CN110183372A - 靛红类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

靛红类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110183372A
CN110183372A CN201910538541.2A CN201910538541A CN110183372A CN 110183372 A CN110183372 A CN 110183372A CN 201910538541 A CN201910538541 A CN 201910538541A CN 110183372 A CN110183372 A CN 110183372A
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
compound
diketone
methyl
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910538541.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110183372B (zh
Inventor
李荀
于海鹏
郑永唐
黄旭升
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN201910538541.2A priority Critical patent/CN110183372B/zh
Publication of CN110183372A publication Critical patent/CN110183372A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110183372B publication Critical patent/CN110183372B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/32—Oxygen atoms
    • C07D209/38—Oxygen atoms in positions 2 and 3, e.g. isatin

Abstract

本发明提供一种靛红类化合物及制备方法和应用，其具有式(I)所示结构：本发明的化合物具备良好的BRD4蛋白抑制活性，在抗肿瘤及抗病毒方面具有巨大的应用潜力，可应用于制备BRD4抑制剂类药物；同时本发明的化合物具有良好的HIV潜伏病毒激活能力，与已知的HIV潜伏激活剂JQ1相比，其体外细胞毒性大大降低，用药更安全，具有良好耐受性。

Description

靛红类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及靛红类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
BRD4即溴结构域蛋白4，属于BET溴结构域家族成员。BET家族包含四种蛋白，即BRD2、BRD3、BRD4和BRDT。每个成员均含有两个高度保守的溴结构域，例如BRD4(BD1),BRD4(BD2)。BRD4作用于细胞周期蛋白激酶9和细胞周期蛋白T1所组成的正性转录延伸因子核心部分，参与HIV、EBV、HPV等病毒的转录调控。近年来，以BRD4为靶标开发的各类抑制剂在抗肿瘤、抗感染、抗病毒等方面的潜在应用价值已获得了广泛关注，成为表观遗传领域内的重要靶标之一。
人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，即艾滋病病毒，是一种能够引起人类免疫系统功能缺陷的逆转录病毒。进入人体后主要攻击T淋巴细胞，阻断细胞免疫和体液免疫，造成免疫系统崩溃，引起各种疾病的扩散，最终导致艾滋病(AIDS)，对人类健康、社会稳定造成了巨大威胁。由于缺乏预防HIV感染的有效疫苗，高效抗逆转录病毒疗法(HAART)是目前临床上最行之有效的HIV/AIDS治疗手段，通过三个或更多的抗HIV药物联用，可最大限度地抑制HIV复制，但不能彻底根除病毒，在停止HAART治疗后病毒会迅速反弹，这主要是由于一部分HIV病毒能够潜伏在静息记忆CD4+细胞中形成潜伏病毒库。
HIV潜伏病毒库的存在是阻碍艾滋病治愈的根本原因。减小和消除HIV潜伏病毒库的关键在于从源头上阻断新的HIV潜伏病毒库形成，以及现在国际上公认的“激活再杀灭(shock and kill)策略”。即先通过潜伏病毒激活剂刺激并激活已经存在的HIV潜伏病毒使其复活，再配以抗艾滋病病毒药物治疗，达到治愈艾滋病的目的。近年来，在体外已经构建起U1、Ach2、J-Lat T等多种HIV潜伏细胞系(这些细胞含HIV整合病毒DNA，但不释放游离病毒)，也从经HAART治疗后的病人中分离出原代静息性CD4+T细胞。通过这些细胞筛选发现了大量HIV潜伏病毒激活剂，其中BRD4抑制剂是研究的热点。
BRD4是一种致癌基因，能够抑制P-TEFb的两个蛋白复合体CDK9和CycT1与Tat蛋白共同作用，激活HIV的转录过程，从而激活了潜伏病毒的复制。JQ1是最早发现具有HIV潜伏病毒激活活性的BRD4抑制剂，其结构为：JQ1通过抑制T细胞的复制、下调T细胞激活的基因、上调染色质的修饰基因及赖氨酸脱甲基酶来增加TAT蛋白的活性，从而诱导HIV病毒的转录。但是发明人发现，JQ1的化学结构与苯二氮卓类镇静催眠药相似，且存在较大的神经毒性，水溶性差、高细胞毒性等副作用，限制了其成药的可能性。
发明内容
发明人调研发现JQ1与BRD4的共结晶复合物(如图1所示)，其活性结合区域由三部分(KAC、ZA、WPF)组成，JQ1能很好地伸入三个区域产生疏水性相互作用。基于此，本发明基于靶标结构特点设计了一种靛红类化合物，并提供了制备方法和应用。本发明的化合物具有BRD4蛋白抑制活性，能够作为HIV潜伏病毒激活剂。
具体地，本发明具有如下技术方案：
在本发明的第一方面，本发明提供了一种靛红类化合物及其药学上可接受的盐，所述化合物或具有式(I)所示结构：
式(I)化合物化学分子式为C23H18F2N2O5S，中文名称为N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)乙磺酰胺，英文名称为N-(4-(2,4-difluorophenoxy)-3-(1-methyl-2,3-dioxoindolin-6-yl)phenyl)ethanes ulfonamide，分子量为472.09。
本发明所述的“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
本发明所述的“盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述药学上可接受的盐可以是化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、草酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐和柠檬酸盐。
在本发明的第二方面，本发明提供了式(I)化合物的制备方法，其包括：6-溴靛红和硫酸二甲酯反应制备6-溴-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后与2-氟-5硝基苯硼酸反应制备6-(2-氟-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后与2,4-二氟苯酚反应制备6-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后还原制备6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后与乙烷磺酰卤反应制备式(I)化合物。
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法中，6-溴靛红和硫酸二甲酯的反应以N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂，在室温下进行；反应中需要加入碱；在一些实施方式中，所述碱为碳酸钾。
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法中，6-溴-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮与2-氟-5硝基苯硼酸的反应以1,4-二氧六环和水为溶剂；以四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4)为催化剂；反应中需要加入碱；在一些实施方式中，所述碱为碳酸钠；以及，在一些实施方式中，所述反应温度为95℃。
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法中，6-(2-氟-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮与2,4-二氟苯酚的反应以碳酸铯为催化剂；以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂，反应温度为100℃。
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法中，6-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮进行催化氢化反应，制备6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮。
在本发明的实施方式中，所述催化氢化反应以甲醇为溶剂，以钯碳为催化剂，在氢气环境下室温反应。
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法中，6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮与乙烷磺酰卤(比如乙烷磺酰氯)的反应以二氯甲烷(DCM)为溶剂，加入吡啶，在氮气环境下室温反应。
在本发明的某些实施方式中，所述制备方法包括以下步骤：
步骤1：将6-溴靛红和硫酸二甲酯置于圆底烧瓶中,以DMF为溶剂，加入碳酸钾,在室温环境下反应4小时,制得中间体1；所述的6-溴靛红、硫酸二甲酯、碳酸钾的摩尔比为1：1.25：2，所述的DMF溶剂量为每1mmol 6-溴靛红，溶剂量为2毫升。
步骤2：将2-氟-5硝基苯硼酸与步骤1制得的中间体1置于圆底烧瓶中,以1，4-二氧六环和水为溶剂，加入催化剂四(三苯基膦)钯和碳酸钠，在氮气保护，95℃条件下反应16小时，制得中间体2，中间体1、2-氟-5硝基苯硼酸、四(三苯基膦)钯、碳酸钠的摩尔比为1：1.5：0.1：3，所述的溶剂量为每1mmol 6-溴-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮、1，4-二氧六环为10毫升水为2毫升。
步骤3：将2,4-二氟苯酚、碳酸铯及步骤2制得的中间体2置于圆底烧瓶中，再加入DMSO，在100℃的环境下反应2小时，制得中间体3；所述中间体2,2,4-二氟苯酚，碳酸铯的摩尔比为1:1.1:1.1，所述的DMSO溶剂量为每1mmol中间体2，溶剂量为5毫升。
步骤4：将步骤3制得的中间体3置于圆底烧瓶中,以甲醇为溶剂，加入催化剂钯碳,在氢气环境下室温反应12小时。制得中间体4；所述钯碳质量为中间体3的十分之一，所述甲醇溶剂量每1mmol中间体3，溶剂量为10毫升。
步骤5：将步骤4制得中间体4置于圆底烧瓶中,以DCM为溶剂，加入吡啶，各种取代的磺酰氯(比如乙烷磺酰氯)，在氮气环境下室温反应24小时。制得新型的靛红类化合物，中间体4、各种取代的磺酰氯(比如乙烷磺酰氯)和吡啶的摩尔比为1：1.1：3，所述DCM溶剂量为每1mmol中间体4，溶剂量为10毫升。
本发明所述的步骤1、2、3、4、5的反应均可采用常规方法进行，该制备方法具有原材料来源广泛、成本低、方法操作简单、条件温和等优点。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种组合物或药物制剂，其包含本发明上述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的辅料或载体。
本发明所述组合物指包括治疗有效量的规定成分的药物产品，以及直接或间接地由规定量的规定成分的组合产生的任何产品。
本发明所述的组合物尤其指药物组合物，其通常是安全、无毒且为生物学上所需要的，因此，本发明中所述药学上可接受的载体或辅料是无毒且安全的，而且其与本发明所述化合物的组合也是无毒且安全的。本发明所述的药学上可接受的载体和辅料通常为本领域人员所熟知的，或者可由本领域技术人员根据实际情况能够确定的。合适的载体和辅料的实例包括葡萄糖、水、甘油、乙醇、丙二醇、玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、海藻酸、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠、交联羧甲基纤维素钠和淀粉羟乙酸钠等等聚山梨酯80、聚乙二醇300、聚乙二醇400、环糊精或其衍生物，比如((2-羟基丙基)-环糊精)和(2-羟基乙基)-环糊精，其又称为HPCD、聚乙二醇化蓖麻油、泊洛沙姆(比如泊洛沙姆407或188)；亲水载体、疏水载体，或其组合等。疏水载体包括，例如脂肪乳剂、脂质、聚乙二醇化磷脂、生物相容的聚合物、脂质球、脂质体、小囊泡、聚合物基质、颗粒等等。
载体在药物组合物中的含量可以是1wt％-98wt％，通常大约占到80wt％。为方便起见，局部麻醉剂，防腐剂，缓冲剂等可直接溶于载体中。
本发明所述的组合物，可以以选自以下任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。
本发明化合物或含有它的组合物或药物制剂可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混旋剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。
在本发明的第四方面，本发明提供了上述式(I)化合物或其药学上可接受的盐或包含该化合物的组合物的应用。
具体地，本发明提供了上述式(I)化合物或其药学上可接受的盐或包含该化合物的组合物在制备用于治疗与BRD4蛋白相关疾病的药物中的应用。
以及，上述式(I)化合物或其药学上可接受的盐或包含该化合物的组合物在制备BRD4抑制剂药物中的应用。
以及，上述式(I)化合物或其药学上可接受的盐或包含该化合物的组合物在制备抗HIV的药物中的应用；优选地，所述抗HIV的药物为HIV潜伏激活药物。
本发明的化合物具有良好的BRD4蛋白抑制活性，说明本发明化合物在抗肿瘤及抗病毒方面具有巨大的应用潜力，可应用于制备BRD4抑制剂类药物。同时本发明提供的化合物具有良好的HIV潜伏激活能力，与已知的HIV潜伏激活剂JQ1相比，其体外细胞毒性大大降低，说明该药用药安全，且具有良好耐受性。因此，本发明的化合物有望成为HIV的潜伏病毒激活剂，从而达到彻底清除HIV潜伏感染库，实现HIV“功能性”治愈的目标。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为BRD4的三个活性口袋及其与JQ1的作用模式图。
图2为化合物YHP-1(A)、JQ1(B)、YHP-2(C)与BRD4的对接效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。如无特殊说明，本发明的原料及试剂均可通过常规方式购买或定制获得。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1化合物的制备
化合物的合成路线见如下反应式：
反应条件：(a)碳酸钾，DMF，室温；(b)碳酸钠；四(三苯基膦)钯；1,4-二氧六环和水；95℃；(c)碳酸铯，DMSO，100℃；(d)钯碳/H2；甲醇，室温；(e)吡啶，DCM，0℃至室温。
化合物5中R选自乙基、丙基、环丙基、噻吩基、取代及未取代的苯基；进一步地，所述化合物5包括以下结构：其中YHP-1即式(I)化合物。
具体反应过程如下：
(1)中间体6-溴-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮(1)的制备
将1.15g(5mmol)6-溴靛红溶于10mL DMF，搅拌下加入1.03g(7.5mmol)碳酸钾，然后逐滴加入0.804g(6.25mmol)硫酸二甲酯，室温下反应4小时，将混合物倒入100mL冰水中，用乙酸乙酯萃取(60mL×3)萃取，合并有机相，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩蒸干后，用硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20：3)得0.753g红色固体，收率63％。
熔点：118～119℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.52–7.42(m,2H),7.32(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),3.14(s,3H).ESI-MS(m/z):240.1[M+H]+；理论计算值：C9H6BrNO2[M+H]+239.96。
(2)中间体6-(2-氟-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮(2)的制备
将中间体1(478mg，2mmol)，2-氟-5硝基苯硼酸(552mg，3mmol)、四(三苯基膦)钯(232mg，0.2mmol)、碳酸钠(636mg，6mmol)溶于20mL1,4-二氧六环和4mL水的混合溶液中，于95℃，氮气保护下反应10小时。旋干混合物，得到粗产物。粗产物用硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1,v:v)，得到红色固体306mg，收率51％。
熔点：240～242℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.49(dd,J＝6.6,2.9Hz,1H),8.41(ddd,J＝9.0,4.2,2.9Hz,1H),7.77–7.64(m,2H),7.45(s,1H),7.38(dt,J＝7.7,1.7Hz,1H),3.21(s,3H).ESI-MS(m/z):301.10[M+H]+；理论计算值：C15H9F1N2O4[M+H]+301.05。
(3)中间体6-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮(3)的制备
将中间体2(300mg，1mmol)和碳酸铯(358mg，1.1mmol)溶于DMSO(5mL)中，缓慢的加入1,4-二氟苯酚(143mg，1.1mmol)，在100℃下加热2小时。乙酸乙酯萃取后，将有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩滤液，用硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1,v:v)分离纯化得目标产物352mg，收率86％。
熔点:224～246℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.39(d,J＝2.8Hz,1H),8.27(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(ddd,J＝14.4,7.2,3.6Hz,2H),7.51–7.39(m,2H),7.25(td,J＝8.6,1.9Hz,1H),7.03(d,J＝9.1Hz,1H),3.20(s,3H).ESI-MS(m/z):411.10[M+H]+；理论计算值:C21H12F2N2O5[M+H]+411.07。
(4)中间体6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮(4)的制备
将中间体3(205mg，0.5mmol)，10％钯碳20.5mg溶解于5mL甲醇中，通入氢气，室温反应过夜，过滤并浓缩。用硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：4,v:v)，得橘黄色固体180mg，收率95％。
熔点251～253℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.35～7.23(m,2H),7.09(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.02(d,J＝1.4Hz,1H),6.94～6.87(m,1H),6.78(dq,J＝9.3,5.6Hz,2H),6.70(d,J＝2.7Hz,1H),6.61(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H),5.17(s,2H),3.04(s,3H).ESI-MS(m/z):381.12[M+H]+；理论计算值：C21H14F2N2O3[M+H]+381.10。
(5)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)乙磺酰胺(YHP-1，即式(I))的制备
将中间体4(150mg，0.39mmol)溶于DCM(3.9mL)中，冰浴条件下依次加入吡啶(96mg，1.2mmol)和乙烷磺酰氯(55mg，0.43mmol)在氮气保护下室温反应24小时，混合物用1mol/L HCl(1mL)调节pH后用DCM萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：2,v:v)得158mg红色固体，收率86％。
熔点：232～234℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.87(s,1H),7.60(d,J＝7.6Hz,1H),7.44(ddd,J＝11.5,8.8,3.0Hz,1H),7.36(d,J＝2.7Hz,1H),7.33–7.17(m,4H),7.08(ddt,J＝10.6,8.8,2.0Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),3.13(d,J＝7.9Hz,5H),1.23(t,J＝7.3Hz,3H).ESI-MS(m/z):473.10[M+H]+；理论计算值：C23H18F2N2O5S[M+H]+473.09。
(6)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)丙烷-1-磺酰胺(YHP-2)的制备
将中间体4(150mg，0.39mmol)溶于DCM(3.9mL)中，冰浴条件下依次加入吡啶(96mg，1.2mmol)和丙烷磺酰氯(61mg，0.43mmol)在氮气保护下室温反应24小时，混合物用1mol/L HCl(1mL)调节pH后用DCM萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：2,v:v)得167mg红色固体，收率88％。
熔点：228～230℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.27(s,1H),7.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.34(ddd,J＝11.3,8.7,3.1Hz,1H),7.38(d,J＝2.8Hz,1H),7.34–7.27(m,4H),7.08(ddt,J＝10.5,8.5,2.0Hz,1H),6.84(d,J＝8.7Hz,1H),3.23(d,J＝7.8Hz,5H),1.72(h,J＝7.5Hz,2H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-MS(m/z):487.10[M+H]+；理论计算值：C24H20F2N2O5S[M+H]+487.11。
(7)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)环丙磺酰胺(YHP-3)的制备
将中间体4(150mg，0.39mmol)溶于DCM(3.9mL)中，冰浴条件下依次加入吡啶(96mg，1.2mmol)和环丙烷磺酰氯(60mg，0.43mmol)在氮气保护下室温反应24小时，混合物用1mol/L HCl(1mL)调节pH后用DCM萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：2,v:v)得156mg红色固体，收率83％。
熔点：224～226℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.88(s,1H),8.26(s,1H),7.85(d,J＝9.5Hz,1H),7.65(d,J＝9.5Hz,1H),7.50–7.40(m,2H),7.36–7.22(m,2H),7.19(t,J＝8.7Hz,1H),6.96(d,J＝8.7Hz,1H),3.18(s,3H),1.12(s,1H),0.96(t,J＝7.4Hz,4H).ESI-MS(m/z):485.10[M+H]+；理论计算值：C24H18F2N2O5S[M+H]+485.09。
(8)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)噻吩-2-磺酰胺(YHP-4)的制备
将中间体4(150mg，0.39mmol)溶于DCM(3.9mL)中，冰浴条件下依次加入吡啶(96mg，1.2mmol)和2-噻吩磺酰氯(78mg，0.43mmol)在氮气保护下室温反应24小时，混合物用1mol/L HCl(1mL)调节pH后用DCM萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：2,v:v)得182mg红色固体，收率89％。
熔点：241～243℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.19(s,1H),8.26(s,1H),7.85(d,J＝5.0Hz,1H),7.65(d,J＝9.5Hz,1H),7.49(d,J＝3.7Hz,1H),7.2(t,J＝11.3Hz,2H),7.32(d,J＝2.5Hz,1H),7.25–7.13(m,3H),7.08(t,J＝8.4Hz,1H),6.89(d,J＝8.9Hz,1H),3.20(s,3H).ESI-MS(m/z):527.10[M+H]+；理论计算值：C25H16F2N2O5S2[M+H]+527.05。
(9)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)苯磺酰胺(YHP-5)的制备
将中间体4(150mg，0.39mmol)溶于DCM(3.9mL)中，冰浴条件下依次加入吡啶(96mg，1.2mmol)和苯磺酰氯(76mg，0.43mmol)在氮气保护下室温反应24小时，混合物用1mol/L HCl(1mL)调节pH后用DCM萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：2,v:v)得174mg红色固体，收率86％。
熔点：245～247℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.35(s,1H),8.23(s,1H),7.85–7.51(m,6H),7.46–7.35(m,2H),7.28(d,J＝2.6Hz,1H),7.16(td,J＝9.1,5.3Hz,1H),7.12–7.02(m,2H),6.82(d,J＝8.7Hz,1H),3.18(s,3H).ESI-MS(m/z):521.10[M+H]+；理论计算值：C27H18F2N2O5S[M+H]+521.09。
(10)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(1-甲基-2,3-二氧吲哚-6-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(YHP-6)的制备
将中间体4(150mg，0.39mmol)溶于DCM(3.9mL)中，冰浴条件下依次加入吡啶(96mg，1.2mmol)和4-氟苯磺酰氯(83mg，0.43mmol)在氮气保护下室温反应24小时，混合物用1mol/L HCl(1mL)调节pH后用DCM萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱层析分离纯化(DCM：甲醇＝100：2,v:v)得188mg红色固体，收率90％。
熔点：252～254℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.36(s,1H),8.35(s,1H),7.87–7.65(m,5H),7.41(ddd,J＝14.6,8.6,2.3Hz,2H),7.31(d,J＝2.7Hz,1H),7.21(td,J＝9.1,5.4Hz,1H),7.09(dd,J＝9.2,2.7Hz,2H),6.86(d,J＝8.8Hz,1H),3.21(s,3H).ESI-MS(m/z):539.12[M+H]+；理论计算值：C27H17F3N2O5S[M+H]+539.08。
实施例2化合物对BRD4蛋白的抑制活性检测
通过均相时间分辨荧光技术(Homogeneous Time-Resolved Fluorescence，HTRF)测试化合物对BRD4的抑制活性。具体方法如下：
实验原理：HTRF结合了荧光共振能量转移FRET和时间分辨荧光TRF两种技术的优势，将FRET的均相实验方式和TRF的低背景特点融合在一起，具有操作简单、灵敏度高、测试通量大、实验数据稳定可靠的特点。
(1)使用DMSO对化合物进行稀释。
(2)使用试剂盒中的Diluent Buffer稀释BRD4(BD2、BD2)和Biotin标记的组蛋白H4肽段，并配置反应液。
(3)使用试剂盒中的Dtection Buffer稀释Anti-GST-TB2+Cryptate和SA-XL-665,并配置检测液。
(4)取384孔板，按照排板布置，板上分别为对照孔min(高浓度阳性药)，待测化合物孔，对照孔max(DMSO)，阳性药对照孔。
(5)向孔板中加入对应浓度的化合物或DMSO溶液。
(6)向孔板中加入反应液，随后加入检测液，振摇30秒。
(7)室温下孵育2小时，用Envision检测仪读取荧光数值和HTRF信号值。
数值处理：抑制率＝(Max-Signal)/(Max-Min)*100。Max为Biotin标记的组蛋白H4肽段与BRD4(BD1、BD2)完全结合时的HTRF信号值。Signal为相应浓度下的化合物的HTRF信号值。Min为高浓度阳性药下Biotin标记的组蛋白H4肽段与BRD4(BD1、BD2)完全不结合时的HTRF信号值。
实验结果：本发明化合物YHP-1在5μM浓度下对BRD4的抑制作用高于阳性对照JQ1。
实施例3：YHP-1在J-Lat HIV-1潜伏感染细胞系中的EC50
实验原理：EC50为半数最大效应浓度，指化合物达到激活HIV潜伏活性50％最大效应时所对应的化合物浓度，单位为μM。
实验步骤：取生长良好的J-Lat细胞铺于96孔透明板中,细胞用量为每孔2×105个，分别加入不同浓度的待测化合物，终浓度分别为320，160，80，40，20，10，5，0μM，采用JQ1为阳性对照，未处理组为阴性对照，每个浓度至少3个复孔，每个实验重复3次。于5％CO2孵箱中培养24h后离心收取细胞，弃上清,使用PBS清洗一次，弃上清，然后用PBS重悬。使用流式细胞仪检测相应细胞的GFP表达水平并分析结果。
实验结果：
化合物 EC<sub>50</sub>(μM)
YHP-1 3.2
YHP-2 188
YHP-3 172
YHP-4 183
YHP-5 >200
YHP-6 >200
JQ1 9.5
由结果可知，本发明化合物YHP-1具有比JQ1好的HIV潜伏病毒的激活效果。
实施例4：YHP-1对正常细胞的毒性CC50
实验原理：CC50为衡量化合物毒性的指标，指引起半数正常细胞变异的化合物浓度，单位为μM。
实验步骤：按每孔2×104个正常人外周血单核细胞(PBMC)种植于96孔板，每孔加入100ul含10％FBS(Gibco)的DMEM培养基(Gibco)，24小时后，分别加入不同浓度的待测化合物，使终浓度分别为0、50、100、200、400、800μM，采用JQ1为阳性对照，每个浓度至少3个复孔，每个实验重复3次，药物处理细胞72小时后，在每孔中加入MTT试剂(0.5mg/mL)(购自SIGMA)，振荡1h，于酶标仪上570nm处测OD值。
实验结果：
化合物 CC<sub>50</sub>(μM)
YHP-1 >100
YHP-2 68
YHP-3 77
YHP-4 86
YHP-5 >100
YHP-6 >100
JQ1 8.8
结果显示，YHP-1对人正常细胞的半数毒性浓度为CC50大于100μM，JQ1对人正常细胞的半数毒性浓度为CC50＝8.8μM，表明YHP-1在激活浓度下安全性更高，具有更潜在的临床应用价值。
实施例5：YHP-1与BRD4的对接研究
实验原理：SYBYL是美国Tripos公司开发的计算机分子模拟软件，其中Surflex-Dock分子对接模块采用独特的经验打分函数和拥有专利的搜索引擎(基于分子相似性的搜索引擎)将配体分子对接到蛋白的结合位点，属于柔性对接技术，同时支持考虑生物大分子蛋白残基柔性的对接，是化合物虚拟活性筛选的主要考量因素，可为发现新型BRD4靶点先导化合物及其结构改造和修饰提供理论支撑和技术指导。
实验步骤：1)从蛋白质数据库中下载BRD4复合物晶体结构5UVV；2)配体优化：在对接软件中画出配体分子YHP-1，进一步优化处理在SYBYL配体准备模块(ligand structurepreparation)进行。首先，对配体分子进行加氢处理；然后，进行能量优化，参数设置如下：力场设定为Tripos力场，能量优化计算方法为Powell，梯度为最大迭代次数为10,000次。3)受体优化：在SYBYL Surflex-Dock蛋白准备模块(prepare proteinstructure)对5UVV进行优化处理。首先将复合物晶体结构中的配体抽提出来，对蛋白进行加氢处理。然后，以复合物晶体结构中配体分子的坐标为中心生成原型分子即对接口袋，保存当前生成的文件用于下一步分子对接操作。4)YHP-1与BRD4蛋白分子对接：为了检验分子对接软件的对接效果，并进一步确定BRD4抑制剂与蛋白对接的合适参数，在SYBYLSurflex-Dock模块，将配体分子对接回蛋白活性口袋。选择Surflex-Dock对接模式，导入处理后的受体分子和配体分子，对接参数设置如下：每个片段的最大生成构象(Maxconformations per Fragment)为20，每个配体分子最大输出构象(Maximum Number ofPoses per Ligand)为20，最终保留对接构象间的RMSD值(Minimum RMSD BetweenFinalPoses)为为了比较对接构象与结晶构象之间的差异，设定5UVV中。
结果分析：YHP-1(图2A)与JQ1(图2B)的空间伸展方向基本相似，都能通过柔性取代基的伸展而伸入三个关键结合腔KAC、ZA和WPF，同时都能与ZA区的关键氨基酸Asp381产生氢键作用以及通过水分子桥与KAC识别口袋中的Tyr390、Lys378形成网状氢键结构。不同的是，YHP-1中靛红的羰基氧原子可与KAc识别口袋中的关键氨基酸Asn433形成氢键作用但JQ1却没有与此关键氨基酸产生作用，说明YHP-1潜伏激活效果要好于JQ1，这与本发明的实验结果相吻合。
此外，本发明还研究了YHP系列其他潜伏激活效果不好的化合物与BRD4的对接效果。以YHP-2为例(图2C)，虽然该化合物也能伸入三个关键结合腔，但只与其中一个关键氨基酸Asn433产生了较弱的氢键相互作用同时通过水分子桥与KAC识别口袋中的Tyr390形成网状氢键结合作用也较弱这也解释了化合物YHP-2对BRD4抑制效果较差的原因。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.靛红类化合物，其具有式(I)所示结构：
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1所述的靛红类化合物，其特征在于，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、草酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐和柠檬酸盐。
3.式(I)化合物的制备方法，其包括：6-溴靛红和硫酸二甲酯反应制备6-溴-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后与2-氟-5硝基苯硼酸反应制备6-(2-氟-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后与2,4-二氟苯酚反应制备6-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后还原制备6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；然后与乙烷磺酰卤反应制备式(I)化合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，6-溴靛红和硫酸二甲酯的反应以DMF为溶剂；
优选地，所述反应在室温下进行；
优选地，所述反应中需要加入碱；
优选地，所述碱为碳酸钾。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，6-溴-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮与2-氟-5硝基苯硼酸的反应以1,4-二氧六环和水为溶剂；
优选地，所述反应以四(三苯基膦)钯为催化剂；
优选地，所述反应中加入碱；
优选地，所述碱为碳酸钠；
优选地，所述反应温度为95℃。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，6-(2-氟-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮与2,4-二氟苯酚的反应以碳酸铯为催化剂；
优选地，所述反应溶剂为DMSO；
优选地，所述反应温度为100℃。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，6-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-硝基苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮进行催化氢化反应制备6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮；
优选地，所述催化氢化反应以甲醇为溶剂，以钯碳为催化剂，在氢气环境下室温反应。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-1-甲基二氢吲哚-2,3-二酮与乙烷磺酰卤的反应以DCM为溶剂，加入吡啶，在氮气环境下室温反应。
9.组合物或药物制剂，其包含权利要求1或2中所述的化合物和至少一种药学上可接受的辅料或载体。
10.权利要求1或2中的所述的靛红类化合物或权利要求9所述的组合物在制备用于治疗与BRD4蛋白相关疾病的药物中的应用；
或者，权利要求1或2中的所述的靛红类化合物或权利要求9所述的组合物在制备BRD4抑制剂药物中的应用；
或者，权利要求1或2中的所述的靛红类化合物或权利要求9所述的组合物在制备抗HIV的药物中的应用；优选地，所述抗HIV的药物为HIV潜伏病毒激活药物。
CN201910538541.2A 2019-06-20 2019-06-20 靛红类化合物及其制备方法和应用 Expired - Fee Related CN110183372B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910538541.2A CN110183372B (zh) 2019-06-20 2019-06-20 靛红类化合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910538541.2A CN110183372B (zh) 2019-06-20 2019-06-20 靛红类化合物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110183372A true CN110183372A (zh) 2019-08-30
CN110183372B CN110183372B (zh) 2020-10-30

Family

ID=67722622

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910538541.2A Expired - Fee Related CN110183372B (zh) 2019-06-20 2019-06-20 靛红类化合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110183372B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111265516A (zh) * 2020-02-27 2020-06-12 华侨大学 吲哚二酮类化合物及其在药学上可接受的盐在制备抗乙型肝炎病毒的药物中的应用
CN115028646A (zh) * 2022-05-31 2022-09-09 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108069959A (zh) * 2016-11-10 2018-05-25 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含氮杂环类化合物、其制备方法、药物组合物及应用
WO2018109271A1 (en) * 2016-12-13 2018-06-21 Orion Corporation New bromodomain inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108069959A (zh) * 2016-11-10 2018-05-25 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含氮杂环类化合物、其制备方法、药物组合物及应用
WO2018109271A1 (en) * 2016-12-13 2018-06-21 Orion Corporation New bromodomain inhibitors

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIANPING HU ET AL.: ""Structure-based optimization of a series of selective BET inhibitors containing aniline or indoline groups"", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 *
李婷等: ""艾滋病功能性治愈策略研究进展"", 《微生物学免疫学进展》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111265516A (zh) * 2020-02-27 2020-06-12 华侨大学 吲哚二酮类化合物及其在药学上可接受的盐在制备抗乙型肝炎病毒的药物中的应用
CN115028646A (zh) * 2022-05-31 2022-09-09 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用
CN115028646B (zh) * 2022-05-31 2023-06-30 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110183372B (zh) 2020-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI663172B (zh) 經取代之多環性吡啶酮衍生物及含有其前體之醫藥組合物
Andrews et al. Reversal agent and linker variants of reversed chloroquines: activities against Plasmodium falciparum
CN104822267B (zh) 乙型肝炎病毒共价闭合环状dna形成的抑制剂及其使用方法
Zhang et al. Identification of less lipophilic riminophenazine derivatives for the treatment of drug-resistant tuberculosis
Pérez et al. N-cinnamoylated chloroquine analogues as dual-stage antimalarial leads
CN105209031A (zh) 针对hbv感染的新型抗病毒剂
CN103998042B (zh) Pi3k的活性或功能的抑制剂的应用
CN103153995B (zh) 作为磷酸二酯酶(pdes)抑制剂的稠合杂环化合物
Hwang et al. Synthesis and evaluation of 7-substituted 4-aminoquinoline analogues for antimalarial activity
CN102131798A (zh) 用作磷酸二酯酶10抑制剂的二取代的苯基化合物
CN101087755A (zh) 取代的芳基酰基硫脲及其相关化合物；病毒复制抑制剂
CN106715415A (zh) 3‑氨基‑1,5,6,7‑四氢‑4h‑吲哚‑4‑酮
CN108699015A (zh) 对电压门控性钠通道具有选择性活性的羟基烷基胺-和羟基环烷基胺-取代的二胺-芳基磺胺化合物
CN105163738A (zh) Mk2抑制剂和其用途
CN102131800A (zh) 5元和6元杂环化合物
CN104125946B (zh) 6-氨基吡啶-3-醇衍生物或其药学上可接受的盐以及预防或治疗由血管新生引起的疾病的、含有上述物质作为活性成分的药物组合物
CN105228982A (zh) 用于治疗过度增殖性病症的3-乙酰基氨基-1-(苯基-杂芳基-氨基羰基或苯基-杂芳基-羰基氨基)苯衍生物
CN110183372A (zh) 靛红类化合物及其制备方法和应用
CN103998432A (zh) 双环化合物
CN101035791B (zh) 作为c-JUN N末端激酶（JNK）和P-38激酶的抑制剂的吡咯并[1,2-D][1,2,4]三嗪
CN105246887A (zh) 香豆素衍生物以及用于治疗过度增生性疾病的方法
CN109153672A (zh) Trpv4拮抗剂
CN110272418B (zh) 三氮唑类化合物及其制备方法和应用
CN106243047B (zh) 具有VEGFR-2和B-raf双重抑制作用的喹喔啉酮双芳基脲及其衍生物、制备方法及其应用
EA034528B1 (ru) Способ лечения нарушений, связанных с вич

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20201030

Termination date: 20210620