CN110068688A - 一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡 - Google Patents
一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110068688A CN110068688A CN201910429625.2A CN201910429625A CN110068688A CN 110068688 A CN110068688 A CN 110068688A CN 201910429625 A CN201910429625 A CN 201910429625A CN 110068688 A CN110068688 A CN 110068688A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nano flower
- lactoferrin
- gold
- line
- milk
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000002057 nanoflower Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 60
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 title claims abstract description 39
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 title claims abstract description 39
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000005259 measurement Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 13
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 title claims abstract 10
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 43
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 35
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 101000798100 Bos taurus Lactotransferrin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 229940072440 bovine lactoferrin Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 35
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 15
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 claims description 4
- 244000248349 Citrus limon Species 0.000 claims description 3
- 229910004042 HAuCl4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SJUCACGNNJFHLB-UHFFFAOYSA-N O=C1N[ClH](=O)NC2=C1NC(=O)N2 Chemical compound O=C1N[ClH](=O)NC2=C1NC(=O)N2 SJUCACGNNJFHLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 claims description 3
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 claims description 3
- SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydroxy-[[phosphonatomethyl(phosphonomethyl)amino]methyl]phosphinate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)(=O)CN(CP(O)([O-])=O)CP([O-])([O-])=O SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims 1
- 229910021505 gold(III) hydroxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract description 14
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract description 14
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract description 14
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 abstract description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 abstract description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 abstract description 2
- 102100032241 Lactotransferrin Human genes 0.000 description 29
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 15
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 229920002538 Polyethylene Glycol 20000 Polymers 0.000 description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 3
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 241000530105 Clerodendrum minahassae Species 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000012174 Lactotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000893859 Matelea Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 1
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- BRSVJNYNWNMJKC-UHFFFAOYSA-N [Cl].[Au] Chemical compound [Cl].[Au] BRSVJNYNWNMJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000356 anti-lactoferrin effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical class CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- -1 salt ion Chemical class 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010206 sensitivity analysis Methods 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明属于抗体工程与免疫检测领域,具体涉及一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡。该纳米花免疫测流层析检测卡包括样品垫、纳米花金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水垫和塑料卡壳。所述的NC膜上设置有C线和T线,所述的C线上喷有羊抗鼠的IgG抗体,而所述的T线上包被有牛乳铁蛋白抗原。所述的金标垫上含有纳米花金标记的鼠源单克隆IgG抗体。本发明能够通过竞争法纳米花免疫检测卡,对牛奶中乳铁蛋白进行快速检测,其检测灵敏度为2.4 ng/mL,对牛奶中主要的酪蛋白、血清白蛋白和脱脂牛奶均无交叉反应,所建立的检测方法方便快捷可以直接用于乳产品中乳铁蛋白含量的快速检测。
Description
技术领域
本发明属于抗体工程与免疫检测领域,具体涉及一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡。
背景技术
乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)也叫乳运铁蛋白,是转铁蛋白家族的一种多功能蛋白,其相对分子质量约为80 kDa,存在于所有哺乳动物的分泌液中,尤其是在牛乳中存在最为广泛。乳铁蛋白具有营养、抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等作用,目前已经在食品、药品和化妆品中得到了广泛的应用。此外,在食品安全检测中它可以作为评价奶产品质量的一项重要指标,因此对于乳制品中乳铁蛋白含量的快速检测显得尤为重要。
目前,检测样品中乳铁蛋白含量的方法主要包括高效液相色谱法,离子交换层析,分光光度法,核酸适配体和表面等离子共振技术等方法。这些方法都利用分析化学的检测手段对样品进行分离和鉴定,可以实现乳铁蛋白的定量检测。然而,这些方法的操作都需要实验室技术人员的操作以及对样品的预处理,有些还会用到昂贵的实验仪器,因此对样品中乳铁蛋白的快速检测带来了一定的困扰。抗体可以在体内或体外通过结合抗原表位的方式参与免疫防御,免疫检测和免疫应答的过程,从而广泛应用于个包括医学在内的各个领域。抗原抗体反应具有比例性,可逆性和高度的特异性,因此可以被用作免疫检测以及免疫诊断,目前已经被广泛应用于免疫印迹(WB)、免疫组织化学(IHC)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫胶体和纳米花金层析技术(GICA)。应用纳米花金标免疫检测卡可以对乳铁蛋白进行快速大批量的定量检测,而且不需要对样品进行前处理,从而省去了繁琐的步骤和样品处理时间。与其他化学检测方法相比较而言,该检测卡具有灵敏度高,特异性强,快速,简便等特点,被广泛应用于食品安全检测中。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速和特异性较强的一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,该检测能够满足竞争法纳米花标记免疫检测卡检测牛奶及其乳制品中乳铁蛋白的要求,实现对牛乳铁蛋白的快速灵敏检测。
为了实现上述目的,本发明提供了一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,检测卡包括样品垫、纳米花金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料卡壳;所述的NC膜上设置有C线和T线,所述的C线上喷有羊抗鼠的IgG抗体,所述的T线上包被有牛乳铁蛋白抗原;所述的金标垫上含有纳米花标记的抗LF单克隆抗体;所述抗LF单克隆IgG抗体是由保藏编号为CGMCC NO. 17087的杂交瘤细胞株3E2分泌获得。杂交瘤细胞3E2菌株,于2019年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.17087,中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址为中国,北京,北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所。
所述金标垫中所含有纳米花标记的抗LF单克隆抗体,是由纳米花金标记的抗LF单克隆IgG抗体溶液以100 mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在金标垫上干燥后得到的;所述抗体溶液的浓度为0.04 mg/mL。
所述纳米花金的制备方法为:用100 mL ddH2O溶解1 g HAuCl4制备获得氯金酸溶液,每管1 mL分装于1.5 mL灭菌离心管中并用锡箔纸密封后于-20℃保存备用;取750 μL的氯金酸溶液加入100 mL ddH2O中,加入500 μL的胶体金溶液混匀,再加入300 μL 1wt%的柠檬酸三钠摇匀, 最后加入1 mL 30 mM的对苯二酚溶液,搅拌30 min即可得到纳米花金溶液。
所述纳米花金的粒径大小为79 nm。
所述T线上包被的牛乳铁蛋白抗原,是由1 mg/mL的牛乳铁蛋白标准品溶液以100mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在T线上干燥后得到的。
所述C线上包被的羊抗鼠IgG的抗体是由1 mg/mL的羊抗鼠IgG的抗体溶液以100mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C线上干燥后得到的。
本发明的显著优点在于:通过竞争法纳米花金标免疫测流层析检测卡方法,对牛乳铁蛋白进行快速检测,其检测灵敏度为2.4 ng/mL, 对牛奶中主要的酪蛋白、血清白蛋白和脱脂牛奶均无交叉反应,所建立的检测方法方便快捷可以直接用于乳产品中乳铁蛋白含量的快速检测。
附图说明
图1 单克隆抗体3E2的SDS-PAGE纯化结果鉴定,其中泳道1为marker;泳道2为未纯化的腹水;泳道3为纯化后的单克隆抗体。
图2 小鼠腹水和纯化单克隆抗体3E2效价测定结果。
图3 纳米花免疫测流层析检测卡的结构示意图。
图4 纳米花免疫测流层析检测卡特异性分析。
图5 纳米花免疫测流层析检测卡灵敏度分析。
图6 纳米花免疫测流层析检测卡实际样品检测。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例1 本发明单克隆抗体3E2的纯化与鉴定
1) 单克隆抗体腹水的制备
选取9~10周龄的Balb/c小鼠,每只小鼠腹腔注射500 μL液体石蜡致敏。致敏后7~10 d,选取96孔细胞培养板中的生长状态良好的杂交瘤细胞进行细胞计数后(约105~106个)注射到致敏的小鼠腹腔。倘若注射操作不当会导致小鼠的死亡,在注射细胞后应注意每天观察小鼠的状态。大约10~12 d,小鼠的腹部出现明显的膨胀而且行动缓慢,说明腹腔内杂交瘤细胞已经大量繁殖产生了腹水。待小鼠的腹部继续膨胀变大直到小鼠奄奄一息时;即可采用无菌针头扎入小鼠的下部腹腔收集腹水,腹水收集完毕后于13300 r/min 4℃离心10min。离心后的腹水分三层,最下层是血细胞,中间相为单克隆抗体,最上层是脂肪等结缔组织碎片。用移液器吸取中间相置于新的离心管中,-80℃超低温冰箱保存。
2) 单克隆抗体的纯化
单克隆抗体的纯化采用辛酸硫酸铵法和Protein G Resin法。
辛酸硫酸铵法:从-80℃超低温冰箱中取出腹水融化后吸取1 mL置于离心管中,2500 r/min室温离心5 min。用移液枪吸出上清加入3 mL 60 mM的CH3COONa(pH 4.0)缓冲液,用0.1 mol/mL NaOH溶液调pH至4.5。在室温下,将33 μL正辛酸逐滴缓慢的加入上述溶液中,继续搅拌30 min,冰上静置反应2 h,然后以10000 r/min 4℃离心20 min收集上清,加入1/10体积的0.1 M PBS,再调pH值至7.4。量取上步骤溶液的体积,在冰上逐滴缓慢加入等体积的饱和硫酸铵溶液,注意一边加一边搅拌,加完以后在冰上静置30 min。然后全部溶液转移至离心管内,10000 r/min 4℃离心20 min收集沉淀,用1/10体积的0.01 M PBS重悬抗体沉淀,最后用0.01 M PBS透析抗体并用PEG-20000浓缩。
通过辛酸硫酸铵纯化的单克隆抗体纯度较低,仍需要根据实验要求进一步纯化才能得到高纯度的单克隆抗体。Protein G亲和层析:平衡:用5~10倍层析柱体积的平衡缓冲液(20 mM Na2HPO4,0.15 M NaCl,pH 7.0)平衡层析柱材料,直到流出液与平衡缓冲液完全一致。上样:辛酸硫酸铵粗纯得到的抗体要用0.45 μm微孔滤膜过滤后才能上柱。把过滤后的溶液与等体积的平衡缓冲液(20 mM Na2HPO4,0.15 M NaCl,pH 7.0)混合,用计时器计时按照1 mL/min的速度收集流出液。把收集的流出液再次上柱后按照1 mL/min的速度流出,重复2~3次后于4℃静置2 h。洗涤:用30 mL的平衡缓冲液(20 mM Na2HPO4,0.15 M NaCl,pH7.0)洗涤层析柱,用计时器计时按照2 mL/min的速度流出。洗脱:用20 mL的洗脱缓冲液(0.1 M Gly,pH 2.5)洗脱结合在层析柱的单克隆抗体,用计时器计时按照1 mL/min的速度收集流出液。最后,收集洗脱下来的抗体溶液,立即加入1/10体积的中和缓冲液(1 M Tris,pH 8.5)直至pH值为7.4。用0.01 M PBS透析抗体并用PEG-20000浓缩后待用。透析抗体时,需要在4℃用0.01 M PBS缓冲液(pH 7.4)透析,每6 h更换一次透析液,透析4次后即可SDS-PAGE电泳分析。
3) 单克隆抗体SDS-PAGE分析
取10 μL纯化后的抗体加入20 μL 5×loading buffer混匀;取1.5 μL未纯化的腹水加入20 μL 5×loading buffer混匀。然后把样品置于1.5 mL离心管中沸水浴10~15 min使抗体完全变性后各取10 μL点样后SDS-PAGE电泳。最后经考马斯亮蓝染色后再脱色观察。如图1所示,腹水中含有大量的免疫球蛋白和其他的杂蛋白,经过纯化后的单克隆抗体只有重链(约50 kDa)和轻链(约25 kDa)。
4) 间接ELISA分析抗体活性
抗原包被在酶标板上,乳铁蛋白的单克隆抗体与抗原特异性结合,之后商品化的山羊抗小鼠-HRP孵育后与一抗结合,最后酶标二抗在TMB显色液中显色。根据酶标二抗在显色液中催化底物的量而显出不同深浅的颜色。本实验中把腹水和纯化后的单克隆抗体分别用作一抗,即可测定抗乳铁蛋白腹水和单克隆抗体的效价。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内生长的同时会分泌大量的抗体,经过辛酸硫酸铵和Protein G亲和层析后就可以得到高纯度的抗体,之后采用直接ELISA的方法检测其效价,结果如图2所示,纯化后的单克隆抗体效价已经达到1:64000,可以用于ELISA免疫检测方法的建立和后续的实验。
实施例2 本发明纳米花免疫层析检测卡的制备与鉴定
1)纳米花金溶液的制备
纯化透析后的抗体溶液(0.01 M PBS)会含有大量的盐离子,这些盐离子浓度会影响胶体金溶液的稳定性甚至使胶体金变性。所以单克隆抗体需要在ddH2O透析24 h,每6 h更换一次透析液,透析后用PEG-20000浓缩备用。用100 mL ddH2O溶解1 g HAuCl4制备获得氯金酸溶液,每管1 mL分装于1.5 mL灭菌离心管中并用锡箔纸密封后于-20℃保存备用。取750μL的氯金酸溶液加入100 mL ddH2O中,加入500 μL的胶体金溶液混匀,再加入300 μL的柠檬酸三钠(1wt%)摇匀, 最后加入1 mL的对苯二酚溶液(30 mM),搅拌30 min即可得到纳米花金溶液。
2)纳米花标记LF单克隆抗体
用移液枪取10 mL纳米花金溶液于50 mL小烧杯中,加入300 μL 0.1 M K2CO3溶液,混匀后备用。按照纳米花标记最小蛋白量的20%为最适的抗体标记量(300 μLmAb),用移液枪慢慢滴加入锥形瓶中,于冰上继续搅拌30 min。 称量0.1 g BSA并缓慢加入到上述溶液中,于冰上继续搅拌30 min。称量0.1g PEG-20000并缓慢加入到上述溶液中,于冰上继续搅拌30 min待完全溶解后4℃静置过夜。
3)金标抗体的纯化
把过夜静置的纳米花金标抗体分装至1.5 mL灭菌离心管中,4℃ 1000 r/min离心10min,用移液枪轻轻吸取上清并转移至新的离心管中,弃沉淀。然后把新的离心管中的纳米花金标抗体,于4℃ 3000 r/min离心30 min,用移液器把上清全部吸出,收集中间层蓝紫色流动相。向含有蓝紫色流动相的离心管中加入原来纳米花金标抗体1/10体积的纳米花金标稀释液。(纳米花金标稀释液:10 mL PBS+0.1g BSA+0.05 g PEG-20000+0.2g 蔗糖+0.005gNaN3)然后置于4℃保存备用。
4)纳米花金标垫与样品垫的处理
把金标垫和样品垫裁剪成4 mm宽的长条状,放入500 mL玻璃烧杯中,加入封闭液(100mL PBS+1 g BSA+1 mL Tween-20)使纳米花金标垫和样品垫淹没,置于37℃恒温培养箱30min,然后取出于37℃干燥保存。
5)纳米花金标抗体活性测定
制备好的纳米花金标抗体需要测试是否标记成功才能进行后续的实验,把LF抗原包被在测试线(T line),山羊抗小鼠抗体包被在控制线(C line),加入5 μL的纳米花金标抗体后组装成免疫试纸条。用移液枪加入100 μL 0.01 M PBS,反应时间10 min,通过金标检测卡的显色情况判断金标抗体是否能进行检测使用。纳米花免疫检测卡的组装结构示意图如图3所示。
实施例3 本发明纳米花免疫层析检测卡的检测应用
1)纳米花免疫层析检测卡特异性测定
依据的最优的乳铁蛋白浓度和山羊抗小鼠IgG浓度在划线喷金系统上把抗原和二抗划线于NC膜上。然后把划线的NC膜放置于37℃恒温培养箱干燥10 min,同时每个金标垫加入5.2.13最佳纳米花金标抗体使用量的纳米花金标抗体于37℃恒温培养箱干燥10 min。用0.01 M PBS把10种不同的完全抗原(BSA,OVA,KLH,Casein,HSA,IFN-γ,TLH,PBSM,GFP,LF)稀释至终浓度为20 μg/mL。然后向组装好的纳米花金标检测卡样品垫中依次加入100 μL稀释好的不同抗原,反应时间10 min,观察T线的消失情况。结果如图4所示:只有加入乳铁蛋白抗原的溶液中纳米花免疫检测卡的T线完全消失,检测结果为阳性。而加入其它9种蛋白抗原的检测卡中都显示出C线和T线,检测结果为阴性。这表明:纳米花免疫层析检测卡只与乳铁蛋白抗原反应,不和其它无关的抗原包括牛奶中含有的乳蛋白和牛血清白蛋白反应,证明该纳米花免疫层析检测卡方法特异性强,无交叉反应。
2)免疫胶体金层析灵敏度测定
依据最优的乳铁蛋白浓度和山羊抗小鼠IgG浓度在划线喷金系统上把抗原和二抗划线于NC膜上。然后把划线的NC膜放置于37℃恒温培养箱干燥10 min,同时每个金标垫加入最佳纳米花金标抗体使用量的纳米花金标抗体于37℃恒温培养箱干燥10 min。用0.01 M PBS把乳铁蛋白标品稀释至终浓度为50 μg/mL,20 μg/mL,10 μg/mL,5 μg/mL,1.25 μg/mL,0.625 μg/mL,0.3125 μg/mL,0.156 μg/mL,0.039 μg/mL,0.019 μg/mL,0.0097 μg/mL,0.0048 μg/mL,0.0024 μg/mL,和0 μg/mL。然后向组装好的纳米花金标检测卡样品垫中依次加入100 μL稀释好的乳铁蛋白标准品,反应时间10 min,观察T线的消失情况。实验结果如下图5所示:随着待测样品中乳铁蛋白浓度的提高,T线逐渐的消失,直至抗原浓度达到5μg/mL时,测试区的蓝紫色条带完全消失。相反随着乳铁蛋白抗原浓度的降低,抗原的竞争越来越弱,T线的颜色越来越深,当乳铁蛋白的浓度为0.0024 μg/mL时免疫胶体金层析中C线和T线的显色情况与没有加乳铁蛋白的显色情况完全一样,此时已经达到了胶体金检测卡的下限。当检测样品中乳铁蛋白的浓度由0.0024 μg/mL增加至0.048 μg/mL时,T线明显颜色开始变浅,C线颜色明显加深,这是由于纳米花金标抗体与溶液中游离的乳铁蛋白结合的量开始变多从而导致与T线上包被的抗原结合量变少。综上所述,本研究制备的纳米花免疫免疫层析检测卡的最低检测限为2.4 ng/mL。
3)纳米花免疫胶体金层析实际样品检测
依据最优的乳铁蛋白浓度和山羊抗小鼠IgG浓度在划线喷金系统上把抗原和二抗划线于NC膜上。然后把划线的NC膜放置于37℃恒温培养箱干燥10 min,同时每个金标垫加入最佳纳米花金标抗体使用量的纳米花金标抗体于37℃恒温培养箱干燥10 min。从学校超市随机购买6种不同品牌的牛奶,然后向组装好的纳米花金标检测卡样品垫中依次加入100 μL牛奶样品,反应时间10 min,观察T线的消失情况。结果如下图6所示:3号牛奶中纳米花免疫层析检测卡的T线完全消失,检测结果为阳性。而加入其它5种牛奶样品的检测卡中都显示出C线和T线,检测结果为阴性。这说明只有3号牛奶中含有乳铁蛋白,其余5种牛奶中均不含乳铁蛋白。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰,皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (6)
1.一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,其特征在于:检测卡包括样品垫、纳米花金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料卡壳;所述的NC膜上设置有C线和T线,所述的C线上喷有羊抗鼠的IgG抗体,所述的T线上包被有牛乳铁蛋白抗原;所述的金标垫上含有纳米花标记的抗LF单克隆IgG抗体;所述抗LF单克隆IgG抗体是由保藏编号为CGMCCNO. 17087的杂交瘤细胞株3E2分泌获得。
2.根据权利要求1所述的牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,其特征在于,所述金标垫中所含有纳米花标记的抗LF单克隆IgG抗体,是由纳米花金标记的抗LF单克隆IgG抗体溶液以100 mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在金标垫上干燥后得到的;所述抗体溶液的浓度为0.04 mg/mL。
3.根据权利要求2所述的牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,其特征在于,所述纳米花金的制备方法为:用100 mL ddH2O溶解1 g HAuCl4制备获得氯金酸溶液,每管1 mL分装于1.5 mL灭菌离心管中并用锡箔纸密封后于-20℃保存备用;取750 μL的氯金酸溶液加入100 mL ddH2O中,加入500 μL的胶体金溶液混匀,再加入300 μL 1wt%的柠檬酸三钠摇匀, 最后加入1 mL 30 mM的对苯二酚溶液,搅拌30 min即可得到纳米花金溶液。
4.根据权利要求2所述的牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,其特征在于,所述纳米花金的粒径大小为79 nm。
5.根据权利要求1所述的牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,其中,所述T线上包被的牛乳铁蛋白抗原,是由1 mg/mL的牛乳铁蛋白标准品溶液以100 mm/s和1.25μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在T线上干燥后得到的。
6.根据权利要求1所述的牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡,其中,所述C线上包被的羊抗鼠IgG的抗体是由1 mg/mL的羊抗鼠IgG的抗体溶液以100 mm/s和1.25μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C线上干燥后得到的。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910429625.2A CN110068688B (zh) | 2019-05-22 | 2019-05-22 | 一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910429625.2A CN110068688B (zh) | 2019-05-22 | 2019-05-22 | 一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110068688A true CN110068688A (zh) | 2019-07-30 |
CN110068688B CN110068688B (zh) | 2020-08-14 |
Family
ID=67371302
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910429625.2A Expired - Fee Related CN110068688B (zh) | 2019-05-22 | 2019-05-22 | 一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110068688B (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112285354A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-01-29 | 福建农林大学 | 一种基于单克隆抗体检测细交链格孢菌酮酸的金纳米花快速检测试纸 |
CN112305223A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-02-02 | 福建农林大学 | 一种检测细交链孢菌酮酸的核壳型金铂合金纳米免疫层析试纸 |
CN112345753A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-02-09 | 江西维邦生物科技有限公司 | 一种以聚多巴胺包菊花金纳米粒子为信标载体制备的免疫层析试纸条 |
CN112881679A (zh) * | 2021-01-19 | 2021-06-01 | 南昌大学 | 一种同时检测两种水溶性真菌毒素试纸条制备方法 |
CN113607944A (zh) * | 2021-08-26 | 2021-11-05 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 胶体金层析试剂条、制备方法以及新冠抗原检测试剂盒 |
CN113848318A (zh) * | 2021-09-26 | 2021-12-28 | 福建农林大学 | 青环海蛇毒素竞争法胶体金/纳米花免疫层析检测卡 |
CN113985022A (zh) * | 2021-10-26 | 2022-01-28 | 福建农林大学 | 一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001036975A1 (en) * | 1999-11-19 | 2001-05-25 | Binax, Inc. | Method for detecting enteric disease |
US20030040106A1 (en) * | 2000-10-27 | 2003-02-27 | Koichi Hashimoto | Reagent and method for detecting substance |
WO2012052586A1 (es) * | 2010-10-19 | 2012-04-26 | Certest Biotec,S.L. | Método y dispositivo para el diagnóstico rápido de enfermedades en muestras fecales |
CN102879561A (zh) * | 2011-07-13 | 2013-01-16 | 华中农业大学 | 一种牛奶中人乳铁蛋白筛查试纸条及制备方法 |
CN103336132A (zh) * | 2013-07-08 | 2013-10-02 | 无锡安迪生物工程有限公司 | 一种检测泪液中乳铁蛋白的方法及其专用胶体金检测卡 |
CN105021830A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-11-04 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白双抗夹心胶体金检测试纸条 |
CN106141199A (zh) * | 2015-03-24 | 2016-11-23 | 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 | 多级纳米金花、其制备方法及应用 |
CN109725149A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-05-07 | 安徽科技学院 | 一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器 |
CN109738636A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-05-10 | 安徽科技学院 | 一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法 |
-
2019
- 2019-05-22 CN CN201910429625.2A patent/CN110068688B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001036975A1 (en) * | 1999-11-19 | 2001-05-25 | Binax, Inc. | Method for detecting enteric disease |
US20030040106A1 (en) * | 2000-10-27 | 2003-02-27 | Koichi Hashimoto | Reagent and method for detecting substance |
WO2012052586A1 (es) * | 2010-10-19 | 2012-04-26 | Certest Biotec,S.L. | Método y dispositivo para el diagnóstico rápido de enfermedades en muestras fecales |
CN102879561A (zh) * | 2011-07-13 | 2013-01-16 | 华中农业大学 | 一种牛奶中人乳铁蛋白筛查试纸条及制备方法 |
CN103336132A (zh) * | 2013-07-08 | 2013-10-02 | 无锡安迪生物工程有限公司 | 一种检测泪液中乳铁蛋白的方法及其专用胶体金检测卡 |
CN106141199A (zh) * | 2015-03-24 | 2016-11-23 | 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 | 多级纳米金花、其制备方法及应用 |
CN105021830A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-11-04 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白双抗夹心胶体金检测试纸条 |
CN109725149A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-05-07 | 安徽科技学院 | 一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器 |
CN109738636A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-05-10 | 安徽科技学院 | 一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
吴雨豪 等: "多枝状胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中沙丁胺醇", 《生物加工过程》 * |
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112345753A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-02-09 | 江西维邦生物科技有限公司 | 一种以聚多巴胺包菊花金纳米粒子为信标载体制备的免疫层析试纸条 |
CN112285354A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-01-29 | 福建农林大学 | 一种基于单克隆抗体检测细交链格孢菌酮酸的金纳米花快速检测试纸 |
CN112305223A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-02-02 | 福建农林大学 | 一种检测细交链孢菌酮酸的核壳型金铂合金纳米免疫层析试纸 |
CN112285354B (zh) * | 2020-11-13 | 2022-08-05 | 福建农林大学 | 一种基于单克隆抗体检测细交链格孢菌酮酸的金纳米花快速检测试纸 |
CN112305223B (zh) * | 2020-11-13 | 2022-08-05 | 福建农林大学 | 一种检测细交链孢菌酮酸的核壳型金铂合金纳米免疫层析试纸 |
CN112881679A (zh) * | 2021-01-19 | 2021-06-01 | 南昌大学 | 一种同时检测两种水溶性真菌毒素试纸条制备方法 |
CN113607944A (zh) * | 2021-08-26 | 2021-11-05 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 胶体金层析试剂条、制备方法以及新冠抗原检测试剂盒 |
CN113607944B (zh) * | 2021-08-26 | 2022-07-08 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 胶体金层析试剂条、制备方法以及新冠抗原检测试剂盒 |
CN113848318A (zh) * | 2021-09-26 | 2021-12-28 | 福建农林大学 | 青环海蛇毒素竞争法胶体金/纳米花免疫层析检测卡 |
CN113848318B (zh) * | 2021-09-26 | 2024-03-12 | 福建农林大学 | 青环海蛇毒素竞争法胶体金/纳米花免疫层析检测卡 |
CN113985022A (zh) * | 2021-10-26 | 2022-01-28 | 福建农林大学 | 一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡 |
CN113985022B (zh) * | 2021-10-26 | 2024-03-12 | 福建农林大学 | 一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110068688B (zh) | 2020-08-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110068688A (zh) | 一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡 | |
CN101226194B (zh) | 无色孔雀石绿残留的酶联免疫检测试剂盒及其使用方法 | |
CN109891236A (zh) | 回收胞外囊泡的方法 | |
CN101241132B (zh) | 硝基呋喃类药物代谢物残留的酶联免疫检测试剂盒及使用方法 | |
CN108918851B (zh) | 一种拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法 | |
CN111273042A (zh) | 抗缪勒氏管激素检测试剂盒 | |
CN104099300A (zh) | 可分泌抗牛免疫球蛋白IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 | |
CN105238759B (zh) | 抗驼乳重链IgG3单克隆抗体、含有所述单克隆抗体的试纸及其应用 | |
CN103698504B (zh) | 邻苯二甲酸酯类总量elisa酶联免疫检测试剂盒及其使用方法 | |
CN100465645C (zh) | 一种微囊藻毒素酶联免疫检测试剂盒 | |
WO2023098215A1 (zh) | 妊娠相关糖蛋白的单克隆抗体及其在牛早期怀孕检测中的应用 | |
CN101241133A (zh) | 检测沙丁胺醇残留的酶联免疫试剂盒及其使用方法 | |
CN110927382A (zh) | 一种检测喹乙醇的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其应用 | |
CN203178273U (zh) | 赛庚啶elisa检测试剂盒 | |
CN103105490A (zh) | 一种检测四环素类药物的试剂盒及方法 | |
CN113030463B (zh) | 一种检测疫苗中蛋白a等杂质的试纸条及其应用 | |
CN103424550B (zh) | 一种检测氯霉素的试剂盒及方法 | |
CN103102300B (zh) | 四环素半抗原及其制备方法和应用 | |
CN109971727B (zh) | 一种分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 | |
CN105085676A (zh) | 兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体及其制备方法和应用 | |
CN110658342B (zh) | 水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法 | |
JP6481192B2 (ja) | クドア・セプテンプンクタータの迅速検出法 | |
CN112142756A (zh) | 黄曲霉毒素m1半抗原与全抗原制备及其快速转移定量试剂盒制备与应用 | |
CN208506058U (zh) | 一种用于检测玉米赤霉醇的食品检测试剂盒 | |
CN106771216B (zh) | 提高免疫试剂检测特异性的方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200814 |