CN110114671B - 血液分析方法及血液检查试剂盒 - Google Patents

血液分析方法及血液检查试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明的课题在于提供一种准确地求出稀释倍率并进行成分的定量分析的血液分析方法及血液检查试剂盒。根据本发明，血液分析方法包括：用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率的工序；分析血液样本中的对象成分的浓度的工序，血液分析方法是使用选自包括第1容纳器具，容纳有稀释液；分离器具，用于从用所述稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆；保持器具，用于保持所述分离器具；第2容纳器具，用于容纳所回收的血浆；及密封器具，用于将所收容的血浆维持在第2容纳器具内的组中的部件的血液分析方法，稀释液是将源于稀释液及/或部件的可包含于稀释液中的标准成分的量进行了规定的稀释液，血液样本的容量为50μL以下，血液样本中的血浆成分的稀释倍率为14倍以上。

Description

血液分析方法及血液检查试剂盒
技术领域
本发明涉及一种用于分析微量的血液样本中的对象成分的血液分析方法及血液检查试剂盒。
背景技术
通常，采血中有：普通采血，医生等某些有资格人员使用注射器从静脉采集血液；及自行采血，检查对象将采血针刺入到自身的手指等来采集血液。
通过普通采血而采集的血液，以被密封在采集容器中的状态输送到医疗机构或检查机构，在那里进行检查。在不分离出血球和血浆而输送血液的情况下，在医疗机构或检查机构，通过离心分离机将血液分离成血球和血浆之后进行检查。并且，在检查对象进行的自行采血中，采集后的血液通过分离膜而分离成血球和血浆，以该分离的状态被输送到检查场所，在那里进行检查。
专利文献1中记载有通过自行采血而采集的血液样本的检查方法。具体而言，记载有包括如下工序的活体试样中的应定量成分的定量方法：1)制备包括含有未定量容量而采集的应定量成分的未知容量的活体试样和含有一定量的指示物的一定量的水性溶液的定量用试样的工序；2)由含有一定量的指示物的一定量的水性溶液中的指示物浓度(C1)和定量用试样中的指示物的浓度(C2)来求出活体试样的稀释倍率(a)的工序；3)求出定量用试样中的应定量成分的浓度(Y)的工序；及4)根据由上述2)求出的活体试样稀释倍率(a)和由上述3)求出的定量用试样中的应定量物质的浓度(Y)来确定活体试样中的应定量成分的工序。
在专利文献2中记载有如下定量分析法：测定样本中的分析对象成分量，进而，测定除此以外的原本恒久性地存在于样本中的标准成分的量，由该标准成分的量和样本中的标准成分的已知浓度来确定样本的量，由该样本量和分析对象成分量来确定样本中的分析对象成分的浓度。
并且，在专利文献3中记载有如下方法：使用血液稀释定量器具，从人和动物采集微量血液，将其原样或者在稀释之后将一定量供给到其他机器和容器，或者直接供给到试剂。而且，在专利文献4中记载有如下方法：利用稀释用水溶液中的指示物的吸光度来对生物学的试样中的应定量成分的浓度进行定量。
另一方面，当检查对象采集血液样本时，通过小型刀具所具备的柳叶刀而进行采集，并使用于血液中的任意成分的浓度的定量中，但通常需要采集100μL以上的血液样本。
以往技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2003-161729号公报
专利文献2：日本特开2001-330603号公报
专利文献3：日本特开2009-122082号公报
专利文献4：日本特开2009-109196号公报
发明内容
发明要解决的技术课题
在专利文献1中记载的方法中，血液样本为微量的情况下，需要提高对血液样本量的稀释液的比例。然而，该情况下，由于在稀释血液样本前后稀释液的体积变化率非常小，因此内部标准物质的浓度的变化率小，存在测定值的重复再现性降低的问题。
在专利文献2中，将健康的人的总血量约100μL滴加于多孔质膜，分离出血球而展开了血清之后，添加150μL的生理盐水等渗PBS(Phosphate-buffered saline(磷酸盐缓冲盐水)：pH7.4)，将所得到的液体进行离心分离而得到的上清液作为分析试样进行了分析，但关于小于100μL的采血却未记载。
在专利文献3的方法中，用微量吸移管准确地采集10μL的血液量进行了分析，但不习惯于采血的患者进行采集的情况下，难以准确地采集一定量，通过包括误差的采血量而进行了检查的情况下，其结果，在测定值中包括误差。
专利文献4中所记载的测定方法是稀释倍率为10倍左右的测定，在进一步提高稀释倍率而充分地确保稀释血液量的情况下，与专利文献1同样，存在测定值的重复再现性降低的问题。
如上所述，关于使用微量的血液样本的情况，期待一种测定值的重复再现性高的血液分析方法。本发明人等认为，为了在50μL以下的血液样本中以高精度进行测定值的重复再现性高的血液分析方法，若使用以往提出的内部标准物质则并不充分，并对使用外部标准物质的方法进行了研究。
本发明的目的在于提供一种血液分析方法及血液检查试剂盒，作为用缓冲液来稀释50μL以下的微量血液并对成分进行定量分析的方法，在使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度的方法中，规定从血液检查试剂盒的部件溶出到缓冲液中的恒久性地存在于血液中的标准成分浓度，由此，例如以专利文献1及专利文献2的现有技术中所没有的精度准确地求出稀释倍率并进行成分的定量分析。
用于解决技术课题的手段
本发明人等为了解决上述课题而经过深入研究的结果，发现在用稀释液来稀释所采集的血液样本，使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率，分析血液样本中的对象成分的浓度的血液分析方法中，血液样本的容量为50μL以下，血液样本中的血浆成分的稀释倍率为14倍以上，作为稀释液，使用将源于稀释液及/或血液检查试剂盒的部件的可包含于稀释液中的标准成分的量进行了规定的稀释液，通过该结构能够解决上述课题，并完成了本发明。即，根据本发明，提供以下发明。
(1)一种血液分析方法，其包括：
用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；
使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率的工序；
分析血液样本中的对象成分的浓度的工序；
上述血液分析方法是使用部件的血液分析方法，该部件选自包括第1容纳器具，容纳有稀释液；分离器具，用于从用所述稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆；保持器具，用于保持所述分离器具；第2容纳器具，用于容纳所回收的血浆；及密封器具，用于将所收容的血浆维持在第2容纳器具内的密封器具的组，
上述稀释液是将源于上述稀释液及/或上述部件的可包含于上述稀释液中的上述标准成分的量进行了规定的稀释液，
上述血液样本的容量为50μL以下，上述血液样本中的血浆成分的稀释倍率为14倍以上。
(2)根据(1)所述的血液分析方法，其中，可包含于上述稀释液中的源于上述血液检查试剂盒的部件的上述标准成分的量相对于稀释液为0.35mmol/L以下。
(3)根据(1)或(2)所述的血液分析方法，其中，恒久性地存在于血液中的上述标准成分为钠离子或氯离子。
(4)根据(1)至(3)中任一项所述的血液分析方法，其中，恒久性地存在于血液中的上述标准成分为钠离子或氯离子以及至少1种另外标准成分。
(5)根据(4)所述的血液分析方法，其中，上述至少1种另外标准成分是选自总蛋白或白蛋白的标准成分。
(6)根据(4)或(5)所述的血液分析方法，其中，还包括由使用上述至少1种另外标准成分的标准值求出的稀释倍率来验证上述对象成分浓度的分析的工序。
(7)根据(1)至(6)中任一项所述的血液分析方法，其中，上述稀释液不包含恒久性地存在于血液中的标准成分。
(8)根据(1)至(7)中任一项所述的血液分析方法，其中，上述稀释液是在pH6.5～pH8.0的pH范围内具有缓冲作用的缓冲液。
(9)根据(1)至(8)中任一项所述的血液分析方法，其中，上述稀释液包含：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的氨基醇化合物；及选自包括也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸、也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸的组中的缓冲剂。
(10)一种血液检查试剂盒，用于在根据(1)至(9)中任一项所述的血液分析方法中使用，并包括：第1容纳器具，容纳有上述稀释液；分离器具，用于从用上述稀释液来稀释的血液样本中分离并回收血浆；保持器具，用于保持上述分离器具；第2容纳器具，用于容纳所回收的血浆；及密封器具，用于将所收容的血浆维持在第2容纳器具内。
发明效果
根据本发明的血液分析方法及血液检查试剂盒，能够使用恒久性地存在于血液中的标准成分来以高精度进行血液样本中的对象成分的浓度的分析。
附图说明
图1是本发明的实施方式所涉及的血液检查试剂盒的剖视图。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。另外，用X～Y来表示的范围包括上限X和下限Y的值。有时将恒久性地存在于血液中的标准成分称作外部标准物质或外部标准。并且，有时将不存在于血液中的标准成分称作内部标准物质或内部标准。
在进行血液检查的情况下，将采血针插入到受检者的静脉中采集血液，或者在指尖等皮肤上制造伤口以采集流出到皮肤外部的血液，通过该方法而获得血液。无论是哪种方法都是在皮肤上制造伤口的侵袭性行为，因此会给患者带来疼痛感。由此许多患者期待着如下方法：通过减小对皮肤的伤口以尽量抑制侵袭性并缓解患者的疼痛感的方法，进行采血并分析。该情况下，通过减小伤口而减少疼痛感，但由于采血量为微量，因此存在导致能够检查的对象成分的种类被限制的弊端。在专利文献1的检查方法中应用这种方式以解决上述弊端的情况下，通过提高稀释液量相对于采血量的比例，关于稀释了血液的稀释液确保充分的量，以便能够检查需要检查的所有分析对象成分。然而，在采血量少的情况下，在稀释血液前后的稀释液的体积变化率变得非常小，作为内部标准物质而使用的物质的变化率也变得非常小，因此测量时的测量误差、测定时的测定误差相对变大，因测定精度变差、重复再现性的降低等而有可能损伤检查的可靠性。从而，为了测定值的再现性高的检查，需要确保一定程度的血液样本的量，并需要进行对受检者带来一定程度的疼痛感的采血方法。
在专利文献2中采集约100μL的血液量，但在患者自行采集100μL的血液的情况下，在指尖等皮肤上制造的伤口需要设为较大，患者伴有疼痛感，有些人也会感觉到强烈的疼痛感。并且，由于伤口深，因此也存在止血延迟的忧患。进而，在专利文献2中，作为恒定性成分量，使用血液中的恒定性的中心值为0.9mmol/L的镁离子、4.65mmol/L的钙离子、7.5g/100mL的总蛋白测定稀释倍率。然而，若患者采集的血液量变少，则稀释液中的恒定性成分的浓度变低，导致成为包括当测定恒定性成分时不可忽略的测定误差的结果。其结果，稀释倍率的测定值中也包括误差，测定的可靠性受到损伤。
在专利文献3的方法中，将10μL的少的血液量，用微量吸移管准确地采集一定量并进行分析，但在患者进行采集的情况下，对采血不熟练的患者也多，因此难以始终准确地采集一定量。在患者进行采集的情况下，由于重复进行采血，因此大量的血液量流出到皮肤外部，或者在通过包括误差的采血而进行了检查的情况下，导致成为在测定值中包括误差的结果。
在专利文献4中公开了利用双波长的光来补正乳糜的影响以提高测定精度的技术，是稀释倍率为10倍左右的测定。专利文献4的方法对已稀释的血液量为100μL以下的分析是有效的，但无法应对如下目的的检查，即，分析对象成分少，获取各种各样的大量的分析对象成分的信息以使用于预测器官的状态、生活习惯等中。该情况下，在进一步提高稀释倍率以充分地确保稀释血液量的情况下，将面对与专利文献1相同的课题。
本发明是考虑到上述问题而进行了研究，即使在将为了减少采血时的侵袭性以缓解患者的负担而采集的血液量设为微量的情况下，也能够实现提高稀释倍率而充分地确保应分析的稀释液量时的再现性良好的稀释倍率，为了实现对象成分的高的分析精度，优选测定以高浓度存在于微量的血液中的标准成分。在本发明中，优选使用在恒久性地存在于血液样本中的成分中以高浓度存在的钠离子(Na+)或氯离子(Cl-)，进而，最优选测定在上述恒久性地存在于血液中的标准成分中存在于血液中的量最多的钠离子。钠离子表示平均值为标准值(基准范围的中央值)，该值为142mmol/L，占血浆中的总阳离子的90摩尔％以上。
在这些现有技术的实施例中，在进行提取的缓冲液中，由于磷酸缓冲生理盐水稳定地保持活体成分的性能优异而被利用，但磷酸缓冲生理盐水中包含有钠离子和氯离子。因此，无法将钠离子和氯离子作为外部标准而利用，而利用钙离子、蛋白质等。从而，为了以高精度进行微量血液中的血液检查，如现有技术中所记载，使用补正稀释倍率的外部标准物质或者使用以往所提出的含有内部标准物质的缓冲液就无法充分确保检查精度。
并且，虽然是血液中的恒定性物质，但是例如在钠离子中具有正常值134～146mmol/L分布的宽度，因此需要算出更准确的稀释倍率。若稀释倍率的精度降低，则会对检查精度带来不良影响，导致损害检查可靠性的风险提高。尤其，在存在一些由从构成试剂盒的部件溶出到缓冲液中的外部标准物质引起的污染(所谓的污染物)的情况下，若血液采集量发生变化，则对计算污染物的稀释倍率的计算带来的影响程度变得不同。在专利文献2中根本未提及到有关如下情况：抑制从构成这种试剂盒的部件溶出到缓冲液中的外部标准物质的污染物对稀释倍率计算所带来的影响程度。
本发明是用缓冲液来稀释基于对患者负担少的微量血液采集量的样本并分析对象成分浓度的血液分析方法，涉及提供一种当使用恒久性地存在于血液中的外部标准进行对象成分的分析时，能够以现有技术中没有的精度求出稀释倍率的血液分析方法，作为用于该目的的解决方式，规定了可包含于稀释液中的稀释液成分及/或源于血液检查试剂盒的部件的上述标准成分的量。
可包含于稀释液中的标准成分存在源于溶解于稀释液中的化学物质的成分和从校正血液检查试剂盒的部件溶出的成分这两种。前者的源于溶解于稀释液中的化学物质的成分，例如在将钠用作标准成分的情况下，可以考虑抗凝固剂、缓冲液等在抗衡离子中使用了钠的情况的成分等。后者的情况下，有在容纳缓冲液的容器、分离血球的分离膜或过滤器等中原本含有的成分、在这些部件的制备阶段附着于表面而残留的成分等。在本发明中，在将采集的血液量设为微量的情况下，带入稀释液中的源于血液的标准成分的量非常微量，可包含于稀释液中的上述标准成分存在一定程度的情况下产生的误差相对变大。从而，稀释液可包含于规定的稀释液中的源于上述部件的上述标准成分的量，上述量优选规定为极低的值。该情况下，源于构成稀释液的化学物质及溶剂的标准物质以能够忽略程度设为微量，需要将源于容纳缓冲液的容器及分离血球的分离膜等部件标准物质的量规定为能够保证血液分析精度的程度的量。通过设为这种结构，即使在所采集的血液为微量、且基于稀释液的血浆的稀释倍率高的情况下，也能够准确地求出血浆的稀释倍率，而且，能够进行测定值的重复再现性高的血液分析。这是无法由现有技术文献的记载来预测的效果。
在将恒久性地存在于血液中的钠用作标准成分的情况下，如后面所述，测定血浆和稀释液的混合液中的钠离子浓度，由此使用血浆中的钠离子浓度的恒定的平均值即142mmol/L计算稀释倍率，并能够计算存在于已分离并回收的血浆中的对象成分的浓度。该情况下，源于血液检查试剂盒的部件的稀释液中的钠离子量(不是源于血液的钠离子量，即，污染物成分)抑制为血浆中的钠离子量的5％左右或更少，由此在稀释倍率的计算中能够维持5％左右的误差精度。例如，在将稀释液的量设为350μL，将血液采血量为30μL，将血浆成分所占比例设为55％的情况下，若可包含于稀释液中的源于试剂盒的部件的钠成分的量相对于稀释液为0.35mmol/L以下，则相对于源于血浆的钠离子保持5质量％左右，因此可知能够将检查精度维持在5％左右的误差精度的范围内。并且，若相对于稀释液钠成分的量为0.15mmol/L以下，则可知能够将检查精度维持在2％左右的误差精度的范围内。可包含于稀释液中的源于试剂盒的部件的钠成分的量优选较少，优选为0.35mmol/L以下，更优选为0.15mmol/L以下，进一步优选为0.10mmol/L以下。
(血液样本)
本发明的血液分析方法的成为对象的活体试样是血液，血液是包括血清或血浆的概念。血液的来源并不限定于人，也可以是除了人以外的动物(非人类动物)即哺乳类、鸟类及鱼类等。作为除了人以外的动物，例如可以举出马、牛、猪、羊、山羊、狗、猫、老鼠、熊、熊猫等。优选活体试样的来源是人。
在本发明中，采集血液样本并分析血液样本中的对象成分。本发明的血液分析方法可以通过对象者本身采集血液的自行采血而实施，也可以通过医生等有资格人员使用注射器采集血液的普通采血而实施。
作为优选方式，有如下方法，即，患者本人使用柳叶刀等带刀具的器具对指尖等制造伤口以采集出到皮肤外部的血液。为了减轻患者的负担，优选降低侵袭性并采集血液，更优选在采集血液时能够以无疼痛或疼痛感非常少的状态进行采血。该情况下，优选伤口的深度及大小较小，其结果，能够采集的血液也非常少。从而，在本发明的血液分析方法中使用的血液样本的容量(即，采血量)为50μL以下，优选为40μL以下，更优选为30μL以下，进一步优选为20μL以下，下限并无特别的限定，但通常作为用于进行血液分析的所需血液量，优选为5μL以上。在本发明中，即使在血液样本为微量的情况下，也能够以高的测定精度进行对象成分的分析。
在所采集的血液中包含血浆成分和血球成分，但为了测定血浆成分中的对象成分的浓度，用稀释液来稀释从血液中去除血球成分的血浆成分。可以在预先从血液中分离血球成分之后，用稀释液对血浆成分进行稀释，也可以在用稀释液来稀释已采集的血液之后，使用分离膜等分离血球成分，但优选在用稀释液来稀释已采集的血液样本之后，分离并回收含有血浆成分的试样。
在血液以被稀释的状态放置长时间的情况下，例如引起红血球的溶血，血球内的浓度高的物质或酶等溶出到血浆或血清中，可能对检查结果带来影响，或者从红血球溶出的血红蛋白成分对检查带来影响，在从血球中分离含有血浆成分的试样之后，优选将含有血浆成分的试样和血球进行隔离。该情况下，能够将从血球隔离的含有血浆成分的试样输送至例如检查位置。
从血液中分离血球并回收血浆的方法和从已稀释的血液中分离血球并回收含有血浆成分的试样的方法，并无特别的限制。可以在用放入抗凝固剂的采血管进行采血之后进行离心分离，以将血液分离成血球成分和血浆成分，也可以对血液成分施加压力，以使其通过过滤膜等分离膜，从而将血球成分捕捉到分离膜以从血液中分离血球成分。该情况下，可以使用抗凝固剂。在回收血浆成分的工序在上述中也优选为使用分离膜的工序。并且，为了确保测定精度，优选以物理的方式与去除了血球成分的血液的溶液部分进行隔离，该情况下，具体而言，能够使用在日本特开2003-270239号公报中记载的具有防反流构件的活体试样分离器具等。
(血液样本的稀释)
在本发明中，用稀释液来稀释已采集的血液样本。
作为血液检查，在检查肾功能、新陈代谢等特定的器官、特定的疾病的情况下，为了获取器官和疾病特有的多个测定对象成分的信息而进行器官的状态、生活习惯的预测等，通常，同时进行多个对象成分的分析。例如，为了检查肝的状态，通常，测定ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(门冬氨酸氨基转移酶)、γ-GTP(γ-谷氨酰转肽酶)、ALP(碱性磷酸酶)、总胆红素、总蛋白、白蛋白等几种以上成分在血液中的浓度。如此，为了由一个血液样本测定多个对象成分，若也考虑到再次测定的可能性，则需要一定程度的被稀释的血液的量。从而，作为稀释已采集的血液的稀释液，需要使用一定程度的量的稀释液。无论已采集的血液量如何，为了测定多个对象成分，所使用的稀释液的量优选为250μL以上，更优选为300μL以上，进一步优选为350μL以上，最优选为400μL以上，稀释液的量的上限并无特别的限定，但为了实现对测定有效的稀释倍率，通常，优选为1000μL以下。
(稀释倍率)
作为患者的受检者的血液中的血浆成分的占有率以容积的比率计约为55％，但因受检者的盐分摄取量的变化等而变动，并且，对每一个受检者也不同。因此，在本发明中，使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率，并使用已确定的稀释倍率来分析血液样本中的对象成分的浓度。作为确定稀释倍率的方法，由血浆的稀释液中的标准物质的测定值(浓度X)和恒久地存在于血浆中的标准物质的已知浓度值(浓度Y)，能够计算血液样本中的血浆成分的稀释倍率(Y/X)。使用该稀释倍率而测定血浆的稀释液中的对象成分的测定值(浓度Z)，通过在该测定值上乘以稀释倍率而能够测定实际上包含于血液样本中的分析对象成分的浓度[Z×(Y/X)]。
在血液的采集中降低侵袭性，这对患者等受检者来讲是优选的，由微量的血液样本制备血液的稀释液。另一方面，如上所述，为了能够分析多个测定对象成分，需要一定程度的量的稀释液，因此血液样本中的血浆成分的稀释倍率变高。在本发明中，为了能够进行低侵袭性的采血，已采集的血液的血浆成分的稀释倍率为14倍以上，优选为17倍以上，更优选为21倍以上，进一步优选为25倍以上，尤其优选为30倍以上，最优选为40倍以上。上限并无特别的限定，但为了能够进行高精度的测定，优选为100倍以下。在稀释倍率为用稀释液来稀释包含血球的血液的血液本身的稀释倍率的情况下，稀释倍率优选为8倍以上，更优选为10倍以上，进一步优选为13倍以上，最优选为18倍以上，上限并无特别的限定，但为了能够进行高精度的测定，优选为50倍以下。
(标准物质)
如上所述，作为在血浆成分的稀释倍率高的稀释血浆中的对象成分的分析中使用的标准物质，在使用预先存在于稀释液中的物质的情况下，稀释前后的标准物质的浓度变化非常小，因此稀释倍率的测定误差变大，存在测定的再现性变差的弊端。另一方面，在使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率的本发明的方法中，稀释前后的标准物质的浓度变化大，因此测定误差小，也能够良好地保持测定的再现性，因此能够始终进行测定精度高的血液分析。另外，恒久性地存在于血液中的标准成分也称作外部标准物质。
恒久性地存在于血液中的标准成分，例如，可以举出钠离子、氯离子、钾离子、镁离子、钙离子、总蛋白及白蛋白等。血液样本的血清及血浆中所包含的这些标准成分的浓度为如下：钠离子浓度为134～146mmol/L(平均值：142mmol/L)、氯离子浓度为97～107mmol/L(平均值：102mmol/L)、钾离子浓度为3.2～4.8mmol/L(平均值：4.0mmol/L)、镁离子浓度为0.75～1.0mmol/L(平均值：0.9mmol/L)、钙离子浓度为4.2～5.1mmol/L(平均值：4.65mmol/L)、总蛋白浓度为6.7～8.3g/100mL(平均值：7.5g/100mL)、白蛋白浓度为4.1～5.1g/100mL(平均值：4.6g/100mL)。为了使患者或受检者能够进行低侵袭性采血，优选使用以高浓度存在于血液中的标准成分，以便即使为微量的采血量，也以高精度进行对象成分的测定。在本发明中，优选使用在恒久性地存在于血液样本中的成分中也以高浓度存在的钠离子(Na+)或氯离子(Cl-)，而且，最优选测定在标准成分中存在于血液中的量也最高的钠离子。钠离子占血浆中的总阳离子的90％以上。
(验证)
为了确认是否正常地进行血液中的分析对象成分的浓度分析，优选将恒久性地存在于血液中的不同的两种以上的成分用作标准成分，分别独立地求出血液样本中的血浆成分的稀释倍率，并确认该值大致一致。作为优选的方式，确认到与由钠离子浓度求出的稀释倍率相比，由除了钠离子以外的恒久性地存在于血浆中的标准成分求出的稀释倍率为大致相同的值，由此能够验证正常地进行使用由血浆的稀释液中的钠离子浓度的测定值求出的稀释倍率而进行的血液中的分析对象成分的浓度分析。关于氯离子的测定法，有使用了离子选择电极的电极法(Ion Selective Electrode：ISE)、使用淀粉酶等酶的酶法、硝酸银滴定法等，能够选择根据测定试样的特性或灵敏度、试样量等适当地使用的方法。作为本发明的优选方式，是恒久性地存在于血液中的标准成分为钠离子或氯离子和恒久性地存在于血液中的另外标准成分的情况。该情况下，作为除了钠离子及氯离子以外的恒久性地存在于血浆中的为了验证而使用的标准成分的例子，优选从总蛋白或白蛋白中进行选择，更优选从总蛋白中进行选择。作为总蛋白的测定方法，有双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法(Bradford法)、劳里法、二辛可宁酸法(Bicinchoninic Acid：BCA)法、荧光法等公知的方法，根据测定试样的特性和灵敏度、试样量等，能够选择适合使用的方法。
钠离子浓度及氯离子浓度能够通过例如火焰光度法、玻璃电极法、滴定法、离子选择电极法及酶活性法等而测定。
在本发明中，分析血液样本中的对象成分的浓度包括：确定对象成分的浓度(即，将对象成分进行定量)；或者确定对象成分的浓度是规定的基准值以上，还是规定的基准值以下；进行检测包含一定程度的浓度的定性测定；等，分析方式并无特别的方式。
(稀释液)
在本发明中，在用稀释液来稀释之后，测定恒久性地存在于血液中的标准成分(以下，也称作恒定性物质)，如上所述确定稀释倍率，从而能够分析血液样本中的对象成分的浓度。关于作为用于稀释血液样本的稀释液而使用的化学物质或溶剂，优选不含有(不包含)为了求出稀释倍率而使用的“恒久性地存在于血液中的标准成分”。在本说明书中“不含有”是指“实质上不含有”。在此，“实质上不含有”是指完全不含有求出稀释倍率时所使用的恒定性物质，或者即使含有，也以对稀释了血液样本之后的稀释液的恒定性物质的测定不造成影响的程度的极微量的浓度含有的情况。作为恒定性物质，在使用钠离子或氯离子的情况下，优选在使用于稀释液中的化学物质或溶剂中实质上不含有钠离子或氯离子。
在本发明中，在将患者或受检者所采集的血液样本进行稀释之后，能够输送到医疗机构或检查机构而分析对象成分的浓度。该情况下，有时从采血到分析需要长时间，因此优选防止该期间血浆的稀释液中的对象成分的分解和改性。在健康的人中，血液的pH通常以pH7.30～7.40程度保持为恒定。从而，为了防止对象成分进行分解和改性，稀释液优选为含有缓冲成分的缓冲液，该缓冲成分在pH6.5～pH8.0、优选在pH7.0～pH7.5、进一步优选在pH7.3～pH7.4的pH范围内具有缓冲作用。
作为缓冲液的种类，已知有乙酸缓冲液(Na)、磷酸缓冲液(Na)、柠檬酸缓冲液(Na)、硼酸缓冲液(Na)、酒石酸缓冲液(Na)、Tris(三(羟甲基)氨基乙烷)缓冲液(Cl)、HEPES(2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸)缓冲液、磷酸缓冲生理盐水(Na)等。其中，作为pH7.0～pH8.0附近的缓冲液，具代表性的有磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液。然而，磷酸缓冲液含有磷酸的钠盐，Tris缓冲液的解离pKa(ka为酸解离常数)为8.08，因此为了使其在pH7.0～pH8.0附近具有缓冲能力，通常，与盐酸组合而进行使用，HEPES的磺酸的解离的pKa为7.55，但为了调整离子强度恒定的缓冲溶液，通常，使用氢氧化钠、氯化钠及HEPES的混合物，由此，在将钠离子或氯离子用作标准物质的情况下，不优选适用于本发明。
作为在本发明中使用的稀释液，优选使用不含有钠离子或氯离子的缓冲液，并优选使用：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的至少1种氨基醇化合物；及选自包括Good's缓冲液(Good'sbuffer)中pKa为7.4附近的缓冲剂即也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(pKa＝7.55)、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.50)、也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸(pKa＝7.20)及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.15)的组中的缓冲剂。上述中优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES、TES、MOPS或BES的组合，而且，最优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES的组合。
为了制备上述缓冲液，将氨基醇和Good's缓冲液以1:2～2:1、优选以1:1.5～1.5:1、进一步优选以1:1的浓度比进行混合即可。缓冲液的浓度不受限定，但氨基醇或Good's缓冲液的浓度为0.1～1000mmol/L，优选为1～500mmol/L，进一步优选为10～100mmol/L。
在缓冲液中，以稳定地保持分析对象成分为目的可以含有螯合剂、表面活性剂、抗菌剂、防腐剂、辅酶、糖类等。作为螯合剂，可以举出乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸盐、草酸盐等。作为表面活性剂，例如可以举出阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。作为防腐剂，例如可以举出叠氮化钠和抗生物质等。作为辅酶，可以举出磷酸吡哆醛、镁及锌等。作为红血球稳定剂的糖类，可以举出甘露糖醇、葡萄糖、低聚糖等。尤其，通过添加抗生物质，能够抑制手指采血时从手指表面混入的一部分细菌的增殖，并能够实现因活体成分的细菌而引起的分解的稳定化。
在血液样本中使用全血的情况下，需要用过滤器过滤已稀释的血液中的血球成分，因此将缓冲液的渗透压设为与血液相等(285mOsm/kg(mOsm/kg为在溶液的水1kg所具有的渗透压，表示离子的毫摩尔数))或血液以上，由此能够防止血球的溶血。渗透压能够通过不影响对象成分的测定、及恒久性地存在于血液中的标准成分的测定的盐类、糖类或缓冲剂等而调整为等渗。
(对象成分)
血液样本中的分析的对象成分并无特别的限定，血液中所包含的所有物质成为对象。例如可以举出临床诊断中使用的血液中的生物化学检查项目、肿瘤标志和肝炎的标志等各种疾病的标志等，可以举出蛋白质、糖、脂质、低分子化合物等。并且，测定时不仅物质浓度成为对象，而且酶等具有活性的物质的活性也成为对象。各对象成分的测定能够通过公知的方法而进行。而且，在检查肝功能、肾功能、新陈代谢等特定的器官、特定的疾病的情况下，获取器官和疾病特有的多个测定对象成分的信息，为了进行器官的状态、生活习惯的预测等，同时进行多个对象成分的分析。例如，为了检查肝的状态，测定ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(门冬氨酸氨基转移酶)、γ-GTP(γ-谷氨酰转肽酶)、ALP(碱性磷酸酶)、总胆红素、总蛋白、白蛋白等几种以上成分在血液中的浓度。
(血液检查试剂盒)
本发明的血液检查试剂盒包括容纳有稀释液的第1容纳器具、用于从用稀释液来稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第2容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第2容纳器具内的密封器具。作为本发明的血液检查试剂盒的一例，能够具备：用于稀释血液样本的成分的稀释液；容纳有稀释液的第一容纳器具；用于从通过稀释液而被稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具；用于保持分离器具的保持器具；用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具；用于使已容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具；在皮肤上制造伤口以使血液渗出到皮肤外部的针或柳叶刀、贴在伤口上的创可贴或消毒部件(例如浸渍异丙醇(70％异丙醇等)或乙醇等的无纺布)及操作说明书等。作为用于从被稀释的血液样本中回收血浆成分的分离器具，优选为分离膜的方式，更优选具有可分离血球成分的细孔的过滤器。
第一容纳器具及第二容纳器具可以将1个器具兼用作第一容纳器具及第二容纳器具，也可以是具备不同的器具的方式。为了使患者或进行稀释倍率的测定和分析对象成分的分析的测定者，可以确认稀释了容纳器具内的血液的稀释液，第一容纳器具及第二容纳器具优选由透明的原材料来制成。
保持分离器具的保持器具，优选为垫圈的方式。并且，作为密封器具，在容纳器具为筒形状的器具等的情况下，能够使用可以盖住开口的顶盖、具有螺旋状槽的盖或者橡胶塞子等。
根据上述结构，对血液和稀释液的混合容器赋予通过稀释液而稀释血液之后立即分离血浆和血球的功能，由此能够赋予血液成分的稳定性和排除来自血球细胞的基于溶血的成分的变动的影响且血液采集后的试样的稳定性。
本发明的血液分析方法设为能够实现如下方法：即使为50μL以下的采血量，也能够以高的测定精度分析分析对象成分，血液分析用血液检查试剂盒优选为包括操作说明书的试剂盒，该操作说明书记载有以50μL以下的较少的采血量也能够以高精度进行测定等对患者的信息。
(血液检查试剂盒的具体例)
在优选方式之一中，血液分析用试剂盒包括稀释液、容纳有稀释液的第一容纳器具(也是用于容纳血液样本的稀释物的容纳器具。)、用于从用稀释液来稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于使已容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具。作为具体的器具，能够使用例如日本专利第3597827号公报的图1至图13中所记载的器具。将日本专利第3597827号公报的图1作为本申请的图1而引用。
血液分离器具1具备采血容器2(有时也称作容纳有稀释液的容纳器具、第一容纳器具。也是用于容纳血液样本的稀释物的容纳器具。)、可嵌插于采血容器2中的筒体3(用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具)、可以盖装于筒体3上的顶盖活塞4、设置于顶盖活塞4的下端的密封盖5(密封器具)，使用之前，如图1所示，采血容器2的上端开口部通过顶盖6隔着密封件7而被封闭。本发明中的用于容纳被稀释的血液样本的容纳器具在图1的结构中对应于采血容器2和筒体3的组合。即，用于容纳被稀释的血液样本的容纳器具可以是1个，也可以是2个以上的组合。
采血容器2以透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部在外表面形成有螺纹部8，内表面上突出设置有卡止部9。并且，在采血容器2的下端部形成有倒圆锥状底部10，在底部10的周围形成有圆筒状腿部11。腿部11具有与分析检查血液时使用的样品杯相同的外径，优选在其下端的对置的位置分别沿铅垂方向形成有狭缝槽12。而且，如图1所示，在采血容器2内也可以预先放入有所需要量例如500mm3的稀释液13。
筒体3由透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部上形成有扩径部14。扩径部14经由薄壁部15而与主体部16连接。筒体3的下端部形成有缩径部18，在缩径部18的内表面形成有卡止突起部19。而且，在缩径部18的下端部形成有外锷部20(保持器具)，外锷部20的下端开口部通过过滤膜21(分离器具)而被覆盖，过滤膜21容许血液中的血浆的通过，并阻止血球的通过。
缩径部18的外周装配有硅橡胶制罩22(图1)。
顶盖活塞4由大致呈圆筒状的握持部26、与握持部26为同心且向下方延伸的芯棒部27构成。在握持部26的内侧上端部形成有筒体3的扩径部14可以嵌合的圆筒状的空间28，并且，其下方被螺刻，可以与螺纹螺合。芯棒部27其下端部29形成为销状，在下端部29可装卸地设置有密封盖5(参考图1)。密封盖5为硅橡胶制密封盖。
来自血液样本的稀释物的血浆的分离并回收操作，具体而言，如下进行。在容纳稀释液的采血容器2中放入所采集的血液之后，把持采血容器2的上部，一边注意避免产生气泡，一边将血液和稀释液充分地摇晃并混合。接着，将保持过滤膜21的筒体3(防止在血浆、血球分离时因环绕缸体侧面而产生的漏液)以过滤膜位于下方的方式插入到采血容器2中，并且缓慢地以一定的速度将过滤膜下压至采血容器2的底面。此时，血浆通过筒体3的过滤膜向上部上升，而血球残留在采血容器2的下部。之后，将顶盖活塞4缓慢地插入筒体3中，且由密封盖5来防止血浆和血球因反流的混合。
基于上述器具的血液分离方法的详细内容记载于日本专利第3597827号公报的0023～0026段落以及图12及图13中，该内容被引用于本说明书中。
(来自试剂盒的部件的溶出)
在本发明的试剂盒中，可包含于稀释液中的源于血液试剂盒的部件的恒久性地存在于血液中的标准成分的量被规定。将成为对象的部件在实际上适当的量的稀释液中暴露一定时间，并测定源于部件并包含于稀释液中的标准成分的量，从而能够求出可包含于稀释液中的量。优选可包含于稀释液中的源于血液试剂盒的部件的恒久性地存在于血液中的标准成分的量少，下限值并无特别的限定。
在血液检查试剂盒中，通常，采集血液的抽吸器中使用纤维棒，该纤维棒中，作为抗凝血剂而使用EDTA钠盐。并且，作为用于分离并回收血浆的器具而使用玻璃过滤器，其中包含有苏打玻璃、碳酸钠等的微量的钠离子。苏打玻璃通过将硅砂(SiO2)、碳酸钠(Na2CO3)、碳酸钙(CaCO3)进行混合并熔解而可以得到。用于保持玻璃过滤器的垫圈的原材料及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具只要是橡胶制，则有时作为用于去除蛋白质的NaOH清洗及成型时所使用的脱模剂(硝酸钠、亚硝酸钠等混合物)等的残渣物而包含微量的钠离子。作为塑料(树脂)成型品的部件有时在表面包含微量的Na。这是因为在树脂成型时所使用的脱模剂中含有作为金属元素的锡、锌、钙等及钠。
作为这些源于试剂盒的部件的钠离子，可假定混入稀释液中。根据本发明人等的研究，通过充分地减少实际上可包含于稀释液中的源于试剂盒的恒久性地存在于血液中的标准成分(优选钠离子或氯离子)的量，具体而言，通过抑制成与稀释液混合的源于血浆的钠离子量的3％左右或更少，在稀释倍率的计算中能够维持3％左右的误差精度。如上所述，例如在将稀释液的量设为350μL，将血液采血量设为30μL，将血浆成分所占比例设为55％的情况下，若可包含于稀释液中的源于试剂盒的部件的钠成分的量相对于稀释液为0.35mmol/L以下，则相对于源于血浆的钠离子保持5质量％左右，因此可知在5％左右的误差精度的范围内能够维持检查精度。如此，源于试剂盒的部件的钠成分的量优选较少，优选为0.35mmol/L以下，更优选为0.15mmol/L以下，进一步优选为0.10mmol/L以下。
作为将源于试剂盒的部件的、混入稀释液中的钠离子的量规定为充分少的量的方式，能够用不包含钠离子的纯水等水，预先优选清洗多次试剂盒的部件。该情况下，优选确认如下情况：分别准备多个用纯水等以相同的方法进行了清洗的部件，并稀释实际的最终血液，在直至最终分析血液中的对象成分为止保持了稀释液的情况下，在所有已准备的多个部件中钠离子被充分地冲洗，溶出到稀释液中的钠离子浓度降低至能够维持测定精度。
[实施例]
以下，对本发明的参考例、实施例及比较例进行说明。
(参考例1)
1.部件的清洗和稀释液的制备
使用了DEMECAL血液检查试剂盒(Leisure,Inc.)。此时，准备了对血液检查试剂盒的部件即瓶(用于容纳稀释液的第一容纳器具)、过滤器(用于从通过稀释液而被稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具)、垫圈(用于保持分离器具的保持器具)实施了无清洗、蒸馏水清洗1次、纯水清洗(导电性1μS/cm)3次的血液检查试剂盒。然后，将如下制备的350μL的稀释液-1放入瓶中，通过垫圈而被保持的过滤器被压入瓶中而过滤稀释液，测定出通过过滤器的液体的钠离子量。另外，通过使水以喷淋状喷射于部件而进行了清洗。
(稀释液组成)
按以下组成制备了稀释液-1。渗透压表示使用OSMOATAT OM-6040(ARKRAY,Inc.制造)而测定的值。渗透压的单位是溶液的水1kg所具有的渗透压，表示离子的毫摩尔数。
HEPES 50mmol/L
2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP) 50mmol/L
D-甘露糖醇 284mmol/L
氯化锂 1mmol/L
EDTA-2K 0.8mmol/L
PALP(磷酸吡哆醛) 0.05mmol/L
噻苯达唑 0.0001质量％
阿米卡星硫酸盐 0.0003质量％
硫酸卡那霉素 0.0005质量％
美罗培南三水合物 0.0005质量％
渗透压 355mOsm/kg
pH 7.4
2.钠浓度的测定
在1.中制备出的稀释液的钠浓度的测定中，通过酶活性法而进行，该酶活性法利用β-半乳糖酶通过钠而进行活性化，并利用各稀释液中的钠浓度与β-半乳糖酶活性成比例关系的情况。具体而言，用不含钠离子的纯净水，将如上所述的已过滤的稀释液-1稀释成5倍之后秤量3μL，添加如下述制备的第一试剂52μL，在37℃下加热了5分钟，添加如下述制备的第二试剂26μL，通过用JCA-BM6050型生物化学自动分析装置(JEOL Co.,Ltd.制造)，在主波长410nm、副波长658nm下测定吸光度，由此求出了1分钟的吸光度的变化。由预先制成的校准曲线测定出钠浓度。
(钠测定试剂的制备)
制备出以下组成的钠测定试剂。
第一试剂
HEPES·LiOH(pH8.0) 100mmol/L
D-甘露糖醇 60mmol/L
N-乙酰半胱氨酸 30mmol/L
硫酸镁 1.52mmol/L
β-半乳糖酶 1.1kU/L
TritonX-100 0.05质量％
第二试剂
HEPES·LiOH(pH8.0) 100mmol/L
邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷 15mmol/L
准备通过下述表1中示出的清洗方法而清洗的血液检查试剂盒10套，分别求出溶出到已过滤的稀释液-1中的Na离子量的平均值和偏差的尺度即变动系数CV(coefficientof variation)(％)。将结果示于表1中。
[表1]
Figure BDA0002106126100000191
(参考例2)
1.稀释了微量血液样本的稀释液的制备
由志愿者的患者进行知情同意之后，在采血管中获得用注射器从静脉采集的10mL的血液。从该所采血的血液中，用微量吸移管分别各20次准确地称量80μL、60μL、40μL、30μL、20μL，并分别混合到与参考例1中所制备出的稀释液相同的稀释液-1的350μL中。提前确认到从注射器和微量吸移管几乎没有溶出钠。与参考例1同样地，如下述表2所示，加入稀释液-1的血液检查试剂盒使用了已进行蒸馏水清洗、纯水清洗的血液检查试剂盒。通过使得到的血液和稀释液的混合液通过过滤器而分离血球成分，从而得到稀释血浆。将得到的稀释血浆作为试样，与参考例1同样地，进行了钠离子浓度的测定。
由如上所述求出的稀释液中的钠离子浓度(X)和血液的血浆中的钠离子浓度的标准值(Y：142mmol/L)求出各稀释液的稀释倍率(Y/X)，关于所采血的血液(80μL、60μL、40μL、30μL、20μL)的各血液，求出制作出各10件试样的稀释倍率的平均值和稀释倍率的变动系数CV(coefficient of variation)(％)。将结果示于表2中。
[表2]
Figure BDA0002106126100000201
(稀释液中的锂离子的测定)
接着，通过螯合比色法(卤化卟啉螯合法：全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉)测定出使稀释液及已进行纯水清洗的血液检查试剂盒中的稀释液和血液的混合液通过过滤器而得到的血浆的稀释液中的锂离子。具体而言，用不包含锂离子的纯净水将稀释血浆稀释为4.5倍之后，称量5μL并加入如下所述制备出的第三试剂55μL，在37℃下加热了10分钟。关于该混合物，使用JCA-BM6050型生物化学自动分析装置(JEOL Ltd.制造)，以主波长545nm、副波长596nm测定吸光度，由此求出1分钟的吸光度的变化。由预先制成的校准曲线测定出锂离子的浓度。
(锂离子用测定试剂的制备)
制备出以下组成的锂离子用测定试剂。
第三试剂
全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉 0.05质量％
二甲基亚砜 5质量％
三乙醇胺 2质量％
聚乙二醇-叔辛基苯基醚 2质量％
十二烷基硫酸钠 2质量％
由如上所述求出的稀释了血液样本的稀释后的稀释液中的锂离子浓度(A)和稀释血液之前的稀释液中的锂离子浓度(B)，求出各稀释液的稀释倍率[B/(B-A)]，关于所采血的血液(80μL、60μL、40μL、30μL、20μL)的各血液，求出制作出各10件试样的稀释倍率的平均值和稀释倍率的变动系数CV(％)。将结果示于表3中。
[表3]
Figure BDA0002106126100000211
由表2的结果可知，清洗不充分的比较级别1、3、5、6、7的稀释倍率的平均值与由锂离子求出的表3所示的稀释倍率的结果产生偏差。并且可知稀释倍率的测定结果的偏差小却变大。另一方面，强化了清洗的比较级别2、4、参考级别1、2、3的稀释倍率的平均值与由锂离子求出的表3所示的稀释倍率的结果非常一致。进而，可知在采血量为50μL以下、稀释倍率为14倍以上的级别中，关于稀释倍率的重复再现性，相对于表3所示的由锂离子求出的稀释倍率的重复再现性变差的结果，如表2所示的由血液中的钠离子浓度求出的参考级别1、2、3的稀释倍率的重复再现性非常好。
(实施例1)
1.ALT(丙氨酸氨基转移酶)及AST(门冬氨酸氨基转移酶)的测定
在参考例2中使用注射器从静脉刚进行采血之后，从已采血的同一个患者的指尖，使用柳叶刀使血液渗出到指尖的皮肤外部，之后，与参考例2同样地，用纯水清洗3次能够吸收20μL～40μL左右的液体的海绵，在干燥之后进行使用以使患者吸取血液，在与参考例2中所使用的稀释液为相同组成的稀释液350μL中浸渍吸收了血液的海绵，从海绵将血液充分地提取到稀释液中，用过滤器进行过滤而分离血球成分，得到血液样本的血浆成分的稀释液。此时所使用的血液检查试剂盒，与参考例2同样地，使用了进行3次纯水清洗的试剂盒。之后，密封稀释液并输送到能够检查的另一设施，然后取出稀释液，以与使用了参考例2的血液中的钠离子的稀释倍率的测定方法相同的方式测定稀释倍率的结果，为19.8倍的稀释倍率。由此可知采血量大于30μL。使用市售的测定试剂盒(转氨酶CII-测试Wako：Wako PureChemical Industries,Ltd.制造)测定出该稀释样本中的ALT、AST的浓度的结果，在参考例2的采血量30μL的样品中，根据使用钠离子浓度测定出的稀释倍率分析的ALT值为18U/L，AST值为36U/L，相对于该结果，如上所述，由将使用海绵而采集的血液进行了稀释的稀释液进行了分析的ALT值为18U/L，AST值为36U/L，得到一致的结果，并确认到本发明的效果。
(实施例2)
在实施例1中，使用稀释液并通过下述所示的方法测定出氯离子的浓度，所述稀释液进行了使用钠离子的血液样本中的血浆成分的稀释倍率的测定。
(稀释液中的氯离子浓度的测定)
使用离子选择电极(ISE)进行了氯离子的测定。使活体试样在选择性地响应于氯离子的离子选择电极与参照电极之间流过，根据两个电极之间产生的电动势算出氯离子浓度。
相对于由血浆的稀释液中的钠离子浓度的测定求出的血液样本中的血浆成分的稀释倍率，得到由稀释液中的氯离子浓度的测定值和恒久性地存在于血液中的氯离子浓度的平均值102mmol/L求出的稀释倍率为相同的值的结果。由此可知正常地进行由实施例1的钠离子浓度求出的稀释倍率的测定，并可知能够进行测定的验证。
符号说明
1-血液分离器具，2-采血容器，3-筒体，4-顶盖活塞，5-密封盖，6-顶盖，7-密封件，8-螺纹部，9-卡止部，10-底部，11-腿部，12-狭缝槽，13-稀释液，14-扩径部，15-薄壁部，16-主体部，18-缩径部，19-卡止突起部，20-外锷部，21-过滤膜，22-罩，26-握持部，27-芯棒部，28-空间，29-下端部，31-高低差部，33-上端部，34-顶部。

Claims (6)

1.一种血液分析方法，其包括：
用稀释液来稀释所采集的血液样本的工序；
使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率的工序；
分析血液样本中的对象成分的浓度的工序；
所述血液分析方法是使用包含选自包括如下器具的组中的部件的血液检查试剂盒的血液分析方法：
容纳有稀释液的第1容纳器具；用于从用所述稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具；用于保持所述分离器具的保持器具；用于容纳所回收的血浆的第2容纳器具；及用于将所收容的血浆维持在第2容纳器具内的密封器具，
所述稀释液是将源于所述稀释液的可包含于所述稀释液中的所述标准成分的量以能够忽略程度规定为微量并且源于所述部件的可包含于所述稀释液中的所述标准成分的量规定为能够保证血液分析精度的程度的量的稀释液，
所述血液样本的容量为50μL以下，所述血液样本中的血浆成分的稀释倍率为25倍以上，
恒久性地存在于血液中的所述标准成分为钠离子或氯离子以及至少1种另外标准成分，
所述至少1种另外标准成分是选自总蛋白或白蛋白的标准成分，
所述血液分析方法还包括：由使用所述至少1种另外标准成分的标准值求出的稀释倍率来验证所述对象成分浓度的分析的工序，
可包含于所述稀释液中的、源于所述血液检查试剂盒的部件的所述标准成分的量相对于稀释液为0.35mmol/L以下。
2.根据权利要求1所述的血液分析方法，其中，
恒久性地存在于血液中的所述标准成分为钠离子或氯离子。
3.根据权利要求1或2所述的血液分析方法，其中，
所述稀释液不包含恒久性地存在于血液中的标准成分。
4.根据权利要求1或2所述的血液分析方法，其中，
所述稀释液是在pH6.5～pH8.0的pH范围内具有缓冲作用的缓冲液。
5.根据权利要求1或2所述的血液分析方法，其中，
所述稀释液包含：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的氨基醇化合物；及选自包括也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸、也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸的组中的缓冲剂。
6.一种血液检查试剂盒，该血液检查试剂盒在权利要求1或2所述的血液分析方法中使用，并包括如下器具：
容纳有稀释液的第1容纳器具容纳；用于从用所述稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具；用于保持所述分离器具的保持器具；用于容纳所回收的血浆的第2容纳器具；及用于将所收容的血浆维持在第2容纳器具内的密封器具，
可包含于所述稀释液中的、源于所述血液检查试剂盒的部件的所述标准成分的量相对于所述稀释液为0.35mmol/L以下。
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