CN110122868B - 一种臭参酵素、臭参酵素饮品及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种臭参酵素、臭参酵素饮品及制备方法，属于保健发酵饮品的研制和开发领域。本发明通过原料预处理、分步酶解、限制性微耗氧发酵过程、厌氧发酵、后发酵、溶菌破碎、过滤除菌、脱盐处理等步骤得到产品。基于仿生学的思想，模仿食物组分在人体内的消化、结直肠发酵过程，在臭参酵素口服液制备的过程中采用“分步酶解+三段式发酵”的菌酶协同策略，提高了发酵效率。酵素口服液更易于人体消化吸收。本发明制得的酵素产品风味独特，营养物质丰富，含有丰富的短链脂肪酸和多酚类物质，具有改善肠道微环境、抑制肠道有害菌，预防结直肠癌的效果，符合人们对于酵素的健康、美味的追求，具有较高的经济价值和商业推广价值。

Description

一种臭参酵素、臭参酵素饮品及制备方法
技术领域
本发明涉及一种酵素，尤其是涉及一种臭参酵素、臭参酵素饮品及制备方法。
背景技术
臭参又叫臭药、云南参，据文献报道，桔梗科党参属植物管钟党参(Codonopsisbulleyana)、小花党参(C.micrantha)、球花党参(C.subglobosa)、缠绕党参(C.pilosula)、拟心叶党参(C.cordifolioidea)的根等均被称为臭参或滇产臭参。臭参地上部分鲜重占总体的质量分数为64.29％、干重为55.91％。臭参根部含有丰富的药理学功效成分维生素B和微量元素，与其它食、药用根茎类相比，维生素B含量高3～84倍。现代药理学研究表明臭参营养成分丰富，具有加强胃肠蠕动、保护胃黏膜，抗衰老、抗肿瘤，提高血红蛋白和耐缺氧能力，提高营养物质利用率，提高免疫功能，减少过敏发生，降低癌症的发病率等功能。结合其资源和生态优势、市场和科研成果分析来看，臭参具有很高的开发利用价值，表现出较高的食用、保健、药用价值。
酵素是以植物、菌类等为原料，经微生物发酵制得的含有特定生物活性成分的产品。当今市场上最常见的酵素产品是以植物作为原料制作的，并含有丰富的生物酶、矿物质、维生素以及次生代谢产物等的功能性生物发酵产品，具有抗菌、消炎、抗衰老、增强机体免疫能力、净化血液及解毒抗癌等多种保健功能。发酵的微生物主要是酵母菌、乳酸菌、醋酸菌等。这些益生菌通过自身的中间代谢，使发酵基质产生一系列复杂的生物化学变化，实现三大物质(糖类、脂质、蛋白质)之间的相互转化，或为产生新的生理物质提供前体物质。在自然的生态环境下微生物生长所需的营养物质经常是不丰富和不平衡的，一些次级代谢产物具有富集营养物质的作用。植物中含有黄酮类、酚类、没食子酸、花青素等物质，发酵后可以增加这些物质释放及转化，增强功效。酵素的作用来源于原料本身与微生物代谢合成的物质，发酵底物在益生菌的作用下可以改善发酵基质原有的一些不良风味，并且产生新的功能成分，增强酵素食品的保健作用。
中国专利CN201910156395.7提供了一种结合复合酶解的两步式蛹虫草酵素的发酵制备方法。该专利利用复合酶解协同乳酸菌发酵，再经过酵母菌的二次发酵，可以在2～3天的时间内快速完成整个发酵过程，得到的蛹虫草酵素酸甜可口、风味独特、悬浮稳定性好，并能很好地保留虫草素这一重要活性成分，具有抗氧化性和提高免疫力的功能。该发明的复合酶与乳酸菌共发酵，酶解的效率会受到发酵进程的影响导致酶解效率低下，且该发明仅利用乳酸菌和酵母菌进行发酵，发酵产物较为单一，发酵液中酒精含量不易控制。另外该发明对产品进行了巴氏杀菌，终产品的热敏性生物活性物质减少。
中国专利CN201910132413.8提供了一种米糠益生菌酵素的制备方法。该发明是以米糠粉、雪莲果粉、赤砂糖、蜂蜜、菊粉和水为原料，经超声处理后得到米糠发酵液，以嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母菌的混合菌株为发酵菌株，厌氧条件下发酵得米糠益生菌酵素，具有预防结肠炎的效果。该发明原料前经高温膨化处理，生物活性物质丧失较多；终产品未经调配，口味欠佳。
中国授权专利ZL201610048532.1提供了一种复合木瓜酵素及其生产方法。该发明利用木瓜皮、木瓜籽、陈皮、女贞子、酸枣仁、玫瑰茄、冰糖、食盐制备了一种木瓜酵素。该木瓜酵素口感酸甜，风味独特，还具有滋阴和滋补肝肾、通便等功效。该发明采用自然发酵形式，发酵效率较低，发酵过程不易控制、发酵过程及产品易染病原菌等。
中国授权专利201510976037.2提供了一种牡丹酵素及制备方法和应用。该发明以牡丹花、或复配牡丹皮、牡丹饼粕中的一种或两种为原料，经过物料处理、低温灭菌、研磨打浆、三个过程发酵(酵母菌发酵、乳酸菌发酵、纳豆菌发酵)、后熟、过滤、超高静压灭菌等制备牡丹酵素。该牡丹酵素具有降低胆固醇、降血压、排毒养颜、抗疲劳、增强人体免疫力、调节人体生理机能等功效优势。该发明涉及的低温真空浓缩、超高静压灭菌等成本高昂，不易大规模推广应用。
中国授权专利201610414791.1提供一种南酸枣酵素及其制备方法，其克服了现有技术缺陷，包括发酵原料和糖分各组分原料，加入混合菌种发酵制成南酸枣综合酵素，生产工艺简单，产品营养价值高。该发明采用是半固态发酵，生产发酵效率远低于液体发酵。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种臭参酵素、臭参酵素饮品及制备方法。
本发明基于仿生学思想，利用分步酶解、人源化肠道益生菌三段式发酵技术等策略提供臭参酵素、臭参酵素饮品口服液及其制备方法，属于保健发酵饮品的研制和开发领域。
本发明提供的臭参酵素或臭参酵素饮品具有改善胃肠道环境、促进肠道有益菌生长、预防结肠癌、提高免疫力、增强体质、保障健康等功能，臭参酵素饮品酸甜可口、风味独特、悬浮稳定性好，生物活性物质丰富，具有很高的商业价值和推广价值。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明第一方面，提供一种臭参酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)臭参预处理：臭参打浆，过滤，杀菌，得无菌臭参汁；
(2)无菌臭参汁的分步酶解：调节无菌臭参汁体系pH为5.4～6.4，加入复合酶进行第一步酶解，调节第一步酶解的酶解液pH至1.6，加入胃蛋白酶进行第二步酶解，酶解结束后，利用调整体系pH为6.4～7.4，进行灭酶处理，得到无菌臭参酶解液，无菌保存，备用；
(3)臭参酵素主发酵过程：
(31)限制性微耗氧发酵过程：向步骤(2)得到的无菌臭参酶解液中加入过夜活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)复合种子液，进行发酵，发酵体系氧气含量控制≤5％；
(32)厌氧发酵过程：向步骤(31)得到的发酵液中加入发酵助剂，混合均匀，并接入活化的普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗斯氏菌属(Roseburiacecicola)、双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)复合种子液，进行发酵，发酵体系氧气含量控制≤0.5％；
(4)后发酵过程：在步骤(32)后所得发酵液中加入低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖，再进行后发酵过程，发酵体系氧气含量控制≤5％；
(5)溶菌破碎：过滤步骤(4)的发酵液，调节体系pH值为4.2～5.0，将发酵液进行均质，向均质后的发酵液加入溶菌酶进行酶解，酶解结束后进行超声破碎；
(6)过滤除菌，将步骤(5)处理后的发酵过滤冷除菌，得到滤过夜；
(7)脱盐处理：对步骤(6)的得到的滤过液进行脱盐处理。
进一步地，步骤(1)中，所述臭参优选为滇产臭参。
进一步地，步骤(1)中，挑选品相较好、无霉变的臭参，去离子水清洗3～5次，沥干水分进行晾晒5～8h；将晾晒完成的臭参切成1.5～3cm的小段，按照料液比1：3～1：5进行打浆后，25目滤袋过滤，75℃巴氏杀菌30min得无菌臭参汁，备用。
进一步地，步骤(2)中，进行第一步酶解前，用混合酸溶液调节无菌臭参汁体系pH，所述混合酸溶液包括柠檬酸、苹果酸、醋酸、盐酸，柠檬酸、苹果酸、醋酸、盐酸混合体积比为3：0.5：1.5：5，所述混合酸溶液浓度优选为5mol/L。
进一步地，步骤(2)中，所述复合酶包括100 000U/g纤维素酶、50 000U/g半纤维素酶、50 000U/g木聚糖酶、100 000U/g果胶酶，100 000U/g纤维素酶、50 000U/g半纤维素酶、50 000U/g木聚糖酶、100 000U/g果胶酶的质量比为4：2：2：2。
进一步地，步骤(2)中，所述复合酶加入量为0.05％～0.1％(w/w)。
进一步地，步骤(2)中，进行第一步酶解的条件为：酶解时间控制在3.5h，酶解温度为35℃～40℃。
进一步地，步骤(2)中，用混合酸溶液调节调节第一步酶解的酶解液pH，所述混合酸溶液包括柠檬酸、苹果酸、醋酸、盐酸，柠檬酸、苹果酸、醋酸、盐酸混合体积比为3：0.5：1.5：5(v/v)，所述混合酸溶液浓度优选为5mol/L。
进一步地，步骤(2)中，所述胃蛋白酶的浓度为250 000U/mg，所述胃蛋白酶加入量为0.25～0.5％(w/w)。
进一步地，步骤(2)中，进行第二步酶解的条件为：酶解2h，酶解温度37℃。
进一步地，步骤(2)中，酶解结束后，利用5mol/L氢氧化钠溶液调整体系pH。
进一步地，步骤(2)中，将酶解体系温度升至95℃，保持时间为3min进行灭酶处理。
进一步地，步骤(31)中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)复合种子液浓度为1*109～5*109CFU/mL，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)复合比例为2：4：4(v/v)；
进一步地，步骤(31)中，复合种子液接种量为0.5％～1.0％(v/v)；
进一步地，步骤(31)中，发酵的条件为：发酵温度控制在32℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，发酵周期为5天。
进一步地，步骤(32)中，所述发酵助剂及其添加量为0.002％氯化血红素(w/w)，0.05％～0.08％胆汁盐(w/w)，0.001％～0.003％维生素K10(w/w)。
进一步地，步骤(32)中，普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗斯氏菌属(Roseburia cecicola)、双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)复合种子液浓度为1*109～5*109CFU/mL，普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗斯氏菌属(Roseburia cecicola)、双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)复合比例为3：3：4(v/v)；
普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗斯氏菌属(Roseburiacecicola)、双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)复合种子液接种量为0.3％～0.5％(v/v)。
进一步地，步骤(32)中，普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗斯氏菌属(Roseburia cecicola)、双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)复合种子液活化过程为：配置一定量的厌氧培养培养基(培养基组成为0.8％氯化钠溶液、0.02％氯化钾、0.115％磷酸氢二钠、0.02％磷酸二氢钾、0.05％L-半胱氨酸、0.2％蛋白胨、0.2％酵母提取物，以上组成比例均为w/w)调节pH至7.4，121℃高压灭菌30min，接种量为1％(v/v)，活化温度为37℃，活化时间为18～24h。
进一步地，步骤(32)中，发酵的条件为：发酵温度控制在37℃，发酵体系氧气含量控制≤0.5％，发酵周期为3～5天。
进一步地，步骤(4)中，低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖选自几丁类寡糖或分子量低于5kDa的低分子量壳聚糖中的一种或几种。
进一步地，所述几丁类寡糖包括壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖、壳八糖、壳九糖、壳十糖、壳十一糖、壳十二糖、壳十三糖、壳十四糖、壳十五糖、壳十六糖、壳十七糖、壳十八糖、壳十九糖、壳二十糖、几丁二糖、几丁三糖、几丁四糖、几丁五糖、几丁六糖、几丁七糖、几丁八糖、几丁九糖、几丁十糖、几丁十一糖、几丁十二糖、几丁十三糖、几丁十四糖、几丁十五糖、几丁十六糖、几丁十七糖、几丁十八糖、几丁十九糖、几丁二十糖)。
进一步地，步骤(4)中，低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖加入量为1％～3％(w/w)。
进一步地，步骤(4)中，低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖加入后，进行搅拌，搅拌转速在50～80rpm/min，搅拌时间为2～3h。
进一步地，步骤(4)中，进行后发酵的条件为：后发酵温度控制在在4℃～16℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，后发酵时间控制在10～15天。
进一步地，步骤(5)中，利用100～150目滤袋过滤步骤(4)的发酵液。
进一步地，步骤(5)中，利用5mol/L氢氧化钠溶液调节体系pH值为4.2～5.0；调节pH值的条件为：搅拌转速300rpm/min，氢氧化钠流加速度0.5～0.8mL/min至体系pH值为4.2～5，调整后静置2h。
进一步地，步骤(5)中，将发酵液打入高速均质机进行均质，均质时间15min，均质压力30MPa，均质温度控制在30℃。
进一步地，步骤(5)中，向均质后的发酵液加入0.05％～0.1％(w/w)溶菌酶。
进一步地，步骤(5)中，酶解的条件为：酶解时间控制0.5～1.0h，酶解温度控制在37℃。
进一步地，步骤(5)中，超声破碎的条件为：破碎功率300W，5min，每分钟超声20次，超声2s，停1s，超声温度25～35℃。
进一步地，步骤(6)中，将步骤(5)处理后的发酵液进行0.45微米膜过滤冷除菌，膜过滤温度≤35℃，过滤方式为死端过滤，膜材质为醋酸-硝酸混合纤维素(CA-CN)、聚苯乙烯(PS)或聚四氟乙烯(PTFE)中的一种。
进一步地，步骤(7)中，利用电渗析设备对步骤(6)的得到的滤过液进行脱盐处理，电渗析设备压力控制在0.04～0.06Mpa，电流控制在0.005～0.01A，12V膜电压下进行脱盐，脱盐体系温度控制≤30℃。
本发明第二方面，提供一种臭参酵素，为采用本发明第一方面所述制备方法制备得到脱盐后的发酵液，或将发酵液干燥处理后所得物质。
本发明第三方面，提供一种臭参酵素饮品的制备方法，采用本发明第一方面所述制备方法制备得到脱盐后的发酵液，还进行以下步骤：
(8)调配：在步骤(7)脱盐后的发酵液中加入悬浮剂、稳定剂和营养补充剂，搅拌混合均匀；
(9)无菌灌装：将调配好的臭参酵素饮品均质、脱气进行无菌灌装，即得终产品。
进一步地，步骤(8)中，在步骤(7)脱盐后的发酵液中加入0.05％～0.08％悬浮剂(w/w)、0.5％～3％稳定剂(w/w)和适宜含量的营养补充剂，
所述营养补充剂及添加量为：牛磺酸：0.01～0.05％(w/w)，酵母β-葡聚糖：0.02～0.05％(w/w)，低聚果糖：0.5～0.75％(w/w)。
进一步地，步骤(8)中，所述悬浮剂为琼脂、果胶、结冷胶的混合物，琼脂、果胶、结冷胶混合质量比为5：3：2。
进一步地，步骤(8)中，所述稳定剂为柠檬酸、苹果酸、琥珀酸的混合物，柠檬酸、苹果酸、琥珀酸的混合质量比为5：4：1。
进一步地，步骤(8)中，混合罐搅拌转速控制在120～150rpm/min，混合时间4～6h，混合温度≤30℃。
本发明第四方面，提供一种臭参酵素饮品，采用本发明第三方面所述制备方法制备得到。
进一步，所述臭参酵素饮品包括臭参酵素口服液、臭参酵素饮料等。
本发明提供的臭参酵素或臭参酵素饮品中含有丰富的短链脂肪酸(如乙酸、丙酸、丁酸)和乳酸对改善肠道微环境、抑制有害菌生长、促进有益菌生长、预防结直肠炎有较好的效果。动物实验证明循环短链脂肪酸可以通过血脑屏障，作为肠-脑轴(Gut-Brain Axis)的信号分子，直接为神经细胞提供能量；短链脂肪酸直接调控胰岛β细胞的数量和功能，增加单糖吸收和转移至肝门静脉循环，调节宿主的能量平衡和代谢；短链脂肪酸能够直接调控小鼠结肠调节性T细胞的数目与功能，治疗结肠炎和非酒精性脂肪肝。其中，乙酸盐和丙酸盐作为肝脏糖异生的益生的底物、通过肠道吸收进入肝静脉系统，促进肝糖异生等代谢，为肝脏代谢提供接近30％代谢所需能量。丁酸盐使肠道上皮细胞的能量来源，有保持肠黏膜健康，抑制炎症和肠道癌症的效果。有研究显示，服用产丁酸菌或乙酸菌可有效预防、控制糖尿病。乳酸作为厌氧发酵的产物，有酸化肠道环境、改善结肠部位供氧、促进有益菌生长的作用。在臭参发酵过程中，各种短链脂肪酸、乳酸及其他发酵产生的生理活性物质存在复杂关系，配比天然，使臭参酵素或臭参酵素饮品益生作用增强。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)基于仿生学的思想，模仿食物在人体内的消化、结肠发酵过程，在臭参酵素口服液制备的过程中采用“分步酶解+三段式发酵”，菌酶协同，提高了发酵效率，得到酵素口服液更易于人体消化吸收，且风味独特，营养物质丰富；
(2)在营养学理论和实践指导下精选配方，在后发酵过程中加入了天然海洋氨基寡糖，提高发酵产物的丰富度，促进复合菌种的生长，在调配过程中加入牛磺酸、酵母β-葡聚糖、低聚果糖，充分糅合添加食物配料和发酵液中的功能活性成分，提高保健效果；
(3)在酵素口服液制备的过程中，采用了溶菌破碎和膜过滤冷除菌，使发酵过程中菌体中的营养物质尽可能的释放的同时，尽可能的提高发酵过程中的热敏性物质的生理活性；
(4)在本酵素口服液制备的过程中，加入了脱盐步骤，降低了酵素中的盐度，使酵素更健康。
与中国专利CN201910156395.7相比，本发明采用复合纤维素酶和仿生胃液进行分步酶解，大大提高了营养物质的溶出和高分子物质的降解；本发明采用的人源化益生菌三段式厌氧发酵使发酵产物更加丰富多样，贴合人体特性，易于人体消化和吸收；本发明对终产物进行膜过滤的冷杀菌技术，提高了热敏性营养物质的生物活性。
与中国专利CN201910132413.8相比，本发明仿生化分步酶解提高了原料利用率，后续经调配脱盐，口味独特，营养健康。
与中国授权专利ZL201610048532.1相比，本发明采用的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)、普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗斯氏菌属(Roseburia cecicola)、双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)复合菌种，进行三段式发酵，发酵产物过程易于控制，感染病原菌的机率大大减少。
与中国授权专利201510976037.2相比，本发明涉及的原料预处理、酶解、主发酵、后发酵、调配等工段工业化成本较低，易于规模应用，具有较高的推广和商业价值。
与中国授权专利201610414791.1相比，本发明涉及的原料经两步酶解，三段式液体发酵，发酵效率较高且原料发酵较为彻底。
综上所述，本发明利用臭参的原料特性，采用分步酶解和三段式发酵对预处理的臭参进行深度发酵，提高了营养物质的利用率，并产生益生元类物质，使其更容易消化吸收，具有改善肠道环境、抑制有害菌、消炎、抗衰老、增强机体免疫能力等功能。
附图说明
图1是本发明的主要技术路线图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
以下实施例中的原料均为市售，均能通过购买得到。其中：臭参购自云南省寻甸县金源乡市场。低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖购自惠州长龙生物科技有限公司，纯度≥90％。其他涉及的加工助剂及食品添加剂均为市售，均通过购买即可得到。其中：牛磺酸、酵母β-葡聚糖、低聚果糖的纯度需≥95％。
实施例中涉及的发酵菌种植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌均为普通市售菌株，不涉及菌种保藏。
实施例中涉及的测试菌种大肠杆菌来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心(保藏编号CGMCC 1.2135)、阪崎克罗诺杆菌来自德国微生物保藏中心(保藏编号DSM 18702)、粪肠球菌来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心(保藏编号CGMCC 1.15424)
实施例中涉及的复合酸溶液为5mol/L柠檬酸、苹果酸、醋酸、盐酸混合溶液(3：0.5：1.5：5，v/v)，食品级。
实施例中涉及的种子活化培养基组成及制备方法为：准确称取0.008kg氯化钠溶液、0.0002kg氯化钾、0.00115kg磷酸氢二钠、0.0002kg磷酸二氢钾、0.0005kg L-半胱氨酸、0.002kg蛋白胨、0.002kg酵母提取物，加水定容至1L，调节pH至7.4，121℃灭菌30min，以上涉及试剂均为食品级。
实施例中涉及的电渗析脱盐设备为常规12V电渗析设备，通过市售可得到。
实施例1
参考图1，一种滇产臭参酵素口服液制备方法的步骤如下：
(1)挑选品相较好、无霉变的臭参，去离子水清洗3次，沥干水分进行晾晒5h；将晾晒完成的120kg臭参切成1.5cm的小段，按照料液比1：3进行打浆后，25目滤袋过滤，弃滤渣，滤液经巴氏杀菌75℃，30min后，量取300L无菌臭参汁，备用。
(2)利用复合酸混合溶液调节无菌臭参汁体系pH为5.4，加入0.15kg复合酶(纤维素酶(100 000U/g)、半纤维素酶(50 000U/g)、木聚糖酶(50 000U/g)、果胶酶(100 000U/g)，混合比例为4：2：2：2，(w/w))进行第一步酶解，酶解时间控制在3.5h，酶解温度为35℃。利用复合酸混合溶液调节第一步酶解的酶解液pH至1.6，加入0.75kg胃蛋白酶(250 000U/mg)酶解2h，酶解温度37℃。酶解结束后，利用5mol/L氢氧化钠溶液调整体系pH为6.4，并将酶解体系温度升至95℃，保持时间为3min进行灭酶处理得到无菌臭参的酶解液。
(3)向步骤(2)得到的无菌臭参酶解液中加入1.5L植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌复合种子液，发酵温度控制在32℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，发酵周期为5day。第一次发酵完成后，向发酵液中加入适量的发酵助剂，混合均匀，并接入0.9L普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌复合种子液，发酵温度控制在37℃，发酵体系氧气含量控制≤0.5％，发酵周期为3天。
(4)在第二次发酵的发酵液中加入3kg低分子量的氨基寡糖类混合物，搅拌转速在50rpm/min，2h后混合完成，后发酵温度控制在在4℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，后发酵时间控制在10天。
(5)利用100目滤袋过滤步骤(4)的发酵液，弃滤渣，5mol/L氢氧化钠溶液调节滤液体系pH值为4.2。将发酵液打入高速均质机进行均质。向均质后的发酵液加入0.15kg溶菌酶，酶解时间控制0.5h，酶解温度控制在37℃。酶解结束后进行超声破碎，破碎功率300W，5min，每分钟超声20次，超声2s，停1s，超声温度25℃。
(6)将步骤(5)处理后的发酵液进行0.45微米醋酸-硝酸混合纤维素(CA-CN)膜死端过滤冷除菌，膜过滤温度20℃。
(7)利用电渗析设备对步骤(6)的得到的滤过液进行脱盐处理，电渗析设备压力控制在0.04Mpa，电流控制在0.005A，12V膜电压下进行脱盐，脱盐体系温度控制15℃。
(8)在步骤(7)脱盐后的发酵液中加入0.15kg悬浮剂、1.5kg稳定剂和适量的营养补充剂，搅拌混合均匀。混合罐搅拌转速控制在120rpm/min，混合时间4h，混合温度15℃。
(9)将调配好的臭参酵素口服液进行均质、脱气、无菌灌装，即得终产品。
其中，步骤(3)中限制性微耗氧发酵所用的植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌复合种子液为过夜活化的种子液，调节种子液的浓度为1*109CFU/mL，复合比例为2：4：4(v/v)。
其中，步骤(3)中厌氧发酵助剂及其添加量为0.006kg氯化血红素，0.15kg胆汁盐，0.003kg维生素K10。
其中，步骤(3)中厌氧发酵过程中所用的普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌复合种子液为经活化的种子液，调节种子液的浓度为1*109CFU/mL，复合比例为3：3：4(v/v)。普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌的活化过程为：配置1L种子活化用厌氧培养基，接种量为0.01L待活化菌种，活化温度为37℃，活化时间为18h。
其中，步骤(4)低分子量的氨基寡糖类混合物，该混合物含壳二糖15.24％(w/w，下同)、壳三糖16.33％、壳四糖13.23％、壳五糖14.25％、壳六糖9.51％、壳七糖7.12％、壳八糖5.87％、壳九糖3.32％、壳十糖4.10％、壳十一糖1.30％、壳十二糖1.60％、壳十三糖1.70％、壳十四糖0.51％、壳十五糖0.92％、壳十六糖0.21％、壳十七糖0.90％、壳十八糖1.30％、壳十九糖0.05％、壳二十糖0.02％。
其中，步骤(5)调节pH值的条件为：搅拌转速300rpm/min，氢氧化钠流加速度0.5mL/min至体系pH值为4.2，调整后静置2h。
其中，步骤(7)所述悬浮剂为琼脂、果胶、结冷胶，混合比例为5：3：2(w/w)；所述稳定剂为：柠檬酸、苹果酸、琥珀酸，混合比例为5：4：1(w/w)。所述营养补充剂及添加量为：0.03kg牛磺酸、0.06kg酵母β～葡聚糖、1.5kg低聚果糖。
其中，步骤(5)、(9)所述的均质条件为均质时间15min，均质压力30MPa，均质温度控制在30℃。
通过15人感官评价方式对产品的风味进行分析。所得产品呈淡黄色、清澈透亮，酸味纯正，有臭参的香气、不刺激(臭参臭味消失)、质地均匀；对产品的理化指标分析：终产品pH为4.20±0.05，可溶性固形物约为8.2％，无酒精含量；产品总酚含量达到了276.82mg/L，较发酵前提高了2.58倍，具有较好的抗氧化性。
终产品总酸含量达到0.376％，其中乙酸含量0.150％，丙酸含量0.088％，丁酸含量0.105％，戊酸含量0.006％，乳酸含量0.120％，具有改善肠道微环境，促进益生菌生长的作用。
在96孔板中进行抑菌性测定终产品在不同稀释倍数(10倍、20倍、50倍)对大肠杆菌、阪崎克罗诺杆菌和粪肠球菌的抑制性，培养时间为24h，培养温度为37℃。具体抑菌作用见表1。
表1实施例1不同稀释倍数的臭参酵素对肠道有害菌的抑制作用
Figure BDA0002101723160000121
利用GC/MS对发酵结束后的代谢物进行分析，其主要代谢产物和其占总固形物含量的百分比分别为见表2。
表2实施例1臭参发酵液中的主要典型代谢产物及其占比
Figure BDA0002101723160000122
Figure BDA0002101723160000131
实施例2
参考图1，一种滇产臭参酵素口服液制备方法的步骤如下：
(1)臭参预处理：挑选品相较好、无霉变的臭参，去离子水清洗4次，沥干水分进行晾晒6.5h；将晾晒完成的120kg臭参切成2.5cm的小段，按照料液比1：4进行打浆后，25目滤袋过滤，巴氏杀菌75℃，30min后，量取300L无菌臭参汁，备用。
(2)无菌臭参汁的分步酶解：利用复合酸混合溶液调节无菌臭参汁体系pH为6.0，加入0.225kg复合酶(纤维素酶(100 000U/g)、半纤维素酶(50 000U/g)、木聚糖酶(50000U/g)、果胶酶(100 000U/g)，混合比例为4：2：2：2，(w/w))进行第一步酶解，酶解时间控制在3.5h，酶解温度为37.5℃。利用复合酸混合溶液调节第一步酶解后的酶解液pH至1.6，加入1.125kg胃蛋白酶(250 000U/mg)酶解2h，酶解温度37℃。酶解结束后，利用5mol/L氢氧化钠溶液调整体系pH为6.9，并将酶解体系温度升至95℃，保持时间为3min进行灭酶处理得到无菌臭参的酶解液。
(3)向步骤(2)得到的无菌臭参酶解液中加入2.25L植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌复合种子液，发酵温度控制在32℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，发酵周期为5day。第一次发酵完成后，向发酵液中加入适量的发酵助剂，混合均匀，并接入1.2L普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌复合种子液，发酵温度控制在37℃，发酵体系氧气含量控制≤0.5％，发酵周期为4天。
(4)在第二次发酵的发酵液中加入6kg低分子量的壳寡糖混合物，搅拌转速在65rpm/min，搅拌时间为2.5h后混合完成，后发酵温度控制在在10℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，后发酵时间控制在12天。
(5)利用120目滤袋过滤步骤(4)的发酵液，5mol/L氢氧化钠溶液调节体系pH值为4.7。将发酵液打入高速均质机进行均质。向均质后的发酵液加入0.225kg溶菌酶，酶解时间控制0.75h，酶解温度控制在37℃。酶解结束后进行超声破碎，破碎功率300W，破碎时间5min，每分钟超声20次，超声2s，停1s，超声温度30℃。
(6)将步骤(5)处理后的发酵液进行0.45微米聚苯乙烯(PS)膜死端过滤冷除菌，膜过滤温度27℃。
(7)利用电渗析设备对步骤(6)的得到的滤过液进行脱盐处理，电渗析设备压力控制在0.05Mpa，电流控制在0.0075A，12V膜电压下进行脱盐，脱盐体系温度控制22℃。
(8)在步骤(7)脱盐后的发酵液中加入0.195kg悬浮剂、5.25kg稳定剂和适宜含量的营养补充剂，搅拌混合均匀。混合罐搅拌转速控制在135rpm/min，混合时间5h，混合温度22℃。
(9)将调配好的臭参酵素口服液进行均质、脱气、无菌灌装，即得终产品。
其中，步骤(3)中限制性微耗氧发酵所用的植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌复合种子液为过夜活化的种子液，调节种子液的浓度为2.5*109CFU/mL，复合比例为2：4：4(v/v)。
其中，步骤(3)中厌氧发酵助剂及其添加量为0.006kg氯化血红素，0.195kg胆汁盐，0.006kg维生素K10。
其中，步骤(3)中厌氧发酵过程中所用的普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌复合种子液为经活化的种子液，调节种子液的浓度为2.5*109CFU/mL，复合比例为3：3：4(v/v)。普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌的活化过程为：配置1.5L种子活化厌氧培养基接种量为0.015L待活化菌种，活化温度为37℃，活化时间为21h。
其中，步骤(4)低分子量的壳寡糖混合物，该混合物含壳二糖3.40％(w/w，下同)、壳三糖2.67％、壳四糖4.77％、壳五糖14.33％、壳六糖12.90％、壳七糖14.22％、壳八糖9.35％、壳九糖10.27％、壳十糖5.31％、壳十一糖3.26％、壳十二糖4.41％、壳十三糖5.03％、壳十四糖3.28％、壳十五糖2.11％、壳十六糖0.96％、壳十七糖1.05％、壳十八糖1.41％、壳十九糖0.84％、壳二十糖0.44％。
其中，步骤(5)调节pH值的条件为：搅拌转速300rpm/min，氢氧化钠流加速度0.75mL/min至体系pH值为4.6，调整后静置2h。
其中，步骤(7)所述悬浮剂为琼脂、果胶、结冷胶，混合比例为5：3：2(w/w)；所述稳定剂为：柠檬酸、苹果酸、琥珀酸，混合比例为5：4：1(w/w)。所述营养补充剂及添加量为：0.09kg牛磺酸、0.105kg酵母β～葡聚糖、1.875kg低聚果糖。
其中，步骤(5)、(9)所述的均质条件为均质时间15min，均质压力30MPa，均质温度控制在30℃。
通过15人感官评价方式对产品的风味进行分析。所得产品呈淡黄色、清澈透亮，酸味纯正，有臭参的香气、不刺激(臭参臭味消失)、质地均匀；对产品的理化指标分析：终产品pH为4.50±0.02，可溶性固形物约为8.7％，不含酒精；产品总酚含量达到了281.11mg/L，较发酵前提高了2.62倍，具有较好的抗氧化性。
终产品总酸含量达到0.447％，其中乙酸含量0.192％，丙酸含量0.095％，丁酸含量0.130％，戊酸含量0.007％，乳酸含量0.141％，具有改善肠道微环境，促进益生菌生长的作用。
在96孔板中进行抑菌性测定终产品在不同稀释倍数(10倍、20倍、50倍)对大肠杆菌、阪崎克罗诺杆菌和粪肠球菌的抑制性，培养时间为24h，培养温度为37℃。具体抑菌作用见表3。
表3实施例2不同稀释倍数的臭参酵素对肠道有害菌的抑制作用
Figure BDA0002101723160000151
Figure BDA0002101723160000161
利用GC/MS对发酵结束后的代谢物进行分析，其主要代谢产物和其占总固形物含量的百分比分别为见表4。
表4实施例2臭参发酵液中的主要典型代谢产物及其占比
Figure BDA0002101723160000162
实施例3
参考图1，一种滇产臭参酵素口服液制备方法的步骤如下：
(1)挑选品相较好、无霉变的臭参，去离子水清洗5次，沥干水分进行晾晒8h；将晾晒完成的120kg臭参切成3cm的小段，按照料液比1：5进行打浆后，25目滤袋过滤，巴氏杀菌温度75℃，杀菌时间30min后，量取300L无菌臭参汁，备用。
(2)利用复合酸混合溶液调节无菌臭参汁体系pH为6.4，加入0.3kg复合酶((纤维素酶(100 000U/g)、半纤维素酶(50 000U/g)、木聚糖酶(50 000U/g)、果胶酶(100 000U/g)，混合比例为4：2：2：2，(w/w)))进行第一步酶解，酶解时间控制在3.5h，酶解温度为40℃。利用复合酸混合溶液调节第一步酶解的酶解液pH至1.6，加入1.5kg胃蛋白酶(250 000U/mg)酶解2h，酶解温度37℃。酶解结束后，利用5mol/L氢氧化钠溶液调整体系pH为7.4，并将酶解体系温度升至95℃，保持时间为3min进行灭酶得到无菌臭参的酶解液。
(3)向步骤(2)得到的无菌臭参酶解液中加入3L植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌复合种子液，发酵温度控制在32℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，发酵周期为5day。第一步发酵完成后，向发酵液中加入适量的发酵助剂，混合均匀，并接入1.5L普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌复合种子液，发酵温度控制在37℃，发酵体系氧气含量控制≤0.5％，发酵周期为5天。
(4)在第二次发酵的发酵液中加入9kg低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖，搅拌转速在80rpm/min，搅拌时间3h后混合完成，后发酵温度控制在16℃，发酵体系氧气含量控制≤5％，后发酵时间控制在15天。
(5)利用150目滤袋过滤步骤(4)的发酵液，5mol/L氢氧化钠溶液调节体系pH值为5.0。将发酵液打入高速均质机进行均质。向均质后的发酵液加入0.3kg溶菌酶，酶解时间1.0h，酶解温度控制在37℃。酶解结束后进行超声破碎，破碎功率300W，5min，每分钟超声20次，超声2s，停1s，超声温度35℃。
(6)将步骤(5)处理后的发酵液进行0.45微米聚四氟乙烯(PTFE)膜死端过滤冷除菌，膜过滤温度35℃。
(7)利用电渗析设备对步骤(6)的得到的滤过液进行脱盐处理，电渗析设备压力0.06Mpa，电流0.01A，12V膜电压下进行脱盐，脱盐体系温度30℃。
(8)在步骤(7)脱盐后的发酵液中加入0.24kg悬浮剂、9kg稳定剂和适宜含量的营养补充剂，搅拌混合均匀。混合罐搅拌转速控制在150rpm/min，混合时间6h，混合温度30℃。
(9)将调配好的臭参酵素口服液进行均质、脱气无菌灌装，即得终产品。
其中，步骤(3)中限制性微耗氧发酵所用的植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌复合种子液为过夜活化的种子液，调节种子液的浓度为5*109CFU/mL，复合比例为2：4：4(v/v)。
其中，步骤(3)中厌氧发酵助剂及其添加量为0.006kg氯化血红素，0.24kg胆汁盐，0.009kg维生素K10。
其中，步骤(3)中厌氧发酵过程中所用的普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌复合种子液为经活化的种子液，调节种子液的浓度为5*109CFU/mL，复合比例为3：3：4(v/v)。
普氏粪杆菌、罗斯氏菌属、双歧杆菌的活化过程为：配置1.5L的厌氧培养培养基接种0.015L待活化菌种，活化温度为37℃，活化时间为24h。
所述步骤(4)低分子量的几丁寡糖类混合物，该混合物含几丁二糖13.89％(w/w，下同)、几丁三糖16.72％、几丁四糖9.54％、几丁五糖14.30％、几丁六糖12.40％、几丁七糖6.26％、几丁八糖7.91％、几丁九糖8.01％、几丁十糖3.30％、几丁十一糖1.82％、几丁十二糖2.32％、几丁十三糖2.88％、几丁十四糖2.51％、几丁十五糖2.14％、几丁十六糖1.98％、几丁十七糖1.21％、几丁十八糖1.31％、几丁十九糖1.53％、几丁二十糖1.12％。
其中，步骤(5)调节pH值的条件为：搅拌转速300rpm/min，氢氧化钠流加速度0.8mL/min至体系pH值为5，调整后静置2h。
其中，步骤(7)所述悬浮剂为琼脂、果胶、结冷胶，混合比例为5：3：2(w/w)；所述稳定剂为：柠檬酸、苹果酸、琥珀酸，混合比例为5：4：1(w/w)。所述营养补充剂及添加量为：0.15kg牛磺酸、0.15kg酵母β-葡聚糖、2.1kg低聚果糖。
其中，步骤(5)、(9)所述的均质条件为均质时间15min，均质压力30MPa，均质温度控制在30℃。
通过15人感官小组评价对产品的风味进行分析。所得产品呈黄色、清澈透亮，酸味纯正，有臭参的香气、不刺激(臭参臭味消失)、质地均匀；对产品的理化指标分析：终产品pH为5.00±0.07，可溶性固形物约为9.0％，不含酒精；产品总酚含量达到了292.11mg/L，较发酵前提高了2.73倍，具有较好的抗氧化性。
终产品总酸含量达到0.445％，其中乙酸含量0.197％，丙酸含量0.009％，丁酸含量0.016％，戊酸含量0.072％，乳酸含量0.151％，具有改善肠道微环境，促进益生菌生长的作用。
在96孔板中进行抑菌性测定终产品在不同稀释倍数(10倍、20倍、50倍)对大肠杆菌、阪崎克罗诺杆菌和粪肠球菌的抑制性，培养时间为24h，培养温度为37℃。具体抑菌作用见表5。
表5实施例3不同稀释倍数的臭参酵素对肠道有害菌的抑制作用
Figure BDA0002101723160000191
利用GC/MS对发酵结束后的代谢物进行分析，其主要代谢产物和其占总固形物含量的百分比分别为见下表6。
表6实施例3臭参发酵液中的主要典型代谢产物及其占比
Figure BDA0002101723160000192
Figure BDA0002101723160000201
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种臭参酵素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）臭参预处理：臭参打浆，过滤，杀菌，得无菌臭参汁；
（2）无菌臭参汁的分步酶解：调节无菌臭参汁体系pH为5.4~6.4，加入复合酶进行第一步酶解，调节第一步酶解的酶解液pH 至1.6，加入胃蛋白酶进行第二步酶解，酶解结束后，利用调整体系pH为6.4~7.4，进行灭酶处理，得到无菌臭参酶解液；
（3）臭参酵素主发酵过程：
（31）限制性微耗氧发酵过程：向步骤（2）得到的无菌臭参酶解液中加入活化的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、巴氏醋杆菌（Acetobacter pasteurianus）复合种子液，进行发酵，发酵体系氧气含量控制≤5%；
（32）厌氧发酵过程：向步骤（31）得到的发酵液中加入发酵助剂，混合均匀，并接入活化的普氏粪杆菌（Faecalibacterium prausnitzii）、罗斯氏菌属（Roseburia cecicola）、双歧杆菌（Bifidobacterium longum subsp. infantis）复合种子液，进行发酵，发酵体系氧气含量控制≤0.5%；
（4）后发酵过程：在步骤（32）后所得发酵液中加入低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖，再进行后发酵过程，发酵体系氧气含量控制≤5%；
（5）溶菌破碎：过滤步骤（4）的发酵液，调节体系pH值为4.2~5.0，将发酵液进行均质，向均质后的发酵液加入溶菌酶进行酶解，酶解结束后进行超声破碎；
（6）过滤除菌，将步骤（5）处理后的发酵过滤冷除菌，得到滤过液；
（7）脱盐处理：对步骤（6）的得到的滤过液进行脱盐处理；
步骤（2）中，所述复合酶包括100 000 U/g纤维素酶、50 000 U/g半纤维素酶、50 000U/g木聚糖酶、100 000 U/g果胶酶，100 000 U/g纤维素酶、50 000 U/g半纤维素酶、50 000U/g木聚糖酶、100 000 U/g果胶酶的质量比为4：2：2：2；
所述复合酶加入量为0.05%~0.1% w/w；
步骤（2）中，进行第一步酶解的条件为：酶解时间控制在3.5 h，酶解温度为35℃~40℃；
进行第二步酶解的条件为：酶解2 h，酶解温度37℃；
将酶解体系温度升至95℃，保持时间为3 min进行灭酶处理；
步骤（31）中，发酵的条件为：发酵温度控制在32℃，发酵体系氧气含量控制≤5%，发酵周期为5 天；
步骤（32）中，发酵的条件为：发酵温度控制在37℃，发酵体系氧气含量控制≤0.5%，发酵周期为3~5 天；
步骤（4）中，进行后发酵的条件为：后发酵温度控制在在4℃~16℃，发酵体系氧气含量控制≤5%，后发酵时间控制在10~15 天；
步骤（5）中，向均质后的发酵液加入0.05%~0.1% w/w溶菌酶，酶解的条件为：酶解时间控制0.5~1.0h，酶解温度控制在37℃；
步骤（5）中，超声破碎的条件为：破碎功率300 W，5 min，每分钟超声20次，超声2s，停1s，超声温度25~35℃；
步骤（7）中，利用电渗析设备对步骤（6）的得到的滤过液进行脱盐处理，电渗析设备压力控制在0.04~0.06 Mpa，电流控制在0.005~0.01 A，12 V膜电压下进行脱盐，脱盐体系温度控制≤30℃；
步骤（4）中，低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖加入量为1%~3% w/w；
步骤（4）中，低分子量的氨基寡糖类混合物或单一聚合物的低分子量氨基寡糖选自几丁类寡糖或分子量低于5 kDa的低分子量壳聚糖中的一种或几种，
所述几丁类寡糖包括壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖、壳八糖、壳九糖、壳十糖、壳十一糖、壳十二糖、壳十三糖、壳十四糖、壳十五糖、壳十六糖、壳十七糖、壳十八糖、壳十九糖、壳二十糖、几丁二糖、几丁三糖、几丁四糖、几丁五糖、几丁六糖、几丁七糖、几丁八糖、几丁九糖、几丁十糖、几丁十一糖、几丁十二糖、几丁十三糖、几丁十四糖、几丁十五糖、几丁十六糖、几丁十七糖、几丁十八糖、几丁十九糖、几丁二十糖。
2.根据权利要求1所述臭参酵素的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述胃蛋白酶的浓度为250 000 U/mg，所述胃蛋白酶加入量为0.25~0.5% w/w。
3.根据权利要求1所述臭参酵素的制备方法，其特征在于，步骤（31）中，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、巴氏醋杆菌（Acetobacter pasteurianus）复合种子液浓度为1×109~5×109 CFU/mL，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、巴氏醋杆菌（Acetobacter pasteurianus）复合比例为2：4：4 v/v；
步骤（31）中，复合种子液接种量为0.5%~1.0% v/v；
步骤（32）中，所述发酵助剂及其添加量为0.002% 氯化血红素 w/w，0.05%~0.08%胆汁盐 w/w，0.001%~0.003%维生素K10 w/w；
步骤（32）中，普氏粪杆菌（Faecalibacterium prausnitzii）、罗斯氏菌属（Roseburia cecicola）、双歧杆菌（Bifidobacterium longum subsp. infantis）复合种子液浓度为1×109~5×109 CFU/mL，普氏粪杆菌（Faecalibacterium prausnitzii）、罗斯氏菌属（Roseburia cecicola）、双歧杆菌（Bifidobacterium longum subsp. infantis）复合比例为3：3：4 v/v；
普氏粪杆菌（Faecalibacterium prausnitzii）、罗斯氏菌属（Roseburia cecicola）、双歧杆菌（Bifidobacterium longum subsp. infantis）复合种子液接种量为0.3%~0.5%v/v。
4.一种臭参酵素，其特征在于，为采用权利要求1-3中任一项所述制备方法制备得到脱盐后的发酵液，或将发酵液干燥处理后所得物质。
5.一种臭参酵素饮品的制备方法，其特征在于，采用权利要求1-3中任一项所述制备方法制备得到脱盐后的发酵液，还进行以下步骤：
（8）调配：在步骤（7）脱盐后的发酵液中加入悬浮剂、稳定剂和营养补充剂，搅拌混合均匀；
（9）无菌灌装：将调配好的臭参酵素饮品均质、脱气进行无菌灌装，即得终产品。
6.根据权利要求5所述一种臭参酵素饮品的制备方法，其特征在于，步骤（8）中，在步骤（7）脱盐后的发酵液中加入0.05%~0.08%悬浮剂 w/w、0.5%~3%稳定剂 w/w和适宜含量的营养补充剂，
所述营养补充剂及添加量为：牛磺酸：0.01~0.05% w/w，酵母β-葡聚糖：0.02~0.05% w/w，低聚果糖：0.5~0.75% w/w；
步骤（8）中，所述悬浮剂为琼脂、果胶、结冷胶的混合物，琼脂、果胶、结冷胶混合质量比为5：3：2；
步骤（8）中，所述稳定剂为柠檬酸、苹果酸、琥珀酸的混合物，柠檬酸、苹果酸、琥珀酸的混合质量比为5：4：1。
7.一种臭参酵素饮品，其特征在于，采用权利要求5所述制备方法制备得到。
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