CN110187102A - 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法 - Google Patents

基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110187102A
CN110187102A CN201910379305.0A CN201910379305A CN110187102A CN 110187102 A CN110187102 A CN 110187102A CN 201910379305 A CN201910379305 A CN 201910379305A CN 110187102 A CN110187102 A CN 110187102A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aggregation
induced emission
influenza
influenza virus
molecule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910379305.0A
Other languages
English (en)
Inventor
郑斌
明东
王树超
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University
Original Assignee
Tianjin University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University filed Critical Tianjin University
Priority to CN201910379305.0A priority Critical patent/CN110187102A/zh
Publication of CN110187102A publication Critical patent/CN110187102A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明涉及一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法。该方法以聚集诱导发光分子作为荧光标记物，通过静电相互作用，实现聚集诱导发光分子对流感病毒的标记。通过激光共聚焦成像分析系统，可以实现对流感病毒侵染宿主细胞的侵染过程的全程示踪。该标记方法简单高效，对病毒活性影响小，能够充分反映病毒在单个细胞内的群体动态侵染行为。结合聚集诱导发光分子优异的光学性质，我们建立了一种多目标的，实时的，长时间的流感病毒的示踪方法，对全局地，高效地研究流感病毒侵染机制提供了强有力的工具。

Description

基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法
技术领域
本发明属于病毒学和生物科学领域,涉及一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法。
背景技术
为了有效地预防和控制病毒性疾病的传播，深刻认识病毒感染宿主等传播过程的机制显得尤为重要。对病毒侵染宿主细胞动态过程及机制的诠释，将为认识病毒致病机制及防治病毒性疾病奠定重要的理论基础。病毒侵染宿主细胞的过程非常复杂,往往包含许多阶段、多种途径并涉及不同亚细胞结构。单病毒示踪技术主要利用荧光显微镜实时动态成像，监测病毒的侵染路径和动态行为或病毒的组分与宿主细胞相互作用。
迄今为止，最广泛采用的病毒标记材料包括荧光蛋白，化学染料和量子点。然而，荧光蛋白基因整合到病毒基因组中通常会影响病毒的遗传稳定性和感染性。传统荧光分子如异硫氰酸荧光素(FITC)直接标记通常亮度不足且易于光漂白。量子点必须通过共价或非共价反应与病毒缀合，步骤繁琐且标记效率低。
发明内容
本发明为克服现有技术的不足，提供一种快速、实时动态可视化的流感病毒示踪方法
本发明为解决技术问题采用的技术方案是基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，包括如下步骤：
1)利用聚集诱导发光分子，进行流感病毒标记；
2)利用多功能酶标仪对流感病毒标记结果进行检测；
3)利用激光共聚焦成像分析系统为成像仪器，对流感病毒在活细胞内的侵染行为进行监控。
具体技术方案如下：
1.利用聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记方法：
1)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-4～10-6μM；
2)以50～60瓦的功率超声20～30分钟；
3)12,000～13,000转/分钟，离心10分钟，取上清5～10微升；
4)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入5～10微升纯化后的流感病毒和5～10微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
2.聚集诱导发光分子标记的流感病毒感染海拉细胞的方法如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒5～10微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
3)将步骤2)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
4)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察；
本发明的优势：
本发明利用一种简单高效的基于聚集诱导发光分子流感病毒标记策略，建立了一种基于聚集诱导发光分子的长时间的流感病毒示踪技术。聚集诱导发光分子作为荧光标记物有着传统荧光分子不能比拟的优点，可以使更多的聚集诱导发光分子结合到流感病毒上获得高亮度的荧光,而不必担心像传统的荧光分子那样发生聚集导致的荧光猝灭,从根本上克服了聚集导致的荧光淬灭问题。同时标记过程相对简单、对病毒活性影响小，该技术将成为研究流感病毒侵染机制的强有利工具。
附图说明
图1：AIE标记PR8病毒后荧光变化
具体实施方式
下面的实施例中将对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。
实施例1：
一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，具体步骤如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-6μM；
3)以50瓦的功率超声20分钟；
4)12,000转/分钟，离心10分钟，取上清5微升；
5)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入5微升纯化后的流感病毒和5微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
6)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒5微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
7)将步骤6)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
8)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察。
实施例2：
一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，具体步骤如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-5μM；
3)以60瓦的功率超声30分钟；
4)13,000转/分钟，离心10分钟，取上清10微升；
5)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入10微升纯化后的流感病毒和10微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
6)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒10微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
7)将步骤6)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
8)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察。
实施例3：
一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，具体步骤如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-4μM；
3)以55瓦的功率超声26分钟；
4)12500转/分钟，离心10分钟，取上清8微升；
5)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入8微升纯化后的流感病毒和7微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
6)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒8微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
7)将步骤6)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
8)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察。
本发明公开和提出的一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法及其应用，本领域技术人员可通过借鉴本文内容，适当改变条件路线等环节实现，尽管本发明的方法和制备技术已通过较佳实施例子进行了描述，相关技术人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和技术路线进行改动或重新组合，来实现最终的制备技术。特别需要指出的是，所有相类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，他们都被视为包括在本发明精神、范围和内容中。

Claims (2)

1.基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，其特征是包括如下步骤：
1)利用聚集诱导发光分子，进行流感病毒标记；
2)利用多功能酶标仪对流感病毒标记结果进行检测；
3)利用激光共聚焦成像分析系统为成像仪器，对流感病毒在活细胞内的侵染行为进行监控。
2.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，其特征是包括如下步骤：
1)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-4～10-6微摩，以50～60瓦的功率超声20～30分钟，12,000～13,000转/分钟，离心10分钟，取上清；
2)利用聚集诱导发光分子如正四苯基乙烯，与流感病毒充分混匀；
3)利用激光共聚焦成像分析系统为成像仪器，对流感病毒在活细胞内的侵染行为进行监控。
CN201910379305.0A 2019-05-08 2019-05-08 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法 Pending CN110187102A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910379305.0A CN110187102A (zh) 2019-05-08 2019-05-08 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910379305.0A CN110187102A (zh) 2019-05-08 2019-05-08 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110187102A true CN110187102A (zh) 2019-08-30

Family

ID=67715893

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910379305.0A Pending CN110187102A (zh) 2019-05-08 2019-05-08 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110187102A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110859822A (zh) * 2019-11-14 2020-03-06 天津大学 一种纳米制剂的合成方法
CN111474339A (zh) * 2020-04-17 2020-07-31 浙江康佰裕生物科技有限公司 一种利用荧光标记痘病毒颗粒的方法及其应用
CN111719021A (zh) * 2020-06-29 2020-09-29 湖北贝恩特生物科技有限公司 一种基于实验检测用c57小鼠体内病毒研究步骤
CN111896735A (zh) * 2020-07-08 2020-11-06 熊玲红 病毒的检测杀伤方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102445541A (zh) * 2011-09-29 2012-05-09 武汉大学 一种基于量子点的单病毒示踪方法
CN104945537A (zh) * 2015-05-26 2015-09-30 浙江大学 一种水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法
US20160349245A1 (en) * 2015-04-20 2016-12-01 Chunqiu Zhang Aggregation-Induced Emission Luminogen Having An Peptide Sequence And Its Uses Thereof
CN106470964A (zh) * 2014-04-25 2017-03-01 新加坡国立大学 具有聚集诱导发光性质的聚合物和寡聚物在成像和成像引导的治疗中的应用
CN108117612A (zh) * 2017-12-15 2018-06-05 浙江大学 一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102445541A (zh) * 2011-09-29 2012-05-09 武汉大学 一种基于量子点的单病毒示踪方法
CN106470964A (zh) * 2014-04-25 2017-03-01 新加坡国立大学 具有聚集诱导发光性质的聚合物和寡聚物在成像和成像引导的治疗中的应用
US20160349245A1 (en) * 2015-04-20 2016-12-01 Chunqiu Zhang Aggregation-Induced Emission Luminogen Having An Peptide Sequence And Its Uses Thereof
CN104945537A (zh) * 2015-05-26 2015-09-30 浙江大学 一种水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法
CN108117612A (zh) * 2017-12-15 2018-06-05 浙江大学 一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KATO TOMOHISA等: "Development of tetraphenylethylene-based fluorescent oligosaccharide probes for detection of influenza virus", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
单博文等: "红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立", 《中国预防兽医学报》 *
夏晶等: "具有聚集诱导发光特性的四苯基乙烯研究进展", 《影像科学与光化学》 *
李民等: "具有聚集诱导发光特性的四苯基乙烯在细胞成像中的应用及细胞毒性检测", 《华中科技大学学报(医学版)》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110859822A (zh) * 2019-11-14 2020-03-06 天津大学 一种纳米制剂的合成方法
CN110859822B (zh) * 2019-11-14 2021-11-05 天津大学 一种纳米制剂的合成方法
CN111474339A (zh) * 2020-04-17 2020-07-31 浙江康佰裕生物科技有限公司 一种利用荧光标记痘病毒颗粒的方法及其应用
CN111719021A (zh) * 2020-06-29 2020-09-29 湖北贝恩特生物科技有限公司 一种基于实验检测用c57小鼠体内病毒研究步骤
CN111896735A (zh) * 2020-07-08 2020-11-06 熊玲红 病毒的检测杀伤方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110187102A (zh) 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法
Lippé Flow virometry: a powerful tool to functionally characterize viruses
Liu et al. Tracking single viruses infecting their host cells using quantum dots
Soto et al. Fluorescent signal amplification of carbocyanine dyes using engineered viral nanoparticles
Belák § et al. Molecular diagnosis of animal diseases: some experiences over the past decade
Li et al. Development of general methods for detection of virus by engineering fluorescent silver nanoclusters
Sivaraman et al. Detecting RNA viruses in living mammalian cells by fluorescence microscopy
Lv et al. Labeling viral envelope lipids with quantum dots by harnessing the biotinylated lipid-self-inserted cellular membrane
WO2021202440A1 (en) Aptamers against sars-cov-2, compositions comprising aptamers against sars-cov-2 and methods of using the same
Niu et al. Quantitative assessment of the physical virus titer and purity by ultrasensitive flow virometry
Zhang et al. Electron microscopy: essentials for viral structure, morphogenesis and rapid diagnosis
CN111239391B (zh) 一种2019-nCoV新型冠状病毒抗原检测试剂及检测装置
CN102135543A (zh) 实时灵敏生物大分子检测新方法及试剂盒制备
Huang et al. Progress on the labeling and single-particle tracking technologies of viruses
BRPI0809958B1 (pt) conjunto de esferas para a detecção de uma cepa de hpv e/ou para diferenciação entre duas ou mais cepas de hpv, método para a preparação do referido conjunto de esferas, método para o diagnóstico de infecção por hpv, método para determinação do risco de um indivíduo humano desenvolver 5 uma doença associada a uma ou mais cepas de hpv e par de iniciadores para amplificação de oligonucleotídeo direcionado ao hpv oncogênico
CN102230032B (zh) 一种病原体核酸的等温链多重检测卡
CN102445541A (zh) 一种基于量子点的单病毒示踪方法
Yin et al. Detection methods for foodborne viruses: Current state-of-art and future perspectives
CN102391996A (zh) 重组痘苗病毒天坛株及使用其检测痘苗病毒中和抗体的方法
WO2023165231A1 (zh) 弹状病毒阴性草地贪夜蛾昆虫细胞株及其筛选、鉴定和应用
CN101477117B (zh) 检测禽病血清抗体的可视化蛋白芯片及其制备方法和应用
Liu et al. Virus tracking technologies and their applications in viral life cycle: research advances and future perspectives
CN110187103A (zh) 基于聚集诱导发光分子的肠道病毒快速标记及示踪方法
CN110241254A (zh) 基于聚集诱导发光分子的仙台病毒快速标记及示踪方法
CN111239390B (zh) 一种抗原检测试剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190830

RJ01 Rejection of invention patent application after publication