CN105954410A - 一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法 - Google Patents

一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱‑荧光检测方法，包括粉碎、溶解、提取、纯化和高效液相色谱‑荧光检测步骤。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述高效液相色谱‑荧光检测方法能够准确检测出中药中赭曲霉毒素的含量；(2)本发明所述高效液相色谱‑荧光检测方法专一性强、灵敏度高、可操作性好。

Description

一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，涉及真菌毒素的检测，尤其涉及一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法。
背景技术
赭曲霉毒素是一组结构类似的真菌毒素，有OTA、OTB、OTC、OTD四种化合物，其中分布最广、产毒量最高、毒性最大、与人类健康关系最密切，且对农作物的污染最严重的是赭曲霉毒素A。OTA的分子量为403.8，熔点为169℃，为无色晶体，易溶于极性有机溶剂和稀碳酸氢钠溶液，微溶于水。在紫外光下的OTA呈绿色荧光，最大吸收波长为332nm.该化合物相当稳定，一般的烹调和加工方法只有部分破坏。
OTA首先是在玉米中发现，以后又相继从谷物和大豆中检出。粮谷类、水果、酒类、咖啡、调味料及中草药等多种植物产品和食品均可被OTA污染。OTA主要是由赭曲霉、纯绿青霉、炭黑霉这三种真菌所产生的次生代谢产物。研究发现，这三种产毒真菌生长繁殖所需的生态环境、污染农作物的种类、以及污染率等情况，依地域的不同而异。在热带和亚热带地区，农作物在田间和储存过程中污染的OTA主要是由赭曲霉产生；在加拿大等寒冷地区，粮食及其制品中的OTA主要来源于纯绿青霉；炭黑霉则以侵染水果为主，是新鲜葡萄、葡萄干、葡萄酒和咖啡中的OTA的主要产菌。另外，动物饲料中的OTA的污染也很严重，动物进食被OTA污染的饲料后导致体内的OTA的蓄积，而且不易被代谢降解，因此动物性食品，尤其是猪的肾脏、肝脏、肌肉、血液以及如和乳制品中常有OTA检出，随后又通过食物链对人类健康构成威胁。
用于检测OTA的方法有很多，概括起来有生物鉴定法、化学分析法、免疫分析法和仪器分析法等。生物鉴定法是利用真菌毒素能影响微生物、水生动物、家禽等生物体的细胞代谢来鉴定真菌毒素的存在。其方法专一性差、灵敏度低、一般只作为化学分析法的佐证。OTA的化学分析法主要是薄层色谱法，该方法应用范围广，易普及但结果不精确。免疫分析法以抗原抗体免疫学反应为基础，该方法具有高度特异性、灵敏性和快速简便等优点，但OTA属于半抗原，抗原性弱，因而检测结果难判断。
发明内容
本发明解决的技术问题是：为了克服上述现有技术的缺陷，获得一种专一性强、灵敏度高、可操作性好的中药中赭曲霉毒素检测方法，本发明提供了一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法。
技术方案：一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，包含以下步骤：
(1)将中药样品加入粉碎机中，功率为1.4～2.1kW/h、转速为2600～3200转/分钟、每小时投入饮片量为3～5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200～400目；
(2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1～2:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比7～9:2混合，超声提取28～35分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液；
(3)将步骤(2)获得的提取液在36～42℃条件下减压旋蒸15～30分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在45～52℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL；
(4)采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为16～21％的乙酸乙腈溶液，柱温为32～36℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为15～25μL。
优选的，步骤(1)中将中药样品加入粉碎机中，功率为1.8kW/h、转速为2900转/分钟、每小时投入饮片量为4kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目；
优选的，步骤(2)中将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1.5:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比9:2混合，超声提取32分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液。
优选的，步骤(3)中将步骤(2)获得的提取液在38℃条件下减压旋蒸26分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在48℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL。
优选的，步骤(4)中采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为19％的乙酸乙腈溶液，柱温为34℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为20μL。
有益效果：(1)本发明所述高效液相色谱-荧光检测方法能够准确检测出中药中赭曲霉毒素的含量；(2)本发明所述高效液相色谱-荧光检测方法专一性强、灵敏度高、可操作性好。
具体实施方式
实施例1
一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，包含以下步骤：
(1)将中药样品加入粉碎机中，功率为1.4kW/h、转速为2600转/分钟、每小时投入饮片量为3kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200目；
(2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比7:2混合，超声提取28分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液；
(3)将步骤(2)获得的提取液在36℃条件下减压旋蒸15分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在45℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL；
(4)采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为16％的乙酸乙腈溶液，柱温为32℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为15μL。
实施例2
一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，包含以下步骤：
(1)将中药样品加入粉碎机中，功率为1.8kW/h、转速为2900转/分钟、每小时投入饮片量为4kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目；
(2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1.5:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比9:2混合，超声提取32分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液；
(3)将步骤(2)获得的提取液在38℃条件下减压旋蒸26分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在48℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL；
(4)采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为19％的乙酸乙腈溶液，柱温为34℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为20μL。
实施例3
一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，包含以下步骤：
(1)将中药样品加入粉碎机中，功率为2.1kW/h、转速为3200转/分钟、每小时投入饮片量为5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为400目；
(2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按2:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比9:2混合，超声提取35分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液；
(3)将步骤(2)获得的提取液在42℃条件下减压旋蒸30分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在52℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL；
(4)采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为21％的乙酸乙腈溶液，柱温为36℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为25μL。
采用实施例1～3所述的检测方法对中药中赭曲霉毒素进行检测，结果如下表所示：

Claims (5)

1.一种中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，其特征在于，包含以下步骤：
(1)将中药样品加入粉碎机中，功率为1.4～2.1kW/h、转速为2600～3200转/分钟、每小时投入饮片量为3～5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200～400目；
(2)将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1～2:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比7～9:2混合，超声提取28～35分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液；
(3)将步骤(2)获得的提取液在36～42℃条件下减压旋蒸15～30分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在45～52℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL；
(4)采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为16～21％的乙酸乙腈溶液，柱温为32～36℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为15～25μL。
2.根据权利要求1所述的中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，其特征在于，步骤(1)中将中药样品加入粉碎机中，功率为1.8kW/h、转速为2900转/分钟、每小时投入饮片量为4kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目。
3.根据权利要求1所述的中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，其特征在于，步骤(2)中将步骤(1)获得的粉末与甲醇溶液按1.5:10混合，其中甲醇溶液为甲醇与水按体积比9:2混合，超声提取32分钟；采用玻璃纤维滤纸过滤提取液。
4.根据权利要求1所述的中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，其特征在于，步骤(3)中将步骤(2)获得的提取液在38℃条件下减压旋蒸26分钟，再加入双蒸水稀释至澄清状；采用免疫亲和柱纯化，其中洗脱液为甲醇，收集洗脱液后在48℃条件下吹干，用乙腈定容至2mL。
5.根据权利要求1所述的中药中赭曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法，其特征在于，步骤(4)中采用高效液相色谱测定步骤(3)获得的溶液，其中流动相为体积分数为19％的乙酸乙腈溶液，柱温为34℃，激发波长为332nm，发射波长为465nm，进样体积为20μL。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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CN114076800A (zh) * 2020-08-13 2022-02-22 云南大益微生物技术有限公司 一种发酵茶的检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李浩: "免疫亲和柱层析净化－高效液相色谱法检测中药材中赭曲霉毒素A", 《中国药业》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108169378A (zh) * 2017-12-29 2018-06-15 北京世纪桑尼科技有限公司 基于激光诱导荧光与液相色谱联用的真菌毒素检测方法
CN114076800A (zh) * 2020-08-13 2022-02-22 云南大益微生物技术有限公司 一种发酵茶的检测方法

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