CN110090293A - 一种抑制plga微球中多肽类药物酰化副反应的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法。该方法针对工业化中应用最广泛的微球制备方法—乳化溶剂挥发法，通过在复乳制备过程中添加一类特殊的二价金属盐的方式，达到长期抑制多肽与载体发生的酰化副反应的目的。所述的二价金属盐具有如下特征：1）难溶于水；2）能够吸纳微球降解产生的氢离子（H+）而逐渐释放二价金属离子；优选二价金属盐吸纳微球降解产生的氢离子（H+）后，能够逐渐转化成溶解度逐渐提高的一氢盐或二氢盐的形式。该方法工艺简单，技术要求低，抑制酰化副反应效果显著，适合应用于大规模工业化生产。

Description

一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法
技术领域
本发明涉及多肽类长效缓释微球制剂领域，具体涉及一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法。
背景技术
进入二十一世纪以来，以新型小分子化合物实体为基础的药物研发成本与日俱增，据统计，单个小分子化药的开发成本约为1~5亿美元。而生物大分子类药物研发成本相对较低，对治疗靶点的高选择性和高特异性使其在重大疾病的治疗中展现出巨大的优势。随着DNA重组技术等现代化生物技术的迅速发展，越来越多的生物制品被开发并应用于临床。已上市的生物大分子药物以多肽类药物为主。然而多肽类药物分子量大难以透过肠系膜被吸收，药物递送的方式主要依赖非肠道给药方式。上市的剂型多为注射剂，分为注射液和注射用长效微球制剂。就注射液而言，由于多肽类药物半衰期短、生物利用度低、易被内源性的蛋白酶水解而失活等特点，为了维持稳定的血药浓度保证良好治疗效果，需反复给药。但对于慢性病的治疗，如血液疾病（高血压）、激素分泌功能障碍（糖尿病）等，连续给药带来的患者的用药依从性差，增加了用药成本。因此，注射用长效微球制剂已成为主流的研究方向，其一次剂量的药效可维持数周乃至数月。制备微球的载体多为生物可降解性高分子材料。该剂型的特点是：随着载体的缓慢降解，药物逐渐释放而达到长期的治疗的目的。
聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）是一种可降解型生物高分子聚合物，由于载体本身及其降解产物具有良好的生物相容性，已被美国食品药品监督管理局（FDA）批准可用于临床。目前PLGA在生物医药行业中具有广泛的应用，例如商品名为Dexon® 和 Vicryl®的手术缝合线，固定骨和软组织的板、钉、栓和螺丝钉等。已上市微球制剂的载体材料绝大多数为PLGA，其能够保护多肽类药物免遭蛋白酶水解，例如最早上市的亮丙瑞林微球（Lupron® Depot）、后期的戈舍瑞林（Zoladex®）、奥曲肽（Sandostatin® LAR Depot）、艾塞那肽微球（Bydureon®），以及近期上市的醋酸曲安奈德微球（ZILRETTATM）等。药物释放速率和载体的降解快慢由聚合物单体乳酸和羟基乙酸的比例及分子量控制。
然而PLGA载多肽类药物微球在长期的药物释放过程中，药物与载体之间易发生酰化副反应，具体为多肽类药物分子中的赖氨酸、精氨酸残基上的氨基基团以及分子末端的氨基基团与PLGA分子末端的羧基基团发生共价反应。这种共价反应将会产生一系列多肽药物的酰化副产物。药物经酰化副反应后产生的酰化产物与治疗靶点的亲和力大大下降（药效下降），严重的会导致强烈的毒性作用并诱导机体的免疫反应。
文献“Peptide acylation by poly (α-hydroxy esters)”中报道，中和微球中载体降解产生的酸性微环境能够一定程度上抑制酰化副反应；文献“Identification ofchemically modified peptide from poly (D, L-lactide-co-glycolide)microspheres under in vitro release conditions”中报道，当采用的聚合物载体中乳酸单体的比例较高时（例如乳酸：羟基乙酸 = 85:15），酰化副反应情况有所改善；文献“Effect of N-terminal mono-PEGylation on biological activity andpharmacokinetics”中报道以及US8206735B2中公开，将多肽类药物中的活性氨基基团修饰聚乙二醇后（PEG化保护氨基），酰化副反应情况大大改善。但中和酸性微环境带来抑制酰化副反应的效果较差；只采用高比例乳酸单体的PLGA很大程度上限制了可选择的载体范围；PEG化保护氨基基团的同时，药物的活性也大大下降（药效下降）。因此亟待开发一种工艺简单，适合工业化生产，并且有效抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法。
近些年来，文献“A new class of inhibitors of peptide sorption andacylation in PLGA”、“Inhibition of Peptide Acylation in PLGA Microspheres withWater-soluble Divalent Cationic Salts”和“Minimizing acylation of peptides inPLGA microspheres”报道，以及US 9675675 B2公开的一种能够从根源上解决PLGA微球中多肽类药物酰化副反应问题的方法引起了广泛的关注。经过确证，微球在降解过程中产生的可溶性酸性低聚物是酰化副反应重要底物。在生理环境下（pH为7.4），多肽类药物中的氨基质子化产生氨基正离子（-NH3 +），PLGA降解产生的酸性低聚物电离产生羧基负离子（-COO-），带相反电荷的氨基正离子和羧基负离子产生静电吸附并发生酰化副反应。该种静电吸附是PLGA与药物发生酰化副反应的前提。研究发现二价金属离子（Mn2+，Ca2+，Mg2+和Zn2+等）的加入能够高效地抑制低聚物与多肽之间的静电吸附，从而大大抑制酰化副反应。为了起到最佳抑制效果，通常选用高水溶性的二价金属盐（例如MnCl2，CaCl2，MgCl2，ZnCl2等）。然而该策略存在两个重要的技术壁垒：1）在乳化法制备微球的过程中，高水溶性的无机盐极易扩散到外水相中而导致无机盐的包封率低下（20~30%）；2）在微球释放药物的初期，水溶性的无机盐快速溶解，形成相互联结的水性孔道，金属离子很快顺渗透梯度从微球内部的水性孔道释放到介质中。二价金属盐包封率低下造成长期抑制酰化副反应的储备力不足以及抑制效力下降，金属离子在药物释放初期的快速流失使得中后期的抑制效果大打折扣。目前尚无改善微球中的二价金属盐包封以及缓慢释放其中金属离子的方法公开。
发明内容
本发明立足于PLGA微球自身降解的特点，公开一种高包封、快速响应并智能释放二价金属离子的方法。该方法主要针对现代工业化生产中应用最广泛的微球制备方法—乳化溶剂挥发法，通过在复乳制备过程中添加一类特殊的二价金属盐的方式，达到智能释放二价金属离子抑制多肽与载体酰化副反应的目的。该方法工艺简单，技术要求低，抑制酰化副反应效果显著，适合应用于大规模工业化生产。
本发明采用的技术方案为：
一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，在乳化法制备PLGA载多肽类药物微球过程中加入一类特殊的二价金属盐，随微球缓慢降解，其逐渐释放二价金属离子抑制微球中的酰化副反应，所述的二价金属盐具有如下特征：
1）难溶于水；
2）能够吸纳微球降解产生的氢离子（H+）而逐渐释放二价金属离子；
优选地所选二价金属盐吸纳微球降解产生的氢离子（H+）后能够逐渐转化成溶解度越来越高的一氢盐或二氢盐的形式，则抑制效果更佳。
所述的二价金属盐的阳离子为Ca2+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Sr2+、Ni2+中的一种；阴离子为：CO3 2-、PO4 3-、SO4 2-、PO3 2-和SO3 2-中的一种。
所述二价金属盐固体颗粒经研磨后过筛，选择粒径小于1微米的颗粒作为添加剂。
所述二价金属盐加入到PLGA油相溶液中。
二价金属盐与加入的药物摩尔比为：1:1~10:1。
设计原理：PLGA载药微球在长达数月的释药过程中，载体材料缓慢降解，逐渐产生酸性低聚物以及乳酸、羟基乙酸等酸性单体分子（图1）。这些酸性低聚物分子一部分释放到介质中，另一部分在微球内部蓄积并形成局部的酸性微环境（图2为酸性低聚物释放到介质中引起释放介质pH变化，图3为微球内部的pH变化）。留在微球内部的酸性低聚物是多肽类药物发生酰化副反应的重要底物。微环境的酸度代表着蓄积的低聚物的浓度，是酰化副反应剧烈程度的重要指示和信号。本发明利用这种与低聚物相伴而生的酸性微环境为刺激源，刺激一类特殊的二价金属盐根据酸度（酰化副反应的剧烈程度）响应性释放二价金属离子以抑制酰化副反应。以其中一种二价金属盐，Ca3(PO4)2为例：
1）在微球制备的过程中，由于Ca3(PO4)2难溶于水，固体形式的Ca3(PO4)2迁移到外水相中的量很少，因此其包封率很高（约95%）。高包封是能够长期抑制酰化副反应的前提和保障。且在微球没有发生降解的过程中（未经酸刺激条件下），Ca3(PO4)2是固体（难溶于水），不会造成钙离子的不必要流失。此时绝大部分的钙以固体的形式储存于微球中，Ca3(PO4)2作为潜在的钙离子储库。
2）随着微球在释放介质中逐渐降解，产生越来越多的酸性低聚物，固体形式的Ca3(PO4)2将吸收微环境的H+而逐渐转化成溶解度越来越高的CaHPO4和Ca(H2PO4)2（图4），自发根据酰化副反应的剧烈程度而提供相应量的钙离子抑制酰化副反应。酸性低聚物产生的越多，酰化副反应越剧烈，从钙离子储库中释放的钙离子的量则越充足。结果表明，该发明起到了很好的抑制酰化副反应的效果（以醋酸奥曲肽为例，图5，实施例1）。
具体通过以下步骤实现：
本发明采用水包油包水（W1/O/W2）型乳化溶剂挥发法制备多肽类药物微球，二价金属盐作为添加剂加入其中。其具体组成如下：
1）内水相：
药物：10%~100%（w/v, g/ml）
2）油相：
PLGA：5%~100%（w/v, g/ml）
二价金属盐：0.5%~5%（w/v, g/ml）
表面活性剂：0.1%~10%（w/v, g/ml）
3）外水相：
表面活性剂：0.1%~10%（w/v, g/ml）
制备方法如下：
将多肽类药物加入到水性溶液中，超声溶解，制备内水相溶液（W1）。
将PLGA加入到有机溶剂中，超声溶解，制备油相溶液（O），将研磨后的二价金属盐颗粒加入其中。
将所述的内水相药物溶液（W1）逐滴加入到油相溶液（O）中，并均质乳化，形成初乳溶液（W1/O）。
向所述初乳溶液中加入含少量稳定初乳的表面活性剂溶液，涡旋振荡，使之混合均匀。
将所述的混合初乳加入到大体积的外水相水性溶液（W2）中，搅拌，制备复乳溶液（W1/O/W2）。
待有机溶剂挥发完全后，将微球收集并用去离子水反复洗涤，弃去上清液，将剩余的微球冷冻干燥，获得PLGA载药微球。
本发明所述的多肽针对含有氨基基团的多肽类药物，包括奥曲肽、艾塞那肽、利拉鲁肽、兰瑞肽、特立帕肽等。
本发明所述的二价金属盐，为具有如下特征的金属盐：
1）本身难溶于水；
2）能够吸纳微球降解产生的氢离子（H+）而逐渐释放二价金属离子；
3）若所选二价金属盐吸纳微球降解产生的氢离子（H+）后能够逐渐转化成溶解度越来越高的一氢盐或二氢盐的形式，则抑制效果更佳。
所述的二价金属盐，例如可以为：阳离子为Ca2+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Sr2+、Ni2+中的一种；阴离子为：CO3 2-、PO4 3-、SO4 2-、PO3 2-和SO3 2-中的一种。二价金属盐固体颗粒经研磨后过筛，选择粒径小于1微米的颗粒作为添加剂。涡旋5分钟使之在有机相中均匀分散。优选的二价金属盐的阳离子为Ca2+、Zn2+中的一种，阴离子为：CO3 2-、PO4 3-、PO3 2-和SO3 2-中的一种，二价金属盐颗粒的粒径小于0.1微米。
本发明所述的二价金属盐与加入的药物摩尔比为：1:1~10:1；优选的摩尔比为1:1~4:1。
本发明内水相溶剂为：水、甲醇、乙腈中的一种或多种，内水相体积为50~500 μl，药物浓度为10%~100%（w/v, g/ml）。优选的溶剂为水和甲醇中的一种或两种，内水相体积为100~200 μl，药物浓度为20%~50%（w/v, g/ml）。
本发明油相溶剂为：二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙酸甲酯、四氢呋喃中的一种或多种，油相体积为1~10 ml，PLGA的浓度为5%~100%（w/v, g/ml），二价金属盐的量为0.5%~5%（w/v, g/ml）。优选的溶剂为二氯甲烷和乙酸乙酯，油相体积为2~5 ml，PLGA的量为20%~50%（w/v, g/ml），二价金属盐的量为2%~4%（w/v, g/ml）。
本发明所述的制备初乳时均质速度为10000~30000 rpm，均质时间为0.5~5分钟。优选的转速为20000 rpm，均质时间为1分钟。
本发明所述的稳定初乳的表面活性剂溶液为0.1~10%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，体积为2~10 ml。优选聚乙烯醇浓度为2~5%（w/v, g/ml），体积为2~5 ml。将混合乳液放置于涡旋振荡器上以最大涡旋速度涡旋30秒，使乳液充分混合。
本发明所述的外水相溶液为0.1~10%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇水溶液，外水相体积为50~500 ml，优选0.3~1%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇水溶液，体积为80~150 ml。
本发明所述制备复乳时的搅拌速度为100~1000 rpm，优选的转速为200~500 rpm。
经过6小时后，有机溶剂挥发完全，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。
所述水包油包水型乳化溶剂挥发法制备的微球粒径均一，微球表面光滑（图6）。加入的二价金属盐对微球中的酰化副反应抑制效果好。工艺简单，适合应用于大规模工业化生产。
有益效果：本发明在复乳制备过程中添加一类特殊的二价金属盐的方式，达到智能释放二价金属离子抑制多肽与载体酰化副反应的目的，该方法工艺简单，技术要求低，抑制酰化副反应效果显著，适合应用于大规模工业化生产。
附图说明
图1为PLGA降解产生酸性低聚物图。
图2为微球中的酸性低聚物释放到介质中引起介质pH值变化曲线图。
图3为微球内部pH变化图。
图4为难溶性二价金属盐Ca3(PO4)2在酸性条件下逐渐转化成水溶性逐渐升高的一氢盐CaHPO4和二氢盐Ca(H2PO4)2形式图。
图5为含20 mg醋酸奥曲肽的微球中加入40 mg Ca3(PO4)2抑制酰化副反应效果图（实施例1）。
图6为微球中加入Ca3(PO4)2的扫描电子显微镜图。
图7为含50 mg醋酸奥曲肽的微球中加入50 mg Ca3(PO4)2抑制酰化副反应效果图（实施例2）。
图8为含20 mg醋酸奥曲肽的微球中加入40 mg ZnCO3抑制酰化副反应效果图（实施例3）。
图9为含30 mg艾塞那肽的微球中加入30 mg Ca3(PO4)2抑制酰化副反应效果图（实施例4）。
图10为含20 mg醋酸奥曲肽的微球中加入20 mg CaCO3抑制酰化副反应效果图（实施例5）。
图11为含50 mg艾塞那肽的微球中加入30 mg Ca3(PO3)2抑制酰化副反应效果图（实施例6）。
图12为含50 mg醋酸奥曲肽的微球中加入80 mg Ca3(PO4)2抑制酰化副反应效果图（实施例7）。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步详细说明。以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干修饰和改进，这些修饰和改进也属于本发明权利要求的保护范围内。
实施例1
称取20 mg的醋酸奥曲肽溶解于100 μl的去离子水中；600 mg PLGA 503H溶解于2 ml二氯甲烷中。称取研磨过筛后的Ca3(PO4)2 40 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将100 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（20000rpm）1分钟。向初乳中加入2 ml 2%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到100 ml 含0.5%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于350rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降85.30%（图5）。
实施例2
称取50 mg的醋酸奥曲肽溶解于200 μl的去离子水中；600 mg PLGA 503H溶解于2 ml二氯甲烷中。称取研磨过筛后的Ca3(PO4)2 50 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将200 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（20000rpm）1分钟。向初乳中加入2 ml 2%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到100 ml 含0.5%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于400rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降57.97%（图7）。
实施例3
称取20 mg的醋酸奥曲肽溶解于100 μl的去离子水中；800 mg PLGA 504溶解于4 ml二氯甲烷中。称取研磨过筛后的ZnCO3 40 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将100 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（20000 rpm）1分钟。向初乳中加入2 ml 4%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到100 ml 含0.5%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于350rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降46.80%（图8）。
实施例4
称取30 mg的艾塞那肽溶解于100 μl的去离子水中；600 mg PLGA 503H溶解于2 ml 二氯甲烷中。称取研磨过筛后的Ca3(PO4)2 30 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将100 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（20000 rpm）1分钟。向初乳中加入3 ml 2%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到200 ml 含0.5%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于300rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降77.98%（图9）。
实施例5
称取20 mg的醋酸奥曲肽溶解于100 μl的甲醇中；1000 mg PLGA 752H溶解于3 ml 二氯甲烷中。称取研磨过筛后的CaCO3 20 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将100 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（15000 rpm）1分钟。向初乳中加入2 ml 2%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到100 ml 含0.5%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于350 rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降48.93%（图10）。
实施例6
称取50 mg的艾塞那肽溶解于200 μl的去离子水中；700 mg PLGA 503H溶解于2 ml 二氯甲烷中。称取研磨过筛后的Ca3(PO3)2 30 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将200 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（18000 rpm）1分钟。向初乳中加入2 ml 2%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到100 ml 含0.8%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于400rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降54.53%（图11）。
实施例7
称取50 mg的醋酸奥曲肽溶解于100 μl的去离子水中；600 mg PLGA 503H溶解于2 ml二氯甲烷中。称取研磨过筛后的Ca3(PO4)2 80 mg于上述有机相中，涡旋振荡，使之均匀悬浮在有机相中。此时立刻将100 μl药物溶液逐滴加入到有机相中，于均质机上均质（13000rpm）1分钟。向初乳中加入3 ml 3%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇溶液，于涡旋振荡器上涡旋30秒（最大涡旋速度）。将混合乳液加入到200 ml 含0.3%（w/v, g/ml）聚乙烯醇的水溶中，于350rpm条件下搅拌6小时。待有机溶剂挥发完全时，将所得微球溶液离心弃去上清液，随后用去离子水反复洗涤微球，离心弃去上清液。将湿微球放入冻干机的冷阱中预冻6小时，随后取出放入冻干室，经过48小时冷冻干燥，得干微球。35天药物释放结果表明，酰化副反应率下降72.96%（图12）。

Claims (10)

1.一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，在乳化法制备PLGA载多肽类药物微球过程中加入一类特殊的二价金属盐，随微球缓慢降解，其逐渐释放二价金属离子抑制微球中的酰化副反应，所述的二价金属盐具有如下特征：
1）难溶于水；
2）能够吸纳微球降解产生的氢离子（H+）而逐渐释放二价金属离子；优选二价金属盐吸纳微球降解产生的氢离子（H+）后，能够逐渐转化成溶解度逐渐提高的一氢盐或二氢盐的形式。
2.根据权利要求1所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，所述的二价金属盐的阳离子为Ca2+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Sr2+、Ni2+中的一种；阴离子为：CO3 2-、PO4 3-、SO4 2-、PO3 2-和SO3 2-中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，所述二价金属盐固体颗粒经研磨后过筛，选择粒径小于1微米的颗粒作为添加剂，二价金属盐加入到PLGA油相溶液中。
4.根据权利要求1所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，二价金属盐与加入的药物摩尔比为：1:1~10:1。
5.根据权利要求1所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，所述的多肽类药物包括奥曲肽、艾塞那肽、利拉鲁肽、兰瑞肽、特立帕肽等。
6.根据权利要求1所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）将多肽类药物加入到水性溶液中，超声溶解，制备内水相溶液W1；
2）将PLGA加入到有机溶剂中，超声溶解，制备油相溶液O，将二价金属盐颗粒加入其中；
3）将所述的内水相药物溶液W1逐滴加入到油相溶液O中，并均质乳化，形成初乳溶液W1/O；
4）向所述初乳溶液中加入含少量稳定初乳的表面活性剂溶液，以最大涡旋速度涡旋振荡30秒，使之混合均匀；
5）将所述的混合初乳加入到大体积的外水相水性溶液W2中，搅拌，制备复乳溶液W1/O/W2；
6）待有机溶剂挥发完全后，将微球收集并用去离子水反复洗涤，弃去上清液，将剩余的微球冷冻干燥，获得PLGA载药微球。
7.根据权利要求6所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，内水相溶剂为水、甲醇、乙腈中的一种或多种；油相溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙酸甲酯、四氢呋喃中的一种或多种；外水相溶液为0.1~10%（w/v, g/ml）的聚乙烯醇水溶液。
8.根据权利要求6所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，二价金属盐的阳离子为Ca2+、Zn2+中的一种，阴离子为：CO3 2-、PO4 3-、PO3 2-和SO3 2-中的一种，二价金属盐颗粒的粒径小于0.1微米。
9.根据权利要求6所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，内水相中药物浓度为10%~100%（w/v, g/ml），油相中PLGA的浓度为5%~100%（w/v, g/ml），油相中二价金属盐的量为0.5%~5%（w/v, g/ml）。
10.根据权利要求6所述的一种抑制PLGA微球中多肽类药物酰化副反应的方法，其特征在于，制备初乳时均质速度为10000~30000 rpm，均质时间为0.5~5分钟。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111870582A (zh) * 2020-06-28 2020-11-03 苏州天微肽生物医药科技有限公司 正硅酸乙酯-利拉鲁肽复合微球制剂及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6113947A (en) * 1997-06-13 2000-09-05 Genentech, Inc. Controlled release microencapsulated NGF formulation
CN104739783A (zh) * 2015-04-14 2015-07-01 南京林业大学 生物可降解聚乳酸-羟基乙酸共聚物/壳聚糖载药微球制备方法及产品
US20170035856A1 (en) * 2014-04-16 2017-02-09 Shandong Luye Pharmaceutical Co., Ltd. Exenatide-containing composition and preparation method therefor
CN107049984A (zh) * 2017-03-14 2017-08-18 武汉理工大学 一种载紫杉醇聚乳酸‑羟基乙酸微球的制备方法
CN110393711A (zh) * 2019-07-26 2019-11-01 南京工业大学 一种改善plga载多肽类药物微球中药物低包封和高初始突释问题的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6113947A (en) * 1997-06-13 2000-09-05 Genentech, Inc. Controlled release microencapsulated NGF formulation
US20170035856A1 (en) * 2014-04-16 2017-02-09 Shandong Luye Pharmaceutical Co., Ltd. Exenatide-containing composition and preparation method therefor
CN104739783A (zh) * 2015-04-14 2015-07-01 南京林业大学 生物可降解聚乳酸-羟基乙酸共聚物/壳聚糖载药微球制备方法及产品
CN107049984A (zh) * 2017-03-14 2017-08-18 武汉理工大学 一种载紫杉醇聚乳酸‑羟基乙酸微球的制备方法
CN110393711A (zh) * 2019-07-26 2019-11-01 南京工业大学 一种改善plga载多肽类药物微球中药物低包封和高初始突释问题的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHIRANGI M, ET AL．: "Inhibition of octreotide acylation inside PLGA microspheres by derivatization of the amines of the peptide with a selfimmolative protecting group", 《BIOCONJUG CHEM》 *
VAISHYA R D, ET AL．: "Reversible hydrophobic ion-paring complex strategy to minimize acylation of octreotide during long-term delivery from PLGA microparticles", 《INT J PHARM》 *
ZHANG Y, ET AL.: "Inhibition of peptide acylation in PLGA microspheres with water-soluble divalent cationic salts", 《PHARM RES》 *
安森博，等: "聚乳酸-羟基乙酸共聚物载药微球性质及缓释行为的影响因素", 《中国医院药学杂志》 *
陈卫，等: "高水溶性药物在微球制备工艺中关键工艺的优化", 《中国医药工业杂志》 *
陈惠鹏: "《医学生物工程进展》", 31 July 2004, 人民军医出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111870582A (zh) * 2020-06-28 2020-11-03 苏州天微肽生物医药科技有限公司 正硅酸乙酯-利拉鲁肽复合微球制剂及其制备方法和应用
CN111870582B (zh) * 2020-06-28 2022-03-18 苏州天微肽生物医药科技有限公司 正硅酸乙酯-利拉鲁肽复合微球制剂及其制备方法和应用

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