6)对分离出的脂血样品的血浆进行全血细胞计数
低速离心后，将各试管中的脂血样品血浆吸出分别进行全血细胞计数，与步骤(1)使用同一仪器、同一工作模式。将所获各份脂血样品血浆的血红蛋白浓度(HGB)测定值进行数据处理，得脂血样品血浆的血红蛋白浓度测定均值HGB脂血血浆＝35.2±23.85g/L，
(7)对脂血样品的血红蛋白检测均值进行校正
HGB校正值＝HGB脂血—(HGB脂血血浆—HGB脂血血浆×HCT脂血)＝110.3±17.62g/L
本实施例中，102份正常新鲜全血的血红蛋白浓度检测均值为110.7±17.25g/L(此值为正常新鲜全血的血红蛋白浓度的真实值)，脂血样品的血红蛋白浓度测定均值为132.8±24.77g/L，脂血样品的血红蛋白浓度校正值为110.3±17.62g/L。将脂血样品的血红蛋白浓度校正值与正常新鲜全血的血红蛋白浓度测定均值进行t检验，P>0.05，差异无统计学意义；经计算，脂血样品的血红蛋白浓度校正值与正常新鲜全血的血红蛋白浓度测定均值的差异百分率为-0.33％。上述结果说明，采用本发明所述方法可消除高甘油三脂对血红蛋白浓度测定的干扰，提高含高甘油三脂血液的血红蛋白浓度测定的准确性。
实施例5
本实施例中，对XE-2100血液细胞分析仪出现“乳糜/血红蛋白干扰(Turbidity/HGBInterference)”报警的7例临床血液标本进行了以下步骤的操作：
(1)将7例临床血液标本进行全血细胞计数(CBC)
在XE-2100血液细胞分析仪准备就绪(绿色Ready灯亮)的状态下，将装有临床血液标本的试管颠倒8-10次使血液混匀，然后拔开试管盖，将临床血液标本置于仪器吸样针下，确认吸样针进入血液中部，按绿色计数键进行吸样，当仪器发出的吸样声停止后，移开试管，1分钟后自动显示出所测临床血液标本的血红蛋白浓度测定值HGB脂血和红细胞压积测定值HCT脂血。7例临床血液标本的血红蛋白浓度测定值HGB脂血和红细胞压积测定值HCT脂血见表6。
(2)将7例临床血液标本进行低速离心
对各例临床血液标本进行全血细胞计数(CBC)后，用TDZ4-WS型低速台式离心机进行低速离心，离心转速均为2000转/分钟(离心力550g)、离心时间均为3分钟。通过低速离心，红细胞与血浆分离，沉降到试管底部。
(3)对血浆进行全血细胞计数(CBC)
低速离心后，将各试管中临床血液标本的血浆吸出分别进行全血细胞计数，与步骤(1)使用同一仪器、同一工作模式。所获各例临床血液标本的血浆中的血红蛋白浓度测定值HGB脂血血浆见表6。
(4)血红蛋白浓度测定值HGB脂血的校正
采用校正公式HGB校正值＝HGB脂血—(HGB脂血血浆—HGB脂血血浆×HCT脂血)进行校正，各例临床血液标本的校正值见表6。
表6 7例临床血液标本的TG浓度和HGB
| 临床血液标本序号 | 生化分析仪测TG浓度(mmol/L) | HGB脂血(g/L) | HCT脂血(L/L) | HGB脂血血浆(g/L) | HGB校正值(g/L) |
| 1 | 20.6 | 167 | 0.460 | 20 | 156 |
| 2 | 10.72 | 78 | 0.209 | 8 | 72 |
| 3 | 26.32 | 110 | 0.198 | 50 | 70 |
| 4 | 10.61 | 84 | 0.190 | 24 | 65 |
| 5 | 12.12 | 121 | 0.352 | 10 | 115 |
| 6 | 18.2 | 142 | 0.409 | 19 | 131 |
| 7 | 10.89 | 95 | 0.316 | 9 | 89 |
Claims (3)
1、一种高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法，其特征在于步骤如下：
(1)将含高甘油三脂的血液进行全血细胞计数，得到其血红蛋白浓度的测定值HGB脂血和红细胞压积的测定值HCT脂血，
(2)将步骤(1)所述含高甘油三脂的血液进行低速离心操作，使该血液中的红细胞与血浆分离，
(3)吸出步骤(2)分离出的血浆，将所述血浆进行全血细胞计数，得到血浆中的血红蛋白浓度测定值HGB脂血血浆，
(4)对步骤(1)得到的血红蛋白浓度测定值HGB脂血进行校正，得到血红蛋白浓度的校正值，校正式如下：
HGB校正值＝HGB脂血—(HGB脂血血浆—HGB脂血血浆×HCT脂血)
式中，HGB脂血血浆×HCT脂血为含高甘油三脂的血液中红细胞所占比例；
所述含高甘油三脂的血液是指血液中甘油三脂的含量>4.76mmol/L。
2、根据权利要求1所述的高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法，其特征在于对含高甘油三脂的血液进行低速离心操作时，转速为1500-3000转/分钟，时间至少为3分钟。
3、根据权利要求2所述的高甘油三脂对血红蛋白浓度测定干扰的消除方法，其特征在于对含高甘油三脂的血液进行低速离心操作时，转速为1500-2000转/分钟，时间为3～5分钟。
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