CN110092819A - 玉米苞叶宽度调控蛋白arf2及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了玉米苞叶宽度调控蛋白ARF2及其编码基因与应用。所述玉米苞叶宽度调控蛋白ARF2是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质a)氨基酸序列是序列3或序列6所示的蛋白质；b)在序列3或序列6所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列3或序列6所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；d)与序列3或序列6所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。通过ARF2突变体验证，ARF2A单突变体及ARF2A和ARF2B双突变体的苞叶宽度显著降低，说明ARF2A和ARF2B在调控苞叶宽度建成中起重要作用。

Description

玉米苞叶宽度调控蛋白ARF2及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及玉米苞叶宽度调控蛋白ARF2及其编码基因与应用，特别涉及一个位于玉米第8号染色体控制玉米苞叶宽度的主效基因ARF2A和第3号染色体上控制玉米苞叶宽度的微效基因ARF2B。

背景技术

玉米机收籽粒是种植模式的一次大变革，是实现玉米大面积高产高效生产的关键措施和发展趋势。然而，目前我国推广的玉米品种普遍存在着籽粒脱水速度过慢、收获期含水量过高的问题，严重制约了玉米联合机收的产业化进程。影响玉米成熟期含水量的因素包括品种熟期、果穗苞叶性状和籽粒灌浆后期自身脱水速率；其中，苞叶性状本身即直接影响果穗脱水，且间接影响籽粒水分的散失，是玉米高产、宜机收育种需优先解决的关键性状。

玉米苞叶是果穗营养贮存器官，也是玉米植株上果穗的保护器官，为果穗提供良好的发育环境。第一，苞叶通过包裹果穗维持了籽粒发育所需的适宜温度。尤其在玉米生育后期，收获可能遇到冻害的情况下，苞叶可以防止热量的散失，有效地降低降温引起的冻害率。第二，苞叶可以降低逆境环境引起的水分亏缺从而带来的玉米生殖抑制。第三，合理的苞叶覆盖和紧密程度可以有效地降低或消除黄曲霉素的污染。第四，玉米收获时，较长和紧密的苞叶可以阻止病害虫进入到果穗内部，从而有利于降低或阻止病虫害的发生。

玉米果穗属于变态的侧茎，而果穗柄为缩短的茎秆，苞叶就是穗柄节上着生的由叶鞘转化成的变态叶。穗柄有节与缩短的节间分化，每一节有苞叶原基，最终发育为雌穗的苞叶。因此，苞叶的数量与穗柄的节数一致。当苞叶尖从穗部叶鞘伸出后，苞叶面积迅速增大，这一过程持续到吐丝期，且叶色转绿、质地坚韧、紧包花序。果穗与主茎相似，但全部节间都很短，而最上节最短，其它各节逐渐增长，最先长出的是最基部节上的叶，其它各叶构成“果穗苞”，包围和保护“顶生果穗”。这样，果穗节间长度与苞叶的紧实度密切相关。苞叶伸展过程中，叶面积的膨大与苞叶伸长时间和伸展效率有关，与细胞液及细胞壁组成也有一定关系。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何调控玉米苞叶性状。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质的新用途。

本发明提供了ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质在调控玉米苞叶性状中的应用。

上述应用中，所述ARF2A蛋白质是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：

a)氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；

b)在序列3所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

d)与序列3所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；

所述ARF2B蛋白质是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：

a)氨基酸序列是序列6所示的蛋白质；

b)在序列6所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将序列6所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

d)与序列6所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。

为了使a)中的蛋白质便于纯化，可在序列表中序列3或序列6所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1、标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述c)中的蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述c)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述c)中的蛋白质的编码基因可通过将序列2或序列5所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

上述d)中，“同源性”包括与本发明的序列3或序列6所示的氨基酸序列具有75％或更高，或80％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同源性的氨基酸序列。

为了解决上述技术问题，本发明又提供了与ARF2A蛋白质相关的生物材料和/或与ARF2B蛋白质相关的生物材料的新用途。

本发明提供了与ARF2A蛋白质相关的生物材料和/或与ARF2B蛋白质相关的生物材料在调控玉米苞叶性状中的应用；

所述生物材料为下述A1)至A12)中的任一种：

A1)编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；

A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；

A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

上述应用中，A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)其编码序列是序列1或序列2或序列4或序列5所示的cDNA分子或基因组DNA分子；

2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。

其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质且具有相同功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码序列3或序列6所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

上述应用中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

上述应用中，A2)所述的含有编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的核酸分子的表达盒是指能够在宿主细胞中表达ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的DNA，该DNA不但可包括启动ARF2A或ARF2B转录的启动子，还可包括终止ARF2A或ARF2B转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。可用于本发明的启动子包括但不限于：组成型启动子；组织、器官和发育特异的启动子及诱导型启动子。

可用现有的表达载体构建含有所述ARF2A或ARF2B基因表达盒的重组载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。如pAHC25、pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb(CAMBIA公司)等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3′端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3′端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂碱合成酶基因Nos)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3′端转录的非翻译区均具有类似功能。使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、抗生素的标记基因(如赋予对卡那霉素和相关抗生素抗性的nptII基因，赋予对除草剂膦丝菌素抗性的bar基因，赋予对抗生素潮霉素抗性的hph基因，和赋予对氨甲喋呤抗性的dhfr基因，赋予对草甘磷抗性的EPSPS基因)或是抗化学试剂标记基因等(如抗除莠剂基因)、提供代谢甘露糖能力的甘露糖-6-磷酸异构酶基因。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

上述应用中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。

上述应用中，所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌，如农杆菌。

上述应用中，所述转基因植物细胞系、转基因植物组织和转基因植物器官均不包括繁殖材料。

上述应用中，所述苞叶性状为苞叶宽度。

所述调控苞叶宽度具体体现在当ARF2A基因功能缺失时或当ARF2A和ARF2B基因功能缺失时，苞叶宽度变窄。

本发明还提供了上述ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质或上述生物材料在培育苞叶宽度变窄的转基因玉米中的应用。

本发明还提供了上述ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质或上述生物材料在玉米育种中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明最后提供了一种培育苞叶宽度变窄的转基因玉米的方法。

本发明提供的培育苞叶宽度变窄的转基因玉米的方法包括降低受体玉米中ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因玉米的步骤；所述转基因玉米的苞叶宽度窄于所述受体玉米。

进一步的，所述方法为如下1)或2)：

1)包括降低受体玉米中ARF2A蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因玉米的步骤；所述转基因玉米的苞叶宽度窄于所述受体玉米；

2)包括降低受体玉米中ARF2A蛋白质和ARF2B蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因玉米的步骤；所述转基因玉米的苞叶宽度窄于所述受体玉米。

更进一步的，所述1)中，所述降低受体玉米中ARF2A蛋白质的表达量和/或活性的方法是通过对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因进行敲除或抑制或沉默表达来实现。

所述2)中，所述降低受体玉米中ARF2A蛋白质和ARF2B蛋白质的表达量和/或活性的方法是通过对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因和ARF2B蛋白质的编码基因进行敲除或抑制或沉默表达来实现。

所述ARF2A蛋白质的编码基因的核苷酸序列是序列2所示的DNA分子；

所述ARF2B蛋白质的编码基因的核苷酸序列是序列4所示的DNA分子。

在本发明的一个具体实施例中，所述1)中，对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因进行敲除或抑制或沉默表达的方法是通过对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因进行突变实现的；

对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因进行突变的方法为将所述受体玉米基因组序列中的ARF2A基因CDS序列第531位的碱基G突变成A或将所述受体玉米基因组序列中的ARF2A基因CDS序列第1647位的碱基G突变成A。

在本发明的一个具体实施例中，所述2)中，对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因和ARF2B蛋白质的编码基因进行敲除或抑制或沉默表达是通过对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因和ARF2B蛋白质的编码基因进行突变实现的；

对所述受体玉米中ARF2A蛋白质的编码基因和ARF2B蛋白质的编码基因进行突变的方法为将所述受体玉米基因组序列中的ARF2A基因CDS序列第531位的碱基G突变成A，且将ARF2B基因CDS序列第442位的碱基C突变成T。

上述方法中，所述受体玉米可为野生型玉米B73。

本发明提供了与玉米苞叶宽度相关的ARF2A蛋白和ARF2B蛋白。氨基酸序列比较分析表明ARF2A蛋白和ARF2B蛋白都含有高度保守的B3_DNA结构域，Auxin_resp结构域，AUX_IAA结构域。利用这两个基因回交2代的EMS单突与双突突变体验证，ARF2A的单突能轻微降低玉米苞叶宽度，ARF2B的单突没有明显表型，而同时降低两个基因的表达会引起苞叶宽度的显著降低，说明ARF2A和ARF2B在调控苞叶宽度建成中起重要作用。

附图说明

图1为ARF2A蛋白保守结构域示意图。注：绿色部分为B3_DNA结构域，红色部分为Auxin_resp结构域，蓝色部分为AUX_IAA结构域。

图2为ARF2B蛋白保守结构域示意图。注：绿色部分为B3_DNA结构域，红色部分为Auxin_resp结构域，蓝色部分为AUX_IAA结构域。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1、ARF2蛋白及其编码基因的获得

在对玉米苞叶表型进行研究中发现，GRMZM2G116557基因在调控玉米苞叶宽度上起重要作用。GRMZM2G116557基因(V4版本基因号为Zm00001d011953)位于8号染色体上，全长5406bp，共有14个外显子，编码806个氨基酸。应用多个蛋白结构域预测软件(SMART，CDD，PFAM)进行搜索，结果表明GRMZM2G116557基因编码的蛋白包含一个B3_DNA结构域，一个Auxin_resp结构域以及一个AUX_IAA结构域。将GRMZM2G116557基因命名为ARF2A，ARF2A基因序列如序列1所示，ARF2A基因的CDS序列如序列2所示，ARF2A基因编码的氨基酸序列如序列3所示。

在玉米B73基因组公共数据库中(www.maizeGDB.org)，应用BLASTP程序进行蛋白序列检索，GRMZM2G116557基因从其全长考虑，存在一个与其同源性达到84.9％的基因，其基因号为GRMZM2G338259(V4版本基因号为Zm00001d042267)。GRMZM2G338259基因位于第3号染色体上，全长5987bp，共有14个外显子，编码805个氨基酸。应用多个蛋白结构域预测软件(SMART，CDD，PFAM)进行搜索，结果表明GRMZM2G338259基因编码蛋白包含一个B3_DNA结构域，一个Auxin_resp结构域以及一个AUX_IAA结构域(图2)。将GRMZM2G338259基因命名为ARF2B，ARF2B基因序列如序列4所示，ARF2A基因的CDS序列如序列5所示，ARF2B基因编码的氨基酸序列如序列6所示。

实施例2、ARF2基因功能验证

一、ARF2突变体的获得及鉴定

1、ARF2突变体的获得

从玉米EMS诱导突变体库(MEMD)中获得了2个独立的以B73为背景的GRMZM2G116557基因EMS突变体(购自EMS诱导突变体库(MEMD)，编号分别为EMS4-0b0178和ems4-9cf3f)，并获得了1个以B73为背景的GRMZM2G338259基因的EMS突变体(购自EMS诱导突变体库(MEMD)，编号为ems4-43886)。

EMS4-0b0178突变体的突变位点位于第6个外显子上，与野生型玉米B73基因组相比，EMS4-0b0178突变体的基因组序列是将野生型玉米B73基因组序列中的ARF2A基因CDS序列第531位的碱基G突变成A，且保持其他序列不变得到的序列。

ems4-9cf3f突变体的突变位点位于第12个外显子上，与野生型玉米B73基因组相比，ems4-9cf3f突变体的基因组序列是将野生型玉米B73基因组序列中的ARF2A基因CDS序列第1647位的碱基G突变成A，且保持其他序列不变得到的序列。

ems4-43886突变体的突变位点位于第5个外显子上，与野生型玉米B73基因组相比，ems4-43886突变体的基因组序列是将野生型玉米B73基因组序列中的ARF2B基因CDS序列第442位的碱基C突变成T，且保持其他序列不变得到的序列。

上述三个突变体中的突变位点造成各自编码的蛋白提前终止翻译，进而导致基因功能缺失。

2、ARF2突变体的鉴定

分别采用如下引物对EMS4-0b0178、ems4-9cf3f和ems4-43886突变体的基因型进行鉴定：

EMS4-0b0178：arf2a-0b0178-F：ACTTGGAGTGCTCTCAGGTGG；

arf2a-0b0178-R：TCAGTCCTGTAGCATACACG；

ems4-9cf3f：arf2a-9cf3f-F：ACCTGACTGAAAGCACCGACTC；

arf2a-9cf3f-R：GGACACCTCAGGCAAGCA；

ems4-43886：arf2b-43886-F：TGAGCGATTCCAGGTCCTGTG；

arf2b-43886-R：ACTCTGAAGGAGATGCCTCC。

对EMS4-0b0178突变体的PCR扩增产物进行测序，若两条链上的ARF2A基因CDS序列第531位的碱基G均突变成A，而其它序列保持不变，则为EMS4-0b0178纯合突变体；若两条链上的ARF2A基因CDS序列第531位的碱基均为G，则为野生型；若一条链上的ARF2A基因CDS序列第531位的碱基G突变成A，而另一条链相应位置为碱基G，则为EMS4-0b0178杂合突变体，杂合突变体不参与表型统计。

对ems4-9cf3f突变体的PCR扩增产物进行测序，若两条链上的ARF2A基因CDS序列第1647位的碱基G均突变成A，而其它序列保持不变，则为ems4-9cf3f纯合突变体；若两条链上的ARF2A基因CDS序列第1647位的碱基均为G，则为野生型；若一条链上的ARF2A基因CDS序列第1647位的碱基G突变成A，而另一条链相应位置为碱基G，则为ems4-9cf3f杂合突变体，杂合突变体不参与表型统计。

对ems4-43886的PCR扩增产物进行测序，若两条链上的ARF2B基因CDS序列第442位的碱基C均突变成T，而其它序列保持不变，则为ems4-43886纯合突变体；若两条链上的ARF2B基因CDS序列第442位的碱基均为C，则为野生型；若一条链上的ARF2B基因CDS序列第442位的碱基C突变成T，而另一条链相应位置为碱基C，则为ems4-43886杂合突变体，杂合突变体不参与表型统计。

3、ARF2A与ARF2B的双突变体材料的构建

将基因型鉴定为ems4-9cf3f杂合突变体与ems4-43886杂合突变体的材料分别作为父母本，取ems4-9cf3f杂合突变体的花粉给ems4-43886杂合突变体的雌穗人工授粉，同时取ems4-43886杂合突变体的花粉给ems4-9cf3f杂合突变体的雌穗人工授粉，分别得到组合为ems4-43886×ems4-9cf3f和ems4-9cf3f×ems4-43886的ARF2A与ARF2B的双突变体材料。采用上述步骤2中的引物进行基因型鉴定，得到组合为ems4-43886×ems4-9cf3f和ems4-9cf3f×ems4-43886的ARF2A与ARF2B的纯合双突变体材料。下面统计表型使用组合为ems4-43886×ems4-9cf3f的纯合双突变体材料。

二、ARF2突变体的表型分析

将步骤一获得的EMS突变体与野生型玉米B73(购自B73基因组公共数据库)回交2代再自交，得到BC2F2突变体材料，并以BC2F2突变体材料为实验材料测定苞叶宽度大小。具体步骤如下：籽粒完全成熟后，收获前同一时间，田间调查苞叶宽度，选取玉米果穗从外向内数第三片苞叶，用软绳尺测量苞叶1/2处的宽度。

上述BC2F2突变体材料的具体制备方法如下：以野生型玉米B73材料为轮回亲本，将步骤一获得的EMS突变体(EMS4-0b0178纯合突变体、ems4-9cf3f纯合突变体、ems4-43886纯合突变体和ems4-43886×ems4-9cf3f的纯合双突变体材料)作为供体亲本，在授粉期取B73的雄穗花粉，人工给步骤一获得的EMS突变体雌穗授粉，得到BC1F1材料；再将BC1F1材料播种，在授粉期取B73的雄穗花粉，人工给BC1F1材料雌穗授粉，得到BC2F1材料；再将BC2F1材料播种，授粉期人工套袋自交授粉，最终得到BC2F2突变体材料。将获得的BC2F2突变体材料分别按照步骤一的2中的方法进行基因型鉴定，选择具有纯合突变表型的BC2F2突变体材料用于表型分析。

结果表明：野生型玉米B73苞叶宽度平均为5.1cm；EMS4-0b0178单突变体苞叶宽度平均为4.1cm；ems4-9cf3f单突变体苞叶宽度平均为4.2cm；ems4-43886单突变体苞叶宽度平均为5.05cm；双突变体苞叶宽度平均为3.04cm。与野生型相比，EMS4-0b0178单突变体会导致苞叶宽度降低20％左右，ems4-9cf3f单突变体会导致苞叶宽度降低18％左右，ems4-43886单突变体对苞叶宽度没有明显的改变，而双突变体导致苞叶宽度降低了40％左右。所有突变体植株其他方面表型没有任何显著变化。

以上突变体表型统计说明：ARF2A和ARF2B基因在控制苞叶宽度建成上起重要作用，ARF2A和ARF2B基因具有调控玉米苞叶宽度的功能。

序列表

<110>中国农业大学

<120>玉米苞叶宽度调控蛋白ARF2及其编码基因与应用

<160>6

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>5406

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>1

ctcctttctc ccgtccccgc acaaaaacat ttgcccccca cccggccacc cctcccgagt 60

cccgactgct actgccgctg cctcctctcc ctttccgcct gccttcgctc tcctcgtcgt 120

ctcctccgtc tagggttctc caccccaccc gccccgccgc cgcccgatcc gaggcagatg 180

ccgcccgcag ccatggcgct gccgtcccag gccccgtcta actcaggtac gcacgcgcgc 240

cagatccggt cagctccggc gccccgcttt cttctctctt cgctcgtgtt cgccgtctcc 300

tccccgcgga gactcgtttc tgatgacgcc tgcctctgtt ccggcagggg atccgctgta 360

cccggagctc tggcgcgcct gcgccggccc gctcgtcacc gtcccccgcg tcggcgacct 420

cgtcttctac ttcccccagg gacacatcga gcaggtacgc ctccctcttc gtcttcctct 480

ctgctcccgc tggagccttg gcttgctccc tttgctgcgg acgctgactt ggagtgctct 540

caggtggagg cgtccatgaa ccaggttgcc gggaacccga tgcgtctcta cgatctgcct 600

tccaagctgc tctgccgcgt gctcaacgtc gagctgaagg tcccttcctc ttccgctcct 660

gttttttttt taccctccct ggtttagtgg ttttccactg ccaattctgc accttccgcg 720

tccgctctag gcccggtgcc tcacgcgttc tccgggtttt ggcaggcgga gaccgacacc 780

gacgaggtgt acgcgcagat catgctcatg ccggagcccg aggtagcctc ctcccaactc 840

gggacgactt tattctcgag acgcgtttcg ggaaaatttt tcctcggtgc taggagagtt 900

ctcacttgct gccgcgcctg cttgttcgcc cgtgcagcaa aacgatgtgg ctgccgagaa 960

gacgagctct gggtctgctg cgccaccgag gccagcggtc aggtcattct gcaagacgct 1020

caccgcctcc gacaccagca cacacggcgg cttctctgtc ctgcgccgcc acgctgacga 1080

gtgcctccct gccctggtgt gtgcgcgcgc gctctccatc cacttctgga ttctgtttca 1140

cgcgcgtgct tctgcttaac gtttgtctct tcgggtgagc tgatcttcgt ttcgcgggca 1200

ggatatgtcc cagtcgcctc ccactcagga gctggtggcg aaggatctgc atggcatgga 1260

gtggcgattc cgccacatct tccgcggtaa tttgggctcc tcatttgccg tggttcgcgc 1320

ctgtcgtgta tgctacagga ctgattgatt tgttgcaccg ttactttcca ttgtcgattt 1380

gttcagtatt tgtagtttac aactttagat tatgaatcag taccgctgtg attcattgca 1440

tgtctcaatt ggaaagctcg tttttttgtg cctggtgttg atgatcacta accgtgcaca 1500

aaatccatct tcagggcaac ccaggaggca tctccttcag agtggttgga gtgtttttgt 1560

cagttccaaa aggcttgttg ctggagacgc cttcattttc ctcaggtttg ctttgtttcc 1620

tgcctaccca gcatgatagc aatttcctga tctggtgcta agtttctgtt ggtccttgtg 1680

cagaggagaa aacggtgaac ttcgagttgg tgttaggcgc gctatgaggc agttgtctaa 1740

tgtaccttct tcggttatat ctagccaaag catgcatctc ggggttcttg cgactgcatg 1800

gcacgctatt aacacaaagt ccatgttcac tgtctactac aaacctaggt acgttgcatg 1860

tctgccaaac acactgatta catttctgat actttacata ccgatctacc ttgtttatct 1920

tgcatgcagt ttgttcttgt taaaggtact taacatctta ctgatctcta aatgtcaatg 1980

ttaggacgag cccttcagag ttcatcattc catatgatca atatatggag tcagtaaaaa 2040

acaattattc tattgggatg agattcagga tgaggtttga aggggaagag gcccccgagc 2100

agaggtaact cctccttatt ggccttctgt aatttgcagc ttcattcatg ctacctggtc 2160

cccatcattg tacctgctcg ttatttgtag ttatttttga tgtattttta tcatgtcatt 2220

taggtttact ggtacaatag ttggctgtga aaatcttgac ccactatggc ctgattccag 2280

ttggagatac ttgaaggtaa ctgcttattc aatgtttaat tccattatgg tcttaaatct 2340

tatgtttatg gagggttgtt ttttttcttt gttattaact ataggtgcgc tgggatgagc 2400

cttctactat cccgcggcca gataaggtct ctccctggaa gatagagcct gcttcatcac 2460

ctcctgttaa tcctctccct ctttctagag gaaaaagacc tagacaaaat gcacctccac 2520

cttcccctga atcatctgtt ctcacaaaag aaggtaagtt tattagatcg ttcagtttca 2580

agagtaatgg tgacaaaaat atagccaggc taatgctttt caaattatct tgtgtaattt 2640

gcaggtgcaa ccaagattga tactgattct gctcaaacac cacatcaaaa ttcggtcttg 2700

caaagtcaag agcagatgag ctttaggaac aacctgactg aaagcaccga ctctgattcc 2760

actgttcaga agcagatgat gtggtcccca tcacccaatg ggaaagttca cactaatttt 2820

cagccgagac ctgctatgga taactggatg ccattgggaa ggcgtgaaac tgacttcaag 2880

gacacccgtt ctgccttcaa ggatgcccgc accgcttctc aatcgtttgg agatacacag 2940

gggttcttta tgcaagctta tgatgacagt cgtcaccgtc tttctttcaa caatcagttt 3000

caagatcagg gttcagctca tcgctttgca gatccatact tctatatgcc tcaacaacct 3060

tctctgacgg ttgaatcagg cacaaggacg caaacagcga acaatgactt gcgtttttgg 3120

agtgagcgga attcgatgta tggtaatcca agtgaccaac agcagggttt cagctttggg 3180

caaaacacat caagttggtt gaaccagcca cttccccagg ttgaacagtc acgagtggtc 3240

aggccgcatg caacggttgc tccatttgat ttagagaaga ctagagaagg cagtgggttc 3300

aaaatatttg gtttccaagt tgatacaacc aatccatcac ctgtccaatt gagctctcca 3360

ttgtctgcta tccgagagca tgtggtacaa actcgaccat cggcaccagt gaatgaattg 3420

caacctgtgc aaattgagtg cttgcctgag gtgtccgtaa gcacagctgg aactgcagct 3480

gagaacattc agcaagtcca gcaaagttcg aaagatattc aaagcaagtc ccagggcgct 3540

tcaacaagga gctgtacaaa ggtattgttt ttttccgttt ttatgaccat gcacttgtct 3600

atattcaatg tgcatgtgat tgggaatata ttatcagcta ttggctcatt cggttattga 3660

aacaaaatga cctcttcaga tattgctgtg tggttccgaa atcctggtgg tttggttcct 3720

aattgtctga atgcagactg gtcgttgagt tcatgactca aatctgtggt tttcaccgac 3780

actgatcgaa tctgccaata atcgtttgat gtgttctcta tgttgcctaa aatcgcatct 3840

ccatttggca gaattcaaaa aagaagaaga aaagaaacag aaacaaaaca ataaatttac 3900

tcaacatgcc tgatgataca tttattcttt tttggtggcc atggattgga ttgttcggtc 3960

caaagcagaa ttgcttgatt gcgtcattgt agttttacat acaataatat tgcataactg 4020

ctttgtggcc gaacctataa aatatcttgt gtagtcctat gatcctatcc tctacaattt 4080

acacttctgc ttcgaatggt cttcaggttc ataagcaagg agttgcgctt ggccggtccg 4140

tggacctctc taaattcacc gactacggtg agctcaaagc ggaactagac aagatgtttg 4200

agttcgaggg cgaattggta tctgctaacc ggaactggca gatcgtttat accgacaacg 4260

agggtgatat gatgcttgtc ggagatgacc cgtgggagta agtctttttc tctctctcaa 4320

gtggtgggag ctttgtacac gcgaatgagc tttctcgttc caatactgac acaccagtcc 4380

attgcttacg agcagggagt tctgcaacat agtgcgcaag atctacatct acacgaagga 4440

ggaggtccag aagatgaact cgaaatcatc cgtgccgagg aaggaggaac ccccagcagc 4500

aggcgaaggc tgcgccgccg ccgccgcaaa cgagtaggat gtctgcctgc actgcagcaa 4560

gcagttttag atgactaggt aagtcctccg tttgagccgc agtactctgt tttttttgtt 4620

gttgttgcaa cagtggtggt gaatggggtt ttgactctgg actaaaggag caacgaattt 4680

gtctttgttg aatacctgtt aatgcattgc taaattcagc atctcggctg cattggcgct 4740

ctggtcacat gatacttaag tttggcattg gcatgatagg aggctgcagt gatgggaaaa 4800

ggaaaaaggg gggctcatct tttggttgtc gctttttggc tttgtgtgta ggtcgtgtgg 4860

aggaagccga cgatgatgca tgcgtgatga acccgttcct tgtgcaggag gtggtgccag 4920

cccgggtccc agggaagtaa aaactcctga gatcttttgc ttgtccgttg cagccccatc 4980

ccccgtccgt ttgggtttta gttgggaacg tagaaactac tgtctccgcc tgcttctccg 5040

aagctcgctg ttggtagcaa gttttattgc tagtattatt gttattgctg atttgctccc 5100

ctctgccttt gcgatgtaaa tatttgtgta cccagcccca gccccagccc cagccccagc 5160

ttgtagtgag cagtaacaag cagtagcggt accttcggta ttaaccggca gctagctatt 5220

tcgcggcatt ttaatccctg taagcgtagc tctgtggcgt gagatagatg acaaacactg 5280

ggtatatgta tgtctgatct ttctcactga atgtaccata agagagtttg tagagtacct 5340

gacctgtgac caaccccgtt cctgtcagct ctctggtctc agcaacacgc tgtgtgatgc 5400

cgcata 5406

<210>2

<211>2421

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>2

atgccgcccg cagccatggc gctgccgtcc caggccccgt ctaactcagg ggatccgctg 60

tacccggagc tctggcgcgc ctgcgccggc ccgctcgtca ccgtcccccg cgtcggcgac 120

ctcgtcttct acttccccca gggacacatc gagcaggtgg aggcgtccat gaaccaggtt 180

gccgggaacc cgatgcgtct ctacgatctg ccttccaagc tgctctgccg cgtgctcaac 240

gtcgagctga aggcggagac cgacaccgac gaggtgtacg cgcagatcat gctcatgccg 300

gagcccgagc aaaacgatgt ggctgccgag aagacgagct ctgggtctgc tgcgccaccg 360

aggccagcgg tcaggtcatt ctgcaagacg ctcaccgcct ccgacaccag cacacacggc 420

ggcttctctg tcctgcgccg ccacgctgac gagtgcctcc ctgccctgga tatgtcccag 480

tcgcctccca ctcaggagct ggtggcgaag gatctgcatg gcatggagtg gcgattccgc 540

cacatcttcc gcgggcaacc caggaggcat ctccttcaga gtggttggag tgtttttgtc 600

agttccaaaa ggcttgttgc tggagacgcc ttcattttcc tcagaggaga aaacggtgaa 660

cttcgagttg gtgttaggcg cgctatgagg cagttgtcta atgtaccttc ttcggttata 720

tctagccaaa gcatgcatct cggggttctt gcgactgcat ggcacgctat taacacaaag 780

tccatgttca ctgtctacta caaacctagg acgagccctt cagagttcat cattccatat 840

gatcaatata tggagtcagt aaaaaacaat tattctattg ggatgagatt caggatgagg 900

tttgaagggg aagaggcccc cgagcagagg tttactggta caatagttgg ctgtgaaaat 960

cttgacccac tatggcctga ttccagttgg agatacttga aggtgcgctg ggatgagcct 1020

tctactatcc cgcggccaga taaggtctct ccctggaaga tagagcctgc ttcatcacct 1080

cctgttaatc ctctccctct ttctagagga aaaagaccta gacaaaatgc acctccacct 1140

tcccctgaat catctgttct cacaaaagaa ggtgcaacca agattgatac tgattctgct 1200

caaacaccac atcaaaattc ggtcttgcaa agtcaagagc agatgagctt taggaacaac 1260

ctgactgaaa gcaccgactc tgattccact gttcagaagc agatgatgtg gtccccatca 1320

cccaatggga aagttcacac taattttcag ccgagacctg ctatggataa ctggatgcca 1380

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gcttctcaat cgtttggaga tacacagggg ttctttatgc aagcttatga tgacagtcgt 1500

caccgtcttt ctttcaacaa tcagtttcaa gatcagggtt cagctcatcg ctttgcagat 1560

ccatacttct atatgcctca acaaccttct ctgacggttg aatcaggcac aaggacgcaa 1620

acagcgaaca atgacttgcg tttttggagt gagcggaatt cgatgtatgg taatccaagt 1680

gaccaacagc agggtttcag ctttgggcaa aacacatcaa gttggttgaa ccagccactt 1740

ccccaggttg aacagtcacg agtggtcagg ccgcatgcaa cggttgctcc atttgattta 1800

gagaagacta gagaaggcag tgggttcaaa atatttggtt tccaagttga tacaaccaat 1860

ccatcacctg tccaattgag ctctccattg tctgctatcc gagagcatgt ggtacaaact 1920

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tccgtaagca cagctggaac tgcagctgag aacattcagc aagtccagca aagttcgaaa 2040

gatattcaaa gcaagtccca gggcgcttca acaaggagct gtacaaaggt tcataagcaa 2100

ggagttgcgc ttggccggtc cgtggacctc tctaaattca ccgactacgg tgagctcaaa 2160

gcggaactag acaagatgtt tgagttcgag ggcgaattgg tatctgctaa ccggaactgg 2220

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gagttctgca acatagtgcg caagatctac atctacacga aggaggaggt ccagaagatg 2340

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gccgccgccg caaacgagta g 2421

<210>3

<211>806

<212>PRT

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>3

Met Pro Pro Ala Ala Met Ala Leu Pro Ser Gln Ala Pro Ser Asn Ser

1 5 10 15

Gly Asp Pro Leu Tyr Pro Glu Leu Trp Arg Ala Cys Ala Gly Pro Leu

20 25 30

Val Thr Val Pro Arg Val Gly Asp Leu Val Phe Tyr Phe Pro Gln Gly

35 40 45

His Ile Glu Gln Val Glu Ala Ser Met Asn Gln Val Ala Gly Asn Pro

50 55 60

Met Arg Leu Tyr Asp Leu Pro Ser Lys Leu Leu Cys Arg Val Leu Asn

65 70 75 80

Val Glu Leu Lys Ala Glu Thr Asp Thr Asp Glu Val Tyr Ala Gln Ile

85 90 95

Met Leu Met Pro Glu Pro Glu Gln Asn Asp Val Ala Ala Glu Lys Thr

100 105 110

Ser Ser Gly Ser Ala Ala Pro Pro Arg Pro Ala Val Arg Ser Phe Cys

115 120 125

Lys Thr Leu Thr Ala Ser Asp Thr Ser Thr His Gly Gly Phe Ser Val

130 135 140

Leu Arg Arg His Ala Asp Glu Cys Leu Pro Ala Leu Asp Met Ser Gln

145 150 155 160

Ser Pro Pro Thr Gln Glu Leu Val Ala Lys Asp Leu His Gly Met Glu

165 170 175

Trp Arg Phe Arg His Ile Phe Arg Gly Gln Pro Arg Arg His Leu Leu

180 185 190

Gln Ser Gly Trp Ser Val Phe Val Ser Ser Lys Arg Leu Val Ala Gly

195 200 205

Asp Ala Phe Ile Phe Leu Arg Gly Glu Asn Gly Glu Leu Arg Val Gly

210 215 220

Val Arg Arg Ala Met Arg Gln Leu Ser Asn Val Pro Ser Ser Val Ile

225 230 235 240

Ser Ser Gln Ser Met His Leu Gly Val Leu Ala Thr Ala Trp His Ala

245 250 255

Ile Asn Thr Lys Ser Met Phe Thr Val Tyr Tyr Lys Pro Arg Thr Ser

260 265 270

Pro Ser Glu Phe Ile Ile Pro Tyr Asp Gln Tyr Met Glu Ser Val Lys

275 280 285

Asn Asn Tyr Ser Ile Gly Met Arg Phe Arg Met Arg Phe Glu Gly Glu

290 295 300

Glu Ala Pro Glu Gln Arg Phe Thr Gly Thr Ile Val Gly Cys Glu Asn

305 310 315 320

Leu Asp Pro Leu Trp Pro Asp Ser Ser Trp Arg Tyr Leu Lys Val Arg

325 330 335

Trp Asp Glu Pro Ser Thr Ile Pro Arg Pro Asp Lys Val Ser Pro Trp

340 345 350

Lys Ile Glu Pro Ala Ser Ser Pro Pro Val Asn Pro Leu Pro Leu Ser

355 360 365

Arg Gly Lys Arg Pro Arg Gln Asn Ala Pro Pro Pro Ser Pro Glu Ser

370 375 380

Ser Val Leu Thr Lys Glu Gly Ala Thr Lys Ile Asp Thr Asp Ser Ala

385 390 395 400

Gln Thr Pro His Gln Asn Ser Val Leu Gln Ser Gln Glu Gln Met Ser

405 410 415

Phe Arg Asn Asn Leu Thr Glu Ser Thr Asp Ser Asp Ser Thr Val Gln

420 425 430

Lys Gln Met Met Trp Ser Pro Ser Pro Asn Gly Lys Val His Thr Asn

435 440 445

Phe Gln Pro Arg Pro Ala Met Asp Asn Trp Met Pro Leu Gly Arg Arg

450 455 460

Glu Thr Asp Phe Lys Asp Thr Arg Ser Ala Phe Lys Asp Ala Arg Thr

465 470 475 480

Ala Ser Gln Ser Phe Gly Asp Thr Gln Gly Phe Phe Met Gln Ala Tyr

485 490 495

Asp Asp Ser Arg His Arg Leu Ser Phe Asn Asn Gln Phe Gln Asp Gln

500 505 510

Gly Ser Ala His Arg Phe Ala Asp Pro Tyr Phe Tyr Met Pro Gln Gln

515 520 525

Pro Ser Leu Thr Val Glu Ser Gly Thr Arg Thr Gln Thr Ala Asn Asn

530 535 540

Asp Leu Arg Phe Trp Ser Glu Arg Asn Ser Met Tyr Gly Asn Pro Ser

545 550 555 560

Asp Gln Gln Gln Gly Phe Ser Phe Gly Gln Asn Thr Ser Ser Trp Leu

565 570 575

Asn Gln Pro Leu Pro Gln Val Glu Gln Ser Arg Val Val Arg Pro His

580 585 590

Ala Thr Val Ala Pro Phe Asp Leu Glu Lys Thr Arg Glu Gly Ser Gly

595 600 605

Phe Lys Ile Phe Gly Phe Gln Val Asp Thr Thr Asn Pro Ser Pro Val

610 615 620

Gln Leu Ser Ser Pro Leu Ser Ala Ile Arg Glu His Val Val Gln Thr

625 630 635 640

Arg Pro Ser Ala Pro Val Asn Glu Leu Gln Pro Val Gln Ile Glu Cys

645 650 655

Leu Pro Glu Val Ser Val Ser Thr Ala Gly Thr Ala Ala Glu Asn Ile

660 665 670

Gln Gln Val Gln Gln Ser Ser Lys Asp Ile Gln Ser Lys Ser Gln Gly

675 680 685

Ala Ser Thr Arg Ser Cys Thr Lys Val His Lys Gln Gly Val Ala Leu

690 695 700

Gly Arg Ser Val Asp Leu Ser Lys Phe Thr Asp Tyr Gly Glu Leu Lys

705 710 715 720

Ala Glu Leu Asp Lys Met Phe Glu Phe Glu Gly Glu Leu Val Ser Ala

725 730 735

Asn Arg Asn Trp Gln Ile Val Tyr Thr Asp Asn Glu Gly Asp Met Met

740 745 750

Leu Val Gly Asp Asp Pro Trp Glu Glu Phe Cys Asn Ile Val Arg Lys

755 760 765

Ile Tyr Ile Tyr Thr Lys Glu Glu Val Gln Lys Met Asn Ser Lys Ser

770 775 780

Ser Val Pro Arg Lys Glu Glu Pro Pro Ala Ala Gly Glu Gly Cys Ala

785 790 795 800

Ala Ala Ala Ala Asn Glu

805

<210>4

<211>5938

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>4

caccacaccc cgtctcgctt ttgctgccgc tgcaggccgg tcagaccaga caggcagcag 60

gcagccagcc agccgcacac acgcaagcac cggcccgggc ccacacgcct ttcccagccc 120

gcgcatcgga ccggaccgga ccggaccata ctggaccgga ccgcgcgaac cggtggtcca 180

agccaacgcg gccgtgtcac caccggcttt ctttctgtcc ggacgccacc gctgcgtcac 240

gctgtctact ccctacaaag agaccacacc gaatctcccc tctcgtctac cctcctctcc 300

ttcctcgccg cacacacaga cacacgcaaa aacatttctc ccccctcccg actgctactg 360

ccgctgcctc ctcccccttt ccgcccgcct tcgctccctc ccaaccccct tcctcctccg 420

tctagggttt cccgccgccg cctgatccga gtcagatgcc gcccgcaaca gccatggcgc 480

cgccgtccca gcccccgtct aactcaggta cgcgcgcgcc agatccggtc agctccggcg 540

gccttatctc tctacctctt ggcgtccgcc gtctcctctc cgaggcgggg cctcgtgctg 600

atggtgcctt gctctgttcc tggcagggga tccgctgtac ccggagctct ggcgcgcctg 660

cgccggcccg ctcgtcaccg tcccccgcgt cggcgacctc gtcttctact tcccccaggg 720

gcacatcgag caggtactcc tcctcccttc tcctccgctg gagcttagct tgtccctcgc 780

cccccctgcc ctgctccgga cgctgatttg gagtgctcgg gggctcgcag gtggaggcgt 840

ccatgaacca ggtcgccggg aaccagatgc gcctctacga tctgcccccc aagctgctct 900

gccgcgtgct caacgtcgag ctcaaggttc cttccacttc ccgccgtctt ttttttgttt 960

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gagcgattcc aggtcctgtg cttacgcgtt ctgcgggttt gggcaggcgg agaagcccga 1080

ggtagcctcc ctcccagctc ggactatcta tgctcggcac gtaattccgg aattttccct 1140

cggaactagg aggttctcac ttgctctcgc tctgcttgct cgttcgtgca gcaaaccgat 1200

gtgccggctg agaagccgag ttctgcacct gctgcgtcgc cgaggccagc agtcaggtcc 1260

ttctgcaaga cgctcaccgc ctcggacacc agcacacacg gtggcttctc tgtgctgcgc 1320

cgacacgctg acgagtgcct ccctcccctg gtgtgtgcgc tcaacacccc cctgtggatt 1380

ctgttcctct gctattaata gaagtataga actagagatg cgcgtggtac tgcttaagct 1440

ttgtgtcgtc tggtgagctg accttcttgt ttttccgtcg gcaggatatg acccagtcgc 1500

ctcccacaca ggagctggtg gcgaaggatc tgcatggcat ggagtggcgc ttccgccaca 1560

tctttagagg taatttgggc tcctcatttg ccatggttcg cgcctgcctt gtatgctaca 1620

ggattgattg atttgcttca ccgctacttc cgattgtcga tttattcact atttgtagtt 1680

tagtttatct atcagtttcg ccgtgattcg ttgcatttat cgactgaaaa gctcgttttt 1740

tgtgcctgat gttgttgatc actaaccgtg cccaaaaaat ccatcttcag ggcagccaag 1800

gaggcatctc cttcagagtg gttggagtgt ttttgttagt tctaaaaggc ttgttgctgg 1860

tgatgccttc attttcctca ggtttgcttt gtgtcctgcc tacccagcac tgatagcaat 1920

tcgccgtttt ggtgctaagt ttctgttggg ccctgtgcag aggagaaaat ggtgaacttc 1980

gagttggtgt taggcgggca atgaggcaat tgtctaatgt accttcttca gtcatatcta 2040

gccaaagcat gcacctcgga gtccttgcga ctgcatggca cgccattaac acgaagtcca 2100

tgttcactgt ctactacaag cctaggtacg ttgacatgtc tgcagcaaac tgattgcatt 2160

tctgagactt tacatactga cttaccttga ttatcttgct gacctctaaa tgtcaatgtt 2220

aggacgagcc cttcagagtt catcataccg tacgatcaat atatggagtc ggtaaaaaat 2280

aattattcta ttggcatgag attcaggatg aggtttgaag gagaagaggc gccagagcag 2340

aggtaactcc cttatttggc cttctgtagt ttgtggcttc atgtcacctg gtcccctgat 2400

cccctcattg tagctgctcg ttatttgtag ttacccttga gtgataattc gtggtgtgtt 2460

attatcttgt cttgtaggtt tactggtaca atagttggtt gtgaaaatct tgacccacta 2520

tggcctgatt ccagttggag atacttgaag gtaactgctt gttcaaagtt tattatttcc 2580

attatggtct taaatctcaa ggaggattgt tttttttctg tattatgaac tataggtgcg 2640

ttgggatgag ccttctacta tcccgcggcc agatagggtc tctccttgga agatagagcc 2700

tgcttcatcg cctcctgtta atccactcgt gcattcttct agagcaaaaa gacctagaca 2760

aaacgttcct ccaccttcac ttgaatcatc tgttctcaca aaagaaggta agtgcagtag 2820

atcgttcagt ttcaagagca acggtgacaa aaatgtagcc aggctaatgc tttgcaaatc 2880

atcttctgca atttgcaggt gcaaccaagg tcgaaatcga ttcagctcaa acacaacacc 2940

aaaattcggt cttgcaaggt caggagcaga tgaccttgag gaacaacctg actgaaagcg 3000

ctgattctga ttccactgtt cagaagccga tgatgtggtc cccatcactc aatgggaaag 3060

cccacactca ttttcagcag agacctgcta tggataattg gatgccattg ggaaggcgtg 3120

aaaatgactt caaggacacc cgttctgcct tcaaggatgc ccgcaccgcc tctcaatcat 3180

ttggagatac acagggtttt tttgtgcaag cttatgatga caatcatcac cgtctctctt 3240

tcaaaaatca gggttcaact catcgcttcg cagatccgta cttctatatg cctcaacaat 3300

cgtcagtgac ggttgaatca agcacaagga cacaaacagc aaacaatgac ttgtgtttct 3360

ggggtgacca gaatgctatg tacggcaatc caagtgacca acaacagggt ttcaactttg 3420

gacaaaaccc atcaagttgg ttgaaccagc catttcccca ggttgaacag ccacgagtgg 3480

tcaggcctca tgcaacggtt gctccatttg atctggagaa gactagagaa ggaagtggct 3540

tcaagatttt tgggttccaa gttgatacaa ccagtccatc tcctgtccaa ttgagctctc 3600

cattgcccgc tatccaggag catgtgttac aaactcgacc atcggcaccg gtgaatgaat 3660

tgcaacctgt gcaaattgag tgcttgcctg agggatctgt aagcacagct ggaactgcaa 3720

cggagaacat tcagcaagcc ccgcagagtt caaaagatat ccaaagcaag tcccagggtg 3780

cttcaacaag gagctgtaca aaggtattgt tttctctctt tttttttctt tcatttttgt 3840

gaccatgcac ttgtctatat tagtcagttt gtgcattcgg ttgggaatat actatcagtt 3900

atcggctcat tcagttatta aaacaaaata atctgtttag ataaggcagt atttctatac 3960

agttcttaaa tcctggtaat catccatatc cagacaggtc cttgattatc ccgtgtgtca 4020

aagctgtaat gctcactggc accgatcaaa tcggccaata ttcgcctaaa gttacatctc 4080

ttttcgatag aattaaaaaa atttactcga catacctgat gatgatacat ggatcctttc 4140

ttggtgtgca tggattggtt tgttttgtcc atgcagaatg gattggttgc agcattgttg 4200

ttgaacatat aataattttg cataattgcc tgttgtggct gaacctgcat tctttctagt 4260

cctatgattc taccctccgg gaatttacgc ttctgatttg aatggccatc aggttcataa 4320

gcaaggagtc gcacttggca ggtcggtgga cctctctaaa ttcaccgact acggcgaact 4380

ccaagcagag ctggacaaga tgtttgactt cgagggtgaa ttggtatctg gcagccaaaa 4440

ctggcagatc gtctataccg acgacgaggg cgatatgatg cttgtgggag acgacccgtg 4500

ggagtaagta ttcatccttt ctgggagctc gacacgcgca tgcgcttgtg ttccagcact 4560

gacaccagtt cgtcgtcgtt gtcgttgttt ttacgagcag agagttctgc agcatagtgc 4620

gcaagatcta catctacacg aaggaggagg tccagaagat gaactcgaaa tcagctgcgc 4680

caaggaagga ggaatctccg gcagcgggcg gcggaggagg ttgcgccgcc gccacaaacg 4740

agtagtatgg tggtttgctc ttggtggcaa gttgaggcca aggttttact actgctattg 4800

ttattgctga tttgctctcc ccgccttccg gtgtaaatat ctgtgtgtac ccagtcccgg 4860

ccttgtgcta gtaagtagca agcagtgtta ccttttggta ttttaaccag cagctaagtt 4920

cgcggcattt tagtccctgt aagcggtaag cagctctgta gcgtgagata gatggccaag 4980

cgccggtacg tacgtgtagt gtctggtctt ctcactgagt gtactataaa gagttaatat 5040

aggagctgac cctgtgaacc cgcgtgatgg atgcatatgc ttagtgcaaa cctgcatttt 5100

gtctctattt gaccatctgt acacgcatga tcgccttgct tgcctggtgt ctggtctgct 5160

gatggcagcg caaagcgaaa ggcaaatgca ttgaagggaa ggcaagtgga ggttggagtt 5220

gatgctgcgg ggtgcgggcg cgatttgctg tccctttccg gtgtgcggtg ttgactgacg 5280

cgcgcgagca cgaaactggg ggaagtggtg gtgccgctga gctattttct gcagtggaag 5340

gctagagagg aagggaaggt gccggggcaa ccaaccaagc aagcaggcga caggcgtgtg 5400

gcacgggcgt ctccgtggaa aagccaaacc aaaaccaccc atccatatcg tttcctcgtc 5460

cagttggcgc cactggtatg cactcccaag ttccgtgtcg tgtttgaccc gtccgcgcac 5520

ctgcggtggc gctcgtgcca ccggtgccag ccgtctccat cccccggtca acgtagcagg 5580

atccctgcac tcgccttgga ccggcaggag agagagagag gagggttcac cagaccggac 5640

gccacacctg gtgccgtgcc gtgtagcgtg gctggaaact ggaaagggac ctggctttcc 5700

gtgtgcaggt aggccgaaac gtggcggcga ggttcgctgc atgctgatcc gatgcctccc 5760

tcgctcattg ggtcgtcgca ggacgggaag tggaacgtgc catgtgcctg acaatcctac 5820

agctacaggg tcgtcgtcgt cacccactgt ctgcgccctc gtggctgtcg tggtagcaac 5880

agcggcctgg ctagcacaca cagatggtac tgtgcgccgc acccaggaca agctttga 5938

<210>5

<211>2418

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>5

atgccgcccg caacagccat ggcgccgccg tcccagcccc cgtctaactc aggggatccg 60

ctgtacccgg agctctggcg cgcctgcgcc ggcccgctcg tcaccgtccc ccgcgtcggc 120

gacctcgtct tctacttccc ccaggggcac atcgagcagg tggaggcgtc catgaaccag 180

gtcgccggga accagatgcg cctctacgat ctgcccccca agctgctctg ccgcgtgctc 240

aacgtcgagc tcaaggcgga gacggacacc gacgaggtct acgcgcagat catgctcatg 300

ccggagcccg agcaaaccga tgtgccggct gagaagccga gttctgcacc tgctgcgtcg 360

ccgaggccag cagtcaggtc cttctgcaag acgctcaccg cctcggacac cagcacacac 420

ggtggcttct ctgtgctgcg ccgacacgct gacgagtgcc tccctcccct ggatatgacc 480

cagtcgcctc ccacacagga gctggtggcg aaggatctgc atggcatgga gtggcgcttc 540

cgccacatct ttagagggca gccaaggagg catctccttc agagtggttg gagtgttttt 600

gttagttcta aaaggcttgt tgctggtgat gccttcattt tcctcagagg agaaaatggt 660

gaacttcgag ttggtgttag gcgggcaatg aggcaattgt ctaatgtacc ttcttcagtc 720

atatctagcc aaagcatgca cctcggagtc cttgcgactg catggcacgc cattaacacg 780

aagtccatgt tcactgtcta ctacaagcct aggacgagcc cttcagagtt catcataccg 840

tacgatcaat atatggagtc ggtaaaaaat aattattcta ttggcatgag attcaggatg 900

aggtttgaag gagaagaggc gccagagcag aggtttactg gtacaatagt tggttgtgaa 960

aatcttgacc cactatggcc tgattccagt tggagatact tgaaggtgcg ttgggatgag 1020

ccttctacta tcccgcggcc agatagggtc tctccttgga agatagagcc tgcttcatcg 1080

cctcctgtta atccactcgt gcattcttct agagcaaaaa gacctagaca aaacgttcct 1140

ccaccttcac ttgaatcatc tgttctcaca aaagaaggtg caaccaaggt cgaaatcgat 1200

tcagctcaaa cacaacacca aaattcggtc ttgcaaggtc aggagcagat gaccttgagg 1260

aacaacctga ctgaaagcgc tgattctgat tccactgttc agaagccgat gatgtggtcc 1320

ccatcactca atgggaaagc ccacactcat tttcagcaga gacctgctat ggataattgg 1380

atgccattgg gaaggcgtga aaatgacttc aaggacaccc gttctgcctt caaggatgcc 1440

cgcaccgcct ctcaatcatt tggagataca cagggttttt ttgtgcaagc ttatgatgac 1500

aatcatcacc gtctctcttt caaaaatcag ggttcaactc atcgcttcgc agatccgtac 1560

ttctatatgc ctcaacaatc gtcagtgacg gttgaatcaa gcacaaggac acaaacagca 1620

aacaatgact tgtgtttctg gggtgaccag aatgctatgt acggcaatcc aagtgaccaa 1680

caacagggtt tcaactttgg acaaaaccca tcaagttggt tgaaccagcc atttccccag 1740

gttgaacagc cacgagtggt caggcctcat gcaacggttg ctccatttga tctggagaag 1800

actagagaag gaagtggctt caagattttt gggttccaag ttgatacaac cagtccatct 1860

cctgtccaat tgagctctcc attgcccgct atccaggagc atgtgttaca aactcgacca 1920

tcggcaccgg tgaatgaatt gcaacctgtg caaattgagt gcttgcctga gggatctgta 1980

agcacagctg gaactgcaac ggagaacatt cagcaagccc cgcagagttc aaaagatatc 2040

caaagcaagt cccagggtgc ttcaacaagg agctgtacaa aggttcataa gcaaggagtc 2100

gcacttggca ggtcggtgga cctctctaaa ttcaccgact acggcgaact ccaagcagag 2160

ctggacaaga tgtttgactt cgagggtgaa ttggtatctg gcagccaaaa ctggcagatc 2220

gtctataccg acgacgaggg cgatatgatg cttgtgggag acgacccgtg ggaagagttc 2280

tgcagcatag tgcgcaagat ctacatctac acgaaggagg aggtccagaa gatgaactcg 2340

aaatcagctg cgccaaggaa ggaggaatct ccggcagcgg gcggcggagg aggttgcgcc 2400

gccgccacaa acgagtag 2418

<210>6

<211>805

<212>PRT

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>6

Met Pro Pro Ala Thr Ala Met Ala Pro Pro Ser Gln Pro Pro Ser Asn

1 5 10 15

Ser Gly Asp Pro Leu Tyr Pro Glu Leu Trp Arg Ala Cys Ala Gly Pro

20 25 30

Leu Val Thr Val Pro Arg Val Gly Asp Leu Val Phe Tyr Phe Pro Gln

35 40 45

Gly His Ile Glu Gln Val Glu Ala Ser Met Asn Gln Val Ala Gly Asn

50 55 60

Gln Met Arg Leu Tyr Asp Leu Pro Pro Lys Leu Leu Cys Arg Val Leu

65 70 75 80

Asn Val Glu Leu Lys Ala Glu Thr Asp Thr Asp Glu Val Tyr Ala Gln

85 90 95

Ile Met Leu Met Pro Glu Pro Glu Gln Thr Asp Val Pro Ala Glu Lys

100 105 110

Pro Ser Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Arg Pro Ala Val Arg Ser Phe

115 120 125

Cys Lys Thr Leu Thr Ala Ser Asp Thr Ser Thr His Gly Gly Phe Ser

130 135 140

Val Leu Arg Arg His Ala Asp Glu Cys Leu Pro Pro Leu Asp Met Thr

145 150 155 160

Gln Ser Pro Pro Thr Gln Glu Leu Val Ala Lys Asp Leu His Gly Met

165 170 175

Glu Trp Arg Phe Arg His Ile Phe Arg Gly Gln Pro Arg Arg His Leu

180 185 190

Leu Gln Ser Gly Trp Ser Val Phe Val Ser Ser Lys Arg Leu Val Ala

195 200 205

Gly Asp Ala Phe Ile Phe Leu Arg Gly Glu Asn Gly Glu Leu Arg Val

210 215 220

Gly Val Arg Arg Ala Met Arg Gln Leu Ser Asn Val Pro Ser Ser Val

225 230 235 240

Ile Ser Ser Gln Ser Met His Leu Gly Val Leu Ala Thr Ala Trp His

245 250 255

Ala Ile Asn Thr Lys Ser Met Phe Thr Val Tyr Tyr Lys Pro Arg Thr

260 265 270

Ser Pro Ser Glu Phe Ile Ile Pro Tyr Asp Gln Tyr Met Glu Ser Val

275 280 285

Lys Asn Asn Tyr Ser Ile Gly Met Arg Phe Arg Met Arg Phe Glu Gly

290 295 300

Glu Glu Ala Pro Glu Gln Arg Phe Thr Gly Thr Ile Val Gly Cys Glu

305 310 315 320

Asn Leu Asp Pro Leu Trp Pro Asp Ser Ser Trp Arg Tyr Leu Lys Val

325 330 335

Arg Trp Asp Glu Pro Ser Thr Ile Pro Arg Pro Asp Arg Val Ser Pro

340 345 350

Trp Lys Ile Glu Pro Ala Ser Ser Pro Pro Val Asn Pro Leu Val His

355 360 365

Ser Ser Arg Ala Lys Arg Pro Arg Gln Asn Val Pro Pro Pro Ser Leu

370 375 380

Glu Ser Ser Val Leu Thr Lys Glu Gly Ala Thr Lys Val Glu Ile Asp

385 390 395 400

Ser Ala Gln Thr Gln His Gln Asn Ser Val Leu Gln Gly Gln Glu Gln

405 410 415

Met Thr Leu Arg Asn Asn Leu Thr Glu Ser Ala Asp Ser Asp Ser Thr

420 425 430

Val Gln Lys Pro Met Met Trp Ser Pro Ser Leu Asn Gly Lys Ala His

435 440 445

Thr His Phe Gln Gln Arg Pro Ala Met Asp Asn Trp Met Pro Leu Gly

450 455 460

Arg Arg Glu Asn Asp Phe Lys Asp Thr Arg Ser Ala Phe Lys Asp Ala

465 470 475 480

Arg Thr Ala Ser Gln Ser Phe Gly Asp Thr Gln Gly Phe Phe Val Gln

485 490 495

Ala Tyr Asp Asp Asn His His Arg Leu Ser Phe Lys Asn Gln Gly Ser

500 505 510

Thr His Arg Phe Ala Asp Pro Tyr Phe Tyr Met Pro Gln Gln Ser Ser

515 520 525

Val Thr Val Glu Ser Ser Thr Arg Thr Gln Thr Ala Asn Asn Asp Leu

530 535 540

Cys Phe Trp Gly Asp Gln Asn Ala Met Tyr Gly Asn Pro Ser Asp Gln

545 550 555 560

Gln Gln Gly Phe Asn Phe Gly Gln Asn Pro Ser Ser Trp Leu Asn Gln

565 570 575

Pro Phe Pro Gln Val Glu Gln Pro Arg Val Val Arg Pro His Ala Thr

580 585 590

Val Ala Pro Phe Asp Leu Glu Lys Thr Arg Glu Gly Ser Gly Phe Lys

595 600 605

Ile Phe Gly Phe Gln Val Asp Thr Thr Ser Pro Ser Pro Val Gln Leu

610 615 620

Ser Ser Pro Leu Pro Ala Ile Gln Glu His Val Leu Gln Thr Arg Pro

625 630 635 640

Ser Ala Pro Val Asn Glu Leu Gln Pro Val Gln Ile Glu Cys Leu Pro

645 650 655

Glu Gly Ser Val Ser Thr Ala Gly Thr Ala Thr Glu Asn Ile Gln Gln

660 665 670

Ala Pro Gln Ser Ser Lys Asp Ile Gln Ser Lys Ser Gln Gly Ala Ser

675 680 685

Thr Arg Ser Cys Thr Lys Val His Lys Gln Gly Val Ala Leu Gly Arg

690 695 700

Ser Val Asp Leu Ser Lys Phe Thr Asp Tyr Gly Glu Leu Gln Ala Glu

705 710 715 720

Leu Asp Lys Met Phe Asp Phe Glu Gly Glu Leu Val Ser Gly Ser Gln

725 730 735

Asn Trp Gln Ile Val Tyr Thr Asp Asp Glu Gly Asp Met Met Leu Val

740 745 750

Gly Asp Asp Pro Trp Glu Glu Phe Cys Ser Ile Val Arg Lys Ile Tyr

755 760 765

Ile Tyr Thr Lys Glu Glu Val Gln Lys Met Asn Ser Lys Ser Ala Ala

770 775 780

Pro Arg Lys Glu Glu Ser Pro Ala Ala Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala

785 790 795 800

Ala Ala Thr Asn Glu

805

Claims (10)

1.ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质在调控玉米苞叶性状中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述ARF2A蛋白质是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：

a)氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；

b)在序列3所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

d)与序列3所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；

所述ARF2B蛋白质是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：

a)氨基酸序列是序列6所示的蛋白质；

b)在序列6所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将序列6所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

d)与序列6所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。

3.与ARF2A蛋白质相关的生物材料和/或与ARF2B蛋白质相关的生物材料在调控玉米苞叶性状中的应用；

所述生物材料为下述A1)至A12)中的任一种：

A1)编码ARF2A蛋白质或ARF2B蛋白质的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；

A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；

A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)其编码序列是序列1或序列2或序列4或序列5所示的cDNA分子或基因组DNA分子；

2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1中所述的蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中所述的蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。

5.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于：所述苞叶性状为苞叶宽度。

6.权利要求1或2中所述的ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质或权利要求3或4中所述的生物材料在培育苞叶宽度变窄的转基因玉米中的应用；

或，权利要求1或2中所述的ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质或权利要求3或4中所述的生物材料在玉米育种中的应用。

7.一种培育苞叶宽度变窄的转基因玉米的方法，包括降低受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质和/或ARF2B蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因玉米的步骤；所述转基因玉米的苞叶宽度窄于所述受体玉米。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法为如下1)或2)：

1)包括降低受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因玉米的步骤；所述转基因玉米的苞叶宽度窄于所述受体玉米；

2)包括降低受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质和ARF2B蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因玉米的步骤；所述转基因玉米的苞叶宽度窄于所述受体玉米。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

所述1)中，所述降低受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质的表达量和/或活性的方法是通过对所述受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质的编码基因进行敲除或抑制或沉默表达来实现；

或，所述2)中，所述降低受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质和ARF2B蛋白质的表达量和/或活性的方法是通过对所述受体玉米中权利要求1中所述的ARF2A蛋白质的编码基因和ARF2B蛋白质的编码基因进行敲除或抑制或沉默表达来实现。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：

所述ARF2A蛋白质的编码基因的核苷酸序列是序列2所示的DNA分子；

或，所述ARF2B蛋白质的编码基因的核苷酸序列是序列4所示的DNA分子。