CN111153980A - 一种植物粒型相关蛋白OsSDSG及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一个植物控制水稻粒型相关蛋白OsSDSG及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物粒型大小相关的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。将所述蛋白的编码基因导入存在粒型变小缺陷的植物中，可以培育粒型变大的植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于作物遗传改良。

Description

一种植物粒型相关蛋白OsSDSG及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一个植物粒型相关蛋白OsSDSG及其编码基因与应用。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，也是我国最主要的粮食作物之一。据统计，全球有一半以上的人口以水稻为主食,也是我国三分之二以上人口的主食。随着经济的发展，世界正面临着人口的不断增加、耕地面积的迅速减少，粮食安全越来越受到人们的关注。因此，提高水稻的产量是迫切需要解决的问题。水稻的产量由三个因素决定，即每株有效穗数、每穗粒数和千粒重。有研究表明，增加粒重能够提高水稻的产量。而水稻的粒型直接影响千粒重。同时，随着人们生活水平的提升，对稻米品质的要求也在不断地提高，而水稻的粒型影响着水稻的外观品质、加工品质、蒸煮食味品质。

水稻(Oryza sativa L.)粒型主要受到的粒长、粒宽、粒厚的影响。粒型一方面会受到母本效应的影响，这是由于母本植株不仅为籽粒的发育提供了遗传物质，还有营养物质，所以籽粒的粒型会受到母本基因型的影响。特别是在水稻种子的发育和形成过程中，随着双受精的开始，胚乳不仅不会被胚吸收，而且还会逐渐增大，存储营养物质，最终占据水稻种子的绝大部分空间，最终影响水稻籽粒的大小。另一方面，水稻的胚和胚乳被外稃和内稃包围，细胞数目和细胞的大小决定了外稃和内稃的大小，而外稃和内稃的大小决定了籽粒灌浆的空间，最终能够决定水稻的粒型。

在遗传上，水稻粒型受到复杂的调控途径的影响，包括激素、G蛋白信号途径、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径、泛素途径、表观修饰等。运用遗传学，并结合功能基因组学和迅速发展的高通量测序方法，目前已经有越来越多的粒型相关数量性状位点(QTL)和基因被定位和克隆，例如：GS3、GW5、GS5。同时，克隆粒型相关基因和阐明粒型调控机制对增加水稻产量和提高水稻品质有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物粒型相关蛋白OsSDSG及其编码基因与应用。

本发明提供的控制水稻粒型相关蛋白OsSDSG，来源于稻属水稻(Oryza sativavar.NJ35)，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与粒型相关的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。

序列表中的SEQ ID NO.1由1447个氨基酸残基组成，自氨基末端第858至1355位为SNF2_N和HELICc结构域。

为了使(a)中的OsSDSG便于纯化，可在由序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
FLAG	8	DYKDDDDK

上述(b)中的OsSDSG可以由人工合成，也可以先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的OsSDSG的编码基因可通过将序列表中SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码上述水稻粒型蛋白的基因(OsSDSG)也属于本发明的保护范围。

所述基因OsSDSG可为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)序列表中SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)序列表中SEQ ID NO.3所示的DNA分子；

3)序列表中SEQ ID NO.4所示的DNA分子；

4)在严格条件下与1)或2)或3)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

5)与1)或2)或3)或4)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码粒型蛋白的DNA分子。

序列表中的SEQ ID NO.2由4344个核苷酸组成。

所述严格条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。

含有以上任一所述基因的重组表达载体也属于本发明的保护范围。

可用现有的植物表达载体构建含有所述基因的重组表达载体。

所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。

使用所述基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

所述重组表达载体可为在pCUBi1390载体的多克隆位点HindⅢ和BamHI之间重组插入所述基因(OsSDSG)的启动子、基因组和3’端非翻译区域得到的重组质粒。所述重组质粒具体可为pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG；所述pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG是将OsSDSG的启动子、基因组和3’端非翻译区域序列通过重组技术插入pCUBi1390多克隆位点HindⅢ和BamHI之间得到的(Clontech公司，Infusion重组试剂盒)。

将含有OsSDSG的pCUBi1390命名为pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG。

含有以上任一所述基因(pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG)的表达盒、转基因细胞系及重组菌均属于本发明的保护范围。

扩增所述基因(pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG)全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种培育粒型形成正常的转基因植物的方法。

本发明提供的培育粒型形成正常的转基因植物的方法，是将所述基因导入粒型变小缺陷的植物中，得到粒型变大的转基因植物；具体来说，所述基因通过所述重组表达载体导入粒型变小的异常植物中；所述粒型变小异常植物可为sdsg。

所述蛋白、所述基因、所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌或所述方法均可应用于水稻育种。

利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将编码所述蛋白的基因导入植物细胞，可获转基因细胞系及转基因植株。携带有所述基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、百脉根、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。

本发明还提供所述的基因、蛋白、重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在植物育种中的应用，特别是在培育粒型形成正常或粒型变大的植物育种中的应用。

本发明还提供所述的基因、蛋白、重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在水稻育种中的应用，特别是在培育粒型形成正常或粒型变大的水稻育种中的应用。

本发明所述的粒型形成异常的植物为粒型变小的植物；所述粒型正常的植物为籽粒大小形成正常的植物。

本发明首次发现、定位并克隆得到一个新的影响水稻粒型相关蛋白的基因OsSDSG。将所述蛋白的编码基因导入发生粒型变小缺陷的植物中，可以得到粒型变大的转基因植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于作物的遗传改良。

附图说明

图1为野生型NJ35(WT)和突变体sdsg成熟籽粒外观表型图(标尺＝1cm)。

图2为野生型NJ35(WT)和突变体sdsg成熟籽粒糙米外观表型图(标尺＝1cm)。

图3为野生型NJ35(WT)和突变体sdsg抽穗后颖壳横截面细胞观察比较(上面两横截面观察的张颖壳图片，标尺＝0.2cm；半薄切片横截面观察标尺＝0.4mm)，以及颖壳外稃内表皮纵向细胞观察(下面两张为纵向细胞观察的颖壳图片，标尺＝0.2cm；内表皮细胞观察标尺＝100μm)。

图4为OsSDSG基因精细定位示意图。

图5为OsSDSG转基因互补验证T2代纯和家系粒型互补图(标尺＝1cm)。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1、控制植物种子粒型相关蛋白及其编码基因的发现

一、水稻粒型变小突变体sdsg表型观察

粳稻品种NJ35经钴60辐射诱变库中筛选获得的稳定遗传的小粒突变体，命名为sdsg。

图1为NJ35(WT)成熟种子未去壳籽粒，表现为正常籽粒大小的表型，以及sdsg成熟种子未去壳籽粒，表现为籽粒变小的表型。

图2为NJ35(WT)成熟种子去除颖壳的糙米，表现为正常糙米大小的表型，以及sdsg成熟种子去除颖壳的糙米，表现为糙米变小的表型。

利用半薄切片对抽穗后NJ35(WT)和突变体sdsg颖壳中间部位的横截面细胞进行观察和统计(图3上面两张颖壳图片和半薄切片图片)。根据颖壳横截面细胞的观察，在野生型NJ35(WT)中，颖壳最外层细胞具有正常数目，而在突变体sdsg中，颖壳最外层细胞数目显著减少(图3)；对处于包穗时期的NJ35(WT)和突变体sdsg外稃同一部位的内表皮进行细胞学观察和统计(图3下面两张颖壳图片和纵向细胞图片)，发现在NJ35(WT)具有正常细胞数目，而突变体sdsg细胞的数目显著减少(图3)。

二、突变体sdsg的遗传分析和突变基因定位

1、突变体sdsg的遗传分析和突变基因初步定位

由于突变体sdsg具有粒型变小的表型，首先我们构建野生型NJ35(WT)和突变体sdsg的正反交，所得F₁自交后得到F₂后代，挑选F₂中正常粒型类型和像突变体一样粒型变小的类型的单株数量符合3:1的分离比例，因此,sdsg中控制粒型大小的表型是由单个隐性核基因控制的。

利用突变体sdsg与DJY杂交构建定位群体，在构建的F₂分离群体中选取粒型与突变体sdsg粒型一样的极端(单株)的叶片提取DNA。将覆盖水稻全基因组的SSR引物和InDel引物在NJ35(WT)和DJY之间进行多态性分析，并挑选均匀分布在每条染色体上且在两个亲本间具有多态的标记。利用挑选好的多态引物对sdsg、DJY以及选取的10个极端进行初连锁，最终将控制籽粒大小的关键基因定位在第5号染色体标记S5-2和RM161两个分子标记之间。

其中，SSR标记和InDel标记分析的流程如下：

(1)提取上述选取单株的总DNA作为模板，具体方法如下：

1、取0.3克左右的水稻叶片，置于2.0mL的离心管中，离心管中放置一颗钢珠，把装好样品的2.0mL离心管在液氮中冷冻6min，置于2000型GENO/GRINDER仪器上粉碎样品50秒，确保样品磨碎后倒掉钢珠。

2、加入500μL提取液(含100mM Tris-HCl(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，1.4MNaCl，0.2g/ml CTAB的溶液)，漩涡器上剧烈涡旋混匀，65℃水浴30min，每隔10分钟混匀一次，使其充分反应。

3、待样品稍微冷却，向离心管中加入500μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心5min。

4、吸取3中的上清液到新的1.5mL离心管中，并向1.5mL离心管中加入上清体积0.7-2倍的预冷的异丙醇，轻柔混匀后，将样品放于-20℃冰箱中，静置30min。

5、将4中的样品进行离心，12000rpm，3min。

6、倒掉上清，向离心管中加入400μL预冷的70％乙醇，轻柔混匀，将样品置于-20℃冰箱中静置30min。

7、将6中的样品进行离心，12000rpm，3min，弃去上清，室温晾干。

8、向干燥后的1.5mL离心管中加入200μL 1×TE(121克Tris溶于1升水中，用盐酸调PH值至8.0得到的溶液)溶解DNA。

9、用移液器吸取2μL电泳检测DNA质量，并用DU800分光光度仪测定浓度(BechmanInstrument Inc.U.S.A)。

(2)将上述提取的DNA稀释成约20ng/μL，作为模板进行PCR扩增；PCR反应体系(10μL)：DNA(20ng/μL)2μL，上游引物(2pmol/μL)0.5μL，下游引物(2pmol/μL)0.5μL，10x Buffer(MgCl₂ free)1μL，dNTP(10mM)0.2μL，MgCl₂(25mM)0.6μL，rTaq(5u/μL)0.1μL，ddH₂O 5.1μL。

PCR反应程序：95.0℃变性5min；94.0℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸40s，循环数为34；72℃延伸10min；10℃保存5min。PCR反应在Applied Biosystems Veriti热循环仪中进行。

(3)SSR标记的PCR产物检测

扩增产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。以500bp的DNA Ladder作为对照，比较PCR产物的分子量大小，利用硝酸银进行银染显色。

2、小粒突变基因的精细定位

根据初定位的结果，在初定位的区域间开发新的分子标记，包括：公共图谱上的分子标记和基于水稻基因组序列数据自行开发的SSR、InDel分子标记，并选取有多态的新标记，利用剩余的极端(单株)，以及sdsg/DJY构建的F₂群体中新挑选的新极端(单株)，进一步缩小定位区间，定位控制突变体sdsg表型的位点。

具体方法如下：

(1)SSR标记开发

将公共图谱的SSR标记、InDel标记和水稻基因组的序列进行整合，下载定位区间的BAC/PAC克隆序列。一方面，使用SSR Hunter(李强等，遗传，2005，27(5):808-810)或SSRIT软件搜索克隆中潜在的SSR序列(重复次数≥6)；将这些SSR及其邻近300～600bp的序列在NCBI通过BLAST程序在线与相应的籼稻序列进行比较，如果两者的SSR重复次数有差异，初步推断该SSR引物的PCR产物在籼、粳间存在多态性；另一方面，在gramene(http://www.gramene.org)中根据定位的区间，将该区间籼稻和粳稻的序列进行比对，选择具有InDel差异达到至少3bp及以上的位点。选取包含SSR差异和indel的区段，用primerpremier 5.0进行设计SSR标记和InDel标记，并由南京金斯瑞生物技术有限公司合成。将自行设计的SSR标记和indel标记稀释后，检测其在NJ35和DJY之间的多态性，将具有多态的分子标记作为精细定位OsSDSG基因的分子标记，缩小定位区间。用于精细定位的分子标记见表2。

表2用于精细定位的分子标记

S5-2	TGCCCTCCACTTCACTCCT	CGCTGCTCCATAGAACCGT
			RM161	TGCAGATGAGAAGCGGCGCCTC	TGTGTCATCAGACGGCGCTCCG
S5-39	TGTCTCACCACTCCTGTTC	CGGTAGACAACGACGAAT
			SL-8	GCAATGATAATTGATCGA	GTTTCTCTTCTGCCTACA
SL-3-2	GCTTCTTTACATTTTCAG	GATTATTCGCCTTATTCA
			SL-9	CTTTTAAGCGGTGTGTGC	TCGTCGATTTCAGAATGC
SL-3	ACTGCTTAGTTGATGGAA	GAAGGCTAGGGGGGGTGC
			SL-5-11	CGTTCTCCGTCCCATCTA	GGTGGTCCGTAACTAATGC
Sl-5-3	ATGGCTGGTTGGCTACTG	ACGTGAGGGCTGCTTTAT
			SL-10	CTTGAGGCGGTACTGAGT	AATGTTGGATTGGATAGA

最终把OsSDSG基因精细定位在标记SL-3-2和SL-5-11两个标记之间，物理距离约为112kb，经网站预测该区间包含12个ORFs(图4)。

(2)突变基因的获得

经过对112kb区间内基因测序，发现了OsSDSG基因存在一个单碱基的突变(图4)

根据精细定位区间设计引物，序列如下所述：

primer1：5'-GTTGCAGCTAAACCCCTCTCCCTACTCCT-3'(SEQ ID NO.5)

primer2：5'-AAGAATGAATCCATCTGATGCCAGTCATT-3'(SEQ ID NO.6)

以primer1和primer2为引物，以NJ35的cDNA为模板，进行PCR扩增获得目的基因(对应的基因组序列即SEQ ID NO.3)。

利用Takara的KOD FX在Applied Biosystems Veriti热循环仪上进行扩增反应：94℃2min；98℃10s，55℃30sec，68℃5min 30s，34个循环；68℃10min。将PCR产物回收纯化后克隆到载体pEASY(北京全式金公司)，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司CB101)，挑选阳性克隆后，进行测序。序列测定结果表明，PCR反应获得的片段具有序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，编码1447个氨基酸残基组成的蛋白质(从ATG到TAA)(见序列表的SEQ ID NO.1)。将SEQ ID NO.1所示的蛋白命名为OsSDSG(即为基因定位中所述的OsSDSG基因)，将SEQ ID NO.1所示的蛋白的编码基因命名OsSDSG。

实施例2、转基因植物的获得和鉴定

一、重组表达载体构建

以NJ35的DNA为模板，进行PCR，用带酶切位点的引物扩增获得OsSDSG基因的启动子和基因组和3’端非翻译区序列(SEQ ID NO.4)，PCR引物序列如下：

primer3：5'-CCGGCGCGCCAAGCTTTACGGCTTTCTAATGTGAACATTTTATTA-3'(SEQ IDNO.7)

primer4：5'-GAATTCCCGGGGATCCTAGCTGAAACTAGTCCGCTTATTCATATT-3'(SEQ IDNO.8)

上述引物去除酶切位点序列后分别位于SEQ ID NO.4所示基因的启动子区域开始和3’端非翻译区域末端，扩增产物包含了该基因的启动子、基因组和3’端非翻译区域，将PCR产物回收纯化。采用Infusion重组试剂盒(Clontech)将PCR产物克隆到载体pCUBi1390中，构建成pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG；重组反应体系(10.0μL)：PCR产物5μL(50-100ng)，pCUBi1390载体2μL(30-50ng)，5×Infusion buffer 2.0μL，Infusion enzyme mix1μL。短暂离心后将混合体系在50℃水浴中重组30min，取5μL反应体系用热激法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司；CB101)。将全部转化细胞均匀涂布在含50mg/L卡那霉素的LB固体培养基上。

37℃培养16h后，挑选阳性克隆进行测序。测序结果表明，得到了含有SEQ ID NO.4所示基因的重组表达载体，将含有SDSG的pCUBi1390命名为pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG,OsSDSG基因插入在多克隆位点HindⅢ和BamHI之间。

二、重组表达载体的遗传转化

以农杆菌菌株EHA105介导为例，将所述重组表达载体导入粒型变小的受体植物材料中，此处的植物材料可为sdsg。选用突变体sdsg植株的种子制备成熟胚的胚性愈伤组织。水稻成熟胚遗传转化的基本流程如下所述。

1、在28℃、200rpm培养条件下培育重组表达载体的农杆菌过夜，直到农杆菌至OD600＝06-1.0之间。

2、将培养合适的水稻成熟胚胚性愈伤组织与农杆菌悬浮液混合侵染30min，用无菌滤纸吸干菌液后转移至培养基中共培养3天。

3、将上述愈伤接种在含有150mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第一次筛选16天。

4、挑取健康愈伤转入200mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第二次筛选，每15天继代一次。

5、挑取抗性愈伤转入含有150mg/L潮霉素的分化培养基上分化。

6、待分化出的植株长至一定高时进行10天的炼苗，并移栽至温室栽培。

三、转基因植株的鉴定

1、潮霉素抗性鉴定

本研究中利用1‰浓度的潮霉素溶液鉴定转基因植株。具体方法：将新鲜的转基因植株叶片(没有转基因植株叶片做阴性对照)放在培养皿中，用新配的1‰的潮霉素溶液浸泡，放在28℃培养箱中暗培养48小时，与对照比较，叶片坏死的表明不抗，没有坏死的表明抗，将抗潮霉素的两个家系命名为sdsg-com-1和sdsg-com-2。

2、表型鉴定

分别将T₀代转pCUBi1390-OsSDSGpro-gOsSDSG的转基因植株，野生型NJ35和突变体sdsg按照大田管理种植在南京农业大学土桥实验基地大田中。鉴定到的两个独立的T₂代转基因家系粒型大小恢复到了野生型粒型大小的水平，由此验证了转基因前的小粒表型是由OsSDSG基因控制的，即该OsSDSG基因为控制粒型大小的相关基因(图5)。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一种植物粒型相关蛋白OsSDSG及其编码基因与应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 2

<211> 1447

<212> PRT

<213> 稻属水稻(Oryza sativa var.NJ35)

<400> 2

Met Asp Arg Ala Ala Arg Leu Ala Arg Arg Arg Arg Gly Gly Gly Val

1 5 10 15

Thr Val Ala Glu Tyr Arg Met Val Arg Gly His Arg Arg Gly Gly Asp

20 25 30

Ala Gly Pro Val Val Val Ile Asp Val Glu Asp Asp Gly Glu Asp Ala

35 40 45

Ala Asp Asp Ser Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Val Lys

50 55 60

Arg Arg Val Val Val Pro Gly Ala Val Ala Thr Arg Thr Arg Ser Arg

65 70 75 80

Arg Met Ala Met Ala Gln Gln Ala Pro Val Thr Pro Pro Ala Ala Ala

85 90 95

Glu Glu Ala Pro Ser Arg Arg Arg Lys Arg Lys Gly Ala Ala Ser Ala

100 105 110

Glu Ala Gly Gly Gly Gly Pro Ser Lys Arg Arg Val Arg Ser Ser Gly

115 120 125

Ser Ala Gly Gly Arg Gly Ala Arg Lys Arg Lys Glu Ala Glu Ala Asp

130 135 140

Glu Glu Glu Ala Glu Ala Glu Ala Glu Glu Glu Ala Glu Ala Glu Ala

145 150 155 160

Gly Thr Pro Ala Arg Gly Glu Ser Met Glu Val Ser Gln Val Asp Gly

165 170 175

Gly Gly Ser Ser Gly Arg Ala Asp Asp Ala Ser His Asn Gly Asn Gly

180 185 190

Glu Ser Arg Val Cys Asn Ala Asp Gly Ile Asp Gln Ala Ser Glu Glu

195 200 205

Arg Pro Ser Val Ala Gly Gly Asp Leu Ile Glu Glu Glu His Cys Gly

210 215 220

Asn Gly Glu Thr Ser Val Ala Gly Gly Asp Arg Ile Glu Glu His Cys

225 230 235 240

Gly Asn Val Glu Ala Ser Val Ala Asn Ser Asn Arg Asp Gly Gly Glu

245 250 255

Ile Ile Ala Gly Glu Gly Thr Glu Asp Arg Gly Asn Thr Glu Leu Ala

260 265 270

Val Val Asp Ser Val Asn Glu Glu Leu Ala Ser Asp Glu Asp Asp Tyr

275 280 285

Asp Asp Glu Met Leu Glu Glu Lys Leu Val Gly Asp Val Ile Arg Ala

290 295 300

Tyr Ser Asn Gly Thr Asp Leu Asp Thr Asn Gly Val Asp Trp Glu Ala

305 310 315 320

Glu Asp Glu Met Glu Phe Ala Asp Leu Asp Thr Asn Val Val Asp Trp

325 330 335

Glu Ala Glu Asp Glu Met Glu Phe Asp Asp Asp Asn Asp Asn Asp Ala

340 345 350

Asp Asp Asp Gly Asp Asn Phe Gly Gly Asp Ala Asp Glu Gly Asp Lys

355 360 365

Ser Val Gln Met His Asp Phe Ser Lys Val Glu Thr Gln Asp Leu Val

370 375 380

Ser His Asn Val Asn Val Ser Glu Val Arg Pro His Glu Asp Glu Glu

385 390 395 400

Ala Ile Lys Asp Glu Met Glu Ser Lys Gly Lys Gly Ser Leu Ser Phe

405 410 415

Asn Glu Gly Ser Ser Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Ser Asp Glu Glu Val

420 425 430

Lys Val Val Asn Asp Thr Gly Asn Ala Leu Arg Arg Lys Pro Leu Val

435 440 445

Pro Ala Lys Leu Pro Ile Val Pro Ser Cys Val Ala Trp Arg Thr Arg

450 455 460

Ser Ser Trp Gly Met Lys Glu Glu Arg Ile Ser Tyr Asn Thr Tyr Phe

465 470 475 480

Glu Val Leu Ser Asp Glu Pro Lys Glu Asp Asp Asp Asp Thr Glu Val

485 490 495

Glu Leu Asp Asp Glu Glu Asp Asp Glu Asn Asp Asp Asp Cys Asn Ser

500 505 510

Ala Ser Cys Asp Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Arg Glu Glu

515 520 525

Glu Glu Glu Glu Ala Gln Arg Arg Lys Gln Lys Lys Gly Ile Asp Ser

530 535 540

Ser Asp Asp Glu Met Ile Asp Asp Ala Val Asp Cys Gly Ile Asp Trp

545 550 555 560

Glu Glu Asp Tyr Pro Glu Val Asp Phe Thr Arg Pro Leu Thr Phe Gln

565 570 575

Lys Asp Gly Ser Glu Ala Pro Val Gly Ser Glu Ala Phe Thr Glu Gln

580 585 590

Gln Lys Arg Ser Arg Phe Thr Trp Glu Leu Glu Arg Arg Lys Lys Leu

595 600 605

Lys Leu Gly Met Met Thr Asn His Arg Leu Tyr Glu Arg Asp Leu Glu

610 615 620

Ser Asp Ser Asn Ser Ser Asp Ser Ser Gln Asn Arg Lys Asn Gly Cys

625 630 635 640

Gln Gly Ser Gly Asp His Arg Thr Gly Arg Lys Arg Lys Asn Pro Leu

645 650 655

Ser Lys Ser Gly Lys Lys Ser Ser Arg Met Leu Lys Arg Gln Ser Leu

660 665 670

Met Lys Leu Leu Met Asp Lys Met Cys Ser Asn Asp Asp Gly Lys Ser

675 680 685

Thr Pro Phe Asp Gln Lys Pro Gln Ile Glu Tyr Ser Phe Lys Asp Leu

690 695 700

His Pro Leu Val Phe Ser Phe Gly Asp Asp Asp Pro Ser Pro Thr Asp

705 710 715 720

Arg Ser Glu Gln Asp Ala Ala Leu Asp Met Leu Trp Ala Asp Leu Asp

725 730 735

Phe Thr Leu Glu Ser Glu Asn Ile Gly Thr Tyr Tyr Asp Asp Glu Gly

740 745 750

Gln Glu Asp Ser Leu Leu Asp His Ala Leu Ala Pro Ile Thr Pro Cys

755 760 765

Ser Arg Gly Lys His Glu Phe Ile Ile Asp Glu Gln Ile Gly Ile Arg

770 775 780

Cys Lys Tyr Cys Ser Leu Val Asn Leu Glu Ile Arg Phe Ile Leu Pro

785 790 795 800

Leu Leu Ala Ser Asn Phe Ala Glu Lys Pro Ala Trp Arg Asn Ser Ser

805 810 815

Cys Leu Lys Thr Ala Leu Met Cys Pro Asp Leu Tyr Glu Gln Thr Gly

820 825 830

Thr Gly Asp Gly Gln Ser Gln Asp Phe His Ile Asn Gly Thr Val Trp

835 840 845

Asp Leu Ile Pro Gly Val Ile Thr Asp Met Tyr Gln His Gln Arg Glu

850 855 860

Ala Phe Glu Phe Met Trp Thr Asn Leu Val Gly Asp Ile Arg Leu Asn

865 870 875 880

Glu Ile Lys His Gly Ala Lys Pro Asp Val Val Gly Gly Cys Val Ile

885 890 895

Cys His Ala Pro Gly Thr Gly Lys Thr Arg Leu Ala Ile Val Phe Ile

900 905 910

Gln Thr Tyr Met Lys Val Phe Pro Asp Cys Arg Pro Val Ile Ile Ala

915 920 925

Pro Arg Gly Met Leu Phe Ala Trp Glu Gln Glu Phe Lys Lys Trp Asn

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Val Asn Val Pro Phe His Ile Met Asn Thr Thr Asp Tyr Ser Gly Lys

945 950 955 960

Glu Asp Arg Asp Ile Cys Arg Leu Ile Lys Lys Glu His Arg Thr Glu

965 970 975

Lys Leu Thr Arg Leu Val Lys Leu Phe Ser Trp Asn Arg Gly His Gly

980 985 990

Val Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Leu Tyr Met Lys Leu Thr Ser Glu Lys

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Val Gly Cys Thr Gly Glu Asn Lys Val Arg Thr Ile Leu Leu Glu Asn

1010 1015 1020

Pro Gly Leu Leu Val Leu Asp Glu Gly His Thr Pro Arg Asn Glu Arg

1025 1030 1035 1040

Ser Val Ile Trp Lys Thr Leu Gly Lys Val Lys Thr Glu Lys Arg Ile

1045 1050 1055

Ile Leu Ser Gly Thr Pro Phe Gln Asn Asn Phe Leu Glu Leu Tyr Asn

1060 1065 1070

Ile Leu Cys Leu Val Arg Pro Arg Phe Gly Glu Met Phe Leu Thr Lys

1075 1080 1085

Thr Arg Val Gly Arg Arg His Cys Val Ser Lys Lys Gln Arg Asp Lys

1090 1095 1100

Phe Ser Asp Lys Tyr Glu Lys Gly Val Trp Ala Ser Leu Thr Ser Asn

1105 1110 1115 1120

Val Thr Asp Asp Asn Ala Glu Lys Val Arg Ser Ile Leu Lys Pro Phe

1125 1130 1135

Val His Ile His Asn Gly Thr Ile Leu Arg Thr Leu Pro Gly Leu Arg

1140 1145 1150

Glu Cys Val Ile Val Leu Lys Pro Leu Pro Leu Gln Lys Ser Ile Ile

1155 1160 1165

Arg Lys Val Glu Asn Val Gly Ser Gly Asn Asn Phe Glu His Glu Tyr

1170 1175 1180

Val Ile Ser Leu Ala Ser Thr His Pro Ser Leu Val Asn Ala Ile Asn

1185 1190 1195 1200

Met Thr Glu Glu Glu Ala Ser Leu Ile Asp Lys Pro Met Leu Glu Arg

1205 1210 1215

Leu Arg Ser Asn Pro Tyr Glu Gly Val Lys Thr Arg Phe Val Met Glu

1220 1225 1230

Val Val Arg Leu Cys Glu Ala Leu Lys Glu Lys Val Leu Ile Phe Ser

1235 1240 1245

Gln Phe Ile Gln Pro Leu Glu Leu Ile Lys Glu His Leu Arg Lys Ile

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Phe Lys Trp Arg Glu Gly Lys Glu Ile Leu Gln Met Asp Gly Lys Ile

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Leu Pro Arg Tyr Arg Gln Asn Ser Ile Glu Val Phe Asn Asn Pro Asp

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Ser Asp Ala Arg Val Leu Leu Ala Ser Thr Arg Ala Cys Cys Glu Gly

1300 1305 1310

Ile Ser Leu Thr Gly Ala Ser Arg Val Val Leu Leu Asp Val Val Trp

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Asn Pro Ala Val Gly Arg Gln Ala Ile Ser Arg Ala Phe Arg Ile Gly

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Gln Lys Lys Phe Val Tyr Thr Tyr Asn Leu Ile Thr Tyr Gly Thr Gly

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Glu Gly Asp Lys Tyr Asp Arg Gln Ala Glu Lys Asp His Leu Ser Lys

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Leu Val Phe Ser Thr Glu Asp Glu Phe Ser Asn Val Arg Asn Met Leu

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Ser Lys Ala Glu Met Glu His Cys Ser Lys Leu Ile Ser Glu Asp Lys

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Val Leu Glu Glu Met Thr Ser His Asp Gln Leu Lys Gly Met Phe Leu

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Lys Ile His Tyr Pro Pro Thr Glu Ser Asn Ile Val Phe Thr Tyr Asn

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Gln Ile Ala Pro Glu Leu Ser

1445

<210> 2

<211> 4344

<212> DNA

<213> 稻属水稻(Oryza sativa var.NJ35)

<400> 2

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taccgcatgg tgcggggcca ccgccgcgga ggcgacgcgg ggccggtggt ggtcatcgat 120

gtcgaagacg acggggagga cgctgctgat gactccgccg gcggtggggg tggagcggcg 180

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aggatggcga tggcgcagca ggcgcccgtc acgccgccgg ctgcggcgga ggaggcgccg 300

agcaggagga ggaagaggaa gggggcggcg agtgcggagg cgggtggcgg agggccgtcg 360

aagcgccgcg tgcgatcctc ggggtcagcg ggcgggcgtg gtgcgcgcaa gcgcaaggag 420

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gggactcccg ctcgcggaga atcgatggag gtgtcacagg ttgacggggg tggcagcagc 540

gggcgagccg atgacgcttc gcacaatggt aatggcgagt ctcgcgtgtg taacgcggat 600

ggcattgatc aggcaagcga ggagcgtcca agtgtcgctg gtggggatct aattgaggag 660

gagcactgcg ggaatgggga aaccagcgtc gctggtgggg atcgaattga ggagcactgc 720

ggtaatgtgg aagccagtgt cgccaattcg aatcgtgatg gcggtgagat catcgctggg 780

gagggcacag aggatcgtgg gaacacggag ttagcagtgg tggattcagt gaatgaagag 840

ttggcttccg atgaggatga ttacgacgat gaaatgttgg aggaaaagct tgtcggagat 900

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gaggatgaga tggaatttgc tgatttggat acaaatgtag tggactggga agctgaggat 1020

gagatggaat ttgatgatga taatgataat gatgctgatg acgacggtga taattttggg 1080

ggtgatgcgg atgaaggtga caaatctgta caaatgcatg acttttctaa ggtggaaaca 1140

caagatttgg tgagccacaa tgttaatgtt agtgaagtga ggcctcatga ggatgaggag 1200

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tcctatattg aaattcttga ctctgacgag gaagtcaaag tggtcaatga cacagggaat 1320

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gaggaggacg atgaaaacga tgacgattgc aatagtgcta gctgtgatga agaagatgaa 1560

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gggattgact catctgatga tgagatgatt gatgatgctg tagattgtgg cattgattgg 1680

gaggaggatt acccagaggt tgattttact cggccactta cctttcagaa agatggcagt 1740

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<213> 稻属水稻(Oryza sativa var.NJ35)

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agcgtgagga cagtgagact gaatacagca taaattttca gctgtttttg ttgcagatga 5220

tgattcatta attataaggt gaacccttgt gtaatcgcac tggaagaaca tactattgct 5280

atggcatccg tggtccagag ttaaatagtt ctagttgact gtaagtttgt tccactgact 5340

tcatcatgtt attcaatttt ataaagttga cttgcataca attagtagtc aggtggctgc 5400

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gcattaggtc acgcatgatc aaataggact agtcagttct tacataatgg gtgcaaagca 5580

tcaacaaatc tagaatcggc acaaggtcgc cggctgaaaa atcttcttgt gtacaataat 5640

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tgaaatatat tagcgttaat cggcttgtta cctcccaaca tcaaccatgt ttagacaagc 420

attaatgtta ctcgggcgtc ggaagtgatg gcacaaacaa aatagaaatg acggtccata 480

ggacatgggt ttcgaggcat ctcatatgaa aagtccatac gctagaggac aagttgccat 540

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aataaaaata ttttctaatt ttacaagttg ttatttatta atagtagtta gagaaaatac 840

caacttttct atttttgtat aagcatgaaa aatagtctaa ccatacccta actactatat 900

ccatctcaaa ataagttcat ttttcattca ttttacacaa accaataaaa aaagactata 960

atacccttcg cttttatcaa atctcaatgc aactatatct tactttatct actatcattt 1020

ttttttgctt ctttatctac tatcattttt ttttgctttt acaaactcgg atacaatgat 1080

tactcaacaa taaacttatt ttggaataaa tgggaggagc taaaagtaac ttatttcaga 1140

gacctgggaa gtaagatttt atgtccagtt cactctaagg cgtaaccgta agagttgtct 1200

taatcctcca tatataatca tctactccct tggttgaaag aaaataagtg aattctttac 1260

atctcgagga aattttagtg gtgaggagaa aagaccaaag taaccattat atatggaaaa 1320

gtataatcgg taggtggtgg gtaggtaata ttaagggata aaatttctta acttttggac 1380

tatagtatgt atgaaggtga aaattaattt atttttagac aaaatttaaa ctgtagaaac 1440

caaattattt ttgacgggag gcagtattat aatttttatg agttaacaat aaatttattg 1500

aggagataga ggttaatttt aagtctcatg aagaaaaaac aactctaggt aaaaaaaaag 1560

aggagagagg gacatgatga tgatgattga agaaaatttt attttagatc cacaagtact 1620

cctaggaaat agaaacaaag cattgataaa gtactaccct tctcatttca tattattatt 1680

agttgctttt cctttttctc agtgaaactt ctttagatct taatcaagtt tataggaaaa 1740

aatagcgaca tttacaatat caaaatagtt tcattaaata ttacattgaa tatattattg 1800

ataatgtgtt tgttttatgg tgaaattgct atttctttta tatacctagt caaattttaa 1860

atggtttgat taaaaaaaaa tcaaagtacc ttataatatg aaaaggggtt cccctaatgc 1920

acatgtaatt ttatccatac ttaaaacata ttgttttaaa catatttttt tcaatcaaat 1980

tagatactca aacttaaact gtatcatttt atatattaag attgaatgtg ctcatcttta 2040

cccaaagtaa cctcgtactc ttataatatt tctgggtttt ataactatac tactggcatc 2100

ggtgtgcatt aggtaggtgt catcaagatg agatgagatg gacaatatga cttaattgac 2160

atgaagagaa tttatgttca aatcataatt gacatgagga gaagtaatac aaaatgtaaa 2220

tattactatg agatatttgg gtaagaatcg aacaacaaac ctcatccata tgatcagata 2280

actgcatgta tacaacagtc agtattaggt gcattaacac tattactccc tcaattccaa 2340

cagtcactat gtttattatt attataatac atctctctcg actaaattat tgttattatt 2400

ttaaatcttt catgctcaat atctctgatt ctattgggta tatgcattat attttttgat 2460

tgatccacat aagaagaaag tgataataat tgtttcgatc tttatggatt aagggtgtac 2520

cttataattt gtaacagatg gagtatgata tgatagttag ttctctcccc gtcccctaat 2580

gtaaggctta tattttttta tatggtcttt agtggcatac agggtggatc tagcatgagg 2640

gcgacggggt ctcgagcctc cactactgac gtgagaacta tagaagcccc cacgaatcct 2700

ccactaaaaa tttttgctat aagtaaatgg ggagagggct atagcttcgt ttagtttatt 2760

cagtccctca tgttatttct ttatccatca cgtgtggtct actttgacaa ttaatatatt 2820

tcatattatg tgcccaatgg atatgtaatt agcataactc gaaattactt caaaatataa 2880

aacgagtgtt ataacgtgca taatatttag cataatttgg ttagtatgat tattagtcaa 2940

aaggtaccaa gtttaatttt ccttaaaacg ataatttggg acggagggag tatcattata 3000

ctctttatat tatataaata taaataaata acatcactat tgctttctaa ataagctacg 3060

atgagagcat aaaaacgctt tcgacagtat caattcctac caaaaatgaa ccgcaaaaaa 3120

attccatcaa aaagagagcc attccttatc ggaatcagaa ccccccacta caggattcgc 3180

gctccgcacg ggcgggcagc agcaggcagg ctcgctcgag accgatcgac acgataacga 3240

cacacggcca cagtgcacca ccgcccggcc gcacccgatc cctcccctcc tcggactccg 3300

cccccggccc cggccgccgt ctctcgggct ttactctctc ccgtgccgtc cacccagggc 3360

cccaccccgc cccctgaccc catccaccac ccgggcccac tcgtcattgc ccccaccact 3420

tcgtcataaa ccctccactg ctataactgc gactgcgacg cactcgtcat attctcatat 3480

actagtagta tcaactaccc accccccacc tcctacgcct ccgccgttgc agctaaaccc 3540

ctctccctac tcctcatcct tcccatccgc atggatcgcg ccgcgcgcct cgcccgccgc 3600

cgccgcggcg gcggcgtgac cgtggctgaa taccgcatgg tgcggggcca ccgccgcgga 3660

ggcgacgcgg ggccggtggt ggtcatcgat gtcgaagacg acggggagga cgctgctgat 3720

gactccgccg gcggtggggg tggagcggcg gcggcggtga agaggagggt ggtggttccg 3780

ggggccgtgg cgacgcggac gcgatcgcgg aggatggcga tggcgcagca ggcgcccgtc 3840

acgccgccgg ctgcggcgga ggaggcgccg agcaggagga ggaagaggaa gggggcggcg 3900

agtgcggagg cgggtggcgg agggccgtcg aagcgccgcg tgcgatcctc ggggtcagcg 3960

ggcgggcgtg gtgcgcgcaa gcgcaaggag gcggaggcgg atgaggagga agcggaagca 4020

gaggctgagg aggaagcgga agcagaggcg gggactcccg ctcgcggaga atcgatggag 4080

gtgtcacagg ttgacggggg tggcagcagc gggcgagccg atgacgcttc gcacaatggt 4140

aatggcgagt ctcgcgtgtg taacgcggat ggcattgatc aggcaagcga ggagcgtcca 4200

agtgtcgctg gtggggatct aattgaggag gagcactgcg ggaatgggga aaccagcgtc 4260

gctggtgggg atcgaattga ggagcactgc ggtaatgtgg aagccagtgt cgccaattcg 4320

aatcgtgatg gcggtgagat catcgctggg gagggcacag aggatcgtgg gaacacggag 4380

ttagcagtgg tggattcagt gaatgaagag ttggcttccg atgaggatga ttacgacgat 4440

gaaatgttgg aggaaaagct tgtcggagat gtcattcgtg cttacagcaa tggcactgat 4500

ttggatacaa atggagtgga ctgggaagcc gaggatgaga tggaatttgc tgatttggat 4560

acaaatgtag tggactggga agctgaggat gagatggaat ttgatgatga taatgataat 4620

gatgctgatg acgacggtga taattttggg ggtgatgcgg atgaaggtga caaatctgta 4680

caaatgcatg acttttctaa ggtggaaaca caagatttgg tgagccacaa tgttaatgtt 4740

agtgaagtga ggcctcatga ggatgaggag gctatcaagg atgagatgga gtcaaaggga 4800

aaaggatctc tcagttttaa tgaagggagc tcctatattg aaattcttga ctctgacgag 4860

gaagtcaaag tggtcaatga cacagggaat gccttgagaa ggaagccatt agtaccagcg 4920

aagctaccga ttgtgccatc ttgtgttgca tggagaactc ggtcatcatg gggtatgaag 4980

gaggagagga tttcttacaa tacatatttc gaggtattgt ctgatgagcc aaaagaggat 5040

gatgatgaca ctgaagtgga attggatgat gaggaggacg atgaaaacga tgacgattgc 5100

aatagtgcta gctgtgatga agaagatgaa gaggaagaag aggaaagaga ggaggaagag 5160

gaagaagctc aaaggagaaa gcaaaagaaa gggattgact catctgatga tgagatgatt 5220

gatgatgctg tagattgtgg cattgattgg gaggaggatt acccagaggt tgattttact 5280

cggccactta cctttcagaa agatggcagt gaggcccctg tgggcagcga ggcttttacg 5340

gagcaacaga agagatcgcg atttacatgg gagcttgaga ggaggaaaaa actgaagctt 5400

ggcatgatga cgaatcatcg tttgtatgaa cgagacctgg aatcagattc caactcatca 5460

gattctagtc agaatcgaaa aaatggatgt caagggagtg gtgatcacag aactgggagg 5520

aaaaggaaga atccattatc aaaatctggt aagaaatcca gccgcatgtt aaagaggcag 5580

tctcttatga agcttctgat ggacaagatg tgtagcaatg atgatgggaa gtctactcct 5640

tttgaccaga agccccagat tgagtatagt ttcaaggatt tgcatccgtt ggttttttca 5700

tttggggacg atgatcctag tccaactgat aggtcagagc aagatgctgc actggatatg 5760

ctatgggctg atttagactt cactttagag tcagagaaca ttgggactta ttatgatgat 5820

gaggtacttt tgctgcatga atttatctga cattgctgac gtcctattat tttccttaat 5880

ggggttgatt tgattatgga acatggcaac cctatctata ttacatgatt gttgcactta 5940

tctttgcaga gaaaataagc tgggtataga cataggttct tgttaatcat tcatcaccat 6000

tgctgcccaa tttgttacat tctattttac cactatttgt ggtaccaata tttgggaaca 6060

gcagtcttaa cttggcgcag ccaattctaa gtagtgtatg tatgcgtatt ttgtgccact 6120

accatattgc actctttaac aatgaacata tatttatttg tttggagaat aaatattcct 6180

ttatgttatc tctgtataac agcagaacac cttttgatgg ttgacaacag gagattctgg 6240

tcaattttaa ctatattata ttatgtaatt ctccaaaatt ttccagtgtg acaaatttga 6300

tgctttcatt tttttggtgt catctagtca aggctaccat gttgaaatga ttagcttctg 6360

ttgttttgta gggccaagag gacagtctgc tagatcatgc acttgctcct attacacctt 6420

gttctagagg gaagcatgaa tttattattg atgagcaaat aggaatcaga tgcaaatact 6480

gctccttggt aaatctggaa atcagattta ttttaccatt gctggtgagt ttagtatctc 6540

tcaaaacttc tggcttgctt cccacaacat aagttgatca attccattat ttatcttgtt 6600

cttccattcc aggcctccaa ttttgcagag aaacctgcat ggcgaaacag ctcttgtttg 6660

aagactgcgt tgatgtgtcc tgatctttat gaacaaacag ggactggtga tggacaatct 6720

caagatttcc atataaatgg aactgtgtgg gatctcattc ctggcgtcat tactgatatg 6780

tatcagcatc aacgtgaggc atttgagttt atgtggacaa atctagtggg tgatattagg 6840

cttaatgaaa taaagcatgg ggctaagcct gatgttgttg gaggatgtgt gatctgtcat 6900

gccccaggga caggaaagac tcgtttggct attgtgttta tccagacata catgaaggtg 6960

ttcccagact gccgaccggt gattattgca cctcgtggga tgctgtttgc ttgggaacaa 7020

gagttcaaga aatggaatgt caacgttcct tttcatataa tgaacactac tgattactct 7080

gggaaggaag acagagatat atgtagatta ataaagaaag agcatcggac tgaaaagttg 7140

actaggcttg taaaactgtt ttcatggaac aggggtcatg gtgttcttgg aattagttat 7200

ggtctatata tgaaactaac atctgaaaag gttggctgca ctggagaaaa caaagtgaga 7260

actattcttc ttgagaaccc tggtttgctt gttctcgatg aagggcacac acctaggaat 7320

gagcgcagtg ttatttggaa gacactagga aaagttaaaa ccgagaagcg tataattcta 7380

tctggaactc ctttccaaaa taattttctt gagctttaca atattctctg tttggtgagg 7440

cctaggtttg gtgaaatgtt tttgactaaa acaagagtgg gtcgaaggca ctgtgtctca 7500

aagaagcaac gggataaatt ttctgataaa tatgagaaag gagtttgggc ttccttaact 7560

agtaatgtaa ctgatgataa tgcagaaaag gtaagatcaa tactgaaacc atttgttcat 7620

atccataatg ggactattct tcgaactctt ccggggctca gagagtgtgt gatagttctg 7680

aagcctctac cgcttcaaaa gagtatcatt agaaaggtag aaaatgttgg atctggtaac 7740

aatttcgaac atgagtatgt tatttcttta gcctccacac atccttcact tgtaaacgca 7800

attaacatga cggaagaaga agcttccctt attgataaac ctatgcttga aagattaagg 7860

tctaatcctt atgaaggagt aaaaacaagg tttgtaatgg aagttgttcg tttgtgtgaa 7920

gcattgaaag aaaaggtatt gatttttagt caatttattc agccattaga attgataaag 7980

gaacatcttc gtaagatttt caaatggaga gaaggaaaag agattctcca aatggatggg 8040

aagatcctcc cgagatatcg tcaaaattca attgaggttt tcaataatcc ggatagtgac 8100

gcgagggtgt tacttgcatc tacaagagct tgttgtgaag ggattagcct aacaggggct 8160

tctagagttg ttcttctaga tgttgtctgg aatccagctg ttggaaggca agctatcagc 8220

agagcattta ggataggaca gaagaaattt gtatatacat acaatttaat aacttatgga 8280

acaggtgaag gtgacaaata tgataggcaa gcagaaaagg accacttgtc caagttggtc 8340

ttctctacag aagacgagtt cagtaatgtt aggaacatgc tttcaaaagc tgaaatggag 8400

cactgttcta agttgatatc cgaggataag gttctggagg aaatgacttc ccatgaccag 8460

ctgaaaggca tgtttttaaa gattcattat ccaccaactg agtcaaacat tgtttttact 8520

tacaaccaga ttgctcctga gttaagttaa taatgactgg catcagatgg attcattctt 8580

taaggtggtg ctctcgaact tttgacttct tattgttgtg gctagttcta gaatgatcag 8640

atattgatgg aatgcgatgt gcatgtgtaa tgcagctgac tagctagcgt gaggacagtg 8700

agactgaata cagcataaat tttcagctgt ttttgttgca gatgatgatt cattaattat 8760

aaggtgaacc cttgtgtaat cgcactggaa gaacatacta ttgctatggc atccgtggtc 8820

cagagttaaa tagttctagt tgactgtaag tttgttccac tgacttcatc atgttattca 8880

attttataaa gttgacttgc atacaattag tagtcaggtg gctgctgatt tccattattt 8940

tcttttaatg gacagctatg tgtttctgta gggcatgcac tgagaaattc ctgatgcagc 9000

aggctgtggt atccctatac tctatcaaat aatggatctt gggttgcatt aggtcacgca 9060

tgatcaaata ggactagtca gttcttacat aatgggtgca aagcatcaac aaatctagaa 9120

tcggcacaag gtcgccggct gaaaaatctt cttgtgtaca ataatgaatc tccagatgcg 9180

atgtataata atgctattgg ttcatttctg gtggtccaat atttgttgaa ctaaacacaa 9240

tcttaatatg aataagcgga ctagtttcag cta 9273

<210> 5

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gttgcagcta aacccctctc cctactcct 29

<210> 6

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aagaatgaat ccatctgatg ccagtcatt 29

<210> 7

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

ccggcgcgcc aagctttacg gctttctaat gtgaacattt tatta 45

<210> 8

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gaattcccgg ggatcctagc tgaaactagt ccgcttattc atatt 45

Claims (10)

1.一种控制粒型的蛋白质OsSDSG，其特征在于选自如(a)或(b)所示的任一种：

(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与淀粉合成相关的由序列1衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述蛋白的基因OsSDSG。

3.根据权利要求2所述的基因OsSDSG，其特征在于：所述基因是如下1)或2)或3)或4)或5)所述的DNA分子：

1)SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)SEQ ID NO.3所示的DNA分子；

3)SEQ ID NO.4所示的DNA分子；

4)在严格条件下与1)或2)或3)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白OsSDSG的DNA分子；

5)与1)或2)或3)或4)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码植物粒型相关蛋白的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体是在pCUBi1390载体的多克隆位点HindⅢ和BamHI之间插入权利要求2或3所述基因得到的重组质粒。

6.扩增权利要求2或3所述基因的全长或其任意片段的引物对。

7.权利要求1所述蛋白，权利要求2或3所述基因，权利要求4所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在植物育种中的应用；优选的，所述植物为水稻。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于权利要求1所述蛋白，权利要求2或3所述基因，权利要求4所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在培育粒型形成正常或粒型变大的转基因植物中的应用；优选的，所述植物为水稻。

9.一种培育粒型形成正常的转基因植物的方法，是将权利要求2或3所述基因导入粒型形成异常植物中，得到粒型形成正常的转基因植物；所述粒型形成异常的植物为粒型变小的植物；所述粒型正常的转基因植物为籽粒大小形成正常的转基因植物；优选的，所述植物为水稻。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：权利要求2或3所述基因通过权利要求4或5所述重组表达载体导入粒型大小形成异常的植物中。

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