CN110036909B - 一种血叶兰快速培养繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血叶兰快速培养繁殖方法。本发明通过蒴果消毒和种子萌发、壮苗培养、增殖培养、生根培养和移栽，获得了大量优质的血叶兰种苗。通过本发明可对血叶兰进行快速培养繁殖，效率高，并且培养后的血叶兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，作为药用植物安全环保，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需要，为企业规模化、生产化培养血叶兰提供了技术支持。同时本发明的快速培养繁殖方法简单易行、步骤精炼、消毒效果好、培养繁殖快、成苗率高、污染率低，能够有效降低培养成本，从而大大提高了成苗率及工作效率，节约了资源。
Description
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种血叶兰快速培养繁殖方法。
背景技术：
血叶兰(Ludisia discolor)又名石蚕，属兰科(Orchidaceae)血叶兰属多年生草本植物。血叶兰是高档的观叶观花植物，同时还是名贵药用植物。我国医学书籍《中华本草》、《全国中草药汇编》等均有记载，最早记载于慈济宫保生大帝药签，而今，是海南黎族医生处方的重要药材，药用历史悠久，民间应用广泛。
由于血叶兰具有很好的药用价值，而其种子在自然条件下难以萌发，资源再生慢，加上长期无节制的采挖，资源濒临枯竭。为了更好的保护血叶兰野生资源，应大力发展人工栽培，满足市场需求，保障血叶兰资源的可持续利用。然而关于血叶兰组织培养的快繁技术研究仍然处于初级阶段，在很大程度上阻碍了血叶兰的规模化生产。并且现有的其他兰花品种的组织培养不能直接运用到血叶兰培养上，所以目前急需一种血叶兰组培繁殖方法。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种苗株品质好，培养繁殖快的血叶兰快速培养繁殖方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
本发明的血叶兰快速培养繁殖方法，包括以下步骤：
a、蒴果消毒和种子萌发：选取血叶兰进行人工授粉获得蒴果，选取授粉后20-30天成熟的蒴果清洗后进行消毒处理，将消毒后的蒴果剖开，将种子接种到种子萌发培养基上进行培养，先进行暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，种子萌发形成无菌苗；所述的种子萌发培养基为：每升含有花宝1号1.5-2.5g、香蕉90-140g、土豆40-80g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖10-15g、琼脂5-7g和活性炭1-2g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
b、壮苗培养：将无菌苗转入壮苗培养基中培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx；所述的壮苗培养基为：每升含有花宝1号1-2g、香蕉130-180g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖10-15g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
c、增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6BA 1-3mg、NAA 0.4-0.6mg、椰汁100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
d、生根培养：将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，获得生根的试管苗；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号1-3g、香蕉110-150g、土豆50-100g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖10-15g、活性炭1-2g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
e、移栽：将试管苗在自然光下炼苗6-9天，然后取出试管苗并洗净附着在根部的培养基，移栽至培养基质中培养获得血叶兰种苗。
通过品种选育，选用无病虫害长势良好的血叶兰植株做母本能降低苗株的发病率，保证在组培过程中不受其他因素的干扰，增加种子萌发成活率。种子由种皮包裹，采用质量分数0.15％的升汞水溶液消毒不会造成种子褐化，消毒15min，可以使消毒效果更好，减少细菌污染的同时，提高成活率。种子萌发过程中先进行暗培养，模拟种子在地下的原始生境，能够使种子在培养过程中逐渐适应培养条件，有利于存活。
所述的选取授粉后20-30天成熟的蒴果清洗后进行消毒处理具体为：选取授粉后20-30天成熟的蒴果，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min，在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5-8次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分。
所述的种子萌发培养基优选为：每升含有花宝1号2g、香蕉120g、土豆50g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6。
所述的壮苗培养基优选为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉150g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖13g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
所述的增殖培养基优选为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 2mg、NAA0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
所述的生根培养基优选为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆80g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖12g、活性炭1.5g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
所述的培养基质优选为椰块。
本发明的有益效果是：通过本发明能对血叶兰进行快速培养繁殖，效率高，除了增殖阶段，其他环节无需添加植物生长调节剂，并且培养后的血叶兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，作为药用植物安全环保，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养血叶兰提供了技术支持。同时本发明的快速培养繁殖方法简单易行、步骤精炼、消毒效果好、培养繁殖快、成苗率高、污染率低、培养周期短，能够有效降低培养成本，从而大大提高了成苗率及工作效率，节约了资源。
附图说明：
图1为本发明的血叶兰快速培养繁殖的流程示意图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后25天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约95％，萌发率96％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉120g、土豆50g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉150g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖13g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 2mg、NAA0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆80g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖12g、活性炭1.5g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为97％。
实施例2：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后25天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约95％，萌发率94％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2.5g、香蕉110g、土豆40g、肌醇0.05g、蔗糖14g、琼脂5g和活性炭1.8g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号1g、香蕉160g、蛋白胨3g、肌醇0.15g、蔗糖14g和琼脂5g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号0.5g、6BA 3mg、NAA 0.4mg、椰汁120mL、蛋白胨1g、肌醇0.15g、蔗糖28g和琼脂5g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养67d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉110g、土豆100g、蛋白胨1g、肌醇0.05g、蔗糖10g、活性炭1.3g和琼脂5g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为93％。
实施例3：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后25天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约93％，萌发率95％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉140g、土豆60g、肌醇0.08g、蔗糖12g、琼脂7g和活性炭1.3g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉180g、蛋白胨2g、肌醇0.05g、蔗糖12g和琼脂7g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1g、花宝4号1.5g、6BA 3mg、NAA 0.6mg、椰汁150mL、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖29g和琼脂7g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号1g、香蕉120g、土豆90g、蛋白胨3g、肌醇0.08g、蔗糖11g、活性炭2g和琼脂7g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为96％。
实施例4：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后25天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约91％，萌发率93％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2.5g、香蕉100g、土豆50g、肌醇0.1g、蔗糖15g、琼脂7g和活性炭1g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号1g、香蕉140g、蛋白胨3g、肌醇0.05g、蔗糖15g和琼脂7g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1g、花宝4号0.5g、6BA 2mg、NAA 0.6mg、椰汁140mL、蛋白胨3g、肌醇0.1g、蔗糖32g和琼脂5g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养66d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆70g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖13g、活性炭1.5g和琼脂7g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为94％。
实施例5：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后25天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约92％，萌发率91％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉90g、土豆80g、肌醇0.13g、蔗糖11g、琼脂6g和活性炭2g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉130g、蛋白胨1g、肌醇0.15g、蔗糖11g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 1mg、NAA 0.5mg、椰汁100mL、蛋白胨2g、肌醇0.15g、蔗糖33g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养72d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号3g、香蕉140g、土豆60g、蛋白胨2g、肌醇0.13g、蔗糖15g、活性炭1g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为91％。
实施例6：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后25天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约94％，萌发率92％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆70g、肌醇0.15g、蔗糖10g、琼脂5g和活性炭1.8g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉170g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖10g和琼脂5g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号2g、花宝4号1.5g、6BA 1mg、NAA 0.4mg、椰汁110mL、蛋白胨1g、肌醇0.05g、蔗糖31g和琼脂7g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养64d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1800lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号1g、香蕉150g、土豆50g、蛋白胨3g、肌醇0.15g、蔗糖14g、活性炭1.8g和琼脂5g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为80％，温度为25℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为95％。
实施例7：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后20天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗8次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行20d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养60d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约91％，萌发率80％，无菌苗生长势一般(++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉120g、土豆50g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.8；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉150g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖13g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.8；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养90d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.8；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养75d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆80g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖12g、活性炭1.5g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.8；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗7天，打开组培瓶瓶盖炼苗1天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为22℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为90％。
实施例8：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好植株健壮的血叶兰，通过人工授粉获得蒴果；
(2)蒴果预处理：选取授粉后30天成熟的蒴果，用软刷毛将选取的蒴果在水池中进行初步清洗，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min；
(3)蒴果消毒：在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)种子萌发：将消毒后的蒴果剖开，将种子均匀分布于种子萌发培养基上进行培养(接种数50瓶)，先进行30d的暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养45d，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx，种子萌发形成无菌苗，消毒成功率约93％，萌发率92％，无菌苗生长势良好(+++)；种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉120g、土豆50g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6；
(5)壮苗培养：选择高2cm以上的无菌苗转入壮苗培养基中培养60d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx；壮苗培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉150g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖13g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(6)增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(7)生根培养：增殖培养后，将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养70d，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000lx，试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片，生根率100％；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆80g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖12g、活性炭1.5g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6；
(8)移栽：当试管苗生长至5cm高，根2-4条，叶3-4片时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开组培瓶瓶盖炼苗2天；然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至椰块中，保持湿度和透气，空气湿度为85％，温度为28℃，由此得到血叶兰种苗，移栽成活率为93％。
Claims (7)
1.一种血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、蒴果消毒和种子萌发：选取血叶兰进行人工授粉获得蒴果，选取授粉后20-30天成熟的蒴果清洗后进行消毒处理，将消毒后的蒴果剖开，将种子接种到种子萌发培养基上进行培养，先进行暗培养，培养温度为(25±1)℃，然后再进行常规光照培养，培养温度为(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，种子萌发形成无菌苗；所述的种子萌发培养基为：每升含有花宝1号1.5-2.5g、香蕉90-140g、土豆40-80g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖10-15g、琼脂5-7g和活性炭1-2g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
b、壮苗培养：将无菌苗转入壮苗培养基中培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx；所述的壮苗培养基为：每升含有花宝1号1-2g、香蕉130-180g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖10-15g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
c、增殖培养：壮苗培养后，将无菌苗分成茎尖和茎段两部分，茎尖用于生根培养，将茎段切成带有1-2个茎节的茎段，转入增殖培养基中培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，获得无菌苗；所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1-2g、花宝4号0.5-1.5g、6-BA 1-3mg、NAA 0.4-0.6mg、椰汁100-150mL、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖28-33g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
d、生根培养：将茎尖和增殖培养获得的无菌苗转入生根培养基中培养，培养温度(25±1)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000lx，获得生根的试管苗；所述的生根培养基为：每升含有花宝1号1-3g、香蕉110-150g、土豆50-100g、蛋白胨1-3g、肌醇0.05-0.15g、蔗糖10-15g、活性炭1-2g和琼脂5-7g，其余为水，pH值为5.6-5.8；
e、移栽：将试管苗在自然光下炼苗6-9天，然后取出试管苗并洗净附着在根部的培养基，移栽至培养基质中培养获得血叶兰种苗。
2.根据权利要求1所述的血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，所述的选取授粉后20-30天成熟的蒴果清洗后进行消毒处理具体为：选取授粉后20-30天成熟的蒴果，去除表面泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min，在超净工作台上，将蒴果用体积分数75％的酒精水溶液浸泡1min，无菌水冲洗1次，然后浸泡在质量分数0.15％的升汞水溶液中消毒15min，消毒后，用无菌水冲洗5-8次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分。
3.根据权利要求1或2所述的血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，所述的种子萌发培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉120g、土豆50g、肌醇0.1g、蔗糖13g、琼脂6g和活性炭1.5g，其余为水，pH值为5.6。
4.根据权利要求1或2所述的血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，所述的壮苗培养基为：每升含有花宝1号1.5g、香蕉150g、蛋白胨1g、肌醇0.1g、蔗糖13g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
5.根据权利要求1或2所述的血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，所述的增殖培养基为：每升含有花宝1号1.5g、花宝4号1g、6-BA 2mg、NAA 0.5mg、椰汁130mL、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖30g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
6.根据权利要求1或2所述的血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，所述的生根培养基为：每升含有花宝1号2g、香蕉130g、土豆80g、蛋白胨2g、肌醇0.1g、蔗糖12g、活性炭1.5g和琼脂6g，其余为水，pH值为5.6。
7.根据权利要求1所述的血叶兰快速培养繁殖方法，其特征在于，所述的培养基质为椰块。
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| Effect of pollination stage and cold storage of capsule on the seed germination of Haemaria discolor (Ker) Lindl.;Shiau YihJuh等;《Journal of Agricultural Research of China》;20040630;第53卷(第3期);全文 * |
| 血叶兰的无菌播种与快速繁殖;李宏杨等;《南方农业学报》;20151215;第46卷(第11期);全文 * |
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