CN110183519A

CN110183519A - 一种达巴万星关键中间体a40926的分离纯化方法

Info

Publication number: CN110183519A
Application number: CN201910373147.8A
Authority: CN
Inventors: 郭霞凌; 李辉
Original assignee: ARGUS PHARMACEUTICALS Ltd
Current assignee: ARGUS PHARMACEUTICALS Ltd
Priority date: 2019-05-06
Filing date: 2019-05-06
Publication date: 2019-08-30
Anticipated expiration: 2039-05-06
Also published as: CN110183519B

Abstract

本发明提供一种达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，包括：加碱调节发酵液pH，升温至一定范围内进行去乙酰化处理；然后利用陶瓷膜进行错流洗滤并收集滤液；调节所得滤液pH后加助沉剂静置沉淀，收集下层A40926沉淀浓缩液；调节沉淀浓缩液pH，过滤并导入大孔吸附树脂吸附；将所得大孔吸附树脂预洗后用解析液进行解析，得A40926复合物解析混合液；调节所得大孔树脂解析混合液酒精度，导入小粒径树脂进行吸附；将所得小粒径树脂预洗，用解析液进行解析，得解析液；将所得解析液进行减压浓缩，调节pH，离心过滤收集A40926沉淀；加碱水溶解所得A40926沉淀，溶析结晶后进行干燥处理得A40926干粉。本发明能有效去除产品中的有关杂质和色素，提升了终产品的质量。

Description

一种达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法

技术领域

本发明属于医药化学领域，特别涉及一种达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法。

背景技术

达巴万星(又称道古霉素)是一种具有抗多重耐药菌的新型长效糖肽类抗生素，用于治疗金黄色葡萄球菌(包括甲氧西林敏感和甲氧西林耐药菌株)、无乳链球菌、停乳链球菌、化脓性链球菌、咽峡炎链球菌群和粪肠球菌(仅万古霉素敏感株)等革兰氏阳性菌敏感株导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(ABSSSI)。达巴万星是目前唯一获批用于ABSSSI治疗的双剂量治疗方案静脉注射抗生素，具有抗菌活性高、对耐药菌有效、半衰期长、无剂量限制性副反应等优点，是理想的第二代糖肽抗生素，具有广阔的市场前景。

达巴万星为替考拉宁类似物A40926的半合成衍生物，药用达巴万星是由A₀、A₁、B₀、B₁和B₂五种结构相近的同系物所组成的多组分混合物，其中主要成分B₀含量要求应不低于75％，五种组分都是以A40926为前体合成。A40926作为合成达巴万星的关键前体，由野野村放线菌属ATCC39727菌株发酵产生，该产生菌主要产生A(A₀，A₁)、B(B₀，B₁，B₂)两组有效产物，同时还少量产生一组RS(RS₁，RS₂，RS₃)无效产物，其中B组分中B₀占比90％左右。A、B、RS三组产物在发酵液中以其分子中甘露糖的C-6乙酸酯形式存在，发酵产物纯化过程中在碱性条件下可脱去乙酰基转化为A、B、RS组分，它们的结构式如下。

从A40926出发，通过酯化、酰胺化、水解三步反应在其七肽骨架的C-末端加上1个N，N-二甲基丙胺即可制得达巴万星，因此制备高质量的A40926是合成达巴万星的关键所在。A40926分子结构十分复杂，很难通过化学方法合成，目前只能依赖生物发酵方法制备。但野野村放线菌属ATCC39727菌株发酵液中A40926含量较低，对酸、碱、热稳定性差，且相关杂质与其结构相近，导致A40926分离纯化工作十分困难，如何从发酵液中分离得到高质量的A40926一直是人们研究的重点课题。

美国专利US5843679、US4935238中公开了一种A40926的分离纯化方法；其方法虽然可以得到纯度较高的A40926，但发酵液添加助滤剂过滤操作困难且劳动强度大，亲和色谱载体制备成本很高且使用寿命短，逆向柱层析收率偏低，不适合大规模工业化应用。

中国专利CN200910058576.2中公开了一种达巴万星关键中间体A40926-B₀组分的纯化制备方法，该专利未报道如何从发酵液中分离A40926-B₀组分粗品的方法。

美国专利US20040142883中公开了三种适用于规模制备A40926的分离纯化方法，三种方法分别利用SC6聚酰胺树脂、XAD-7HP大孔树脂和CG-71大孔树脂分离A40926。这些方法的缺点为澄清滤液中有机杂质含量高，未经初步提纯直接上柱导致树脂对目标产物A40926的吸附量降低，解析过程中产物层与杂质层分离不清，高峰液不集中。

因此上述三种专利中有的采用强碱性溶液解析，容易造成A40926降解，有的采用丙酮溶液作为洗脱剂，对操作人员的身体健康造成潜在威胁。采用丙酮/异丙醇混合溶剂结晶，结晶母液溶剂回收套用困难，容易造成环境污染。此外使用活性炭吸附除去有色杂质不是很彻底。因此进一步优化A40926分离纯化工艺、降低生产成本、减少溶剂使用、提高产品质量还有待继续深入研究。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，所述方法包括：

步骤一：调节发酵液pH，升温并保持在一定范围内进行搅拌，降温至室温后用陶瓷膜进行错流洗滤，收集深棕黄色澄清滤液；

步骤二：调节步骤一所得澄清滤液pH，加入助沉剂后静置沉淀，收集下层沉淀后的A40926浓缩液；

步骤三：调节步骤二所得浓缩液pH，过滤去除助沉剂后导入大孔吸附树脂进行吸附富集；

步骤四：将步骤三所得吸附树脂预洗，然后用解析液进行解析并收集组分，得A40926复合物解析混合液；

步骤五：调节步骤四所得解析混合液的酒精度至一定范围内，导入单分散小粒径交联聚苯乙烯微球树脂进行吸附；

步骤六：将步骤五所得微球树脂预洗，然后用解析液进行解析并收集组分，得A40926解析液；

步骤七：将步骤六所得解析液进行减压浓缩，调节pH，离心过滤收集A40926沉淀；

步骤八：加碱水溶解步骤七所得A40926沉淀，调节pH，加热溶解，滴加丙酮与异丙醇混合液，冷却析晶、过滤、丙酮洗涤、烘干，得A40926干粉。

进一步地，所述步骤一中调节发酵液pH包括质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液调整pH到11～12，所述升温并维持在50～55℃，所述搅拌时间为2～3h。

进一步地，所述步骤二中调节步骤一所得澄清滤液pH包括使用质量分数为5～10％的盐酸溶液调节pH至2.5～4.0。

进一步地，所述步骤二中助沉剂包括硅藻土、珍珠岩中的一种，且所述助沉剂添加量为澄清滤液中A40926量的1.5～2.5倍。

进一步地，所述步骤三中调节步骤二所得浓缩液pH包括使用质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液调节pH至7.0～7.5。

进一步地，所述步骤三中过滤包括离心或减压抽滤中的一种，大孔吸附树脂为XR910S树脂。

进一步地，所述步骤四中预洗包括使用pH为7.0～8.0的纯化水冲洗树脂柱，且所述纯化水用量为3～10个柱体积。

进一步地，所述步骤四中解析液包括酒精度为25～50°的乙醇水溶液，所述解析包括，

用酒精度为30°的含盐乙醇溶液冲洗4～6柱体积；

用25°的无盐乙醇溶液冲洗4～6柱体积；

用酒精度为50～55°的乙醇水溶液冲洗3～6柱体积。

进一步地，所述步骤五中调节步骤四所得解析混合液的酒精度至一定范围内包括加纯化水稀释解析液至酒精度为20～25°，所述单分散小粒径交联聚苯乙烯微球树脂为XR-3SP小粒径树脂。

进一步地，所述步骤六中微球树脂预洗是采用pH为7.0～8.0的纯化水冲洗树脂柱，所述纯化水用量为3～5个柱体积。

进一步地，所述步骤六中解析液为体积分数为50～80％的甲醇溶液；所述解析包括，

用体积分数为50％的甲醇溶液冲洗8～10柱体积，

用体积分数为80％的甲醇溶液冲洗4～6柱体积。

进一步地，所述步骤七中调节pH包括使用质量分数为5～10％的盐酸溶液调整pH至2.5～4.0，所述减压浓缩包括真空减压浓缩。

进一步地，所述步骤八中调节pH包括使用体积分数为3～6％的氨水调节pH至7.0～7.2，碱水包括使用体积分数为3～6％的氨水；所述加热的温度为60～65℃。

进一步地，所述步骤八中丙酮与异丙醇比例为1:4～6，丙酮与异丙醇溶剂滴加体积为溶液体积的2～3倍；所述冷却析晶是在室温下逐渐降温至20℃后维持2h，所述过滤采用离心、压滤或抽滤中的一种。

本发明提供的分离纯化方法去除了产品中的色素，提升了最终产品的质量，适宜于大规模工业化制备A40926，为达巴万星的批量生产奠定了基础。

本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1示出了根据本发明的整体操作流程示意图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，示例性的，如图1所示，所述方法包括：

步骤一：调节发酵液pH，升温并保持在一定温度下进行搅拌，降温至室温后用陶瓷膜进行错流洗滤，收集深棕黄色澄清滤液；

具体的，取发酵液，将发酵液pH调节至11～12，pH调节剂优选使用质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液，但不限于此；升温并维持在50～55℃，在此条件下持续搅拌2～3小时；而后降温到室温，利用陶瓷膜进行错流洗滤(即错流洗滤原液在滤管孔道中做高速循环运动，而滤液流出方向与料液循环方向垂直，滤液在膜表面形成强烈的湍流效果，由于流体具有的较大剪切力，可以及时冲走沉积的悬浮物颗粒使其重新回到循环料液中，避免了陶瓷膜管孔道的堵塞)；其中的陶瓷膜洗滤精度优选为50nm，在实验时当发酵液浓缩倍数达到1～2倍时，加入自来水进行连续洗滤，维持洗液的流加速率与滤液的透出速率一致，直至滤液中A40926含量低于50～100ug/ml时，停止陶瓷膜过滤。连续洗滤加水量为发酵液体积的3～4倍，收集澄清滤液体积为发酵液体积的4～5倍。

具体的，利用pH调节剂调节步骤一所得陶瓷膜澄清滤液pH至2.5～4.0，其中pH调节剂优选为体积分数为5～10％的盐酸溶液，加入助沉剂后静置沉淀2～4小时，弃上层棕黄色清液，收集下层沉淀后得A40926浓缩液；其中助沉剂选用硅藻土或珍珠岩中的一种，但不限于此，助沉剂添加量为滤液中A40926量的1.5～2.5倍。

弃去上层清液后的沉淀液浓缩倍数为澄清滤液的20～30倍，收集下层沉淀后得的A40926浓缩液，已经过初步提纯，大部分水溶性蛋白和碱性有机杂质得到去除。

需要说明的是，A40926分子结构中具有亲水性七肽骨架与疏水性脂肪酰侧链，在水溶液中容易以二聚体或更高阶的多聚体形式存在，通过调节酸碱度、添加沉淀促进剂等改变多聚体的稳定性可使A40926凝聚沉淀。滤液中含有的发酵培养基中最初添加的电解质无机盐作为沉淀促进剂足以使A40926析出，无须额外添加电解质或絮凝剂等沉淀促进剂。

具体的，利用调节剂调节步骤二所得浓缩液pH至7.0～7.5，其pH调节剂优选为质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液，所述过滤方法为离心或减压抽滤中的一种，所述大孔吸附树脂优选为XR910S树脂，XR910S树脂吸附量为10～30g/L，优选的，XR910S树脂，其吸附量为15～20g/L。

具体的，所述吸附树脂预洗是采用pH为7.0～8.0的纯化水冲洗树脂柱以洗去部分色素和大极性杂素，纯化水用量为3～10个柱体积，优选用量为6～8个柱体积。所述解析液为酒精度为25～50°的乙醇水溶液，在纯化水洗后先用酒精度为30°的含盐乙醇溶液冲洗4～6柱体积，再用酒精度为25°的无盐乙醇溶液冲洗4～6柱体积，以洗脱大部分色素和大极性杂质，其中，酒精度为30°的含盐乙醇溶液中所述盐为1～2％的氯化钠。酒精度为25～30°的低度乙醇洗后再用酒精度为50～55°的乙醇水溶液冲洗3～6柱体积以集中洗脱目的产物A40926，洗脱液A40926浓度高，杂质和色素含量较少，解析收率90％以上。

步骤五：调节步骤四所得解析混合液的酒精度至一定范围内，导入单分散小粒径交联聚苯乙烯微球树脂树脂进行吸附；

具体的，调节步骤四所得解析混合液的酒精度至一定范围内是加纯化水稀释酒精度为50～55°解析液至酒精度为20～25°，所述单分散小粒径交联聚苯乙烯微球树脂优选XR-3SP小粒径树脂，XR-3SP小粒径树脂吸附量为20～40g/L，优选的XR-3SP小粒径树脂吸附量为25～35g/L。

步骤六：将步骤五所得微球树脂小粒径树脂预洗，然后用解析液进行解析并收集组分，得A40926解析液；

具体的，将步骤五所得微球树脂小粒径树脂预洗是采用pH为7.0～8.0的纯化水冲洗树脂柱，纯化水用量为3～5个柱体积。用解析液进行解析时，所述的解析液为体积分数为50～80％的甲醇溶液；即纯化水洗后先用体积分数为50％的甲醇溶液冲洗8～10柱体积，以洗脱A40926复合物中比极性B组分大的A组分杂质，50％的甲醇洗后再用体积分数为80％的甲醇溶液冲洗4～6柱体积以集中洗脱目的产物A40926-B₀，洗脱液A40926-B₀浓度高，杂质和色素含量较少，解析收率85％以上。

具体的，调节pH包括使用pH调节剂进行调节，pH调节剂优选为5～10％的盐酸溶液，调整pH至2.5～4.0，所述的减压浓缩优选为真空减压浓缩以去除甲醇解析液中的甲醇，调节pH后的酸性沉液经过滤式离心机离心过滤后得A40926沉淀。

具体的，所述加碱水溶解A40926沉淀并调节pH至7.0～7.2，碱水和pH调节剂均优选为体积分数为3～6％的氨水；所述加热的温度为60～65℃，温度优选为65℃，溶解后产物浓度为100～200g/L。结晶混合溶剂丙酮与异丙醇比例为1:4～6，优选为1:5，混合溶剂滴加体积为溶液体积的2～3倍。冷却析晶在室温下逐渐降温至20℃左右后维持2小时左右即可。过滤采用离心、压滤或抽滤，过滤后丙酮洗涤沉淀1～2次，干燥选择40℃真空干燥15～20小时。

示例性的，选取一定量的野野村放线菌发酵液进行试验，采用高效液相色谱法检测A40926含量，色谱条件：UnitrayC18柱，20mM甲酸铵缓冲液/乙腈＝70/30(v/v)为流动相，柱温35℃，流速1.0ml/min，紫外检测波长254nm，进样量20ul。

案列情形1

将8m³的A40926含量为1490ug/ml的发酵液野野村放线菌A40926菌株发酵液，用质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液调节pH至12.0左右，加热至50～60℃保温，持续搅拌2～3小时进行去乙酰化水解，2小时后采用HPLC监测发酵液中的A40926及其乙酸酯的含量变化，使去乙酰化反应完全，然后将温度降至室温。

将去乙酰化处理后的碱化液泵入陶瓷膜系统，陶瓷膜精度50nm，进膜压力0.35～0.4Mpa，出膜压力0.15-0.2Mpa，洗滤温度30～45℃。在陶瓷膜过滤过程中，当碱化液浓缩1倍左右时，以一定的速率加入自来水进行连续洗滤，维持洗液的流加速率与滤液的透出速率一致。洗滤过程中采用HPLC检测滤出液中A40926含量，直至滤液中A40926含量低于85ug/ml时，停止陶瓷膜洗滤，连续洗滤加水量为28m³。收集澄清滤液体积的31.5m³，A40926含量356ug/ml，所得滤液透明澄清，颜色呈深棕黄色。计算滤液中含A40926的量为11.21kg，收率为94.0％，陶瓷膜洗滤回收率高，损失小。

案列情形2

将实施例1所得含有澄清滤液用10％的稀盐酸溶液调节pH至3.1，加入20kg硅藻土，搅拌均匀后静置3小时。取上层橙黄色清液调节pH至7～8后用HPLC检测其中A40926含量，无A40926检出，目的产物A40926全部凝聚沉淀，效果良好。取上层清液后得下层沉淀浓缩液1.65m³，加质量分数为20％的氢氧化钠溶液调节沉淀浓缩液pH至7.2，再经过滤式离心机离心过滤后收集浓缩滤液1.60m³，浓缩滤液中A40926含量为6.675g/L，颜色澄清呈深棕黄色。计算浓缩滤液中含A40926的量为10.68kg，收率为95.3％。

案列情形3

取600L弱极性苯乙烯系大孔吸附树脂XR910S装柱，依次以4％氢氧化钠溶液、去离子水、4％盐酸溶液处理并水洗至中性。将案列情形2中所得1.05m³浓缩滤液按1.0BV/h的流速导入吸附柱吸附，吸附温度为常温，吸附余液中无A40926检出，吸附率100％，树脂对A40926的载样量为17.8g/L。

上柱后用去离子水洗去未被吸附的残留液以及吸附力较弱的杂质和色素，以1.0BV/h的速度进行洗脱。水洗后先用酒精度为30°的含2％氯化钠的乙醇水溶液冲洗7倍柱体积，洗涤速度1.0BV/h。HPLC检测洗涤液中A40926及相关杂质和色素洗出情况，洗涤液中无A40926检出，有保留时间在2～5min范围内的亲水性杂质和色素检出，洗涤液颜色随洗涤体积的增加由深逐渐转浅，其中可检出的杂质和色素含量逐渐下降。30°含盐酒精洗涤体积6BV后，采用同样的流速，改用25°无盐酒精继续洗涤6BV，洗涤液中亲水性杂质和色素含量又逐渐上升再缓慢下降，至此保留时间在2～5min范围内的亲水性杂质和色素基本洗脱完全。

最后用2倍树脂量的酒精度为50°的乙醇水溶液，以1BV/h的流速解析A40926组分，解析液中A40926浓度高，杂质和色素含量较少。HPLC检测结果计算1150L解析液中A40926含量为8.57g/L，计算大孔树脂解析收率为92.3％，A40926的量为9821g。

案列情形4

取250LXR3SP小粒径树脂装柱，依次以4％氢氧化钠溶液、去离子水、4％盐酸溶液处理并水洗至中性。加去离子水将案列情形3中所得1.15m³含A40926的50°酒精解析液的酒精度稀释至25°左右，稀释液按1.0BV/h的流速导入微球树脂小粒径树脂吸附，吸附温度为常温，吸附余液中有少量A40926检出，吸附率98％以上，树脂对A40926的载样量为39.5g/L。上柱后用去离子水洗冲洗微球树脂，去离子水用量为4个柱体积。去离子水洗后用体积分数为50％的甲醇溶液冲洗10个柱体积，以洗脱A40926复合物中比极性B组分大的A组分杂质，洗涤速度1.0BV/h，洗涤液中有少量产物洗出。50％的甲醇洗后改用体积分数为80％的甲醇溶液冲洗6柱体积以集中洗脱目的产物A40926-B₀，80％的甲醇溶液中添加质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液调节pH至9.0～10.0，促进产物解析。解析液体积约1500L，其中A40926含量为5.63g/L，计算微球树脂小粒径树脂解析收率为85.9％，其中A组分杂质含量明显降低，A40926的量为8445g。

案列情形5

将案列情形4中所得的甲醇解析液导入真空减压浓缩罐中进行减压浓缩，浓缩后体积约320L，颜色呈棕黄色，浓缩液中A40926含量26.5g/L。用10％的稀盐酸溶液调节浓缩液pH至3.0后使产物凝聚沉淀，采用过滤式离心机离心过滤，压紧并收集沉淀，弃滤液，滤液中无产物检出。向盛有沉淀的容器中在搅拌下逐步滴加5％的氨水至7.0左右，然后置于60℃下水浴加热形成热饱和溶液，然后在低速搅拌下逐步滴加不良溶剂丙酮与异丙醇溶液，使产物逐步析出。不良溶剂用量为热饱和溶液体积的3倍左右，逐渐冷却至室温后继续维持2h，产物完全析出并下沉。减压过滤后收集沉淀，添加适量丙酮重复洗涤2次，最后置于40℃真空干燥箱干燥处理20h，得到A40926粉末6953g。计算甲醇解析液经减压浓缩、酸沉离心、氨水溶解、溶析结晶和真空干燥多步处理后，收率为82％。

综上可以得出，本发明的发酵液经去乙酰化、陶瓷膜过滤、酸沉浓缩、大孔树脂脱色与粗提、小粒径树脂纯化与溶析结晶后，得到的A40926收率在70％以上，主要组分B₀色谱纯度在80％以上，完全可以满足后续达巴万星的制备需求。同时该方法工艺简单，操作方便，成本低廉，产品收率高，产品纯度高，且选用溶剂毒性小、用量少、易回收利用、对环境热污染小。另外本发明提供的技术方案很大程度上去除了产品中的色素，提升了最终产品的质量，适宜于大规模工业化制备A40926，为达巴万星的批量生产奠定了基础。

尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims

1.一种达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述方法包括：

步骤一：调节发酵液pH，升温并保持在一定温度范围内进行搅拌，降温至室温后用陶瓷膜进行错流洗滤，收集深棕黄色澄清滤液；

步骤三：调节步骤二所得浓缩液pH，过滤去除助沉剂，而后导入大孔吸附树脂进行吸附富集；

步骤六：将步骤五所得小粒径树脂预洗，然后用解析液进行解析并收集组分，得A40926解析液；

2.根据权利要求1所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤一中调节发酵液pH包括使用质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液调整pH到11～12，所述升温并维持在50～55℃，所述搅拌时间为2～3小时。

3.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤二中调节步骤一所得澄清滤液pH包括使用质量分数为5～10％的盐酸溶液调节pH至2.5～4.0。

4.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤二中助沉剂包括硅藻土、珍珠岩中的一种，且所述助沉剂添加量为澄清滤液中A40926量的1.5～2.5倍。

5.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤三中调节步骤二所得浓缩液pH包括使用质量分数为10～20％的氢氧化钠溶液调节pH至7.0～7.5。

6.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤三中过滤包括离心或减压抽滤中的一种，大孔吸附树脂为XR910S大孔吸附树脂。

7.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤四中预洗包括使用pH为7.0～8.0的纯化水冲洗树脂柱，且所述纯化水用量为3～10个柱体积。

8.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤四中解析液包括酒精度为25～50°的乙醇水溶液，所述解析包括，

用酒精度为30°的含盐乙醇溶液冲洗4～6柱体积；

用酒精度为25°的无盐乙醇溶液冲洗4～6柱体积；

用酒精度为50～55°的乙醇水溶液冲洗3～6柱体积。

9.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤五中调节步骤四所得解析混合液的酒精度至一定范围内包括加纯化水稀释解析液至酒精度为20～25°，所述单分散小粒径交联聚苯乙烯微球树脂为XR-3SP小粒径树脂。

10.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤六中微球柱预洗是采用pH为7.0～8.0的纯化水冲洗树脂柱，所述纯化水用量为3～5个柱体积。

11.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤六中解析液为体积分数为50～80％的甲醇溶液；所述解析包括，

用体积分数为50％的甲醇溶液冲洗8～10柱体积，

用体积分数为80％的甲醇溶液冲洗4～6柱体积。

12.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤七中调节pH包括使用质量分数为5～10％的盐酸溶液调整pH至2.5～4.0，所述减压浓缩包括真空减压浓缩。

13.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤八中调节pH包括使用体积分数为3～6％的氨水调节pH至7.0～7.2，碱水包括使用体积分数为3～6％的氨水；所述加热的温度为60～65℃。

14.根据权利要求1或2所述达巴万星关键中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤八中丙酮与异丙醇比例为1:4～6，丙酮与异丙醇溶剂滴加体积为溶液体积的2～3倍；所述冷却析晶是在室温下逐渐降温至20℃后维持2小时，所述过滤采用离心、压滤或抽滤中的一种。