CN110151789A - 一种用于治疗卵巢早衰的产品 - Google Patents
一种用于治疗卵巢早衰的产品 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110151789A CN110151789A CN201810140927.3A CN201810140927A CN110151789A CN 110151789 A CN110151789 A CN 110151789A CN 201810140927 A CN201810140927 A CN 201810140927A CN 110151789 A CN110151789 A CN 110151789A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tissue
- collagen
- taking
- based materials
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于治疗卵巢早衰的产品。本发明提供了包括间充质干细胞和胶原材料的产品。产品功能为：治疗卵巢功能减退性疾病；治疗卵巢早衰；促进早衰卵巢的功能恢复；促进卵巢分泌雌二醇；促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；增加卵巢中的卵泡数量。胶原材料的制备方法：取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；置于丙酮中浸泡；置于水中浸泡并清洗；置于NaOH溶液中浸泡；置于水中浸泡并清洗；进行冷冻干燥，得到干燥组织；溶于醋酸溶液；转移到透析袋在水中进行透析；收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料。本发明对于卵巢早衰的治疗具有重大的应用推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于治疗卵巢早衰的产品。
背景技术
卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)是指在青春期之后、40岁之前发生的非生理性的停经，伴有潮热、原发或继发不孕、全身和生殖器官(卵巢、子宫等)萎缩。POF是妇科内分泌领域的常见病，发病率约为1％-3％，占原发性闭经患者的10％-28％，继发性闭经患者的4％-18％，平均发病年龄23.3岁。近年来POF的发病率逐年增高，在女性因素不孕患者中所占的比例亦有逐年上升的趋势。POF导致的低雌激素水平及生育力丧失已成为妇女生殖健康的两大威胁，较早发生的低雌激素水平也增加了妇女患骨质疏松和冠心病的危险。处于生育期的妇女提早闭经，在心理上会产生沉重包袱，易出现抑郁、焦虑、人际交往困难、敌对等情绪和社交方面的心理卫生问题，婚姻生活质量下降，从而产生一系列心理和社会问题。因此，POF不仅威胁着妇女的生殖及身体健康，同时也是一个严重的社会问题。
卵巢早衰的病因复杂，主要包括遗传学因素、免疫性因素、医源性因素(包括免疫抑制剂，化疗药物和放射治疗)及其他因素，如半乳糖磷酸盐尿苷转移酶缺乏等。由于卵巢早衰的机制不明，临床治疗缺乏有效的手段与药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗卵巢早衰的产品。
本发明提供了一种产品，包括间充质干细胞和胶原材料。
所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
所述胶原材料的制备方法包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料。
干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比为“3g胶原材料：(104-1012)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比具体为“3g胶原材料：(3×106-2×109)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比更具体为：“3g：3×106个细胞”或“3g：2×109个细胞”。
所述胶原材料的制备方法还包括如下步骤(10)：取步骤(9)得到的干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料。
步骤(1)中，所述水为去离子水。
步骤(2)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡时间可为1小时-15小时，具体可为10小时。步骤(2)中，每1小时更换新的丙酮。
步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每10分钟-30分钟换水，共换水8次-20次”，具体可为“每20分钟换水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤”。
步骤(4)中，所述NaOH溶液为NaOH水溶液。步骤(4)中，NaOH溶液为0.5M-4M NaOH溶液，具体可为2M NaOH溶液。步骤(4)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(4)中，浸泡时间可为5分钟-60分钟，具体可为20分钟。
步骤(5)中，所述水为去离子水。步骤(5)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(5)中，浸泡并清洗可为“每3分钟-10分钟换水，共换水15次-25次”，具体可为“每5分钟换水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤”。
步骤(6)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(7)中，所述醋酸溶液为醋酸水溶液。步骤(7)中，醋酸溶液为0.05M-1M醋酸溶液，具体可为0.5M醋酸溶液。步骤(7)中，干燥组织与醋酸溶液的配比为“1g-5g：100ml-500ml”，具体配比可为“1g-5g：150ml”或“3g：100ml-500ml”，具体配比可为“3g：150ml”。步骤(7)中，醋酸溶液为预冷的醋酸溶液。所述预冷的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(7)中，溶于醋酸溶液的实现方式可为“2℃-16℃搅拌24小时-72小时”，具体可为“4℃搅拌48小时”。
步骤(8)中，所述透析袋的截留分子量为3000Da-100kDa，具体可为50kDa。步骤(8)中，所述水为去离子水。步骤(8)中，透析的时间可为5天-15天，具体可为10天。步骤(8)中，透析过程中每天换水，具体可每天换水3次。步骤(8)中，透析的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。
步骤(9)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(10)中，溶剂可为生理盐水或磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7-8的磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.4的PBS缓冲液。步骤(10)中，干粉状胶原材料与溶剂的配比可为“1g-4g：100ml”，具体可为“3g：100ml”。
本发明还保护一种负载间充质干细胞的胶原材料，其制备方法包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)取干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料；
(11)将间充质干细胞负载于所述凝胶状胶原材料，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
步骤(1)中，所述水为去离子水。
步骤(2)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡时间可为1小时-15小时，具体可为10小时。步骤(2)中，每1小时更换新的丙酮。
步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每10分钟-30分钟换水，共换水8次-20次”，具体可为“每20分钟换水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤”。
步骤(4)中，所述NaOH溶液为NaOH水溶液。步骤(4)中，NaOH溶液为0.5M-4M NaOH溶液，具体可为2M NaOH溶液。步骤(4)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(4)中，浸泡时间可为5分钟-60分钟，具体可为20分钟。
步骤(5)中，所述水为去离子水。步骤(5)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(5)中，浸泡并清洗可为“每3分钟-10分钟换水，共换水15次-25次”，具体可为“每5分钟换水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤”。
步骤(6)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(7)中，所述醋酸溶液为醋酸水溶液。步骤(7)中，醋酸溶液为0.05M-1M醋酸溶液，具体可为0.5M醋酸溶液。步骤(7)中，干燥组织与醋酸溶液的配比为“1g-5g：100ml-500ml”，具体配比可为“1g-5g：150ml”或“3g：100ml-500ml”，具体配比可为“3g：150ml”。步骤(7)中，醋酸溶液为预冷的醋酸溶液。所述预冷的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(7)中，溶于醋酸溶液的实现方式可为“2℃-16℃搅拌24小时-72小时”，具体可为“4℃搅拌48小时”。
步骤(8)中，所述透析袋的截留分子量为3000Da-100kDa，具体可为50kDa。步骤(8)中，所述水为去离子水。步骤(8)中，透析的时间可为5天-15天，具体可为10天。步骤(8)中，透析过程中每天换水，具体可每天换水3次。步骤(8)中，透析的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。
步骤(9)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(10)中，溶剂可为生理盐水或磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7-8的磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.4的PBS缓冲液。步骤(10)中，干粉状胶原材料与溶剂的配比可为“1g-4g：100ml”，具体可为“3g：100ml”。
步骤(11)中，干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比为“3g胶原材料：(104-1012)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比具体为“3g胶原材料：(3×106-2×109)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比更具体为：“3g：3×106个细胞”或“3g：2×109个细胞”。
本发明还保护一种负载间充质干细胞的胶原材料，其制备方法包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)将干粉状胶原材料、间充质干细胞和溶剂混合，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
步骤(1)中，所述水为去离子水。
步骤(2)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡时间可为1小时-15小时，具体可为10小时。步骤(2)中，每1小时更换新的丙酮。
步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每10分钟-30分钟换水，共换水8次-20次”，具体可为“每20分钟换水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤”。
步骤(4)中，所述NaOH溶液为NaOH水溶液。步骤(4)中，NaOH溶液为0.5M-4M NaOH溶液，具体可为2M NaOH溶液。步骤(4)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(4)中，浸泡时间可为5分钟-60分钟，具体可为20分钟。
步骤(5)中，所述水为去离子水。步骤(5)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(5)中，浸泡并清洗可为“每3分钟-10分钟换水，共换水15次-25次”，具体可为“每5分钟换水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤”。
步骤(6)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(7)中，所述醋酸溶液为醋酸水溶液。步骤(7)中，醋酸溶液为0.05M-1M醋酸溶液，具体可为0.5M醋酸溶液。步骤(7)中，干燥组织与醋酸溶液的配比为“1g-5g：100ml-500ml”，具体配比可为“1g-5g：150ml”或“3g：100ml-500ml”，具体配比可为“3g：150ml”。步骤(7)中，醋酸溶液为预冷的醋酸溶液。所述预冷的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(7)中，溶于醋酸溶液的实现方式可为“2℃-16℃搅拌24小时-72小时”，具体可为“4℃搅拌48小时”。
步骤(8)中，所述透析袋的截留分子量为3000Da-100kDa，具体可为50kDa。步骤(8)中，所述水为去离子水。步骤(8)中，透析的时间可为5天-15天，具体可为10天。步骤(8)中，透析过程中每天换水，具体可每天换水3次。步骤(8)中，透析的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。
步骤(9)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(10)中，溶剂可为生理盐水或磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7-8的磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.4的PBS缓冲液。步骤(10)中，干粉状胶原材料与溶剂的配比可为“1g-4g：100ml”，具体可为“3g：100ml”。
步骤(10)中，干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比为“3g胶原材料：(104-1012)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比具体为“3g胶原材料：(3×106-2×109)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比更具体为：“3g：3×106个细胞”或“3g：2×109个细胞”。
本发明还保护一种负载间充质干细胞的胶原材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)取干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料；
(11)将间充质干细胞负载于所述凝胶状胶原材料，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
步骤(1)中，所述水为去离子水。
步骤(2)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡时间可为1小时-15小时，具体可为10小时。步骤(2)中，每1小时更换新的丙酮。
步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每10分钟-30分钟换水，共换水8次-20次”，具体可为“每20分钟换水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤”。
步骤(4)中，所述NaOH溶液为NaOH水溶液。步骤(4)中，NaOH溶液为0.5M-4M NaOH溶液，具体可为2M NaOH溶液。步骤(4)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(4)中，浸泡时间可为5分钟-60分钟，具体可为20分钟。
步骤(5)中，所述水为去离子水。步骤(5)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(5)中，浸泡并清洗可为“每3分钟-10分钟换水，共换水15次-25次”，具体可为“每5分钟换水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤”。
步骤(6)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(7)中，所述醋酸溶液为醋酸水溶液。步骤(7)中，醋酸溶液为0.05M-1M醋酸溶液，具体可为0.5M醋酸溶液。步骤(7)中，干燥组织与醋酸溶液的配比为“1g-5g：100ml-500ml”，具体配比可为“1g-5g：150ml”或“3g：100ml-500ml”，具体配比可为“3g：150ml”。步骤(7)中，醋酸溶液为预冷的醋酸溶液。所述预冷的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(7)中，溶于醋酸溶液的实现方式可为“2℃-16℃搅拌24小时-72小时”，具体可为“4℃搅拌48小时”。
步骤(8)中，所述透析袋的截留分子量为3000Da-100kDa，具体可为50kDa。步骤(8)中，所述水为去离子水。步骤(8)中，透析的时间可为5天-15天，具体可为10天。步骤(8)中，透析过程中每天换水，具体可每天换水3次。步骤(8)中，透析的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。
步骤(9)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(10)中，溶剂可为生理盐水或磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7-8的磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.4的PBS缓冲液。步骤(10)中，干粉状胶原材料与溶剂的配比可为“1g-4g：100ml”，具体可为“3g：100ml”。
步骤(11)中，干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比为“3g胶原材料：(104-1012)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比具体为“3g胶原材料：(3×106-2×109)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比更具体为：“3g：3×106个细胞”或“3g：2×109个细胞”。
本发明还保护一种负载间充质干细胞的胶原材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)将干粉状胶原材料、间充质干细胞和溶剂混合，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
步骤(1)中，所述水为去离子水。
步骤(2)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡时间可为1小时-15小时，具体可为10小时。步骤(2)中，每1小时更换新的丙酮。
步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每10分钟-30分钟换水，共换水8次-20次”，具体可为“每20分钟换水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤”。
步骤(4)中，所述NaOH溶液为NaOH水溶液。步骤(4)中，NaOH溶液为0.5M-4M NaOH溶液，具体可为2M NaOH溶液。步骤(4)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(4)中，浸泡时间可为5分钟-60分钟，具体可为20分钟。
步骤(5)中，所述水为去离子水。步骤(5)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(5)中，浸泡并清洗可为“每3分钟-10分钟换水，共换水15次-25次”，具体可为“每5分钟换水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤”。
步骤(6)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(7)中，所述醋酸溶液为醋酸水溶液。步骤(7)中，醋酸溶液为0.05M-1M醋酸溶液，具体可为0.5M醋酸溶液。步骤(7)中，干燥组织与醋酸溶液的配比为“1g-5g：100ml-500ml”，具体配比可为“1g-5g：150ml”或“3g：100ml-500ml”，具体配比可为“3g：150ml”。步骤(7)中，醋酸溶液为预冷的醋酸溶液。所述预冷的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(7)中，溶于醋酸溶液的实现方式可为“2℃-16℃搅拌24小时-72小时”，具体可为“4℃搅拌48小时”。
步骤(8)中，所述透析袋的截留分子量为3000Da-100kDa，具体可为50kDa。步骤(8)中，所述水为去离子水。步骤(8)中，透析的时间可为5天-15天，具体可为10天。步骤(8)中，透析过程中每天换水，具体可每天换水3次。步骤(8)中，透析的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。
步骤(9)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(10)中，溶剂可为生理盐水或磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7-8的磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.4的PBS缓冲液。步骤(10)中，干粉状胶原材料与溶剂的配比可为“1g-4g：100ml”，具体可为“3g：100ml”。
步骤(10)中，干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比为“3g胶原材料：(104-1012)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比具体为“3g胶原材料：(3×106-2×109)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比更具体为：“3g：3×106个细胞”或“3g：2×109个细胞”。
本发明还保护一种产品，包括以上任一所述的负载间充质干细胞的胶原材料；所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
本发明还保护间充质干细胞和胶原材料在制备产品中的应用。
所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
所述胶原材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料。
干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比为“3g胶原材料：(104-1012)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比具体为“3g胶原材料：(3×106-2×109)个细胞”。干粉状胶原材料和间充质干细胞的配比更具体为：“3g：3×106个细胞”或“3g：2×109个细胞”。
所述胶原材料的制备方法还包括如下步骤(10)：取步骤(9)得到的干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料。
步骤(1)中，所述水为去离子水。
步骤(2)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡时间可为1小时-15小时，具体可为10小时。步骤(2)中，每1小时更换新的丙酮。
步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每10分钟-30分钟换水，共换水8次-20次”，具体可为“每20分钟换水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤”。
步骤(4)中，所述NaOH溶液为NaOH水溶液。步骤(4)中，NaOH溶液为0.5M-4M NaOH溶液，具体可为2M NaOH溶液。步骤(4)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(4)中，浸泡时间可为5分钟-60分钟，具体可为20分钟。
步骤(5)中，所述水为去离子水。步骤(5)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(5)中，浸泡并清洗可为“每3分钟-10分钟换水，共换水15次-25次”，具体可为“每5分钟换水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤”。
步骤(6)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(7)中，所述醋酸溶液为醋酸水溶液。步骤(7)中，醋酸溶液为0.05M-1M醋酸溶液，具体可为0.5M醋酸溶液。步骤(7)中，干燥组织与醋酸溶液的配比为“1g-5g：100ml-500ml”，具体配比可为“1g-5g：150ml”或“3g：100ml-500ml”，具体配比可为“3g：150ml”。步骤(7)中，醋酸溶液为预冷的醋酸溶液。所述预冷的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(7)中，溶于醋酸溶液的实现方式可为“2℃-16℃搅拌24小时-72小时”，具体可为“4℃搅拌48小时”。
步骤(8)中，所述透析袋的截留分子量为3000Da-100kDa，具体可为50kDa。步骤(8)中，所述水为去离子水。步骤(8)中，透析的时间可为5天-15天，具体可为10天。步骤(8)中，透析过程中每天换水，具体可每天换水3次。步骤(8)中，透析的温度为2℃-16℃，具体可为4℃。
步骤(9)中，所述冷冻干燥的时间可为12小时-72小时，具体可为36小时。
步骤(10)中，溶剂可为生理盐水或磷酸盐缓冲液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7-8的磷酸盐缓冲液，具体可为pH7.4的PBS缓冲液。步骤(10)中，干粉状胶原材料与溶剂的配比可为“1g-4g：100ml”，具体可为“3g：100ml”。
本发明还保护以上任一所述负载间充质干细胞的胶原材料在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
以上任一所述间充质干细胞具体可为脐带间充质干细胞。以上任一所述间充质干细胞具体可为人间充质干细胞。以上任一所述脐带间充质干细胞具体可为第1代脐带间充质干细胞至第6代脐带间充质干细胞，更具体可为第3代脐带间充质干细胞。
人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)是指存在于脐带中的间充质干细胞。脐带作为分娩废弃物，相比其它间充质干细胞，hUC-MSCs具有亚全能分化潜能，其获取简单、来源丰富、培植过程也比其它干细胞快约1倍，生长均匀，具有很多作为种子细胞的优良特性，如增殖活性高、免疫原性低、无致瘤性等，来源充足，无伦理问题等的优势。雌激素有重要的促进骨合成和抗骨分解代谢的作用，且其骨保护作用远大于补钙的作用。年轻女性若在骨峰值形成前出现POF，因雌激素缺乏时间较同龄正常女性长，骨吸收速度加快而骨丢失率较高，而更易罹患骨质疏松。
本发明对于卵巢早衰的治疗具有重大的应用推广价值。
附图说明
图1为实施例4中三种标志性蛋白水平的结果。
图2为实施例5中卵泡形态学观察的照片。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中，冷冻干燥均采用0.1Mpa真空度。如无特殊说明，实施例中的PBS缓冲液均为pH7.4的PBS缓冲液。如无特殊说明，实施例中的细胞培养液为RPMI1640培养液。
C57BL/6小鼠：北京维通利华实验动物技术有限公司，又称C57BL/6NCrl近交系。
实施例1、胶原材料的制备
1、取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用去离子水充分清洗。
2、取完成步骤1的组织，置于丙酮中4℃浸泡10小时(每1小时更换新的丙酮)。
实际应用中，2℃-16℃均可。
实际应用中，浸泡1小时-15小时均可。
3、取完成步骤2的组织，置于去离子水中4℃浸泡(每20分钟更换去离子水，共换水9次，最后一次换水20分钟后完成本步骤)。
实际应用中，2℃-16℃均可。
实际应用中，可每10分钟-30分钟更换去离子水，共换水8次-20次。
4、取完成步骤3的组织，置于2M NaOH水溶液中4℃浸泡20分钟。
实际应用中，0.5M-4M NaOH水溶液均可。
实际应用中，2℃-16℃均可。
实际应用中，浸泡5分钟-60分钟均可。
5、取完成步骤4的组织，置于去离子水中4℃浸泡(每5分钟更换去离子水，共换水19次，最后一次换水5分钟后完成本步骤)。
实际应用中，2℃-16℃均可。
实际应用中，可每3分钟-10分钟更换去离子水，共换水15次-25次。
6、取完成步骤5的组织，进行36小时的冷冻干燥，得到干燥组织。
实际应用中，12小时-72小时均可。
7、称取3g步骤6得到的干燥组织，溶于150ml 4℃预冷的0.5M醋酸水溶液中，4℃搅拌48小时。
实际应用中，可采用取1g-5g步骤6得到的干燥组织。
实际应用中，可采用100ml-500ml醋酸水溶液。
实际应用中，可采用0.05M-1M醋酸水溶液。
实际应用中，2℃-16℃预冷均可。
实际应用中，2℃-16℃搅拌24小时-72小时均可。
8、将完成步骤7的整个体系转移到透析袋(透析袋截留分子量为50kDa)中，将透析袋放入去离子水中，4℃透析10天(每天更换去离子水3次)。
实际应用中，可采用截留分子量为3000Da-100kDa的透析袋。
实际应用中，2℃-16℃均可。
实际应用中，5天-15天均可。
9、完成步骤8后，收集透析袋内的整个体系，进行36小时的冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料。
实际应用中，冷冻干燥采用12小时-72小时均可。
10、取3g步骤9得到的干粉，用100ml生理盐水溶解，得到凝胶状胶原材料。
实际应用中，也可采用磷酸盐缓冲液代替生理盐水作为溶剂。
实际应用中，干粉和溶剂的配比为可为：1-4g：100ml。
实施例2、脐带间充质干细胞的分离培养
1、将离体的人脐带剪成2cm左右的小段，用DPBS缓冲液洗3遍，至无血液存在。
2、完成步骤1后，取脐带段，剔除3根血管(两根脐动脉，一根脐静脉)。
3、完成步骤2后，取脐带段，剪碎，得到约1mm3组织块。
4、取步骤3得到的组织块，用细胞培养液悬浮，得到50个组织块/ml的组织悬液，将2ml组织悬液加至T25细胞培养瓶中，将培养瓶置于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养直至细胞爬出(3-7天)。
5、完成步骤4后，向所述细胞培养瓶中加入10ml细胞培养液，继续置于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养，直至达到80％-90％汇合度。
6、完成步骤5后，收集细胞，即为原代脐带间充质干细胞。
7、进行持续传代。原代脐带间充质干细胞传代得到第1代脐带间充质干细胞，第1代脐带间充质干细胞传代得到第2代脐带间充质干细胞，第2代脐带间充质干细胞传代得到第3代脐带间充质干细胞。
每次传代的方法均为：用胰酶消化细胞，然后用细胞培养液悬浮，然后接种至细胞培养瓶中，然后将培养瓶置于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养，直至达到80％-90％汇合度。
实施例3、附着有脐带间充质干细胞的胶原材料的制备和表征
1、收集实施例2得到的第3代脐带间充质干细胞，用细胞培养液悬浮，得到20000个细胞/ml的细胞悬液。
2、将1ml步骤1得到的细胞悬液和2ml实施例1制备的凝胶状胶原材料混匀，然后加入10ml细胞培养液，静置孵育20分钟。
3、完成步骤2后，分离凝胶和液相，检测液相中的细胞浓度，计算液相中的细胞数量。
2ml实施例1制备的凝胶状胶原材料负载的细胞数量＝20000-液相中的细胞数量。
进行五次重复试验，结果取平均值。
2ml实施例1制备的凝胶状胶原材料负载的细胞数量为15334个细胞。
实施例4、附着有脐带间充质干细胞的胶原材料的应用
小鼠卵巢组织：从出生3天的C57BL/6小鼠中分离得到的整个卵巢。
小鼠卵巢组织分为四组，分别处理如下：
第一组：将小鼠卵巢组织置于100ml基础培养基中进行培养；
第二组：将小鼠卵巢组织置于100ml培养基甲中进行培养；
第三组：将小鼠卵巢组织置于100ml培养基乙中进行培养；
基础培养基：含有10％(体积比)胎牛血清、3mg/mL牛血清白蛋白、0.23mM丙酮酸、0.06IU/mL FSH(Merck Serono)、100IU/mL青霉素和50μg/mL链霉素的Waymouth mediumMB752/1培养基；
培养基甲的制备方法：将实施例2得到的第3代脐带间充质干细胞加至基础培养基中，使其浓度为3×104个细胞/ml；
培养基乙的制备方法：将实施例2得到的第3代脐带间充质干细胞和实施例1制备得到的干粉状胶原材料加至基础培养基中，使细胞的浓度为3×104个细胞/ml，干粉状胶原材料的浓度为3g/100ml；
培养条件：置于37℃、5％CO2的培养箱中。
培养6小时后，取卵巢组织，用10％福尔马林固定12小时，用免疫组化方法检测相关分子的表达。用于检测p-AKT的一抗购自Cell signaling,货号4060。用于检测P-Foxo3的一抗购自Abcam公司，货号ab31109。用于检测p-Foxo1的一抗购自Abcam公司，货号ab131339。
结果见图1。与第一组相比，第二组和第三组以上3种蛋白的表达水平都有显著上升，以第三组上升最为显著。
实施例5、附着有脐带间充质干细胞的胶原材料的应用
一、卵巢早衰小鼠模型制备(采用本领域内通用的经典卵巢早衰模型)
选择6周龄成年雌性C57BL/6小鼠，试验第1天至第15天，连续15天每天腹腔内注射环磷酰胺CTX(C3250000，sigma)，注射剂量40mg/kg/d。
完成上述步骤的小鼠称为模型动物。
二、分组给药
试验第16天，用水合氯醛(4ml/kg)麻醉模型动物，卧位固定并备皮。使用背部微切口暴露卵巢。通过卵巢的最大横截面将药物注射入卵巢核心，然后缝合。
各组动物分组给药(单次给药)如下：
PBS组(10只动物)：每只动物注射10μl PBS缓冲液；
胶原组(10只动物)：每只动物注射10μl实施例1制备的凝胶状胶原材料；
UC-MSCs组(10只动物)：每只动物注射10μl细胞悬液(细胞悬液是将实施例2得到的第3代脐带间充质干细胞用PBS缓冲液悬浮得到的，含有2×105个细胞)；
胶原/UC-MSCs组(10只动物)：每只动物注射10μl细胞凝胶(细胞凝胶是将实施例2得到的第3代脐带间充质干细胞、实施例1制备的干粉状胶原材料和PBS缓冲液混合得到的；细胞凝胶中，细胞浓度为2×105个细胞/10μl，干粉状胶原材料的浓度为3g/100ml)；
三、激素水平检测
从试验第30天开始，每天制作阴道涂片，连续2周或一个动情周期。
试验第43天后，小鼠在发情期间用水合氯醛麻醉，从眶后静脉丛收集血液。采用ELISA试剂盒(YANYU，Shanghai，China)测定血清雌二醇(E2)浓度，采用用ELISA试剂盒(CEA228Mu，Cloud-Clone Corp，武汉，中国)测定血清抗缪勒氏激素(AMH)浓度。然后处死小鼠，检测卵巢重量和卵巢中的卵泡数量。
动情周期(该组平均值)：PBS组小鼠为6.33天，胶原组小鼠为6.08天，UC-MSCs组小鼠为4.78天，胶原/UC-MSCs组小鼠为4.53天。胶原/UC-MSCs组动情周期时间最短。
雌二醇浓度(该组平均值)：PBS组小鼠为91.73pmol/L，胶原组小鼠为93.06pmol/L，胶原/UC-MSCs组小鼠为111.37pmol/L。胶原/UC-MSCs组雌二醇浓度最高。
抗缪勒氏激素浓度(该组平均值)：PBS组小鼠为511.23±106.61pg/mL，胶原组小鼠为464.63±42.46pg/mL，UC-MSCs组小鼠为537.18±77.33pg/mL，胶原/UC-MSCs组小鼠为620.57±80.88pg/mL。胶原/UC-MSCs组抗缪勒氏激素浓度浓度最高。
卵巢重量(该组平均值)：PBS组小鼠为27.83×10-4g，胶原组小鼠为31.88×10-4g，胶原/UC-MSCs组小鼠为37.32×10-4g。胶原/UC-MSCs组卵巢重量最大。
卵巢中的卵泡数量(该组平均值)：始基卵泡数，PBS组为75个，胶原组为63.33个，胶原/UC-MSCs组为190个；初级卵泡数，PBS组为75个，胶原组为95个，胶原/UC-MSCs组为164.17个；二级卵泡数，PBS组为61.67个，胶原组为67.5个，胶原/UC-MSCs组为135.83个；窦状卵泡数，PBS组为18.33个，胶原组为26.67个，胶原/UC-MSCs组为67.5个。胶原/UC-MSCs组各级卵泡数量均显著高于其他组。
四、卵泡形态学观察
将卵巢固定在Bouin溶液中4-6小时，然后脱水并包埋在石蜡中，制作5μm厚的切片，用苏木精和曙红(HE)染色，观察卵泡成熟情况。
结果见图2。结果显示，胶原/UC-MSCs组卵泡数量显著高于其他组。
Claims (10)
1.一种产品，包括间充质干细胞和胶原材料；
所述胶原材料的制备方法包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
2.如权利要求1所述的产品，其特征在于：
所述胶原材料的制备方法还包括如下步骤(10)：取步骤(9)得到的干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料。
3.一种负载间充质干细胞的胶原材料，其制备方法包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)取干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料；
(11)将间充质干细胞负载于所述凝胶状胶原材料，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
4.一种负载间充质干细胞的胶原材料，其制备方法包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)将干粉状胶原材料、间充质干细胞和溶剂混合，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
5.一种负载间充质干细胞的胶原材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)取干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料；
(11)将间充质干细胞负载于所述凝胶状胶原材料，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
6.一种负载间充质干细胞的胶原材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
(10)将干粉状胶原材料、间充质干细胞和溶剂混合，得到负载间充质干细胞的胶原材料。
7.一种产品，包括权利要求3或4所述的负载间充质干细胞的胶原材料；所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
8.间充质干细胞和胶原材料在制备产品中的应用；
所述胶原材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取牛腱子肉，去除脂肪和肌肉，得到肌腱组织，用水清洗；
(2)取完成步骤(1)的组织，置于丙酮中浸泡；
(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；
(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；
(6)取完成步骤(5)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；
(7)取步骤(6)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液；
(8)将完成步骤(7)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；
(9)完成步骤(8)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料；
所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：
所述胶原材料的制备方法还包括如下步骤(10)：取步骤(9)得到的干粉状胶原材料，用溶剂溶解，得到凝胶状胶原材料。
10.权利要求3或4所述的负载间充质干细胞的胶原材料在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)和/或(d)和/或(e)和/或(f)：
(a)治疗卵巢功能减退性疾病；
(b)治疗卵巢早衰；
(c)促进早衰卵巢的功能恢复；
(d)促进卵巢分泌雌二醇；
(e)促进卵巢分泌抗缪勒氏激素；
(f)增加卵巢中的卵泡数量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810140927.3A CN110151789B (zh) | 2018-02-11 | 2018-02-11 | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810140927.3A CN110151789B (zh) | 2018-02-11 | 2018-02-11 | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110151789A true CN110151789A (zh) | 2019-08-23 |
| CN110151789B CN110151789B (zh) | 2021-02-26 |
Family
ID=67634950
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810140927.3A Active CN110151789B (zh) | 2018-02-11 | 2018-02-11 | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110151789B (zh) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1511592A (zh) * | 2002-12-30 | 2004-07-14 | 中国皮革和制鞋工业研究院 | 一种含有表皮生长因子的皮肤组织工程支架的构建方法 |
| CN1796545A (zh) * | 2004-12-24 | 2006-07-05 | 于海鹰 | 干细胞与胶原促生脑组织的制备及应用 |
| CN101363040A (zh) * | 2008-09-19 | 2009-02-11 | 无锡贝迪生物工程有限公司 | 胶原蛋白的制备方法 |
| CN101628938A (zh) * | 2009-08-12 | 2010-01-20 | 江苏省海洋资源开发研究院 | 大分子胶原蛋白提取工艺 |
| CN103816184A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-05-28 | 中国福利会国际和平妇幼保健院 | 皮肤来源间充质干细胞在制备促进卵巢功能修复药物中的应用 |
| CN104958319A (zh) * | 2015-06-01 | 2015-10-07 | 成都清科生物科技有限公司 | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 |
| CN105327392A (zh) * | 2014-08-08 | 2016-02-17 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种有序胶原材料及其制备方法与应用 |
| CN105524965A (zh) * | 2016-02-26 | 2016-04-27 | 福建华灿制药有限公司 | 一种牛肌腱胶原蛋白的提取方法 |
| CN105601731A (zh) * | 2014-09-03 | 2016-05-25 | 浙江百谷医疗科技有限公司 | 纯化牛跟腱胶原蛋白的方法及其海绵的制备 |
| CN105663168A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-06-15 | 深圳爱生再生医学科技有限公司 | 用于修复卵巢功能的细胞制剂 |
-
2018
- 2018-02-11 CN CN201810140927.3A patent/CN110151789B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1511592A (zh) * | 2002-12-30 | 2004-07-14 | 中国皮革和制鞋工业研究院 | 一种含有表皮生长因子的皮肤组织工程支架的构建方法 |
| CN1796545A (zh) * | 2004-12-24 | 2006-07-05 | 于海鹰 | 干细胞与胶原促生脑组织的制备及应用 |
| CN101363040A (zh) * | 2008-09-19 | 2009-02-11 | 无锡贝迪生物工程有限公司 | 胶原蛋白的制备方法 |
| CN101628938A (zh) * | 2009-08-12 | 2010-01-20 | 江苏省海洋资源开发研究院 | 大分子胶原蛋白提取工艺 |
| CN103816184A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-05-28 | 中国福利会国际和平妇幼保健院 | 皮肤来源间充质干细胞在制备促进卵巢功能修复药物中的应用 |
| CN105327392A (zh) * | 2014-08-08 | 2016-02-17 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种有序胶原材料及其制备方法与应用 |
| CN105601731A (zh) * | 2014-09-03 | 2016-05-25 | 浙江百谷医疗科技有限公司 | 纯化牛跟腱胶原蛋白的方法及其海绵的制备 |
| CN104958319A (zh) * | 2015-06-01 | 2015-10-07 | 成都清科生物科技有限公司 | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 |
| CN105663168A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-06-15 | 深圳爱生再生医学科技有限公司 | 用于修复卵巢功能的细胞制剂 |
| CN105524965A (zh) * | 2016-02-26 | 2016-04-27 | 福建华灿制药有限公司 | 一种牛肌腱胶原蛋白的提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SUN J等: "Transplantation of adipose-derived stem cells combined with collagen scaffolds restores ovarian function in a rat model of premature ovarian insufficiency", 《HUMAN REPRODUCTION》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110151789B (zh) | 2021-02-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4751005B2 (ja) | 三次元皮膚モデル | |
| CN110352240A (zh) | 围产期组织衍生的间充质干细胞：其制备方法和用途 | |
| CN108057116A (zh) | 干细胞组合物在皮肤损伤治疗药物中的应用 | |
| CN110478368A (zh) | 脐带间充质干细胞条件培养基的用途 | |
| CN109893541A (zh) | 经血干细胞来源的外泌体在制备治疗宫腔粘连的药物中的应用 | |
| Ding et al. | Galectin-1-induced skeletal muscle cell differentiation of mesenchymal stem cells seeded on an acellular dermal matrix improves injured anal sphincter | |
| Bekhite et al. | Differential effects of high and low strength magnetic fields on mouse embryonic development and vasculogenesis of embryonic stem cells | |
| US20150110891A1 (en) | Cell Homogenate From Stem Cells Derived From Growing Deer Antlers, A Method Of Obtaining It And Its Use | |
| CN107899015A (zh) | 药物组合物在调节成纤维细胞生长中的用途 | |
| Ark et al. | Cellular survival and proliferation in autogenous flexor tendon grafts | |
| CN113846064A (zh) | 一种fgf18基因修饰的间充质干细胞及其制备方法和应用 | |
| CN108066750A (zh) | 干细胞及其分泌物用于治疗皮肤烧烫伤的新用途 | |
| CN113101303A (zh) | 自发性凋亡的间充质干细胞的制备方法及用途 | |
| Sondergaard et al. | Human thymus mesenchymal stromal cells augment force production in self-organized cardiac tissue | |
| Hansen et al. | Granulosa cell steroidogenesis and follicular fluid steroid concentrations after the onset of oestrus in cows | |
| Liang et al. | Perfusable adipose decellularized extracellular matrix biological scaffold co-recellularized with adipose-derived stem cells and L6 promotes functional skeletal muscle regeneration following volumetric muscle loss | |
| CN109381743A (zh) | 3d打印人造子宫内膜及其制备方法和应用 | |
| CN110151789A (zh) | 一种用于治疗卵巢早衰的产品 | |
| CN108066824A (zh) | 一种制备表皮缺损治疗药物的新方法 | |
| Ilan et al. | Alpha melanocyte stimulating hormone (α-MSH) enhances eicosanoid production by bovine retinal pigment epithelium | |
| CN114848792B (zh) | 基于子宫内膜干细胞的阴道修复凝胶、制备方法及应用 | |
| Flaxman | Cell identification in primary cell cultures from skin | |
| CN104740613B (zh) | 脂联素在制备治疗骨折的药物中的应用 | |
| CN110090228A (zh) | 人羊膜上皮细胞在自身免疫性疾病中的治疗用途 | |
| CN115025034A (zh) | 一种间充质干细胞外泌体组合物及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |