CN110012667A

CN110012667A - 化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物

Info

Publication number: CN110012667A
Application number: CN201780065438.XA
Authority: CN
Inventors: N·P·亨利
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2016-09-02
Filing date: 2017-08-31
Publication date: 2019-07-12
Anticipated expiration: 2037-08-31
Also published as: CN110012667B; US10676466B2; EP3507286A1; AU2017317723A1; US20190177307A1; JP6983873B2; BR112019004168A2; GB201614939D0; RU2019105794A; CA3040584A1; WO2018041946A1; JP2019526574A; KR20190044655A

Abstract

本发明涉及化合物(2S，3R)‑2‑(((2‑(1，5‑二甲基‑6‑氧代‑1，6‑二氢吡啶‑3‑基)‑1‑((四氢‑2H‑吡喃‑4‑基)甲基)‑1H‑苯并[d]咪唑‑5‑基)甲基)氨基)‑3‑羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物，以及其在治疗BET抑制剂适用的各种病症、特别是炎性和自身免疫疾病和癌症中的用途。还公开了制备该结晶形式的方法和包含所述结晶形式的药物组合物，并且其形成本发明的一部分。

Description

化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑- 5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物

发明领域

本发明涉及化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物，以及其在治疗BET抑制剂适用的各种病症、特别是炎性和自身免疫疾病和癌症中的用途。还公开了制备该结晶水合物形式的方法和包含所述结晶水合物形式的药物组合物，并且其形成本发明的一部分。

发明背景

真核生物的基因组在细胞核内高度组织。双链体DNA的长链缠绕在组蛋白的八聚体(最通常包含两个拷贝的组蛋白H2A、H2B、H3和H4)周围以形成核小体。然后通过核小体的聚集和折叠进一步压缩该基本单元以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同状态的凝聚是可能的，并且这种结构的紧密度在细胞周期期间变化，在细胞分裂过程期间是最紧凑的。染色质结构在调节基因转录中起着关键作用，该基因转录不能从高度凝聚的染色质有效地发生。染色质结构受到对组蛋白(特别是组蛋白H3和H4)(并且最常见的是在延伸超过核心核小体结构的组蛋白尾部内)的一系列翻译后修饰的控制。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和SUMO化。这些表观遗传标记被特定的酶写入和清除，所述酶将标签置于组蛋白尾部内的特定残基上，从而形成表观遗传密码，其然后由细胞翻译以允许调节基因表达。

组蛋白乙酰化最通常与基因转录的激活相关，因为修饰通过改变静电学而松弛DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除了这种物理变化以外，特定蛋白识别并结合组蛋白内的乙酰化的赖氨酸残基以读取表观遗传密码。溴结构域是在组蛋白的背景下通常但不是唯一地结合乙酰化的赖氨酸残基的蛋白内的小的(～110个氨基酸)独特结构域。存在约50种已知含溴结构域蛋白的家族，并且它们在细胞内具有一系列功能。

含溴结构域蛋白的BET家族包括4种蛋白(BRD2、BRD3、BRD4和BRDT)，其含有串联的溴结构域，所述串联的溴结构域能够结合两个紧密靠近的乙酰化的赖氨酸残基，增加相互作用的特异性。从每个BET蛋白的N-末端编号，串联的溴结构域通常被标记结合结构域1(BD1)和结合结构域2(BD2)(Chung等人，J Med.Chem，.2011，54，3827-3838)。

抑制BET蛋白与乙酰化赖氨酸残基的结合具有改善几种疾病，包括但不限于癌症(Dawson M.A.等人，Nature，2011：478(7370)：529-33；Wyce，A.等人，Oncotarget.2013：4(12)：2419-29)、败血症(Nicodeme E.等人，Nature，2010：468(7327)：1119-23)、自身免疫和炎性疾病诸如类风湿性关节炎和多发性硬化(Mele D.A.等人，Journal ofExperimental Medicine，2013：210(11)：2181-90)、心力衰竭(Anand P.等人，Cell，2013：154(3)：569-82)和肺纤维化(Tang X.等人，Molecular Pharmacology，2013：83(1)：.283-293)的进展的潜力。

本领域需要抑制溴结构域的活性的另外的化学化合物，特别是抑制BET家族含溴结构域蛋白与乙酰化的赖氨酸残基结合的化合物。具体而言，需要具有比已知BET抑制剂改进的概况的化合物。

国际专利申请号PCT/EP2016/055792公开了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶形式。

发明概述

在第一个方面，本发明提供了化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物，其为BET抑制剂，且因此可用于治疗BET抑制剂适用的各种病症，特别是炎性和自身免疫疾病，以及癌症。

在一个进一步方面，本发明提供了药物组合物，其包含所述(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂。

在一个进一步方面，本发明提供了化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物，例如一水合物，其用于疗法中，且特别是用于治疗BET抑制剂适用的疾病或病况，诸如自身免疫和/或炎性疾病(例如，类风湿性关节炎或骨关节炎)和癌症。

在又一个进一步方面，本发明提供了治疗BET抑制剂适用的疾病或病况，诸如自身免疫和/或炎性疾病(例如，类风湿性关节炎或骨关节炎)和癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物。

附图简述

图1显示本发明的化合物的X-射线粉末衍射图。

图2显示本发明的化合物的差示扫描量热法热分析图。

图3显示本发明的化合物的拉曼光谱。

图4显示本发明的化合物的热重分析热分析图。

发明详述

定义

如本文所用，术语“溴结构域”是指结合乙酰化的赖氨酸残基(诸如组蛋白的N末端尾部上的那些)的进化和结构保守的模块(长度为近似110个氨基酸)。它们是蛋白结构域，其作为大得多的含溴结构域蛋白(BCP)的一部分被发现，许多所述蛋白在调节基因转录和/或染色质重塑中起作用。人类基因组编码至少57个溴结构域。

如本文所用，术语“BET”是指含有溴结构域和溴结构域的额外终端结构域家族的蛋白，其包括BRD2、BRD3、BRD4和BRDt。

如本文所用，术语“BET抑制剂”是指能够抑制一种或多种BET家族含溴结构域蛋白(例如，BRD2、BRD3、BRD4或BRDT)与例如乙酰化的赖氨酸残基的结合的化合物。

如本文所用，术语“乙二磺酸盐”是指美国采用的名称(USAN)批准的1，2-乙二磺酸盐的缩写。

应当理解的是，许多有机化合物可以与它们在其中反应或者它们从其中沉淀或结晶的溶剂形成络合物。这些络合物被称为“溶剂化物”。当所述化合物与水形成络合物时，这被称为“水合物”。本文提及“水合物”包括例如半水合物、一水合物、倍半水合物、二水合物和三水合物。在一个实施方案中，所述结晶水合物是一水合物。

如本文所用，术语“治疗”是指预防病况、改善或稳定指定的病况、减少或消除病况的症状、减缓或消除病况的进展，以及预防或延缓以前患病的患者或受试者中病况的复发。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指在动物或人体中引发所需生物反应的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的量。

如本文所用，术语“受试者”是指动物或人体。

应当理解的是，本文提及“本发明的化合物”意指(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物。

发明描述

国际专利申请号PCT/EP2016/055792描述了式(I)的化合物(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯的两种制备法(实施例303)

PCT/EP2016/055792进一步描述了式(II)的(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯的1，2-乙二磺酸盐的结晶形式的制备和表征：

现在已发现(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的新的结晶水合物。

本文所述的结晶水合物已通过X-射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)、拉曼光谱和热重分析(TGA)表征。

仪器详情

X-射线粉末衍射(XRPD)

使用X’Celerator检测器在PANalytical X’Pert Pro粉末衍射仪(型号PW3040/60)上获取数据。采集条件为：辐射：Cu K_α，发生器电压：40kV，发生器电流：45mA，起始角：2.0° 2θ，结束角：40.0° 2θ，步长：0.0167° 2θ，每步时间：31.75秒。通过将几毫克样品安装在硅晶片(零背景板)上制备样品，产生薄粉末层。

FT-拉曼光谱

用配备有1064nm Nd：YVO₄激发激光器、液氮冷却的Ge检测器和微型定位台的Nicolet NXR 9650光谱仪(Thermo Scientific)收集拉曼光谱。使用Happ-Genzel切趾函数和2-级零填充，以4cm^-1分辨率、128次扫描获得光谱。使用Omnic软件确定谱带位置，并且每个谱带位置的误差界限为近似±1cm^-1。

差示扫描量热法(DSC)

用配备有自动采样器和冷冻的冷却系统的TA仪器Q200差示扫描量热仪在50ml/min N₂吹扫下获得DSC热分析图。在卷曲的铝盘中以10.00℃/min获得DSC热分析图。

热重分析(TGA)

用TA仪器Q5000热重分析仪在50mL/min N₂吹扫下以10℃/min获得TGA热分析图。

在一个实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐一水合物的结晶形式，其具有基本上如图1中所示的X-射线粉末衍射图。

表1中记录了实施例4的特征性XRPD角和d-间距。对于每个峰归属，误差界限为近似±0.1° 2θ。由于优选的取向，峰强度可能因样品而不同。使用PANalytical HighscorePlus软件测量峰位置。

表1：实施例4的水合物的X-射线粉末衍射(XRPD)特定峰

在一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有X-射线粉末衍射图，所述X-射线粉末衍射图在5.1、7.9、10.1、11.3、11.9、12.9、13.4、14.2、18.3、20.3、21.0和21.8度的2θ值(±0.1°2θ实验误差)处具有特定峰，如表1中所示。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有X-射线粉末衍射图，所述X-射线粉末衍射图在选自5.1、7.9、10.1、11.3、11.9、12.9、13.4、14.2、18.3、20.3、21.0和21.8度的2θ值(±0.1°2θ实验误差)处具有至少9个特定峰。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有X-射线粉末衍射图，所述X-射线粉末衍射图在选自5.1、7.9、10.1、11.3、11.9、12.9、13.4、14.2、18.3、20.3、21.0和21.8度的2θ值(±0.1° 2θ实验误差)处具有至少8个或至少7个或至少6个或至少5个或至少4个特定峰。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有X-射线粉末衍射图，所述X-射线粉末衍射图在选自5.1、7.9、10.1、11.3、11.9、12.9、13.4、14.2、18.3、20.3、21.0和21.8度的2θ值(±0.1° 2θ实验误差)处具有至少3个特定峰。

在一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有基本上如图2中所示的DSC热分析图。

在一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有如通过DSC所测定的约223℃的起始熔点。

在一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其具有基本上如图3中所示的FT拉曼光谱。

在一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其特征在于在上文所述条件下获得的FT-拉曼光谱，其包括在805、1017、1060、1117、1211、1253、1264、1282、1295、1331、1363、1413、1459、1514、1575、1631、2932、2966和3062cm^-1处的峰，其中在每个谱带位置的误差界限为近似±1cm^-1。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其特征在于在上文所述条件下获得的FT-拉曼光谱，其包括选自805、1017、1060、1117、1211、1253、1264、1282、1295、1331、1363、1413、1459、1514、1575、1631、2932、2966和3062cm^-1的至少15个峰，其中在每个谱带位置的误差界限为近似±1cm^-1。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其特征在于在上文所述条件下获得的FT-拉曼光谱，其包括选自805、1017、1060、1117、1211、1253、1264、1282、1295、1331、1363、1413、

1459、1514、1575、1631、2932、2966和3062cm^-1的至少12个峰，其中在每个谱带位置的误差界限为近似±1cm^-1。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其特征在于在上文所述条件下获得的FT-拉曼光谱，其包括选自805、1017、1060、1117、1211、1253、1264、1282、1295、1331、1363、1413、1459、1514、1575、1631、2932、2966和3062cm^-1的至少10个峰，其中在每个谱带位置的误差界限为近似±1cm^-1。

在另一个进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，其特征在于在上文所述条件下获得的FT-拉曼光谱，其包括选自805、1017、1060、1117、1211、1253、1264、1282、1295、1331、1363、1413、1459、1514、1575、1631、2932、2966和3062cm^-1的至少8个峰，其中在每个谱带位置的误差界限为近似±1cm^-1。

在一个又进一步实施方案中，提供了(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式，如本领域普通技术人员将理解，其特征在于表征前面提及的实施方案的分析数据的任何组合。例如，在一个实施方案中，(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式具有基本上如图1中所示的X-射线粉末衍射图和基本上如图2中所示的DSC热分析图和基本上如图3中所示的FT拉曼光谱。在另一个实施方案中，(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式具有基本上如图1中所示的X-射线粉末衍射图和基本上如图2中所示的DSC热分析图。在另一个实施方案中，(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物形式具有基本上如图1中所示的X-射线粉末衍射图和基本上如图3中所示的FT拉曼光谱。

本领域技术人员众所周知和理解，涉及获得X-射线粉末衍射(XRPD)图的所用装置、湿度、温度、粉末晶体的方向和其它参数可能引起衍射图中的谱线的外观、强度和位置的一些变异性。本文提供的“基本上如图1中所示”的X-射线粉末衍射图是本领域技术人员视为代表与提供图1的XRPD图的化合物具有相同晶型的化合物的XRPD图。即，XRPD图可与图1的XRPD图相同，或更可能其可稍微不同。此XRPD图可能不必显示本文呈现的任一衍射图的各谱线，和/或可以显示由涉及获得数据的条件的差异导致的所述谱线的外观、强度或位置位移的轻微变化。本领域技术人员能够通过比较其XRPD图来确定晶体化合物的样品是否具有与本文公开的形式相同的形式或不同的形式。例如，本领域技术人员可将(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的样品的XRPD图与图1重叠，并使用本领域的专业技术和知识容易地确定所述样品的XRPD图是否基本上如图1中所示。如果XRPD图基本上如图1中所示，则可以将所述样品形式容易且准确地鉴定为具有与本发明的化合物相同的形式。

此外，本领域技术人员还众所周知和理解，涉及获得拉曼光谱的所用装置、湿度、温度、粉末晶体的方向和其它参数可能引起所述光谱中的峰的外观、强度和位置的一些变异性。本文提供的“基本上如图3中所示”的拉曼光谱是本领域技术人员视为代表与提供图3的拉曼光谱的化合物具有相同晶型的化合物的拉曼光谱。即，拉曼光谱可与图3的拉曼光谱相同，或更可能其可稍微不同。此拉曼光谱可能不必显示本文呈现的任一光谱的各峰，和/或可以显示由涉及获得数据的条件的差异导致的所述峰的外观、强度或位置位移的轻微变化。本领域技术人员能够通过比较其拉曼光谱来确定晶体化合物的样品是否具有与本文公开的形式相同的形式或不同的形式。例如，本领域技术人员可将(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的样品的拉曼光谱与图3重叠，并使用本领域的专业技术和知识容易地确定所述样品的拉曼光谱是否基本上如图3中所示。如果XRPD图基本上如图3中所示，则可以将所述样品形式容易且准确地鉴定为具有与本发明的化合物相同的形式。本发明涉及(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯的乙二磺酸盐的水合物，例如一水合物。在一个优选实施方案中，所述水合物呈结晶形式。水合物的无定形形式(例如，无定形一水合物)也形成本发明的一部分。对于结晶水合形式，结晶度大于约60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一个实施方案中，结晶度大于99％。

本文公开的(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物可以显示比已知的BET抑制剂改进的概况，因为其可具有例如以下特性中的一种或多种：

(i)有效的BET抑制活性；

(ii)相对于BET家族的蛋白以外的其它已知的含溴结构域蛋白的选择性；

(iii)相对于一种或多种其它BET家族成员的对特定BET家族成员的选择性；

(iv)对于任何给定的BET家庭成员，针对一种结合结构域的选择性(即，相对于BD2对BD1的选择性)；

(v)改善的可开发性(例如期望的溶解度概况、药代动力学和药效动力学)；或

(vi)降低的副作用概况。

本发明还包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。本发明的化合物的同位素变体被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同于在自然界中通常发现的原子质量的原子代替的化合物。可掺入本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，分别诸如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F和³⁶Cl。式(I)的化合物或其盐的某些同位素变体，例如其中掺入放射性同位素诸如³H或¹⁴C的那些可用于药物和/或底物组织分布研究。因为其易于制备和可检测性，氚化的即³H和碳-14即¹⁴C同位素是特别优选的。此外，用同位素诸如氘即²H取代可以提供由于更大的代谢稳定性而导致的某些治疗优点，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求，并且因此在一些情况下可能是优选的。本发明的化合物的同位素变体通常可以通过常规程序，诸如通过说明性方法或通过下文实施例中描述的制备法使用合适的试剂的适当的同位素变体来制备。

用途的描述

本文公开的式(I)的化合物、其乙二磺酸盐(式(II)的化合物)及其结晶水合物已知为BET抑制剂并且因此可在以下方面具有治疗效用：治疗与全身或组织炎症、对感染或缺氧的炎性反应、细胞活化和增殖、脂质代谢、纤维化有关的各种疾病或病况，以及预防和治疗病毒感染。在一个实施方案中，本发明的化合物能够抑制每种BET家族含溴结构域蛋白(例如BRD2、BRD3、BRD4和BRDT)与乙酰化赖氨酸残基的结合。在一个进一步实施方案中，本发明的化合物能够抑制BRD4与其同源乙酰化赖氨酸残基的结合。

BET抑制剂可用于治疗多种急性或慢性自身免疫和/或炎性病况，诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、急性痛风、牛皮癣、系统性红斑狼疮、肺动脉高压(PAH)、多发性硬化、炎性肠病(克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、哮喘、慢性阻塞性气道疾病、肺炎、心肌炎、心包炎、肌炎、湿疹、皮炎(包括特应性皮炎)、秃头症、白癜风、大疱性皮肤病、肾炎、血管炎、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、抑郁症、舍格伦氏综合征涎腺炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、欧文-加斯综合征(Irvine-Gasssyndrome；白内障后和手术后)、色素性视网膜炎、扁平部睫状体炎、鸟枪弹丸样视网膜脉络膜病变、视网膜前膜、囊性黄斑水肿、旁中心凹毛细血管扩张(parafovealtelengiectasis)、牵引性黄斑病、玻璃体黄斑牵引综合征、视网膜脱落、视神经视网膜炎、特发性黄斑水肿、视网膜炎、干眼症(干燥性角膜结膜炎)、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、葡萄膜炎(诸如前葡萄膜炎、全葡萄膜炎、后葡萄膜炎、葡萄膜炎相关的黄斑水肿)、巩膜炎、糖尿病性视网膜病变、糖尿病黄斑水肿、年龄相关性黄斑营养不良、肝炎、胰腺炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、阿狄森氏病(Addison′s disease)、下垂体炎、甲状腺炎、I型糖尿病、巨细胞动脉炎、肾炎(包括狼疮肾炎)、涉及器官的血管炎(诸如肾小球性肾炎)、血管炎(包括巨细胞动脉炎)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)、结节性多动脉炎、白塞氏病(Behcet′s disease)、川崎病(Kawasaki disease)、高安氏动脉炎(Takayasu′s arteritis)、坏疽性脓皮病、涉及器官的血管炎和急性移植器官排斥。将BET抑制剂用于治疗类风湿性关节炎是特别感兴趣的。

在一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是经由调节APO-A1的脂质代谢病症，诸如高胆固醇血症、动脉粥样硬化和阿尔茨海默氏病。

在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是呼吸病症，诸如哮喘或慢性阻塞性气道疾病。

在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是全身性炎性病症，诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、急性痛风、牛皮癣、系统性红斑狼疮、多发性硬化或炎性肠病(克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)。

在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是多发性硬化。

在一个进一步实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病况是I型糖尿病。

BET抑制剂可用于治疗涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或其毒素感染的炎性反应的疾病或病况，诸如败血症、急性败血症、脓毒症综合征、脓毒性休克、内毒素血症、全身炎性反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征、毒性休克综合征、急性肺损伤、ARDS(成人呼吸窘迫综合征)、急性肾衰竭、暴发型肝炎、烧伤、急性胰腺炎、手术后综合征、肉状瘤病、赫克斯海默反应、脑炎、脊髓炎、脑膜炎、疟疾和与病毒感染(诸如流感、带状疱疹、单纯疱疹和冠状病毒)相关的SIRS。在一个实施方案中，涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或其毒素感染的炎性反应的疾病或病况是急性败血症。

BET抑制剂可用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病况，诸如心肌梗塞、脑-血管缺血(中风)、急性冠状动脉综合征、肾再灌注损伤、器官移植、冠状动脉旁路移植、心-肺转流术(cardio-pulmonary bypass procedures)、肺、肾、肝、胃肠或周肢栓塞。

BET抑制剂可用于治疗纤维化病况，诸如特发性肺纤维化、肾纤维化、手术后狭窄、瘢痕瘤疤形成、硬皮病(包括硬斑病)、心肌纤维化和囊性纤维化。

BET抑制剂可用于治疗病毒感染，诸如单纯疱疹感染和再活化、唇疱疹、带状疱疹(herpes zoster)感染和再活化、水痘、带状疱疹(shingles)、人类乳头状瘤病毒(HPV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、宫颈肿瘤、腺病毒感染(包括急性呼吸疾病)、痘病毒感染诸如牛痘和天花以及非洲猪瘟病毒。在一个实施方案中，病毒感染是皮肤或宫颈上皮的HPV感染。在另一个实施方案中，病毒感染是潜伏HIV感染。

BET抑制剂可用于治疗癌症，包括血液肿瘤(诸如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)，上皮肿瘤(包括肺癌、乳腺癌和结肠癌)，中线癌，间质、肝、肾和神经肿瘤。

BET抑制剂可用于治疗一种或多种选自以下的癌症：脑癌(神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病(Cowden disease)、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、结肠直肠癌、肾母细胞瘤(Wilm′s tumor)、尤因氏肉瘤(Ewing′s sarcoma)、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤癌、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核母细胞性白血病、急性巨核细胞性白血病、前髓细胞性白血病、混合谱系白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、成淋巴细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、泌尿道上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口癌、GIST(胃肠道间质瘤)、NUT-中线癌和睾丸癌。

在一个实施方案中，癌症为白血病，例如选自急性单核细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和混合谱系白血病(MLL)的白血病。在另一个实施方案中，癌症为NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症为肺癌，诸如小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方案中，癌症为成神经细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症为伯基特氏淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症为宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症为食道癌。在另一个实施方案中，癌症为卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症为乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症为结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症为前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症为去势抵抗性前列腺癌。

在一个实施方案中，BET抑制剂适用的疾病或病况选自与全身炎性反应综合征相关的疾病，诸如败血症、烧伤、胰腺炎、严重创伤、出血和缺血。在该实施方案中，将在诊断点施用BET抑制剂以降低SIRS、休克发作、多器官功能障碍综合征(其包括急性肺损伤、ARDS、急性肾、肝、心脏或胃肠道损伤的发作和死亡)的发生率。在另一个实施方案中，BET抑制剂将在与败血症、出血、广泛的组织损伤、SIRS或MODS(多器官功能障碍综合征)的高风险相关的手术或其它程序之前施用。在一个具体实施方案中，BET抑制剂适用的疾病或病况是败血症、脓毒症综合征、脓毒性休克和内毒素血症。在另一个实施方案中，BET抑制剂适用于治疗急性或慢性胰腺炎。在另一个实施方案中，BET抑制剂适用于治疗烧伤。

在一个进一步方面，本发明提供了本发明的化合物，其用于疗法中。

在一个进一步方面，本发明提供了本发明的化合物，其用于治疗BET抑制剂适用的疾病或病况。

在一个进一步方面，本发明还提供了本发明的化合物，其用于治疗自身免疫疾病和/或炎性疾病和癌症。

在一个进一步方面，本发明提供了本发明的化合物，其用于治疗类风湿性关节炎。

在一个进一步方面，本发明提供了本发明的化合物，其用于治疗骨关节炎。

在一个进一步方面，本发明涉及治疗自身免疫疾病和/或炎性疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。在一个实施方案中，所述受试者是人受试者。

在又一个进一步方面，本发明涉及治疗类风湿性关节炎的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。

在又一个进一步方面，本发明涉及治疗骨关节炎的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。

在一个进一步方面，本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗自身免疫疾病和/或炎性疾病的药物中的用途。

在一个进一步方面，本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。

在一个进一步方面，本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗骨关节炎的药物中的用途。

药物组合物/施用途径/剂量

尽管对于在疗法中使用，本发明的化合物可以作为原料化学品施用，但通常将活性成分作为药物组合物呈现。

在一个进一步方面，提供了药物组合物，其包含本发明的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。

赋形剂必须是药学上可接受的并且与组合物的其它成分相容。根据本发明的另一方面，还提供了制备药物组合物的方法，其包括将本发明的化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。药物组合物可用于治疗本文所述的任何疾病。

由于本发明的化合物旨在用于药物组合物中，所以容易理解，它们各自优选以基本上纯(例如至少85％纯，尤其是至少98％纯(按重量计算的重量％))的形式提供。

药物组合物可以以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式呈现。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的日剂量或亚剂量或其适当的部分的那些。因此，此类单位剂量可以每天多于一次地施用。

药物组合物可适于通过任何适当的途径，例如通过口服(包括含服或舌下)、直肠、吸入、鼻内、局部(包括含服、舌下或透皮)、眼部(包括局部、眼内、结膜下、巩膜上、眼球筋膜囊下(sub-Tenon))、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或真皮内)途径施用。此类组合物可以通过药学领域已知的任何方法，例如通过使活性成分与赋形剂(一种或多种)混合制备。

在一个方面，药物组合物适于口服施用。适于口服施用的药物组合物可以作为离散单位诸如片剂或胶囊剂；粉末或颗粒；在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫或发泡物(whips)；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂呈现。

适于掺入片剂或胶囊的粉末可以通过将本发明的化合物减小至合适的细小尺寸(例如通过微粉化)并与类似制备的药物赋形剂诸如可食用碳水化合物例如淀粉或甘露糖醇混合来制备。也可以存在例如调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。

胶囊可以通过如上所述制备粉末混合物并填充形成的明胶壳来制备。在填充操作之前，可以向粉末混合物中加入助流剂和润滑剂，例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇。还可以加入崩解剂或增溶剂诸如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善摄入胶囊时药物的可利用性。

此外，当期望或必要时，还可以将合适的粘合剂、助流剂、润滑剂、甜味剂、香料、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖诸如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶诸如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型中的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。例如通过制备粉末混合物，造粒或击压，加入润滑剂和崩解剂并压制成片剂来配制片剂。通过将适当地粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质混合，并任选地与粘合剂诸如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，溶解阻滞剂诸如石蜡，再吸收促进剂诸如季盐和/或吸收剂诸如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合，制备粉末混合物。粉末混合物可以通过用粘合剂诸如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆(acadia mucilage)或纤维素或聚合物材料的溶液润湿并迫使通过筛网而造粒。作为造粒的替代方案，可以将粉末混合物运行通过压片机，并且结果是不完全形成的块破碎成颗粒。可以通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒，以防止粘附到片剂成型模具上。然后将润滑的混合物压成片剂。本发明的化合物也可以与自由流动的惰性赋形剂组合并直接压制成片剂，而不经过造粒或击压步骤。可以提供透明或不透明的保护性包衣，其由虫胶的密封包衣、糖或聚合物材料的包衣和蜡的抛光包衣组成。染料可以添加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。

口服流体诸如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制备，使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中制备，而酏剂通过使用无毒的含醇媒介物制备。可以通过将化合物分散在无毒的媒介物中来配制悬浮液。还可以加入增溶剂和乳化剂诸如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、风味添加剂诸如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂等。

用于口服施用的组合物可以设计成提供改良的释放概况，以便维持或以其它方式控制治疗活性剂的释放。

适当时，用于口服施用的剂量单位组合物可以微胶囊化。可以制备组合物以延长或维持释放，例如通过将微粒材料涂覆或包埋在聚合物、蜡等中。

用于鼻或吸入施用的药物组合物可以方便地配制为气雾剂、溶液、悬浮液、凝胶或干粉。对于适合于和/或适应于吸入施用的组合物，优选本发明的化合物为粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。尺寸减小的(例如微粉化的)化合物的优选粒径由约0.5至约10微米的D50值(例如如使用激光衍射所测量)定义。

用于吸入施用的药物组合物可以是干粉组合物或气雾剂制剂，其包含活性物质在药学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液。干粉组合物可以包含粉末基质诸如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇或淀粉，本发明的化合物(优选呈粒径减小的形式，例如呈微粉化的形式)，以及任选的性能改良剂诸如L-亮氨酸或另一种氨基酸和/或硬脂酸的金属盐诸如硬脂酸镁或硬脂酸钙。优选地，干粉可吸入组合物包含乳糖例如乳糖一水合物和本发明的化合物的干粉混合物。

在一个实施方案中，可以将适合于吸入施用的干粉组合物装入多个密封剂量容器中，所述容器提供在装在合适的吸入装置内的药物包上。如本领域已知的那样，容器可以是可破裂的、可剥离的或以其它方式可开启的(每次一个地)并且干粉组合物的剂量通过在吸入装置的吸口上吸入施用。药物包可以采取多种不同的形式，例如盘形或细长带。代表性的吸入装置是由GlaxoSmithKline销售的DISKHALER^TM吸入器装置、DISKUS^TM吸入装置和ELLIPTA^TM吸入装置。DISKUS^TM吸入装置例如描述于GB 2242134A中，并且ELLIPTA^TM吸入装置例如描述于WO 03/061743 A1、WO 2007/012871 A1和/或WO2007/068896中。

适于肠胃外施用的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与预期接受者的血液等渗的溶质；以及可以包括助悬剂和增稠剂的水性和非水性无菌悬浮液。组合物可以呈现于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需在临用前加入无菌液体载体例如注射用水。即用注射溶液和悬浮液可以由无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。

适于局部施用的药物组合物可以配制为软膏剂、乳膏剂、悬浮液、乳液、洗剂、粉末、溶液、糊剂、凝胶、泡沫、喷雾剂、气雾剂或油。此类药物组合物可以包括常规的添加剂，其包括但不限于防腐剂、辅助药物渗透的溶剂、共溶剂、润肤剂、推进剂、粘度调节剂(胶凝剂)、表面活性剂和载体。

对于眼睛或其它外部组织(例如口腔和皮肤)的治疗，组合物优选作为局部软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、喷雾剂或泡沫剂施用。当配制在软膏剂中时，活性成分可以与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，活性成分可以用水包油乳膏剂基质或油包水基质配制在乳膏剂中。适于局部施用于眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体，特别是水性溶剂中。

本发明的化合物的治疗有效量将取决于多种因素，包括例如受试者的年龄和重量、需要治疗的精确病况及其严重程度、制剂性质和施用途径，并将最终由主治医师或兽医决定。在药物组合物中，各剂量单位可以含有0.01至1000mg、更优选0.5至100mg的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(以游离碱计算)。

本发明的化合物可单独采用或与其它治疗剂组合采用。根据本发明的组合疗法因此包括施用至少一种本发明的化合物和使用至少一种其它治疗活性剂。本发明的化合物和其它治疗活性剂可在单一药物组合物中一起施用或分开施用，并且在分开施用时，这可同时或以任何顺序依次进行。

在一个进一步方面，提供了包含本发明的化合物连同一种或多种其它治疗活性剂和任选一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

本领域技术人员应清楚，当适当时，其它治疗成分可以以盐的形式(例如作为碱金属或胺盐或作为酸加成盐)或作为溶剂化物(例如水合物)使用，以优化治疗成分的活性和/或稳定性和/或物理特征(诸如溶解度)。还应清楚，当适当时，治疗成分可以以光学纯形式使用。

以上所提及的组合可便利地呈现为用于以药物组合物的形式使用且因此包含如上文定义的组合连同一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物代表本发明的一个进一步方面。

实施例制备

缩写

DCM 二氯甲烷

DIPEA 二异丙基乙胺

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

g 克

h 小时

EtOAc 乙酸乙酯

Et₃N 三乙胺

HPLC 高效液相色谱

L 升

LCMS 液相色谱-质谱

min 分钟

mg 毫克

MHz 兆赫

mL 毫升

mM 毫摩尔浓度

nm 纳米

ppm 百万分率

RT 室温

rpm 每分钟转数

t_RET 保留时间

μm 微米。

实验细节

LCMS

系统A

柱：50mm x 2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC CSH C₁₈

流速：1mL/min。

温度：40℃

UV检测范围：210至350nm

质谱：使用交替扫描正和负模式电喷射电离在质谱仪上记录

使用的溶剂是：

A＝用氨溶液调节至pH10的10mM碳酸氢铵水溶液。

B＝乙腈。

¹H NMR

在具有低温探针的Bruker AV-400 400MHz光谱仪上在DMSO-d₆中记录¹H NMR光谱，并针对0.00ppm的TMS进行参照。

实施例1：(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯(式(I)的化合物)的制备

(3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)甲醇

将(4-氟-3-硝基苯基)甲醇(2.4g，14.02mmol)和(四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(2.423g，21.04mmol)悬浮于水(30ml)中并加入碳酸钾(2.52g，18.23mmol)，然后将混合物在80℃搅拌24h，然后在搅拌的同时使其冷却。将所得混合物用EtOAc(50mL)萃取并将有机层用水(50ml)洗涤，干燥并在真空中蒸发，以得到标题化合物(3.60g，13.52mmol，96％产率)，为深黄色固体。LCMS(系统A)：t_RET＝0.82min；MH⁺267。标题化合物不经纯化即用于下一步中。

(3-氨基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)甲醇

将(3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)甲醇(48g，180mmol)溶解于乙醇(400mL)中并经5重量％(3g，28.2mmol)Pd/C在大气压下氢化18h，然后将混合物在氮气下通过硅藻土过滤，并将滤液在真空中蒸发，以得到标题化合物(50g，212mmol，117％产率)，为深棕色油状物。LCMS(系统A)：t_RET＝0.62min；MH⁺237。产物不经进一步纯化即运用到下一步中。

5-(5-(羟基甲基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1，3- 二甲基吡啶-2-(1H)-酮

将(3-氨基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)甲醇(50g，190mmol)悬浮于水(500mL)中并加入1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲醛(31.7g，209mmol)和溴化十六烷基吡啶鎓(14.64g，38.1mmol)，然后将混合物剧烈搅拌过夜。将混合物用DCM(3x300mL)萃取并将合并的有机物用盐水(500mL)洗涤，然后干燥并蒸发，以得到深棕色固体。将其悬浮于EtOAc(500mL)中并加热至回流保持2h，然后冷却并通过过滤收集产物。将粗制物再悬浮于EtOAc(500ml)中并再次加热至回流，然后在冰浴中冷却并通过过滤收集产物并用乙醚(300ml)洗涤，以得到棕色固体(64g)。LCMS显示干净的产物，但是NMR谱显示在产物中存在残余的0.2当量的十六烷基吡啶鎓盐。将其不经纯化即运用到下一步中。标题化合物为90％Wt纯度。LCMS(系统A)：t_RET＝0.66min；MH⁺368。

(2S，3R)-2-氨基-3-羟基丁酸异丙酯，盐酸盐

将AcCl(96mL，1343mmol)逐滴加入到2-丙醇(500mL，6490mmol)中，然后将混合物搅拌20min，然后加入(2S，3R)-2-氨基-3-羟基丁酸(40g，336mmol)。将所得悬浮液加热至回流过夜，然后冷却并在真空中蒸发，以得到无色油状物。将其用乙醚(300mL)研磨并将产物通过过滤收集，以得到标题化合物，为无色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.49(br.s.，3H)，5.66(br.s.，1H)，4.99(td，J＝6.24，12.47Hz，1H)，4.09(br.s.，1H)，3.80(d，J＝4.16Hz，1H)，1.17-1.29(m，9H)

2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)- 1H-苯并[d]咪唑-5-甲醛

将5-(5-(羟基甲基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1，3-二甲基吡啶-2(1H)-酮(64g，122mmol)溶解于DCM(600mL)中并加入二氧化锰(42.4g，488mmol)，然后将混合物在回流下加热18h。LCMS显示完全转化，并将混合物过滤并将固体用DCM洗涤。将滤液在真空中蒸发，以得到棕色胶状物，将其溶解于DCM(100mL)中并加载至340g二氧化硅柱上，然后用0-50％EtOH/EtOAc洗脱并将含有产物的级分在真空中蒸发，以得到棕色固体。将其用乙醚(200mL)研磨并将固体通过过滤收集，然后悬浮于EtOAc(300mL)中并加热至回流保持1h，然后在冰浴中冷却并将产物通过过滤收集，以得到2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醛(42.5g，116mmol，95％产率)，为沙子色固体。LCMS(系统A)：t_RET＝0.74min；MH⁺366。将滤液在真空中蒸发并将残余物在回流下于EtOAc(50mL)中研磨30min，然后冷却并过滤，以得到额外部分的产物(3g)，为米黄色固体，NMR与期望的醛一致。标题化合物为80％Wt纯度。

(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯

将2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醛(42g，115mmol)和(2S，3R)-2-氨基-3-羟基丁酸异丙酯盐酸盐(34.1g，172mmol)溶解于DCM(500mL)中，然后加入Et₃N(48.1mL，345mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(73.1g，345mmol)并将混合物在室温搅拌24h。将混合物加入到在5升圆锥形烧瓶中的1.5升的饱和碳酸氢钠溶液中并剧烈搅拌1h，然后将有机层分离，将水层用DCM(500mL)萃取并将合并的有机物用水(500mL)和盐水(500mL)洗涤，经硫酸钠干燥并在真空中蒸发，以得到棕色泡沫。将粗产物溶解于DCM(200mL)中并加载至750g二氧化硅柱上，然后用0-30％EtOH/EtOAc洗脱并将干净的含有产物的级分在真空中蒸发，以得到标题化合物(51g，100mmol，87％产率)，为米黄色泡沫。LCMS(系统A)：t_RET＝0.86min；MH⁺511。

¹H NMR(d6-DMSO)：δ1.06-1.26(m，13H)，1.90-2.02(m，1H)，2.11(s，3H)，2.20-2.41(m，1H)，3.00(d，J＝4.9Hz，1H)，3.05-3.16(m，2H)，3.56(s，3H)，3.66(d，J＝1.32Hz，1H)，3.76-3.86(m，1H)，3.90(d，J＝13.2Hz，1H)，4.26(d，J＝7.3Hz，2H)，4.67(d，J＝5.4Hz，1H)，4.93(sept，J＝6.2Hz，1H)，7.22(dd，J＝8.3，1.2Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.61(d，J＝8.3Hz，1H)，7.73(dd，J＝2.3，1.1Hz，1H)，8.12(d，J＝2.2Hz，1H).

实施例2：(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯的乙二磺酸盐的制备

向carousel管中加入(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯(对于制备，参见实施例1，100mg，0.196mmol)和异丙醇(1.35mL)。将搅拌的混合物加热至40℃并加入乙烷-1，2-二磺酸(44.7mg，0.235mmol)于异丙醇(557μL)中的溶液。将混合物在40℃搅拌15h。该时间之后，固体已经形成。将反应物从carousel中移出，直接冷却至24℃并搅拌6h。该时间之后，将悬浮液过滤并在真空下干燥5min。将转移至小瓶中的固体在真空烘箱中在40℃进一步干燥3天，以得到标题化合物(91mg，66.3％产率)，为白色结晶固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.61(1H，br.s.)，9.29(1H，br.s.)，8.35(1H，br.s.)，8.02(1H，d，J＝8.6Hz)，7.92(1H，s)，7.82-7.75(1H，m)，7.58(1H，d，J＝8.6Hz)，4.94(1H，spt，J＝6.2Hz)，4.46-4.34(4H，m)，4.05(1H，quin，J＝6.4Hz)，3.77-3.69(2H，m)，3.66(1H，br.s.)，3.59(3H，s)，3.17-3.08(2H，m)，2.66(4H，s)，2.13(3H，s)，2.06-1.93(1H，m)，1.31-1.16(13H，m).LCMS(系统A)：t_RET＝0.88min；MH⁺511.

实施例3：(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐(式(II)的化合物)的可替代的制备

向EasyMax 400mL反应器中加入(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯(对于示例性制备，参见实施例1)(10g，19.58mmol)和异丙醇(135mL)。在单独的烧瓶中制备乙烷-1，2-二磺酸(4.47g，23.50mmol)于异丙醇(28mL)中的溶液，其在40℃温热并过滤。

向以250rpm搅拌的(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯的溶液中加入40％的乙烷-1，2-二磺酸溶液(11.2mL)。加入(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐(参见例如上述实施例2)的晶种(131mg)并将混合物在40℃搅拌1.5h。该时间之后，经6h逐滴加入剩余的60％的乙烷-1，2-二磺酸溶液(16.8mL)。完成加入乙烷-1，2-二磺酸溶液后，将混合物经3.5h缓慢地冷却至20℃并在室温搅拌另外11h。将所得悬浮液用滤杯和纸芯过滤器过滤，流出的滤液是澄清的。将滤饼用IPA(2x20mL和10mL)洗涤并在真空下进一步干燥，以得到湿滤饼(24.06g)。收集固体并在真空烘箱(44℃)中干燥22h，以得到标题化合物(11.337g，16.02mmol，82％产率)，为白色结晶固体。LCMS(系统A)：t_RET＝0.88min；MH⁺511。

实施例4：(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯1，2-乙二磺酸盐水合物的制备

在带有搅拌棒的Wheaton小瓶中在室温(26℃)下，将乙烷1，2-二磺酸(467.4mg)于去离子水(175μL)中的溶液加入无定形(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯(对于实施例制备，参见实施例1)(1.0g)于丙酮(8mL)中的溶液中。将含有乙烷1-2-二磺酸的小瓶用去离子水(175μL)冲洗。将混合物加热至50℃，然后在50℃搅拌30分钟。将反应混合物经1小时从50℃冷却至室温，且然后从室温再加热至50℃。将温度在50℃维持30分钟，且然后冷却至26℃。将悬浮液在26℃搅拌14.5小时。通过过滤分离固体，并在真空下脱液10分钟，以得到标题化合物，为白色结晶固体(824mg)。

实施例5：(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯，1，2-乙二磺酸水合物盐的可替代的制备

向搅拌的结晶(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯1，2-乙二磺酸盐(对于实施例制备，参见实施例2或3)(26mg)于7.3％v/v含水丙-2-醇(0.1mL)中的悬浮液中加入(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯1，2-乙二磺酸盐水合物(对于实施例制备，参见实施例4)的一些晶种。在5分钟内观察到无水物转化为水合物。

生物学数据

时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)测定

使用时间分辨荧光共振能量转移结合测定来评估结合。其使用在蛋白的N-末端处的6His纯化标签作为用铕螯合物标记的抗-6His抗体(PerkinElmer AD0111)的表位，从而允许铕与起供体荧光团作用的蛋白结合。溴结构域BRD2、BRD3、BRD4和BRDT的小分子高亲和力结合剂已经用Alexa Fluor647(参照化合物X)标记，并且其起FRET对中的受体(acceptor)的作用。

参照化合物X：4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H- 苯并[f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮杂 -4-基)乙酰氨基)戊基)氨基)-6-氧代己基)-2-((2E，4E)-5-(3，3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-2-基)戊-2，4- 二烯-1-亚基)-3-甲基-5-磺基吲哚啉-1-基)丁烷-1-磺酸盐)

向N-(5-氨基戊基)-2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮杂-4-基)乙酰胺(对于制备，参见参照化合物J，WO2011/054848A1，1.7mg，3.53μmol)于DMF(40μL)中的溶液中加入AlexaFluor647-ONSu(2.16mg，1.966μmol)同样于DMF(100μL)中的溶液。将混合物用DIPEA(1μl，5.73μmol)碱化并在涡旋混合器上搅动过夜。将反应混合物蒸发至干。将固体溶解于乙腈/水/乙酸(5/4/1，＜1mL)中，过滤并施加于Phenomenex Jupiter C18制备型柱上并用以下梯度(A＝0.1％三氟乙酸的水溶液，B＝0.1％TFA/90％乙腈/10％水)洗脱：流速＝10ml/min.，AU＝20/10(214nm)：5-35％，t＝0min：B＝5％；t＝10min：B＝5％；t＝100min：B＝35％；t＝115min：B＝100％(Sep.grad：0.33％/min)。

主要的组分经范围26-28％B洗脱，但似乎由两个峰构成。将应当含有“两种”组分的中间级分(F1.26)通过分析型HPLC(Spherisorb ODS2，1-35％，经60min)分析：单一组分在28％B洗脱。

合并级分F1.25/26&27并蒸发至干。用DMF转移，蒸发至干，用干燥的乙醚研磨并将蓝色固体在＜0.2mbar干燥过夜：1.54mg。

分析型HPLC(Sphersisorb ODS2，1-35％B，经60min)：MSM10520-1：[M+H]⁺(观测值)：661.8/-与M-29对应。对于1320.984的计算质量(其为M-29)，这相等于[(M+2H)/2]⁺。这是Alexa Fluor 647染料的标准发生事件(occurence)并代表在质谱仪条件下的两个亚甲基基团的理论损失。

测定原理：在不存在竞争性的化合物的情况下，铕的激发导致供体在λ618nm处发射，其激发Alexa标记的溴结构域结合化合物，导致可在λ647nm处测量的增加的能量转移。在存在足够浓度的可以结合这些蛋白的化合物的情况下，该相互作用被破坏，导致荧光共振能量转移的可以计量的下降。

使用突变的蛋白评估本发明的化合物与溴结构域BRD2、BRD3、BRD4和BRDT的结合以检测与溴结构域上的结合结构域1(BD1)或结合结构域2(BD2)的差异结合。乙酰基赖氨酸结合口袋中的这些单一残基突变大大地降低氟配体(参照化合物X)对突变的结构域的亲和力(针对非突变的结构域有＞1000倍的选择性)。因此，在最终的测定条件下，氟配体与突变的结构域的结合不能够被检测到并且因此该测定适合于确定化合物与单一非突变的溴结构域的结合。

蛋白产生：将重组人溴结构域[(BRD2(1-473)(Y113A)和(Y386A)、BRD3(1-435)(Y73A)和(Y348A)BRD4(1-477)(Y97A)和(Y390A)和BRDT(1-397)(Y66A)和(Y309A)]在大肠杆菌细胞中表达(对于BRD2/3/4，于pET15b载体中并且对于BRDT，于pET28a载体中)(在N-末端处具有6-His标签)。将His-标记的溴结构域沉淀(pellet)再悬浮于50mM HEPES(pH7.5)，300mM NaCl，10mM咪唑&1μl/ml蛋白酶抑制剂混合物中并使用声处理从大肠杆菌细胞中萃取并使用镍琼脂糖高效柱纯化，洗涤蛋白，且然后用0-500mM咪唑的线性梯度(含有缓冲剂50mM HEPES(pH7.5)，150mM NaCl，500mM咪唑)经20个柱体积洗脱。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成最终的纯化。将纯化的蛋白在-80℃于20mM HEPES pH 7.5和100mM NaCl中储存。通过肽质量指纹图谱确认蛋白身份并通过质谱法确认预测的分子量。

溴结构域BRD2、3、4和T，BD1+BD2突变体测定的方案：将所有测定组分溶解在50mMHEPES pH7.4，50mM NaCl，5％甘油，1mM DTT和1mM CHAPS的缓冲剂组合物中。溴结构域蛋白的最终浓度为10nM并且Alexa Fluor647配体是在Kd。将这些组分预混合并将5mL的该反应混合物加入到在Greiner 384孔黑色低容量微量滴定板中的含有50nl各种浓度的测试化合物或DMSO媒介物(最终0.5％DMSO)的所有孔中并在暗处在室温孵育30分钟。将5μL含有1.5nM最终浓度的抗-6His铕螯合物的检测混合物加入到所有孔中并进行至少30分钟的进一步暗处孵育。然后将各板在Envision读板器(platereader)(·ex＝317nm，供体·em＝615nm；受体·em＝665nm；Dichroic LANCE dual)上读取。在两个发射波长处进行时间分辨荧光强度测量并计算受体/供体比并用于数据分析。将所有数据归一化为在每个板上的16个高(抑制剂对照-WO 2011/054846A1的实施例11)和16个低(DMSO)对照孔的平均值。然后应用以下形式的四参数曲线拟合：

y＝a+((b-a)/(1+(10^x/10^c)^d)

其中‘a’是最小值，‘b’是Hill斜率(Hill slope)，‘c’是pIC₅₀且‘d’是最大值。

结果：发现实施例1在BRD4 BD1测定中具有7.3的平均pIC₅₀并且在BRD4 BD2测定中具有6.8的平均pIC₅₀。发现实施例1的乙二磺酸盐在BRD4 BD1测定中具有7.3的平均pIC₅₀并且在BRD4 BD2测定中具有6.6的平均pIC₅₀。

LPS诱导的MCP-1从人全血中的产生的测量

Toll-样受体的激动剂诸如细菌脂多糖(LPS)对单核细胞的活化导致关键的炎性介质(包括MCP-1)的产生。此类途径被广泛地认为对于一系列自身免疫和炎性病症的病理生理学是关键的。在含有肝素钠的管(Leo Pharmaceuticals)中收集血液(10单位的肝素/mL血液)。制备含有1μL于100％DMSO中的测试样品的96-孔化合物板(由于供体变异性而重复两次)。将130μL全血分配至96-孔化合物板的每个孔中并在37℃，5％CO₂下孵育30min。将10μL配制在PBS中的脂多糖(来自伤寒沙门氏菌(Salmonella typhosa)；L6386)(200ng/mL最终测定浓度)加入到化合物板的每个孔中。然后将所述板放置于增湿的原代细胞培养器中，在37℃，5％CO₂保持18-24小时。将140μL PBS加入到含有血液的化合物板的所有孔中。然后将板密封并以2500rpm离心10min。将25μL细胞上清液放置于用人MCP-1捕获抗体预包被的96-孔MSD板中。将板密封并放置在振荡器上以600rpm保持1小时(室温)。将25μL用MSDSULFO-TAG^TM试剂标记的抗人MCP-1抗体加入到MSD板的每个孔中(50X储备液用Diluent 1001∶50稀释，最终测定浓度是1μg/mL)。然后将板再密封并振摇另外一小时，然后用PBS洗涤。然后将150μL 2X MSD Read Buffer T(4X MSD Read Buffer T储备液用去离子水50∶50稀释)加入到每个孔中并将板在MSD Sector Imager 6000上读取。从数据中产生每种化合物的浓度响应曲线并计算pIC₅₀值。

结果：实施例1具有7.6的平均pIC₅₀。实施例1的乙二磺酸盐具有7.5的平均pIC₅₀。

这些数据证实了在上面的全血测定中测试的溴结构域抑制剂抑制关键炎性介质MCP-1的产生。

通过hCES-1的水解

通过羧酸酯酶1(CES1)水解含有ESM的BET抑制剂是递送靶标分子的一个方面。使用HPLC测定确定某些本发明的化合物被重组人CES1水解的速率。从Novoprotein，Summit，New Jersey，USA(目录号C450)获得在人细胞中表达并纯化成同质的重组人CES1(Gly18-Glu563，在C-末端处携带多组氨酸标签)。反应在384孔板中在50mM磷酸钠pH 7.5/100 mMNaCl的缓冲液中在20℃进行。测定使用固定浓度的测试化合物(50μM)和CES1(50nM)并且反应的时程通过在递增的时间通过加入甲酸以降低pH而停止样品而获得。随后通过HPLC分析停止的样品以解析产物酸与未水解的酯，其使用50x2mm C18 5μM反相柱(PhenomenexGemini)，流速为1ml/min，使用乙腈/水(含有0.1％甲酸)的梯度。色谱法使用在300nm波长处的吸光度监测。形成的产物的％使用积分的峰面积来确定并用于确定初始反应速率。通过用初始反应速率除以CES1浓度来获得在这些条件下CES1对每种测试化合物的比活性(以μM/min/μM为单位)。

结果：实施例1在上面的测定中具有0.21的平均水解速率(μM的水解的测试化合物/分钟/μM的CES1)(n＝2)。

Claims

1.(2S，3R)-2-(((2-(1，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-3-羟基丁酸异丙酯乙二磺酸盐的结晶水合物。

2.根据权利要求1所述的结晶水合物，其为一水合物。

3.根据权利要求1或2所述的结晶水合物，其具有基本上如图1中所示的X-射线粉末衍射图(XRPD)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶水合物，其具有X-射线粉末衍射图，所述X-射线粉末衍射图在5.1、7.9、10.1、11.3、11.9、12.9、13.4、14.2、18.3、20.3、21.0和21.8度的2θ值、±0.1°2θ实验误差处具有特定峰。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的结晶水合物，其具有基本上如图2中所示的DSC热分析图。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的结晶水合物，其具有如通过DSC所测定的约223℃的起始熔点。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的结晶水合物，其具有基本上如图3中所示的FT拉曼光谱。

8.药物组合物，其包含如权利要求1至7中任一项中所定义的结晶水合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其进一步包含一种或多种其他治疗活性剂。

10.如权利要求1至7中任一项中所定义的结晶水合物，其用于疗法中。

11.如权利要求1至7中任一项中所定义的结晶水合物，其用于治疗BET抑制剂适用的疾病或病况。

12.用于根据权利要求11所述用途的结晶水合物，其中所述疾病或病况是自身免疫疾病和/或炎性疾病。

13.用于根据权利要求11所述用途的结晶水合物，其中所述疾病或病况是类风湿性关节炎。

14.用于根据权利要求11所述用途的结晶水合物，其中所述疾病或病况是骨关节炎。

15.BET抑制剂适用的疾病或病况的治疗方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至7中任一项中所定义的结晶水合物。

16.根据权利要求15所述的治疗方法，其中所述BET抑制剂适用的疾病或病况是自身免疫疾病和/或炎性疾病。

17.根据权利要求15所述的治疗方法，其中所述BET抑制剂适用的疾病或病况是类风湿性关节炎。

18.根据权利要求15所述的治疗方法，其中所述BET抑制剂适用的疾病或病况是骨关节炎。