CN1100553C - 一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，主要是将干燥的柑桔类种子粉碎，经过反复的有机溶剂提取、过滤、分离操作，分别获得种籽油、柠檬苦素类化合物、柠檬苦素配糖体及由滤渣配制成的颗粒肥料。本发明具有工艺规范，流程合理，产品系列化且易于控制和操作，能够充分提取柑桔类种子中的各种有效药物活性物质并将其分离、提纯，其综合利用率、产品制得率及产品纯度均较高等特点，便于普及推广应用和工业化大批量生产。

Description

一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺

本发明涉及一种从植物种子中分别提取多种有效成份的方法，尤其是一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺。

众所周知，包括柑桔、橙子、柚子、柠檬在内的云香科柑桔类果实之种子是一类常用的中药材，其主要原因在于它们含有多种药物活性物质，如以亚油酸、亚麻酸为主的活性脂肪酸；以柠檬苦素类化合物为主的抗癌活性物质和以柠檬苦素配糖体为主的功能性活性物质。前者是一种降血脂、抗衰老的药物活性物质，后者则是一类具有解毒作用和抗癌变的药物活性物质。然而，至今尚未见有关从柑桔类种子中有效提取上述药物活性物质的工业生产方法报道。中国专利CN1056804A公开了一种“含柑桔种子提取物的低温或冷冻加工食品含柑桔种子提取物的组合物及其用途”，其主要技术特征是采用水提、醇提或水提与醇提相结合的传统工艺方法将柑桔类果实、种子中的水溶性活性物质提取出来，配合其他的化学添加剂或抗菌性提取物，组合成一种用于低温或冷冻加工食品中的杀菌、保鲜剂。该工艺方法的含柑桔种子提取物的组合物是一种组份杂乱、由大量水提、醇提物及其他化学添加剂和抗菌性提取物混杂在一起而组成的液态混合物，而起杀菌、保鲜作用的仅仅是其中少数几种活性化合物或是其他抗菌性提取物，剩余的大部分化合物则既不能被分离、提纯，又不能起到有益的或辅助的作用；有的化合物还不太稳定、易于发生物理或化学变化，进而影响有效成份的杀菌、保鲜效果。此外，该工艺方法缺乏规范化的工艺和操作要求，其种子提取物的成分确定性、稳定性及有效性均较难以保证。

本发明的目的就在于克服上述现有技术中的不足之处，提出一种工艺规范，流程合理，产品系列化且易于控制和操作，能够充分提取柑桔类种子中的各种有效药物活性物质并将其分离、提纯，其综合利用率、产品制得率及产品纯度均较高的从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺。

本发明的目的可以通过实施下列技术方案来达到：将经过洗涤、干燥的柑桔类种子粉碎至40-80目，置于索氏提取器中并使用醚类有机溶剂于30-60℃的温度下进行20-40小时的提取操作，经过滤器分离出滤渣和滤液；上述滤液经过加热、减压浓缩将醚类有机溶剂回收后，便得到含有多种活性脂肪酸的种子油；选择性先用酮类或氯代烷烃类有机溶剂或选择性先用醇类有机溶剂分别于30-60℃的温度下，对所得滤渣进行上述两类溶剂先后互补且各为5--10小时的两次提取操作，并先后用过滤器分离出滤渣和滤液；先后获得的两种滤液分别经过加热、减压浓缩将酮类或氯代烷烃类有机溶剂或者醇类有机溶剂回收后，分别得到含有多种柠檬苦素类化合物的浓缩液和含有多种柠檬苦素配糖体化合物的浓缩液；再分别通过加入氯代烷烃溶解、加入异丙醇进行结晶、分离得到含有多种柠檬苦素类化合物的粗结晶体或者经过加入有机溶剂溶解、通过硅胶色谱柱进行结晶、分离得到各种柠檬苦素配糖体化合物结晶体；最后，经过先后两次提取操作所剩余的滤渣通过造粒后成为颗粒肥料。为了获得更佳的使用效果，本发明还可以进一步采取下列措施：在索氏提取器中用来提取被粉碎柑桔类种子的最佳有机溶剂是石油醚；在提取操作中所使用的最佳酮类有机溶剂是丙酮；在提取操作中所使用的最佳氯代烷烃类有机溶剂是二氯甲烷；在提取操作中所使用的最佳醇类有机溶剂是乙醇；在得到的含有多种柠檬苦素类化合物粗结晶体中，再加入醇类有机溶剂溶解，经过硅胶色谱柱进行分离、结晶，分别获得各种柠檬苦素类化合物结晶。

附图为本发明的生产工艺流程方框示意图。

以下结合实施例及附图对本发明作进一步详细地描述。

实施例1：取经洗涤、干燥的柚子种籽100克粉碎至40目后，置于索氏提取器中用800毫升石油醚在45℃温度下浸泡提取24小时，经过滤器分离滤渣后，将滤液用旋转蒸馏器进行减压浓缩，回收石油醚并获得柚籽油约45克。经测试柚籽油主要成分的重量百分比如下：

十四碳酸      0.08    油  酸    22.4

十五碳酸      0.05    亚油酸    40.6

十五碳烯酸    0.01    亚麻酸    6.34

棕榈酸        27.0    芥子酸    0.11

十七碳酸      0.11    其  它    0.11

硬脂酸        3.14

分离后的滤渣中加入300毫升丙酮，在40℃温度下回流6小时，经过负压抽滤分离滤渣后，收集滤液并用旋转蒸馏器进行减压浓缩，得胶状浓缩物。加入为其等量的二氯甲烷溶解该浓缩物，再经过滤除杂质后，加入双倍量的异丙醇充分混匀，静置12小时，得粗结晶体约0.65克。将粗结晶体重复结晶两次，获得纯柠檬苦素结晶约0.41克；收集结晶时的滤液，经硅胶色谱柱分离，以三氯甲烷∶甲醇＝9∶1为洗脱剂，分段收集洗脱液并分别减压浓缩后，分别获得诺米林结晶约146毫克和奥吧叩酮结晶31毫克。

上述经过负压抽滤分离后的滤渣中加入300毫升甲醇，在50℃温度下回流6小时，经过负压抽滤分离滤渣后，收集滤液并用旋转蒸馏器进行减压浓缩至40-50毫升，再经硅胶色谱柱分离，以三氯甲烷∶甲醇＝9∶1为洗脱剂，分段收集洗脱液并分别减压浓缩后，可得到柠檬苦素配糖体结晶62毫克，诺米林配糖体45毫克和奥吧叩酮配糖体13毫克。最终的滤渣可以通过调配适当的氮、磷、钾比例和造粒工序制成颗粒肥料。

实施例2：取经洗涤、干燥的柑桔种籽100克粉碎至60目后，于索氏提取器中用700毫升石油醚在50℃温度下浸泡提取20小时，经过滤器分离滤渣后，将滤液用旋转蒸馏器进行减压浓缩，回收石油醚并获得桔籽油约44克。经测试桔籽油主要成分的重量百分比如下：

十二碳酸    0.04    油  酸    28.1

十四碳酸    0.01    亚油酸    36.8

棕榈酸      25.7    亚麻酸    6.62

十七碳酸    0.17    芥子酸    0.01

硬脂酸      2.56    其  它    0.03

分离后的滤渣中加入300毫升甲醇，在50℃温度下回流6小时，经过负压抽滤分离滤渣后，收集滤液并用旋转蒸馏器进行减压浓缩至40-50毫升，再经硅胶色谱柱分离，以三氯甲烷∶甲醇＝9∶1为洗脱剂，分段收集洗脱液并分别减压浓缩后，可以得到柠檬苦素配糖体结晶68毫克，诺米林配糖体54毫克和奥吧叩酮配糖体23毫克。

上述经过负压抽滤分离后的滤渣中加入300毫升丙酮，在40℃温度下回流6小时，经过负压抽滤分离滤渣后，收集滤液并用旋转蒸馏器进行减压浓缩，得胶状浓缩物。加入为其等量的二氯甲烷溶解该浓缩物，再经过滤除杂质后，加入双倍量的异丙醇充分混匀，静置12小时，得粗结晶体约0.62克。将粗结晶体重复结晶两次，获得纯柠檬苦素结晶约0.394克；收集结晶时的滤液，经硅胶色谱柱分离，以三氯甲烷∶甲醇＝9∶1为洗脱剂，分段收集洗脱液并分别减压浓缩后，可获得诺米林结晶约134毫克和奥吧叩酮结晶27毫克。最终的滤渣可以通过调配适当的氮、磷、钾比例和造粒工序制成颗粒肥料。

实施例3：取经洗涤、干燥的橙子种籽100克粉碎至50目后，于索氏提取器中用900毫升石油醚在40℃温度下浸泡提取30小时，经过滤器分离滤渣后，将滤液用旋转蒸馏器进行减压浓缩，回收石油醚并获得橙籽油约44克。经测试桔籽油主要成分的重量百分比如下：

十二碳酸    0.03    油  酸    26.2

十四碳酸    0.02    亚油酸    37.8

十五碳酸    0.04    亚麻酸    6.45

十七碳酸    0.15    芥子酸    0.05

棕榈酸      26.3    其  它    0.06

硬脂酸      2.83

分离后的滤渣按实施例1用丙酮提取柠檬苦素类化合物粗晶体约0.65克。按实施例1进一步精制得到纯柠檬苦素结晶约0.408克，诺米林结晶约144毫克和奥吧叩酮结晶33毫克。将上述丙酮提取后过滤分离的滤渣用300毫升乙醇在50℃温度下回流提取2次，每次2小时，待加热回收乙醇后，置于冰箱中在6℃温度下存放12小时，然后过滤除去沉淀析出的黄酮类化合物，将滤液通过树脂色谱柱进行分离处理，最后得到柠檬苦素配糖体65毫克，诺米林配糖体42毫克，奥吧叩酮配糖体14毫克。最终的滤渣可以通过调配适当的氮、磷、钾比例和造粒工序制成颗粒肥料。

实施例4：取经洗涤、干燥的柑桔种籽100克粉碎至60目后，置于索氏提取器中用900毫升乙醚在40℃温度下浸泡提取28小时，经过滤器分离滤渣后，将滤液用旋转蒸馏器进行减压浓缩，回收乙醚并获得种籽油约46克。分离后的滤渣中加入500毫升二氯甲烷，在45℃温度下回流6小时，经过负压抽滤分离滤渣后，收集滤液并用旋转蒸馏器进行减压浓缩，加入双倍量的异丙醇充分混匀，静置12小时，得柠檬苦素类化合物粗结晶体约0.63克。按实施例1进一步精制得到纯柠檬苦素结晶约0.402克，诺米林结晶约137毫克和奥吧叩酮结晶29毫克。再按实施例3用400毫升乙醇对滤渣进行后处理，最后得到柠檬苦素配糖体60毫克，诺米林配糖体46毫克，奥吧叩酮配糖体15毫克。最终的滤渣可以通过调配适当的氮、磷、钾比例和造粒工序制成颗粒肥料。

实施例5：取经洗涤、干燥的柑桔种籽100克粉碎至70目后，置于索氏提取器中用800毫升乙醚在40℃温度下浸泡提取30小时，经过滤器分离滤渣后，将滤液用旋转蒸馏器进行减压浓缩，回收乙醚并获得种籽油约47克。分离后的滤渣中加入600毫升三氯甲烷，在45℃温度下回流6小时，通过负压抽滤分离滤渣，收集滤液并用旋转蒸馏器进行减压浓缩，经溶解、静置后得柠檬苦素类化合物粗结晶体约0.66克。进一步精制得到纯柠檬苦素结晶约0.411克，诺米林结晶约139毫克和奥吧叩酮结晶33毫克。再按实施例1用400毫升甲醇对滤渣进行后处理，最后得到柠檬苦素配糖体60毫克，诺米林配糖体44毫克，奥吧叩酮配糖体12毫克。最终的滤渣可以通过调配适当的氮、磷、钾比例和造粒工序制成颗粒肥料。

以上制得的各种籽油经精练后可以直接食用或添加到缺少亚麻酸等活性脂肪酸的食用油中；柠檬苦素、诺米林和奥吧叩酮可用作抗癌药物；柠檬苦素配糖体、诺米林配糖体和奥吧叩酮配糖体可用于食品饮料和日用化工品中；由滤渣配制成的颗粒肥料则可以直接施用于农作物或园艺植物。

本发明与现有技术相比较，具有工艺规范，流程合理，产品系列化且易于控制和操作，能够充分提取柑桔类种子中的各种有效药物活性物质并将其分离、提纯，其综合利用率、产品制得率及产品纯度均较高等特点，便于普及推广应用和工业化大批量生产。

Claims (6)

1.一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，其工艺步骤为：

a.将经过洗涤、干燥的柑桔类种子粉碎至40-80目，置于索氏提取器中并使用醚类有机溶剂于30-60℃的温度下进行20-40小时的提取操作，经过滤器分离出滤渣和滤液；

b.上述滤液经过加热、减压浓缩将有机溶剂回收后便得到含有多种活性脂肪酸的种子油；

c.选择性先用酮类或氯代烷烃类有机溶剂或选择性先用醇类有机溶剂分别于30-60℃的温度下，对步骤a所得滤渣进行上述两类溶剂先后互补且各为5--10小时的两次提取操作，并先后用过滤器分离出滤渣和滤液；

d.先后获得的两种滤液分别经过加热、减压浓缩将酮类或氯代烷烃类有机溶剂或者醇类有机溶剂回收后，分别得到含有多种柠檬苦素类化合物的浓缩液和含有多种柠檬苦素配糖体化合物的浓缩液；

e.上述浓缩液再分别通过加入氯代烷烃溶解、加入异丙醇进行结晶、分离得到含有多种柠檬苦素类化合物的粗结晶体或者经过加入有机溶剂溶解、通过硅胶色谱柱进行分离、结晶得到各种柠檬苦素配糖体化合物结晶体；

f.经过步骤c先后两次提取操作所剩余的滤渣通过造粒后成为颗粒肥料。

2.根据权利要求1所述的一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，其特征在于上述步骤a中用来提取被粉碎柑桔类种子的醚类有机溶剂是石油醚。

3.根据权利要求1或2所述的一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，其特征在于上述步骤c中处理滤渣所使用的酮类有机溶剂是丙酮。

4.根据权利要求1或2所述的一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，其特征在于上述步骤c中处理滤渣所使用的氯代烷烃类有机溶剂是二氯甲烷。

5.根据权利要求1或2所述的一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，其特征在于上述步骤c中处理滤渣所使用的醇类有机溶剂是乙醇。

6.根据权利要求1或2所述的一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺，其特征在于上述步骤e所得到的含多种柠檬苦素类化合物粗结晶体中，再加入醇类有机溶剂溶解，经过硅胶色谱柱进行分离、结晶，分别获得各种柠檬苦素类化合物结晶。