CN110051747A - 一种精血补片提取液及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种精血补片提取液及其应用，所述精血补片提取液又精血补片提取而成，精血补片由以下重量份的组分制备而成：生晒参100份，红参100份，制何首乌200份，紫河车200份，五味子200份和陈皮120份；所述精血补片提取液在提高T细胞免疫活性中的应用。本发明的优点在于：本发明精血补片提取液在250ug/mL浓度时对于T细胞的增值有接近于两倍的刺激作用。

Description

一种精血补片提取液及其应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，特别涉及一种精血补片提取液及其应用。
背景技术
《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂）第六册中具有用于神经衰弱，精神萎靡，头晕目眩心悸失眠的药物精血补片，该复方制剂由中药材生晒参100g，红参100g，制何首乌200g，紫河车200g，五味子200g，陈皮120g组成，上述原料共制成4600片。生晒参是方中主要药味，为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根及根茎，具有大补元气，复脉固脱，补皮益肺，生津，安神之功效。红参也是方中主要药味，为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的栽培品经蒸制后的干燥根及根茎，具有大补元气，复脉固脱，益气摄血之功效。制何首乌为萝科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根的炮制加工品，具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨之功效。紫河车为健康人的干燥太胖，具有温肾补精，益气养血之功效。五味子为木兰科植物北五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果实，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功效。陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulta Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮，具有理气健脾，燥湿化痰之功效。
关于对精血补片的提取，以及在免疫细胞中的应用，经检索，目前还没有报道类似的专利文献。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种精血补片提取液及其应用，
以挖掘精血补片新的应用。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种精血补片提取液，其创新点在于：所述精血补片由以下重量份的组分制备而成：生晒参100份，红参100份，制何首乌200份，紫河车200份，五味子200份和陈皮120份；所述精血补片提取液是通过以下步骤制备而成：
步骤1：精确称量精血补片9.2g置于一50mL的离心管中，然后向离心管中加入30mL的磷酸缓冲盐溶液，并振荡离心管混匀；
步骤2：步骤1中精血补片与磷酸缓冲盐溶液混匀后，冰上超声粉碎，超声功率为45～80KHZ，每次超声处理6S停9S，共30min，共超声处理至少两次；
步骤3：冰上超声处理后，将混匀的精血补片与磷酸缓冲盐溶液在10000rpm转速下离心30min，然后取上清液20mL，下沉淀物于65～75℃下烘干；
步骤4：将步骤3中的上清液依次经0.22µm过滤膜和0.1µm过滤膜过滤，得到精血补片提取液，备用。
一种上述的精血补片提取液的应用，其创新点在于：所述精血补片提取液在提高T细胞免疫活性中的应用。
本发明的优点在于：
本发明精血补片提取液及其应用，通过对精血补片进行提取，并通过提取液进行免疫细胞株增殖试验，进而发现本发明精血补片提取液在250ug/mL浓度时对于T细胞的增值有接近于两倍的刺激作用。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明精血补片提取液免疫细胞增殖图。
具体实施方式
下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
实施例
本实施例精血补片提取液，该精血补片由以下重量份的组分制备而成：生晒参100份，红参100份，制何首乌200份，紫河车200份，五味子200份和陈皮120份；所述精血补片提取液是通过以下步骤制备而成：
步骤1：精确称量精血补片9.2g置于一50mL的离心管中，然后向离心管中加入30mL的磷酸缓冲盐溶液，并振荡离心管混匀；
步骤2：步骤1中精血补片与磷酸缓冲盐溶液混匀后，冰上超声粉碎，超声功率为45～80KHZ，每次超声处理6S停9S，共30min，共超声处理至少两次；
步骤3：冰上超声处理后，将混匀的精血补片与磷酸缓冲盐溶液在10000rpm转速下离心30min，然后取上清液20mL，下沉淀物于65～75℃下烘干；
步骤4：将步骤3中的上清液依次经0.22µm过滤膜和0.1µm过滤膜过滤，得到精血补片提取液，备用。
对精血补片提取液进行免疫细胞株增殖试验，包括如下步骤：
步骤1：使用RPMI1640（10%FBS、1%双抗）完全培养基梯度稀释制备含水提取液1000、500、250 、100 、20 ug/mL；
步骤2：取对数期生长良好的Raw264.7（巨噬细胞）、CTLL-2（T细胞）、NALM-6（B细胞）重悬计数；将密度调至5*10^4/mL，100ul/孔接种于96孔板，每孔加入100ul制备好的水提物完全培养基，每个浓度三个复孔，并设置0浓度对照孔；
步骤3：48h后，加入细胞活性检测试剂CCK8,20ul/孔，37℃培养4小时；
步骤4：酶标仪读取OD450nm 读数，其结果见下表1和图1。
表1 精血补片提取液免疫细胞增殖（%）
由表1和图1可以看出，精血补片提取液在250ug/mL浓度时对于T细胞的增值有接近于两倍的刺激作用，进一步提高浓度没有发现有进一步增殖作用现象。在同等浓度范围内，JH01对于巨噬细胞和B细胞的刺激作用则不明显。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (2)

1.一种精血补片提取液，其特征在于：所述精血补片由以下重量份的组分制备而成：生晒参100份，红参100份，制何首乌200份，紫河车200份，五味子200份和陈皮120份；所述精血补片提取液是通过以下步骤制备而成：
步骤1：精确称量精血补片9.2g置于一50mL的离心管中，然后向离心管中加入30mL的磷酸缓冲盐溶液，并振荡离心管混匀；
步骤2：步骤1中精血补片与磷酸缓冲盐溶液混匀后，冰上超声粉碎，超声功率为45～80KHZ，每次超声处理6S停9S，共30min，共超声处理至少两次；
步骤3：冰上超声处理后，将混匀的精血补片与磷酸缓冲盐溶液在10000rpm转速下离心30min，然后取上清液20mL，下沉淀物于65～75℃下烘干；
步骤4：将步骤3中的上清液依次经0.22µm过滤膜和0.1µm过滤膜过滤，得到精血补片提取液，备用。
2.一种权利要求1所述的精血补片提取液的应用，其特征在于：所述精血补片提取液在提高T细胞免疫活性中的应用。
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