CN110108821A - 一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用，属于食用油中黄曲霉毒素检测技术领域，本分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：称取腐殖酸，超声波水洗12‑18min，水洗后离心取固态沉淀物，分散于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；取残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗直至回流液澄清无色后，停止加热；取出清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5‑2.5h，冷却0.5‑1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。本发明的制备方法适用于目前在售的多数腐殖酸，本制备方法工艺简单，利于控制，经过清洗制备后的分散固相萃取材料性状稳定。

Description

一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于食用油中黄曲霉毒素检测技术领域，具体涉及一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用。
背景技术
我国既是食用油生产大国也是世界上最大的食用油消费国，我国人均食用油年消费量随着生活水平的不断提高而逐年增长。因此，“食用油安全”是“食品安全”的重要组成部分，不仅关系国民体质的健康，而且直接影响国民经济的发展。
黄曲霉毒素(Aflatoxins,AFs)是食用油的一种主要污染物，其为黄曲霉菌(Aspergillus flavus)和寄生曲霉菌(Aspergillus parasiticus)的次生代谢产物。到目前为止，一共有18种AFs被报道，其中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2是最常见的四种。AFs具有高毒性、高致癌性、高致突变性和高致畸性的特点，对人类健康危害极为突出。其中，AFB1是AFs中毒性最大的，其毒性远高于氰化物、砷化物和有机农药。并且，AFB1也是目前报道的最强天然致癌物质。在温暖潮湿的地区，食品在生长、收割、储藏以及加工过程中都可能受潮长霉，因此有很高的几率遭受AFs的污染。易受AFs污染的食品主要包括：花生、玉米、大豆等油料作物以及食用油、果肉干、调味品等加工食品，摄入受AFs污染的食用油不但危害国民健康还会造成重大经济损失。因此，准确测定食用油中AFs的含量具有十分重大的意义。
目前，食用油中AFs的检测方法主要为液相色谱质谱联用分析法(LC-MS)和液相色谱荧光分析法(LC-FLD)。食用油是基质十分复杂的样品，其95％以上的成分是甘油三酯类化合物，还包含1％-5％的脂肪酸、维生素、脂溶性色素等其它类酯物。然而，受污染的食用油中AFs一般处于ng/kg的痕量水平，且食用油中大量的甘油三酯类化合物会对检测造成严重的干扰。所以对食用油中的痕量黄曲霉毒素进行检测之前，必须进行样品前处理，在提取AFs的同时消除油脂基质的干扰。
样品前处理方法是检测食用油中AFs的核心，决定整个检测方法的效率和成本。目前在食用油AFs的检测中普遍使用免疫亲和柱净化法(IAC)或多功能净化柱法(MFC)处理样品。然而，这些样品前处理方法在大批量检测食用油中的AFs时会面临以下几个问题：1、液–液萃取会消耗大量的有机试剂，并且对方法的回收率影响较大；2、提取与纯化步骤分开进行使操作过程繁琐并耗时耗力；3、样品前处理中使用的IAC柱和MFC柱价格高昂。基于此，目前食品安全检测行业在大批量地检测食用油中AFs时，面临着样品前处理方法操作过于繁琐、检测成本过高且稳定性较差等问题。为评估、监察和确保食用油安全，每年全国各地会对当地食用油中的AFs进行大批量检测，采用上述样品前处理方法无疑将消耗大量的时间和人力，同时耗费巨大的经费。如果能建立一种可靠的检测方法，使操作简便并能显著降低检测成本，就可以在很大程度上避免这种不必要的耗费，节约大量社会资源。因此，为解决食用油检测行业所面临的问题，迫切需要开发一种简单、廉价、可靠的新型检测方法应用于大批量食用油中痕量AFs的检测。
发明内容
本发明为了解决上述技术问题提供一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用，应用于各种食用油AFs的检测领域中，具有处理简便、成本低、基质干扰小和样品回收率高等效果。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种分散固相萃取材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、称取腐殖酸，超声波水洗12-18min，水洗后离心取固态沉淀物，溶解于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；
S2、取步骤S1得到的残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗至回流液澄清无色后，停止加热；
S3、取出步骤S2中清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5-2.5h，冷却0.5-1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。
本发明的制备方法的有益效果是：本分散固相萃取材料的制备方法适用于多种国内外商品化腐殖酸，本制备方法工艺简单，利于控制，经过清洗制备后的腐殖酸性状稳定，能够应用到多种食用油中对黄曲霉毒素进行萃取净化，同时能够对黄曲霉毒素进行检测，保障食用油的品质。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述步骤S1中，经超声波水洗后静置6-10h，除去上清液，并重复循环超声波水洗和静置操作10次，再离心取固态沉淀物。
采用上述进一步方案的有益效果是：静置后能够充分保留材料中的有效成分，另外重复操作10次有利于将腐殖酸中的黄腐酸和其它一些水溶性杂物清除。
进一步，所述步骤S2中对索氏提取器加热包括将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为70-90℃，加热回流时间为8-30h。
采用上述进一步方案的有益效果是：通过将清洗液蒸发、回流与腐殖酸多次接触进行清洗，清洗效果好。
进一步，所述步骤S2中将加热回流20h后的残渣取出，自然风干，研磨，置于另一索氏提取器中，再次加入180mL清洗液，再次加热提取8-12h，至回流液澄清无色后，停止加热。
采用上述进一步方案的有益效果是：对一些棕腐酸、醇溶性杂质较多的腐殖酸，能够提高清洗效率。
进一步，所述步骤S2中加热回流清洗所用的清洗液为丙酮、甲醇、乙腈和水，其中，所述丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6-8:4-6:6-8:1-2。
采用上述进一步方案的有益效果是：通过清洗液能够将腐殖酸中的棕腐酸清除，除去无效成分，避免在后续检测时产生干扰。
本发明还提供一种采用上述的制备方法制得的分散固相萃取材料。
本发明的分散固相萃取材料的有益效果是：能够应用到食用油中对黄曲霉毒素进行萃取净化，同时能够对黄曲霉毒素进行检测，保障食用油的品质。
本发明还提供一种采用上述的分散固相萃取材料在检测食用油黄曲霉毒素中的应用。
本发明还提供一种检测食用油中黄曲霉毒素的方法，包括样品前处理，称取1g食用油试样和权利要求6所述的50mg分散固相萃取材料，混合，加入5mL正己烷振荡离心，除去上清液；再加入4mL洗脱液振荡离心，取上清液，干燥，得到待检测样品，将待检测样品溶解后进行检测。
本发明的样品前处理方法有益效果是：操作简便，相较于经典的免疫亲和柱净化法，可直接处理油样而无需事先进行液液萃取操作；成本远远低于经典方法，只有其1/20的水平；能够同时处理较大量的样品，具有省时省力的优点；另外适用于净化各种食用油基质，基质干扰小，并且都具有较高的AFs回收率，在食用油AFs分析领域具有广阔的应用前景。
进一步，所述加入正己烷振荡离心，除去上清液的操作具体包括两次，第一次为加入5mL正己烷，振荡1.5-2min，再以9000-12000r/min转速离心10-20min，除去上清液；第二次为加入5mL正己烷，振荡20-40s，再以9000-12000r/min转速离心5min，除去上清液；所述加入洗脱液振荡离心的操作中振荡时间为1.5-2min，再以9000-12000r/min转速离心5min。
采用上述进一步方案的有益效果是：通过两次正己烷清洗，更利于充分将油样中杂质去除，避免油基质对检测的干扰。
进一步，所述洗脱液为乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1。
采用上述进一步方案的有益效果是：通过洗脱液将AFs从材料上洗脱下来，实现食用油中AFs的萃取，供后续检测。
附图说明
图1为本发明分散固相萃取材料制备方法流程图；
图2为本发明样品前处理方法流程图；
图3为本发明实施例1的LC-FLD色谱图；
图4为本发明实施例5的LC-FLD色谱图；
图5为本发明实施例11的LC-MS色谱图。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g国内在售的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为15min，清洗后静置8h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置8h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液为体积比为6:6:6:1的丙酮、甲醇、乙腈和水，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为30h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白调和油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液为体积比为9：1乙腈和水，具体的，振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。具体LC-FLD检测色谱图如图3所示。
实施例2
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g国内在售的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为12min，清洗后静置8h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗12min，静置8h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以6000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:2，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为30h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白混合橄榄油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例3
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g国内在售的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为16min，清洗后静置7h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗16min，静置7h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为8:6:8:2，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为20h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2.5h，材料烘干放入干燥器中冷却1h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白山茶油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为2min，以10000r/min转速离心12min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以10000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为2min，以11000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例4
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g国内在售的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为18min，清洗后静置10h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗18min，静置10h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置10h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1.5h后取出，再放入干燥器中冷却30min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:4:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为28h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为1.5h，材料烘干放入干燥器中冷却1h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白葵花籽油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以12000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以12000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为2min，以12000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例5
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g国内在售的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为16min，清洗后静置8h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗16min，静置8h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为30h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却1h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白菜籽油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以11000r/min转速离心15min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以11000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。具体LC-FLD的检测色谱图如图4所示。
实施例6
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g在售进口的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为15min，清洗后静置6h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置6h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为20h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白芝麻油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例7
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g在售进口的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为18min，清洗后静置6h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗18min，静置6h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置6h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:2，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为8h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2.5h，材料烘干放入干燥器中冷却1h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白大豆油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为2min，以12000r/min转速离心20min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例8
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g在售进口的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为15min，清洗后静置6h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置6h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为9h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白稻米油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例9
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g在售进口的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为12min，清洗后静置6h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置6h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:5:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为12h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白玉米油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例10
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g在售进口的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为15min，清洗后静置7h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置7h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为7:4:7:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为15h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白花生油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
实施例11
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g国内在售的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为15min，清洗后静置8h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置8h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为30h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述的制备方法制得的分散固相萃取材料的检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g实际阳性在售花生油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。具体LC-MS检测色谱图如图5所示。
实施例12
本申请提供一种分散固相萃取材料的制备方法，包括以下步骤：
S1、称取5g在售进口的腐殖酸试样放入1L烧杯中，加入500mL水，充分搅拌分散，将烧杯放入超声波仪中，进行超声波清洗，超声波清洗的时间为15min，清洗后静置8h，除去上清液，再次加入500mL水，进行超声波清洗15min，静置8h，除去上清液，重复循环以上步骤10次后，直至在自然光线下目测上清液无明显淡黄色现象；若试样在静置过程中，静置8h后，烧杯内的颗粒物未完全沉淀，仍然按上述步骤重复循环10次清洗；将清洗后的试样和水一起转移到离心管中，以5000r/min转速，离心6min，离心取得固态沉淀物，用丙酮将沉淀物转移至75mL的蒸发皿中，用50℃水浴加热蒸发皿，将丙酮蒸发后取出剩余残渣，将残渣放入100℃鼓风干燥箱中烘干1h后取出，再放入干燥器中冷却20min，取出冷却后的残渣，通过研磨棒将残渣研磨粉碎，得到细颗粒状残渣；
S2、取步骤S1中得到的残渣放入滤纸筒中，将滤纸筒放入索氏提取器中的抽提器内，并加入清洗液，所述清洗液包括丙酮、甲醇、乙腈和水，丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6:6:6:1，具体的，清洗液为180mL，将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为82℃，加热回流时间为20h，清洗液蒸发回流对残渣反复清洗，直至索氏提取器内回流液体澄清无色后，停止加热，将滤纸筒从索氏提取器中取出，同时要确认停止抽提12h，抽提器内回流液体保持澄清状态；
S3、将步骤S2中清洗后的滤纸筒中的材料取出，对清洗后材料烘干，烘干的温度为100℃，烘干时间为2h，材料烘干放入干燥器中冷却0.5h，再经过120目标准试验筛过筛，收集筛下物质，得到分散固相萃取材料，通过目测为黑色粉末状，其内无黄色粉末即确定为分散固相萃取材料，将分散固相萃取材料密封干燥保存。
本实施例提供一种采用上述制备方法制得的分散固相萃取材料检测食用油中黄曲霉毒素的方法，具体为样品前处理方法，包括以下步骤：称取1g加有已知定量黄曲霉毒素空白调和油试样和上述制得的分散固相萃取材料50mg置于50mL的离心管中，加入5mL正己烷振荡离心，具体振荡离心包括两次，第一次振荡时间为1.5min，以9000r/min转速离心10min，除去上清液；再次加入5mL正己烷进行第二次振荡，第二次振荡时间为30s，以9000r/min转速离心5min，除去上清液；再加入洗脱液振荡离心，洗脱液加入量为4mL，所述洗脱液包括乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1，具体的，振荡时间为1.5-2min，以9000r/min转速离心5min，离心结束后用5mL针筒注射器将上清液全部吸出，再经过0.22μm微孔滤膜过滤后，转移到新的离心管中，在小于40℃的情况下进行干燥得到待检测样品，将甲醇和水按体积比1：1混合的溶液加入待检测样品中重新溶解样品，对溶液通过LC-MS或LC-FLD进行检测分析。
具体的，通过对实施例1-10进行LC-MS检测，得到经过本方法制备的分散固相萃取材料对空白加标样品进行检测前处理后的基质效应值和回收率，通过基质效应值来判断经本分散固相萃取材料处理后的样品基质对于检测结果的干扰影响，当基质效应值大于100％时，会产生正干扰，使得检测结果出现正偏差，同时随着值越大，干扰性越大；当基质效应值小于100％时，会产生负干扰，使得检测结果出现负偏差，同时随着值越小，干扰性越大，检测结果偏差越大；当基质效应值为100％时，不产生干扰。而通过回收率来判断本分散固定萃取材料对黄曲霉毒素的萃取程度，当数值为100％时，为百分之百将其萃取出来，数值越接近100％，萃取效果越好，检测结果越准确。具体检测结果如下表1和表2：
表1
表2
另外实施例1与实施例12是分别采用国产在售腐殖酸和在售进口腐殖酸制备的分散固相萃取材料，分别各取3组平行试验制得的分散固相材料经过对比，两者的效果基本相同，因此本分散固相萃取材料适用于在售的国内外腐殖酸。在误差允许范围内，本发明中使用的腐殖酸均为含有黑腐酸的腐殖酸，用此类腐殖酸才能应用于本发明并且均能使本发明达到相同的技术效果，而对于主要含有黄腐酸的腐殖酸并不适用本发明，也无法达到本发明所描述的技术效果。具体对比结果如下表3：
表3
另外将实施例1的检测数据与现有的黄曲霉毒素标准检测方法，即免疫亲和柱净化法(IAC)的检测数据比较后，得出本制备方法制备的分散固相萃取材料以及样品前处理方法与现有的免疫亲和柱净化法检测效果相同，本方法符合检测标准的要求，具体数据结果如下表4：
表4
而本方法检测步骤简便，成本低，本方法检测的成本在10-30元/样品不等，而免疫亲和柱净化法(IAC)的检测成本在200-500元/样品不等，因此通过本方法利于进行食品油中黄曲霉毒素的低成本检测。
另外在上述实施例中，当制备分散固相萃取材料时，若放有残渣的滤纸筒在索氏提取器内蒸发回流清洗20h后回流液仍然无法呈现明显的澄清状态，为了加快清洗效率，将放有残渣的滤纸筒从索氏提取器中的抽提器中取出，将残渣取出，自然风干干燥后，再次进行研磨粉碎分散，放置在另一个滤纸筒内再次放入到另一个干净的索氏提取器中，重新加入180mL的清洗液，再次蒸发回流清洗8-12h，至回流液澄清无色，将滤纸筒从索氏提取器中取出。
上述实施例中所用的技术手段中索氏提取和分散固相萃取均为本领域技术人员所熟知的常规手段。具体的，其中LC-MS分析中所用质谱仪为SCIEX公司的Triple Quad5500，产于美国，使用电喷雾离子源。液相色谱仪为Shimadzu LC-30UFLC，产于日本，装配有LC-30AD二元高压梯度泵、SIL-30AC自动进样器、CTO-30A恒温柱温箱、DGU-20A5R脱气机。使用C18反相色谱柱(100mm×3.0mm，2.6μm)进行化合物分离，柱温控制在40℃。流动相为：水和甲醇。色谱流速为0.3mL/min，流动相为42％的B相等度洗脱。LC-FLD分析中所用液相色谱仪为Shimadzu LC-20HPLC，产于日本，装配有LC-20AT二元高压梯度泵、SIL-20A自动进样器、CTO-20A3R恒温柱温箱、DGU-20A3脱气机和RF-20A荧光检测器。使用C18反相色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)进行化合物分离，柱温控制在40℃。流动相为：水和甲醇。色谱流速为0.8mL/min，流动相为梯度洗脱，具体的，45％的B相维持4min，接着在10min内B相升高至53％。
通过申请本制备方法制得的分散固相萃取材料对样品检测前进行处理，针对实施例1、实施例5以及实施例11进行检测，实施例1为对加有已知定量黄曲霉毒素的空白调和油试样进行检测，黄曲霉毒素中的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的测试结果已知，能够确认本分散固相萃取材料的萃取效果，具体如图3所示；实施例5为对加有已知定量黄曲霉毒素的空白菜籽油试样进行检测，黄曲霉毒素中的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的测试结果已知，能够确认本分散固相萃取材料的萃取效果，具体如图4所示；针对实施例11的阳性在售花生油进行检测，具体检测结果如图5所示，为检测AFB1的色谱图、检测AFB2的色谱图、检测AFG1的色谱图和检测AFG2的色谱图；图中色谱峰分别对应AFB1、AFB2、AFG1、AFG2。腐殖酸中含有溶于水的黄腐酸，溶于丙酮和乙醇的棕腐酸，以及既不溶于水也不溶于丙酮和乙醇的黑腐酸，只有黑腐酸适合作为分散固相萃取材料提取和净化食用油中的AFs，本发明提供的材料清洗方法可以充分除去其中的黄腐酸和棕腐酸成分，有效保留黑腐酸的部分。使得通过本制备方法制得的分散固相萃取材料能够将食用油中的AFs提取出并进行检测，检测结果准确，重复性好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种分散固相萃取材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、称取腐殖酸，超声波水洗12-18min，水洗后离心取固态沉淀物，分散于丙酮中，加热蒸发，至丙酮完全蒸发后，得残渣；
S2、取步骤S1得到的残渣，置于索氏提取器中，并加入180mL清洗液，加热回流清洗至回流液澄清无色后，停止加热；
S3、取出步骤S2中清洗处理后的材料，对材料在100℃下烘干1.5-2.5h，冷却0.5-1h，再经120目过筛，取筛下物质，得到分散固相萃取材料。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，经超声波水洗后静置6-10h，除去上清液，并重复循环超声波水洗和静置操作10次，再离心取固态沉淀物。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中对索氏提取器加热包括将索氏提取器置于水浴中加热，水浴温度为70-90℃，加热回流时间为8-30h。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中将加热回流20h后的残渣取出，自然风干，研磨，置于另一索氏提取器中，再次加入180mL清洗液，再次加热提取8-12h，至回流液澄清无色后，停止加热。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中加热回流清洗所用的清洗液为丙酮、甲醇、乙腈和水，其中，所述丙酮、甲醇、乙腈和水的体积比为6-8:4-6:6-8:1-2。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的制备方法制得的分散固相萃取材料。
7.一种如权利要求6所述的分散固相萃取材料在检测食用油黄曲霉毒素中的应用。
8.一种检测食用油中黄曲霉毒素的方法，包括样品前处理，其特征在于，称取1g食用油试样和权利要求6所述的50mg分散固相萃取材料，混合，加入5mL正己烷振荡离心，除去上清液；再加入4mL洗脱液振荡离心，取上清液，干燥，得到待检测样品，将待检测样品溶解后进行检测。
9.根据权利要求8所述的检测食用油中黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述加入正己烷振荡离心，除去上清液的操作具体包括两次，第一次为加入5mL正己烷，振荡1.5-2min，再以9000-12000r/min转速离心10-20min，除去上清液；第二次为加入5mL正己烷，振荡20-40s，再以9000-12000r/min转速离心5min，除去上清液；所述加入洗脱液振荡离心的操作中振荡时间为1.5-2min，再以9000-12000r/min转速离心5min。
10.根据权利要求8或9任一项所述的检测食用油中黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述洗脱液为乙腈和水，所述乙腈和水的体积比为9：1。
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