CN110029076A - 一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液及其制备方法 - Google Patents

一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液及其制备方法 Download PDF

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李国友
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Abstract

本发明公开了一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液的制备方法，是将利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液按体积比2:1:1:1:1的比例混合，制成复合己酸菌液。所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液。本发明的复合己酸菌液可用于浓香型白酒生产的窖泥培养和窖池养护，提高浓香型白酒中重要风味物质己酸和己酸乙酯的含量，提升酒质。

Description

一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液及其制备方法
技术领域
本发明属于白酒酿造生产技术领域，具体涉及一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液及其制备方法。
背景技术
己酸菌是产生己酸的一类细菌，是重要的窖泥功能菌，其产生的己酸不仅可起到呈香、助香、减少酒体刺激等作用，而且己酸与乙醇酯化生成的己酸乙酯是决定浓香型白酒风格与品质的关键香味成分，为了提高己酸和己酸乙酯的含量、改善酒质，浓香型白酒生产中广泛使用己酸菌液培养人工窖泥和养护窖池。老窖产好酒，老窖产的酒中己酸乙酯含量高于新窖，老窖窖泥微生物中的己酸菌包括利用半乳糖醇产己酸菌(Caproiciproducens)、利用乙醇产己酸菌(克氏梭菌)及利用乳酸产己酸菌(瘤胃菌CPB6)，此外，老窖窖泥中甲烷丝菌属、甲烷短杆菌属等产甲烷菌可促进己酸菌的生长，胺小杆菌、Desulfotomaculum、Sedimentibacter等产氢产乙酸菌群在产酸菌群和产甲烷菌群之间起着承上启下的重要作用，对己酸菌产生己酸有重要的影响。
目前生产上使用的己酸菌液包括纯种己酸菌液和窖泥富集液。纯种己酸菌液菌群结构单一，分离、培养及保藏较困难，生产上应用较少；生产上应用较多的窖泥富集培养液虽然较纯种己酸菌液菌群结构丰富，但目前使用的富集方法均是采用乙醇和乙酸钠为碳源的巴氏合成培养基，仅能富集培养利用乙醇产己酸菌，不能保留窖泥中己酸菌群及影响己酸形成的微生物的多样性，应用后不易形成稳定的己酸菌群落结构，己酸产量较低。
发明内容
本发明旨在提供用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液及其制备方法，本发明制备的己酸菌液己酸菌群结构丰富，可利用半乳糖醇、乳酸、乙醇等多种碳源形成己酸，应用后易形成稳定的己酸菌群落结构，可用于浓香型白酒生产中的人工窖泥培养和窖池养护，增加己酸和己酸乙酯的含量，提升酒质。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液，包括利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液，所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积大小关系为，利用半乳糖醇产己酸菌富集液的体积大于利用乙醇产己酸菌富集液的体积，利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液和利用乳酸产己酸菌富集液的体积总和大于产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积总和，利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积相同或互相之间的差距在20％以内。
优选的，所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积比2:1:1:1:1。
所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液。
所述用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液的制备方法为，将利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液按比例混合，优选的，上述制备方法在厌氧条件下进行。
上述各种菌富集液的制备方法为：S1将培养基通入氮气除氧，灭菌冷却备用；S2取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，得到样品菌，按10％-15％体积比的接种量将样品菌接种在培养基中，35℃-40℃培养5-7天；S3取产气的培养液，按5-10％体积比的接种量接种在培养基中，35℃-40℃培养5-7天，得到菌富集液；优选的，在制备利用乙醇产己酸菌富集液和利用乳酸产己酸菌富集液时，将样品菌进行热处理。
在制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液时采用的培养基I，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：半乳糖醇0.8-3.0g，酵母膏0.2-0.6g，胰蛋白胨0.05-0.3g，L-天门冬酰胺0.03-0.07g，L-半胱氨酸盐酸盐0.01-0.05g，刃天青0.0001-0.0003g，KH2PO4 0.1-0.3g，K2HPO4·3H2O 0.1-0.3g，MgSO4·7H2O 0.007-0.013g，MnSO4·H2O 0.007-0.013g，FeSO4·7H2O0.0013-0.0018g，NaCl 0.007-0.013g，pH 6.5-7.0。
在制备利用乙醇产己酸菌富集液时采用的培养基II，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.3-0.8g，酵母膏0.1-0.5g，CaCO3 0.1-0.5g，K2HPO4·3H2O0.02-0.05g，MgSO4·7H2O 0.03-0.08g，(NH4)2SO4 0.03-0.08g，刃天青0.0001-0.0003g，乙醇0.5-3.0g，pH6.5-7.0，所述乙醇在灭菌后加入。
在制备利用乳酸产己酸菌富集液时采用的培养基III，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：乳酸0.5-5.0g，酵母膏0.1-0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03-0.08g，刃天青0.0001-0.0003g，KH2PO4 0.01-0.04g，K2HPO4·3H2O 0.02-0.08g，MgSO4·7H2O 0.01-0.04g，(NH4)2SO4 0.01-0.05g，维生素溶液0.1-0.5g，微量元素溶液0.1-0.5g，pH5.0-5.5。
在制备产氢产乙酸菌富集液时采用的培养基IV，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：丁酸钠1.0-5.0g，丙酸钠1.0-5.0g，酵母膏0.1-0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03-0.08g，刃天青0.0001-0.0003g，CaCl2 0.05-0.3g，MgCl2·7H2O 0.005-0.02g，K2HPO4·3H2O 0.05-0.1g，KH2PO4 0.05-0.1g，NH4Cl 0.05-0.5g，微量元素溶液0.1-0.5g，维生素溶液0.1-0.5g，pH 6.5-7.0。
在制备产甲烷菌富集液时采用的培养基V，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.5-0.8g，甲酸钠0.5-0.8g，酵母膏0.1-0.5g，K2HPO4·3H2O 0.02-0.08g，NH4Cl0.05-0.2g，KCl 0.01-0.05g，NaCl 0.1-0.5g，MgCl2·6H2O 0.005-0.02g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03-0.08g，NaHCO3 0.05-0.2g，刃天青0.0001-0.0003g，微量元素溶液0.1-0.5g，维生素溶液0.1-0.5g，pH 6.5-7.0。
所述微量元素溶液组分构成：N(CH2COOH)3 1.5g/L，CoCl2·6H2O 0.2g/L，MnSO4·H2O 0.2g/L，CaCl2·2H2O 0.1g/L，ZnSO4·7H2O 0.1g/L，FeCl3·4H2O 1.0g/L，Na2MoO4·2H2O 0.05g/L，NiCl2·6H2O 0.03g/L，CuSO4·5H2O 0.01g/L，H3BO3 0.01g/L；所述维生素溶液组分构成：VB10.2g/L，VB6 0.1g/L，VB12 0.1g/L，生物素0.02g/L，叶酸0.002g/L，烟酸0.02g/L，对氨基苯甲酸0.05g/L，泛酸0.05g/L，硫辛酸0.05g/L。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的复合己酸菌液可用于浓香型白酒生产的窖泥培养和窖池养护，是将利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液按一定的体积比例进行混合，制成复合己酸菌液，其中总菌数为6-9×1010个/mL，本发明提高了浓香型白酒中重要风味物质己酸和己酸乙酯的含量，提升酒质；而当各富集液按体积比2:1:1:1:1的比例进行混合时，己酸的产量更多及产酒的口感更优。
(2)本发明制备的复合己酸菌液，具有己酸为主的复合香味，与曲粉、酒糟、酯化红曲霉等添加到窖泥原料中培养窖泥，窖香味明显、柔熟、稍粘稠，将新窖泥应用于浓香型白酒酿造产酒，可增加基酒中己酸和己酸乙酯的含量。应用于窖池养护时，可将复合己酸菌液均匀喷洒至窖壁和窖底，或者在窖壁和窖底中打孔，将复合己酸菌液灌进孔后再抹平。
(3)本发明的复合己酸菌液易于制备，菌群丰富，菌群结构与老窖泥相似，可利用半乳糖醇、乙醇、乳酸等多种碳源产生己酸，应用于窖泥培养和窖池养护易形成稳定的己酸菌群落结构，增加己酸和己酸乙酯含量，提升酒质。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
本发明实施例中：
所述微量元素溶液组分构成：N(CH2COOH)3 1.5g/L，CoCl2·6H2O 0.2g/L，MnSO4·H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O 0.1g/L，ZnSO4·7H2O 0.1g/L，FeCl3·4H2O 1.0g/L，Na2MoO4·2H2O0.05g/L，NiCl2·6H2O 0.03g/L，CuSO4·5H2O 0.01g/L，H3BO3 0.01g/L。
所述维生素溶液组分构成：VB1 0.2g/L，VB6 0.1g/L，VB12 0.1g/L，生物素0.02g/L，叶酸0.002g/L，烟酸0.02g/L，对氨基苯甲酸0.05g/L，泛酸0.05g/L，硫辛酸0.05g/L。
实施例1：
1.制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液：
1.1制备培养基I
每100毫升水中含有以下质量的物质：半乳糖醇1.0g，酵母膏0.3g，胰蛋白胨0.1g，L-天门冬酰胺0.04g，L-半胱氨酸盐酸盐0.02g，刃天青0.0001g，KH2PO4 0.2g，K2HPO4·3H2O0.2g，MgSO4·7H2O 0.008g，MnSO4·H2O 0.008g，FeSO4·7H2O 0.0013g，NaCl 0.008g，pH 6.5-7.0。
1.2制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液
将利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按10％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，35℃培养6天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，35℃培养6天，得到利用半乳糖醇产己酸菌富集液。
2.制备利用乙醇产己酸菌富集液
2.1制备培养基II
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.4g，酵母膏0.2g，CaCO3 0.3g，K2HPO4·3H2O 0.03g，MgSO4·7H2O 0.04g，(NH4)2SO4 0.04g，刃天青0.0002g，乙醇1.5g(乙醇在灭菌后加)，pH6.5-7.0。
2.2利用乙醇产己酸菌富集液
将利用乙醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，加入乙醇，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按10％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，35℃培养6天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，35℃培养6天，得到利用乙醇产己酸菌富集液。
3.制备利用乳酸产己酸菌富集液
3.1制备培养基III
每100毫升水中含有以下质量的物质：乳酸2.0g，酵母膏0.2g，L-半胱氨酸盐酸盐0.04g，刃天青0.0001g，KH2PO4 0.02g，K2HPO4·3H2O 0.02g，MgSO4·7H2O 0.02g，(NH4)2SO40.02g，维生素溶液0.2g，微量元素溶液0.25g，pH5.0-5.5。
3.2制备利用乳酸产己酸菌富集液
将利用乳酸产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按10％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，35℃培养6天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，35℃培养7天，得到利用乳酸产己酸菌富集液。
4.制备产氢产乙酸菌富集液
4.1制备培养基IV
每100毫升水中含有以下质量的物质：丁酸钠2.0g，丙酸钠2.0g，酵母膏0.2g，L-半胱氨酸盐酸盐0.04g，刃天青0.0002g，CaCl2 0.1g，MgCl2·7H2O 0.01g，K2HPO4·3H2O0.08g，KH2PO4 0.08g，NH4Cl 0.2g，微量元素溶液0.2％，维生素溶液0.2％，pH6.5-7.0。
4.2制备产氢产乙酸菌富集液
将产氢产乙酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按10％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，35℃培养6天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，35℃培养6天，得到产氢产乙酸菌富集液。
5.制备产甲烷菌富集液
5.1制备培养基V
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.5g，甲酸钠0.5g，酵母膏0.2g，K2HPO4·3H2O 0.03g，NH4Cl 0.1g，KCl 0.02g，NaCl 0.3g，MgCl2·6H2O 0.01g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，NaHCO3 0.1g，刃天青0.0002g，微量元素溶液0.2g，维生素溶液0.2g，pH6.5-7.0。
5.2制备产甲烷菌富集液
将产甲烷菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按10％体积比的接种量接种在甲烷菌富集培养基中，35℃培养6天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在产甲烷菌富集培养基中，35℃培养6天，得到产甲烷菌富集液。
6.制备复合己酸菌液
所述利用半乳糖产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液，将制备的利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液，按照体积比2:1:1:1:1的比例，在厌氧条件下进行混合均匀。
本实施例制成的复合己酸菌液总菌数为7×1010个/mL，具有己酸为主的复合香味。与曲粉、酒糟、酯化红曲霉等添加到窖泥原料中培养窖泥，窖香味明显、柔熟、稍粘稠，将新窖泥应用于浓香型白酒酿造产酒，与传统菌液培养的窖泥相比，己酸含量增加了0.38g/L，己酸乙酯含量增加了0.71g/L，优级酒率增加了6％。
实施例2：
1.制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液：
1.1制备培养基I
每100毫升水中含有以下质量的物质：半乳糖醇2.0g，酵母膏0.4g，胰蛋白胨0.2g，L-天门冬酰胺0.05g，L-半胱氨酸盐酸盐0.02g，刃天青0.0003g，KH2PO4 0.3g，K2HPO4·3H2O0.3g，MgSO4·7H2O 0.01g，MnSO4·H2O 0.01g，FeSO4·7H2O 0.0015g，NaCl 0.1g，pH6.5-7.0。
1.2制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液
将利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按12％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按8％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用半乳糖醇产己酸菌富集液。
2.制备利用乙醇产己酸菌富集液
2.1制备培养基II
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.5g，酵母膏0.3g，CaCO3 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.04g，MgSO4·7H2O 0.05g，(NH4)2SO4 0.05g，刃天青0.0003g，乙醇2.0g(乙醇在灭菌后加)，pH6.5-7.0。
2.2利用乙醇产己酸菌富集液
将利用乙醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按12％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按8％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用乙醇产己酸菌富集液。
3.制备利用乳酸产己酸菌富集液
3.1制备培养基III
每100毫升水中含有以下质量的物质：乳酸3.0g，酵母膏0.3g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，刃天青0.0002g，KH2PO4 0.03g，K2HPO4·3H2O 0.03g，MgSO4·7H2O 0.03g，(NH4)2SO40.03g，维生素溶液0.3g，微量元素溶液0.3g，pH5.0-5.5。
3.2制备利用乳酸产己酸菌富集液
将利用乳酸产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按12％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按8％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用乳酸产己酸菌富集液。
4.制备产氢产乙酸菌富集液
4.1制备培养基IV
每100毫升水中含有以下质量的物质：丁酸钠3.0g，丙酸钠3.0g，酵母膏0.3g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，刃天青0.0003g，CaCl2 0.2g，MgCl2·7H2O 0.01g，K2HPO4·3H2O 0.1g，KH2PO4 0.1g，NH4Cl 0.3g，微量元素溶液0.3g，维生素溶液0.3g，pH6.5-7.0。
4.2制备产氢产乙酸菌富集液
将产氢产乙酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按12％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按8％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到产氢产乙酸菌富集液。
5.制备产甲烷菌富集液
5.1制备培养基V
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.6g，甲酸钠0.6g，酵母膏0.3g，KH2PO4·3H2O 0.04g，NH4Cl 0.2g，KCl 0.03g，NaCl 0.4g，MgCl2·6H2O 0.02g，L-半胱氨酸盐酸盐0.06g，NaHCO3 0.2g，刃天青0.0002g，微量元素溶液0.3g，维生素溶液0.3g，pH6.5-7.0。
5.2制备产甲烷菌富集液
将产甲烷菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按12％体积比的接种量接种在甲烷菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按8％体积比的接种量接种在产甲烷菌富集培养基中，37℃培养7天，得到产甲烷菌富集液。
6.制备复合己酸菌液
所述利用半乳糖产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液，将制备的利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液，按照体积比2:1:1:1:1的比例，在厌氧条件下进行混合均匀。
本实施例制成的复合己酸菌液总菌数为8×1010个/mL，具有己酸为主的复合香味，将其均匀喷洒至窖壁和窖底，用以养护窖池，与用传统菌液养护窖池相比，己酸含量增加了0.42g/L，己酸乙酯含量增加了0.83g/L，优级酒率增加了7％。
实施例3
本实施例采用实施例2制备的各种菌富集液，但在制备复合己酸菌液时，采用的比例为：6:4:3:3:4，其他实施过程与实施例2一样。
本实施例制成的复合己酸菌液总菌数为6×1010个/mL，具有己酸为主的复合香味，将其均匀喷洒至窖壁和窖底，用以养护窖池，与用传统菌液养护窖池相比，己酸含量增加了0.28g/L，己酸乙酯含量增加了0.37g/L，优级酒率增加了3％。
实施例4：
1.制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液：
1.1制备培养基I
每100毫升水中含有以下质量的物质：半乳糖醇0.8g，酵母膏0.2g，胰蛋白胨0.05g，L-天门冬酰胺0.03g，L-半胱氨酸盐酸盐0.01g，刃天青0.0001g，KH2PO4 0.1g，K2HPO4·3H2O0.1g，MgSO4·7H2O 0.007g，MnSO4·H2O 0.007g，FeSO4·7H2O 0.0013g，NaCl0.007g，pH 6.5-7.0。
1.2制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液
将利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按10％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按5％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用半乳糖醇产己酸菌富集液。
2.制备利用乙醇产己酸菌富集液
2.1制备培养基II
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.3g，酵母膏0.1g，CaCO3 0.1g，K2HPO4·3H2O 0.02g，MgSO4·7H2O 0.03g，(NH4)2SO4 0.03g，刃天青0.0001g，乙醇0.5g(乙醇在灭菌后加)，pH6.5-7.0。
2.2利用乙醇产己酸菌富集液
将利用乙醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按10％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按5％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用乙醇产己酸菌富集液。
3.制备利用乳酸产己酸菌富集液
3.1制备培养基III
每100毫升水中含有以下质量的物质：乳酸0.5g，酵母膏0.1g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03g，刃天青0.0001g，KH2PO4 0.01g，K2HPO4·3H2O 0.02g，MgSO4·7H2O 0.01g，(NH4)2SO40.01g，维生素溶液0.1g，微量元素溶液0.1g，pH5.0-5.5。
3.2制备利用乳酸产己酸菌富集液
将利用乳酸产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按10％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按5％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用乳酸产己酸菌富集液。
4.制备产氢产乙酸菌富集液
4.1制备培养基IV
每100毫升水中含有以下质量的物质：丁酸钠1.0g，丙酸钠1.0g，酵母膏0.1g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03g，刃天青0.0001g，CaCl2 0.05g，MgCl2·7H2O 0.005g，K2HPO4·3H2O0.05g，KH2PO4 0.05g，NH4Cl 0.05g，微量元素溶液0.1g，维生素溶液0.1g，pH6.5-7.0。
4.2制备产氢产乙酸菌富集液
将产氢产乙酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按10％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按5％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到产氢产乙酸菌富集液。
5.制备产甲烷菌富集液
5.1制备培养基V
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.6g，甲酸钠0.5g，酵母膏0.1g，KH2PO4·3H2O 0.02g，NH4Cl 0.05g，KCl 0.01g，NaCl 0.1g，MgCl2·6H2O 0.005g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03g，NaHCO3 0.05g，刃天青0.0001g，微量元素溶液0.1g，维生素溶液0.1g，pH6.5-7.0。
5.2制备产甲烷菌富集液
将产甲烷菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按10％体积比的接种量接种在甲烷菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按5％体积比的接种量接种在产甲烷菌富集培养基中，37℃培养7天，得到产甲烷菌富集液。
6.制备复合己酸菌液
所述利用半乳糖产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液，将制备的利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液，按照体积比5:3:3:3:3的比例，在厌氧条件下进行混合均匀。
实施例5：
1.制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液：
1.1制备培养基I
每100毫升水中含有以下质量的物质：半乳糖醇3.0g，酵母膏0.6g，胰蛋白胨0.3g，L-天门冬酰胺0.07g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，刃天青0.0003g，KH2PO4 0.3g，K2HPO4·3H2O0.3g，MgSO4·7H2O 0.013g，MnSO4·H2O 0.013g，FeSO4·7H2O 0.0018g，NaCl 0.013g，pH 6.5-7.0。
1.2制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液
将利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按15％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在利用半乳糖醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用半乳糖醇产己酸菌富集液。
2.制备利用乙醇产己酸菌富集液
2.1制备培养基II
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.8g，酵母膏0.5g，CaCO3 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.05g，MgSO4·7H2O 0.08g，(NH4)2SO4 0.08g，刃天青0.0003g，乙醇3.0g(乙醇在灭菌后加)，pH6.5-7.0。
2.2利用乙醇产己酸菌富集液
将利用乙醇产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按15％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在利用乙醇产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用乙醇产己酸菌富集液。
3.制备利用乳酸产己酸菌富集液
3.1制备培养基III
每100毫升水中含有以下质量的物质：乳酸5.0g，酵母膏0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐0.08g，刃天青0.0003g，KH2PO4 0.04g，K2HPO4·3H2O 0.08g，MgSO4·7H2O 0.04g，(NH4)2SO40.05g，维生素溶液0.5g，微量元素溶液0.5g，pH5.0-5.5。
3.2制备利用乳酸产己酸菌富集液
将利用乳酸产己酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，90℃水浴10分钟，冷却至40℃后按15％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在利用乳酸产己酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到利用乳酸产己酸菌富集液。
4.制备产氢产乙酸菌富集液
4.1制备培养基IV
每100毫升水中含有以下质量的物质：丁酸钠5.0g，丙酸钠5.0g，酵母膏0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐0.08g，刃天青0.0003g，CaCl2 0.3g，MgCl2·7H2O 0.02g，K2HPO4·3H2O 0.1g，KH2PO4 0.1g，NH4Cl 0.5g，微量元素溶液0.5g，维生素溶液0.5g，pH6.5-7.0。
4.2制备产氢产乙酸菌富集液
将产氢产乙酸菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按15％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在产氢产乙酸菌富集培养基中，37℃培养7天，得到产氢产乙酸菌富集液。
5.制备产甲烷菌富集液
5.1制备培养基V
每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.8g，甲酸钠0.8g，酵母膏0.5g，KH2PO4·3H2O 0.08g，NH4Cl 0.2g，KCl 0.05g，NaCl 0.5g，MgCl2·6H2O 0.02g，L-半胱氨酸盐酸盐0.08g，NaHCO3 0.2g，刃天青0.0003g，微量元素溶液0.5g，维生素溶液0.5g，pH6.5-7.0。
5.2制备产甲烷菌富集液
将产甲烷菌富集培养基通入氮气除氧，121℃灭菌20min，冷却至40℃，取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，按15％体积比的接种量接种在甲烷菌富集培养基中，37℃培养7天，取产气的培养液，按10％体积比的接种量接种在产甲烷菌富集培养基中，37℃培养7天，得到产甲烷菌富集液。
6.制备复合己酸菌液
所述利用半乳糖产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液，将制备的利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液，按照体积比5:3:3:3.5:3的比例，在厌氧条件下进行混合均匀。
本申请中产甲烷菌可促进己酸菌的生长，产甲烷菌对己酸菌的生长促进作用相关数据如表1所示。
表1混合培养菌数测定结果
菌种数量(个/mL) 己酸菌、甲烷菌混合培养 己酸菌单独培养
己酸菌 2.6×10<sup>10</sup> 1.8×10<sup>10</sup>
甲烷菌 1.1×10<sup>10</sup> ---
本申请中，产氢产乙酸菌群产生的氢气可吸收氧，有利于厌氧系统的维持，甲烷菌可利用氢气生长，且菌群在氢分压低时，作用增强，氢分压高时，作用减弱，在厌氧产酸系统中起到一个平衡器的作用；产氢产乙酸菌群还可利用乳酸、丙酸等产生乙酸，乙酸可作为合成己酸的底物，促进己酸的生成，相关数据如表2所示。
表2不同培养己酸产量
本申请中，均为厌氧操作，可淘汰非厌氧菌株；富集利用乙醇产己酸菌和利用乳酸产己酸菌时，因这两类菌均耐热激，先将样品热处理，即90℃水浴10分钟，淘汰不耐热的菌株，可进一步纯化菌株；本申请均采用两次富集培养，针对目标菌株的生物学特性，采用不同目标菌株的选择性培养基富集培养；因这几类目标菌株均可产生氢气或二氧化碳等气体，选择产气的培养物再用选择性培养基富集培养，纯化菌株。
以上揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作地等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (10)

1.一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液，其特征在于，包括利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液，所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积大小关系为，利用半乳糖醇产己酸菌富集液的体积大于利用乙醇产己酸菌富集液的体积，利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液和利用乳酸产己酸菌富集液的体积总和大于产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积总和，利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积相同或互相之间的差距在20％以内；优选的，所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液和产甲烷菌富集液的体积比2:1:1:1:1。
2.根据权利要求1所述的一种用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液，其特征在于：所述利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液均为培养至对数期的菌液。
3.根据权利要求1或2所述的用于生产浓香型白酒的复合己酸菌液的制备方法，其特征在于，将利用半乳糖醇产己酸菌富集液、利用乙醇产己酸菌富集液、利用乳酸产己酸菌富集液、产氢产乙酸菌富集液及产甲烷菌富集液按比例混合，优选的，上述制备方法在厌氧条件下进行。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，上述各种菌富集液的制备方法为：S1将培养基通入氮气除氧，灭菌冷却备用；S2取优质窖泥，按重量体积比加入2倍量的无菌水，搅拌均匀，通入氮气除氧，得到样品菌，按10％-15％体积比的接种量将样品菌接种在培养基中，35℃-40℃培养5-7天；S3取产气的培养液，按5-10％体积比的接种量接种在培养基中，35℃-40℃培养5-7天，得到菌富集液；优选的，在制备利用乙醇产己酸菌富集液和利用乳酸产己酸菌富集液时，将样品菌进行热处理。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在制备利用半乳糖醇产己酸菌富集液时采用的培养基I，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：半乳糖醇0.8-3.0g，酵母膏0.2-0.6g，胰蛋白胨0.05-0.3g，L-天门冬酰胺0.03-0.07g，L-半胱氨酸盐酸盐0.01-0.05g，刃天青0.0001-0.0003g，KH2PO4 0.1-0.3g，K2HPO4·3H2O 0.1-0.3g，MgSO4·7H2O0.007-0.013g，MnSO4·H2O 0.007-0.013g，FeSO4·7H2O 0.0013-0.0018g，NaCl 0.007-0.013g，pH 6.5-7.0。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在制备利用乙醇产己酸菌富集液时采用的培养基II，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.3-0.8g，酵母膏0.1-0.5g，CaCO3 0.1-0.5g，K2HPO4·3H2O 0.02-0.05g，MgSO4·7H2O 0.03-0.08g，(NH4)2SO40.03-0.08g，刃天青0.0001-0.0003g，乙醇0.5-3.0g，pH6.5-7.0。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在制备利用乳酸产己酸菌富集液时采用的培养基III，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：乳酸0.5-5.0g，酵母膏0.1-0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03-0.08g，刃天青0.0001-0.0003g，KH2PO4 0.01-0.04g，K2HPO4·3H2O 0.02-0.08g，MgSO4·7H2O 0.01-0.04g，(NH4)2SO4 0.01-0.05g，维生素溶液0.1-0.5g，微量元素溶液0.1-0.5g，pH5.0-5.5。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在制备产氢产乙酸菌富集液时采用的培养基IV，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：丁酸钠1.0-5.0g，丙酸钠1.0-5.0g，酵母膏0.1-0.5g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03-0.08g，刃天青0.0001-0.0003g，CaCl20.05-0.3g，MgCl2·7H2O 0.005-0.02g，K2HPO4·3H2O 0.05-0.1g，KH2PO4 0.05-0.1g，NH4Cl0.05-0.5g，微量元素溶液0.1-0.5g，维生素溶液0.1-0.5g，pH 6.5-7.0。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在制备产甲烷菌富集液时采用的培养基V，其组成为每100毫升水中含有以下质量的物质：乙酸钠0.5-0.8g，甲酸钠0.5-0.8g，酵母膏0.1-0.5g，K2HPO4·3H2O 0.02-0.08g，NH4Cl 0.05-0.2g，KCl 0.01-0.05g，NaCl 0.1-0.5g，MgCl2·6H2O 0.005-0.02g，L-半胱氨酸盐酸盐0.03-0.08g，NaHCO3 0.05-0.2g，刃天青0.0001-0.0003g，微量元素溶液0.1-0.5g，维生素溶液0.1-0.5g，pH 6.5-7.0。
10.根据权利要求7-9任一项所述的制备方法，其特征在于，所述微量元素溶液组分构成：N(CH2COOH)3 1.5g/L，CoCl2·6H2O 0.2g/L，MnSO4·H2O 0.2g/L，CaCl2·2H2O 0.1g/L，ZnSO4·7H2O 0.1g/L，FeCl3·4H2O 1.0g/L，Na2MoO4·2H2O 0.05g/L，NiCl2·6H2O 0.03g/L，CuSO4·5H2O 0.01g/L，H3BO3 0.01g/L；所述维生素溶液组分构成：VB1 0.2g/L，VB6 0.1g/L，VB12 0.1g/L，生物素0.02g/L，叶酸0.002g/L，烟酸0.02g/L，对氨基苯甲酸0.05g/L，泛酸0.05g/L，硫辛酸0.05g/L。
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