CN110054645A

CN110054645A - 二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN110054645A
Application number: CN201910442088.5A
Authority: CN
Inventors: 刘见永; 苏丹; 李小强; 杨德潮; 操晶晶; 许敢; 张明山
Original assignee: Fuzhou University
Current assignee: Fuzhou University
Priority date: 2019-05-24
Filing date: 2019-05-24
Publication date: 2019-07-26
Anticipated expiration: 2039-05-24
Also published as: CN110054645B

Abstract

本发明公开了二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂及其制备。本发明首先制备含有三氟甲基的氟硼二吡咯母体，然后利用亲电取代反应在母体的2,6位引入两个重原子碘，以增加系间窜越的机率和单线态氧的量子产率，再经缩合反应扩大其共轭体系，使其吸收移动至红光区域以便于光动力治疗，最后通过经典的“点击反应”修饰上与S‑S键共价连接的二茂铁基团，进而得到谷胱甘肽可激活式的抗癌光敏剂。该氟硼二吡咯光敏剂衍生物合成方法简便，原料容易获得，成本较低，副反应少，产率较高，易提纯，有利于工业化生产。

Description

二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于有机合成、抗癌药物设计领域，具体涉及二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂及其制备。

背景技术

研发新型抗肿瘤药物一直以来都是国内外医药科学家的工作重点，同时也是医药化学研究者的研究热点之一。光动力治疗因具有毒性较低和选择性高等优点而备受广大科研工作者的青睐。然而，由于光敏剂普遍存在的靶向性能力较差的问题，光动力治疗在临床医学上的应用受到极大限制。目前越来越多的科研人员都在致力于研究功能型的光敏剂。

功能型的光敏剂主要可分为两大类。一类是将光敏剂缀合上一些具有特异性靶向肿瘤细胞的小分子，如肽链或者DNA序列等；另外一类则是可激活式光敏剂(Activablephotosensitizers，aPS)。可激活式光敏剂在分子结构的设计上巧妙的运用了光诱导电子转移效应(photo-induced electron transfer，PET)、荧光共振能量转移(Fluorescenceresonance energy transfer，FRET)效应和自淬灭(self-quenching)效应。本发明采用分子内的PET效应设计合成了谷胱甘肽可激活式的氟硼二吡咯光敏剂。该分子只有在肿瘤细胞中谷胱甘肽的触发下才能够被激活，光照后产生光敏化活性；而在正常细胞中光照后产生十分微弱的光动力活性。

发明内容

本发明的目的在于提供二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物及其制备。本发明首先制备含有三氟甲基的氟硼二吡咯母体，利用亲电取代反应在母体的2,6位引入两个重原子碘，以增加系间窜越的机率和单线态氧的量子产率，再经缩合反应扩大其共轭体系，使其吸收移动至红光区域以便于光动力治疗，最后通过经典的“点击反应”修饰上与S-S键共价连接的二茂铁基团，进而得到谷胱甘肽可激活式的抗癌光敏剂。氟硼二吡咯光敏剂修饰上具有强吸电子的三氟甲基降低了光敏剂母体的电子云密度，致使氟硼二吡咯的吸电子能力增强，其可与通过点击反应修饰的富电子基团二茂铁发生光诱导电子转移(PET)。PET过程的发生将淬灭光敏剂的荧光和单线态氧，然而，该光敏剂可被肿瘤微环境中的谷胱甘肽激活，实现靶向光动力治疗。本发明合成的化合物结构单一，不存在异构体，产品易提纯；合成方法比较简单，副反应少，产率较高，原料易得，成本低，有利于工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂，其化学结构式为

一种制备二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的方法，具体步骤为：

(1)将化合物按摩尔比1:4加入到干燥的甲苯中，以碘代氟硼二吡咯的摩尔量计，再将哌啶与冰乙酸按当量40～60:60～80加入到反应混合液中，然后加入10mg催化量的高氯酸镁，装上分水器，升温至125℃回流2-4小时；反应结束后减压旋蒸除去甲苯，残留物用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到绿色化合物

(2)将化合物按摩尔比1:1-2加入到干燥的二氯甲烷中，再将4-二甲氨基吡啶和三乙胺按当量为0.01-0.02:0.1-0.2(以化合物D的摩尔量计)加入到反应混合液中，氮气保护下室温搅拌8-12小时；反应结束后减压旋蒸除去溶剂，残留物用饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后，减压旋干得中间粗产物；将粗产物与NaN₃按摩尔比1:3-4加入到丙酮中(含体积分数为0.5％的水)，在氮气保护下升温至65℃回流48小时；反应结束后减压旋蒸除去溶剂，残留物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到黄色油状化合物

(3)将步骤(1)和步骤(2)获得的化合物按摩尔比1:3加入至7mL二氯甲烷、乙醇和水(三者体积比为12:1:1)的混合液中，然后再将0.1-1当量(以化合物B的摩尔量计)的CuSO₄·5H₂O、0.3-3当量(以化合物B的摩尔量计)的抗坏血酸钠加入至混合液中，室温下剧烈搅拌8-30小时；反应液用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物

所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物，用于制备抗癌光敏剂，从而进行光动力治疗。

光动力治疗(Photodynamic Therapy，PDT)是一种具有选择性的，由光敏剂、光和氧分子三种要素参与反应的新型疗法。其中光敏剂是光动力治疗中的核心元素。理想的光敏剂应满足以下几点：组分单一，结构明确，高的光稳定性；特异靶向性强，能在到达靶组织后迅速达到最高浓度；体内代谢时间短，在光照时具有较强的光毒性，而在黑暗情况下无毒副作用；光敏化能力强，单线态氧量子产率高；最长激发波长位于近红外区，在光动力治疗窗口(650-800nm)有较强的吸收。氟硼二吡咯衍生物因具有优良的光物理、光化学性质(较高的摩尔消光系数和荧光量子产率，稳定性高，无光漂白特性等)而成为理想的光敏剂之一。本发明合成了一个在近红外区域具有较强吸收的可激活式氟硼二吡咯衍生物，母体利用重原子的修饰增加了其单线态氧量子产率和光敏化活性，通过三氟甲基的修饰在理论上可增强其药代动力学性质。

本发明首先制备含有三氟甲基的氟硼二吡咯母体，利用亲电取代反应在母体的2,6位引入两个重原子碘，以增加系间窜越的机率和单线态氧的量子产率，再经缩合反应扩大其共轭体系，使其吸收移动至红光区域以便于光动力治疗，最后通过经典的“点击反应”修饰上与S-S键共价连接的二茂铁基团，进而得到谷胱甘肽可激活式的抗癌光敏剂。氟硼二吡咯光敏剂修饰上具有强吸电子的三氟甲基降低了光敏剂母体的电子云密度，致使氟硼二吡咯的吸电子能力增强，其可与通过点击反应修饰的富电子基团二茂铁发生光诱导电子转移(PET)。这样整个分子之间就通过PET效应达到了淬灭光敏剂活性的目的，因而光照该化合物，无荧光和单线态氧产生。而在有谷胱甘肽存在的情况下，S-S键被破坏，氟硼二吡咯的荧光发射和单线态氧得到恢复。基于肿瘤细胞中谷胱甘肽的含量高于正常组织细胞，该氟硼二吡咯衍生物可用于荧光成像指导光动力治疗，且有可能实现癌症的选择性治疗。同时本发明以二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂为研究对象，分别以人宫颈癌细胞HeLa和人胚肺成纤维细胞HELF为受试细胞株，展开了其体外抗癌活性研究，筛选出适合于分子光动力治疗的前药，为二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物应用于光动力治疗癌症奠定了基础。

本发明的显著优点在于：

(1)经过二茂铁修饰的氟硼二吡咯衍生物由于分子内光诱导电子转移作用，在正常细胞中没有光敏化活性，无毒副作用，而在肿瘤细胞中，谷胱甘肽的含量相对较高，能够特异性的破坏S-S键，氟硼二吡咯的荧光发射和单线态氧产生得到恢复，因而，该化合物可选择性的杀伤癌细胞；

(2)该激活式氟硼二吡咯衍生物在正常细胞中发射非常弱的荧光，而在肿瘤细胞中发射强荧光，二者之间对比大，可用于恶性肿瘤的早期诊断；

(3)经过二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物的最大吸收和发射波长均处于红光区域，组织穿透能力强，光动力治疗时不易造成皮肤光毒性，是较为理想的光敏剂；

(4)三氟甲基的引入可能有利于改善氟硼二吡咯光敏剂的代谢稳定性；

(5)目标化合物结构单一，不存在异构体，产物容易纯化；

(6)合成方法简单，只需要几个步骤就可以完成，副反应少，原料易得，成本低，有利于工业化生产。

附图说明

图1实施例1制备的药物A(5μM)在HELF(左)和HeLa(右)细胞中的荧光成像；

图2实施例1制备的药物A(5μM)在HELF和HeLa细胞中的荧光强度的量化关系图。

具体实施方式

为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。

具有光动力抗癌活性的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物的具体制备过程包括：

(1)将化合物按摩尔比1:4加入到干燥的甲苯中，以碘代氟硼二吡咯的摩尔量计，再将哌啶与冰乙酸按当量40～60:60～80加入到反应混合液中，然后加入10mg催化量的高氯酸镁，装上分水器，升温至125℃回流2-4小时；反应结束后减压旋蒸除去甲苯，残留物用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到绿色化合物产率为27-45％；

(2)将化合物按摩尔比1:1-2加入到干燥的二氯甲烷中，再将4-二甲氨基吡啶和三乙胺按当量为0.01-0.02:0.1-0.2(以化合物D的摩尔量计)加入到反应混合液中，氮气保护下室温搅拌8-12小时；反应结束后减压旋蒸除去溶剂，残留物用饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后，减压旋干得中间粗产物；将粗产物与NaN₃按摩尔比1:3-4加入到丙酮中(含体积分数为0.5％的水)，在氮气保护下升温至65℃回流48小时；反应结束后减压旋蒸除去溶剂，残留物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到黄色油状化合物产率为70-87％；

(3)将化合物按摩尔比1:3加入至7mL二氯甲烷、乙醇和水(三者体积比为12:1:1)的混合液中，然后再将0.1-1当量(以化合物B的摩尔量计)的CuSO₄·5H₂O、0.3-3当量(以化合物B的摩尔量计)的抗坏血酸钠加入至混合液中，室温下剧烈搅拌8-30小时；反应液用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物产率为50-70％。

实施例1

(1)将化合物(0.151g，0.234mmol)和化合物(0.150g，0.937mmol)加入到100mL干燥的甲苯中，再将1.0mL冰乙酸、1.2mL哌啶以及催化量(10mg)的高氯酸镁加入到反应混合液中，装上分水器，升温至125℃回流2.5小时；反应结束后减压旋蒸除去甲苯，残留物用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；以二氯甲烷-甲醇(80:1，v:v)为洗脱剂，经硅胶柱色谱纯化后得到绿色化合物：(0.0921g，43％)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ＝8.16(d,J＝17.2Hz,2H,CH＝CH),7.83(d,J＝7.2Hz,2H,ArH),7.65-7.58(m,6H,ArH,CH＝CH),7.48(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.04(d,J＝8.8Hz,4H,ArH),4.76(d,4H,J＝2.4Hz,CH₂),2.56(t,J＝2.4Hz,1H,C≡CH),1.43(s,6H,CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd for C₄₀H₂₈BF₅I₂N₂NaO₂[M+Na]⁺，951.0146；found，951.0192。

(2)将化合物(2.42g，6.61mmol)和(1.53g，8.05mmol)用125mL干燥的二氯甲烷溶解于250mL圆底烧瓶中，再加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.082mmol)和三乙胺(82mg，0.81mmol)，室温下反应搅拌12小时；将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用二氯甲烷萃取三次，收集有机相并用无水硫酸钠干燥后，减压旋蒸得黄色油状粗产物(2.24g)；将粗产物(2.24g，4.31mmol)用35mL丙酮溶解于圆底烧瓶中，加入叠氮化钠(1.07g，16.46mmol)水溶液，在氮气保护下升温至65℃回流48h；减压旋干除去丙酮，残留物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷萃取三次，收集有机相并用无水硫酸钠干燥；以石油醚-乙酸乙酯(3:1，v/v)为洗脱剂，经硅胶柱色谱纯化后得到黄色油状液体化合物：(1.38g，82％)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ＝4.82(s,2H,Fc-H),4.50(t,J＝6.2Hz,2H,OCH₂),4.42(s,2H,Fc-H),4.22(s,5H,Fc-H),3.63(t,J＝5.2Hz,2H,SCH₂),3.04(t,J＝6.2Hz,2H,NCH₂),2.91(t,J＝5.2Hz,2H,SCH₂)；¹³C-NMR(100.6MHz,CDCl₃),δ(ppm):δ＝171.54,71.54,70.60,70.22,69.90,61.90,49.96,37.61,37.57。

(3)将化合物(53mg，0.057mmol)和(67mg，0.17mmol)，加入至7mL二氯甲烷、乙醇和水的混合液中，其中CH₂Cl₂-EtOH-H₂O的体积比为12:1:1，搅拌均匀后加入研磨后的抗坏血酸钠(30mg，0.15mmol)和五水硫酸铜(15mg，0.06mmol)，反应混合液避光搅拌24h；反应液用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物：(65mg，69％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ＝8.15(d,J＝16.4Hz,2H,CH＝CH),7.81(d,J＝8Hz,2H,ArH),7.73(s,2H,triazole-H),7.62-7.60(m,6H,ArH,CH＝CH),7.48(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.04(d,J＝8Hz,4H,ArH),5.27(s,4H,OCH₂),4.80(s,4H,Fc-H),4.71(t,J＝6.4Hz,4H,OCH₂),4.47(t,J＝6Hz,4H,SCH₂),4.40(s,4H,Fc-H),4.21(s,10H,Fc-H),3.21(t,J＝6.4Hz,4H,NCH₂),3.03(t,J＝6Hz,4H,SCH₂),1.41(s,6H,CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd for C₆₆H₅₈BF₅Fe₂I₂N₈NaO₆S₄[M+Na]⁺，1733.0369；found，1733.0485。

应用实例1

对二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物的离体光动力抗癌活性进行了研究，该实验能够为以后在体实验提供一定的参考价值，因此具有十分重要的意义。光敏剂的细胞毒性实验一般包括光毒性和暗毒性两部分，通常采用MTT法(四氮唑盐还原法)进行测定。检测原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒,甲瓒的水溶性较差会沉积在细胞中；而死细胞中缺少琥珀酸脱氢酶，因此不会产生甲瓒。用DMSO(二甲基亚砜)溶解活细胞中产生的甲瓒，并用酶标仪测定其在490nm波长处的吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数量范围内，甲瓒的形成量与活细胞的数目成正相关性。

MTT实验：取生长状态良好的人宫颈癌细胞HeLa和人胚肺成纤维细胞HELF，用胰蛋白酶(含体积分数为0.25％的EDTA)消化，用Dulbecco’smodified Eagle’s medium(DMEM)培养基(含体积分数为10％的胎牛血清)配制6×10⁴cells/mL细胞悬浮液，将每孔100μL悬浮液(约含6000个肿瘤细胞)接种于96孔培养板内，置于37℃、5％CO₂培养箱内培养过夜，贴壁后加药；实验设空白对照组(空白对照组是指对照组除了不加药物溶液外，其他条件与受试样品组一致)和溶剂对照组(溶剂对照组是指对照组不加细胞，其他条件与受试样品组一致)。将二茂铁修饰的可激活式氟硼二吡咯衍生物分别预先配制为DMSO(含体积分数为5％的吐温80)储备液，所有药液配制后均经有机膜过滤(0.22μm)，使用时药物溶液用培养基稀释为不同浓度，终浓度中DMSO所占的体积分数为1％，吐温所占的体积分数为0.05％。每个浓度设定6个平行复孔，每孔加入100μL不同浓度的药物后置于培养箱内孵育。光毒实验：24小时后，去除含药液的培养基，换上100μL新鲜培养基，然后用波长为670nm的LED灯对细胞进行照射，照射能量密度为2.4J·cm^-2。光照完毕后，将96孔板重置于37℃、5％CO₂的培养箱内，继续培养。暗毒实验则在换完新鲜培养基后直接放入培养箱中继续培养，操作过程应避免光照，24小时后，每孔加入10μL用PBS配置好的MTT溶液(5mg·mL^-1)，37℃孵育4小时，4小时后小心移弃上清液，每孔加入100μL DMSO溶液溶解甲瓒晶体，摇床震荡0.5小时使甲瓒完全溶解后，用酶标仪测定490nm波长下OD值。

本发明采用MTT法测定了实施例1制备的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物，在有无光照的条件下，对人宫颈癌细胞HeLa以及人胚肺成纤维细胞HELF的杀伤效果，光照波长为670nm，光照能量密度为2.4J·cm^-2。数据由三次独立的平行实验得到，以Mean±SD方式处理。由实验数据可知：在无光照的条件下，药物浓度达至5μM时，二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物对两种细胞均没有任何杀伤作用；在光照条件下，药物对正常组织细胞HELF表现出十分微弱地光动力活性；而对肿瘤细胞HeLa则表现出十分强烈的体外光毒性，其半数抑制浓度(IC₅₀值)为0.28μM(见表1)。该实验结果表明：这个由二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物对人宫颈癌细胞HeLa表现出一定的光动力抗癌活性，可选择性杀死癌细胞。

表1二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物对HeLa细胞的IC₅₀值

药物	IC<sub>50</sub>(μM)
		实施例1	0.28

应用实例2

对二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物的离体细胞光致成像进行了研究，该实验能够为以后指导光动力治疗提供一定的参考价值，因此具有十分重要的意义。检测原理是该二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物在肿瘤细胞中过度表达的谷胱甘肽的作用下，经过一定波长的光激发后，能够产生光敏化现象，可用激光共聚焦显微镜进行荧光成像拍照；而该二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物在正常组织细胞中则无明显现象。因此该二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物可用来检测肿瘤细胞所在位置，达到荧光成像指导光动力治疗的目的。

细胞内光致成像实验：取生长状态良好的人宫颈癌细胞HeLa和人胚肺成纤维细胞HELF，用胰蛋白酶(含体积分数为0.25％的EDTA)消化，用Dulbecco’s modified Eagle’smedium(DMEM)培养基(含体积分数为10％的胎牛血清)配制3×10⁴cells/mL细胞悬浮液，均匀平铺在激光共聚焦皿中，放入恒温培养箱中过夜培育。将激光共聚焦皿取出，用PBS缓冲液冲洗三次，各加入含有一定浓度的该二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物的细胞培养基，再放入恒温培养箱中共培育6h。将激光共聚焦皿取出，用PBS缓冲液冲洗6-7次，然后每个皿中加入1mL的细胞培养基，再用633nm波长的激光进行激发，并用激光共聚焦显微镜进行荧光拍照。

本发明采用激光共聚焦显微镜测定了实施例1制备的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物于人宫颈癌细胞HeLa以及人胚肺成纤维细胞HELF中产生的荧光强弱，激发波长为633nm(图1和图2)。由实验数据可知：药物A在正常细胞HELF中产生十分微弱的荧光，而在肿瘤细胞HeLa中能够产生强的荧光。

实施例1制备的化合物A在HeLa和HELF细胞内荧光成像图和荧光强度量化见图1和图2。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂，其特征在于：所述光敏剂为二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物，其化学结构式为：

2.一种制备如权利要求1所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的方法，其特征在于：以化合物为起始原料，合成二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物

3.根据权利要求2所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的制备方法，其特征在于：包括如下具体步骤：

将化合物按摩尔比1:3加入至7mL二氯甲烷、乙醇和水的混合液中，然后以化合物B的摩尔量计，再将0.1-1当量的CuSO₄·5H₂O、0.3-3当量的抗坏血酸钠加入至混合液中，室温下剧烈搅拌8-30小时；反应液用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯衍生物其中二氯甲烷、乙醇和水三者体积比为12:1:1。

4.根据权利要求2所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的制备方法，其特征在于：所述化合物的合成方法具体包括以下步骤：

以化合物为起始原料，合成化合物

5.根据权利要求4所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的制备方法，其特征在于：所述化合物的具体合成步骤包括：

将化合物按摩尔比1:4加入到干燥的甲苯中，以碘代氟硼二吡咯的摩尔量计，再将哌啶与冰乙酸按当量40～60:60～80加入到反应混合液中，然后加入10mg催化量的高氯酸镁，装上分水器，升温至125℃回流2-4小时；反应结束后减压旋蒸除去甲苯，残留物用二氯甲烷和水萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到绿色化合物

6.根据权利要求2所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的制备方法，其特征在于：所述化合物的合成方法具体包括以下步骤：

以化合物NaN₃为起始原料，合成化合物

7.根据权利要求6所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的制备方法，其特征在于：所述化合物的具体合成步骤包括：

将化合物按摩尔比1:1-2加入到干燥的二氯甲烷中，再将4-二甲氨基吡啶和三乙胺加入到反应混合液中，氮气保护下室温搅拌8-12小时；反应结束后减压旋蒸除去溶剂，残留物用饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后，减压旋干得中间粗产物；将粗产物与NaN₃按摩尔比1:3-4加入到水含量体积分数为0.5％的丙酮中，在氮气保护下升温至65℃回流48小时；反应结束后减压旋蒸除去溶剂，残留物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷萃取；有机相用无水硫酸钠干燥后减压旋干；然后以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化后得到黄色油状化合物

8.根据权利要求7所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂的制备方法，其特征在于：其中以化合物D的摩尔量计，4-二甲氨基吡啶和三乙胺按当量为0.01-0.02:0.1-0.2加入到反应混合液中。

9.一种如权利要求1所述的二茂铁修饰的谷胱甘肽可激活式氟硼二吡咯光敏剂在制备抗癌光敏剂中的应用。