CN110187102A - 基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法。该方法以聚集诱导发光分子作为荧光标记物，通过静电相互作用，实现聚集诱导发光分子对流感病毒的标记。通过激光共聚焦成像分析系统，可以实现对流感病毒侵染宿主细胞的侵染过程的全程示踪。该标记方法简单高效，对病毒活性影响小，能够充分反映病毒在单个细胞内的群体动态侵染行为。结合聚集诱导发光分子优异的光学性质，我们建立了一种多目标的，实时的，长时间的流感病毒的示踪方法，对全局地，高效地研究流感病毒侵染机制提供了强有力的工具。

Description

基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法
技术领域
本发明属于病毒学和生物科学领域,涉及一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法。
背景技术
为了有效地预防和控制病毒性疾病的传播，深刻认识病毒感染宿主等传播过程的机制显得尤为重要。对病毒侵染宿主细胞动态过程及机制的诠释，将为认识病毒致病机制及防治病毒性疾病奠定重要的理论基础。病毒侵染宿主细胞的过程非常复杂,往往包含许多阶段、多种途径并涉及不同亚细胞结构。单病毒示踪技术主要利用荧光显微镜实时动态成像，监测病毒的侵染路径和动态行为或病毒的组分与宿主细胞相互作用。
迄今为止，最广泛采用的病毒标记材料包括荧光蛋白，化学染料和量子点。然而，荧光蛋白基因整合到病毒基因组中通常会影响病毒的遗传稳定性和感染性。传统荧光分子如异硫氰酸荧光素(FITC)直接标记通常亮度不足且易于光漂白。量子点必须通过共价或非共价反应与病毒缀合，步骤繁琐且标记效率低。
发明内容
本发明为克服现有技术的不足，提供一种快速、实时动态可视化的流感病毒示踪方法
本发明为解决技术问题采用的技术方案是基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，包括如下步骤：
1)利用聚集诱导发光分子，进行流感病毒标记；
2)利用多功能酶标仪对流感病毒标记结果进行检测；
3)利用激光共聚焦成像分析系统为成像仪器，对流感病毒在活细胞内的侵染行为进行监控。
具体技术方案如下：
1.利用聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记方法：
1)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-4～10-6μM；
2)以50～60瓦的功率超声20～30分钟；
3)12,000～13,000转/分钟，离心10分钟，取上清5～10微升；
4)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入5～10微升纯化后的流感病毒和5～10微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
2.聚集诱导发光分子标记的流感病毒感染海拉细胞的方法如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒5～10微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
3)将步骤2)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
4)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察；
本发明的优势：
本发明利用一种简单高效的基于聚集诱导发光分子流感病毒标记策略，建立了一种基于聚集诱导发光分子的长时间的流感病毒示踪技术。聚集诱导发光分子作为荧光标记物有着传统荧光分子不能比拟的优点，可以使更多的聚集诱导发光分子结合到流感病毒上获得高亮度的荧光,而不必担心像传统的荧光分子那样发生聚集导致的荧光猝灭,从根本上克服了聚集导致的荧光淬灭问题。同时标记过程相对简单、对病毒活性影响小，该技术将成为研究流感病毒侵染机制的强有利工具。
附图说明
图1：AIE标记PR8病毒后荧光变化
具体实施方式
下面的实施例中将对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。
实施例1：
一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，具体步骤如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-6μM；
3)以50瓦的功率超声20分钟；
4)12,000转/分钟，离心10分钟，取上清5微升；
5)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入5微升纯化后的流感病毒和5微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
6)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒5微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
7)将步骤6)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
8)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察。
实施例2：
一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，具体步骤如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-5μM；
3)以60瓦的功率超声30分钟；
4)13,000转/分钟，离心10分钟，取上清10微升；
5)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入10微升纯化后的流感病毒和10微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
6)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒10微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
7)将步骤6)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
8)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察。
实施例3：
一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，具体步骤如下：
1)将状态良好的海拉细胞接种到15毫米玻底培养皿中，待细胞密度50％；
2)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-4μM；
3)以55瓦的功率超声26分钟；
4)12500转/分钟，离心10分钟，取上清8微升；
5)取一无菌的0.2毫升的离心管，加入8微升纯化后的流感病毒和7微升正四苯基乙烯上清并充分混匀，使正四苯基乙烯吸附在流感病毒表面。
6)取一无菌的1.5毫升离心管，加入聚集诱导发光分子标记的流感病毒8微升用无血清培养基DMEM稀释至1毫升；
7)将步骤6)的溶液全部加入至15毫米玻底培养皿的海拉细胞中；
8)放在60X的激光共聚焦显微镜下进行观察。
本发明公开和提出的一种基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法及其应用，本领域技术人员可通过借鉴本文内容，适当改变条件路线等环节实现，尽管本发明的方法和制备技术已通过较佳实施例子进行了描述，相关技术人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和技术路线进行改动或重新组合，来实现最终的制备技术。特别需要指出的是，所有相类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，他们都被视为包括在本发明精神、范围和内容中。

Claims (2)

1.基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，其特征是包括如下步骤：
1)利用聚集诱导发光分子，进行流感病毒标记；
2)利用多功能酶标仪对流感病毒标记结果进行检测；
3)利用激光共聚焦成像分析系统为成像仪器，对流感病毒在活细胞内的侵染行为进行监控。
2.根据权利要求1所述的基于聚集诱导发光分子的流感病毒快速标记及示踪方法，其特征是包括如下步骤：
1)取具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子正四苯基乙烯(TPE)10-4～10-6微摩，以50～60瓦的功率超声20～30分钟，12,000～13,000转/分钟，离心10分钟，取上清；
2)利用聚集诱导发光分子如正四苯基乙烯，与流感病毒充分混匀；
3)利用激光共聚焦成像分析系统为成像仪器，对流感病毒在活细胞内的侵染行为进行监控。
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