CN115028646B - 一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用 - Google Patents

一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用。本发明基于靶标BRD4的结构特点，设计了一系列具有BRD4抑制作用的含氮杂环类化合物，结构如下式I所示：
Figure DDA0003671759520000011
经验证，上述含氮杂环类化合物在抑制肿瘤增殖方面具有良好的效果，有望应用于临床抗肿瘤药物的开发。

Description

一种含氮杂环类化合物、制备方法及在抗肿瘤制剂中的应用
技术领域
本发明属于抗肿瘤活性化合物技术领域，具体涉及一种含氮杂环类化合物、所述化合物的合成方法、包含该含氮杂环类化合物的药物组合物及其在制备抗肿瘤制剂中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
癌症是由多种复杂性因素引起的疾病，以恶性细胞的无限增殖为主要特征，也被称为恶性肿瘤。据WHO统计，每年全世界因癌症导致的死亡数就高达数百万，严重威胁了人类的健康。
BRD4即溴结构域蛋白4，属于BET溴结构域家族成员。BET家族包含四种蛋白，即BRD2、BRD3、BRD4和BRDT。BRD4是BET蛋白家族中研究最深入、最广泛的成员，其基因表达与多种恶性肿瘤患者预后及临床病理特征有关。BRD4能够结合乙酰化的组蛋白赖氨酸残基，从而介导下游的染色质重塑，转录调控等过程。研究显示，BRD4抑制剂能够抑制淋巴瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌等癌症的生长。针对BRD4已开发出多种结构类型的抑制剂，且其单独用药或联合其它抗肿瘤剂均显现出良好的抗肿瘤效果。近年来，以BRD4为靶标开发的抑制剂在抗肿瘤等领域潜在的应用价值已获得了广泛关注，使其成为研发肿瘤靶向治疗药物的重要靶标之一。
JQ1是最早报道的BET抑制剂之一，由JQ1与BRD4的共结晶复合物晶体结构可知(图1)，其活性结合区域由三部分(KAC、ZA channel、WPF)组成。JQ1能很好地伸入三个区域产生疏水性结合作用，被认为是临床上治疗癌症的潜在有效药物，同时也被用作化学工具探针来探索BRD4的机制和功能。但由于JQ1的化学结构与苯并二氮卓类镇静催眠药相似，且神经毒性较大，水溶性差、高细胞毒性等副作用，限制了其成药的可能性，至今未能成功上市。因此，亟待开发活性高、毒副作用低的新结构类型BRD4抑制剂。
发明内容
基于上述研究背景，本发明基于BRD4靶标结构的特点，设计并提供了一种具有BRD4抑制作用的新型含氮杂环类衍生物。经验证，该含氮杂环类衍生物在体外对多种肿瘤细胞系显示出良好的增殖抑制效果，为发现以BRD4为靶点的先导化合物研究提供了借鉴经验，也为抗肿瘤活性药物的开发提供了丰富的可用于筛选活性的化合物。
本发明第一方面，提供一种含氮杂环类化合物，所述化合物具有如下式I所示的结构，或式I所示化合物的光学异构体、非对映异构体、消旋混合物、其药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药；
Figure BDA0003671759500000011
其中，R1,R2,R3各自独立地选自氢、卤素、芳基磺酰基、乙烷磺酰基、丙烷磺酰基、环丙烷磺酰基；上述芳基磺酰基、乙烷磺酰基、丙烷磺酰基、环丙烷磺酰基均包括取代或未取代的官能团。
A,B环为取代及未取代的杂芳基，杂芳基是指芳族杂环，可以是单环或多环，进一步的，杂芳基包括：噻吩并嘧啶烷酮，苯并噻唑烷酮，苯并甲基异噁唑，3,5-二甲基异噁唑等。
本发明的一种实施方式中，所述A,B环为噻吩并嘧啶烷酮，即式I所示化合物的结构如下式II所示：
Figure BDA0003671759500000021
其中，R选自取代或未取代的芳基磺酰基、乙烷磺酰基，丙烷磺酰基，环丙烷磺酰基。
该系列的实施方式中，式II选自以下具体化合物：
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)乙磺酰亚胺(代号CL-A1)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)环丙磺酰胺(代号CL-A2)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(代号CL-A3)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(代号CL-A4)。
在本发明的又一种实施方式中，所述A,B环为苯并噻唑烷酮，即式I所示化合物的结构如下式III所示：
Figure BDA0003671759500000022
其中，R选自取代或未取代的芳基磺酰基、乙烷磺酰基、丙烷磺酰基、环丙烷磺酰基。
在该系列的实施方式中，式III选自以下具体化合物：
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)乙磺酰胺(代号CL-B1)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)环丙磺酰胺(代号CL-B2)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(代号CL-B3)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(代号CL-B4)。
在本发明的又一种实施方式中，所述A,B环为苯并甲基异噁唑，即式I所示化合物的结构如下式IV所示：
Figure BDA0003671759500000031
其中，R1,R2,R3各自独立地选自氢、卤素、取代或未取代的芳基磺酰基、乙烷磺酰基、丙烷磺酰基、环丙烷磺酰基。
该系列的实施方式中，式IV选自以下具体化合物：
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺(代号CL-C1)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺(代号CL-C2)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(代号CL-C3)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(代号CL-C4)；
N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺(代号CL-C5)；
N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺(代号CL-C6)；
N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(代号CL-C7)；
N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺(代号CL-C8)；
N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺(代号CL-C9)；
N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(代号CL-C10)。
本发明的又一种实施方式中，所述A,B环为3,5-二甲基异噁唑，即式I所示化合物的结构如下式V所示：
Figure BDA0003671759500000032
其中，R选自取代或未取代的芳基磺酰基、乙烷磺酰基、丙烷磺酰基、环丙烷磺酰基。
该系列的实施方式中，式V选自以下具体化合物：
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)乙磺酰胺(代号CL-D1)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)环丙磺酰胺(代号CL-D2)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(代号CL-D3)；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(代号CL-D4)。
优选的，上述第一方面所述药学上可接受的盐，应当是无毒性的盐，旨在增加化合物的水溶性、增加生物利用度。进一步的，所述药学上可接受的盐主要包括式I所示化合物与无机或有机酸形成的季铵盐；其中，所述无机酸为包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、二磷酸、氢溴酸、氢碘酸、六氟磷酸中的一种；所述有机酸为包括但不限于乙酸、马来酸、富马酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、对甲苯磺酸、水杨酸、草酸中的一种。
本领域熟练技术人员可以根据溶解度、稳定性、制剂工艺等对有机酸及无机酸进行选择从而获取相应的盐，所述盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。
本发明第二方面，提供第一方面所述含氮杂环类化合物的合成方法，以1-氟-2-溴-4-硝基苯(1)为起始原料，合成路线如下：
Figure BDA0003671759500000041
优选的，上述合成方法中，步骤a的具体合成方式如下：将1-氟-2-溴-4-硝基苯，碳酸铯和含R1，R2取代基的苯酚溶于DMSO,在100～120℃的环境下反应0.5～1.5小时，制得中间体2a-b。
进一步的，所述1-氟-2-溴-4-硝基苯、含R1，R2取代基的苯酚、碳酸铯的摩尔比为1:1～1.2:1～1.2。
进一步的，所述DMSO的用量为每毫摩尔1-氟-2-溴-4-硝基苯加入4～6mLDMSO。
优选的，步骤b的具体合成方式如下：将中间体2a-b加入乙醇、四氢呋喃及水的混合溶液中，再加入铁粉和氯化铵在90～110℃下反应1.5～2.5小时，得到中间体3a-b。
进一步的，所述中间体2a-b、铁粉、氯化铵摩尔比为1：4～6：1～3；所述乙醇、四氢呋喃、水的体积比为2～4：2～4：1；所述混合溶液的用量为每毫摩尔中间体2a-b加入4～6mL溶剂。
优选的，步骤c的具体合成方式如下：将中间体3a-b溶于1,4-二氧六环中，加入催化剂[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和乙酸钾，在氮气保护，90～110℃条件下反应4～6小时，得到中间体4a-b。
进一步的，所述中间体3a-b、双(频哪醇合)二硼，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯及乙酸钾的摩尔比为1：1～2：0.04～0.06：2～4；所述1,4-二氧六环的用量为每毫摩尔中间体3a-b加入4～6mL溶剂。
优选的，步骤d具体合成方式如下：将中间体4a-b和不同的溴代芳香杂环溶于1,4-二氧六环和水的混合溶剂中，加入催化剂[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和碳酸钠，在氮气保护，90～110℃条件下反应10～15小时，得到中间体6a-b。
进一步的，所述中间体4a-b、溴代芳香杂环、1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、碳酸钠的摩尔比为1：1～2：0.04～0.06：2～4；所述混合溶剂中，1,4-二氧六环与水体积比为4～6：1，所述混合溶剂的用量为每毫摩尔中间体4a-b加入12～17mL溶剂。
优选的，步骤e具体合成方式如下：将中间体6a-b溶于二氯甲烷，加入吡啶，含R3取代基的磺酰氯，在氮气环境下室温反应20～26小时，得到式I所示化合物。
进一步的，所述中间体6a-b、含R3取代基的磺酰氯，吡啶的摩尔比为1：1～2：2～4；所述二氯甲烷的用量为每毫摩尔6a-b的中间体加入15～24mL溶剂。
本发明第三方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包括第一方面所述含氮杂环类化合物，还包括药学上所必须的载体。
上述药物组合物中，第一方面所述含氮杂环类化合物应当是治疗有效剂量的，所述有效剂量可依据所述药物组合物临床应用的目的进行常规调整。
优选的，所述药物组合物为口服制剂或胃肠外给药制剂，具体的实例中，所述药物组合物为片剂、丸剂、胶囊或注射剂。
本发明第四方面，提供第一方面所述含氮杂环类化合物、第三方面所述药物组合物在制备抗肿瘤制剂中的应用。
优选的，所述抗肿瘤制剂用于包括但不限于皮肤癌、头颈癌、肺癌、食道癌、宫颈癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、肾癌、输尿管癌、膀胱癌中的一种；进一步的，所述抗肿瘤药物制剂用于BRD4高表达的肿瘤类型。
本发明第五方面，提供第一方面所述含氮杂环类化合物、第三方面所述药物组合物在制备BRD4抑制剂中的应用。
上述第五方面所述BRD4抑制剂为一种模型药剂，其应用方式包括将上述含氮杂环类化合物或药物组合物用于BRD4表达抑制模型的制备。
本发明第六方面，提供一种肿瘤疾病治疗方法，所述治疗方法包括向有需要的个体使用第一方面所述含氮杂环类化合物、第三方面所述药物组合物。
优选的，所述使用方式包括但不限于通过口服、注射或介入等方式将第一方面所述含氮杂环类化合物、第三方面所述药物组合物递送至病灶部位。
以上一个或多个技术方案的有益效果是：
本发明合成了一系列具有抗肿瘤活性的含氮杂环类化合物，该类化合物可作为BRD4抑制剂，并且在体外抗肿瘤增殖实验中均表现出较好的活性，体外抑制肿瘤细胞增殖效果超过阳性药物JQ1，进而有可能成为治疗指数较高的可用于临床的药物。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为背景技术中所述JQ1与BRD4的共结晶复合物结构图；
图2为CL-A1的空间构象及其与BRD4的结合模式图；
其中，图2左图为CL-A1的空间结构图，图2右图为CL-A1与BRD4关键结合腔的示意图；
图3为CL-C1的空间构象及其与BRD4的结合模式图；
其中，图3左图为CL-C1的空间结构图，图3右图为CL-C1与BRD4关键结合腔的示意图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
术语解释：
当术语“用于治疗”，其意指由护理者(例如就人类而言为医师、护士、从业护士等；就动物(包括非人类哺乳动物)而言为兽医)作出的有关个体或动物需要治疗或将受益于治疗的判断。这种判断基于各种因素而作出，所述因素在护理者的专业知识范围内而且包括有关个体或动物由于可用本发明化合物治疗的疾病、病症或障碍而生病或将要生病的知识。因此，本发明化合物可按保护性或预防性方式来使用；或本发明化合物可用于缓解、抑制或改善所述疾病、病症或障碍。
术语“个体”意指任意动物包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，以及最优选为人类。
术语“药物组合物”意指包含至少一种活性成分的组合物，所述活性成分包括但不限于本发明化合物的盐、溶剂化物和水合物，由此所述组合物可在哺乳动物(例如但不限于人类)中经受得住有关具体有效结果的研究。本领域技术人员应该理解和知晓适于确定活性成分是否基于技术人员需要而具有所需有效结果的技术手段。
术语“治疗有效量”意指在组织、系统、动物、个体或人类中引起生物应答或医药应答的活性化合物或药物的量，所述生物应答或医药应答是研究人员、兽医、医师或其他临床医师所寻找的，其包括如下的一种或多种：
(1)预防疾病，例如在可能易患所述疾病、病症或障碍但尚未经历或表现出所述疾病的病理或症状的个体中预防所述疾病、病症或障碍；
(2)抑制疾病，例如在正在经历或正在表现出所述疾病、病症或障碍的病理学或症状学的个体中抑制所述疾病、病症或障碍(即阻止所述病理和/或症状的进一步发展)；
(3)缓解疾病，例如在正在经历或正在表现出所述疾病、病症或障碍的病理学或症状学的个体中缓解所述疾病、病症或障碍(即逆转所述病理和/或症状)。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1
一、中间体4a-4c的合成路线
见如下反应式：
Figure BDA0003671759500000061
上述制备流程中所用的试剂分别为：(a)碳酸铯，含R1，R2取代基的苯酚，DMSO，110℃；(b)铁粉，氯化铵，乙醇、四氢呋喃和水，100℃；(c)双(频哪醇合)二硼，乙酸钾，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，1,4-二氧六环，100℃。
(1)中间体2-溴-1-(2,4-二氟苯氧基)-4-硝基苯(2a)的制备
将1-氟-2-溴-4-硝基苯(3.00g,13.63mmol)和碳酸铯(4.89g,15.00mmol)溶于30mL DMSO中，然后缓慢加入2,4-二氟苯酚(1.95g,15.00mmol)，升温至110℃反应1小时。将反应液冷却至室温，倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(2)中间体2-溴-1-(2,4-二氯苯氧基)-4-硝基苯(2b)的制备
将1-氟-2-溴-4-硝基苯(3.00g,13.64mmol)和碳酸铯(4.89g,15.00mmol)溶于30mL DMSO中，然后缓慢加入2,4-二氯苯酚(2.45g,15.00mmol)，升温至110℃反应1小时。将反应液冷却至室温，倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(3)中间体2-溴-1-(4-氯-2-氟苯氧基)-4-硝基苯(2c)的制备
将1-氟-2-溴-4-硝基苯(3.00g,13.64mmol)和碳酸铯(4.89g,15.00mmol)溶于30mL DMSO中，然后缓慢加入4-氯-2-氟苯酚(2.19g,15.00mmol)，升温至110℃反应1小时。将反应液冷却至室温，倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(4)中间体3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)苯胺(3a)的制备
将中间体2a(3.97g,12.03mmol)，铁粉(3.36g,60.14mmol)，氯化铵(1.29g,24.05mmol)溶于30mL四氢呋喃，30mL乙醇，10mL水的混合溶液中，升温至100℃反应2.5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(5)中间体3-溴-4-(2,4-二氯苯氧基)苯胺(3b)的制备
将中间体2b(4.40g,12.12mmol)，铁粉(3.38g,60.61mmol)，氯化铵(1.29g,24.24mmol)溶于30mL四氢呋喃，30mL乙醇，10mL水的混合溶液中，升温至100℃反应2.5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(6)中间体3-溴-4-(4-氯-2-氟苯氧基)苯胺(3c)的制备
将中间体2c(4.27g,12.34mmol)，铁粉(3.45g,61.69mmol)，氯化铵(1.32g,24.68mmol)溶于30mL四氢呋喃，30mL乙醇，10mL水的混合溶液中，升温至100℃反应2.5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(7)中间体4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯胺(4a)的制备
将中间体3a(2.42g,8.06mmol)，联硼酸频那醇酯(4.09g,16.12mmol)，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.29g,0.40mmol)，乙酸钾(2.37g,24.19mmol)溶于35mL 1,4-二氧六环中，升温至100℃，氮气保护下反应5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗。滤液浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(8)中间体4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯胺(4b)的制备
将中间体3b(2.98g,8.97mmol)，联硼酸频那醇酯(4.55g,17.93mmol)，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.33g,0.45mmol)，乙酸钾(2.64g,26.90mmol)溶于35mL 1,4-二氧六环中，升温至100℃，氮气保护下反应5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗。滤液浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
(9)中间体4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯胺(4c)的制备
将中间体3c(3.00g,9.47mmol)，联硼酸频那醇酯(4.81g,18.95mmol)，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.35g,0.47mmol)，乙酸钾(2.79g,28.43mmol)溶于35mL 1,4-二氧六环中，升温至100℃，氮气保护下反应5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗。滤液浓缩，得到黄色油状液体，无需纯化，直接用于下一步。
二、式II所示化合物的合成路线
见如下反应式：
Figure BDA0003671759500000081
上述制备流程中所用的试剂分别为：(a)碳酸钠，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，1,4-二氧六环和水，100℃；(b)吡啶，含R取代基的磺酰氯，二氯甲烷，0℃至室温。
(10)中间体7-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(6)的制备
将7-溴噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(1H)-酮(0.21g,0.92mmol)，中间体4a(0.64g,1.84mmol)和碳酸钠(0.29g,2.76mmol)溶解于20mL 1,4-二氧六环和4mL水的混合溶液中，加入[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.35g,0.47mmol)，升温至100℃，氮气保护下反应12小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝75：1)，得黄色粉末0.25g，收率为73％。熔点：119–122℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.54(s,1H,NH),8.13(s,1H,ArH),8.08(s,1H,ArH),7.25(ddd,J＝11.6,9.0,2.7Hz,1H,ArH),6.90–6.76(m,4H,ArH),6.62(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H,ArH),5.12(s,2H,NH2)；MS(ESI)m/z:calcd.for C18H11F2N3O2S[M-H]-:370.05,found:370.32.
(11)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)乙磺酰亚胺(CL-A1)的制备
将中间体6(0.17g,0.46mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.11g,1.37mmol)和乙烷磺酰氯(0.07g,0.55mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)，得白色粉末89mg，收率为42％。熔点：172–175℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H,NH),9.82(s,1H,NH),8.28(s,1H,ArH),8.17(s,1H,ArH),7.53(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),7.44–7.34(m,1H,ArH),7.21(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H,ArH),7.15(td,J＝9.2,5.6Hz,1H,ArH),7.02(t,J＝8.0Hz,1H,ArH),6.91(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.12(q,J＝7.3Hz,2H,CH2),1.23(t,J＝7.3Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C20H15F2N3O4S2[M-H]-:462.05,found:462.16.
(12)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)环丙磺酰胺(CL-A2)的制备
将中间体6(0.16g,0.43mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.10g,1.29mmol)和环丙烷磺酰氯(0.07g,0.52mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应22小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)，得黄色粉末53mg，收率为26％。熔点：214–217℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.58(s,1H,NH),9.72(s,1H,NH),8.28(s,1H,ArH),8.19(d,J＝15.7Hz,1H,ArH),7.57(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),7.43–7.32(m,1H,ArH),7.24(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H,ArH),7.15(td,J＝9.2,5.7Hz,1H,ArH),7.02(t,J＝8.3Hz,1H,ArH),6.91(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.70–2.58(m,1H,CH),0.97(dd,J＝14.9,7.0Hz,4H,CH2)；MS(ESI)m/z:calcd.for C21H15F2N3O4S2[M-H]-:374.05,found:374.15.
(13)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(CL-A3)的制备
将中间体6(0.15g,0.40mmol)溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.10g,1.21mmol)和对氟苯磺酰氯(0.09g,0.48mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应4小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得白色粉末94mg，收率为44％。熔点：245–248℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.62(s,1H,NH),10.32(s,1H,NH),8.24(s,1H,ArH),8.16(d,J＝3.0Hz,1H,ArH),7.86(dd,J＝8.8,5.2Hz,2H,ArH),7.48(d,J＝2.7Hz,1H,ArH),7.43(t,J＝8.8Hz,2H,ArH),7.41–7.33(m,1H,ArH),7.11(td,J＝9.2,5.7Hz,1H,ArH),7.07–6.98(m,2H,ArH),6.81(d,J＝8.8Hz,1H,ArH)；MS(ESI)m/z:calcd.for C24H14F3N3O4S2[M-H]-:528.04,found:528.53.
(14)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-7-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(CL-A4)的制备
将中间体6(0.12g,0.32mmol)溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.08g,0.97mmol)和对甲氧基苯磺酰氯(0.08g,0.39mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应5小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物，合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得白色粉末73mg，收率为42％。熔点：277–280℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H,NH),10.16(s,1H,NH),8.22(s,1H,ArH),8.14(d,J＝3.5Hz,1H,ArH),7.72(d,J＝8.9Hz,2H,ArH),7.45(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),7.41–7.32(m,1H,ArH),7.08(d,J＝8.9Hz,3H,ArH),7.06–6.96(m,2H,ArH),6.80(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.81(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C25H17F2N3O5S2[M-H]-:540.06,found:540.12.
三、式III所示化合物的合成路线
见如下反应式：
Figure BDA0003671759500000091
上述制备流程中所用的试剂分别为：(a)硫酸二甲酯，氢氧化钠，水，室温；(b)碳酸钠，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，1,4-二氧六环和水，100℃；(c)吡啶，含R取代基的磺酰氯，二氯甲烷，0℃至室温。
(15)中间体6-溴-3-甲基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(8)的制备
将6-溴-2-苯并噻唑啉酮(1.00g,4.34mmol)，硫酸二乙酯(0.66g,5.22mmol)溶解于20mL氢氧化钠(0.18g,4.34mmol)的水溶液中，室温反应6小时。将反应液用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得白色粉末0.90g，收率为85％。熔点：123–125℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,J＝2.1Hz,1H,ArH),7.54(dd,J＝7.8,2.8Hz,1H,ArH),7.25(d,J＝8.6Hz,1H,ArH),3.37(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C8H6BrNOS[M+2H]+:244.94,found:244.96.
(16)中间体6-(5-氨基-2-(2,4-二氟苯氧基)苯基)-3-甲基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(9)的制备
将中间体8(0.58g,2.39mmol)，中间体4a(0.83g,2.39mmol)和碳酸钠(0.76g,7.17mmol)溶解于30mL 1,4-二氧六环和6mL水的混合溶液中，加入[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.07g,0.09mmol)，升温至120℃，氮气保护下反应10小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗。滤液浓缩，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得白色固体0.64g，收率为70％。熔点：128–131℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,J＝1.5Hz,1H,ArH),7.44(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.33–7.24(m,2H,ArH),6.88(ddd,J＝10.7,2.7,1.3Hz,1H,ArH),6.80–6.72(m,2H,ArH),6.68(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),6.59(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H,ArH),5.19(s,2H,NH2),3.38(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C20H14F2N2O2S[M-H]-:385.07,found:385.19.
(17)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)乙磺酰胺(CL-B1)的制备
将中间体9(0.23g,0.59mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.79mmol)和乙烷磺酰氯(0.09g,0.72mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应48小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得白色固体0.19g，收率为71％。熔点：205–208℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.81(s,1H,NH),7.83(d,J＝1.4Hz,1H,ArH),7.53(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H,ArH),7.41–7.30(m,3H,ArH),7.25–7.18(m,1H,ArH),7.11(td,J＝9.1,5.6Hz,1H,ArH),7.03(t,J＝8.6Hz,1H,ArH),6.91(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.42(s,3H,CH3),3.13(q,J＝7.3Hz,2H,CH2),1.24(t,J＝7.3Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C22H18F2N2O4S2[M-H]-:475.07,found:475.35.
(18)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)环丙磺酰胺(CL-B2)的制备
将中间体9(0.22g,0.57mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.71mmol)和环丙烷磺酰氯(0.09g,0.68mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应48小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得白色固体0.17g，收率为60％。熔点：203–205℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.73(s,1H,NH),7.83(d,J＝1.3Hz,1H,ArH),7.53(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H,ArH),7.43–7.33(m,3H,ArH),7.23(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H,ArH),7.12(td,J＝9.1,5.6Hz,1H,ArH),7.04(t,J＝8.2Hz,1H,ArH),6.92(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),3.42(s,3H,CH3),2.72–2.62(m,1H,CH),0.97(d,J＝8.1Hz,4H,CH2)；MS(ESI)m/z:calcd.for C23H18F2N2O4S2[M-H]-:487.07,found:487.32.
(19)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(CL-B3)的制备
将中间体9(0.20g,0.52mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.12g,1.56mmol)和对氟苯磺酰氯(0.12g,0.62mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应5小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色固体0.12g，收率为44％。熔点：116–119℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H,NH),7.83(dd,J＝8.8,5.2Hz,2H,ArH),7.73(d,J＝1.3Hz,1H,ArH),7.48–7.37(m,4H,ArH),7.35(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.16(d,J＝2.3Hz,1H,ArH),7.05(pd,J＝9.4,4.2Hz,3H,ArH),6.81(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.41(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C26H17F3N2O4S2[M-H]-:541.06,found:541.33.
(20)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噻唑-6-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(CL-B4)的制备
将中间体9(0.22g,0.58mmol)溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.73mmol)和对甲氧基苯磺酰氯(0.14g,0.69mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应5小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物，合并有机液，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色粉末0.17g，收率为46％。熔点：118–121℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H,NH),7.70(t,J＝5.5Hz,3H,ArH),7.43–7.32(m,3H,ArH),7.15(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),7.09(d,J＝8.9Hz,2H,ArH),7.03(dtd,J＝11.9,9.1,2.7Hz,3H,ArH),6.81(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.81(s,3H,CH3),3.40(d,J＝7.6Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C27H20F2N2O5S2[M-H]-:553.08,found:553.42.
四、式IV所示化合物的合成路线
见如下反应式：
Figure BDA0003671759500000111
上述制备流程中所用的试剂分别为：(a)盐酸羟胺，乙酸钠，乙醇，水，80℃；(b)乙酸酐，乙酸钠，N,N-二甲基甲酰胺，153℃；(c)碳酸钠，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，1,4-二氧六环和水，100℃；(d)吡啶，含R3取代基的磺酰氯，二氯甲烷，0℃至室温。
(21)中间体2-溴-1-(2,4-二氟苯氧基)-4-硝基苯(11)的制备
将5'-溴-2'-羟基苯乙酮(1.72g,8.00mmol)，盐酸羟胺(1.11g,16.00mmol)和乙酸钠(0.98g,12.00mmol)溶于14mL乙醇和6mL水的混合液中，回流加热反应70分钟。将反应液冷却至室温，倒入20mL水，减压浓缩至固体析出，抽滤，烘干，得白色固体，无需纯化，直接用于下一步。
(22)中间体5-溴-3-甲基苯并[d]异噁唑(12)的制备
将中间体11(1.72g,8.00mmol)，乙酸酐(1.11g,16.00mmol)和乙酸钠(0.98g,12.00mmol)溶于14mL N,N-二甲基甲酰胺中，153℃反应4小时。将反应液倒入20mL水，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100：1)，得白色固体0.88g，收率为65％。熔点：41–44℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14(d,J＝10.5Hz,1H,ArH),7.77(t,J＝7.4Hz,1H,ArH),7.68(s,1H,ArH),2.55(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C8H6BrNO[M+H]+:211.96,found:211.99.
(23)4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯胺(13a)的制备
将中间体12(0.60g,2.45mmol)，中间体4a(0.85g,2.45mmol)和碳酸钠(0.78g,7.35mmol)溶解于30mL 1,4-二氧六环和6mL水的混合溶液中，加入[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.07g,0.09mmol)，升温至100℃，氮气保护下反应5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色固体0.53g，收率为62％。熔点：129–132℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(s,1H,ArH),7.67(q,J＝8.7Hz,2H,ArH),7.29–7.20(m,1H,ArH),6.92–6.85(m,1H,ArH),6.83(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),6.81–6.75(m,1H,ArH),6.74(d,J＝2.7Hz,1H,ArH),6.63(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H,ArH),5.22(s,2H,NH2),2.53(s,3H,CH3).；MS(ESI)m/z:calcd.for C20H14F2N2O2[M+H]+:353.10,found:353.30.
(24)中间体4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯胺(13b)的制备
将中间体12(0.73g,3.38mmol)，中间体4b(1.28g,3.38mmol)和碳酸钠(1.08g,10.15mmol)溶解于30mL 1,4-二氧六环和6mL水的混合溶液中，加入[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.09g,0.14mmol)，升温至100℃，氮气保护下反应5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得黄色固体1.09g，收率为77％。熔点：114–117℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(s,1H,ArH),7.63(s,2H,ArH),7.45(s,1H,ArH),7.13(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),6.92(d,J＝6.1Hz,1H,ArH),6.77(s,1H,ArH),6.67(d,J＝6.1Hz,1H,ArH),6.58(d,J＝6.1Hz,1H,ArH),5.30(s,2H,NH2),2.52(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C20H14Cl2N2O2[M-H]-:383.04,found:383.24.
(25)中间体4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯胺(13c)的制备
将中间体12(0.89g,4.26mmol)，中间体4c(1.54g,4.26mmol)和碳酸钠(1.35g,12.78mmol)溶解于30mL 1,4-二氧六环和6mL水的混合溶液中，加入[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.12g,0.17mmol)，升温至100℃，氮气保护下反应5小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得类白色固体1.00g，收率为64％。熔点：108–111℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87(s,1H,ArH),7.70–7.61(m,2H,ArH),7.36(dd,J＝11.0,2.3Hz,1H,ArH),7.04(d,J＝8.9Hz,1H,ArH),6.90(d,J＝8.6Hz,1H,ArH),6.76(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),6.72(t,J＝9.0Hz,1H,ArH),6.66(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H,ArH),5.23(s,2H,NH2),2.53(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C20H14ClFN2O2[M-H]-:369.07,found:369.24.
(26)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺(CL-C1)的制备
将中间体13a(0.20g,0.57mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.13g,1.70mmol)和乙烷磺酰氯(0.09g,0.68mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色粉末0.11g，收率为45％。熔点：244–246℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H,NH),7.96(s,1H,ArH),7.81–7.72(m,2H,ArH),7.43–7.36(m,1H,ArH),7.35(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),7.24(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H,ArH),7.12(td,J＝9.2,5.6Hz,1H,ArH),7.06–6.99(m,1H,ArH),6.96(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.13(q,J＝7.3Hz,2H,CH2),2.57(s,3H,CH3),1.23(t,J＝7.3Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C22H18F2N2O4S[M-H]-:443.10,found:443.34.
(27)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺(CL-C2)的制备
将中间体13a(0.22g,0.62mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.15g,1.87mmol)和环丙烷磺酰氯(0.11g,0.75mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色粉末0.11g，收率为40％。熔点：94–96℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H,NH),7.96(s,1H,ArH),7.82–7.72(m,2H,ArH),7.42–7.34(m,2H,ArH),7.27(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H,ArH),7.13(td,J＝9.2,5.6Hz,1H,ArH),7.06–6.99(m,1H,ArH),6.96(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.72–2.63(m,1H,CH),2.57(s,3H,CH3),0.99–0.93(m,4H,CH2)；MS(ESI)m/z:calcd.forC23H18F2N2O4S[M-H]-:455.10,found:455.35.
(28)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(CL-C3)的制备
将中间体13a(0.21g,0.59mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.79mmol)和对氟苯磺酰氯(0.14g,0.72mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应6小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色粉末0.13g，收率为43％。熔点：163–166℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H,NH),7.84(dd,J＝8.7,5.1Hz,2H,ArH),7.81(s,1H,ArH),7.71(dt,J＝8.7,5.1Hz,2H,ArH),7.45(t,J＝8.8Hz,2H,ArH),7.42–7.33(m,2H,ArH),7.19(d,J＝2.1Hz,1H,ArH),7.14–7.06(m,1H,ArH),7.06–6.98(m,1H,ArH),6.86(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.57(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C26H17F3N2O4S[M-H]-:509.09,found:509.50.
(29)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(CL-C4)的制备
将中间体13a(0.21g,0.60mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.80mmol)和对甲氧基苯磺酰氯(0.15g,0.72mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应6小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色粉末0.14g，收率为45％。熔点：88–91℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H,NH),7.81(s,1H,ArH),7.76–7.66(m,4H,ArH),7.41–7.32(m,1H,ArH),7.20(d,J＝2.1Hz,1H,ArH),7.11(d,J＝8.7Hz,3H,ArH),7.09–6.98(m,2H,ArH),6.87(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.82(s,3H,CH3),2.57(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C27H20F2N2O5S[M-H]-:521.11,found:521.19.
(30)N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺(CL-C5)的制备
将中间体13b(0.20g,0.52mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.12g,1.56mmol)和乙烷磺酰氯(0.08g,0.62mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色粉末0.10g，收率为41％。熔点：177–179℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H,NH),7.96(s,1H,ArH),7.72(s,2H,ArH),7.60(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),7.39(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),7.28(ddd,J＝11.3,9.0,2.5Hz,2H,ArH),7.10(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),6.85(d,J＝8.9Hz,1H,ArH),3.17(q,J＝7.3Hz,2H,CH2),2.56(s,3H,CH3),1.25(t,J＝7.3Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C22H18Cl2N2O4S[M-H]-:475.04,found:475.52.
(31)N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺(CL-C6)的制备
将中间体13b(0.24g,0.62mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.15g,1.86mmol)和环丙烷磺酰氯(0.10g,0.74mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色固体0.13g，收率为43％。熔点：154–157℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H,NH),7.96(s,1H,ArH),7.76–7.68(m,2H,ArH),7.58(dd,J＝5.1,2.5Hz,1H,ArH),7.42(s,1H,ArH),7.32(dd,J＝8.8,1.4Hz,1H,ArH),7.26(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),7.09(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),6.84(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.74–2.67(m,1H,CH),2.55(s,3H,CH3),0.97(d,J＝7.8Hz,4H,CH2)；MS(ESI)m/z:calcd.for C23H18Cl2N2O4S[M-H]-:487.04,found:487.25.
(32)N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(CL-C7)的制备
将中间体13b(0.22g,0.56mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.13g,1.68mmol)和对氟苯磺酰氯(0.13g,0.67mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应6小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色固体0.13g，收率为43％。熔点：214–217℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H,NH),7.92–7.82(m,3H,ArH),7.69(dd,J＝22.1,8.7Hz,2H,ArH),7.58(s,1H,ArH),7.46(t,J＝8.7Hz,2H,ArH),7.31–7.24(m,2H,ArH),7.16(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H,ArH),7.01(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),6.79(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.56(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C26H17Cl2FN2O4S[M-H]-:541.03,found:541.15.
(33)N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺(CL-C8)的制备
将中间体13c(0.201g,0.57mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.71mmol)和乙烷磺酰氯(0.09g,0.68mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色固体0.12g，收率为47％。熔点：221–224℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.88(s,1H,NH),7.94(s,1H,ArH),7.74(s,2H,ArH),7.50(dd,J＝10.8,2.3Hz,1H,ArH),7.38(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),7.28(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H,ArH),7.17(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),7.07(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),7.00(t,J＝8.9Hz,1H,ArH),3.16(q,J＝7.3Hz,2H,CH2),2.56(s,3H,CH3),1.25(t,J＝7.3Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C22H18ClFN2O4S[M-H]-:459.07,found:459.17.
(34)N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺(CL-C9)的制备
将中间体13c(0.22g,0.59mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.79mmol)和环丙烷磺酰氯(0.10g,0.72mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应72小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝9：1)，得白色固体0.12g，收率为43％。熔点：201–204℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H,NH),7.94(s,1H,ArH),7.74(s,2H,ArH),7.51(dd,J＝10.8,2.4Hz,1H,ArH),7.40(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),7.30(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H,ArH),7.18(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),7.08(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),7.01(t,J＝8.9Hz,1H,ArH),2.74–2.66(m,1H,CH),2.56(s,3H,CH3),0.96(dd,J＝9.0,4.8Hz,4H,CH2)；MS(ESI)m/z:calcd.for C23H18ClFN2O4S[M-H]-:471.07,found:471.16.
(35)N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(CL-C10)的制备
将中间体13c(0.21g,0.56mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.14g,1.72mmol)和对氟苯磺酰氯(0.13g,0.68mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应6小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色固体0.18g，收率为60％。熔点：176–179℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H,NH),7.85(dd,J＝8.2,5.3Hz,2H,ArH),7.79(s,1H,ArH),7.72(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),7.65(dd,J＝8.7,1.4Hz,1H,ArH),7.52–7.40(m,3H,ArH),7.21(s,1H,ArH),7.16(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),7.12(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),7.00–6.92(m,2H,ArH),2.54(d,J＝9.0Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C26H17ClF2N2O4S[M-H]-:525.06,found:525.23.
五、式V所示化合物的合成路线
见如下反应式：
Figure BDA0003671759500000151
上述制备流程中所用的试剂分别为：(a)碳酸钠，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，1,4-二氧六环和水，100℃；(b)吡啶，含R取代基的磺酰氯，二氯甲烷，0℃至室温。
(36)中间体4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯胺(15)的制备
将4-溴-3,5-二甲基异噁唑(0.43g,2.45mmol)，中间体4a(0.85g,2.45mmol)和碳酸钠(0.78g,7.35mmol)溶解于20mL 1,4-二氧六环和4mL水的混合溶液中，加入[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.05g,0.07mmol)，升温至100℃，氮气保护下反应10小时。将反应液用硅藻土趁热抽滤，并用温热的甲醇溶液冲洗，滤液浓缩，用乙酸乙酯多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得黄色固体，无需纯化，直接用于下一步。
(37)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)乙磺酰胺(CL-D1)的制备
将中间体15(0.20g,0.63mmol)溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.15g,1.89mmol)和乙烷磺酰氯(0.10g,0.76mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝75：1)，得白色粉末0.12g，收率为47％。熔点：176–179℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H,NH),7.44–7.36(m,1H,ArH),7.26(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H,ArH),7.18(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),7.02(dd,J＝7.3,3.8Hz,2H,ArH),6.97(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.12(q,J＝7.3Hz,2H,CH2),2.30(s,3H,CH3),2.14(s,3H,CH3),1.23(t,J＝7.3Hz,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C19H18F2N2O4S[M+H]+:409.10,found:409.31.
(38)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)环丙磺酰胺(CL-D2)的制备
将中间体15(0.23g,0.73mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.17g,2.19mmol)和环丙烷磺酰氯(0.12g,0.87mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应24小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝100：1)，得白色固体0.13g，收率为43％。熔点：156–158℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H,NH),7.44–7.37(m,1H,ArH),7.28(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H,ArH),7.20(d,J＝2.6Hz,1H,ArH),7.06–7.01(m,2H,ArH),6.98(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.66(dq,J＝7.8,5.0Hz,1H,CH),2.31(s,3H,CH3),2.14(s,3H,CH3),0.99–0.87(m,4H,CH2)；MS(ESI)m/z:calcd.for C20H18F2N2O4S[M-H]-:419.10,found:419.54.
(39)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺(CL-D3)的制备
将中间体15(0.15g,0.47mmol)溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.11g,1.42mmol)和对氟苯磺酰氯(0.11g,0.57mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应5小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得白色固体0.11g，收率为51％。熔点：140–143℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H,NH),7.80(dd,J＝8.7,5.2Hz,2H,ArH),7.47–7.36(m,3H,ArH),7.10(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H,ArH),7.06–6.96(m,2H,ArH),6.95(d,J＝2.5Hz,1H,ArH),6.87(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),2.18(s,3H,CH3),2.01(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C23H17F3N2O4S[M-H]-:528.04,found:528.53.
(40)N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)-4-甲氧基苯磺酰胺(CL-D4)的制备
将中间体15(0.21g,0.66mmol)溶解于10mL二氯甲烷中，冰浴条件下，依次加入吡啶(0.16g,1.98mmol)和对甲氧基苯磺酰氯(0.16g,0.79mmol)，氮气保护下，恢复至室温，反应5小时。将反应液用1mol/L HCl调节pH后，用二氯甲烷多次萃取，直到水相中没有产物。合并有机液，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得白色固体0.15g，收率为48％。熔点：138–141℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H,NH),7.71–7.66(m,2H,ArH),7.37(ddd,J＝11.2,5.6,2.3Hz,1H,ArH),7.15–7.06(m,3H,ArH),7.05–6.93(m,3H,ArH),6.88(d,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.81(s,3H,CH3),2.18(s,3H,CH3),2.02(s,3H,CH3)；MS(ESI)m/z:calcd.for C24H20F2N2O5S[M-H]-:485.11,found:485.29.
实施例2：化合物对BRD4蛋白的抑制活性检测
通过HTRF(均相时间分辨荧光技术Homogeneous Time-Resolved Fluorescence)法测试化合物在针对BRD4的抑制活性。具体方法如下：
实验原理：HTRF结合了荧光共振能量转移FRET和时间分辨荧光TRF两种技术，将FRET的均相实验方式和TRF的低背景特点融合在一起，具有操作简单、灵敏度高、通量大、实验数据稳定可靠的特点。
(1)使用DMSO对化合物进行稀释。
(2)使用试剂盒中的Diluent Buffer稀释BRD4和Biotin标记的组蛋白H4肽段，并配置反应液。
(3)使用试剂盒中的Dtection Buffer稀释Anti-GST-TB2+Cryptate和SA-XL-665,并配置检测液。
(4)取384孔板，按照排板布置，板上分别为对照孔min(高浓度阳性药)，待测化合物孔，对照孔max(DMSO)，阳性药对照孔。
(5)向孔板中加入对应浓度的化合物或DMSO溶液。
(6)向孔板中加入反应液，随后加入检测液，振摇30秒。
(7)室温下孵育2小时，用Envision检测仪读取荧光数值和HTRF信号值。
数值处理：抑制率＝(Max-Signal)/(Max-Min)*100。Max为Biotin标记的组蛋白H4肽段与BRD4完全结合时的HTRF信号值。Signal为相应浓度下的化合物的HTRF信号值。Min为高浓度阳性药下Biotin标记的组蛋白H4肽段与BRD4完全不结合时的HTRF信号值。
实验结果：本发明化合物在1μM浓度下对BRD4的抑制作用与阳性对照JQ1相当。
表1
Figure BDA0003671759500000161
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Figure BDA0003671759500000171
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Figure BDA0003671759500000181
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Figure BDA0003671759500000191
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Figure BDA0003671759500000201
实施例3：化合物体外抑制肿瘤细胞增殖实验
(1)实验材料：CCK-8试剂盒，MCF-7(人乳腺癌细胞)，A549(人肺癌细胞)，HT-29(人结肠癌细胞)，DMEM培养基，F12K培养基，McCoy's 5A培养基，胎牛血清，胰蛋白酶，青霉素-链霉素混合溶液(双抗)，磷酸盐缓冲液，96孔板，DMSO，多功能酶标仪(BioTek)，待测化合物，阳性对照药JQ1
(2)实验方法：取对数生长期的肿瘤细胞，用胰酶消化制成单细胞悬液，细胞计数，按每孔5000个细胞稀释，均匀接种于96孔板上，每孔100μL。另设空白对照：仅有相同体积培养基；阴性对照：只加细胞悬液、不加药。72小时后，吸掉96孔板中的培养基，向实验孔中加入100μL不同浓度的待测化合物，每个浓度设定4个复孔，阴性对照孔和空白对照孔分别加入100μL培养基。在37℃，5％CO2的培养箱中孵育24h后，每孔弃去100μL后，加入含有10％CCK8的培养基100μL，再在37℃，5％CO2培养箱中孵育1.5h后，用多功能酶标仪(BioTek)测定在450nm时的OD值，然后再进行数据处理。
(3)计算抑制率：抑制率＝(阴性对照组OD值-实验组OD值)/(阴性对照组OD值-空白组OD值)，用Graphpadprism 8软件计算IC50值。
实验结果：本发明化合物对MCF-7，A549和HT-29三株肿瘤细胞的抗增殖作用均优于法舒地尔。
表2
Figure BDA0003671759500000202
Figure BDA0003671759500000211
实施例4：化合物与BRD4的对接研究
实验原理：SYBYL是美国Tripos公司开发的计算机分子模拟软件，其中Surflex-Dock分子对接模块采用独特的经验打分函数和拥有专利的搜索引擎(基于分子相似性的搜索引擎)将配体分子对接到蛋白的结合位点，属于柔性对接技术，同时支持考虑生物大分子蛋白残基柔性的对接，是化合物虚拟活性筛选的主要考量因素，可为发现新型BRD4靶点先导化合物及其结构改造和修饰提供理论支撑和技术指导。
实验步骤：1)从蛋白质数据库中下载BRD4复合物晶体结构6KEF；2)配体优化：在对接软件中画出配体分子，进一步优化处理在SYBYL配体准备模块(ligand structurepreparation)进行。首先，对配体分子进行加氢处理；然后，进行能量优化，参数设置如下：力场设定为Tripos力场，能量优化计算方法为Powell，梯度为
Figure BDA0003671759500000212
最大迭代次数为10,000次。3)受体优化：在SYBYL Surflex-Dock蛋白准备模块(prepare proteinstructure)对6KEF进行优化处理。首先将复合物晶体结构中的配体抽提出来，对蛋白进行加氢处理。然后，以复合物晶体结构中配体分子的坐标为中心生成原型分子即对接口袋，保存当前生成的文件用于下一步分子对接操作。4)配体分子与BRD4蛋白分子对接：为了检验分子对接软件的对接效果，并进一步确定BRD4抑制剂与蛋白对接的合适参数，在SYBYLSurflex-Dock模块，将配体分子对接回蛋白活性口袋。选择Surflex-Dock对接模式，导入处理后的受体分子和配体分子，对接参数设置如下：每个片段的最大生成构象(Maxconformations per Fragment)为20，每个配体分子最大输出构象(Maximum Number ofPoses per Ligand)为20，最终保留对接构象间的RMSD值(Minimum RMSD BetweenFinalPoses)为/>
Figure BDA0003671759500000213
为了比较对接构象与结晶构象之间的差异，设定6KEF中。
结果分析：CL-A1，CL-C1(图2)与JQ1(图1)的空间伸展方向基本相似，都能通过柔性取代基的伸展而伸入三个关键结合腔KAC、ZA和WPF，同时都能与ZA区的关键氨基酸Asp88产生氢键作用以及通过水分子桥与KAC识别口袋中的Tyr97、Asn140形成网状氢键结构。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种含氮杂环类化合物，其特征在于，所述含氮杂环类化合物选自以下具体化合物：
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺；
N-(4-(2,4-二氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺；
N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)乙磺酰胺；
N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺；
N-(4-(2,4-二氯苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺；
N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)环丙磺酰胺；
N-(4-(4-氯-2-氟苯氧基)-3-(3-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)苯基)-4-氟苯磺酰胺。
2.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1所述含氮杂环类化合物，还包括药学上所必须的载体；
所述含氮杂环类化合物应当是治疗有效剂量的；
所述药物组合物为口服制剂或胃肠外给药制剂，所述药物组合物为片剂、丸剂、胶囊或注射剂。
3.权利要求1所述含氮杂环类化合物、权利要求2所述药物组合物在制备抗肿瘤制剂中的应用；
所述抗肿瘤制剂用于包括乳腺癌、肺癌、结肠癌中的一种或多种；所述抗肿瘤药物制剂用于BRD4高表达的肿瘤类型。
4.权利要求1所述含氮杂环类化合物、权利要求2所述药物组合物在制备BRD4抑制剂中的应用；
所述BRD4抑制剂为一种模型药剂，其应用方式包括将上述含氮杂环类化合物或药物组合物用于BRD4表达抑制模型的制备。
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Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108069958A (zh) * 2016-11-10 2018-05-25 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含氮杂环类化合物、其制备方法、药物组合物及应用
CN108069959A (zh) * 2016-11-10 2018-05-25 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含氮杂环类化合物、其制备方法、药物组合物及应用
WO2018137655A1 (zh) * 2017-01-25 2018-08-02 江苏豪森药业集团有限公司 吡咯并吡啶类n-氧化衍生物及其制备方法和应用
CN109836385A (zh) * 2019-04-04 2019-06-04 上海翰森生物医药科技有限公司 四氢喹啉类n-氧化衍生物及其制备方法和应用
CN110183372A (zh) * 2019-06-20 2019-08-30 山东大学 靛红类化合物及其制备方法和应用
CN110272418A (zh) * 2019-07-25 2019-09-24 山东大学 三氮唑类化合物及其制备方法和应用
CN113226322A (zh) * 2018-10-30 2021-08-06 诺维逊生物股份有限公司 作为bet抑制剂的杂环化合物
CN114286818A (zh) * 2019-07-02 2022-04-05 诺维逊生物股份有限公司 作为bet抑制剂的杂环化合物

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108069958A (zh) * 2016-11-10 2018-05-25 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含氮杂环类化合物、其制备方法、药物组合物及应用
CN108069959A (zh) * 2016-11-10 2018-05-25 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含氮杂环类化合物、其制备方法、药物组合物及应用
WO2018137655A1 (zh) * 2017-01-25 2018-08-02 江苏豪森药业集团有限公司 吡咯并吡啶类n-氧化衍生物及其制备方法和应用
CN113226322A (zh) * 2018-10-30 2021-08-06 诺维逊生物股份有限公司 作为bet抑制剂的杂环化合物
CN109836385A (zh) * 2019-04-04 2019-06-04 上海翰森生物医药科技有限公司 四氢喹啉类n-氧化衍生物及其制备方法和应用
CN110183372A (zh) * 2019-06-20 2019-08-30 山东大学 靛红类化合物及其制备方法和应用
CN114286818A (zh) * 2019-07-02 2022-04-05 诺维逊生物股份有限公司 作为bet抑制剂的杂环化合物
CN110272418A (zh) * 2019-07-25 2019-09-24 山东大学 三氮唑类化合物及其制备方法和应用

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