CN108358972B - 邻菲罗啉钌配合物类光敏染料及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一类邻菲罗啉钌配合物类光敏染料及其制备方法和用途，所述光敏染料具有通式I的结构。本发明所述的邻菲罗啉钌配合物类化合物可靶向雌激素受体，可区分雌激素受体过表达与低表达的细胞。在雌激素受体过表达与低表达细胞共同培养的条件下，所述钌配合物可以选择性进入雌激素受体过表达的细胞，进而引起光动力细胞杀伤效果的差异。同时所述钌配合物光敏剂还可以被双光子激发，达到更深的肿瘤治疗深度。

Description

邻菲罗啉钌配合物类光敏染料及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及精细化工领域一类光敏剂及其制法和用途，尤其涉及一类钌配合物光敏剂、其制备方法及用途。

背景技术

光动力学疗法(Photodynamic Therapy,PDT)是将光化学、光物理学及光生物学的原理应用于诊断和治疗疾病的一种方法，是继手术、化疗、放疗之后的第四种疗法，在治疗癌症等恶性疾病以及多种良性疾病方面表现出巨大的应用潜力。

光动力治疗的三要素分别是：光源、光敏剂和氧气。其中光敏剂是PDT三要素中最为重要的组分。目前，卟啉类衍生物二氢卟吩(ce6)、菁染料类IR-780、ICG等商品化的光敏剂都在光动力及光热治疗中起到了重要的作用。然而，这些染料都存在着共同的局限性，即光敏剂对正常细胞与癌细胞没有选择性，在破坏癌细胞的同时也使正常细胞受损，因此这些光敏剂在进一步的光动力治疗应用中受到了限制。此外光动力治疗的特点在于采用特定波长的光激发光敏剂，这也就要求光敏剂具有一定的光稳定性，因此，研究开发出具有良好光稳定性、对特殊细胞具有选择性的新型光敏剂仍然是推动光动力治疗发展的关键和核心。

在众多的光敏剂母体中，联吡啶钌配合物及其衍生物具有优异的双光子性能、荧光量子产率适中、光谱性质稳定、光热及化学稳定性好和细胞毒性较低等优点，作为光敏剂和成像荧光试剂已被广泛应用，并且目前钌配合物还没有被开发用作靶向性能的光敏剂。

雌激素与雌激素受体的结合在细胞的分裂、分化过程中起到重要的作用，雌激素受体调节剂是能够与雌激素竞争地结合雌激素受体的物质。由于一些癌细胞(如MCF-7、4T1)相对于正常细胞(COS-7、HL-7702)雌激素受体表现为过表达。一些抗癌药物(如tamoxifen)作为雌激素受体调节剂通过与雌激素受体结合进而一定程度上抑制乳腺癌细胞的生长。

发明内容

本发明旨在提供一类对癌细胞具有优异的识别特异性以及强大杀伤力的新型PDT光敏剂。

本发明首先提供一类邻菲罗啉钌配合物类光敏染料，具有如下结构通式I：

通式I中：

R₁、R₂、R₃和R₄和R₅各自独立地选自H或苯基；

R₆选自H或式i～ⅳ所述基团：

X选自六氟磷酸根、氯或高氯酸根；

n为2或6。

另一方面，本发明提供上述邻菲罗啉钌配合物类光敏染料的制备方法，包括式II的化合物与式III化合物在一价铜离子存在条件下反应的步骤，

通过上述本发明的合成方法制备的邻菲罗啉钌配合物类光敏剂，具有以下显著的特征：1、光稳定性好，在连续的最大吸收波长的光照射下，其吸收光谱不发生变化；2、能够被双光子激光激发，可进行细胞的双光子成像以及双光子光动力细胞破坏；3、对雌激素受体可特异性响应，因此对癌细胞具有选择性，光动力选择性杀死癌细胞；4、生物相容性好，可用于活细胞特异细胞器定位染色以及光动力细胞器破坏。

基于此，本发明进一步提供所述的邻菲罗啉钌配合物类光敏染料在制备PDT光敏剂中的应用。所制备的PDT光敏剂可以用于光动力治疗，以双光子激发，并且显然相对于一般的钌光敏剂有着更强的光动力治疗效果。

对于PDT光敏剂的更为具体的探讨，与本发明的化合物对乳腺癌细胞的特异性识别、标记及处理有关。本发明的邻菲罗啉钌配合物类化合物能够特异性识别乳腺癌细胞，由癌细胞与正常细胞摄取该光敏剂量的差异进而造成光动力损伤癌细胞明显多于正常细胞的结果，从而达到光动力选择性损伤的目的。对于已报道的邻菲罗啉钌配合物类光敏剂，本发明提供的光敏剂有着特异性的亚细胞器定位，有着更强的治疗效果，并且该光敏剂还可以采用双光子激发，一定程度上增加了潜在的治疗深度。基于此，上述应用中的PDT光敏剂，优选用于特异性标记、标记雌激素受体过表达的乳腺癌细胞，并在特定波长激发光的存在下诱导癌细胞死亡。

附图说明

本发明附图10幅：

图1是对本发明的光敏剂Ru-tmxf进行单线态氧产生能力、单线态氧产率的计算及光稳定性测试图。图1中：A和B分别是标准参比[Ru(bpy)₃]²⁺和Ru-tmxf与DPBF(3-二苯基异苯并呋喃)的混合溶液在450nm的光照射下DPBF的吸收衰减曲线；C和D是Ru-tmxf与标准参比[Ru(bpy)₃]²⁺对分别于DPBF的混合溶液在450nm光照射下DPBF的荧光衰减曲线。

图2是光敏分子Ru-tmxf在竞争性MCF-7细胞摄取抑制剂17β-雌二醇存在的条件下，MCF-7细胞对光敏分子Ru-tmxf的激光共聚焦细胞摄取图。图2中：A，B和C分别代表加入细胞摄取抑制剂17β-雌二醇浓度为0,25,50μM的条件下，细胞对Ru-tmxf摄取的荧光场图；D,E和F为明场与荧光场的混合图。

图3是本发明的光敏分子Ru-tmxf对MCF-7、COS-7、HL-7702细胞的流式细胞摄取量图。图3中：A,B和C分别为MCF-7、COS-7、HL-7702细胞对Ru-tmxf的摄取的流式细胞图。

图4是本发明的光敏分子Ru-tmxf在MCF-7细胞与COS-7细胞共同孵育条件下细胞摄取图。图4中：A图为荧光场，B图为明场与荧光场的叠加图。

图5是本发明的光敏分子Ru-tmxf与靶标分子他莫昔芬对MCF-7细胞的MTT光动力效果测试对比图。

图6是本发明的光敏分子Ru-tmxf在MCF-7细胞与COS-7细胞的MTT光动力效果测试图。横坐标为光敏分子Ru-tmxf的浓度，纵坐标为细胞的存活率。图6是考察本发明光敏分子Ru-tmxf在MCF-7细胞的亚细胞器定位图。

图7本发明的光敏分子Ru-tmxf在MCF-7细胞中的亚细胞器定位图。图7中：A,B,C和D图中分别表示商品化溶酶体染料染色，Ru-tmxf染色，染色叠加，叠加定位系数图；E,F,G和H分别表示商品化线粒体染料染色，Ru-tmxf染色，染色叠加，叠加定位系数图；I,J,K和L分别表示商品化细胞核染料染色，Ru-tmxf染色，染色叠加，叠加定位系数图。

图8是光敏分子Ru-tmxf的对MCF-7细胞溶酶体破坏图。图8中：A图表示未经处理的细胞，B图表示只经Ru-tmxf处理的细胞，C图表示只经过光照处理的细胞，D图表示经Ru-tmxf光动力治疗的细胞。

图9是本发明的光敏分子Ru-tmxf在MCF-7细胞的单双光子成像图。图9中：A,B和C图表示单光子激发下Ru-tmxf对细胞的染色的明场，荧光场，混合叠加图；D,E和F图表示双光子激发下Ru-tmxf对细胞的染色的明场，荧光场，混合叠加图。

图10是本发明的光敏分子Ru-tmxf对MCF-7细胞的双光子激发光动力破坏图。图10中：A,B,C,D和E分别代表对细胞进行双光子光照或非光照的明场，钙黄绿素染色，PI染色，荧光场染色叠加，混合叠加图；F,G,H,I和J分别代表对细胞进行双光子光动力治疗和只进行Ru-tmxf处理的明场，钙黄绿素染色，PI染色，荧光场染色叠加，混合叠加图。

具体实施方式

本发明的邻菲罗啉钌配合物类光敏染料，具有如下结构通式I：

通式I中：

R₁、R₂、R₃和R₄和R₅各自独立地选自H或苯基；其中，R₅优选苯基；R₁、R₂、R₃和R₄优选均为氢。

所述的R₆选自H或式i～ⅳ所述基团，优选ii的基团:

X选自六氟磷酸根、氯或高氯酸根；优选为六氟磷酸根。

n为2或6，优选2。

上述优选技术特征之组合可以获得本发明的优选的化合物，其中代表性的最优选化合物是Ru-tmxf：

另一方面，本发明提供所述的邻菲罗啉钌配合物类光敏染料的制备方法，包括式II的化合物与式III化合物(炔化R₆)在一价铜离子存在条件下反应的步骤，

其中，式II的化合物与式III化合物的摩尔比可为1:0.1～100，优选为1:1～50，更优选为1:1～5，最佳为1:2。

其中所述的一价铜离子可以通过在反应物中添加五水硫酸铜和抗坏血酸钠来获得；也可直接采用溴化亚铜，碘化亚铜。优选为五水硫酸铜和抗坏血酸钠；一价铜离子与式II的化合物的摩尔比为1.5～10:1，优选2:1。

所述的反应的溶剂是水与有机溶剂的混合物，其中有机溶剂优选氯仿或乙醇，便于反应物的溶解、也便于反应后的脱除。

实际生产操作中，优选使式III的化合物的加入量稍过量于中间体II，以利于中间体II反应完全。

另一方面，该步骤优选在惰性气体保护下进行反应，这样可以使产率更高。

反应是否达到终点通过薄层色谱(TLC)判断，通常的反应时间优选24小时。

反应结束后，蒸去溶剂。优选用二氯甲烷/甲醇作为洗脱液进行色谱柱分离提纯产物。产物通过核磁和高分辨质谱进行表征。

所得光敏剂可通过本领域公知的分离和纯化技术回收，以达到需要的纯度。

本发明中使用的各种原料均可市售获得，或者可通过本领域技术人员公知的方法或现有技术中公开的方法由本领域公知的原料简单地制备得到。

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明及其有益效果，但不以任何方式限制本发明。

实施例1.光敏分子Ru-tmxf的合成：

(1)中间体化合物3的合成：

将钌配合物中间体1(0.106g，0.2mmol)加入含有20mL乙醇和10mL水的100mL单口烧瓶中，加入中间体2(0.1g，0.21mmol)，氮气保护下回流24h。减压蒸除溶剂。中性氧化铝柱分离(二氯甲烷:甲醇＝15:1)得到橘红色固体，最后将固体溶于水中，加入饱和的六氟磷酸铵溶液，析出红色固体中间体3(70％)。¹H NMR(500MHz,CD₃SOCD₃),δ:3.66(t,J＝10Hz,2H),4.2(t,10H,2H),7.00(d,J＝10Hz,2H),7.38(d,J＝10Hz,1H),7.49(t,J＝8Hz,1H),7.58(d,J＝10Hz,2H),7.79(m,10H),7.96(d,J＝5Hz,1H),8.09(m,4H)；8.39(d,J＝10Hz,4H),8.77(m,4H),9.18(d,J＝10Hz,1H)；ES-MS:m/z calcd for C₅₁H₃₅N₁₁ORu²⁺[M–2PF₆]²⁺:459.6029,found:459.6027.

(2)光敏分子Ru-tmxf的合成：

将钌配合物中间体3(0.150g，0.163mmol)加入含有12mL氯仿、1mL乙醇和1mL水的50mL单口烧瓶中，加入中间体4(0.106g，0.269mmol)，五水硫酸铜(24.45mg,0.098mmol)和抗坏血酸钠(64.58mg,0.326mmol)室温下搅拌，反应24h，减压蒸除溶剂。中性氧化铝柱分离(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得到橘红色固体Ru-tmxf(78％)。¹H NMR(500MHz,CD₃SOCD₃),δ:0.80(t,J＝10Hz,3H),2.17(s,3H),2.33(q,J＝10Hz,2H),2.62(s,2H),3.63(s,2H),3.91(s,2H),4.41(t,J＝5Hz,2H),4.72(t,J＝5Hz,2H),6.58(d,J＝5Hz,2H),6.72(d,J＝5Hz,2H),6.92(d,J＝10Hz,2H),7.10(d,J＝5Hz,3H),7.17(m,4H),7.25(t,J＝10Hz,1H),7.35(m,3H),7.50(m,3H),7.76(m,9H),7.82(m,1H),7.95(d,J＝5Hz,1H),8.04(m,2H),8.07(m,4H)；ES-MS:m/z calcd for C₇₉H₆₄N₁₂O₂Ru²⁺[M–2PF₆]²⁺:657.2154,found:657.2182.

实施例2.光敏分子Ru-tmxf的单线态氧性能测试

将10μM的参比[Ru(bpy)₃]²⁺和光敏分子Ru-tmxf加入到含有3mL甲醇溶液的测试石英皿，通过DPBF溶液调整415nm处的吸光度达到1左右，将皿置于450nm，2mW/cm²的氙灯光源下照射，每隔两分钟记录溶液的吸收光谱。测试结果显示于图1中的A图和B图，溶液的吸收随照射时间的增长按一定的值同等衰减，表明溶液在该波长的光源照射下产生了单线态氧，并且随着照射时间的增长，溶液的吸收光谱在460nm处的吸收并没有发生变化，一定程度上说明光敏分子Ru-tmxf具有良好的光稳定性。同样地，将10μM的光敏分子Ru-tmxf加入到含有3mL乙腈溶液的测试石英皿，在450nm，2mW/cm²的氙灯光源下照射下，每隔两分钟记录溶液的荧光发射谱，激发波长为405nm。再以相同的条件对参比[Ru(bpy)₃]²⁺进行测试。测试结果显示于图1中C图和D图，根据谱图可以看出，光敏分子Ru-tmxf具有相对于参比更高的单线态氧量子产率，通过比较溶液荧光光谱衰减斜率可以精准计算光敏分子Ru-tmxf在乙腈溶液中的精准单线态氧量子产率为75％。

实施例3.靶向竞争实验

MCF-7、COS-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。采用17β-雌二醇作为Ru-tmxf进入MCF-7细胞的竞争性抑制剂。分别将0、25和50μM的17β-雌二醇预先加入至含有MCF-7细胞的皿中培养24h，再将3μM的化合物Ru-tmxf分别加入其中孵育2h，后采用激光共聚焦成像。光敏分子激发波长为488nm，接受波段为570nm-620nm。从图2的A,B和C图(D,E和F为明场与荧光场的混合图)中可以看到，加入竞争性抑制剂的细胞摄取量减少，且随着浓度的增加，抑制强度增大。

实施例4.不同细胞对光敏分子Ru-tmxf摄取量实验

MCF-7、COS-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。HL-7702在1640(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。使用细胞(MCF-7、COS-7、HL-7702、HepG2细胞)进行Ru-tmxf的摄取量实验。将3μM的化合物Ru-tmxf加入到含有MCF-7、COS-7、HL-7702细胞的培养液中，37℃下孵育2h，后采用流式细胞仪记录不同细胞的摄取量。光敏分子激发波长为488nm，探针发射波长588nm，测试结果显示于图3的A,B和C图中。从图中可以看到，光敏化合物Ru-tmxf在MCF-7细胞中的摄取量明显优于正常细胞COS-7、HL-7702细胞，相对于正常细胞，MCF-7细胞过表达雌激素受体，使得MCF-7细胞的摄取量优于其他两种细胞。纵坐标count值为记录细胞数目，横坐标表示荧光强度。

实施例5.：MCF-7细胞与COS-7细胞竞争摄取光敏分子Ru-tmxf实验

MCF-7和COS-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。共聚焦荧光成像实验前一天，两种细胞共同种在细胞共聚焦培养皿中。将3μM的化合物Ru-tmxf加入到既含有MCF-7细胞又含有COS-7细胞的共聚焦成像皿中，37℃下孵育2h。光敏分子的激发波长为488nm，探针发射波长588nm，测试结果显示于图4中(A图为荧光场，B图为明场与荧光场的叠加图)。从图中可以看到，在MCF-7细胞和COS-7细胞共同存在的条件下，光敏分子Ru-tmxf可以选择性的进入到乳腺癌MCF-7细胞中。

实施例6.：光敏分子Ru-tmxf与tamoxifen对MCF-7细胞的细胞毒性对比实验

将要检测的MCF-7和COS-7细胞用0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的DMEM培养液配成单个细胞悬液，以每孔10³～10⁴个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100μL；将培养板移入孵箱中，37℃，5％CO₂及饱和湿度下培育24小时后，别加入不同浓度的光敏分子与tamoxifen分子，继续培养2.5小时；随后采用450nm，20mW/cm²的氙灯光源均匀的照射每个孔，照射完毕后，继续将96孔板放置培养箱中放置24h。每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，孵育4小时，终止培养，小心吸掉孔内培养上清液。然后，每孔加入100μL的DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分溶解；在酶标仪上测定各孔570nm处的吸光度，计算细胞存活率：试验组光吸光度/对照组吸光度值×100％。

从图5中可以看出，光敏分子Ru-tmxf对MCF-7细胞的光毒性远远大于tamoxifen分子本身对MCF-7细胞的毒性，具有明显的统计学差异。

实施例7.光敏分子Ru-tmxf对MCF-7细胞与COS-7细胞的光动力MTT实验

将要检测的MCF-7和COS-7细胞用0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的DMEM培养液配成单个细胞悬液，以每孔10³～10⁴个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100μL；将培养板移入孵箱中，37℃，5％CO₂及饱和湿度下培育24小时后，加入不同浓度的光敏分子，继续培养2.5小时；随后采用450nm，20mW/cm²的氙灯光源均匀的照射每个孔，照射完毕后，继续将96孔板放置培养箱中放置24h。每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，孵育4小时，终止培养，小心吸掉孔内培养上清液。然后，每孔加入100μL的DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分溶解；在酶标仪上测定各孔570nm处的吸光度，计算细胞存活率：试验组光吸光度/对照组吸光度值×100％。

从图6中可以看出，光敏分子Ru-tmxf对MCF-7和COS-7细胞具有明显细胞光毒性差异，具有统计学意义。符合实验设计预期。

实施例8.：光敏分子Ru-tmxf的亚细胞器定位实验

MCF-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。共聚焦荧光成像实验前一天，细胞种在细胞共聚焦培养皿中。图5是光敏分子与不同亚细胞器定位的商业化染料的复染实验。光敏分子Ru-tmxf的浓度为3μM，商业化染料Hochest 33342(细胞核)、MTG(线粒体)、LTG(溶酶体)的浓度分别为100nM。先将3μM的光敏分子Ru-tmxf分别加入至3个含有MCF-7细胞的皿中孵育2小时，后分别将3中100nM的商业化染料加入皿中分别孵育5min、30min和20min，随后进行激光共聚焦成像。光敏分子Ru-tmxf的激发波长为488nm发射为570-600nm。Hochest 33342的激发波长为405nm，接受波段为460-490nm。MTG与LTG的激发波长均为488nm，接受波段为515-545nm。从图7(A,B,C和D图中分别表示商品化溶酶体染料染色，Ru-tmxf染色，染色叠加，叠加定位系数图；E,F,G和H分别表示商品化线粒体染料染色，Ru-tmxf染色，染色叠加，叠加定位系数图；I,J,K和L分别表示商品化细胞核染料染色，Ru-tmxf染色，染色叠加，叠加定位系数图)中可以看出Ru-tmxf能够较好的定位于MCF-7细胞的溶酶体中。

实施例9.光敏分子Ru-tmxf的MCF-7细胞溶酶体破坏实验

MCF-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。共聚焦荧光成像实验前一天，细胞种在细胞共聚焦培养皿中。将3μM化合物Ru-tmxf加入至含有MCF-7细胞的培养皿中孵育2h，将皿至于450nm，20mW/cm²的氙灯光源照射10min。同时作为对比实验，未加入光敏分子的细胞皿也在相同光参数下照射10min。随后向细胞皿中加入5μM的吖啶橙溶液，37℃下孵育20min。随后进行激光共聚焦成像。吖啶橙的激发波长为488nm，接受波段分别为515-545nm和610-640nm。如图8(A图表示未经处理的细胞，B图表示只经Ru-tmxf处理的细胞，C图表示只经过光照处理的细胞，D图表示经Ru-tmxf光动力治疗的细胞)所示，在光照射条件下，光敏分子可以特异性的破坏溶酶体，细胞中溶酶体部分的染色效果消失。而未经过光照射的染料以及单纯的光照射不会产生此效果。特异性的说明了破坏溶酶体的毒性来自于光敏分子的光动力作用。

实施例10：荧光显微镜下观察光敏分子Ru-tmxf对细胞的单双光子成像

MCF-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。共聚焦荧光成像实验前一天，细胞种在细胞共聚焦培养皿中。第二天，向其中加入3μM的光敏分子Ru-tmxf，保持在37℃及5％CO₂条件下，孵育2h，然后用磷酸缓冲溶液冲洗3遍后，进行单双光子共聚焦成像。细胞的培养密度为2×10⁵cells/mL。成像所用仪器为含双光子飞秒激光器的Olympus倒置显微镜，60倍油镜。单光子激发光为488nm激发，双光子激发光为800nm激发，收集575-620nm波段。

图9(A,B和C图表示单光子激发下Ru-tmxf对细胞的染色的明场，荧光场，混合叠加图；D,E和F图表示双光子激发下Ru-tmxf对细胞的染色的明场，荧光场，混合叠加图)可以看出，光敏分子Ru-tmxf还可被双光子激光器激发，并且双光子成像相对于单光子具有更好的空间分辨率，成像效果更有优势。

实施例11：双光子光动力细胞破坏实验

图9：MCF-7细胞在DMEM(invitrogen)中用10％的FCS(invitrogen)培养。共聚焦荧光成像实验前一天，细胞种在细胞共聚焦培养皿中。第二天，向其中加入3μM的光敏分子Ru-tmxf，保持在37℃及5％CO₂条件下，孵育2h。

使用钙黄绿素/PI试剂盒对双光子激光照射下的MCF-7细胞进行共聚焦成像。

细胞的培养密度为2×10⁵cells/mL。成像所用仪器为Olympus双光子共聚焦显微镜，60倍油镜。Ru-tmxf的激发光为800nm激发，收集扫描视野区域5min；进行钙黄绿素/PI成像。钙黄绿素/PI激发波长为488nm，收集分别为515-545nm波段和615-645nm波段。

从图10(A,B,C,D和E分别代表对细胞进行双光子光照或非光照的明场，钙黄绿素染色，PI染色，荧光场染色叠加，混合叠加图；F,G,H,I和J分别代表对细胞进行双光子光动力治疗和只进行Ru-tmxf处理的明场，钙黄绿素染色，PI染色，荧光场染色叠加，混合叠加图)中可以看出，MCF-7细胞中，光敏剂Ru-tmxf可对MCF-7细胞在飞秒双光子激光的激发下对细胞产生光毒性作用，导致正常细胞染色剂钙黄绿素无法对其进行正常染色，甚至PDT组还出现了一些细胞的晚期凋亡现象，而只加光敏剂Ru-tmxf与只加光照组没有此现象，进一步说明了Ru-tmxf双光子光动力的效果。

Claims (7)

1.一类邻菲罗啉钌配合物类光敏染料，具有如下结构通式I：

通式I中：

所述R₁、R₂、R₃和R₄均为氢；所述的R₅为苯基；所述的R₆为式ii的基团：

X选自六氟磷酸根、氯或高氯酸根；

n为2或6。

2.根据权利要求1所述的光敏染料，其特征在于，所述的X为六氟磷酸根。

3.根据权利要求1所述的光敏染料，其特征在于，所述的n为2。

4.权利要求1所述的邻菲罗啉钌配合物类光敏染料的制备方法，其特征在于，包括式II的化合物与式III化合物在一价铜离子存在条件下反应的步骤，

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的式II的化合物与式III化合物的摩尔比可为1:0.1～100；

所述的一价铜离子与式II的化合物的摩尔比可为为1.5～10:1；

所述反应的溶剂是水与有机溶剂的混合物，有机溶剂是氯仿或乙醇。

6.权利要求1所述的邻菲罗啉钌配合物类光敏染料在制备PDT光敏剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的PDT光敏剂用于特异性标记、标记雌激素受体过表达的乳腺癌细胞，并在特定波长激发光的存在下诱导癌细胞死亡。

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