CN109153646A - 作为溴结构域抑制剂的吡啶二甲酰胺衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)化合物及其盐、包含此类化合物的药物组合物以及其在治疗中的用途。

Description

作为溴结构域抑制剂的吡啶二甲酰胺衍生物
发明领域
本发明涉及作为溴结构域抑制剂的吡啶基衍生物，其制备方法，包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物或所述组合物在治疗各种疾病或病症（例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病症、病毒感染和癌症）中的用途。
发明背景
真核生物的基因组在细胞核内高度组织化。双链DNA的长链包裹在组蛋白的八聚体（最通常包含组蛋白H2A、H2B、H3和H4的两个拷贝）的周围以形成核小体。然后通过核小体的聚集和折叠进一步压缩该基本单元，以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同的凝聚状态是可能的，并且该结构的紧密性在细胞周期期间变化，在细胞分裂过程中最紧密。染色质结构在调节基因转录中起关键作用，基因转录不能从高度凝聚的染色质中有效地发生。染色质结构由对组蛋白（尤其是组蛋白H3和H4）的一系列翻译后修饰控制，所述翻译后修饰最常发生于延伸超出核心核小体结构的组蛋白尾部内。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、SUMO化。这些表观遗传标记（epigenetic mark）由特定酶（specific enzyme）写入和擦除，所述特定酶将所述标记置于组蛋白尾部内的特定残基上，从而形成表观遗传密码，该密码然后由细胞翻译以允许染色质结构的基因特异性调节并从而转录。
组蛋白乙酰化最经常与基因转录的激活有关，因为该修饰通过改变静电作用而放松DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除了这种物理变化，特定的蛋白识别并结合至组蛋白内的乙酰化赖氨酸残基，以读取表观遗传密码。溴结构域是蛋白内的小（~110个氨基酸）而独特的结构域，其在组蛋白的背景下通常但不仅仅与乙酰化赖氨酸残基结合。已知具有大约50种蛋白的家族含有溴结构域，它们在细胞内具有一系列功能。
含有溴结构域的蛋白的BET家族包括4种蛋白（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT），它们含有能够与极为接近的两个乙酰化赖氨酸残基结合的串联溴结构域，增加了相互作用的特异性。从各个BET蛋白的N-末端开始编号，所述串联溴结构域通常标记为结合域1（BD1）和结合域2（BD2）(Chung等人, J Med. Chem,.2011, 54, 3827-3838)。
Chan等人报道，BET溴结构域抑制在人单核细胞中以基因特异性方式抑制对细胞因子-Jak-STAT信号传导的转录应答，这表明BET抑制通过抑制细胞因子活性部分地减少了炎症。(Chan等人, Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297)。
Klein等人报道，溴结构域蛋白抑制剂I-BET151抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞中炎性基因和基质降解酶的表达，这表明在类风湿性关节炎中靶向表观遗传阅读器蛋白（epigenetic reader protein）的治疗潜力。(Klein等人, Ann. Rheum. Dis., 2014,0:1-8)。
Park-Min等人报道，靶向溴和外末端（BET）蛋白（其通过与乙酰化组蛋白结合“读取”染色质状态）的I-BET151强烈抑制破骨细胞生成。(Park-Min等人, Nature Communications , 2014, 5, 5418)。
PCT专利申请PCT/EP2016/070519、PCT/EP2016/072216和PCT/EP2016/073532均描述了作为溴结构域抑制剂的一系列吡啶酮衍生物。
发明内容
本发明涉及式(I)化合物或其盐
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R3为-H、-C1-4烷基、环丙基、氟、氯、-CH2F、-C0-3烷基OR10或C0-3烷基CN；
R4为苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可以形同或不同的R6基团取代；
每个R5独立地选自氟、-C1-6烷基-R13、-OCH3、-O-C2-6烷基-R13、-CN、-OH、-SO2C1-3烷基和-NR14R15；
每个R6独立地选自氧代、卤素、-OCF3、-OCHF2、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR8、-C0-3烷基-NR14R15、-C0-3烷基-CONR11R12、-C0-3烷基-杂环基、-C0-3烷基-O-C1-2烷基-杂环基、-CN和-SO2R7，其中杂环基任选被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代；
R7为-C1-3烷基或-NR11R12；
R8为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12、-C2-3烷基-OH或-C2-3烷基-O-C1-3烷基；
R9为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12或-C2-3烷基-OH；
R10为-H或-C1-3烷基；
每个R11和每个R12独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基；
R13为-H、-OR9、-NR14R15或-CN；
每个R14和每个R15独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C(O)C1-3烷基、-C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-C2-3烷基-OH和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中-C1-6烷基和C3-7环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R14和R15可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基。
本发明化合物已经显示为溴结构域抑制剂，特别是BD2选择性抑制剂，并且可以用于治疗各种疾病或病症，例如急性或慢性自身免疫和/或炎性病症，例如类风湿性关节炎和癌症。因此，本发明还涉及包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本发明还进一步涉及在需要治疗的对象中治疗与溴结构域相关的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本发明还进一步涉及制备式(I)化合物的方法。
发明详述
式(I)化合物及其盐在本文中称为“本发明化合物”。
“BD2”指的是蛋白BRD2、BRD3、BRD4或BRDT的BET家族中的任何一个的结合域2。
“烷基”指的是具有指定碳原子数的饱和烃链。例如，本文所用的术语“C1-6烷基”指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。例如，术语“C0-3烷基”指的是具有0（即键）至3个碳原子的直链或支链烷基。代表性的支链烷基具有一个、两个或三个支链。烷基可以形成链的一部分，例如，-C0-4烷基-杂环基指的是连接至杂环基的具有0（即键）至4个碳原子的直链或支链烷基链。“烷基”包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。
“环烷基”指的是在环中具有指定成员原子数的饱和烃单环或双环或饱和螺连接的双环烃环。例如，本文所用的术语“C3-7环烷基”指的是具有3至7个成员原子的环烷基。C3-7环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和螺[3.3]庚基。C3-7环烷基的另一具体实例是双环[3.1.0]己基。
“对映体过量”（ee）是一种对映体相对于另一种对映体的过量，以百分比表示。在外消旋修饰中，由于两种对映体以相等的量存在，因此对映体过量为零（0％ee）。然而，如果富集一种对映体使其占产物的95％，那么对映体过量将是90％ee（富集的对映体的量95％减去另一种对映体的量5％）。
“对映体富集的”指的是其中对映体过量（ee）大于零的产物。例如，“对映体富集的”是指其中对映体过量大于50％ee、大于75％ee和大于90％ee的产物。
本文所用的“对映体纯的”指的是其中对映体过量为99％或更高的产物。
“半衰期”指的是一半量的物质在体外或体内转化为另一种化学上不同的物质所需的时间。
“卤素”指的是卤素基团，例如氟、氯、溴或碘。
“杂芳基”指的是具有5、6、8、9、10或11个成员原子的单环或双环基团，包括1、2或3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子，其中该基团的至少一部分是芳族的。与该分子的其余部分的连接点可以是任何合适的碳或氮原子。“杂芳基”的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、二氢苯并二氧杂环己二烯基、苯并噻吩基、苯并氮杂䓬基、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂䓬基、吲哚嗪基、吲哚基、吲哚啉基、异吲哚基、二氢吲哚基、苯并咪唑基、二氢苯并咪唑基、苯并噁唑基、二氢苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、二氢苯并异噻唑基、吲唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并三唑基、三唑并吡啶基、嘌呤基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、1,5-萘啶基、1,6-萘啶基、1,7-萘啶基、1,8-萘啶基和喋啶基。
“杂原子”指的是氮、硫或氧原子。
“杂环基”指的是含有4、5、6、7、8、9或10个环成员原子的非芳族杂环单环或双环系统，包括一个杂原子并任选地含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子。“杂环基”的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、1,3-二氧杂环戊烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、1,3-二氧杂环己烷基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-氧硫杂环戊烷基、1,3-氧硫杂环己烷基、1,3-二硫杂环己烷基、1,4-氧硫杂环戊烷基、1,4-氧硫杂环己烷基、1,4-二硫杂环己烷基、吗啉基、硫代吗啉基、六氢-1H-1,4-二氮杂䓬基、氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂双环[4.3.0]壬基、氧杂双环[2.2.1]庚基、1,1-二氧化四氢-2H-噻喃基、1,5,9-三氮杂环十二烷基、3-氧杂双环[3.1.0]己基和3-氮杂双环[3.1.0]己基。“4至7元杂环基”指的是含有4、5、6或7个环成员原子的非芳族杂环单环或双环系统，包括一个杂原子并任选含有选自氮、氧或硫的另外的杂原子。
“成员原子”指的是形成链或环的一个或多个原子。当链中和环内存在多于一个成员原子时，每个成员原子与链或环中的相邻成员原子共价键合。构成连接在链或环上的取代基的原子不是链或环中的成员原子。
提及基团时的“取代”表示连接在该基团内的成员原子上的氢原子被替代。应当理解，术语“取代”包括如下隐含条件，即这种取代与被取代的原子和取代基的允许价态一致，并且取代产生稳定的化合物（即不会自发地进行转化（例如，重排、环化或消除）的化合物）。在某些实施方案中，单个原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合该原子的允许价态即可。对于每个取代或任选取代的基团，本文都定义了合适的取代基。
“药学上可接受的”指的是在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触而没有过多毒性、刺激或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和剂型。
“药学上可接受的赋形剂”指的是涉及赋予药物组合物形式或稠度的药学上可接受的材料、组合物或载体。当混合时，每种赋形剂必须与药物组合物的其他成分相容，以避免当给药至患者时会显著降低式(I)化合物或其药学上可接受的盐的功效的相互作用。此外，每种赋形剂当然必须是药学上可接受的，例如，纯度足够高。
“rac”指的是式(I)化合物的外消旋混合物。例如，“rac-(2S,3R,4R)”指的是(2S,3R,4R)对映异构体和(2R,3S,4S)对映异构体的外消旋混合物。
本发明化合物可以以固体或液体形式存在。在固态下，本发明化合物可以以结晶或非结晶形式存在，或以其混合物存在。对于结晶形式的本发明化合物，技术人员将理解，可以形成药学上可接受的溶剂化物，其中溶剂分子在结晶期间结合到晶格中。溶剂化物可以包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、N,N-二甲基亚砜（DMSO）、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或者它们可以包括水作为结合到晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量水的组合物。本发明包括所有这样的溶剂化物。
还应理解，以结晶形式存在的某些本发明化合物，包括其各种溶剂化物，可表现出多晶型（即以不同晶体结构存在的能力）。这些不同的结晶形式通常称为“多晶型物”。本发明包括这样的多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在堆积、几何排列和结晶固态的其他描述性质方面不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出不同的熔点、IR光谱和X射线粉末衍射图案，这可用于鉴定。应当理解，可以产生不同的多晶型物，例如，通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂。例如，温度、压力或溶剂的变化可能导致多晶型物。另外，一种多晶型物可在某些条件下自发地转化为另一种多晶型物。可以使用许多常规分析技术表征和区分式(I)化合物的多晶型，包括但不限于X射线粉末衍射（XRPD）图案、红外（IR）光谱、拉曼光谱、差示扫描量热法（DSC）、热重分析（TGA）和固态核磁共振（SSNMR）。
根据式(I)的化合物可能含有一个或多个不对称中心（也称为手性中心），因此可以以单独的对映异构体、非对映异构体或其他立体异构形式或它们的混合物存在。手性中心，例如手性碳原子，也可以存在于取代基如烷基中。当未指定式(I)或本文所示的任何化学结构中存在的手性中心的立体化学时，该结构旨在涵盖任何立体异构体及其所有混合物。因此，含有一个或多个手性中心的根据式(I)的化合物可以以外消旋混合物、对映体富集的混合物、或以对映体纯的单一立体异构体的形式使用。因此，本发明包括式(I)化合物的所有异构体，无论是作为经分离使得基本上不含其他异构体（即纯的）的单独异构体，还是作为混合物（即外消旋混合物）。经分离使得基本上不含其他异构体（即纯的）的单独异构体可以被分离，使得存在少于10％，特别是少于约1％，例如少于约0.1％的另一种异构体。
具有单个立体中心的外消旋化合物表示为无立体化学（单键）或具有标注（+/-）或rac。其中相对立体化学已知的具有两个或更多个立体中心的外消旋化合物表示为顺式或反式，如在结构中所绘制。具有未知的绝对立体化学但已知的相对立体化学的已拆分的单一对映异构体用具有所绘制的适当相对立体化学的(R*或S*)指示。
在表示非对映异构体且仅涉及相对立体化学的情况下，使用粗体或散列的实键符号。在已知绝对立体化学且化合物为单一对映异构体的情况下，适当使用粗体或散列的楔形符号。
含有一个或多个不对称中心的根据式(I)的化合物的单个立体异构体可以通过本领域技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以通过如下方法进行：（1）形成非对映异构体盐、络合物或其他衍生物；（2）与立体异构体特异性试剂的选择性反应，例如通过酶促氧化或还原；或（3）在手性环境中通过气-液或液相色谱法，例如在手性载体如带有结合的手性配体的硅胶上或在手性溶剂存在下。应当理解，当通过上述分离方法之一将所需的立体异构体转化为另一种化学实体时，需要进一步的步骤来释放所需的形式。或者，可以通过使用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种来合成特定的立体异构体。
应当理解，对于式(I)化合物，可能观察到互变异构体。任何与互变异构体的生物活性有关的评论都应该认为包括两种互变异构体。
应理解，本文提及的式(I)化合物及其盐包括作为游离碱或作为其盐例如作为其药学上可接受的盐的式(I)化合物。因此，在一个实施方案中，本发明涉及作为游离碱的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其盐。在进一步的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其药学上可接受的盐。
由于它们在医药中的潜在用途，式(I)化合物的盐合意地是药学上可接受的。合适的药学上可接受的盐可包括酸加成盐或碱加成盐。关于合适的药学上可接受的盐的综述，参见Berge等人, J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)。通常，通过适当使用所需的酸或碱，可以容易地制备药学上可接受的盐。所得盐可以从溶液中沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。
药学上可接受的酸加成盐可以通过式(I)化合物与合适的无机或有机酸（例如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸(如2-萘磺酸)或己酸）的反应形成，任选在合适的溶剂（如有机溶剂）中，以得到通常例如通过结晶和过滤或通过蒸发然后研磨来分离的盐。式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可包含或例如是氢溴酸盐，盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐（如2-萘磺酸盐）或己酸盐。
其他非药学上可接受的盐，例如甲酸盐或三氟乙酸盐，可以用于例如分离式(I)化合物，并且包括在本发明的范围内。
本发明在其范围内包括式(I)化合物的所有可能的化学计量和非化学计量形式的盐。
从上述内容可以理解，式(I)化合物及其盐的溶剂化物、异构体和多晶型包括在本发明范围内。
发明描述
在第一方面，提供了式(I)化合物或其盐：
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R3为-H、-C1-4烷基、环丙基、氟、氯、-CH2F、-C0-3烷基OR10或C0-3烷基CN；
R4为苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可以形同或不同的R6基团取代；
每个R5独立地选自氟、-C1-6烷基-R13、-OCH3、-O-C2-6烷基-R13、-CN、-OH、-SO2C1-3烷基和-NR14R15；
每个R6独立地选自氧代、卤素、-OCF3、-OCHF2、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR8、-C0-3烷基-NR14R15、-C0-3烷基-CONR11R12、-C0-3烷基-杂环基、-C0-3烷基-O-C1-2烷基-杂环基、-CN和-SO2R7，其中杂环基任选被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代；
R7为-C1-3烷基或-NR11R12；
R8为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12、-C2-3烷基-OH或-C2-3烷基-O-C1-3烷基；
R9为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12或-C2-3烷基-OH；
R10为-H或-C1-3烷基；
每个R11和每个R12独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基；
R13为-H、-OR9、-NR14R15或-CN；
每个R14和每个R15独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C(O)C1-3烷基、-C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-C2-3烷基-OH和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中-C1-6烷基和C3-7环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R14和R15可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基。
在一个实施方案中，提供了式(I)化合物
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R3为-H、-C1-4烷基、氟或-C0-3烷基-OR10；
R4为苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可以形同或不同的R6基团取代；
每个R5独立地选自氟、-C1-6烷基-R13、-OCH3、-O-C2-6烷基-R13、-CN、-OH、-SO2C1-3烷基和-NR14R15；
每个R6独立地选自氧代、卤素、-OCF3、-OCHF2、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR8、-C0-3烷基-NR14R15、-C0-3烷基-CONR11R12、-C0-3烷基-杂环基、-C0-3烷基-O-C1-2烷基-杂环基、-CN和-SO2R7，其中杂环基任选被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代；
R7为-C1-3烷基或-NR11R12；
R8为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12、-C2-3烷基-OH或-C2-3烷基-O-C1-3烷基；
R9为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12或-C2-3烷基-OH；
R10为-H或-C1-3烷基；
每个R11和每个R12独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基；
R13为-H、-OR9、-NR14R15或-CN；
每个R14和每个R15独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C(O)C1-3烷基、-C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-C2-3烷基-OH和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中-C1-6烷基和C3-7环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R14和R15可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基。
在一个实施方案中，R1为环丙基。在另一实施方案中，R1为-C1-3烷基。在进一步的实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R2是任选被一个R5基团取代的C3-7环烷基。在另一实施方案中，R2是未取代的。在另一实施方案中，R2被一个R5基团取代。在另一实施方案中，R2被一个R5基团取代，所述R5基团为甲基。在另一实施方案中，R2为环丙基。在另一实施方案中，R2是未取代的环丙基。在另一实施方案中，R2是被一个R5基团取代的环丙基。在进一步的实施方案中，R2是被一个R5基团取代的环丙基，所述R5基团为甲基。
在一个实施方案中，R2为C3-7环烷基，其是任选被一个或两个R5基团取代的双环[3.1.0]己基。在一个实施方案中，R2为C3-7环烷基，其是被两个氟基团取代的双环[3.1.0]己基。在另一实施方案中，R2为C3-7环烷基，其是被一个–OH取代的双环[3.1.0]己基。
在一个实施方案中，R3为-H、-C1-4烷基、环丙基、氟或-C0-3烷基OR10。在一个实施方案中，R3为-H、甲基、乙基、氟、-OCH3、-OH、-CH2F、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2OMe或-CH2CN。在一个实施方案中，R3为-H、甲基、氟、-OCH3或-OH。在一个实施方案中，R3为-H、甲基或-OH。
在一个实施方案中，R4是任选被一个R6基团取代的苯基。在另一实施方案中，R4是未取代的。在另一实施方案中，R4被一个R6基团取代。在另一实施方案中，R4是未取代的苯基。在另一实施方案中，R4是选自吡啶基、吡咯并吡啶基、吲哚基、吲哚啉基、吲唑基和苯并咪唑基的杂芳基，其任选被一个R6基团取代。在另一实施方案中，R4是未取代的吡啶基。在另一实施方案中，R4是未取代的吡咯并吡啶基。在另一实施方案中，R4是未取代的吲哚啉基。在另一实施方案中，R4被一个选自氧代、氟、-OCH2CH2OH、-OCH2CH(CH3)OH、甲基、-OCH3、-OH和-OCH2CH2-3-(4,4-二氟哌啶基)的R6基团取代。
在一个实施方案中，每个R5独立地选自-C1-6烷基-R13、-OH和-SO2C1-3烷基。在另一实施方案中，每个R5独立地选自甲基、-OH、-CH2OH和-SO2CH3。在进一步的实施方案中，每个R5为甲基。
在一个实施方案中，每个R6独立地选自氧代、卤素、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR8和-C0-3烷基-O-C1-2烷基-杂环基。在另一实施方案中，每个R6独立地选自氧代、氟、-OCH2CH2OH、-OCH2CH(CH3)OH、甲基、-OCH3、-OH和-OCH2CH2-3-(4,4-二氟哌啶基)。在另一实施方案中，每个R6独立地选自氧代、氟、-甲基、-OCH3或-OH。
应理解，本发明涵盖上文所述的取代基的所有组合。
本发明化合物包括实施例1至124的化合物及其盐。
本发明化合物包括实施例1至116的化合物及其盐。
本发明化合物包括实施例1至55的化合物及其盐。
在一个实施方案中，所述化合物选自：
6-((S)-羟基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺；
6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺；
6-((S*)-1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺；和
(R*)-N4-环丙基-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，
或其盐。
在一个实施方案中，所述化合物选自：
6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺；
6-(吲哚啉-4-基甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺；和
6-((R*)-甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，
或其盐。
在一个实施方案中，所述化合物选自：
6-苄基-N 4-((1R,3r,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；
6-苄基-N 4-((1R,3s,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；
N 4-((1R,3r,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；
N 4-((1R,3s,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；
N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；
N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；
N 4-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺；和
N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，
或其盐。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在另一实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是：
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在另一实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是：
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在另一实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是：
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在另一实施方案中，式(I)化合物是以下化合物的盐：
。
在进一步的实施方案中，式(I)化合物是：
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在一个实施方案中，式(I)化合物是以下化合物或其盐：
。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在本发明的第三方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，特别是用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
在本发明的第四方面，提供了在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或药学上其可接受的盐。
在本发明的第五方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
用途描述
式(I)化合物及其盐是溴结构域抑制剂，因此被认为在治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症中具有潜在用途。
溴结构域抑制剂被认为可用于治疗与全身性或组织炎症、对感染或缺氧的炎症反应、细胞活化和增殖、脂质代谢、纤维化有关的各种疾病或病症以及用于预防和治疗病毒感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种各样的急性或慢性自身免疫和/或炎性病症，如类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、哮喘、慢性阻塞性气道病、肺炎、心肌炎、心包炎、肌炎、湿疹、皮炎（包括特应性皮炎）、脱发、白癜风、大疱性皮肤病、肾炎、血管炎、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、Sjögren综合征、涎腺炎、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、Irvine-Gass综合征（术后白内障和术后）、视网膜色素变性、睫状体扁平部炎、鸟枪弹样视网膜脉络膜病变、视网膜外膜、囊性黄斑水肿、旁中心凹毛细管扩张、牵张性黄斑病变、玻璃体黄斑牵引综合征、视网膜脱离、视神经视网膜炎、特发性黄斑水肿、视网膜炎、干眼症（干燥性角结膜炎）、春季角结膜炎、特应性角结膜炎、葡萄膜炎（如前葡萄膜炎、全葡萄膜炎、后葡萄膜炎、葡萄膜炎相关性黄斑水肿）、巩膜炎、糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、年龄相关性黄斑营养不良、肝炎、胰腺炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、阿狄森氏病、垂体炎、甲状腺炎、I型糖尿病、II型糖尿病、巨细胞动脉炎、肾炎（包括狼疮性肾炎）、器官受累的血管炎（如肾小球肾炎）、血管炎（包括巨细胞动脉炎）、韦格纳肉芽肿病、结节性多发性动脉炎、白塞氏病、川崎（Kawasaki）病、高安氏（Takayasu）动脉炎、坏疽性脓皮病、器官受累的血管炎、移植器官的急性排斥和系统性硬化症。
在一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是经由APO-A1的调节介导的脂质代谢障碍，例如高胆固醇血症、动脉粥样硬化或阿尔茨海默氏病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是呼吸障碍，例如哮喘或慢性阻塞性气道病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是全身性炎性病症，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症或炎性肠病（克罗恩病或溃疡性结肠炎）。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是多发性硬化症。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是I型糖尿病。
在另一个实施方案中，急性或慢性自身免疫和/或炎性病症是类风湿性关节炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗抑郁症。
溴结构域抑制剂可用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症，如败血症、急性败血症、败血症综合征、败血性休克、内毒素血症、全身炎症反应综合征（SIRS）、多器官功能障碍综合征、中毒性休克综合征、急性肺损伤、ARDS（成人呼吸窘迫综合征）、急性肾功能衰竭、暴发性肝炎、烧伤、急性胰腺炎、术后综合征、结节病、Herxheimer反应、脑炎、脊髓炎、脑膜炎、疟疾和与例如流感、带状疱疹、单纯疱疹和冠状病毒等病毒感染有关的SIRS。在一个实施方案中，涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症是急性败血症。
溴结构域抑制剂可用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症，如心肌梗塞、脑血管缺血（中风）、急性冠状动脉综合征、肾再灌注损伤、器官移植、冠状动脉旁路移植术、心肺旁路手术，肺、肾、肝、胃肠或外周肢体栓塞。
溴结构域抑制剂可用于治疗心血管疾病，如冠状动脉疾病（例如心绞痛或心肌梗塞）、肺动脉高压、脑血管缺血（中风）、高血压性心脏病、风湿性心脏病、心肌病、心房颤动、先天性心脏病、心内膜炎、主动脉瘤或外周动脉疾病。
溴结构域抑制剂可用于治疗纤维化病症，如特发性肺纤维化、肺纤维化、囊性纤维化、进行性大块纤维化、肾纤维化、肝纤维化、肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）、术后狭窄、瘢痕疙瘩形成、硬皮病（包括硬斑病和系统性硬化症）、心肌纤维化、心房纤维化、心内膜纤维化、陈旧性心肌梗死、关节纤维化、Dupuytren挛缩、纵隔、骨髓纤维化、Peyronie病、肾源性系统性纤维化(nephrogenic systemic fibrosis)、腹膜后纤维化和粘连性关节囊炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗病毒感染，如单纯疱疹感染和再激活、唇疱疹（coldsores）、带状疱疹感染和再激活、水痘、带状疱疹、人乳头瘤病毒（HPV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、宫颈瘤、腺病毒感染（包括急性呼吸道疾病）、痘病毒感染（如牛痘或天花），或非洲猪瘟病毒。在一个实施方案中，病毒感染是皮肤或宫颈上皮细胞的HPV感染。在另一个实施方案中，病毒感染是潜伏的HIV感染。
溴结构域抑制剂可用于治疗各种各样的骨病，例如骨质疏松症、骨质减少、骨关节炎和强直性脊柱炎。
溴结构域抑制剂可用于治疗癌症，包括血液癌症（例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤）、上皮癌（包括肺癌、乳腺癌或结肠癌）、中线癌，或间质瘤、肝癌、肾癌或神经肿瘤。
溴结构域抑制剂可用于治疗一种或多种癌症，所述癌症选自：脑癌（神经胶质瘤）、胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、Cowden病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、结肠直肠癌、Wilm肿瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、鳞状细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤癌、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、混合细胞系白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、涎腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST（胃肠道间质瘤）、NUT-中线癌和睾丸癌。
在一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病和混合细胞系白血病（MLL）的白血病。在另一个实施方案中，癌症是NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌（SCLC）。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特氏淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食道癌。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。在另一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是去势抗性前列腺癌。
溴结构域抑制剂可用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病，例如败血症、烧伤、胰腺炎、重度创伤、出血和缺血。在该实施方案中，溴结构域抑制剂将在诊断时给药以降低SIRS、休克发作、多器官功能障碍综合征（其包括急性肺损伤的发作）、ARDS、急性肾、肝、心脏或胃肠损伤的发生率和死亡率。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂可在与高风险的败血症、出血、大面积组织损伤、SIRS或MODS（多器官功能障碍综合征）相关的外科手术或其他程序之前给药。在一个特定的实施方案中，适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症是败血症、败血症综合征、败血性休克和内毒素血症。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗急性或慢性胰腺炎。在另一个实施方案中，溴结构域抑制剂适用于治疗烧伤。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。式(I)化合物或其药学上的盐可用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗心血管疾病。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗纤维化病症。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗病毒感染。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗骨病。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。在再一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病。
还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症的药物中的用途。在一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗纤维化病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗病毒感染的药物中的用途。在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在再一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病的药物中的用途。
还提供了在需要治疗的对象中治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗急性或慢性自身免疫和/或炎性病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应的疾病或病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗心血管疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗纤维化病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗病毒感染的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在再一个实施方案中，提供了在需要治疗的对象中治疗与全身炎症反应综合征相关的疾病的方法，所述方法包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
适合地，需要治疗的对象是哺乳动物，特别是人。
本发明还提供抑制含有溴结构域的蛋白的方法，该方法包括使含有溴结构域的蛋白与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。
如本文所用的，提及特定疾病或病症的“治疗”包括预防或防止这种疾病或病症。
药物组合物/给药途径/剂量
组合物
虽然为了用于治疗，可以将式(I)化合物及其药学上可接受的盐作为原料化学品给药，但是通常将活性成分呈现为药物组合物。式(I)化合物及其药学上可接受的盐在给药于患者之前通常但不是必须配制成药物组合物。因此，在另一方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的赋形剂。所述式(I)化合物和药学上可接受的盐如上所述。所述一种或多种赋形剂在与所述组合物的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上必须是可接受的。根据本发明的另一个方面，还提供了制备药物组合物的方法，包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以通过例如在环境温度和大气压下混合来制备。该药物组合物可用于治疗本文所述的任何病症。
在另一方面，本发明涉及用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
由于式(I)化合物旨在用于药物组合物，因此很容易理解它们各自优选以基本上纯的形式提供，例如，至少85％纯，特别是至少98％纯（％基于重量/重量）。
药物组合物可以以每单位剂量含有预定量活性成分的单位剂型存在。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的日剂量或亚剂量或其适当分数的那些。因此，这样的单位剂量可以每天给药超过一次。优选的单位剂量组合物是含有活性成分的如本文之前所述的日剂量或亚剂量（用于每天给药超过一次）、或其适当分数的那些。
药物组合物可以适于通过任何适当的途径给药，例如通过口服（包括口腔或舌下）、直肠、吸入、鼻内、局部（包括口腔、舌下或透皮）、眼部（包括局部、眼内、结膜下、巩膜外、眼球筋膜下）、阴道或肠胃外（包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内）途径。此类组合物可通过药学领域中已知的任何方法制备，例如通过使活性成分与一种或多种载体或一种或多种赋形剂结合。
本发明的药物组合物可以以散装形式制备和包装，其中可以提取安全有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，然后例如以粉末或糖浆给予患者。或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型制备和包装，其中每个物理上离散的单元含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物通常可含有，例如，0.25mg至1g，或0.5mg至500mg，或1mg至100mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
通常将式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂配制成适于通过所需给药途径给药于患者的剂型。例如，剂型包括适于下列方式给药的那些：（1）口服给药，例如片剂、胶囊、囊片、丸剂、锭剂、粉末、糖浆、酏剂、混悬液、溶液、乳液、小药囊（sachet）和扁囊剂；（2）肠胃外给药，如无菌溶液、混悬液和用于复溶的粉末；（3）透皮给药，如透皮贴剂；（4）直肠给药，如栓剂；（5）吸入，如气雾剂、溶液和干粉；（6）局部给药，如乳膏、软膏、洗液、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选的具体剂型而变化。另外，可以为了其在组合物中可以提供的特定功能而选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于产生均匀剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于产生稳定剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够有助于一旦给药于对象后将一种或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐从一个器官或身体的一部分携带或运输至另一个器官或身体的一部分。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，因为它们能够增强对象顺应性。
合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：载体、稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、掩味剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以起到多于一种的功能，并且可以起到替代功能，这取决于制剂中存在多少赋形剂以及制剂中存在哪些其他赋形剂。
技术人员具有本领域的知识和技能，使得他们能够选择适当量的合适的药学上可接受的赋形剂以用于本发明。此外，存在许多技术人员可获得的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂，并且可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。
使用本领域技术人员已知的技术和方法制备本发明的药物组合物。Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)中描述了本领域常用的一些方法。
在一个实施方案中，药物组合物适于肠胃外给药，特别是静脉内给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于口服给药。
在一个实施方案中，药物组合物适于局部给药。
适于肠胃外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液（其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与预期接受者的血液等渗的溶质）和水性和非水性无菌混悬液（其可以包括助悬剂和增稠剂）。组合物可以以单位剂量或多剂量容器存在，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以以冷冻干燥（冻干）状态储存，仅需要在临用前添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适于口服给药的药物组合物可以作为离散单元存在，例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫或起泡剂（whips）；或水包油液体乳液或油包水液体乳液。
例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可与口服无毒的药学上可接受的惰性载体（如乙醇、甘油、水等）合并。适于掺入片剂或胶囊中的粉末可以通过将化合物减小到合适的细小尺寸（例如通过微粉化）并与类似制备的药物载体（如可食用的碳水化合物（例如淀粉或甘露醇））混合来制备。还可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
胶囊可以通过如上所述制备粉末混合物并填充成形的明胶壳来制备。可以在填充操作之前将助流剂和润滑剂（如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇）加入到粉末混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善胶囊被摄入时药物的可用性。
此外，当需要或必要时，也可将合适的粘合剂、助流剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖（如葡萄糖或β-乳糖）、玉米甜味剂、天然和合成树胶（如阿拉伯树胶、黄蓍胶或藻酸钠）、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂例如通过制备粉末混合物，制粒或击压（slugging），添加润滑剂和崩解剂并压制成片剂来配制。粉末混合物通过如下方法制备：将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质，以及任选地，与粘合剂（如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮）、溶解阻滞剂（如石蜡）、再吸收促进剂（如季铵盐）和/或吸收剂（如膨润土、高岭土或磷酸二钙）混合。粉末混合物可以通过用粘合剂（如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚（acadia）粘液或纤维素或聚合物材料的溶液）润湿并强制通过筛网来造粒。作为造粒的替代方案，可以将粉末混合物通过压片机，结果是破碎成颗粒的不完全形成的块状物。可以通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒以防止粘附到片剂成形模具上。然后将润滑后的混合物压制成片剂。式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可与自由流动的惰性载体混合，直接压制成片剂，而无需经过制粒或击压步骤。可提供透明或不透明的保护包衣，所述包衣由虫胶密封包衣，糖或聚合物材料包衣和蜡的抛光包衣组成。可以将染料添加到这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服液如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制备，使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的酒精载体制备。混悬液可以通过将化合物分散在无毒载体中来配制。还可以加入增溶剂和乳化剂（如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚）、防腐剂、调味添加剂（如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂）等。
可以设计用于口服给药的组合物以提供改变的释放曲线，从而维持或以其他方式控制治疗活性剂的释放。
适当时，可以将用于口服给药的剂量单位组合物微囊化。可以将组合物制备成延长或维持释放，例如通过将颗粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡等中。
对于适合和/或适于口服给药的组合物，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。粒径减小的（例如微粉化的）化合物或盐的优选粒径限定为约0.5至约10微米的D50值（例如使用激光衍射测量）。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可以以脂质体递送系统的形式给药，例如小单层脂囊、大单层脂囊和多层脂囊。脂质体可以由多种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
适于局部给药的药物组合物可以配制成软膏、乳膏、混悬液、乳液、洗剂、粉末、溶液、糊剂、凝胶、泡沫、喷雾剂、气雾剂或油。此类药物组合物可包括常规添加剂，其包括，但不限于，防腐剂、有助于药物渗透的溶剂、共溶剂、软化剂、推进剂、粘度调节剂（胶凝剂）、表面活性剂和载体。在一个实施方案中，提供了适于局部给药的药物组合物，其包含占组合物重量的0.01-10％，或0.01-1％的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
对于眼睛或其他外部组织（例如口腔和皮肤）的治疗，组合物优选作为局部软膏、乳膏、凝胶、喷雾或泡沫施用。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，可以将活性成分配制成具有水包油乳膏基质或油包水基质的乳膏。
适于局部给药于眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是水性溶剂中。给药于眼睛的组合物具有眼科相容的pH和渗透压（osmolality）。一种或多种眼科上可接受的pH调节剂和/或缓冲剂可包括在本发明的组合物中，包括酸，例如乙酸，硼酸，柠檬酸，乳酸，磷酸和盐酸；碱如氢氧化钠，磷酸钠，硼酸钠，柠檬酸钠，乙酸钠和乳酸钠；和缓冲剂，如柠檬酸盐/右旋糖，碳酸氢钠和氯化铵。这些酸、碱和缓冲剂可以以将组合物的pH维持在眼科可接受范围内所需的量包括在内。一种或多种眼科上可接受的盐可以以足以使组合物的渗透压达到眼科可接受的范围的量包含在组合物中。这些盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐。
眼部递送装置可以设计用于控制释放一种或多种具有多种确定的释放速率和持续剂量动力学和渗透性的治疗剂。控制释放可以通过设计聚合物基质（结合可生物降解/可生物蚀解聚合物（例如聚(乙烯-乙酸乙烯酯)（EVA），超水解PVA）、羟烷基纤维素（HPC）、甲基纤维素（MC）、羟丙基甲基纤维素（HPMC）、聚己内酯、聚乙醇酸、聚乳酸、聚酸酐的不同选择和性质），聚合物分子量，聚合物结晶度，共聚物比率，加工条件，表面光洁度，几何学，赋形剂添加和增强药物扩散、侵蚀、溶出和渗透的聚合物包衣而获得。
用于眼部递送的药物组合物还包括原位可胶凝化的含水组合物。这种组合物包含胶凝剂，其浓度有效地在与眼睛或泪液接触时促进胶凝化。合适的胶凝剂包括，但不限于，热固性聚合物。本文所用的术语“原位可胶凝化”不仅包括与眼睛或泪液接触时形成凝胶的低粘度液体，还包括更粘稠的液体，如半流体和触变凝胶，其在给药于眼睛时显示出显着增加的粘度或凝胶硬度。参见，例如，Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595- 639，因为其教导了用于眼部药物递送的聚合物实例，在此引入作为参考。
用于鼻或吸入给药的剂型可以方便地配制成气雾剂、溶液、混悬液、凝胶或干粉。
对于适合和/或适于吸入给药的组合物，优选式(I)化合物或其药学上可接受的盐为粒径减小的形式，例如，通过微粉化获得。粒径减小的（例如微粉化的）化合物或盐的优选粒径限定为约0.5至约10微米（例如使用激光衍射测量）的D50值。
气雾剂制剂，例如用于吸入给药，可包括活性物质在药学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液。气雾剂制剂可以以无菌形式以单剂量或多剂量存在于密封容器中，密封容器可以采用药筒或再填充的形式与雾化装置或吸入器一起使用。或者，密封容器可以是整体分配装置，例如单剂量鼻吸入器或装配有计量阀的气雾剂分配器（计量剂量吸入器），其意图为一旦容器内容物已经用尽就丢弃。
在剂型包含气雾剂分配器的情况下，其优选包含在压力下的合适的推进剂，例如压缩空气、二氧化碳或有机推进剂，例如氢氟烃（HFC）。合适的HFC推进剂包括1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷和1,1,1,2-四氟乙烷。气雾剂剂型也可以采用泵式雾化器的形式。加压气雾剂可含有活性化合物的溶液或混悬液。这可能需要掺入另外的赋形剂，例如共溶剂和/或表面活性剂，以改善混悬制剂的分散特性和均匀性。溶液制剂还可能需要添加共溶剂，例如乙醇。
对于适合和/或适于吸入给药的药物组合物，药物组合物可以是干粉可吸入组合物。这种组合物可包含粉末基质例如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇或淀粉，式(I)化合物或其药学上可接受的盐（优选粒径减小的形式，例如微粉化形式），和任选地，性能改性剂如L-亮氨酸或另一种氨基酸和/或硬脂酸的金属盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙。优选地，干粉可吸入组合物包含乳糖（例如乳糖一水合物）和式(I)化合物或其盐的干粉混合物。这样的组合物可以使用合适的装置给药于患者，例如由GlaxoSmithKline销售的DISKUS®装置，其描述在，例如，GB 2242134 A中。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以配制成用于从流体分配器（例如具有分配喷嘴或分配孔的流体分配器）递送的流体制剂，当将用户施加的力施加到流体分配器的泵机构时，通过所述分配喷嘴或分配孔分配计量剂量的流体制剂。这种流体分配器通常设置有流体制剂的多个计量剂量的储存器，所述剂量可在顺序泵致动时分配。分配喷嘴或孔可构造成用于插入使用者的鼻孔中，以将流体制剂喷雾分配到鼻腔中。在国际专利申请公开号WO 2005/044354 A1中描述和说明了上述类型的流体分配器。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，患者的年龄和体重、需要治疗的确切病症及其严重程度、制剂的性质以及给药途径，并且最终由主治医生或兽医决定。在药物组合物中，以游离碱计算，用于口服或肠胃外给药的每个剂量单位优选含有0.01mg至3000mg，更优选0.5mg至1000mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。以游离碱计算，用于经鼻或吸入给药的每个剂量单位优选含有0.001mg至50mg，更优选0.01mg至5mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
药学上可接受的式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以以如下每日剂量（对于成年患者）给药，例如，以游离碱计算，每天0.01mg至3000mg，每天0.5mg至1000mg或每天100mg至2500mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的口服或肠胃外剂量，或每天0.001mg至50mg或每天0.01mg至5mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的经鼻或吸入剂量。该量可以以每天单次剂量给药或更通常以每天多次（例如两次，三次，四次，五次或六次）亚剂量给药，使得每日总剂量相同。其盐的有效量可以根据式(I)化合物自身的有效量的比例确定。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以单独使用或与其他治疗剂组合使用。因此，根据本发明的组合疗法包括给药至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和使用至少一种其他治疗活性剂。一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐和其他一种或多种治疗活性剂可以在单一药物组合物中一起给药或分开给药，并且当分开给药时，给药可以同时或以任何顺序依次发生。选择一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐和一种或多种其他治疗活性剂的用量和给药的相对时机，以达到所需的组合治疗效果。因此，在另一方面，提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其他治疗活性剂的组合。
因此，在一个方面，根据本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以与一种或多种其他治疗剂组合使用或包括一种或多种其他治疗剂，所述其他治疗剂例如选自抗生素、抗病毒药、糖皮质激素、毒蕈碱拮抗剂、β-2激动剂和维生素D3类似物。在进一步的实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以与适用于治疗癌症的其他治疗剂组合使用。这些其他治疗剂的实例描述于V. T. Devita和S. Hellman（编辑）的Cancer Principles and Practice of Oncology，第6版（2001年），Lippincott Williams & Wilkins Publishers。基于药物的特定特征和所涉及的癌症，本领域普通技术人员将能够辨别哪些药剂组合会是有用的。与式(I)化合物或其药学上可接受的盐组合使用的其他治疗剂包括，但不限于，抗微管剂（如二萜类化合物和长春花生物碱）；铂配位络合物；烷基化剂（如氮芥、氧氮磷杂环己烯（oxazaphosphorines）、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯）；抗生素（如蒽环霉素、放线菌素和博来霉素）；拓扑异构酶II抑制剂（如表鬼臼毒素）；抗代谢物（如嘌呤和嘧啶类似物以及抗叶酸化合物）；拓扑异构酶I抑制剂（如喜树碱；激素和激素类似物）；信号传导通路抑制剂（如酪氨酸受体抑制剂）；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂（如PD-1抑制剂，包括纳武单抗（nivolumab）和派姆单抗（pembrolizumab），以及CTLA-4抑制剂，包括伊匹单抗（ipilimumab））；促凋亡剂；表观遗传或转录调节剂（如组蛋白去乙酰化酶抑制剂）和细胞周期信号传导抑制剂。
应当理解，当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与通常通过吸入、静脉内、口服或鼻内途径给药的其他治疗剂组合给药时，所得药物组合物可以通过相同途径给药。或者，组合物的各个组分可以通过不同途径给药。
对于本领域技术人员显而易见的是，在适当的情况下，一种或多种其他治疗剂可以以盐的形式（例如作为碱金属盐或胺盐或作为酸加成盐），或前药，或者作为酯（例如低级烷基酯），或作为溶剂化物（例如水合物）使用，以优化该治疗剂的活性和/或稳定性和/或物理特性，例如溶解度。还清楚的是，在适当的情况下，该治疗剂可以以光学纯的形式使用。
上述组合可以方便地以药物组合物的形式使用，因此包含如上定义的组合和药学上可接受的赋形剂的药物组合物代表本发明的另一方面。
一般合成路线
本发明化合物可通过多种方法制备。除非另有说明，否则任何先前定义的变量将继续具有先前定义的含义。说明性的一般合成方法在以下方案中列出，并且可以容易地适用于制备本发明的其他化合物。在实施例部分中制备了本发明的具体化合物。
式(I)化合物可如以下任一方案中所述制备：
其中R1、R2、R3和R4如上所述，Hal为氯或溴，并且X为H或连接在一起以形成环状硼酸酯，例如-C(Me)2C(Me)2-。起始的吡啶化合物(II)（其中R1为甲基）可商购自例如Anichem。
关于以上方案1中所示的步骤，可以使用以下反应条件：
步骤1：为Negishi交叉偶联，并且可以使用式R4CH(R3)ZnHal的苄基卤化锌，在钯催化剂如PdCl2(PPh3)2的存在下，任选在替代性的膦配体的存在下，在合适的溶剂如THF中，在合适的温度如70℃下进行。
步骤2：为酸介导的酯裂解，并且可以使用任何合适的酸如TFA，任选在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如室温下进行。
步骤3：为酰胺偶联反应，并且可以使用胺试剂R2-NH2，在合适的叔胺如三乙胺或DIPEA的存在下，在合适的酰胺偶联反应物如HATU的存在下，在合适的溶剂如DCM或DMF中，在合适的温度如室温下进行。
步骤4：为任选的脱保护步骤以除去保护基团如BOC，并且可以使用酸如TFA或HCl，在合适的溶剂如DCM或1,4-二氧杂环己烷的存在下，在合适的温度如室温下进行。
步骤5：为任选的手性分离，使用合适的手性HPLC柱和合适的溶剂系统。
步骤6：为羰基化反应，并且可以使用醇试剂如EtOH，在叔胺如三乙胺的存在下，在钯催化剂如[(R)-(+)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘]氯化钯(II)的存在下，任选在替代性的膦配体的存在下，在一氧化碳的存在下，在合适的溶剂如DMF中，在合适的温度如70℃下进行。
步骤7：为还原反应，并且可以使用还原剂或试剂的组合如硼氢化钠和氯化钙，在合适的溶剂或溶剂混合物如乙醇和2-MeTHF中，在合适的温度如0℃至室温下进行。
步骤8：为氯化反应，并且可以使用氯化试剂如亚硫酰氯，在合适的溶剂如DCM的存在下，在合适的温度如室温下进行。
步骤9：为交叉偶联反应如Suzuki偶联，并且可以使用芳基金属物类如芳基硼酸或芳基硼酸酯R4-B(OX)2，在合适的钯催化剂如PdCl2(PPh3)2的存在下，任选在替代性的膦配体的存在下，在合适的碱如碳酸钾的存在下，在合适的溶剂或溶剂混合物如1,4-二氧杂环己烷和水的存在下，在合适的温度如120℃下进行。
步骤10：为氧化反应，并且可以使用合适的氧化剂如戴斯-马丁氧化剂，在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如室温下进行。
步骤11：是醛的格氏加成反应，使用合适的格氏试剂如苯基溴化镁，在合适的溶剂如THF中，在合适的温度如0℃下进行。
方案2：
其中R1、R2、R3和R4如上所述，Hal为氯或溴，并且X为H或连接在一起以形成环状硼酸酯，例如-C(Me)2C(Me)2-。起始的吡啶化合物(II)（其中R1为甲基并且Hal为氯）可商购自例如Anichem。
关于以上方案2中所示的步骤，可以使用以下反应条件：
步骤1：为酸介导的酯裂解，并且可以使用任何合适的酸如TFA，任选在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如室温下进行。
步骤2：为酰胺偶联反应，并且可以使用胺试剂如R2-NH2，在合适的叔胺如三乙胺或DIPEA的存在下，在合适的酰胺偶联反应物如HATU的存在下，在合适的溶剂如DCM或DMF中，在合适的温度如室温下进行。
步骤3：为羰基化反应，并且可以使用胺试剂R1-NH2，任选在亲核催化剂如DMAP的存在下，在钯催化剂如乙酸钯的存在下，任选在膦配体如CataCXium A的存在下，在羰基化试剂如八羰基二钴的存在下，在合适的溶剂如1,4-二氧杂环己烷中，在合适的温度如80℃下，任选使用微波辐射进行。
步骤4：为Negishi交叉偶联，并且可以使用式R4CH(R3)ZnHal的苄基卤化锌，在钯催化剂如PdCl2(PPh3)2的存在下，任选在替代性的膦配体的存在下，在合适的溶剂如THF中，在合适的温度如70℃下进行。
步骤5：为任选的脱保护步骤以除去保护基团如BOC，并且可以使用酸如TFA或HCl，在合适的溶剂如DCM或1,4-二氧杂环己烷的存在下，在合适的温度如室温下进行。
步骤6：为任选的手性分离，使用合适的手性HPLC柱和合适的溶剂系统。
步骤7：为羰基化反应，并且可以使用醇试剂如EtOH，在叔胺如三乙胺的存在下，在钯催化剂如乙酸钯(II)的存在下，任选在膦配体如1,3-双(二苯基膦基)丙烷的存在下，在一氧化碳的存在下，在合适的溶剂如DMF中，在合适的温度如90℃下，任选在微波辐射下进行。
步骤8：为还原反应，并且可以使用还原剂或试剂的组合如硼氢化钠和氯化钙，在合适的溶剂或溶剂混合物如乙醇和THF中，在合适的温度如0℃至室温下进行。
步骤9：为氯化反应，并且可以使用氯化试剂如亚硫酰氯，在合适的溶剂如DCM的存在下，在合适的温度如室温下进行。
步骤10：为交叉偶联反应如Suzuki偶联，并且可以使用芳基金属物类如芳基硼酸或芳基硼酸酯R4-B(OX)2，在合适的钯催化剂如PdCl2(PPh3)2的存在下，任选在替代性的膦配体的存在下，在合适的碱如碳酸钾的存在下，在合适的溶剂或溶剂混合物如1,4-二氧杂环己烷和水的存在下，在合适的温度如120℃下进行。
应当理解，在上述任何路线中，可以改变通过合成步骤将各种基团和部分引入分子中的这些合成步骤的精确顺序。确保在该方法的一个阶段引入的基团或部分不会受到后续转化和反应的影响以及相应选择合成步骤的顺序将在本领域技术人员的技能范围内。
上述某些中间体化合物构成了本发明的又一方面。
一般方法
一般实验细节
所有提及的温度均以℃为单位。
如本文所用的，在这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例与当代科学文献（例如，Journal of the American Chemical Society）中使用的符号和惯例一致。除非另有说明，否则所有原料均得自商业供应商并且无需进一步纯化即可使用。具体地，在实施例和整个说明书中可能使用以下缩略语：
缩略语
ACD Advanced Chemistry Development, Inc.
AMU 原子质量单位
BOC/Boc 叔丁氧基羰基
cart 柱
cat 催化剂
CataCXium A 二(1-金刚烷基)-正丁基膦
CSH 水的表面带电杂化技术
羰基钴 八羰基二钴
CV 柱体积
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DMSO-d6 氘代二甲基亚砜
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
dppp 1,3-双(二苯基膦基)丙烷
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
IPA 异丙醇
Isolera Biotage®快速纯化系统
LC 液相色谱法
LCMS 液相色谱–质谱法
LiHMDS 六甲基二硅基氨基锂
M 摩尔(浓度)
MDAP 质量导向自动制备色谱法
MeI 碘甲烷
2-MeTHF 2-甲基四氢呋喃
min 分钟
MS 质谱法
Ms 甲磺酸酯基或甲磺酰基
Ms-Cl 甲磺酰氯
MTBE 甲基叔丁基醚
N 当量(浓度)
NBS N-溴代丁二酰亚胺
NMR 核磁共振
NUT 睾丸中的核蛋白
obs 遮蔽的
Pd/C 碳载钯
RBF 圆底烧瓶
Rt 保留时间
rt 室温
sat 饱和
SCX Isolute强阳离子交换吸附SPE
sec 秒
SiO2 二氧化硅
SNAP Biotage® (硅胶)快速色谱柱
SP4 Biotage® 快速纯化系统
SPE 固相萃取
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TMSCl/TMS-Cl 三甲基氯硅烷
TLC 薄层色谱法
Ts 甲苯磺酰基
T3P 丙基膦酸酐
UPLC 超高效液相色谱法
UV 紫外线
wt 重量。
使用化合物命名程序“ACD Name Pro 6.02”或使用ChemDraw Ultra 12.0的命名功能得到下列化合物的名称。
LCMS方法
甲酸法。
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v 甲酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v甲酸于乙腈中的溶液。
所用梯度为：
时间(min) 流速(mL/min) %A %B
0 1 97 3
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 97 3
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS:Waters ZQ
电离模式:交替扫描正负电喷雾
扫描范围:100至1000 AMU
扫描时间:0.27 sec
扫描延迟间隔时间:0.10 sec。
高pH法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 10 mM碳酸氢铵/水，用氨溶液调节至pH10
B = 乙腈。
所用梯度为：
时间(min) 流速(mL/min) %A %B
0 1 97 3
0.05 1 97 3
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 97 3
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS:Waters ZQ
电离模式:交替扫描正负电喷雾
扫描范围:100至1000 AMU
扫描时间:0.27 sec
扫描延迟间隔时间:0.10 sec。
TFA法
LC条件
在40℃在Acquity UPLC CSH C18柱(50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 µm填充直径)上进行UPLC分析。
所用溶剂为：
A = 0.1% v/v三氟乙酸于水中的溶液
B = 0.1% v/v 三氟乙酸于乙腈中的溶液。
所用梯度为：
时间(min) 流速(mL/min) %A %B
0 1 95 5
1.5 1 5 95
1.9 1 5 95
2.0 1 95 5
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS条件
MS:Waters ZQ
电离模式:交替扫描正负电喷雾
扫描范围:100至1000 AMU
扫描时间:0.27 sec
扫描延迟间隔时间:0.10 sec。
一般MDAP纯化方法
下面列出的是已经使用或可以用于化合物纯化的质量导向自动制备色谱（MDAP）方法的实例。
MDAP (高pH法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，使用用氨溶液调节至pH 10的10 mM碳酸氢铵/水(溶剂A)和乙腈 (溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (甲酸法)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用0.1% 甲酸/水(溶剂A)和0.1% 甲酸/乙腈(溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
MDAP (TFA)。HPLC分析在环境温度下在Xselect CSH C18柱(150 mm x 30 mmi.d. 5 μm填充直径)上进行，用0.1% v/v 三氟乙酸于水中的溶液(溶剂A)和0.1% v/v三氟乙酸于乙腈中的溶液(溶剂B) 经15或25分钟使用0至100%溶剂B的洗脱梯度洗脱。
UV检测是波长210nm至350nm的平均信号。在Waters ZQ质谱仪上使用交替扫描正负电喷雾记录质谱。电离数据四舍五入到最接近的整数。
NMR
在400 MHz或600 MHz NMR机器上以302 K运行光谱。
中间体：
中间体1：((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酸叔丁酯
将(1S,2S)-2-甲基环丙烷甲酸(200 mg，1.998 mmol，可商购自例如Enamine)和三乙胺(0.9 mL，6.46 mmol)溶于叔丁醇(4 mL)。添加叠氮磷酸二苯酯(0.47 mL，2.181 mmol)并将反应在90℃下加热。反应随后进行TLC (用50:50 EtOAc:环己烷洗脱，用茚三酮可视化)。在2小时后，TLC显示形成极性较小的产物以及残留的SM。将反应搅拌3天。将溶液在EtOAc (10mL)和碳酸氢钠溶液(10 mL)之间分配，用EtOAc (2 x 20 mL)萃取，经疏水性玻璃料干燥并浓缩，得到1.08 g黄色固体。将其通过在SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 25 g柱，用0-50%EtOAc/环己烷洗脱)纯化。将适当的级分浓缩以得到白色结晶固体形式的((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酸叔丁酯(223 mg，1.172 mmol，58.7 %收率)。
未观察到可交换的质子。
中间体2：(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐
将((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酸叔丁酯(215 mg，1.256 mmol)在4 M HCl/二氧杂环己烷(16 mL，64.0 mmol)中搅拌。反应随后进行TLC (50:50 EtOAc:环己烷，用茚三酮可视化)。在30分钟后，将溶液浓缩以得到灰白色固体形式的(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(151 mg，1.123 mmol，89 %收率)。
中间体3：(±)-3,3-二氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(±)-2-(1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟哌啶-4-基)乙酸(1.99 g，7.13mmol，可商购自例如Activate Scientific)于THF (50 mL)中的搅拌溶液中分批加入(5 mL等分试样) BH3•THF (1.0 M于THF中，29.0 mL，29.0 mmol)。将混合物在室温下在N2下搅拌15.5小时，然后小心地添加MeOH (50 mL)。另外搅拌20分钟后，将混合物在真空下蒸发，残留物在EtOAc (50 mL)和水(50 mL)之间分配。添加饱和盐水溶液(10 mL)以帮助相分离并分离各相。将水相用另外的EtOAc (3 x 40 mL)萃取，合并的有机萃取物通过装有疏水性玻璃料的柱干燥，溶剂在N2气流下蒸发，并且残留物在真空下干燥以得到浅黄色粘稠油状物；(±)-3,3-二氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.942 g，7.32 mmol，103 %收率)。
中间体4：(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(±)-3,3-二氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.884 g，7.10 mmol)溶于DCM(60 mL)中，并添加Et3N (1.48 mL，10.62 mmol)和Ms-Cl (0.719 mL，9.23 mmol)。将溶液在室温下搅拌2.75小时，然后用水(100 mL)洗涤，水相用DCM (2 x 100 mL)萃取。合并的有机相通过使其经过装有疏水性玻璃料的柱来干燥，溶剂在真空下蒸发以得到澄清的油状物，其结晶得到白色固体；(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.467 g，7.18 mmol，101 %收率)。
中间体5：(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(±)-3,3-二氟-4-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.332 g，3.88 mmol)溶于DMF (10 mL)中并添加叠氮化钠(301.5 mg, 4.64 mmol)。将混合物在80℃下在N2下搅拌4小时。在冷却后，将该混合物用1M Na2CO3水溶液(50 mL)稀释并用EtOAc (3x 30 mL)萃取[注意，在分离中观察到3个相，EtOAc萃取物密度最小；在第2次和第3次萃取时，在下部相中出现一些盐析的固体，并且添加水(约 ~10 mL)以帮助解决这个问题]。合并的有机物用水(2 x 40 mL)洗涤[注意，第2次水洗引起层的乳化，并且添加饱和盐水溶液(约 ~10 mL)以帮助各相分离]，然后干燥并且在真空下蒸发以得到浅黄色油状物；含有约0.33当量的DMF的(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.23 g，4.24mmol，109 %收率)。
中间体6：(±)-4-(2-氨基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
在20℃下使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式在10% Pd/C催化剂柱上将(±)-4-(2-叠氮基乙基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.22 g，4.20 mmol)于EtOAc (50 mL)中的溶液氢化。在真空下从收集的溶液中蒸发溶剂以得到无色油状物，其通过NMR分析确定为起始叠氮化物与产物胺的6:5混合物。将残留物重新溶于EtOH (50 mL)中，并使用Thales 'H-Cube'流动装置以全氢模式在10% Pd/C催化剂柱上再次氢化，但是这次是在40℃下进行。在真空下从收集的溶液中蒸发溶剂以得到无色油状物(982.1 mg)。
未观察到可交换物。
中间体7：2-((1S,2S)-2-(羟甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮
将(+/-)-((反式)-2-氨基环丙基)甲醇(10 g，115 mmol，可商购自例如Enamine)溶于甲苯(156 mL)中，添加邻苯二甲酸酐(22 g，149 mmol)，并将反应在110℃下在N2下加热。将反应搅拌5小时。然后将溶液在EtOAc (50 mL)和水(50 mL)之间分配，用EtOAc (2 x 50mL)萃取，用盐水(60 mL)洗涤，经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到34.0 g黑色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 750 g，用0-100%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到26 g无色油状物。将其进一步通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 750g，用10-60% DCM/乙醚洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到19.5 g无色油状物。将其悬浮在乙醚(600 mL)中并在真空下过滤。将滤液浓缩以得到无色油状物形式的(+/-)-2-((反式)-2-(羟甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(16.4 g，48.5 mmol，42.3 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法); Rt = 0.64 min, [MH]+的m/z = 218.2。
(+/-)-2-((反式)-2-(羟甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(16.4 g)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (100 mL)中。进样：将2.5 mL的溶液进样到柱上(50%EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H(5 µm))。进样总数 = 40。将12-14.5 min的级分合并并标记为峰1。将19.5-26 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。从DCM和庚烷中回收最终化合物以获得固体。
收集对应于峰1的级分以得到2-((1S,2S)-2-(羟甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮，中间体7(5.74 g)。
收集对应于峰2的级分以得到对映体产物(7.24 g)。
中间体8：((1S,2S)-2-氨基环丙基)甲醇，盐酸盐
将水合肼(0.466 mL，9.65 mmol，65% wt.)缓慢添加到2-((1S,2S)-2-(羟甲基)环丙基)异吲哚啉-1,3-二酮 (2000 mg，9.21 mmol)于乙醇(46 mL)中的悬浮液中。将反应混合物在N2下加热至50℃过夜。将所得白色沉淀物在真空下过滤。滤液用HCl (4M 于二氧杂环己烷中，57.5 mL，230 mmol)酸化并在真空下蒸发以得到粗产物。将残留物悬浮于甲醇中并通过磺酸基SPE(SCX)20 g使用连续溶剂：甲醇、然后2M氨/甲醇纯化。将适当的级分合并并用HCl (4M于二氧杂环己烷中，6 mL，24.00 mmol)酸化，随后在真空下蒸发以得到白色浆料。注意，盐的形成尚未成功完成，将残留物溶于乙醇(30 mL)中，用2M HCl水溶液(10 mL)处理并再次在真空下蒸发以得到白色浆料(1540 mg)。
将样品在真空下干燥3天以得到白色糊状物((1S,2S)-2-氨基环丙基)甲醇，盐酸盐(1035 mg，6.70 mmol，72.8 %收率)。
中间体9：4-溴吲哚啉-1-甲酸苄酯
向4-溴吲哚啉(300 mg，1.515 mmol，可商购自例如Fluorochem)于DCM (10 mL)中的溶液中加入吡啶(0.245 mL，3.03 mmol)。将反应混合物搅拌10 min，然后添加氯甲酸苄酯(0.281 mL，1.969 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。将另外的氯甲酸苄酯(0.281 mL，1.969 mmol)和吡啶(0.245 mL，3.03 mmol)添加到溶液中，并将所得混合物搅拌4小时。将2M HCl添加到溶液中，然后将有机层干燥并浓缩。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-30%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到白色/棕色固体形式的4-溴吲哚啉-1-甲酸苄酯(456 mg，1.235 mmol，82 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.45 min, [MH]+ 332.1。
中间体10：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-1-甲酸苄 酯
向4-溴吲哚啉-1-甲酸苄酯(442 mg，1.331 mmol)、双(频哪醇合)二硼(405 mg，1.597mmol)和乙酸钾(392 mg，3.99 mmol)于二氧杂环己烷中的搅拌溶液中加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(109 mg，0.133 mmol)。反应混合物用N2吹扫并在 100℃下搅拌2小时。除去溶剂，然后所得残留物用10 mL的EtOAc稀释。所得混合物通过Celite® 过滤(洗脱剂EtOAc)，然后将10 mL的水添加到液体中并用乙酸乙酯(2 x 35 mL)萃取有机物。将合并的有机层干燥，然后浓缩以得到黑色固体形式的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(592.7 mg，1.250 mmol，94 %收率，~80%纯度)，其无需进一步纯化即可使用。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.56 min, [MH]+ 380.3。
中间体11：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-2-酮
向4-溴吲哚啉-2-酮(100 mg，0.472 mmol，可商购自例如Fluorochem)、双(频哪醇合)二硼(144 mg，0.566 mmol)和乙酸钾(139 mg，1.415 mmol)于二氧杂环己烷中的搅拌溶液中加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(38.5 mg，0.047 mmol)。反应混合物用N2吹扫并在100℃下搅拌2小时。该反应混合物通过Celite®过滤(洗脱剂EtOAc)。除去溶剂，然后将所得残留物用乙酸乙酯(2 x 35 mL)萃取。将合并的有机层干燥并浓缩以得到棕色固体形式的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-2-酮(554 mg，0.428 mmol，91 %收率，~23%纯度)。其在下一反应中以粗品使用。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.02 min, [MH]+ 260.2。
中间体12：2,6-二溴-N-环丁基异烟酰胺
在室温下将HATU (3.25 g，8.54 mmol)、环丁胺 (0.506 g，7.12 mmol)和Et3N (1.191mL，8.54 mmol)添加到2,6-二溴异烟酸(2 g，7.12 mmol，可商购自例如Fluorochem)于DCM(20 mL)中的溶液中。将混合物搅拌过夜，然后用水(2 x 20 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发以得到棕色固体。将产物溶于DCM (10 mL)中并装载到50 g硅胶柱上，然后用0-50% EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分在真空下蒸发以得到无色固体形式的2,6-二溴-N-环丁基异烟酰胺(2.10 g，6.29 mmol，88 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.10 min, [MH]+ = 335.1。
中间体13：6-溴-N4-环丁基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2,6-二溴-N-环丁基异烟酰胺(0.11 g，0.329 mmol)、羰基钴(0.028 g，0.082mmol)、甲胺(2M于THF中，0.329 ml，0.659 mmol)、DMAP (0.080 g，0.659 mmol)、乙酸钯(3.70 mg，0.016 mmol)和CataCXium A (5.90 mg，0.016 mmol)在微波小瓶中混合，将其密封并用氮气吹扫，然后添加1,4-二氧杂环己烷 (3 mL)并将混合物在 80℃下加热20 min。将该混合物在 80℃下加热另外30 min。反应混合物用水(30 mL)稀释并用EtOAc (2 x 30mL)萃取。将有机层干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物。将其溶于DCM (3 mL)中并装载到25 g硅胶柱上，然后用0-100% EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物形式的6-溴-N4-环丁基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(138 mg，0.442 mmol，36.0 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.87 min, [MH]+ = 312.1, 314.2。
中间体14：2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将6-溴-4-(叔丁氧基羰基)吡啶甲酸(2.03 g，5.71 mmol，可商购自例如Anichem)悬浮于DCM (18 mL)中，并添加草酰氯(1 mL，11.42 mmol)，随后添加DMF (0.03 mL，0.387mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟。将悬浮液在真空下蒸发以得到红色/棕色油状物，将其悬浮于THF (18 mL)中，并逐滴添加甲胺(2M于THF中，4.28 mL，8.57 mmol)。在2小时后，添加甲胺(2M于THF中，5.7 mL，11.40 mmol)并将反应搅拌30分钟。将悬浮液浓缩以得到棕色油状物，将其在EtOAc (30 mL)和水(30 mL)之间分配，用EtOAc (2 x 20 mL)萃取，用盐水(20 mL)洗涤，经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到2.1 g的深橙色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 100 g，用0-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到橙色固体形式的2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.25 g，2.97 mmol，52.1%收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.15 min, [MH]+ = 315.1, 317.0。
中间体15：2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(667 mg，2.116 mmol)溶于DCM (12 mL)中，添加TFA (3 mL，38.9 mmol)并将反应在室温下搅拌5小时。将溶液浓缩以得到2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(648 mg，2.126 mmol，100 % 收率，~80%纯度)，其在进一步的合成中以粗品使用。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 259.3, 261.3。
中间体16：6-溴-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
在室温下在N2下将2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(648 mg，2.501 mmol)、HATU(1422 mg，3.74 mmol)、DIPEA (1.311 mL，7.50 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙胺(183 mg，2.57 mmol)和DMF (10 mL)搅拌1.5小时。将溶液在EtOAc (20 mL)和饱和LiCl 水溶液(20mL)之间分配，用EtOAc (2 x 20 mL)萃取，用盐水(2 x 20 mL)洗涤，经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到2.08 g的棕色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 100 g，用10-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到浅黄色固体形式的6-溴-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(464 mg，1.338 mmol，53.5 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 312.3, 314.3。
中间体17：2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在室温下将2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(40.7g，64.0 mmol)添加到4-(叔丁氧基羰基)-6-氯吡啶甲酸(15 g，58.2 mmol，可商购自例如Anichem)和Et3N (16.23 mL，116 mmol)于DCM (100 mL)中的溶液中，然后将混合物搅拌20分钟，随后添加甲胺(2M于THF中，38.8 mL，78 mmol)。将混合物搅拌2小时，然后用水(100mL)和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物。将其溶于DCM中并装载在340 g硅胶柱上，然后用0-40% EtOAc/环己烷洗脱，并且将含产物的级分在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物形式的2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(6.9 g，25.5 mmol，43.8 %收率)，其在静置时结晶。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.16 min, [MH]+ = 271.2。
中间体18：6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(4.2 g，15.51 mmol)溶于DMF (50 mL)和乙醇(50 mL)的混合物中，然后添加三乙胺(4.71 g，46.5 mmol)和[(R)-(+)-2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘]氯化钯(II)(0.621 g，0.776 mmol)，并且将该混合物用一氧化碳吹扫，然后密封并装配充满一氧化碳的气球。将混合物在70℃下加热过周末，然后在真空下蒸发并将残留物在水(100 mL)和EtOAc (100 mL)之间分配。有机层用水 (100 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发。深棕色的残留物通过100 g硅胶柱上的色谱法用0-50% EtOAc/环己烷洗脱来纯化以得到浅黄色胶状物形式的6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯 (4.2 g，13.62 mmol，88 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.11 min, [MH]+ = 309.2。
中间体19：2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在0℃下将氯化钙(4.54 g, 40.9 mmol)添加到6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2,4-二甲酸4-叔丁酯2-乙酯(4.2 g, 13.62 mmol)于乙醇(50 mL)和2-MeTHF (50.0 mL)的混合物中的溶液中，然后添加四氢硼酸钠(0.773 g, 20.43 mmol)，并且将所得红色混合物搅拌2小时以使该混合物温热至室温。使该混合物静置过夜，然后在冰浴中冷却并经20分钟缓慢添加氯化铵溶液(100 mL)。混合物用EtOAc (2 x 150 mL)萃取，然后将有机物干燥并在真空下蒸发，残留物通过50 g硅胶柱上的色谱法纯化以得到米色固体形式的2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(2.2 g, 8.26 mmol, 60.6 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 267.3。
未观察到1个可交换的质子。
中间体20：2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g, 5.63 mmol)溶于DCM (5mL)中，添加亚硫酰氯(sulfurous dichloride)(1.257 mL, 16.90 mmol)，并且在室温下将反应搅拌4小时，然后该混合物通过添加饱和碳酸氢钠溶液淬灭，将混合物搅拌20分钟，然后将有机层分离、干燥并在真空下蒸发以得到无色固体形式的2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.35 g, 4.74 mmol, 84 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.13 min, [MH]+ = 285.2。
中间体21：2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-(羟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(543mg, 2.039 mmol)溶于DCM (5mL)中。添加戴斯-马丁氧化剂(1009 mg, 2.380 mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将硫代硫酸钠添加到反应混合物中，然后还添加NaHCO3。将所得混合物搅拌15分钟。水相用DCM萃取三次，合并的有机层经MgSO4干燥并蒸发。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage®SNAP 10 g，用0-50%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(501 mg，1.706 mmol，84 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 265.3。
中间体22：6-溴-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
在室温下在N2下将2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(400 mg，1.544 mmol)、HATU(880 mg，2.314 mmol)、DIPEA (0.81 mL，4.64 mmol)、环丙胺(0.21 mL, 3.03 mmol)和DMF(5 mL)搅拌1.5小时。将溶液在EtOAc (20 mL)和饱和LiCl 水溶液(20 mL)之间分配，用EtOAc (2 x 20 mL)萃取，用盐水(2 x 20 mL)洗涤，通过疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到1.04 g的橙色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 100 g，用10-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到浅黄色固体形式的6-溴-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(320 mg，0.966 mmol，62.6 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.72 min, [MH]+ = 298.0, 300.0。
中间体23：4-(环丙基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸乙酯
向在20 mL微波小瓶中的6-溴-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4二甲酰胺(216 mg, 0.725mmol)于DMF (7.25 mL)中的溶液中加入三乙胺(0.4 mL, 2.87 mmol)、乙酸钯(II)(28 mg,0.125 mmol)、dppp (47 mg, 0.114 mmol)和乙醇(0.72 mL, 12.33 mmol)。将反应用CO吹扫并在 90℃下在微波中加热2小时。将该微波小瓶用CO吹扫并在 90℃下在微波中加热2小时。将该小瓶在90℃下加热1.5小时。
单独地，向6-溴-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(50 mg, 0.168 mmol)于DMF (0.56 mL)中的溶液中加入三乙胺(0.1 mL, 0.717 mmol)、乙酸钯(II)(7 mg, 0.031mmol)、dppp (12 mg, 0.029 mmol)和乙醇(0.17 mL, 2.91 mmol)。将反应用CO吹扫，添加具有CO气球的隔膜，并将反应在70℃下加热21小时。添加另外的三乙胺(0.094 mL, 0.671mmol)、乙酸钯(II)(7.53 mg, 0.034 mmol)、乙醇(0.166 mL, 2.85 mmol)、dppp (11.76mg, 0.029 mmol)和DMF (0.560 mL)，将反应用CO吹扫，装配CO气球，并将反应在70℃下加热24小时。
单独地，向在2 mL微波小瓶中的6-溴-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4二甲酰胺(50mg, 0.168 mmol)于DMF (2 mL)中的溶液中加入三乙胺(0.1 mL, 0.717 mmol)、乙酸钯(II)(8 mg, 0.036 mmol)、dppp (14 mg, 0.034 mmol)和乙醇(0.17 mL, 2.91 mmol)。将反应用CO吹扫并在100℃下在微波中加热1小时。将小瓶再次用CO吹扫并在90℃下加热3小时。
将三次反应的粗反应混合物合并，在EtOAc(10 mL)和饱和LiCl水溶液(10 mL)之间分配，用EtOAc (2 x 20 mL)萃取，用盐水(2 x 20 mL)洗涤，经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到470 mg橙色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 50 g，用0-100%(25%乙醇/乙酸乙酯)/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到黄色固体形式的4-(环丙基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸乙酯(158 mg，0.461 mmol)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.70 min, [MH]+ = 292.4。
中间体24：N4-环丙基-6-(羟甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将4-(环丙基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶甲酸乙酯(80 mg, 0.275 mmol)溶于乙醇(3 mL)和THF (1.5 mL)中。添加氯化钙(67 mg, 0.604 mmol)并将反应在冰浴中冷却至0℃并添加硼氢化钠(10.39 mg, 0.275 mmol)。将反应在0℃下搅拌30分钟。将溶液用饱和氯化铵溶液淬灭并用EtOAc (2 x 20 mL)萃取。水层用2 M HCl溶液酸化至pH 2。将其用另外的EtOAc (2 x 20 mL)萃取。有机层经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到白色固体形式的N4-环丙基-6-(羟甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(78 mg, 0.266 mmol, 97 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.48 min, [MH]+ = 250.5。
中间体25：6-(氯甲基)-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将N4-环丙基-6-(羟甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(78 mg, 0.313 mmol)溶于DCM(2 mL)中，添加亚硫酰氯(0.07 mL, 0.959 mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。添加另外的亚硫酰氯(0.05 mL, 0.685 mmol)并将反应搅拌1小时。将溶液浓缩以得到奶油色固体形式的6-(氯甲基)-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(66 mg, 0.222 mmol, 70.9 %收率)，其直接用于随后步骤中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.70 min, [MH]+ = 268.4。
中间体26：2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(5 g，18.47 mmol，可商购自例如Anichem)和PdCl2(PPh3)2 (1.296 g, 1.847 mmol)溶于THF (50 mL)中，添加苄基溴化锌(II)(0.5M于THF中，55.4 mL，27.7 mmol)，然后将混合物在70℃下加热2小时。溶剂在真空下蒸发，残留物通过100 g硅胶柱上的色谱法用0-50% EtOAc/环己烷洗脱来纯化以得到深棕色油状物形式的2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(5.7 g, 17.46 mmol, 95 %收率)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.30 min, [MH]+ = 327.3。
中间体27：2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(2.5 g, 7.66 mmol)溶于DCM (30 mL)中，然后添加TFA (10 mL, 130 mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3小时。将溶剂在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物。将粗物质溶于DCM (100 mL)并用水(100 mL)洗涤，将有机层干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色固体形式的2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(2.0 g,7.40 mmol, 97 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.63 min, [MH]+ = 271.3。
中间体28：2-(2-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg, 0.369 mmol)、(2-氟苄基)氯化锌(II)(0.5M于THF中, 1.25 mL, 0.625 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (39 mg, 0.056 mmol)和THF(0.5 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将反应混合物通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤，然后浓缩以得到453 mg的粗产物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的2-(2-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(86.5 mg，0.226 mmol，61.2 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.29 min, [MH]+ = 345.1。
中间体29：2-(2-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(2-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(86.5 mg, 0.251 mmol)于DCM(1 mL)中的溶液中加入TFA (0.68 mL, 8.83 mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩以得到橙色固体形式的2-(2-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(90.5mg, 0.251 mmol, 100 %收率, ~80%纯度)，其无需纯化即可用于随后的化学过程中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.95 min, [MH]+ = 289.0。
中间体30：2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g, 5.54 mmol)溶于THF (20 mL)中并添加双三苯基膦二氯化钯(0.389 g, 0.554 mmol)。将溶液用氮气鼓泡5分钟，然后添加(3-甲氧基苄基)溴化锌(II)(0.5M于THF中, 20 mL, 10.00 mmol) 并在 70℃下将混合物加热2小时。溶液用EtOAc (100 mL)稀释并用水(100 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发。残留物通过50 g硅胶柱上的色谱法用0-50% EtOAc/环己烷洗脱纯化，含产物的级分在真空下蒸发以得到深黄色油状物形式的2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.65 g, 4.63 mmol, 84 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.29 min, [MH]+ = 357.3。
中间体31：2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(2.5 g, 7.01 mmol)溶于DCM (30 mL)中，然后添加TFA (10 mL, 130 mmol)，并且将混合物在室温下搅拌18小时。将溶剂在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物。将其溶于DCM (50 mL)中并用水(50 mL)洗涤。将有机层干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色固体形式的2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(1.8 g, 5.99 mmol, 85 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.64 min, [MH]+ = 301.2。
中间体32：2-(3-羟基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(100 mg, 0.333 mmol)于DCM (3mL)中的悬浮液在N2下冷却至0℃并逐滴添加BBr3 (1M于DCM中, 1.665 mL, 1.665 mmol)。将反应用水(10 mL)淬灭并用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。然后有机萃取物用饱和NaHCO3溶液洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩以得到黄色油状物形式的标题化合物(109 mg)，其无需进一步纯化即可使用。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 287.1。
中间体33：2-(3-((S)-2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(S)-2- 羟基丙酯
将2-(3-羟基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(54 mg, 0.189 mmol)、(S)-2-甲基环氧乙烷(0.066 mL, 0.943 mmol)和碳酸铯(184 mg, 0.566 mmol)的混合物溶于DMF (2mL)中并在2 mL微波小瓶中将反应混合物在150℃下加热30分钟。将含有(S)-2-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸的粗溶液直接用于下一反应，假定收率为100%。因此，向(S)-2-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(65 mg, 0.189mmol)/DMF (2 mL)中加入HATU (108 mg, 0.283 mmol)，然后加入环丙胺(0.052 mL,0.753 mmol)和DIPEA (0.132 ml, 0.755 mmol)。将所得反应混合物在室温下在空气中搅拌30分钟。LCMS显示包含13%起始羧酸和11%标题化合物的复杂混合物（与酸开环残留(S)-2-甲基环氧乙烷一致，而不是所需的酰胺偶联）。将反应混合物搅拌过夜。然后将该反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。水层酸化至~pH 3并用另外的乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并浓缩以得到不纯的黄色油状物形式的2-(3-((S)-2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(S)-2-羟基丙酯(226 mg)。将其原样用于随后的酯水解步骤。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 403.2。
中间体34：(S)-2-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-(3-((S)-2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(S)-2-羟基丙酯(76mg, 0.189 mmol) (假定100%收率，来自上一步骤)溶于1,4-二氧杂环己烷(2 mL)中。添加水(2 mL)，随后添加LiOH (15 mg, 0.626 mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌48小时。在真空下除去二氧杂环己烷并添加乙酸(0.038 mL, 0.666 mmol)。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，水层用另外的乙酸乙酯(4 x 20 mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并浓缩以得到浅黄色油状物形式的(S)-2-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(90 mg, 0.196 mmol, 104 %收率)，其纯度为 ~75%并且原样用于随后的化学过程。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 345.1。
中间体35：2-(4-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg, 0.369 mmol)、(4-甲氧基苄基)氯化锌(II)(0.5M于THF中, 1.25 mL, 0.625 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (38.9 mg, 0.055mmol)和THF (0.5 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将反应混合物通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤，然后用水洗涤，然后干燥并浓缩以得到387 mg的粗棕色固体。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到白色固体形式的2-(4-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(134.6 mg，0.340 mmol，92 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.26 min, [MH]+ = 357.2。
中间体36：2-(4-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(4-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(134.6 mg, 0.378 mmol)于DCM (5 mL)中的溶液中加入TFA (0.873 mL, 11.33 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时然后过夜。然后将反应混合物浓缩以得到橙色油状物形式的2-(4-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(123.3 mg, 0.322 mmol, 85 %收率, ~78.5%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 301.1。
中间体37：2-(2-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43 mg, 0.159 mmol)、(2-甲基苄基)氯化锌(II)(0.5M于THF中, 0.538 mL, 0.269 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (16.72 mg, 0.024 mmol)和THF (1 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将反应混合物通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤，然后浓缩以得到棕色固体。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g柱，用0-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的标题化合物(30mg)。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-20%乙酸乙酯/环己烷洗脱)进一步纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的2-(2-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(17.2 mg，0.051 mmol，31.8 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.34 min, [MH]+ = 341.1。
中间体38：2-(2-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(2-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(17.2 mg, 0.051 mmol)于DCM(1 mL)中的溶液中加入TFA (0.13 mL, 1.687 mmol)并将反应混合物在室温下搅拌2 h然后经过周末。添加另外的TFA (0.13 mL, 1.687 mmol)，将反应混合物搅拌8小时然后过夜。将反应混合物浓缩以得到橙色固体形式的2-(2-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(13.8 mg, 0.043 mmol, 85 %收率, ~89%纯度)。其无需纯化即可使用。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 285.1。
中间体39：2-(3-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg, 0.369 mmol)、(3-氟苄基)氯化锌(II)(0.5M于THF中, 1.25 mL, 0.625 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (39 mg, 0.056 mmol)和THF(0.5 mL)在微波中在120℃下加热30分钟。将反应混合物通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤，然后浓缩以得到482 mg的粗产物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-25%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的2-(3-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(52.2 mg，0.136 mmol，36.9 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.28 min, [MH]+ = 345.2。
中间体40：2-(3-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(3-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(52.2 mg, 0.152 mmol)于DCM(2 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.700 mL, 9.09 mmol)并将反应混合物在室温下搅拌经过周末。将反应混合物浓缩以得到橙色固体形式的2-(3-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(53 mg, 0.147 mmol, 97 %收率, ~80%纯度)。其无需纯化即可用于随后的化学过程。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.95 min, [MH]+ = 289.1。
中间体41：2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg, 0.369 mmol)、(3-甲基苄基)氯化锌(II)(0.5M于THF中, 1.25 mL, 0.625 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (38.9 mg, 0.055 mmol)和THF (0.5 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将反应混合物通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤，然后浓缩以得到393.9 mg的棕色固体。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage®SNAP 10 g，用0-30%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(52.2 mg，0.123 mmol，33.2 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.35 min, [MH]+ 341.2。
中间体42：2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(52.2 mg, 0.153 mmol)于DCM(2 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.700 mL, 9.09 mmol)并将反应混合物在室温下搅拌经过周末。将反应混合物浓缩以得到橙色固体形式的2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(102 mg, 0.144 mmol, 94 %收率, ~40%纯度)。其无需纯化即可用于随后的反应。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.01 min, [MH]+ 285.1。
中间体43：2-(甲基氨基甲酰基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)异烟酸叔丁酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(80 mg, 0.281 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-2-酮(479 mg, 0.425 mmol, 23% wt.)、碳酸钾(129.9 mg, 0.940mmol)和PdCl2(dppf) (41.1 mg, 0.056 mmol)混合。将其在120℃下加热40分钟。将溶液通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤然后浓缩以得到198 mg的黑色固体。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用10-50%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)异烟酸叔丁酯(39.7 mg，0.094 mmol，33.3 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.00 min, [MH]+ 382.3。
中间体44：2-(甲基氨基甲酰基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)异烟酸
向2-(甲基氨基甲酰基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)异烟酸叔丁酯(39.7 mg,0.104 mmol, 78% wt.)于DCM (2 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.4 mL, 5.19mmol)并将反应混合物搅拌6小时。加入另外的2,2,2-三氟乙酸(0.3 mL, 3.89 mmol)并将所得混合物搅拌经过周末。将反应混合物浓缩以得到橙色固体形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)异烟酸(55.7 mg, 0.080 mmol, 99 %收率, ~47%纯度)。其无需纯化即可用于随后的化学过程。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.70 min, [MH]+ 326.1。
未观察到可交换的质子。
中间体45：4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚 啉-1-甲酸苄酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(110 mg, 0.386 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(285.5 mg, 0.602 mmol)、碳酸钾(183 mg, 1.321mmol)和PdCl2(dppf) (56.5 mg, 0.077 mmol)混合。将其在120℃下加热40分钟。然后将溶液通过Celite® (洗脱剂EtOAc)过滤，干燥，然后浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage®SNAP 10 g，用0-30%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(138.7 mg，0.249 mmol，64.4 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.44 min, [MH]+ 502.2。
中间体46：2-((1-((苄氧基)羰基)吲哚啉-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟 酸
向4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(138.7 mg, 0.221 mmol)于DCM (4 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.7 mL, 9.09mmol)并将反应混合物搅拌4小时。加入另外的2,2,2-三氟乙酸(1 mL, 12.98 mmol)并将所得混合物搅拌过夜。将反应混合物浓缩以得到棕色固体。将EtOAc (10 mL)添加到棕色固体中，然后将所得混合物用碳酸氢钠溶液碱洗5次，然后水相用2M HCl的溶液(10 mL)中和，然后将其用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(出现固体，因此过滤溶液)，然后在真空下浓缩以得到棕色油状物 - 2-((1-((苄氧基)羰基)吲哚啉-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (109 mg, 0.196 mmol, 88 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.18 min, [MH]+ 446.2。
中间体47：(+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.5 g，1.847 mmol)溶于THF (20 mL)中并添加双三苯基膦二氯化钯(0.130 g, 0.185 mmol)。将溶液用氮气鼓泡5分钟，然后添加(1-苯基乙基)溴化锌(II)(0.5M于THF中，7.39 mL，3.69 mmol，可商购自例如SigmaAldrich) 并在 70℃下将混合物加热2小时。溶液用EtOAc (100 mL)稀释并用水(100 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发。残留物通过25 g硅胶柱上的色谱法用0-50% EtOAc/环己烷洗脱纯化，含产物的级分在真空下蒸发以得到深黄色油状物形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(0.41 g, 1.204 mmol, 65.2 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.37 min, [MH]+ = 341.3。
中间体48：(+/-)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(0.41 g, 1.204 mmol)溶于TFA (6 mL)中并在室温下搅拌3小时，然后将混合物在真空下蒸发，残留物在水(20 mL) 和DCM (20 mL)之间分配。将有机层干燥并在真空下蒸发以得到灰色泡沫形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(305 mg, 1.073 mmol, 89 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.69 min, [MH]+ = 285.2。
中间体49：(R*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
中间体50：(S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯
将中间体47 (7.777 g)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (150 mL)中。进样：将1.1 mL溶液经由制备型自动进样器进样到柱上(20% EtOH /庚烷 +0.2%异丙胺，流速 =42.5 mL/min，检测波长 = 280 nm，带宽 140 nm，参考 400 nm 带宽 100 nm，柱 30 mm x25 cm Chiralcel OJ-H。总进样次数 = 1)。将11.2-13.7 min的级分合并并标记为峰1。将15.7-19 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到中间体49(2.84 g)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.35 min, [MH]+ = 341.3。
收集对应于峰2的级分以得到中间体50(2.80 g)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.35 min, [MH]+ = 341.3。
中间体51：(S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸
将(S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸叔丁酯(2.1878 g, 6.43 mmol)和三氟乙酸(10.0 mL, 130 mmol)于DCM (15 mL)中的混合物在室温下搅拌19小时。在真空下从混合物中蒸发挥发物，将油状残留物重新溶于乙腈(约 10 mL)中并在真空下蒸发溶剂。向橙色油状残留物中加入乙醚(约 10 mL)，沉淀出白色固体。将该固体过滤，用乙醚(2x 5 mL)洗涤并在真空下干燥以得到白色固体形式的所需产物；(S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸 (1.1768 g, 4.14 mmol, 64.4 %收率)。
将来自第二次乙醚洗涤的母液的溶剂在氮气流下蒸发以得到第二批白色固体形式的所需产物；(S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(95.6 mg, 0.336mmol, 5.23 %收率)。
将来自初始研磨和第一次乙醚洗涤的合并母液的溶剂在氮气流下蒸发，得到的橙色粘稠油状物用乙醚(5 mL)研磨。将母液倒出，固体用另外的乙醚(3 x 5 mL)研磨，每次倒出母液。固体在真空下干燥以得到第三批奶油色固体形式的所需产物；(S*)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(310.8 mg, 1.093 mmol, 17.01 %收率)。
来自上述批次的分离的合并母液在氮气流下蒸发，所得橙色半结晶固体用乙醚(3mL)洗涤。将母液倒出，固体用另外的乙醚(3 x 3 mL)研磨，每次倒出母液。固体在真空下干燥以得到第四批奶油色固体形式的所需产物(100.4 mg)。
总计在四个批次中分离的总产物 = 1.6836 g, 92.2%。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 285.3。
中间体52：2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg, 0.351 mmol)与(1H-吲哚-4-基)硼酸(113 mg,0.702 mmol)、碳酸钾(291 mg, 2.107 mmol)和PdCl2(dppf) (51.4 mg, 0.070 mmol)混合。将其在120℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，用EtOAc (10 mL)洗脱，然后干燥并浓缩。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-60% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到白色固体形式的2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(75.4 mg, 0.165 mmol, 47.0 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.20 min, [MH]+ = 366.2。
未观察到可交换物。
中间体53：2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(75.4 mg, 0.165mmol)于DCM (3 mL)中的溶液中加入TFA (0.60 mL, 7.79 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入另外的TFA (0.3 mL, 0.165 mmol)，并将所得混合物搅拌3小时。将反应混合物在真空下浓缩以得到2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(184mg, 0.149 mmol, 90 %收率, ~25%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 310.1。
中间体54：(+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在0℃下向2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(118 mg, 0.447 mmol)于THF(1.5 mL)中的溶液中逐滴加入苯基溴化镁(1M于THF中, 2 mL, 2mmol)。将反应混合物搅拌2小时。将该反应混合物倒在饱和氯化铵水溶液上并用EtOAc (20 mL x 3)萃取。有机层经MgSO4干燥并在真空下浓缩。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43 mg，0.107 mmol，23.91 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.09 min, [MH]+ = 343.3。
未观察到可交换物。
中间体55：(+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43 mg, 0.126 mmol)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入TFA (0.4 mL, 5.19 mmol)并将反应混合物搅拌2小时然后过夜。加入另外的TFA (0.4 mL, 0.126 mmol)，并将反应混合物搅拌5小时，然后将溶剂除去以得到2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(47.9 mg, 0.117 mmol, 93 %收率, 70%纯度)，其直接用于下一步骤。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 287.1。
未观察到可交换物。
中间体56：(+/-)-2-(氯(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在0℃下向2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(46 mg, 0.134mmol)于DCM (4 mL)中的溶液中逐滴加入亚硫酰氯(30 µL, 0.411 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌12小时。加入另外的亚硫酰氯(50 µL, 0.685 mmol)。将所得混合物搅拌5小时，然后在真空下浓缩以得到2-(氯(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(54mg)，其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.33 min, [MH]+ = 361.1。
中间体57：(+/-)-2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-(氯(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(54 mg, 0.150 mmol)于甲醇(5 mL)中的溶液搅拌经过周末。然后将反应混合物在回流下加热最初1小时，然后4小时，最后过夜。然后将反应混合物在真空下浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(SNAP 10g柱，洗脱剂：0-50% 乙酸乙酯/环己烷)纯化。将所需级分合并并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(33 mg，0.083mmol，55.7 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.26 min, [MH]+ = 357.2。
中间体58：(+/-)-2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(33 mg, 0.093 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL, 6.49 mmol)并将反应混合物搅拌过夜。然后将其用水洗涤并用DCM萃取三次，然后将其干燥。将溶剂在真空下除去以得到2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(44.9 mg, 0.090 mmol, 97 %收率, ~60%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 301.1。
中间体59：(+/-)-2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在室温下在N2下向含有氯化锂(140 mg, 3.29 mmol)的干燥圆底烧瓶中加入2-溴吡啶(0.400 mL, 4.11 mmol)和THF (4 mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加异丙基氯化镁(2M于THF中, 2.057 mL, 4.11 mmol)（在添加后，溶液变成黄色/棕色），并且将所得混合物搅拌30分钟以得到吡啶-2-基氯化镁的悬浮液（假定100%收率：1.029M于THF4 mL中的悬浮液）。在0℃下在氮气下向该吡啶-2-基溴化镁的悬浮液（1.029M于THF中, 4mL, 2.93 mmol）中逐滴加入在THF (3 mL)中的2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(344 mg, 1.171 mmol, 90% wt.)。将反应混合物搅拌5小时。添加氯化铵水溶液(3 mL)。将反应混合物搅拌30分钟，然后用EtOAc (20 mL x 3)萃取。有机层经MgSO4干燥并在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g柱，洗脱剂0-50% (25% EtOH/乙酸乙酯) / 环己烷)纯化。将所需级分浓缩以得到2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(232 mg，0.527 mmol，45.0 %收率，~78%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 344.3。
中间体60：(+/-)-2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(232 mg, 0.676mmol)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1.5 mL, 19.47 mmol)并将反应混合物搅拌4小时。将溶剂在真空下除去以得到2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(289 mg, 0.604 mmol, 89 %收率, ~60%纯度)，其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.40 min, [MH]+ = 288.1。
中间体61：2-((1H-吲唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(84 mg, 0.295 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑(216 mg，0.885 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)、碳酸钾(279 mg, 2.018 mmol)和PdCl2(dppf) (43.2 mg, 0.059 mmol)混合。将其在120℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，洗脱剂为EtOAc(10 mL)，然后用水洗涤。水相用EtOAc (3次)萃取。然后将合并的有机相干燥并在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage®SNAP 10 g柱，用0-40%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到黄色油状物形式的2-((1H-吲唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43.8 mg，0.068 mmol，23.10 %收率，~57%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.07 min, [MH]+ = 367.3。
中间体62：2-((1H-吲唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-((1H-吲唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(43.8 mg, 0.068mmol, 57% wt.)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.4 mL, 5.19 mmol)并将反应混合物搅拌2小时。将溶剂在真空下除去以得到2-((1H-吲唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(33.5 mg, 0.054 mmol, 79 %收率, ~50%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 311.2。
中间体63：4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-2-甲 基-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(100 mg, 0.351 mmol)与(1-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)硼酸(150 mg，0.272 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)、碳酸钾(332mg, 2.402 mmol)和PdCl2(dppf) (51.4 mg, 0.070 mmol)混合。将其在120℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，洗脱剂为EtOAc(10 mL)，然后用水洗涤。水相用EtOAc (3次)萃取。然后将合并的有机相经硫酸镁干燥并在真空下浓缩。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用50-70%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到黄色油状物形式的4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(24 mg，0.047 mmol，17.47 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.41 min, [MH]+ = 481.3。
中间体64：2-((2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(24 mg, 0.050 mmol)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.1 mL, 1.298 mmol)，将反应混合物搅拌1.5小时。加入另外的2,2,2-三氟乙酸(0.1mL, 1.298 mmol)，将所得混合物搅拌2小时。加入另外的2,2,2-三氟乙酸(0.2 mL, 0.050mmol)，将所得混合物搅拌1小时。将溶剂在真空下除去以得到2-((2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(32.5 mg, 0.045 mmol, 90 %收率, ~45%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.45 min, [MH]+ = 325.2。
中间体65：2-((1H-吲哚-3-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(140 mg, 0.492 mmol)与(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吲哚-3-基)硼酸(250 mg，0.958 mmol，可商购自例如Fluorochem)、碳酸钾(408 mg, 2.95 mmol)和PdCl2(dppf) (72.0 mg, 0.098 mmol)混合。将其在110℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，洗脱剂：EtOAc (10 mL)，然后用水(10 mL)洗涤。水相用EtOAc萃取3次。然后将合并的有机相干燥并在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 25 g柱，用0-30% 乙酸乙酯 / 环己烷洗脱)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的3-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(100 mg，0.095 mmol，19.22 %收率)。然后相同的柱用100%乙酸乙酯洗脱，并将所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的2-((1H-吲哚-3-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(10 mg，0.022 mmol，4.45 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.53 min, [MH]+ = 466.4。
中间体66：2-((1H-吲哚-3-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向3-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(100 mg, 0.215 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.5 ml, 6.49mmol)并将反应混合物搅拌20小时。将溶剂在真空下除去以得到2-((1H-吲哚-3-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(200 mg, 0.129 mmol, 60.2 %收率, ~20%纯度)，其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 310.2。
中间体67：(+/-)-2-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 叔丁酯
在室温下在氮气下向在干燥圆底烧瓶中的镁屑(24 mg, 0.987 mmol)于干燥THF (0.5mL)中的溶液中加入2-溴-6-甲基吡啶(0.124 mL, 1.090 mmol)。将反应混合物搅拌45分钟，然后在0℃下添加在干燥THF (0.8 mL)中的2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(157 mg, 0.475 mmol)。将反应混合物搅拌2小时。添加氯化铵水溶液(3 mL)，并将反应混合物搅拌5分钟，然后用EtOAc (20 mL x 3)萃取。有机层经MgSO4干燥并在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g柱，洗脱剂：0-100% 乙酸乙酯/环己烷)纯化。将所需级分浓缩以得到2-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(28 mg，0.071 mmol，14.84 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.70 min, [MH]+ = 358.3。
中间体68：(+/-)-2-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(28 mg,0.078 mmol)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL, 6.49 mmol)并将反应混合物搅拌2小时。将溶剂在真空下除去以得到2-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(28 mg, 0.074 mmol, 95 %收率, ~80%纯度)，其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.39 min, [MH]+ = 302.2。
中间体69：(+/-)-2-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲 基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在室温下在N2下向含有氯化锂(11.32 mg, 0.267 mmol)的干燥圆底烧瓶中加入4-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶(90 mg, 0.267 mmol)和THF (0.5 mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后在0℃下添加异丙基氯化镁(2M于THF中, 0.14 mL,0.280 mmol)（在添加异丙基氯化镁后，溶液变成黄色/棕色），并且将所得混合物在0℃下搅拌30分钟以得到(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)溴化镁（假定100%收率：0.417M于THF中的溶液, 0.64 mL, 0.266 mmol）。在0℃下在氮气下向(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)溴化镁(0.417 M于THF中的溶液, 0.64 mL, 0.266 mmol)的溶液中逐滴加入在THF (0.5 mL)中的2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(60mg, 0.182 mmol, 80% wt.)。将反应混合物搅拌过夜（并使其温热至室温）。将NH4Cl的饱和溶液(2 mL)添加到反应混合物中。将溶液在EtOAc和水之间分配，分离各层，并将水相用EtOAc(2次)进一步萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g柱，用0-50% 乙酸乙酯/环己烷，然后用100% (25%EtOH/乙酸乙酯)洗脱)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的2-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(30 mg，0.029 mmol，15.80 %收率，~50%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 523.3。
中间体70：(+/-)-2-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲 基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(30 mg, 0.029 mmol, 50% wt.)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.2 mL, 2.60 mmol)并将反应混合物搅拌过夜。将其用水洗涤并用DCM萃取5次。然后干燥合并的有机相。在真空下将溶剂除去以得到2-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(27 mg, 0.021 mmol, 72.6 %收率, ~36%纯度)。其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 467.3。
中间体71：2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 叔丁酯
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(30 mg, 0.105 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(50 mg，0.205 mmol，可商购自例如Fluorochem)、碳酸钾(50 mg, 0.362 mmol)和PdCl2(dppf) (15.42 mg, 0.021 mmol)混合。将其在110℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，洗脱剂：EtOAc (10 mL)，然后用水洗涤。水相用EtOAc萃取3次。然后将合并的有机相干燥并在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g柱，用0-50% 乙酸乙酯/环己烷洗脱，然后用30至100 % (25% EtOH/乙酸乙酯)洗脱)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的2-((1H-吡咯并[2.3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(40 mg，0.098 mmol，93 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.63 min, [MH]+ = 367.3。
未观察到可交换物。
中间体72：2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(32.2mg, 0.088 mmol)于DCM (0.5 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.3 mL, 3.89 mmol)并将反应混合物搅拌过夜。在真空下将溶剂除去以得到2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(54 mg, 0.087 mmol, 99 %收率, ~50%纯度)，其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.41 min, [MH]+ = 311.2。
中间体73：4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡 咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
向2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(117mg, 0.319 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(77 mg, 0.351 mmol)和吡啶(0.03 mL, 0.371 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后添加HCl (2 mL, 2Maq.)。然后添加水(5 mL)和DCM (5 mL)。分离有机相，水相再次用DCM (2 x 10 mL)萃取。将合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩以得到4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(140 mg，0.285 mmol，89 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 467.4。
中间体74：(+/-)-4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)乙 基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
将4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(138 mg, 0.281 mmol)溶于THF (1 mL)中并在N2下冷却至-78℃。逐滴添加LiHMDS (1M于THF中, 1.3 mL, 1.300 mmol)，并将反应混合物搅拌1小时。添加MeI(0.050 mL, 0.800 mmol)（颜色从深绿色变成黄色溶液），并将所得混合物搅拌30分钟。添加水(0.5 mL)，并将反应混合物温热。然后将反应混合物用水(10 mL)稀释并用EtOAc (3 x10 mL)萃取。合并的有机相通过疏水性过滤器干燥，然后在真空下除去溶剂。将粗产物通过快速色谱法(SNAP 10 g硅胶柱，洗脱剂：0至60% (25% EtOH/EtOAc) / 环己烷)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(126 mg，0.236mmol，84 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 481.4。
未观察到可交换的质子。
中间体75：(+/-)-2-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰 基)异烟酸
向4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)乙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(126 mg, 0.262 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1 mL, 12.98 mmol)并将反应混合物搅拌5小时。将溶剂在真空下除去以得到标题化合物(110.7 mg, ~75%纯度)，其无需纯化即可用于随后的反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.46 min, [MH]+ = 325.2。
未观察到可交换物。
中间体76：6-(3-羟基苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲 酰胺
将三溴化硼(0.553 mL, 5.83 mmol)逐滴添加到6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(206 mg, 0.583 mmol)于DCM (4 mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌10分钟，随后添加另一当量的三溴化硼(0.553 mL, 5.83 mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，随后添加另外的三溴化硼(0.553 mL, 5.83 mmol)。然后将反应混合物搅拌1小时。将该反应混合物在EtOAc和水之间分配。除去水层，将有机层洗涤(1x水，2x饱和NaHCO3溶液)，通过疏水性玻璃料，并在真空下蒸发以得到棕色油状物。然后将样品溶于DCM (3 mL)中，并装载到25 g Biotage® SNAP柱上，并用20-80% EtOAc/环己烷洗脱。合并含产物的级分并在真空下除去溶剂。然后将样品在氮气流下干燥1小时，然后在40℃下放置在真空下1小时以得到所需产物(34 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 340.4。
中间体77：4-((4-(环丙基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲 哚啉-1-甲酸苄酯
向 2-((1-((苄氧基)羰基)吲哚啉-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(54.5mg, 0.098 mmol)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入HATU (55.8 mg, 0.147 mmol)，然后加入环丙胺(0.014 mL, 0.196 mmol)和DIPEA (0.068 mL, 0.391 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌经过周末。将反应混合物用DCM稀释，然后用饱和LiCl溶液洗涤，然后用2MHCl洗涤。将合并的有机相干燥，然后在真空下浓缩以得到256 mg的棕色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用0-50%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到无色油状物形式的4-((4-(环丙基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(31.8 mg，0.066 mmol，67.1 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.17 min, [MH]+ 485.2。
中间体78：6-(氯(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
在0℃下向6-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(19 mg, 0.056 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中逐滴加入亚硫酰氯(0.033 mL,0.447 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌5小时。在真空下除去溶剂以得到无色油状物形式的6-(氯(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(20 mg, 0.033 mmol, 59.9 %收率, ~60%纯度)。其无需纯化即可用于随后的反应。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.86 min, [MH]+ = 359.2。
中间体79：4,4-二氟-3-(2-(3-((6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙 基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)苯氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，在未定义的立体中心 处的非对映异构体的1:1混合物
在微波小瓶中，将 2-(三丁基亚正膦基)乙腈(0.222 mL, 0.848 mmol)添加到6-(3-羟基苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(64.0 mg, 0.188mmol)和(+/-)-4,4-二氟-3-(2-羟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50 mg, 0.188 mmol)于甲苯(4 mL)中的悬浮液中。将反应混合物在110℃下照射0.5小时。然后在120℃下添加另一当量的 2-(三丁基亚正膦基)乙腈(0.222 mL, 0.848 mmol)的情况下，将反应再照射1小时。添加另一当量的 2-(三丁基亚正膦基)乙腈(0.222 mL, 0.848 mmol)，并将反应混合物在120℃下照射2小时。添加另一当量的 2-(三丁基亚正膦基)乙腈(0.222 mL, 0.848 mmol)，并将反应在130℃下照射1小时。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。除去水层，将有机层洗涤(1x水，2x饱和NaHCO3水溶液)，通过疏水性玻璃料，并在真空下蒸发以得到棕色油状物。样品使用10 g Biotage® SNAP柱，使用30-80% EtOAc/环己烷的梯度纯化。合并含产物的级分并在真空下除去溶剂以得到棕色油状物。然后将样品在氮气流下干燥1小时，并在40℃下在真空下进一步干燥以得到所需产物(53.9 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.33 min, [MH]+ = 587.2。
中间体80：6-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲 基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异 构体的1:1混合物
向2-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3.2-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(27 mg, 0.021 mmol, 36% wt.)于DCM (0.8 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.01mL, 0.057 mmol)，随后加入HATU (11.88 mg, 0.031 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(3.36 mg, 0.031 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌3小时。添加另外的(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(15 mg, 0.139 mmol)、HATU (35 mg, 0.092 mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺 (0.04 mL, 0.021 mmol)，并将所得混合物搅拌1小时。将反应混合物直接通过MDAP (高pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(6 mg，9.82 µmol，47.1 %收率，~85%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.78 min, [MH]+ = 520.3。
中间体81 : 2-(反式-3-羟基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮
向反式-3-氨基环丁醇盐酸盐(1.0428 g, 8.44 mmol) (可商购自ActivateScientific)和邻苯二甲酸酐(1.2565 g, 8.48 mmol)于甲苯(35 mL)中的混合物中加入三乙胺(2.50 mL, 17.94 mmol)。将该混合物搅拌并在120℃下加热17小时。将混合物冷却至室温并在真空下蒸发挥发物以得到白色固体，向其中添加乙酸乙酯(50 mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)，并分离各相。有机相用另外的饱和碳酸氢钠水溶液(2 x 50 mL)洗涤并通过装有疏水性玻璃料的柱过滤。将滤液在真空下蒸发以得到白色固体形式的2-(反式-3-羟基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮 (1.4520 g, 6.68 mmol, 79 %收率)。
中间体82：2-((1r,3r)-3-(2-羟基乙氧基)环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮
在室温下向2-((1r,3r)-3-羟基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(299.8 mg, 1.380 mmol)和1,3-二氧戊环-2-酮(380.4 mg, 4.32 mmol)于DMF (12 mL)中的搅拌溶液中逐份加入氢化钠(60%于矿物油中, 106.7 mg, 2.67 mmol)。将所得混合物加热至80℃并在氮气下搅拌20.75小时。在19.5小时后加入另外的氢化钠(60%于矿物油中, 56.7 mg, 1.418 mmol)。将反应混合物冷却至室温并向其中添加水(5 mL)和饱和NH4Cl水溶液 (5 mL)，将该混合物在室温下搅拌约10分钟。向其中添加乙酸乙酯(20 mL)并分离各层。水相用另外的乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。将有机层合并并通过装有疏水性玻璃料的柱过滤。将滤液在真空下蒸发以得到棕色油状物(449.8 mg)。将其重新溶于DCM (约2 mL)中并直接施加至50 g SNAP柱的顶部并通过SP4快速柱色谱法纯化。将该柱用0% - 50%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱。将适当的级分合并并在真空下蒸发以得到粘稠无色油状物(97.1 mg)。将其重新溶于DMSO (1mL)中并进一步通过MDAP (1 mL进样，甲酸法)纯化。将所需级分在氮气流下蒸发并将残留物在真空下干燥以得到粘稠无色油状物形式的所需产物(54.9 mg, 0.210 mmol, 15 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.79 min，未在正确的m/z下电离。
中间体83：2-(反式-3-甲氧基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮胺
在室温下在氮气下将2-(反式-3-羟基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(196.3 mg, 0.904mmol)和碘甲烷(0.085 mL, 1.356 mmol)于四氢呋喃(4.5 mL)中的溶液搅拌约5分钟。向该混合物中逐份添加氢化钠(在矿物油中的60%分散体) (42.8 mg, 1.070 mmol)并将所得的混浊白色混合物在室温下搅拌16小时。然后将该混合物在微波反应器中在60℃下加热30分钟。添加另外的氢化钠(在矿物油中的60%分散体) (18.2 mg, 0.455 mmol)并将该混合物在微波反应器中在60℃下再加热总共90分钟。添加另外的碘甲烷(0.040 mL, 0.640 mmol)并将混合物在微波反应器中在60℃下加热另外的30分钟，然后在70℃下加热另外的30分钟。向反应混合物中加入水(2 mL)和饱和氯化铵水溶液(2 mL)，并将该混合物在室温下搅拌约10分钟。分离各相，水相用乙酸乙酯(3 x 4 mL)萃取。将有机相合并并通过装有疏水性玻璃料的柱过滤。将滤液在真空下蒸发以得到黄色固体，将其重新溶于二氯甲烷(约3 mL)中并直接施加至10 g SNAP硅胶柱的顶部并通过SP4快速柱色谱法纯化。将该柱用0% - 50%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱。将所需级分合并并在真空下蒸发以得到白色固体形式的2-(反式-3-甲氧基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(82.8 mg, 0.358 mmol, 39.6 %收率)。
中间体84：2-((1r,3r)-3-氨基环丁氧基)乙醇盐酸盐
向2-((1r,3r)-3-(2-羟基乙氧基)环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(54.9 mg, 0.21 mmol)于乙醇(2 mL)中的溶液中加入水合肼(~80%于水中, 0.013 mL, 0.268 mmol)。将该溶液在室温下搅拌49.5小时。在43小时后添加另外的水合肼(~80%于水中, 0.015 mL, 0.245mmol)。将反应混合物过滤并用乙醇(约10 mL)洗涤柱。将滤液在真空下蒸发以得到白色固体。将其重新溶于甲醇(约2 mL)和乙醇(约2 mL)中，并直接施加至2 g Isolute SCX-2离子交换柱的顶部。将该柱用乙醇洗脱，然后用2M HCl水溶液洗脱。将酸性级分在氮气流下蒸发并将残留物在真空下干燥以得到粘性黄色固体形式的所需产物(32.8 mg, 0.196 mmol,93 %收率)。
中间体85：((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯
将DPPA (1.462 mL, 6.78 mmol)添加到(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1 g，6.17 mmol，可商购自例如Astatech)和Et3N (1.289 mL, 9.25 mmol)于甲苯(20mL)中的溶液中，并将该溶液搅拌30分钟，然后添加叔丁醇(10 mL)，并将混合物在回流下加热3小时。将该混合物用EtOAc (50 mL)稀释并用水(50 mL)和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后干燥并在真空下蒸发，所得棕色胶状固体通过硅胶柱(25 g)上的色谱法用0-50% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将含产物的级分收集并在真空下蒸发以得到无色固体形式的所需产物(0.92 g, 3.94 mmol, 64 %收率)。
中间体86：(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺
将HCl (5 mL, 20.00 mmol, 4M于1,4-二氧杂环己烷中)添加到((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁酯(0.92 g, 3.94 mmol)于DCM (10 mL)中的溶液中，并将该溶液在室温下搅拌3小时，然后在真空下蒸发以得到浅黄色固体形式的所需产物(620 mg, 3.66 mmol, 93 %收率)。
中间体87：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸叔丁酯
在室温下将(1-苯基乙烯基)硼酸(2.62 g，17.73 mmol，可商购自例如Sigma-Aldrich)、2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (4 g，14.78 mmol，可商购自例如Anichem)、磷酸三钾(9.41 g, 44.3 mmol)和PEPPSI iPr (1.004 g, 1.478 mmol)溶于1,4-二氧杂环己烷(24 mL)和水(12 mL)中并在氮气下脱气。将所得溶液在70℃下搅拌2小时。将反应冷却至室温，用水(20 mL)稀释，用DCM (3 x 25 mL)萃取。将合并的有机物通过疏水性玻璃料并在真空下浓缩以得到黄色泡沫。将其通过SiO2上的快速色谱法(Biotage SNAP100 g柱，用0-60%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化以得到浅黄色泡沫形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸叔丁酯(4.06 g, 11.40 mmol, 77 %收率, 95%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.35 min, [MH]+ = 339.2。
中间体88：2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在0℃下在氮气下将(2,3-二甲基丁-2-基)硼烷(0.66 M于THF中，30.0 mL，19.80mmol，其制备描述于以下文献中：例如H. C. Brown和E. Negishi, J. Am. Chem. Soc.,94, 3567 (1972))添加到圆底烧瓶中的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸叔丁酯(3.94 g, 9.90 mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时，然后添加水(30 mL)，随后添加过氧化氢(35% w/w于水中, 24.26 mL, 277 mmol)，在0℃下添加氢氧化钠(2M,24.74 mL, 49.5 mmol)。将该反应混合物在0℃下搅拌25分钟然后将其温热。然后将反应混合物搅拌2小时。添加柠檬酸(10%, 30 mL)和EtOAc (30 mL)。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (3x 50 mL)萃取。将合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 50g，洗脱剂0-100% EtOAc/环己烷)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到所需产物(1.15 g, 3.07 mmol, 31 %收率, 95%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.08 min, [MH]+ = 357.3。
中间体89：(+/-)-2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙基)-6-(甲基 氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
向圆底烧瓶中加入溶于DCM (10 mL)中的2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(994 mg, 2.79 mmol)并添加DIPEA (0.98 mL, 5.61 mmol)。然后，在搅拌的情况下缓慢添加叔丁基二甲基氯硅烷(670 mg, 4.45 mmol)。将反应混合物搅拌过夜。将反应用DCM (10 mL)稀释并用水(30 mL)洗涤。分离各层，水相用另外部分的DCM (2 x 20mL)萃取。将合并的有机相通过疏水性玻璃料，并在真空下浓缩。将残留物装载到SNAP (50g)硅胶柱上，使用0-8 % EtOAc/环己烷和随后的7- 40 % EtOAc/环己烷的两个连续的梯度洗脱该硅胶柱。将相关级分合并并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.29 g, 2.60mmol, 93 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.65 min, [MH]+ = 471.5。
中间体90：(+/-)-2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.29 g, 2.60 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液中加入TFA (3 mL, 38.9 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加DCM (5 mL)，然后将反应混合物在真空下浓缩。添加乙醚(5 mL)并将反应混合物在真空下浓缩(x4)以得到白色泡沫形式的粗产物，其还含有TFA加合物副产物。添加THF (5 mL)和LiOH溶液 (1M, 5 mL)，将所得混合物搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩以得到白色泡沫形式的2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(981 mg, 2.287 mmol, 88 %收率, 70%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 301.2。
中间体91：2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.5 g, 5.54 mmol)溶于THF (20 mL)中并添加双三苯基膦二氯化钯(0.389 g, 0.554 mmol)。将溶液用氮气鼓泡5分钟，然后添加(3-甲氧基苄基)溴化锌(II)(0.5M于THF中, 20 mL, 10.00 mmol) 并在 70℃下将混合物加热2小时。溶液用EtOAc (100 mL)稀释并用水(100 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发。残留物通过50 g硅胶柱上的色谱法用0-50% EtOAc/环己烷洗脱纯化，含产物的级分在真空下蒸发以得到深黄色油状物形式的2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.65 g, 4.63 mmol, 84 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.29 min, [MH]+ = 357.3。
中间体92：2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(110 mg, 0.31 mmol)和乙酸钯(II)(62.4 mg, 0.28 mmol) 溶于THF (1 mL)中并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加LiHMDS (1M于THF中, 0.95 mL, 0.950 mmol)并将反应混合物搅拌45分钟。添加MeI (0.03 mL, 0.480 mmol)并将所得混合物搅拌2小时。添加另外的MeI (0.01 mL,0.160 mmol)并将所得混合物搅拌1小时。将MeI (0.02 mL, 0.320 mmol)添加到该反应混合物中，并将所得混合物搅拌1.5小时。然后将溶液温热并添加水(2 mL)以得到第一批的反应混合物。
在单独的烧瓶中，将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(39mg, 0.11 mmol)溶于THF (0.35 mL)中并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加LiHMDS (1M于THF中, 0.33 mL, 0.330 mmol)并将反应混合物搅拌45分钟(颜色变化：无色至黄色至深绿色)。添加MeI (0.06 mL，0.320 mmol，来自0.03 mL MeI于0.06 mL THF中的储备溶液)(颜色变化：深绿色至黄色溶液)，将所得混合物搅拌1小时以得到第二批的反应混合物。
将反应混合物合并并用水(10 mL)和EtOAc (3x 10 mL)萃取。将合并的有机相经疏水性过滤器干燥，然后在真空下除去溶剂。将粗产物通过SiO2上的色谱法(Biotage SNAP柱(10 g)，洗脱剂0-40% 乙酸乙酯/环己烷)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到橙色油状物形式的2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(57.3mg, 0.15 mmol, 32 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.31 min, [MH]+ = 371.3。
中间体93：(+/-)-2-(1-(3-羟基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-(1-(3-甲氧基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(950 mg, 1.923mmol, 75%wt.)溶于DMF (10 mL)中并添加碘环己烷(6.3 mL, 48.7 mmol)。将所得反应混合物在140℃下加热6小时然后停止。然后再在140℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，然后在乙酸乙酯(40 mL)之间分配并用5%乙酸/水(40 mL)洗涤(x3)。分离有机层，然后水层再萃取3次。将合并的有机层通过疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到红色油状物2-(1-(3-羟基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(537 mg, 1.162 mmol, 60 %收率, 65%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 301.2。
中间体94：6-(1-(3-羟基苯基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
向2-(1-(3-羟基苯基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(537 mg, 1.162 mmol, 65%wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.61 mL, 3.49 mmol)，随后加入HATU (663mg, 1.743 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(188 mg, 1.743 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物在饱和LiCl (10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc萃取。将水(10 mL)添加到合并的有机层中，然后分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (2 x 10 mL)萃取。将合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶快速柱(10 g)色谱法用40-100% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的6-(1-(3-羟基苯基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(425 mg, 0.842mmol, 72 %收率, 70%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 354.3。
中间体95：2-(1H-吲哚-4-羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1 g，3.69 mmol，可商购自例如Anichem)、碳酸铯(2.407 g, 7.39 mmol)、乙酸钯(II)(0.050 g, 0.222 mmol)和1,3-二均三甲苯基-1H-咪唑-3-鎓氯化物(0.151 g, 0.443 mmol)添加到钢制Parr容器中，其用氮气吹扫，然后添加1,4-二氧杂环己烷(10 mL)并将混合物在4巴氮气压力下加热至80℃。将该容器冷却至20℃并排气，然后移除顶部并添加(1H-吲哚-4-基)硼酸(0.714 g, 4.43 mmol)，将容器密封并装入一氧化碳至4巴并在120℃下加热过夜。将容器排气并用氮气吹扫三次，然后将混合物在真空下蒸发，残留物在水(20 mL)和EtOAc (2 x 20 mL)之间分配。将合并的有机物干燥并在真空下蒸发，残留物通过50 g SNAP ultra柱上的色谱法使用0-100% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将含产物的级分在真空下蒸发以得到黄色胶状物形式的2-(1H-吲哚-4-羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(45 mg, 0.119 mmol, 3%收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.15 min, [MH]+ = 380.4。
还分离出黄色玻璃状物形式的2-(1H-吲哚-4-基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(165 mg, 0.470 mmol, 13%收率)。
中间体96：(+/-)-2-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔 丁酯
将2-(1H-吲哚-4-羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(40 mg, 0.105 mmol)溶于乙醇(1 mL)中，将该反应用氮气吹扫30分钟。在0℃下将NaBH4 (4.39 mg, 0.116 mmol)/乙醇(1 mL)添加到反应中，并将其搅拌温热至室温1小时。将反应用饱和罗谢尔盐溶液(10mL)淬灭并搅拌另外的10分钟。反应用DCM (3 x 15 mL)萃取，有机相通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到所需产物2-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(40 mg, 0.105 mmol, 99 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.02 min, [MH]+ = 382.4。
中间体97：(+/-)-2-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将2-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(40 mg, 0.105mmol)溶于甲醇(1 mL)和THF (1 mL)中。添加NaOH (0.524 mL, 1.049 mmol, 2M)，并将反应在室温下搅拌1小时。将该反应在真空下浓缩。将残留物溶于水(5 mL)中并用2M HCl酸化至pH 2。将沉淀物滤出并保留。研究含水滤液，发现其中存在所需产物。将该滤液在真空下浓缩。将残留物合并并在真空下浓缩。将残留物溶于乙酸乙酯(15 mL)中并用水(15 mL)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到2-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(15 mg, 0.046 mmol, 44 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.47 min, [MH]+ = 326.2。
中间体98：N4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将N 4-环丙基-6-(3-甲氧基苄基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(100 mg, 0.295 mmol,实施例12)溶于DCM (2 mL)中。将反应冷却至0℃，随后添加BBr3 (0.295 mL, 0.295 mmol,1M于DCM中)。将反应搅拌1小时。添加另外的BBr3 (3当量)，将反应搅拌另外的1小时。将该反应用水淬灭并搅拌15分钟，随后溶于DCM (10 mL)中，然后用水(3 x 15 mL)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到N 4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(40 mg, 0.123 mmol, 42 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 326.3。
中间体99：(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硼酸
向4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(340 mg, 0.973 mmol, 85 % wt.)、乙酸钾(432 mg, 4.40 mmol)和PdCl2(dppf) (215 mg, 0.294 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(2.5 mL)中的搅拌溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷) (745 mg, 2.93 mmol)。将反应混合物用N2吹扫并在100℃下搅拌20小时。将反应混合物在EtOAc(15 mL)和水(15 mL)之间分配。分离各层，水层用另外部分的EtOAc (15 x2 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩以得到黑色油状物形式的(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硼酸(204 mg, 0.195 mmol,20.01 %收率, ~25%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 263.3。
中间体100：4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
将碳酸钾(65.5 mg, 0.474 mmol)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(204 mg, 0.148 mmol, 25 % wt.)、PdCl2(dppf) (23.13 mg, 0.032 mmol)和2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(50mg, 0.158 mmol, 90 % wt.)混合于1,4-二氧杂环己烷(1 mL)和水(0.5 mL)中。将其在微波小瓶中在100℃下加热30分钟。将反应混合物在水(10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (3x 50 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩。将其通过MDAP (高pH法)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(15 mg, 0.024 mmol, 15.26 %收率, ~75%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.28 min, [MH]+ = 467.4。
中间体101：2-(甲基氨基甲酰基)-6-((1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4- 基)甲基)异烟酸叔丁酯
向在微波小瓶中的碳酸钾(1182.9 mg, 8.56 mmol)、2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(824.7 mg, 2.90 mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(239 mg, 0.293mmol)以及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1239.3 mg，3.11 mmol，可商购自例如Peakdale)的混合物中加入1,4-二氧杂环己烷(6 mL)。将水(3 mL)添加到混合物中，将该混合物用氮气脱气，重新密封并在微波反应器中在90℃下将该混合物加热30分钟。将混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀释并通过2.5 gCelite柱过滤。将该柱用另外的乙酸乙酯(2 x 20 mL)洗涤，合并的有机物用水(60 mL)洗涤。有机相用另外的水(60 mL)和饱和盐水(20mL)洗涤，分离各相，有机相通过经过装有疏水性玻璃料的柱过滤来干燥。在真空下从该有机相中蒸发溶剂以得到金棕色易碎泡沫，将其重新溶于二氯甲烷(约 ~6 mL)中并通过SP4快速柱色谱法(100 g硅胶柱)用10-60%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱来纯化。合并所需级分，在真空下蒸发溶剂，将残留物溶于DCM中，转移到配衡过的小瓶中，然后在氮气流下干燥，随后在真空下干燥以得到易碎的黄色泡沫形式的所需产物；2-(甲基氨基甲酰基)-6-((1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)异烟酸叔丁酯(1.055 g, 2.027 mmol, 70 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.31 min, [MH]+ = 521.3。
中间体102：(+/-)-2-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰 基)异烟酸叔丁酯
将4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(110 mg, 0.189 mmol, 80%wt.)溶于THF (1 mL)中并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加LiHMDS (0.75 mL, 0.750 mmol, 1M于THF中)，将反应混合物搅拌45分钟。添加MeI (0.02 mL, 0.320 mmol)，将所得混合物搅拌30分钟。添加水(1mL)，并将反应混合物温热。将反应混合物在水(10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (3x 10 mL)萃取。将合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩。将粗产物在SNAP硅胶柱(10 g)上用0-70% EtOAc/环己烷、随后用0-50%(25%EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱来纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的2-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(20mg, 0.021 mmol, 11%收率, 40%wt.)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 381.4。
中间体103：(+/-)-2-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰 基)异烟酸
向4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(20 mg, 0.021 mmol, 40%wt)于DCM (1 mL)中的溶液中加入TFA (0.5mL, 6.49 mmol)，将反应混合物在室温下搅拌3小时。添加DCM (5 mL)，然后将该反应混合物在真空下浓缩。添加乙醚(5 mL)，将反应混合物在真空下浓缩(x4)以得到黄色油状物形式的2-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(14 mg,0.015 mmol, 72 %收率, 35%纯度)，其无需进一步纯化即可使用。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.56 min, [MH]+ = 325.2。
中间体104：2-(2-羟基-1-苯基丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(375 mg, 1.149 mmol)溶于四氢呋喃(1mL)中并在 N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加LiHMDS (1 M于THF中, 4.60 mL,4.60 mmol)，将反应混合物搅拌30分钟。添加乙醛(0.2 mL, 3.54 mmol)，将所得混合物在-78℃下搅拌3小时。然后将该反应温热，并且反应混合物在室温下时，将该反应混合物用水(1 mL)淬灭。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离有机层，然后水层再萃取3次。将合并的有机层干燥（疏水性玻璃料）并浓缩以得到橙色油状物。将其在SNAP柱10g上纯化，洗脱剂为0-40% EtOAc/环己烷。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的2-(2-羟基-1-苯基丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(293 mg, 0.554 mmol, 48.2 %收率, ~70%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.10 min, [MH]+ = 371.3。
中间体105：2-(2-羟基-1-苯基丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(2-羟基-1-苯基丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(293 mg, 0.554mmol, 70 % wt.)于二氯甲烷 (2 mL)中的溶液中加入TFA (0.8 mL, 10.38 mmol)，并将反应混合物搅拌3小时。将该反应混合物在真空下浓缩，然后添加乙醚(5 mL)，反应混合物在真空下浓缩（4次）以得到黄色油状物形式的2-(2-羟基-1-苯基丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(318 mg, 0.405 mmol, 73.1 %收率, ~40%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 315.2。
中间体106：2-(甲基氨基甲酰基)-6-乙烯基异烟酸叔丁酯
将在密封的微波小瓶中的2-氯-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.8010 g，2.96mmol，可商购自例如Anichem)、2,4,6-三乙烯基环硼氧烷吡啶复合物（2,4,6-trivinylcyclotriboroxane pyridine complex）(1.0627 g, 4.42 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II) (0.1040 g, 0.142 mmol)和碳酸钾(1.2526 g, 9.06mmol)于乙醇(5.0 mL)和甲苯(5.0 mL)中的悬浮液在微波反应器中在120℃下加热40分钟。将小瓶重新密封，并将混合物在微波反应器中加热另外的20分钟。将反应混合物通过10gCelite®柱过滤，该柱用乙酸乙酯(约30 mL)洗涤。将滤液在真空下蒸发以得到粘稠的深红色油状物。将其重新溶于二氯甲烷 (约3 mL)中并直接施加至50 g SNAP柱的顶部并通过快速柱色谱法纯化，洗脱剂为0-40% 乙酸乙酯/环己烷。将适当的级分合并并在真空下蒸发以得到粘稠的深棕色油状物。将其重新溶于二氯甲烷 (约3 mL)中并直接施加至50 g SNAP柱的顶部并通过快速柱色谱法进一步纯化，洗脱剂为15-40% 乙酸乙酯/环己烷。将适当的级分合并并在真空下蒸发以得到粘稠的淡黄色油状物形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-乙烯基异烟酸叔丁酯(738.1 mg, 2.81 mmol, 95 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.14 min, [MH]+ = 263.3。
中间体107：2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将溴(0.11 mL, 2.147 mmol)添加到在二氯甲烷(3 mL)中的2-(甲基氨基甲酰基)-6-乙烯基异烟酸叔丁酯(400 mg, 1.525 mmol)中。将所得溶液在室温下搅拌2小时。在真空下除去溶剂，然后添加在50℃下的EtOH (4 mL)和KOH (171 mg, 3.05 mmol)，将反应混合物搅拌2分钟。将反应混合物在水(10 mL)、盐水(2 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (2x 10 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩以得到2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(600 mg, 1.495mmol, 98 %收率, ~85%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.27 min, [MH]+ = 341.1, 343.0。
中间体108：(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在-78℃下将邻甲苯基溴化镁(2M于乙醚中, 4.73 mL, 9.46 mmol)添加到2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1000 mg, 3.78 mmol)与THF中的溶液中，将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后将其温热至室温。逐滴添加氯化铵溶液(5 mL)，然后将该混合物用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2 x 20 mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，干燥并在真空下蒸发。将粗产物通过50 g硅胶柱上的色谱法用0-100% EtOAc/环己烷洗脱来纯化，含产物的级分在真空下蒸发以得到无色胶状物形式的(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(80 wt%纯度, 0.74 g, 1.66 mmol, 44 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.14. min, [MH]+ = 357.3。
中间体109：(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
在室温下将NaOH (2M, 2.491 mL, 4.98 mmol)添加到(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(80 wt%, 0.74 g, 1.66 mmol)于甲醇(10 mL)中的溶液中，将该溶液搅拌2小时，然后在真空下蒸发，残留物在水(20 mL)和乙醚(20 mL)之间分配。将水层用2M HCl酸化至pH 4，然后用EtOAc (2 x 20 mL)萃取。该混合物在界面处包含固体，将其通过过滤收集，用EtOAc洗涤，并在真空烘箱中干燥以得到无色固体形式的(+/-)-2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(220 mg, 0.73 mmol, 44 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.54 min, [MH]+ = 301.2。
中间体110：4-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶
在0℃下在氮气下向4-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(310 mg，1.573 mmol，可商购自例如Aldrich)于THF (10 mL)中的悬浮液中添加氢化钠(94 mg, 2.360 mmol)。在室温下将反应混合物搅拌20分钟，然后冷却至0℃并缓慢添加苯磺酰氯(0.27 mL, 1.573 mmol)。在0℃下将混合物搅拌3小时。添加水(2 mL)，并将其用EtOAc萃取3次。将其干燥（硫酸镁），然后在真空下浓缩以得到白色固体形式的4-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(600 mg,1.548 mmol, 98 %收率, ~87%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.15 min, [MH]+ = 337.0, 339.0。
中间体111：(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)硼酸
向4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷) (2.4 g, 9.45mmol)、乙酸钾(2.140 g, 21.81 mmol)和PdCl2(dppf) (1.064 g, 1.454 mmol)于二氧杂环己烷中的搅拌溶液中加入4-溴-1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(2.58 g, 7.27mmol)。将反应混合物用N2吹扫并在100℃下搅拌20小时。将反应混合物通过Celite®过滤（洗脱剂EtOAc）。将所得液体在EtOAc (10 mL)和水(10 mL)之间分配。分离有机相，水相用EtOAc (2 x 10 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩以得到黑色油状物形式的(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)硼酸(4.58 g, 6.06mmol, 83 %收率, ~40%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.53 min, [MH]+ = 303.0。
中间体112：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡 啶-4-基)乙烯基)异烟酸叔丁酯
在50℃下将2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(600 mg, 1.495mmol, 85 % wt.)、(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)硼酸(2258 mg, 2.99mmol, 40 % wt.)、氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II) (51.7 mg, 0.066 mmol)和磷酸三钾(952 mg, 4.48 mmol)于水(4 mL)和1,4-二氧杂环己烷(8 mL)中的混合物搅拌20小时。将反应混合物通过Celite®过滤（洗脱剂EtOAc）。添加水(10 mL)并分离有机相。水相用另外部分的EtOAc (2 x 20 mL)萃取。将合并的有机相在真空下浓缩。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage SNAP 25g柱，用0-100% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到绿色油状物形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)异烟酸叔丁酯(340 mg, 0.459 mmol, 30.7 %收率, ~70%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.11 min, [MH]+ = 519.3。
中间体113：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡 啶-4-基)乙烯基)异烟酸
向2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)异烟酸叔丁酯(340 mg, 0.459 mmol, 70 % wt.)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中加入TFA (1 mL, 12.98 mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空下浓缩，然后添加DCM (5 mL)，反应混合物在真空下浓缩。添加乙醚(5 mL)并将反应混合物在真空下浓缩4次以得到黄色油状物形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)异烟酸(496 mg, 0.429 mmol, 93 %收率, ~40%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.78 min, [MH]+ = 463.2。
中间体114：N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡 咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)异烟酸(496 mg, 0.429 mmol, 40 % wt.)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.17 mL, 0.973 mmol)，随后加入HATU (245 mg, 0.643 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(69.2 mg, 0.643 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物在饱和LiCl (10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc萃取。将水(10 mL)添加到合并的有机层中，然后分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (2 x 10 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩。将其通过硅胶柱25g纯化，洗脱剂为40-100% EtOAc/环己烷。将适当的级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)吡啶-2,4-二甲酰胺(220 mg, 0.375 mmol, 88 %收率, ~88%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 516.3。
中间体115：N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡 咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向氢化烧瓶中加入在乙醇(10 mL)中的N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)吡啶-2,4-二甲酰胺(50 mg,0.097 mmol)和碳载钯(20.64 mg, 9.70 µmol)。将烧瓶抽空并用氮气重新填充（3次），然后抽空并用氢气重新填充（3次）。将混合物在室温下在氢气氛下搅拌5小时。将反应混合物通过Celite过滤（洗脱剂EtOAc），然后将液体在真空下浓缩以得到约8:2的比率的N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺与N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)吡啶-2,4-二甲酰胺的混合物。将该物质与另外的在乙醇(20 mL)中的N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙烯基)吡啶-2,4-二甲酰胺(170 mg, 0.330 mmol)和碳载钯(91 mg,0.043 mmol)混合。将烧瓶抽空并用氮气重新填充（3次），然后抽空并用氢气重新填充（3次）。将混合物在氢气氛下搅拌并在室温下搅拌20小时。将反应混合物通过Celite®过滤（洗脱剂EtOAc）。在真空下除去溶剂。将其在SNAP柱10g上纯化，洗脱剂为0-50% (25% 乙醇/EtOAc)/环己烷。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(140 mg, 0.243 mmol, 57.0 %收率, ~90%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.79 min, [MH]+ = 518.3。
中间体116：4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气下向吡啶(0.1 mL, 1.236 mmol)于二氯甲烷(3 mL)中的溶液中加入4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(220 mg，1.117 mmol，可商购自例如Aldrich)和二碳酸二叔丁酯(268mg, 1.228 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加另外的吡啶(0.1 mL, 1.236mmol)和二碳酸二叔丁酯(268 mg, 1.228 mmol)，并将反应混合物搅拌3小时。添加柠檬酸(1M, 5 mL)并分离有机相。水相用另外部分的DCM (2 x 5mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩以得到4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(340 mg, 0.973 mmol, 87 %收率, ~85%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.25 min, [MH]+ = 297.1, 299.1。
中间体117：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯(15 mg, 0.024 mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中加入TFA (0.2mL, 2.60 mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加DCM (5 mL)，然后将反应混合物在真空下浓缩。添加乙醚(5 mL)并将反应混合物在真空下浓缩（4次）以得到黄色油状物形式的2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(13 mg, 0.021mmol, 87 %收率, ~50%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.50 min, [MH]+ = 311.2。
替代的程序：
在室温下将2-(甲基氨基甲酰基)-6-((1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)异烟酸叔丁酯(1.044 g, 2.006 mmol)和氢氧化钠(0.6779 g, 16.95 mmol)于甲醇(5 mL)和THF (5 mL)中的溶液搅拌70分钟。在真空下蒸发挥发物以得到绿色固体。将其重新溶于水(20 mL)中并将该溶液用2M HCl水溶液 (约 15 mL)酸化至pH 2以得到淡黄色沉淀物。将其通过过滤分离，固体用2M HCl水溶液 (约 20 mL)和二乙醚(约 3x 20 mL)洗涤并在真空下干燥以得到桃色固体形式的所需产物；2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(0.564 g, 1.817 mmol, 91 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.50 min, [MH]+ = 311.2。
未观察到1个可交换的质子。
中间体118：2-((1-((苄氧基)羰基)吲哚啉-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异 烟酸
向4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(138.7 mg, 0.221 mmol)于DCM (4 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.7 mL, 9.09mmol)并将反应混合物搅拌4小时。加入另外的2,2,2-三氟乙酸(1 mL, 12.98 mmol)并将所得混合物搅拌过夜。将反应混合物浓缩以得到棕色固体。将EtOAc (10 mL)添加到棕色固体中，然后将所得混合物用碳酸氢钠溶液碱洗5次，然后水相用2M HCl溶液 (10 mL)中和，然后将其用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(出现固体，因此过滤溶液)，然后在真空下浓缩以得到棕色油状物 - 2-((1-((苄氧基)羰基)吲哚啉-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (109 mg, 0.196 mmol, 88 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.18 min, [MH]+ 446.2。
未观察到可交换的质子。
中间体119：4-((6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酰基) 吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯
向2-((1-((苄氧基)羰基)吲哚啉-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(155.7mg, 0.350 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(57.4 mg, 0.534 mmol)和HATU(199.6 mg, 0.525 mmol)的混合物中加入DIPEA (0.214 mL, 1.223 mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(3 mL)。将混合物在室温下搅拌3小时。将该混合物在氮气流下浓缩并用乙腈使体积达到3 mL，随后直接通过MDAP (高pH法)纯化。将所需级分在氮气流下蒸发，将残留物重新溶于二氯甲烷(约 4 mL)中，随后合并并转移到配衡的小瓶中。将溶剂在氮气流下蒸发，并在真空下干燥以得到白色粉末形式的4-((6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(152.4 mg, 0.306 mmol, 87 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.23 min, [MH]+ = 499.4。
中间体120：甲磺酸2-(6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲 酰基)吡啶-2-基)-2-苯基乙酯，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
在氮气下向6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(39 mg, 0.110 mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中加入甲磺酰氯 (0.02 mL,0.257 mmol)和Et3N (0.05 mL, 0.359 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌45分钟。添加水(5 mL)和DCM (5 mL)。分离各层，水相用另外部分的DCM (2 x 10 mL)萃取。将合并的有机相通过疏水性玻璃料并在真空下浓缩以得到白色泡沫形式的甲磺酸2-(6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)-2-苯基乙酯(58 mg, 0.108mmol, 97 %收率, ~80%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 432.4。
中间体121：(+/-)-2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁 酯
在0℃下在氮气下向吡啶-2-基溴化镁(1100 mg, 6.03 mmol)于THF(可商购自MatrixScientific)中的溶液中逐滴添加2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(650mg,2.091 mmol)/4mL的THF。在0℃下将反应混合物搅拌2小时。添加5mL的饱和氯化铵溶液，随后添加10mL的乙酸乙酯和5mL的水。分离有机层，水层用另外部分的乙酸乙酯(3x 20 mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。残留物通过SNAP柱色谱法(25g柱，用40 至80 % EtOAc/环己烷然后100%洗脱)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到约80%纯度的(±)-2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(432 mg, 1.006 mmol, 48.1 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.75 分钟, [MH]+的m/z = 344。
中间体122：(±)-2-(氯(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在0℃下向(±)-2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(432mg, 1.258 mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中逐滴加入亚硫酰氯 (0.73 mL, 10.00mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌2小时。
在真空下除去溶剂以得到黄色油状物形式的(±)-2-(氯(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(598 mg, 0.909 mmol, 72.3 %收率)，其不经进一步纯化即用于随后的步骤中。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 1.13 分钟, [MH]+的m/z = 362。
中间体123：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(吡啶-2-基甲基)异烟酸叔丁酯
在室温下向粗(±)-2-(氯(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(598mg, 0.909 mmol)于乙酸(5 mL)中的溶液中分批加入锌粉(178 mg, 2.73 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加另外的锌粉(60 mg, 0.92 mmol)，将所得混合物搅拌1小时。将7mL的2M NaOH溶液和10mL 的水添加到混合物中，随后添加10mL的DCM。分离水层和有机层，水相再用DCM萃取2次。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。残留物通过柱色谱法(SNAP 25g，用40-100% EtOAc/环己烷洗脱)纯化。将所需级分合并并在真空下浓缩以得到2-(甲基氨基甲酰基)-6-(吡啶-2-基甲基)异烟酸叔丁酯(175 mg, 0.481 mmol, 52.9 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.72 分钟, [MH]+的m/z = 328。
中间体124：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)异烟酸叔丁酯
将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(吡啶-2-基甲基)异烟酸叔丁酯(175 mg, 0.481 mmol)溶于四氢呋喃(1 mL)中并在氮气下在CO2/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加双(三甲基甲硅烷基)氨基锂 (1M于THF中) (1.4 mL, 1.400 mmol)并将反应混合物搅拌45分钟。添加碘甲烷(0.050 mL, 0.800 mmol)并将所得混合物搅拌30分钟。添加1mL的水，并将反应混合物温热。将10mL水添加到混合物中，将其用乙酸乙酯(3 x 10mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性过滤器过滤来干燥，在真空下除去溶剂以得到橙色油状物形式的2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)异烟酸叔丁酯(190 mg, 0.473 mmol, 98 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.81 分钟, [MH]+的m/z = 342。
中间体125：(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)异烟酸
向(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)异烟酸叔丁酯(190mg, 0.473mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中加入TFA (1mL, 12.98 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌经过周末。将反应混合物在真空下浓缩，然后添加5 mL的DCM，反应混合物在真空下浓缩。添加5mL的乙醚，并将反应混合物在真空下浓缩（步骤重复4次）以得到黄色油状物形式的(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)异烟酸(330 mg, 0.463 mmol,98 %收率)，纯度为约40%（杂质为相关溶剂）。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.44 分钟, [MH]+的m/z = 286。
中间体126：2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
在-78℃下将(3-氟苯基)溴化镁(10.41 mL, 10.41 mmol, 1M于THF中)逐滴添加到2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.1 g, 4.16 mmol)于THF中的溶液中并将混合物搅拌30分钟，然后将其温热至-20℃，然后将该混合物用饱和氯化铵溶液(10 mL)淬灭并用EtOAc (20 mL)萃取。将有机层干燥并在真空下蒸发以得到橙色胶状物，将其通过硅胶柱(50 g)上的快速色谱法用0-100% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将含产物的级分在真空下蒸发以得到无色胶状物形式的2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.25 g, 3.47 mmol, 83 %收率)。将不纯的产物溶于甲醇中，添加NaOH (6 mL,12.00 mmol, 2M aq.)，然后将混合物在室温下静置经过周末。将溶剂蒸发至其原始体积的一半，并将所得溶液用2M HCl酸化至pH 3，然后将其静置2小时，得到致密的沉淀物。将其通过过滤收集并用水洗涤，然后固体在真空烘箱中干燥以得到无色固体形式的2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(0.71 g, 2.33 mmol, 56 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.52 min, [MH]+ = 305.4。
中间体127：(±)-2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁 酯
在0℃下在氮气下向(2-氟苯基)溴化镁(184 mg, 0.923 mmol) (其制备参见WO 2012/138734)于THF中的溶液中逐滴加入在0.5ml THF中的(±)-2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(110 mg, 0.375 mmol)。将反应混合物搅拌2小时。添加氯化铵水溶液(1 mL)并将反应混合物在水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的乙酸乙酯(3x 10 mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。将残留物通过硅胶上的色谱法(Biotage SNAP 10g柱，用0-80% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到(±)-2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(99 mg, 0.192 mmol, 51.3 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 1.10 分钟, [MH]+的m/z = 361。
中间体128：(±)-2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
将(±)-2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(144 mg,0.400 mmol)溶于甲醇(1.00 mL)和四氢呋喃(1mL)中。添加2M 氢氧化钠 (1.998 mL, 4.00mmol)并将反应在室温下静置1小时。将反应在真空下浓缩。将残留物溶于水(5ml)中并酸化至pH 2。将沉淀物滤出并干燥以得到粗(±)-2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (68 mg, 0.223 mmol, 55.9 %收率)，其不经进一步纯化用于随后的步骤中。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 0.52 分钟, [MH]+的m/z = 305。
中间体129：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-2-酮
在110℃下将4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.9025 g, 7.49 mmol)、4-溴吲哚啉-2-酮(1.0383 g, 4.90 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(0.6005 g, 0.734 mmol)和乙酸钾(1.4802g, 15.08 mmol)于1,4-二氧杂环己烷 (30 mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物冷却至室温，随后通过10g celite柱过滤。将该柱通过乙酸乙酯(3 x 30 mL)洗涤，将合并的滤液在真空下蒸发以得到棕色液体，将其重新溶于二氯甲烷(约 10 mL)中，并装载到100g SNAP硅胶柱上并通过Biotage SP4半自动快速柱色谱法用20至50%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱来纯化。将所需级分合并并在真空下蒸发，将残留物（其处于结晶的边缘）重新溶于二氯甲烷(约 10 mL)中，转移到配衡的小瓶中，并在氮气流下蒸发溶剂。将残留物用乙醚(5 x 5 mL)研磨，每次倾析掉母液，将残留物在氮气流下并在真空下干燥以得到奶油色固体形式的所需产物(941.8 mg, 3.63 mmol, 74.2 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 260。
中间体130：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙烯基)异烟酸叔 丁酯
在室温下在氮气下在黑暗中将2-(1-溴乙烯基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(380 mg, 0.724 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吲哚啉-2-酮(250.3 mg, 0.966 mmol)、[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(51.9 mg, 0.076 mmol)和磷酸三钾(492.6 mg, 2.321 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(4.0 mL)和水(2.0 mL)中的溶液搅拌22.5小时。向反应混合物中加入乙酸乙酯(15 mL)、水(10 mL)和盐水(5 mL)，并分离各层。水层用另外的乙酸乙酯(2 x 15 mL)萃取，将有机相合并并通过装有疏水性玻璃料的柱过滤。将滤液在真空下蒸发以得到粘性浅棕色固体(415.0 mg)。将其重新溶于DMSO (4 mL)和甲醇(2 mL)中并直接通过(MDAP) (2 x 3 mL 进样，高 pH法)纯化。将所需级分合并并在真空下蒸发以得到黄色固体形式的所需产物(103.2 mg, 0.262 mmol, 36.2 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.05 min, [MH]+ = 394。
中间体131：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)异烟酸叔丁 酯
使用Thales H-Cube装置在20℃下以全H2模式在10%钯/碳催化剂柱上将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙烯基)异烟酸叔丁酯(260 mg, 0.661 mmol)于乙酸乙酯(20 mL)和乙醇(20 mL)中的溶液氢化。该溶液在真空下蒸发以得到黄色胶状物形式的所需产物(257.1 mg, 0.650 mmol, 98 %收率)。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 1.05 分钟, [MH]+的m/z = 396。
中间体132：2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)异烟酸
向(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)异烟酸叔丁酯(257mg, 0.650 mmol)于DCM (8.0 mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(1.0 mL, 12.98 mmol)。将所得橙色溶液在室温下在氮气下搅拌总共2天，在此期间添加另外的DCM (4.0 mL，在7.5小时后)和三氟乙酸(0.5 mL，6.49 mmol，在23.75小时后)。在真空下蒸发挥发物以得到深红色胶状物，将其与乙腈(3 x 5 mL)共沸并在真空下蒸发挥发物以得到粘性粉色固体。向其中添加水(5 mL)和二氯甲烷(5 mL)，使用装有疏水性玻璃料的柱分离各层。水层用另外的二氯甲烷(2 x 5 mL)洗涤，并在真空下蒸发以得到棕色胶状物。将其与乙醚(5 mL)共沸并在真空下蒸发挥发物以得到棕色固体形式的所需产物(158.9 mg, 0.398 mmol, 61.2 %收率)。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 0.54 分钟, [MH]+的m/z = 340。
中间体133：N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)异烟酸(74 mg,0.218 mmol)溶于DMF (0.8 mL)中。添加DIPEA (0.190 mL, 1.090 mmol)，随后添加HATU(120 mg, 0.316 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(47 mg, 0.437 mmol)，并将反应混合物在氮气下搅拌16.5小时。将该反应混合物通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3水溶液和DCM之间分配。将有机层萃取(2 x 20 mL)、干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩以得到N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(39 mg, 0.089 mmol, 41.0 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.85 分钟, [MH]+的m/z = 393。
中间体134：2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁 酯
将5-溴咪唑并[1,2-a]吡啶(500 mg, 2.54 mmol) (可商购自Fluorochem)和硼酸三异丙酯(0.589 mL, 2.54 mmol)溶于甲苯(6 mL)和四氢呋喃(1.5 mL)的混合物中。将所得溶液冷却至-78℃并逐滴添加正丁基锂(1.6M于己烷中) (1.586 mL, 2.54 mmol)。将反应混合物缓慢温热至0℃并用异丙醇(1 mL)淬灭，将其在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空下浓缩并将残留物重新悬浮于丙酮(20 mL)中。将所得奶油色悬浮液过滤并在真空烘箱中干燥以得到约50 %纯度的咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基三异丙氧基硼酸锂(371mg)，其无需进一步纯化即用于随后的步骤中。在微波反应器中在70℃下在5mL微波小瓶中将2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯 (100 mg, 0.351 mmol)、如上制备的粗三异丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基硼酸锂盐(200 mg，约0.320 mmol)、氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)配体(41 mg, 0.052 mmol) (可商购自Aldrich)和磷酸三钾(149 mg, 0.702 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(2 mL)和水(0.500mL)中的混合物加热30分钟。将反应混合物与先前反应混合物批次（该批次规模的约50%）混合并通过硅藻土过滤并浓缩以得到粗棕色油状物。将其通过硅胶上的色谱法(BiotageSNAP 25g柱，用10-80%的(20% 2M NH3/MeOH)/DCM洗脱330ml)以得到橙色油状物形式的>80%纯度的2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(141mg, 0.308 mmol, 88 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.61 分钟, [MH]+的m/z = 367。
中间体135：2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸
向2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(140 mg,0.382 mmol)于1,4-二氧杂环己烷 (2 mL)和水(2 mL)中的溶液中添加氢氧化锂(23 mg,0.960 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。添加HCl (2M水溶液) (0.480 mL,0.959 mmol)，并将反应混合物在真空下浓缩以得到为与氯化锂的混合物的浅黄色固体形式的粗2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(260 mg, 0.293mmol, 77 %收率)。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 0.48 分钟, [MH]+的m/z = 311。
中间体136：4-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气下向吡啶(1.210 mL, 14.96 mmol)于二氯甲烷(5 mL)中的溶液中加入4-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(2.68 g，13.60 mmol) (可商购自Aldrich)和二碳酸二叔丁酯(3.27 g, 14.96 mmol)。在室温下将反应混合物搅拌3小时。添加5mL的2M HCl并分离有机相。水相用另外部分的DCM (2 x 5mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩以得到4-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(4.19 g,12.69 mmol, 93 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 1.15 分钟, [MH]+的m/z = 297, 299。
中间体137：(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)硼酸
向4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(3.22 g,12.68 mmol)、乙酸钾(1.899 g, 19.35 mmol)和4-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(2.13 g, 6.45 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(10mL)中的搅拌溶液中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II) (0.944 g, 1.290 mmol)。将反应混合物用氮气吹扫并在80℃下搅拌18小时，然后在100℃下搅拌4小时。将反应混合物在水(30mL)、盐水(10mL)和乙酸乙酯(30mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的乙酸乙酯(3x 10 mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。向残留物中添加20mL的乙醚并将混合物过滤。将滤液在真空下浓缩以得到约60 %纯度的(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)硼酸(4.49 g, 6.00 mmol, 93 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.51 分钟, [MH]+的m/z = 263。
中间体138：4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H- 吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
将碳酸钾(568 mg, 4.11 mmol)与不纯的(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)硼酸(4g, 5.34 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.785 g,1.073 mmol)和2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(1.698g, 5.37 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(20 mL)和水(10mL)中混合。将混合物在100℃下加热2小时，随后在水(30mL)、盐水(10mL)和乙酸乙酯(30mL)之间分配。分离有机层，水相用另外部分的乙酸乙酯(3x 30 mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。将残留物通过硅胶上的色谱法(Biotage SNAP 100g柱，用0-60% 乙酸乙酯/环己烷洗脱，然后用60-100%洗脱)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(760 mg, 1.548 mmol, 28.8 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.85 分钟, [MH]+的m/z = 467。
中间体139：(±)-4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)丙 基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
将4-((4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(370 mg, 0.753 mmol)溶于四氢呋喃 (2.5 mL)中并在氮气下在CO2/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加双(三甲基甲硅烷基)氨基锂 (1M于THF中) (3.0 mL,3.00 mmol)并将反应混合物搅拌45分钟。添加碘乙烷(0.13 mL, 1.617 mmol)并将所得混合物搅拌45分钟。添加1mL的水，并将反应混合物温热。将反应混合物在水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的乙酸乙酯(3x 10 mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。残留物通过Snap 柱色谱法(10g柱，用0-80% EtOAc/环己烷洗脱)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到橙色油状物形式的(±)-4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)丙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(222 mg, 0.404 mmol, 53.6 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.92 分钟, [MH]+的m/z = 495。
中间体140：(±)-2-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-6-(甲基氨基甲酰 基)异烟酸
向(±)-4-(1-(4-(叔丁氧基羰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)丙基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(222 mg, 0.404 mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸 (1.00 mL, 12.98 mmol)，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在真空下浓缩，然后添加5mL的乙醚并将反应混合物在真空下浓缩（步骤重复x 4）以得到黄色油状物形式的(±)-2-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(224 mg, 0.331 mmol, 82 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.49 分钟, [MH]+的m/z = 339。
中间体141：4-溴-7-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶
在氮气下将4-溴-7-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(可商购自例如Pharmablocks, 500mg, 2.369 mmol)溶于DMF (5 mL)中并在冰浴中冷却。添加NaH(在矿物油中的60%悬浮液,114 mg, 2.84 mmol)并将反应搅拌15分钟。添加甲苯磺酰氯(542 mg, 2.84 mmol)并将反应温热至室温过夜。将反应混合物用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2 x 25 mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到棕色油状物。将粗产物于最少的DCM中施加至25g硅胶柱，并用0%乙酸乙酯/环己烷洗脱2CV，然后用0-25%乙酸乙酯经10CV洗脱，然后保持%洗脱5CV。将适当的级分在真空下浓缩以得到奶油色固体形式的所需产物(447 mg, 1.163 mmol, 49.1 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.49 分钟, [MH]+的m/z = 339。
中间体142：7-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1-甲苯 磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶
将4-溴-7-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(440mg, 1.205 mmol)、双(频哪醇合)二硼(459 mg, 1.807 mmol)和乙酸钾(355 mg, 3.61 mmol)混合于1,4-二氧杂环己烷(10 mL)中并使氮气鼓泡通过该混合物10分钟。添加PdCl2(dppf) (176 mg, 0.241mmol)，并将该反应在氮气下加热至50oC经过周末。添加另外部分的PdCl2(dppf) (176 mg,0.241 mmol)并加热升至65℃过夜。将该反应冷却并通过硅藻土过滤。滤饼用EtOAc (20mL)洗涤。滤液用水(25mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到棕色油状物形式的粗所需产物(1.0688g, 0.259 mmol, 21.52 %收率)，其无需进一步纯化即使用。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 1.30 分钟, [MH]+的m/z = 413.6。
中间体143：2-((7-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6- (甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
将7-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(1.0688 g, 0.259 mmol)溶于1,4-二氧杂环己烷(3 mL)和水(1.5 mL)中。添加2-(氯甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.066 g, 0.233 mmol)和磷酸三甲(0.165 g, 0.778 mmol)，并使氮气鼓泡通过该溶液10分钟。添加[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶)二氯化钯(II) (0.018 g, 0.026 mmol)并将该反应在室温下搅拌过夜。然后将反应加热至80℃持续5小时，然后将反应冷却并静置经过周末。将反应在真空下浓缩，残留物在EtOAc和水(各自25mL)之间分配。水层用EtOAc (25mL)再次萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩以得到棕色油状物。粗产物通过MDAP (高pH法)纯化。将适当的级分在真空下浓缩以得到棕色油状物形式的所需产物(44.2 mg,0.079 mmol, 30.3 %收率)。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 1.29 分钟, [MH]+的m/z = 533.5。
中间体144：2-((7-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰 基)异烟酸
将2-((7-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(44.2 mg, 0.083 mmol)溶于甲醇(2 mL)和THF (2.0 mL)中。添加1MLiOH (0.413 mL, 0.413 mmol)并将反应加热至60℃过夜。将反应冷却并在真空下浓缩以得到棕色油状物形式的粗产物，其无需进一步纯化即使用。
LCMS (2 mins 高pH法) 峰Rt = 0.51 分钟, [MH]+的m/z = 325.4。
中间体145：1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
向冷却至0℃的4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶 (1 g, 4.10 mmol)于THF (16 mL)中的溶液中逐滴加入NaHMDS (1M于THF中, 4.51 mL, 4.51 mmol)。在15分钟后，添加TBDMS-Cl(0.803 g, 5.33 mmol)。将反应在0℃下搅拌30分钟并在室温下搅拌30分钟。添加水(75mL)和DCM (75 mL)，并分离各层（添加少量的MeOH以助于分离）。水层用DCM (2 x 50 mL)进一步萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空下浓缩以得到棕色油状物形式的所需粗产物。将其溶于环己烷中并通过快速 SP4色谱法使用50 g SNAP硅胶柱并用100%环己烷洗脱来纯化。将适当的级分收集并在真空下浓缩，重新溶于甲苯中并再次浓缩以除去任何残留的废物，从而得到透明油状物形式的所需产物1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.41 g, 3.94 mmol, 96 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.71 min, [MH]+ = 359.1。
中间体146：(+/-)-2-((1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2.3-b]吡啶-4- 基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
向冷却至0℃的1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶 (305 mg,0.851 mmol)于THF (4 mL)中的溶液中逐滴加入异丙基氯化镁(1.89M于THF中, 0.480 mL,0.908 mmol)，将反应在0℃下搅拌30分钟。然后添加在THF (4 mL)中的2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(150 mg, 0.568 mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时。将反应在0℃下搅拌另外的30分钟，然后用饱和NH4Cl 水溶液(20 mL)淬灭并接着添加EtOAc (20mL)。分离各层，水层用EtOAc (2 x 20 mL)进一步萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，并在真空下浓缩以得到橙色油状物形式的粗产物。将其溶于环己烷（含有几滴DCM）中并添加至SNAP 25 g硅胶柱。将其通过快速SP4色谱法使用 0 - 60% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将适当的级分收集并在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的所需产物2-((1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(160 mg, 0.322 mmol, 57 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.49 min, [MH]+ = 497.3。
中间体147：(+/-)-2-((1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2.3-b]吡啶-4- 基)(甲氧基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯
在室温下将三甲基氧鎓四氟硼酸盐(143 mg, 0.966 mmol)添加到2-((1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(160 mg, 0.322 mmol)和N 1,N 1,N 8,N 8-四甲基萘-1,8-二胺 (221 mg, 1.031 mmol)于DCM (1 mL)中的混合物中，将该混合物搅拌3小时。相继添加另外部分的质子海绵(ProtonSponge) (74 mg)和三甲基氧鎓四氟硼酸盐(48 mg)，将反应搅拌另外的2小时。将反应用EtOAc (20 mL)稀释并添加饱和碳酸氢钠溶液(20 mL)。分离各层，水层用EtOAc (2 x 20mL)进一步萃取。将合并的有机物用NH4Cl (2 x 10 mL)洗涤，然后将有机层干燥(Na2SO4)并在真空下蒸发。将残留物溶于环己烷中并添加至SNAP 10 g硅胶柱。将其通过快速SP4色谱法使用 0 - 60% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将含产物的级分收集并在真空下浓缩以得到产物，TLC显示该产物仍含有残留的质子海绵。因此，将粗产物溶于环己烷中并添加至SNAP10 g硅胶柱。将其通过快速SP4色谱法使用 0 - 40% EtOAc/环己烷洗脱来再次纯化。将含产物的级分收集并在真空下浓缩以得到产物，TLC显示该产物仍含有残留的质子海绵。因此，将粗产物溶于环己烷中并添加至SNAP 25 g硅胶柱。将其通过快速SP4色谱法使用 0 -50% EtOAc/环己烷洗脱来再次纯化。将含产物的级分收集并在真空下浓缩以得到浅黄色油状物形式的所需纯产物2-((1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)(甲氧基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(99 mg, 0.194 mmol, 60 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.63 min, [MH]+ = 511.3。
中间体148：(+/-)-2-(甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基 甲酰基)异烟酸
在室温下向含有在甲醇(1.2 mL)中的2-((1-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)(甲氧基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(99 mg, 0.194 mmol)的烧瓶中加入氢氧化钠(2M于H2O中, 500 µL, 1.00 mmol)，并将反应混合物搅拌3小时。添加HCl (2M于H2O中, 500 µL, 1.00 mmol)(pH ~4)，并将反应在真空下浓缩以得到奶油色固体形式的粗产物2-(甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(128 mg, 0.188 mmol, 97 %收率, ~50%纯度)，其无需进一步纯化即用于下一反应中。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.58 min, [MH]+ = 341.1。
未观察到1个可交换的质子。
中间体149：6-(甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S, 2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
向2-(甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(50%wt., 128 mg, 0.188 mmol)于DMF (0.9 mL)中的溶液中相继加入HATU (107 mg, 0.282mmol)和DIPEA (0.099 mL, 0.564 mmol)。将反应搅拌1分钟，然后添加(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(30.3 mg, 0.282 mmol)。将反应搅拌1小时。将DMF溶液直接添加到两个MDAP小瓶中并用MeOH/DMSO稀释至(2 x 0.9 mL)。将它们通过MDAP (高pH法)纯化。将适当的级分收集并在真空下浓缩以得到灰白色固体形式的产物(43 mg, 0.109 mmol, 58 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 394.3。
中间体150：叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷
将环戊-3-烯-1-醇(5 g，59.4 mmol，可商购自例如Astatech)溶于DCM (100 mL)中并添加TBDMS-Cl (8.96 g, 59.4 mmol)和咪唑(4.86 g, 71.3 mmol)，然后将所得悬浮液在室温下搅拌经过周末。混合物用水(2 x 100 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色液体形式的叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷(12.05g, 60.7 mmol, 102 %收率)。
中间体151：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6- 甲酸乙酯
将重氮乙酸乙酯(6.90 mL，66.5 mmol，可商购自例如Sigma Aldrich)溶于DCM (150mL)中，在室温下将其经~ 5 h逐滴添加到乙酸铑(II)二聚物(1 g，2.263 mmol，可商购自例如Sigma Aldrich)和叔丁基(环戊-3-烯-1-基氧基)二甲基甲硅烷(12g, 60.5 mmol)于DCM(150 mL)中的混合物中。将所得绿色溶液搅拌过夜，然后在真空下蒸发以得到绿色液体。将其装载到340g硅胶柱上并用0-40% EtOAc/环己烷洗脱。将适当的级分在真空下蒸发以得到无色液体形式的(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯 (5.5g, 19.33 mmol, 32.0 %收率)，NMR显示与所需产物一致，为约3:1比率的在甲硅烷基醚位置处的异构体的混合物，其原样用于下一步骤。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 不存在。
中间体152：((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6- 基)氨基甲酸苄酯
步骤1：在室温下将氢氧化钠(20 mL, 40.0 mmol)添加到(1R*,5S*,6r*)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯 (5.0g, 17.58 mmol)于乙醇 (50mL)中的溶液中，并将混合物搅拌3小时。TLC表明所有原料已消耗，将混合物在真空下蒸发至约30 mL体积，然后用水(30 mL)稀释并用乙醚(50 mL)洗涤。将来自后处理的乙醚洗液干燥并在真空下蒸发以得到回收的原料(3.85 g)(1R*,5S*,6r*)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙酯。将其溶于乙醇(30 mL)中并添加 2M NaOH水溶液(20 mL)，然后将混合物在70℃下加热3小时，然后在真空下蒸发。将残留物溶于水(50mL)中并用乙醚(50mL)洗涤，然后水层用2M HCl (20mL)酸化并用EtOAc (2 x 50mL)萃取。将合并的有机物干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色固体形式的(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1.9g, 7.41 mmol, 42.2 %收率)。产物无需纯化用于下一步骤。
步骤2：将(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(1.8 g, 7.02 mmol)溶于甲苯(20 mL)和Et3N (1.957 mL, 14.04 mmol)的混合物中，然后添加DPPA (1.815 mL, 8.42 mmol)，将混合物在室温下搅拌30分钟。添加苄醇(1.095mL, 10.53 mmol)并将混合物在100℃下加热4小时，然后冷却至室温。添加乙酸乙酯 (100mL)，溶液用水(2 x 100mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤，并且将滤液在真空下蒸发以得到浅黄色油状物。将其溶于DCM (10 mL)中并装载到50g硅胶柱上，然后用0-30% EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分（通过高锰酸盐浸渍检测）收集并在真空下蒸发以得到浅黄色油状物形式的((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯(1.90g, 5.26 mmol, 74.9 %收率)，NMR与所需产物一致，为约2:1比率的异构体的混合物。化合物无需进一步纯化用于下一步骤。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.56 min, [MH]+ = 362.6。
中间体153：(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺
将((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸苄酯(1.9g, 5.26 mmol)溶于乙醇(100 mL)中，并在H-Cube中在大气压下以1 mL/min流速进行氢化。将洗脱液在真空下蒸发以得到浅黄色油状物形式的所需产物 (1.12g, 4.92mmol, 84 %收率)，NMR与所需产物一致，为在甲硅烷基醚位置处的大致相等的异构体的混合物。
中间体154：N 4-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己- 6-基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将(S)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(100 mg, 0.352 mmol)、HATU(160 mg, 0.422 mmol)、DMF (2 mL) 和 DIPEA (0.184 mL, 1.055 mmol)混合到烧瓶中并搅拌5分钟。然后添加(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺(96 mg, 0.422 mmol)并将反应在室温下搅拌2小时。反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取3次，合并的有机物用10% LiCl水溶液洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并在真空下浓缩以得到黄色油状物。然后将其通过硅胶柱色谱法使用0至32%的(25% EtOH/AcOEt)/环己烷的梯度洗脱来纯化，以得到黄色胶状物形式的所需产物(156.7 mg, 0.279 mmol, 82 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.53 min, [MH]+ = 494.4。
中间体155：6-苄基-N 4-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环 [3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(35 mg, 0.129 mmol)、HATU (59.1 mg, 0.155mmol)、DMF (1.2 mL) 和 DIPEA (0.068 mL, 0.388 mmol)混合到烧瓶中并搅拌5分钟。然后添加(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺 (35.3 mg,0.155 mmol)并将反应在室温下搅拌1.5小时。反应混合物用水(30 mL)稀释并用EtOAc(3 x30mL)萃取，合并的有机物用10% LiCl水溶液(20 mL)洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并在真空下浓缩以得到黄色油状物。然后将其通过硅胶柱色谱法使用0至40%的(25% EtOH/EtOAc)/环己烷的梯度洗脱(10CV)来纯化，以得到橙色胶状物形式的所需产物(113.5 mg,0.208 mmol, 59.3 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.49 min, [MH]+ = 480.4。
中间体156：N 4-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己- 6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(185 mg, 0.578 mmol)、HATU(264 mg, 0.693 mmol)、DMF (4 mL) 和 DIPEA (0.303 mL, 1.733 mmol)混合到烧瓶中并搅拌5分钟。然后添加(1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-胺(158 mg, 0.693 mmol)并将反应在室温下搅拌1.5小时。添加DIPEA (0.303 mL, 1.733mmol)并将反应混合物在45℃下搅拌2小时。添加另外部分的HATU (264 mg, 0.693 mmol)并将反应在45℃下搅拌2小时。反应混合物用水(40 mL)稀释并用EtOAc(3 x 40mL)萃取，合并的有机物用10% LiCl水溶液(20 mL)洗涤，用饱和NaHCO3溶液(20 mL)洗涤，使用疏水性玻璃料干燥并在真空下浓缩以得到橙色油状物。将其首先通过硅胶柱色谱法使用0至32%的(25% EtOH/AcOEt)/环己烷的梯度洗脱(10 CV)来纯化，然后第二次通过硅胶柱色谱法用20至80%的AcOEt/环己烷的梯度洗脱(10 CV)来纯化。将适当的级分合并并在减压下蒸发以得到橙色胶状物形式的所需产物(168.3 mg, 0.147 mmol, 44.7 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.52 min, [MH]+ = 510.4。
实施例
实施例1：(+/-)-N4-环丙基-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
在室温下在N2下将2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(100 mg，0.352mmol)、HATU (204 mg，0.537 mmol)、DIPEA (0.19 mL，1.088 mmol)、环丙胺(0.05 mL,0.722 mmol)和DMF (3 mL)搅拌1小时。将溶液浓缩以得到750 mg的橙色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 25 g柱，用0-100% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将适当的级分浓缩以得到83 mg黄色油状物。将样品溶于1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 中并通过MDAP(甲酸法)纯化。将适当的级分浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (58 mg, 0.161 mmol, 45.9 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 324.0。
实施例2：6-苄基-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
在室温下在N2下将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(130 mg，0.481 mmol)、HATU(267 mg，0.702 mmol)、DIPEA (0.25 mL，1.431 mmol)、环丙胺(0.07 mL, 1.010 mmol)和DMF (3 mL)搅拌45分钟。将溶液浓缩以得到60 mg的橙色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 25 g柱，用0-100% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将适当的级分浓缩以得到139 mg黄色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 25 g柱，用50-100% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将适当的级分浓缩以得到83 mg黄色油状物。将其溶于DMF (1 mL)中并通过MDAP (甲酸法)进一步纯化。将含所需产物的级分浓缩以得到白色固体形式的6-苄基-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(66 mg，0.192 mmol，39.9 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 310.0。
实施例3：6-苄基-N4-环丁基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将6-溴-N4-环丁基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(46 mg, 0.147 mmol)、苄基溴化锌(II)(0.5M于THF中, 0.5 mL, 0.250 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (12 mg, 0.017 mmol)和THF(1.5 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将黑色溶液经Celite®过滤，在EtOAc和水之间分配，用EtOAc (3 x 30 mL)萃取，经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到70 mg的棕色固体。将样品溶于1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 中并通过MDAP (甲酸法)纯化。将溶液浓缩以得到无色油状物形式的6-苄基-N4-环丁基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(23 mg，0.064 mmol，43.4 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.02 min, [MH]+ = 324.0。
实施例4：(+/-)-N4-环丁基-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将6-溴-N4-环丁基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(46 mg, 0.147 mmol)、(1-苯基乙基)溴化锌(II)(0.5M于THF中, 0.147 mL, 0.074 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (16 mg, 0.023 mmol)和THF (1 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将反应在微波中在110℃下加热另外的30分钟。添加(1-苯基乙基)溴化锌(II)(0.5M于THF中, 0.3 mL, 0.150 mmol)、PdCl2(PPh3)2(11 mg, 0.016 mmol)和THF (0.5 mL)并将反应在微波中在110℃下加热30分钟。将反应混合物在EtOAc和水之间分配，水层用EtOAc (3 x 30 mL)进一步萃取，将合并的有机物经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到120 mg的棕色固体。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage®SNAP 10 g柱，用0-100% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到31 mg棕色固体。将样品溶于1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 中并通过MDAP (甲酸法)纯化。将溶液浓缩以得到白色固体形式的N4-环丁基-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(21 mg，0.056mmol，38.0 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.08 min, [MH]+ = 338.0。
实施例5：(S*)-N4-环丙基-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例6：(R*)-N4-环丙基-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例1 (53 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (1 mL)中。进样：将0.5 mL的溶液进样到柱上(20% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak IC)。进样总数 = 2。将21-23.5 min的级分合并并标记为峰1。将25-28 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例5(26 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 324.2。
收集对应于峰2的级分以得到实施例6(20 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 324.1。
实施例7：6-苄基-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将6-溴-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(80 mg, 0.256mmol)、苄基溴化锌(II)(0.5M于THF中, 0.871 mL, 0.436 mmol)、PdCl2(PPh3)2 (27 mg,0.038 mmol)和THF (1.5 mL)在微波中在110℃下加热30分钟。将黑色溶液经Celite®过滤，在EtOAc和水之间分配，用EtOAc (3 x 30 mL)萃取，经疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到~149 mg的棕色油状物形式的粗产物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g柱，用10-70% 乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化以得到86 mg棕色油状物。将其溶于1:1 DMSO:MeOH (1mL)中并通过MDAP (甲酸法)进一步纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。将有机层萃取(2 x 50 mL)、干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩以得到白色固体形式的6-苄基-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(58 mg，0.161 mmol，63.0 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 324.4。
实施例8：6-((1H-吲唑-7-基)甲基)-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
在2 mL微波小瓶中在1,4-二氧杂环己烷(2 mL)和水(1 mL)中将6-(氯甲基)-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(66 mg, 0.247 mmol)与7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑(68 mg, 0.279 mmol)、碳酸钾(104 mg, 0.753 mmol)和PdCl2(dppf) (34 mg, 0.046 mmol)混合。将其在120℃下加热40分钟。将溶液通过Celite®过滤，在EtOAc (10 mL)和水(10 mL)之间分配，用另外的EtOAc (2 x 10 mL)萃取，通过疏水性玻璃料干燥并浓缩以得到240 mg的棕色油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP25 g，用0-100%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到浅棕色固体形式的6-((1H-吲唑-7-基)甲基)-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(43 mg，0.111 mmol，44.9%收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.80 min, [MH]+ = 350.5。
实施例9：6-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
将1,3-二氧杂环戊-2-酮(11.47 mg, 0.130 mmol)添加到6-(3-羟基苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(34 mg, 0.100 mmol)和K2CO3(27.7 mg,0.200 mmol)于DCM (4 mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌1小时并添加额外当量的1,3-二氧杂环戊-2-酮(11.47 mg, 0.130 mmol)。将反应混合物搅拌额外的2小时并再次添加额外当量的1,3-二氧杂环戊-2-酮(11.47 mg, 0.130 mmol)。将反应混合物搅拌2小时并添加另外的1,3-二氧杂环戊-2-酮(11.47 mg, 0.130 mmol)。添加最后当量的1,3-二氧杂环戊-2-酮(11.47 mg, 0.130 mmol)，并将反应混合物搅拌15小时。将反应混合物在 EtOAc和水之间分配。除去水层，将有机层洗涤(1x水，2x饱和NaHCO3水溶液)，通过疏水性玻璃料，并在真空下蒸发以得到透明油状物。然后样品使用10 g Biotage® SNAP柱，使用30-100% EtOAc/环己烷的梯度来纯化。将含产物的级分合并并在真空下除去溶剂以得到透明油状物。然后将样品在氮气流下干燥2小时，然后放置在40℃下的真空烘箱中1小时。将样品进一步通过MDAP (甲酸法)纯化。将含产物的级分合并并在真空下除去溶剂以得到白色固体。然后将样品在氮气流下干燥16小时，然后在40℃下在真空下放置1小时以得到所需产物(12 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 384.4。
实施例10：N4-环丙基-6-(2-氟苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(2-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(45.2 mg, 0.125 mmol, 80% wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入HATU (64.2 mg, 0.169 mmol)，然后加入环丙胺(0.02 mL,0.289 mmol)和DIPEA (0.1 mL, 0.573 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配。将有机层萃取(2 x 20 mL)，然后干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-6-(2-氟苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(23.4 mg, 0.068 mmol, 60.3 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 328.2。
实施例11：N4-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶- 2,4-二甲酰胺
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(30 mg, 0.100 mmol)悬浮于DCM(10 mL)中，并添加Et3N (0.028 mL, 0.200 mmol)和HATU (49.4 mg, 0.130 mmol)，然后将混合物搅拌20分钟，随后添加((1S,2S)-2-氨基环丙基)甲醇盐酸盐 (18.52 mg, 0.150mmol)。将所得黄色溶液搅拌2小时，然后用水(10 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发，残留物通过MDAP (高pH法)纯化以得到无色固体形式的N4-((1S,2S)-2-(羟基甲基)环丙基)-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (25 mg, 0.068 mmol, 67.7 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 370.3。
实施例12：N4-环丙基-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(40 mg, 0.133 mmol)悬浮于DCM(10 mL)中，并添加Et3N (0.037 mL, 0.266 mmol)和HATU (65.8 mg, 0.173 mmol)，然后将混合物搅拌20分钟，随后添加环丙胺 (0.028 mL, 0.400 mmol)。将所得黄色溶液搅拌2小时，然后用水(10 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发，残留物通过MDAP (高pH法)纯化以得到无色固体形式的N4-环丙基-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (25 mg, 55.3%收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.95 min, [MH]+ = 340.2。
实施例13：6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺
将HATU (425 mg, 1.119 mmol)添加到2-(3-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(210 mg, 0.699 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(90 mg, 0.839 mmol)和DIPEA(0.366 mL, 2.098 mmol)于DMF (4 mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌15分钟。将该反应混合物在EtOAc和水之间分配。除去水层，将有机层洗涤(1x水，2x饱和NaHCO3水溶液)，通过疏水性玻璃料，并在真空下蒸发以得到棕色油状物。然后样品使用10 g Biotage® SNAP柱使用0-80% EtOAc/环己烷洗脱纯化。合并含产物的级分并在真空下除去溶剂。然后将样品在氮气流下干燥1小时，然后在40℃ 下在真空下放置1小时以得到所需产物(206 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.01 min, [MH]+ = 354.3。
实施例14：2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸单体的酰胺阵列
将由2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(162 mg)和HATU (228 mg) 制备的储备溶液一起溶于DMF (3 mL)中。添加DIPEA (330 µL)并将小瓶加盖并摇动以助于溶解。将该反应混合物的等分试样(0.5 mL, 0.1 mmol)添加到基质小瓶(1.2 mL)中的预先称重的具有上示结构的胺(0.120 mmol)中。将其加盖并摇动以分散内容物，然后在室温下静置18小时。然后，向该反应混合物中加入T3P (50%于EtOAc中, 120 µL)和DIPEA (55 µL)，并添加另外的初始胺(+/-)-(反式)-2-氨基环丁醇 (20 mg)。将小瓶摇动并在室温下静置1小时。将该样品原样进样并通过MDAP (高 pH法)纯化。然后将溶剂在氮气流下干燥以得到如下表中所列的所需产物。
实施例
* 所有LCMS均使用2 min 高pH法进行。
实施例15：2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸单体的酰胺阵列
将2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸添加到HATU (0.038 g, 0.100 mmol)和DIPEA (0.052 mL, 0.300 mmol)中并将混合物溶于DMF (0.5 mL)中并放置5分钟。将该溶液分配到该胺(0.100 mmol)中并将反应在22℃下放置24小时。然后将T3P (0.2 mmol)添加到反应中，并通过LCMS分析进程。然后将在DMF中的样品通过MDAP (高 pH法)纯化。将溶剂在氮气流下干燥以得到如下表中所示的所需产物。
实施例
* 所有LCMS均使用2 min 高pH法进行。
实施例16：(S)-N4-环丙基-6-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰 胺
向(S)-2-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(82 mg, 0.238mmol)于DMF (2 mL)中的溶液中加入HATU (136 mg, 0.357 mmol)，然后加入环丙胺(0.035mL, 0.505 mmol)和DIPEA (0.166 ml, 0.952 mmol)。将所得反应混合物在室温下在空气中搅拌。添加另外部分的HATU (136 mg, 0.357 mmol)和环丙胺(0.035 mL, 0.505 mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。将有机层干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩以得到白色固体形式的(S)-N4-环丙基-6-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(17 mg, 0.040 mmol, 16.76 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 384.2。
实施例17：N4-环丙基-6-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(98 mg, 0.297 mmol)于DMF (1 mL)中的溶液中加入HATU (169 mg, 0.445 mmol)，然后加入环丙胺(33.9 mg,0.593 mmol)和DIPEA (0.207 ml, 1.187 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌4小时（在添加胺后，黄色溶液变成棕色）。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。将有机层在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的N4-环丙基-6-(3-(2-羟基乙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(17.6 mg,0.048 mmol, 16.06 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 370.2。
实施例18：6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺；
向 2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(27 mg, 0.052 mmol, 59%wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入HATU (49.8 mg, 0.131 mmol)，然后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(18.78 mg, 0.175 mmol)和DIPEA (0.076 mL, 0.435 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。在添加胺后，黄色溶液变成棕色。反应混合物直接通过MDAP(甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。将有机层萃取然后干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(12.4 mg, 0.031 mmol, 59.8 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 363.2。
实施例19：N4-环丙基-6-(4-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(4-甲氧基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(62 mg, 0.162 mmol, 78.5%wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入HATU (118 mg, 0.310 mmol)，然后加入环丙胺(0.029 mL, 0.419 mmol)和DIPEA (0.180 mL, 1.031 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。在添加胺后，黄色溶液变成棕色。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。将有机层萃取(2 x 20 mL)，然后干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-6-(4-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(38 mg, 0.106 mmol, 65.6 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 340.1。
实施例20：N4-环丙基-N2-甲基-6-(2-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(2-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(13.8 mg, 0.043 mmol, 89% wt.)于DMF (0.9 mL)中的溶液中加入HATU (27.7 mg, 0.073 mmol)，然后加入环丙胺(0.01mL, 0.144 mmol)和DIPEA (0.040 mL, 0.229 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。在添加胺后，黄色溶液变成棕色。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和NaHCO3溶液和DCM之间分配。然后将有机层干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-N2-甲基-6-(2-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺(4.2 mg,0.012 mmol, 27.1 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.99 min, [MH]+ = 324.3。
实施例21：6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-环丙基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(200 mg, 0.647 mmol)溶于DMF (5 mL)中。添加DIPEA (0.339 mL, 1.940 mmol)和HATU (369 mg, 0.970 mmol)并将反应在室温下搅拌10分钟。添加环丙胺(0.090 mL, 1.293 mmol)并将反应搅拌另外的1小时。将反应在真空下浓缩并将残留物溶于乙酸乙酯(10 mL)中并使用碳酸氢钠溶液(10 mL)萃取。有机相用盐水(10 mL)洗涤，随后经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO (1 mL)中并通过MDAP (高 pH法)纯化。将溶剂在真空下蒸发以得到奶油色固体形式的所需产物(23 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 349.3。
实施例22：N4-环丙基-6-(3-氟苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(3-氟苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(53 mg, 0.147 mmol, 80% wt.)于DMF(0.8 mL)中的溶液中加入HATU (105 mg, 0.276 mmol)，然后加入环丙胺(0.03 mL, 0.433mmol)和DIPEA (0.161 mL, 0.922 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配。然后将有机层干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-6-(3-氟苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(26.6 mg, 0.081 mmol, 55.2 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.95 min, [MH]+ = 328.2。
实施例23：N4-环丙基-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(3-甲基苄基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(102 mg, 0.359 mmol)于DMF (0.8mL)中的溶液中加入HATU (205 mg, 0.538 mmol)，然后加入环丙胺(0.070 mL, 1.010mmol)和DIPEA (0.2 mL, 1.145 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配。然后将有机层干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-N2-甲基-6-(3-甲基苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺(25.1 mg, 0.078 mmol, 21.63 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 324.2。
实施例24：N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基) 吡啶-2,4-二甲酰胺
向 2-(甲基氨基甲酰基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)异烟酸(55.7 mg, 0.080mmol, 47% wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入HATU (78 mg, 0.205 mmol)，然后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(20 mg, 0.186 mmol)和DIPEA (0.120 mL, 0.689 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌经过周末。反应混合物直接通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配。然后将有机层干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-((2-氧代吲哚啉-4-基)甲基)吡啶-2,4-二甲酰胺(22 mg, 0.052 mmol, 65.0 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.79 min, [MH]+ 379.3。
实施例25：N4-环丙基-6-(吲哚啉-4-基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将4-((4-(环丙基氨基甲酰基)-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(31.8 mg, 0.066 mmol)溶于甲醇(10 mL)中并在H-Cube中在Pd/C催化剂柱上以全H2模式氢化1小时。在真空下蒸发洗脱液以得到粗产物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage®SNAP 10 g，用0-100%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到N4-环丙基-6-(吲哚啉-4-基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(2.3 mg，6.24 µmol，9.50 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.48 min, [MH]+ 351.2。
实施例26：N4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将N4-环丙基-6-(3-甲氧基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(120 mg, 0.354 mmol)于DCM (3 mL)中的悬浮液在N2下冷却至0℃并逐滴添加BBr3 (1M于DCM中, 1.76 mL, 1.760mmol)。将反应用水(10 mL)淬灭并用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。然后有机萃取物用饱和NaHCO3溶液洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩以得到黄色油状物N4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(117.3 mg，0.288 mmol，82 %收率，~80%纯度)。将12 mg的该样品通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配。然后将有机层干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(3.3 mg, 9.13 µmol, 2.58 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.77 min, [MH]+ 326.2。
实施例27：(R)-N4-环丙基-6-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰 胺
将N4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(53 mg, 0.163 mmol)、(R)-2-甲基环氧乙烷(0.06 mL, 0.856 mmol)和碳酸铯(159 mg, 0.489 mmol)的混合物溶于DMF (1.5 mL)中并在2 mL微波小瓶中将反应混合物在150℃下加热30分钟。反应混合物用水(10 mL)洗涤并用EtOAc (3 x 10 mL)萃取，然后用饱和LiCl溶液洗涤。将合并的有机相干燥并浓缩以得到300 mg的油状物。将其通过SiO2上的色谱法(Biotage® SNAP 10 g，用60-100%乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化。将所需级分浓缩以得到所需产物，其仍然不纯。将其进一步通过MDAP (甲酸法)纯化。将含有所需产物的级分在饱和碳酸氢钠溶液和DCM之间分配。然后将有机层干燥并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的(R)-N4-环丙基-6-(3-(2-羟基丙氧基)苄基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(19.9 mg, 0.049 mmol, 30.3 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.83 min, [MH]+ 384.2。
实施例28：6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向(+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(500 mg, 1.747 mmol)于DCM (3 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.915 mL, 5.24 mmol)，随后加入HATU (996 mg,2.62 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(282 mg, 2.62 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物在饱和LiCl溶液(10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配，随后水相再用EtOAc萃取2次。合并的有机相用水(20 mL)洗涤，水相再用 EtOAc萃取2次。合并的有机相通过疏水性玻璃料干燥。将其通过快速硅胶色谱法(SNAP 10 g硅胶柱，洗脱剂为40-100% EtOAc/环己烷)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(229 mg，0.607 mmol，34.8 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.85 min, [MH]+ 340.2。
未观察到可交换物。
实施例29：6-((R)-羟基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
实施例30：6-((S)-羟基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺
实施例28 (210 mg)通过手性HPLC纯化。将非对映体混合物溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1.5 mL的溶液进样到柱上(20% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm))。进样总数 =2。将10-12.5 min的级分合并并标记为峰1。将15-20 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例30(73 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 340.3。
未观察到可交换物。
收集对应于峰2的级分以得到实施例29(92 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 340.2。
实施例31：6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向 2-(甲氧基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(44.9 mg, 0.090 mmol, 60%wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入HATU (85 mg, 0.224 mmol)，然后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(24.13 mg, 0.224 mmol)和DIPEA (0.1 mL, 0.573 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌3小时（在添加胺后，橙色溶液变成黄色）。反应混合物直接通过MDAP (高pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(24 mg，0.061 mmol，68.1%收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 354.2。
实施例32：6-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向 2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(289 mg, 0.604 mmol,60% wt.)于DMF (1 mL)中的溶液中加入HATU (612 mg, 1.610 mmol)，然后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(173 mg, 1.608 mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺 (0.615 mL,3.52 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过MDAP (高pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(羟基(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(62 mg，0.164 mmol，27.2 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.55 min, [MH]+ = 341.2。
实施例33：6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
向 2-((1H-吲唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(33.5 mg, 0.054 mmol,50% wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入HATU (65.7 mg, 0.173 mmol)，然后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(18.58 mg, 0.173 mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺 (0.07mL, 0.401 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过MDAP (高pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到12.6 mg的粗产物。将其通过快速硅胶色谱法(洗脱剂：40%乙酸乙酯/环己烷；随后100% (25% EtOH/EtOAc))纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(3 mg，8.26 µmol，15.29 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 364.3。
实施例34：N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(吡啶-2-基甲基)吡啶-2,4- 二甲酰胺
在室温下向6-(氯(吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(20 mg, 0.033 mmol, 60% wt.)于乙酸(1 mL)中的溶液中缓慢加入锌粉(6.56mg, 0.100 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加NaOH (5M, 3 mL)和DCM (5mL)。分离水层和有机层，水相用DCM(2次)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。添加1:1 MeOH:DMSO (0.95 mL)并将反应混合物通过MDAP (高 pH法)纯化。将所需级分合并并在真空下浓缩以得到N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(吡啶-2-基甲基)吡啶-2,4-二甲酰胺(5.2 mg, 0.015 mmol, 45.5 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.51 min, [MH]+ = 325.3。
实施例35：6-((S)-氟(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺
将6-((R)-羟基(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(6 mg, 0.018 mmol)溶于DCM (1 mL)中并在氮气下在冰浴中冷却，然后逐滴添加deoxofluor(0.04 mL, 0.108 mmol)，并将混合物在0℃下搅拌2小时，然后将其温热至室温并搅拌过夜。添加碳酸钠溶液(1 mL)和DCM (5 mL)。分离水层和有机层，水相用DCM(2次)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。添加1:1 MeOH:DMSO (0.95 mL)并将反应混合物通过MDAP (高 pH法)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-((S)-氟(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(2 mg，5.57 µmol，31.5 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.02 min, [MH]+ = 342.2。
实施例36：N2-甲基-6-((2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)甲基)-N4-((1S,2S)-2-甲 基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-((2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(32.5 mg,0.045 mmol, 45% wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入HATU (61 mg, 0.160 mmol)，随后加入(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(17.25 mg, 0.160 mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.07 mL, 0.401 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物直接通过MDAP(高pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到所需产物(6 mg)，杂质推定对应于Me酯。添加THF (2 mL)和水(2 mL)，然后添加氢氧化锂(1.62 mg, 0.068 mmol)，将反应混合物搅拌25分钟。然后在真空下除去溶剂，然后添加DMF (0.8 mL)，随后添加HATU (75mg, 0.197 mmol)、DIPEA (0.07 mL, 0.401 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐 (13mg, 0.121 mmol)，并将所得混合物搅拌2小时。将反应混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到粗产物(6 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.53 min, [MH]+ = 378.2。
实施例37：6-(3-(2-(4,4-二氟哌啶-3-基)乙氧基)苄基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)- 2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
将TFA (0.5 mL, 6.49 mmol)添加到4,4-二氟-3-(2-(3-((6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)苯氧基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(51 mg, 0.087 mmol)于DCM (4 mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌15分钟。然后将该反应混合物在真空下浓缩以得到棕色油状物，然后准备用于10 g Biotage® SNAP柱上的快速色谱纯化，使用DCM:甲醇氨(0-50%)的梯度。然而，未获得明显峰表明产物的分离。使用EtOAc:乙醇(0-40%)的梯度额外运行该柱，再次无明显的含产物的级分。因此，将所有级分合并并在真空下浓缩。然后该样品准备用于使用 MDAP (高 pH法)的纯化。合并含产物的级分并在真空下除去溶剂。然后将样品在氮气流下干燥1小时，然后在真空下放置1小时。然后样品使用10 g Biotage® SNAP柱使用DCM:甲醇氨(0-16%)的梯度进一步纯化。合并含产物的级分并在真空下除去溶剂。然后将样品在氮气流下干燥并在真空烘箱中在40℃下放置16小时。然后该样品准备用于 MDAP (高 pH法)。将含产物的级分合并并在真空下除去溶剂以得到白色固体。然后将白色固体在氮气流下干燥2小时，然后在40℃下在真空下进一步干燥1小时以得到标题化合物(11 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.05 min, [MH]+ = 487.2。
实施例38：6-苄基-N4-((1r,3r)-3-羟基环丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(98.4 mg, 0.364 mmol)和HATU (194.7 mg,0.512 mmol)的混合物中加入反式-3-氨基环丁醇盐酸盐 (64.6 mg, 0.523 mmol)于DMF(1.8 mL)中的溶液。添加DIPEA (0.191 mL, 1.092 mmol)并将混合物在室温下搅拌50分钟。将该反应混合物在氮气流下浓缩，用乙腈稀释至2 mL的总体积并直接通过MDAP (2 x 1mL 进样；甲酸法)纯化，将所得级分在氮气流下蒸发。将残余物悬浮于DCM和甲醇(1:1)中，转移到配衡的小瓶中，并在氮气流下蒸发溶剂以得到白色固体形式的所需产物；6-苄基-N4-(反式-3-羟基环丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(111.0 mg, 0.327 mmol, 90 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.80 min, [MH]+ = 340.3。
实施例39：6-((1H-吲哚-3-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
向2-((1H-吲哚-3-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(200 mg, 0.129 mmol, 20%wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.15 mL, 0.859 mmol)，随后加入HATU (148mg, 0.389 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(41.7 mg, 0.388 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-((1H-吲哚-3-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(5 mg，0.013 mmol，10.13 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 363.4。
实施例40：6-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向2-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(28 mg, 0.074mmol, 80% wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.05 mL, 0.286 mmol)，随后加入HATU (53.0 mg, 0.139 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(15 mg, 0.139 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到粗产物，其仍然不纯。将残留物溶于1:1 MeOH:DMSO(1 mL)中并通过MDAP (TFA)纯化。将碳酸氢钠溶液(5 mL)添加到所需级分中，然后将所得混合物用DCM萃取3次。将合并的有机相经疏水性过滤器干燥，然后在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(2 mg, 5.36 µmol, 7.21 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.52 min, [MH]+ = 355.3。
实施例41：6-苄基-N2-甲基-N4-((1r,3r)-3-(甲基磺酰基)环丁基)吡啶-2,4-二甲 酰胺
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(65.0 mg, 0.240 mmol)和HATU (128.6 mg,0.338 mmol)的混合物中加入反式-3-(甲基磺酰基)环丁胺盐酸盐 (48.0 mg, 0.259mmol)于DMF (1.8 mL)中的溶液。添加DIPEA (0.126 mL, 0.721 mmol)并将混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物在氮气流下浓缩并用乙腈稀释至2 mL的总体积并直接通过MDAP (2 x 1 mL 进样；甲酸法)纯化，将所需级分在氮气流下蒸发。将残余物悬浮于DCM和甲醇(1:1, ~10 mL)中，合并并转移到配衡的小瓶中，并在氮气流下蒸发溶剂以得到白色固体形式的所需产物；6-苄基-N2-甲基-N4-(反式-(甲基磺酰基)环丁基)吡啶-2,4-二甲酰胺(89.7 mg, 0.223 mmol, 93 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 402.4。
实施例42：6-苄基-N4-环戊基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(48.3 mg, 0.179 mmol)和HATU (86.9 mg,0.229 mmol)于DMF (1 mL)中的溶液中加入环戊胺(0.021 mL, 0.214 mmol)和DIPEA(0.094 mL, 0.536 mmol)。将所得溶液在室温下搅拌3小时，此后在氮气流下蒸发挥发物以得到粘性深棕色固体。将其重新溶于DMSO (2 mL)中并直接通过MDAP (2 x 1 mL进样，高pH法)纯化。将所需级分在氮气流下蒸发，重新溶于甲醇(各自约 2 mL)中并合并。将该溶液在氮气流下蒸发，残留物在真空下干燥以得到白色固体形式的所需产物；6-苄基-N4-环戊基-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (50.6 mg, 0.150 mmol, 84 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.09 min, [MH]+ = 338.3。
实施例43：6-苄基-N4-(环丙基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(49.2 mg, 0.182 mmol)和HATU (85.9 mg,0.226 mmol)于DMF (1 mL)中的溶液中加入环丙基甲胺(0.019 mL, 0.218 mmol)和DIPEA(0.095 mL, 0.546 mmol)。将溶液在室温下搅拌6小时，此后将其用DMSO (1 mL)稀释并直接通过MDAP (2 x 1 mL进样，高 pH法)纯化。将所需级分在氮气流下蒸发，重新溶于甲醇(各自约 2 mL)和DCM (各自约 1 mL)中并合并。将该溶液在氮气流下蒸发，残留物在真空下干燥以得到黄色胶状物形式的所需产物；6-苄基-N4-(环丙基甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (49.9 mg, 0.154 mmol, 85 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.02 min, [MH]+ = 324.3。
实施例44：6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-((1r,3r)-3-羟基环丁基)-N2-甲基吡啶- 2,4-二甲酰胺
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(53.3 mg, 0.172 mmol)和HATU (105.6 mg, 0.278 mmol)的混合物中加入反式-3-氨基环丁醇盐酸盐 (40.7 mg,0.329 mmol)于DMF (1.5 mL)中的溶液。添加DIPEA (0.120 mL, 0.689 mmol)并将混合物在室温下搅拌85分钟。将该反应混合物在氮气流下浓缩，用乙腈稀释至2 mL的总体积并直接通过MDAP (2 x 1 mL 进样；甲酸法)纯化，将所需级分合并并在真空下蒸发。将残余物悬浮于DCM和甲醇(1:1, ~6 mL)中，转移到配衡的小瓶中，并在氮气流下蒸发溶剂以得到奶油色固体形式的所需产物；6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-(反式-3-羟基环丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(36.4 mg, 0.096 mmol, 55.8 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 379.3。
实施例45：6-(羟基(1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)- 2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
将甲醇(0.2 mL)添加到6-(羟基(1-(苯基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (6 mg, 0.018 mmol, 85%wt.)中。然后添加KOH (1 mg, 0.018 mmol)和水(0.05 mL)，所得混合物在60℃下搅拌2小时。添加另外的KOH (0.7 mg, 0.012 mmol)并将所得混合物在60℃下搅拌45分钟。在氮气流下除去MeOH，然后添加水(1 mL)和DCM (1 mL)。将水相再萃取2次，然后将合并的有机相经疏水性过滤器干燥，然后在真空下浓缩以得到黄色固体形式的6-(羟基(1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(4.1 mg,9.73 µmol, 99 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.44 min, [MH]+ = 380.3。
实施例46：6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲 基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(54 mg,0.087 mmol, 50% wt.)于DMF (0.8 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.05 mL, 0.286 mmol)，随后加入HATU (44 mg, 0.116 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(12.45 mg, 0.116mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌3小时。将该反应混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(10.2 mg，0.025 mmol，29.0 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.52 min, [MH]+ = 364.3。
未观察到可交换物。
实施例47：(+/-)-N4-环丙基-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向(+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(105 mg, 0.330 mmol, ~90% wt.)于DMF (0.6 mL)中的溶液中加入HATU (188 mg, 0.495 mmol)，随后加入DIPEA(0.15 mL, 0.859 mmol)和环丙胺(0.04 mL, 0.577 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌20小时。将该反应混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N4-环丙基-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(8 mg，0.023 mmol，7.08 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 326.2。
未观察到可交换的质子。
实施例48：6-(1-(1H-吡咯并[2.3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向(+/-)-2-(1-(1H-吡咯并[2.3-c]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(110.7 mg, 0.256 mmol, 75% wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.17 mL,0.973 mmol)，随后加入HATU (146 mg, 0.384 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(41.3 mg, 0.384 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应用饱和LiCl溶液(10 mL)洗涤并用EtOAc (3 x 15 mL)萃取，然后将合并的有机相经疏水性玻璃料干燥并在真空下浓缩。粗产物通过快速硅胶色谱法(10 g硅胶柱，洗脱剂：40-100% (25% EtOH/EtOAc) / 环己烷)纯化。将所有含产物的级分在真空下浓缩。将所得的黄色油状物通过MDAP (高pH法)纯化。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(29 mg，0.073 mmol，28.5 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.57 min, [MH]+ = 378.3。
未观察到可交换物。
实施例49：6-((S*)-1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S, 2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例50：6-((R*)-1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)- 2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例48 (26 mg)通过手性HPLC纯化。将非对映异构体混合物溶于EtOH (1 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(20% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm))。进样总数 =1。将10-12 min的级分合并并标记为峰1。将14-17 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例49(15 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.53 min, [MH]+ = 378.4。
未观察到可交换物。
收集对应于峰2的级分以得到实施例50(16 mg)，其含有杂质并因此通过MDAP (高pH法)进一步纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的实施例50(8mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.53 min, [MH]+ = 378.3。
实施例51：(S*)-N4-环丙基-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例52：(R*)-N4-环丙基-6-(羟基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例47 (13 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (1 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(15% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30 mm x 25 cm Chiralcel OJ-H (5 µm))。进样总数 = 1。将12.5-14.5 min的级分合并并标记为峰1。将16.5-20 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例51(7 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 326.2。
收集对应于峰2的级分以得到实施例52(5 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 326.2。
未观察到可交换物。
实施例53：N4-((1r,3S)-3-羟基环丁基)-N2-甲基-6-((S*)-1-苯基乙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺
向2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙基)异烟酸(47.9 mg, 0.168 mmol)和HATU(106.1 mg, 0.279 mmol)的混合物中加入反式-3-氨基环丁醇盐酸盐 (28.1 mg, 0.227mmol)于DMF (0.8 mL)中的溶液。添加DIPEA (90.0 µL, 0.515 mmol)并将混合物在室温下搅拌50分钟。然后将该混合物在氮气流下浓缩，用乙腈稀释至1 mL的总体积并直接通过MDAP (1 x 1 mL 进样；高pH法)纯化，将所需级分在氮气流下蒸发。将残余物重新溶于2:1甲醇/DCM (~ 8 mL)中，转移到配衡的小瓶中，在氮气流下蒸发溶剂，将残留物在真空下干燥以得到白色固体形式的所需产物；N4-((1r,3r)-3-羟基环丁基)-N2-甲基-6-(1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(52.8 mg, 0.149 mmol, 89 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 354.3。
实施例54-55
实施例54-55以类似于先前实施例的方式制备
实施例56：6-苄基-N4-(反式-3-甲氧基环丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向粗2-(反式-3-甲氧基环丁基)异吲哚啉-1,3-二酮 (76.2 mg, 0.330 mmol)于乙醇(5 mL)中的溶液中加入水合肼(0.030 mL, 0.618 mmol)并将溶液在室温下在氮气下搅拌94小时。将反应混合物过滤以除去沉淀的副产物，该沉淀物用乙醇(约10 mL)洗涤。将合并的滤液在真空下蒸发以得到残留物，将其悬浮于乙醇(约5 mL)中并直接施加至1 gIsolute SCX-2离子交换柱的顶部。该柱用5倍柱体积的乙醇和5倍柱体积的2M HCl水溶液洗脱。将酸性级分在氮气流下蒸发，残留物在真空下干燥以得到黄色固体形式的反式-3-甲氧基环丁胺盐酸盐(24.2 mg, 0.176 mmol, 53.4 %收率)，其无需进一步纯化即用于随后的步骤中。向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(50.1 mg, 0.185 mmol)、反式-3-甲氧基环丁胺盐酸盐(24.2 mg, 0.141 mmol)和2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V) (HATU) (89.0 mg, 0.234 mmol)于DMF (1 mL)中的混合物中加入DIPEA (0.100 mL, 0.573 mmol)。在室温下将溶液搅拌4小时。反应混合物用DMSO (1 mL)稀释并直接通过质量导向自动制备反相色谱法(MDAP) (2 x 1 mL 进样，高pH法)纯化。将所需级分合并并在真空下蒸发以得到黄色胶状物形式的6-苄基-N 4-(反式-3-甲氧基环丁基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(21.6 mg, 0.061 mmol, 43.4 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法) 峰Rt = 0.95 分钟, [MH]+的m/z = 354。
实施例57：6-苄基-N4-((1r,3r)-3-(2-羟基乙氧基)环丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二 甲酰胺
向2-苄基-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸 (53.5 mg, 0.198 mmol)、HATU (92.0 mg,0.242 mmol)和2-((1r,3r)-3-氨基环丁氧基)乙醇盐酸盐 (30.2 mg, 0.18 mmol)于DMF(1 mL)中的混合物中加入DIPEA (0.138 mL, 0.792 mmol)。将所得深橙色溶液在室温下搅拌3小时，此后在氮气流下蒸发挥发物以得到棕色胶状物。将其重新溶于DMSO (2 mL)中并直接通过MDAP (2 x 1 mL进样，甲酸法)纯化。将所需级分在氮气流下蒸发，重新溶于甲醇(各自约 2 mL)中并合并。将该溶液在氮气流下蒸发以得到粘性白色固体形式的所需产物(44.7 mg)。6-苄基-N4-((1r,3r)-3-(2-羟基乙氧基)环丁基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(44.7 mg, 0.117 mmol, 59 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 384.4。
实施例58：6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
向2-(2-羟基-1-苯基乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(1.715 g, 2.284 mmol, 40%wt)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (3.05 mL, 17.48 mmol)，随后加入HATU(1.329 g, 3.50 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(1.881 g, 17.48 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌1小时。添加另外的HATU (1.2 g)。将反应搅拌1小时。添加另外的HATU (600 mg)，将反应搅拌1小时。添加另外的HATU (300 mg)，将反应搅拌1小时20分钟。将反应混合物在饱和LiCl (10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (3x 10 mL)萃取。将水(20 mL)添加到合并的有机相中。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc (3x 10 mL)萃取。合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩。将粗产物添加至SNAP 硅胶柱(25 g)并通过快速柱色谱法用0至50% (25% EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱来纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(554 mg,1.489 mmol, 65 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 354.3。
实施例59：6-(氯(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二 甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的未知混合物
向6-((R)-羟基(苯基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(54 mg, 0.151 mmol)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中逐滴加入亚硫酰氯 (0.11 mL,1.507 mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加水(5 mL)和DCM (5 mL)。分离有机相，水相用另外部分的DCM (2 x 5 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩。将其在SNAP柱上纯化，洗脱剂为0-60% EtOAc/环己烷。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到白色油状物形式的6-(氯(苯基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(53 mg, 0.133 mmol, 88 %收率, ~90%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 1.07 min, [MH]+ = 358.2。
实施例60：N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺
向(±)-2-(甲基氨基甲酰基)-6-(1-苯基乙烯基)异烟酸(330 mg, 0.468 mmol) (约40%纯度)于N,N-二甲基甲酰胺(6 mL)中的溶液中加入HATU (356 mg, 0.935 mmol)，随后加入DIPEA (0.24 mL, 1.374 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(101 mg, 0.935mmol)。将所得反应混合物搅拌经过周末，随后在饱和氯化锂溶液(10mL)和乙酸乙酯(10mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的乙酸乙酯(3x 10 mL)萃取。合并的有机层用10mL的水洗涤，水层用另外部分的乙酸乙酯(2 x 10mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩。残留物通过SNAP柱色谱法(10g，用0-60% EtOAc/环己烷洗脱)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到残留物，向其中添加10mL的DCM和5mL的5M NaOH。分离各层，水相用另外部分的DCM (2 x 10 mL)萃取。将合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，然后在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(吡啶-2-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(42mg, 0.112mmol, 23.89 %收率)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.57 分钟, [MH]+的m/z = 339。
实施例61：6-(2-羟基-1-苯基丙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的未知混合物
向2-(2-羟基-1-苯基丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(~40%纯度, 318 mg, 40%wt)于N,N-二甲基甲酰胺(1 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.22 mL, 1.260 mmol)，随后加入HATU (169 mg, 0.445 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(47.9 mg, 0.445 mmol)。将所得反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在饱和LiCl (10 mL)和EtOAc (10 mL)之间分配。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc萃取。合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩。将残留物通过硅胶柱10g纯化，洗脱剂为40-100% EtOAc/环己烷。将含所需产物的级分在真空下浓缩。残留物通过柱10g纯化，洗脱剂为40-80% EtOAc/环己烷。将含较少非对映异构体混合物的级分在真空下浓缩，然后通过MDAP (高 pH法)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到白色固体形式的6-(2-羟基-1-苯基丙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(9.8 mg, 0.025 mmol, 6.26 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 368.4。
实施例62：6-(1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环 丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
将碳酸钾(465 mg, 3.37 mmol, 70%wt.)添加到6-(1-(3-羟基苯基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(425 mg, 0.842 mmol)和1,3-二氧杂环戊-2-酮(0.23 mL, 3.45 mmol) 于DMF (6 mL)中的混合物中。将反应混合物在100℃下在氮气下搅拌3小时。然后将反应混合物冷却至室温并在乙酸乙酯(10 mL)和水(10 mL)之间分配。分离各层，水层用另外部分的EtOAc (2 x 10 mL)萃取。合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩。将所得油状物溶于DCM中并通过在Biotage SNAP (10 g)柱上使用100%环己烷随后使用40至80%乙酸乙酯/环己烷的梯度纯化。将含产物的级分合并并在真空下除去溶剂以得到含有一些残留DMF的所需产物。添加饱和LiCl溶液(10 mL)和EtOAc(10 mL)。分离各层，水层用另外部分的EtOAc (2 x 10 mL)萃取。合并的有机相经疏水性玻璃料干燥，然后在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(192 mg, 0.435 mmol, 52%收率, 90%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 398.4。
实施例63：6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，异构体1
实施例64：6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N2-甲基-N4-((2S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4- 二甲酰胺，异构体2
实施例58 (220 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上[10% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralcel OJ-H (5 µm)，批号OJH10027-01]。进样总数 = 4。将9至10.5分钟的级分合并并标记为峰1。将13至16.5分钟的级分合并并标记为峰2。将10.5至13分钟的级分合并并标记为混合级分。将混合级分在真空下蒸发，残留物如上进行再纯化。将每组合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到配衡的小瓶中并在真空下干燥。将第二洗脱的异构体如上进行再纯化以提高其纯度。收集对应于峰1的级分以得到6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1(92.2 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.86 分钟，[MH]+的m/z = 354。
收集对应于峰2的级分以得到6-(2-羟基-1-苯基乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2(79.1 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.86 分钟，[MH]+的m/z = 354。
实施例65：(+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3.3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(邻 甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(30 mg, 0.100 mmol)溶于DMF (5 mL)中。添加DIPEA (0.052 mL, 0.300 mmol)、HATU (57.0 mg, 0.150 mmol)和(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺 (19.95 mg, 0.150 mmol)并将反应搅拌1小时。将该反应在真空下浓缩。将残留物溶于乙酸乙酯(10 mL)中并用碳酸氢钠溶液(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO (1 mL)中并通过MDAP (高pH法)纯化。在真空下蒸发溶剂。将样品溶于1:1 DMSO:MeCN (1 mL)中并通过MDAP (高pH法)再纯化。在真空下蒸发溶剂以得到所需产物N 4-((1R,5S,6r)-3.3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(12 mg, 0.029 mmol, 29 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 416.4。
实施例66：6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
将2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(30 mg, 0.100 mmol)溶于DMF (5 mL)中。添加DIPEA (0.052 mL, 0.300 mmol)、HATU (57.0 mg, 0.150 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(16.12 mg, 0.150 mmol)并将反应搅拌1小时。反应混合物然后在真空下浓缩。将残留物溶于乙酸乙酯(10 mL)中并用碳酸氢钠溶液(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO (1 mL)中并通过MDAP (高pH法)纯化。在真空下蒸发溶剂以得到所需产物6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(18mg, 0.051 mmol, 51 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 354.2。
实施例67：6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己- 6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(40 mg, 0.129 mmol)溶于DMF (5 mL)中。添加(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺(25.8 mg, 0.194 mmol)、HATU (73.8 mg, 0.194 mmol)和DIPEA (0.068 mL, 0.388 mmol)并将反应在室温下搅拌3小时。将反应在真空下浓缩。将残留物溶于乙酸乙酯(10 mL)中并用碳酸氢钠溶液(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO (1 mL)中并通过MDAP (高pH法)纯化。在真空下蒸发溶剂以得到6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(31 mg, 0.073 mmol, 57 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 1.03 min, [MH]+ = 425.4。
实施例68：6-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基) 吡啶-2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
将2-(羟基(1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(15 mg, 0.046 mmol)溶于DMF (5 mL)中。添加(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(7.44 mg, 0.069 mmol)、HATU(26.3 mg, 0.069 mmol)和DIPEA (0.024 mL, 0.138 mmol)，将反应在室温下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO (1 mL)中并通过MDAP (高pH法)纯化。在真空下蒸发溶剂以得到粗产物(2 mg)。将其通过制备HPLC纯化：将样品溶于DMSO(3.5 mL)中。在室温下进行CSH C18 150 x 30 mm, 5 µm柱上的3.5 mL进样。流量和梯度由两个泵提供，在进样期间通过进样器的流量降低。残余流量在柱顶引入，以使总流量保持恒定。通过二极管阵列 & 质谱信号的组合来确定分级。使用如下限定的溶剂A和溶剂B的梯度：
溶剂A：10 mM 碳酸氢铵/水，用氨溶液调节至pH 10
溶剂B：乙腈
时间 (min) 流速 (mL/min) %B %A
0 40 18 82
3.5 40 18 82
5 40 18 82
20 40 25 75
32 40 30 70
35 40 99 1
41 40 99 1
UV检测为210 nm至350 nm波长的总信号。
MS 条件
MS:Waters ZQ
电离模式:正电喷雾
扫描范围:300至1200 AMU
扫描时间:0.5 sec
扫描延迟间隔时间:0.1 sec。
将级分合并并在40℃下在氮气流吹排下干燥以得到标题化合物(1 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 379.4。
实施例69：6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，异构体1
实施例66 (330 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上[20% EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm)，批号ODH11158-01]。进样总数 = 3。将8至10分钟的级分合并并标记为峰1。将13至17分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到配衡的小瓶中并在真空下干燥。
收集对应于峰1的级分以得到6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1(131 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.90 分钟，[MH]+的m/z = 354。
实施例70：6-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
将2-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(68 mg, 0.223 mmol)溶于DMF (5 mL)中。添加DIPEA (0.117 mL, 0.670 mmol)、HATU (127 mg, 0.335 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐 (36.1 mg, 0.335 mmol)并将反应在室温下搅拌过夜。将反应在真空下浓缩，残留物溶于乙酸乙酯(10ml)中，并用碳酸氢钠 (10ml)和盐水 (10ml)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩。将残留物溶于1:1MeCN:DMSO (1 mL)中，通过Xselect柱上的质量导向自动制备色谱使用含有碳酸铵改性剂的乙腈水纯化(高 pH法)。在真空下蒸发溶剂以得到6-((2-氟苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(4.5 mg, 0.013 mmol, 5.63 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法) 峰Rt = 0.88 分钟, [MH]+的m/z = 358。
实施例71：6-((S*)-1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例72：6-((R*)-1-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基 环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例62 (185 mg)通过手性HPLC纯化。将非对映异构体混合物溶于EtOH (约 15 mL)中。进样：将0.4 mL的溶液经由rheodyne阀进样到柱上(30% EtOH/庚烷，流速 = 20 mL/min，检测：在280 nm下的UV二极管阵列 (带宽 140 nm，参考 400 nm，带宽 100 nm，柱 20mm x 25 cm Regis Whelk-O1 [R,R] (5 µm))。将17.5-20.5 min的级分合并并标记为峰1。将21.5-26 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分转移到EtOH中，在真空下浓缩，并转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例71(51 mg)。
LCMS (2 min 甲酸发): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 398.4。
收集对应于峰2的级分以得到实施例72(57 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 398.4。
实施例73：(+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3.3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯 基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
向(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(41.2 mg, 0.194 mmol)、(+/-)-2-(羟基(苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(44.2 mg, 0.154 mmol)和HATU (86.9mg, 0.229 mmol)于N,N-二甲基甲酰胺 (1.0 mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.108 mL, 0.618 mmol)。将所得橙色溶液在室温下搅拌2小时，此后在氮气流下蒸发挥发物以得到粘性深橙色胶状物。将其重新溶于DMSO (3 mL)中并通过MDAP (高 pH法)纯化。将所需级分在氮气流下蒸发，转移到甲醇(约2 mL)中，将该溶液在氮气流下蒸发，残留物在真空下干燥以得到白色固体形式的所需产物(+/-)-N 4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(39.9 mg, 0.099 mmol,64.4 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法法): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 402.4。
实施例74：6-((R*)-1-(3-氟-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4- ((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将6-((R*)-1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(实施例50, 20 mg, 0.050 mmol)添加到乙腈(0.5 mL)中，然后在0℃下缓慢添加乙酸(0.01 mL, 0.175 mmol)和Selectfluor® (26.7 mg, 0.076 mmol)。将其温热并在室温下搅拌2小时。添加Selectfluor® (20 mg, 0.056 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌2小时。添加另外部分的Selectfluor® (20 mg, 0.056 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌4小时。添加额外的Selectfluor® (20 mg, 0.056 mmol)和乙酸(0.01mL, 0.175 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌18小时。添加另外部分的Selectfluor®(20 mg, 0.056 mmol)并使所得混合物在40℃下1小时。添加额外的Selectfluor® (20 mg,0.056 mmol)和乙酸(0.01 mL, 0.175 mmol)并使所得混合物在40℃下1小时。添加另外部分的Selectfluor® (20 mg, 0.056 mmol)和乙酸(0.01 mmol, 0.175 mmol)并使所得混合物在50℃下1小时。将反应混合物直接通过MDAP (高pH法)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到6-((R*)-1-(3-氟-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(5.4 mg, 0.012 mmol, 24.42 %收率, ~90%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.53 min, [MH]+ = 396.4。
实施例75：N 4-环丙基-N 2-甲基-6-(3-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲氧基)苄基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
将N 4-环丙基-6-(3-羟基苄基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(40 mg, 0.123 mmol)溶于丙酮 (1 mL)中。添加碳酸钾(25.5 mg, 0.184 mmol)和3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑(24.08 mg，0.184 mmol，可商购自例如Maybridge)并将反应在室温下搅拌1小时。将反应加热至50℃过夜。再次添加另外的3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑(24.08 mg，0.184 mmol)并将反应搅拌另外的1小时。将反应在真空下浓缩。将残留物溶于10% 甲醇 / DCM (10 mL)中并用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤。有机相经硫酸钠干燥，通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩。将样品溶于1:1 MeCN:DMSO (1 mL)中并通过MDAP (高pH法)纯化。在真空下蒸发溶剂以得到所需产物N4-环丙基-N2-甲基-6-(3-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲氧基)苄基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (7 mg, 0.017 mmol, 14%收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 420.3。
实施例76：6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
将2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(380mg, 1.249 mmol)悬浮于DCM (20ml)中，然后添加三乙胺(0.522 ml, 3.75 mmol)、HATU (570 mg, 1.499mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(175 mg, 1.624 mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯(30ml)稀释并用水(2 x 50ml)和盐水洗涤，然后干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物。将粗物质溶于DCM中并装载到25g硅胶柱上，然后用0-100%EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分在真空下蒸发以得到无色泡沫形式的6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (330mg, 0.923mmol, 73.9 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法) 峰Rt = 0.89 分钟, [MH]+的m/z = 358。
实施例77：6-((S*)-2-氰基-1-苯基乙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基) 吡啶-2,4-二甲酰胺
将乙腈(0.33 mL, 6.35 mmol)溶于THF (1 mL)中并在 N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加BuLi (2.5M于己烷中, 2.61 mL, 6.51 mmol)，将反应混合物搅拌30分钟。添加6-(氯(苯基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (370mg, 0.931 mmol)，将所得混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后温热。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加MeOH (0.5 mL)并将混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将合并的所需级分在真空下浓缩以得到粗产物(12 mg)。将其通过硅胶色谱法使用玻璃吸管柱并使用30%EtOAc/环己烷洗脱来进一步纯化。将纯级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-((S*)-2-氰基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(3.3 mg, 8.19 µmol, 1 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.95 min, [MH]+ = 363.4。
实施例78：6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1
实施例79：6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基 环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2
向(±)-2-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(224mg, 0.331 mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.2 mL, 1.145mmol)，随后加入HATU (189 mg, 0.497 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙胺盐酸盐(53.4 mg,0.497 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。混合物用饱和氯化锂溶液(10mL)洗涤并用乙酸乙酯(3 x 15mL)萃取，随后合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥并在真空下浓缩。残留物通过柱色谱法10g柱用0至100%的(25% EtOH/EtOAc) / 环己烷洗脱来纯化。将所有含产物的级分在真空下浓缩。向残留物中添加饱和氯化锂溶液(10mL)并用乙酸乙酯(3 x 15mL)萃取，随后合并的有机相通过经过疏水性玻璃料过滤来干燥，并在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(207 mg, 0.317 mmol, 96 %收率)，纯度约60%。
LCMS (2 min 甲酸法) 峰Rt = 0.57 分钟, [MH]+的m/z = 392。
将第二水相(柱后)在真空下浓缩，添加0.9mL 的MeOH，并将溶解的物质通过MDAP纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到黄色油状物形式的6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(1 mg, 2.299 µmol, 0.695 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法) 峰Rt = 0.58 分钟, [MH]+的m/z = 392。
将该外消旋体溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1.5 mL的溶液进样到柱上[20% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH13231]。进样总数 = 2。将7至9分钟的级分合并并标记为峰1。将11.5至15分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到配衡的小瓶中并在真空下干燥。
收集对应于峰1的级分以得到6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1(44 mg)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.55 分钟, [MH]+的m/z = 392。
收集对应于峰2的级分以得到6-(1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)丙基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2(40 mg)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.55 分钟, [MH]+的m/z = 392。
实施例80：6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲 基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(583.2 mg,1.879 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(302.4 mg, 2.81 mmol)和HATU (1055mg, 2.77 mmol)的混合物中加入DIPEA (1.149 mL, 6.58 mmol)和DMF (10 mL)。将混合物在室温下搅拌4小时。在真空下蒸发溶剂以得到棕色油状物，将其溶于乙酸乙酯(50 mL)中并用2M 碳酸钠水溶液(2x 50 mL)、水(1x 50 mL)和饱和盐水溶液(1x 50 mL)洗涤。有机相通过装有疏水性玻璃料的柱过滤，在真空下蒸发溶剂。将残留物重新溶于乙酸乙酯(约 ~15 mL)中，并将溶液施加至25 g SNAP硅胶柱。将样品通过Biotage SP4快速柱色谱法用0-5%乙醇/乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化。将所需级分合并并在真空下蒸发溶剂。将残留物重新溶于甲醇(~10 mL)中并转移到配衡的小瓶中，然后在氮气流下浓缩并在真空下干燥以得到棕色易碎的泡沫。将该物质重新溶于DMSO (~5 mL)中并直接通过MDAP (6 x 1 mL进样，甲酸法)纯化。将所需级分在氮气流下浓缩，然后溶于甲醇中并合并。将溶剂在真空下蒸发以得到浅棕色油性残留物。将残留物溶于甲醇(~10 mL)中并转移到配衡的小瓶中。将溶剂在氮气流下蒸发并将残留物在真空下干燥以得到浅棕色易碎的泡沫形式的产物。将其溶于DMSO (3 mL)中，然后直接通过MDAP (1 x 3 mL进样; TFA)纯化。将所需级分在氮气流下浓缩，重新溶于甲醇(10 mL)中并转移到配衡的小瓶中。将溶剂在氮气流下蒸发并在真空下干燥以得到白色固体形式的所需产物6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(303.6 mg, 0.835 mmol, 45 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.61 min, [MH]+ = 364.3。
实施例81：N 2-甲基-6-((S*)-1-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N 4- ((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将6-((S*)-1-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(58 mg，0.138 mmol，实施例49，90%wt.)溶于THF (1 mL)中，并在N2下在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。逐滴添加LiHMDS (1M于THF中, 0.69 mL, 0.690mmol)，将反应混合物搅拌45分钟。添加碘甲烷(0.03 mL, 0.240 mmol, 8M于THF中)并将所得混合物搅拌2小时。添加另外的MeI (0.01 mL)并将反应混合物搅拌30分钟。添加MeOH (1mL)，然后将溶剂在真空下除去。添加MeOH (0.9 mL)并将混合物直接通过MDAP (高 pH法)纯化。合并的有机相经疏水性过滤器干燥，然后在真空下除去溶剂以得到两种产物的混合物。将其通过快速色谱法在SNAP柱(10 g)上用80至100% (25% EtOH/EtOAc)/环己烷洗脱来纯化。将合并的有机相在真空下浓缩以得到无色油状物形式的N 2-甲基-6-((S*)-1-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)乙基)-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(2.1 mg, 4.83 µmol, 3 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.51 min, [MH]+ = 392.4。
实施例82：6-((1-(2-羟基乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(实施例18, 67 mg, 0.185 mmol)于DMF (0.9 mL)中的溶液中相继加入碳酸钾(38.3mg, 0.277 mmol)和1,3-二氧杂环戊-2-酮(65.1 mg, 0.739 mmol)。将反应加热至90℃并搅拌1小时。继续加热总计~21小时。将反应冷却并过滤DMF悬浮液，并将其直接添加到两个MDAP小瓶中，用MeOH/DMSO稀释至(2 x 0.9 mL)。将它们通过MDAP (高pH法)纯化。将适当的级分收集并在真空下浓缩以得到黄色固体形式的产物6-((1-(2-羟基乙基)-1H-吲哚-4-基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺 (21 mg, 0.052mmol, 28 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 407.4。
实施例83：6-(吲哚啉-4-基甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2, 4-二甲酰胺
使用10%钯/碳柱在Thales H-Cube装置上用乙醇作为载体溶剂以单程将4-((6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-1-甲酸苄酯(149 mg, 0.299 mmol)于乙醇(10 mL)中的溶液氢化。将溶剂在真空下蒸发以得到黄色油状物。将残留物重新溶于DCM (~4 mL)加一滴甲醇中。将该溶液施加至10 g SNAP硅胶柱。将样品通过快速柱色谱法用0-25%乙醇/乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化。将适当的级分合并并在真空下蒸发溶剂。将残留物重新溶于甲醇中并将该溶液施加至10g SNAP硅胶柱。将溶剂蒸发，随后将柱在真空下干燥。将样品通过快速柱色谱法用70-100%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱来纯化。将适当的级分合并并在真空下蒸发溶剂。将残留物溶于甲醇(~10 mL)中并在氮气流下蒸发，将残留物在真空下干燥。将残留物溶于DMSO (2 mL)中并通过MDAP(高 pH法)纯化。将所需级分合并并在真空下蒸发溶剂。将残留物重新溶于甲醇(~10 mL)中，随后在氮气流下浓缩并在真空下干燥以得到白色固体形式的6-(吲哚啉-4-基甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(37.3 mg, 0.102 mmol, 34.2 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 365.6。
实施例84：6-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2- 甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，非对映异构体的混合物
向2-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(14 mg,0.015 mmol, 35%wt.)于DMF (0.7 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.01 mL, 0.057 mmol)，随后加入HATU (11 mg, 0.029 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(3 mg, 0.028mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将所需级分在真空下浓缩以得到无色油状物形式的6-(1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(1.6 mg, 3.82 µmol, 25 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.65 min, [MH]+ = 378.4。
实施例85：N 4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲 基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1
实施例86：N 4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)- N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2
实施例73 (32 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (1 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上[10% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak IC (5 µm)，批号IC10028-01]。进样总数 = 1。将24至29分钟的级分合并并标记为峰1。将33至38分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到配衡的小瓶中并在真空下干燥。
收集对应于峰1的级分以得到N 4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1(11.9 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.91 分钟，[MH]+的m/z = 402。
收集对应于峰2的级分以得到N 4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-基)-6-(羟基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2(11.5 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.91 分钟，[MH]+的m/z = 402。
实施例87：6-(2-氰基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶- 2,4-二甲酰胺，在未定义的立体中心处的非对映异构体的1:1混合物
向甲磺酸2-(6-(甲基氨基甲酰基)-4-(((1S,2S)-2-甲基环丙基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)-2-苯基乙酯(58 mg, 0.108 mmol, 80 % wt.)于DMSO (1.5 mL)中的溶液中加入NaCN(13 mg, 0.265 mmol)和Et3N (0.05 ml, 0.359 mmol)。将反应混合物在160℃下在氮气下加热30分钟。将水(5 mL)添加到合并的有机相中。分离有机层，水层用另外部分的EtOAc(3x 10 mL)萃取。将合并的有机相干燥（疏水性玻璃料），然后在真空下浓缩。将其在SNAP柱10g上纯化，用0-80% EtOAc/环己烷洗脱。将所需级分在真空下浓缩以得到6-(2-氰基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(27.4mg, 0.068 mmol,63.3 %收率, ~90%纯度)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 363.4。
实施例88：6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N 4-((1R,5S,6r)-3,3-二氟 双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(100 mg,0.097 mmol, 30%wt.)、(1R,5S,6r)-3,3-二氟双环[3.1.0]己-6-胺盐酸盐(24.59 mg,0.145 mmol)、HATU (55.1 mg, 0.145 mmol)和Et3N (0.027 ml, 0.193 mmol)混合于RBF中并添加DCM (5 mL)，然后将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水洗涤，干燥并在真空下蒸发，残留物通过MDAP (甲酸法)纯化以得到浅黄色胶状物形式的所需产物(9.5 mg,0.022 mmol, 23%收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.68 min, [MH]+ = 426.4。
实施例89：6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4-环丙基-N 2-乙基吡啶-2,4-二甲酰胺
向2-((1H-吲哚-4-基)甲基)-6-(乙基氨基甲酰基)异烟酸(49.3 mg, 0.152 mmol)和HATU (85.0 mg, 0.224 mmol)于DMF (1.0 mL)中的悬浮液中加入环丙胺(0.016 mL,0.229 mmol)和DIPEA (0.080 mL, 0.457 mmol)。将所得橙色溶液在室温下搅拌1小时，此后在氮气流下蒸发挥发物以得到粘性橙色固体。将其重新溶于DMSO (2 mL)中并直接通过MDAP (高 pH法)纯化。将所需级分合并并在真空下蒸发以得到白色固体形式的6-((1H-吲哚-4-基)甲基)-N 4-环丙基-N 2-乙基吡啶-2,4-二甲酰胺(36.1 mg, 0.100 mmol, 65.3 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 363.3。
实施例90：(±)-N 4-环丙基-6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲 酰胺
将2-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(480mg, 1.578 mmol)悬浮于DCM (10ml)中并添加三乙胺(0.440 ml, 3.16 mmol)和HATU (660 mg, 1.735 mmol)，随后添加环丙胺(180 mg, 3.16 mmol)，将所得溶液在室温下搅拌2小时。将混合物用水(10ml)和0.5M HCl水溶液(10ml)洗涤，干燥并在真空下蒸发，残留物通过色谱法在25g硅胶柱上用0-25%乙醇/乙酸乙酯洗脱来纯化。将含产物的级分在真空下蒸发以得到无色胶状物形式的(±)-N 4-环丙基-6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(282mg,0.821 mmol, 52.1 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法) 峰Rt = 0.80 分钟, [MH]+的m/z = 344。
实施例91：(+/-)-N 4-环丙基-6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰 胺
将2-(羟基(邻甲苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(230 mg, 0.766 mmol)悬浮于DCM (20 mL)中，然后添加Et3N (0.320 mL, 2.298 mmol)、HATU (349 mg, 0.919 mmol)和环丙胺(87 mg, 1.532 mmol)，将混合物在室温下搅拌24 h。该混合物用EtOAc (30 mL)稀释并用水(2 x 50 mL)和盐水洗涤，然后干燥并在真空下蒸发以得到浅黄色胶状物。将粗物质溶于DCM中并装载到硅胶柱(25g)上，然后用0-100% EtOAc/环己烷洗脱，将含产物的级分在真空下蒸发以得到无色泡沫形式的N4-环丙基-6-(羟基(邻甲苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (105 mg, 0.309 mmol, 40%收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 340.2。
实施例92：(S*)-N4-环丙基-6-(羟基(2-甲氧基苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二 甲酰胺
实施例93：(R*)-N4-环丙基-6-(羟基(2-甲氧基苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰 胺
在室温下将TFA (0.910 mL, 11.81 mmol)添加到2-(羟基(2-甲氧基苯基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸叔丁酯(0.44 g, 1.181 mmol)于DCM (5 mL)中的溶液中，将混合物搅拌4小时，然后在真空下蒸发以得到黄色胶状物。将其溶于DCM和甲醇的混合物中，并再次蒸发以得到米色固体。该粗品无需纯化用于下一步骤。将该固体悬浮于DCM (5 mL)中并添加Et3N (0.494 mL, 3.54 mmol)、HATU (0.539 g, 1.418 mmol)和环丙胺(0.135 g,2.363 mmol)，然后将混合物在室温下搅拌过夜。将溶液用水(10 mL)洗涤，干燥并在真空下蒸发，残留物通过硅胶柱(25 g)上的色谱法使用0-100% EtOAc/环己烷洗脱来纯化。将含产物的级分在真空下蒸发以得到无色胶状物形式的N4-环丙基-6-(羟基(2-甲氧基苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(105 mg, 0.295 mmol, 25%收率)。将外消旋体(100 mg)通过手性HPLC纯化。将非对映异构体混合物溶于EtOH (1 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(30% EtOH/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长，215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mmx 25 cm Chiralcel OD-H，批号ODH1158-01(5 µm))。将5.75-7 min的级分合并并标记为峰1。将7.75-10 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分转移，在真空下浓缩到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例92(36 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.78 min, [MH]+ = 356.2。
收集对应于峰2的级分以得到实施例93(36 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.78 min, [MH]+ = 356.2。
实施例94：N4-环丙基-6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺， 对映体1
实施例90 (282 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上[40% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak AD-H (5 µm)，批号ADH13231]。进样总数 = 3。将5.75至7分钟的级分合并并标记为峰1。将8.25至10.5分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到配衡的小瓶中并在真空下干燥。
收集对应于峰1的级分以得到N4-环丙基-6-((3-氟苯基)(羟基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺，对映体1(70 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法) 峰Rt = 0.80 分钟, [MH]+的m/z = 344。
实施例95：6-((R*)-(3-氟苯基)(羟基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例96：6-((S*)-(3-氟苯基)(羟基)甲基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基) 吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例76 (300 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(20% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30mm x 25cm Chiralpak AD-H (5 µm))。进样总数 = 3。将9-11min的级分合并并标记为峰1。将14.5-18 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例95(120 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 358.3。
收集对应于峰2的级分以得到实施例96(118 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 358.3。
实施例97：6-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环 丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
向粗2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸(260 mg, 0.293mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1 mL)中的溶液中加入DIPEA (0.256 mL, 1.466 mmol)，随后加入HATU (167 mg, 0.440 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(64 mg, 0.595mmol)。将所得反应混合物在室温下在空气中搅拌1.5小时。添加另外部分的HATU (167 mg,0.440 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(64 mg, 0.595 mmol)和DIPEA (0.256mL, 1.466 mmol)，将反应混合物在室温下继续搅拌。添加另外部分的 HATU (167 mg,0.440 mmol)、(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(64 mg, 0.595 mmol)和DIPEA (0.256mL, 1.466 mmol)，将反应混合物在室温下继续搅拌。将反应混合物浓缩并通过MDAP (碳酸铵缓冲，方法C，2x1mL DMF进样)。将含所需产物的级分在真空下浓缩以得到浅黄色固体形式的6-(咪唑并[1,2-a]吡啶-5-基甲基)-N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(42 mg, 0.104 mmol, 35.5 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法) 峰Rt = 0.77 分钟, [MH]+的m/z = 364。
实施例98：N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙 基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1
实施例99：N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基) 吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2
将N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(39 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (2 mL)中。进样：将2 mL的溶液进样到柱上[20% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralcel OD-H (5 µm)，批号ODH11158-01]。进样总数 = 1。将8.5至10分钟的级分合并并标记为峰1。将11.5至15分钟的级分合并并标记为峰2。将每组合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到配衡的小瓶中并在真空下干燥。
收集对应于峰1的级分以得到N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体1(16 mg)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.85 分钟, [MH]+的m/z = 393。
收集对应于峰2的级分以得到N2-甲基-N4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)-6-(1-(2-氧代吲哚啉-4-基)乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺，异构体2(17 mg)。
LCMS (2 mins 甲酸法) 峰Rt = 0.85 分钟, [MH]+的m/z = 393。
实施例100：6-((S*)-1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S, 2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例101：6-((R*)-1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)- 2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例84 (110 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (3 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(10% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷(+0.2% 异丙胺)，流速 = 30 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 30mm x 25cm Chiralcel OJ-H (5 µm)，批号OJH10027-01)。进样总数 = 4。将13-15 分钟的级分合并并标记为峰1。将15-17分钟的级分合并并标记为混合。将17-20分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的混合级分在真空下浓缩并使用上述方法再处理。将合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例100(33 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.67 min, [MH]+ = 378.3。
收集对应于峰2的级分以得到实施例101(35 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.67 min, [MH]+ = 378.3。
实施例102：6-((S*)-2-氰基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基) 吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例103：6-((R*)-2-氰基-1-苯基乙基)-N 2-甲基-N 4-((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡 啶-2,4-二甲酰胺
实施例87 (21 mg)通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH (1 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(10% EtOH/庚烷，流速 = 20 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 2cm x25cm Chiralpak AD (10 µm)，批号AD00CJ-LE004)。进样总数 = 3。将22-26 分钟的级分合并并标记为峰1。将26-29分钟的级分合并并标记为混合。将29-36分钟的级分合并并标记为峰2。将合并的混合级分在真空下浓缩并使用上述方法再处理。将合并的纯级分在真空下浓缩，然后转移到称重的烧瓶中。将峰2进一步通过手性HPLC纯化。将外消旋体溶于EtOH 中。进样：将20 µL的溶液进样到柱上(15% EtOH/庚烷，流速 = 1 mL/min，检测波长 = 215 nm，柱 4.6mm id x 25cm Chiralpak AD-H，批号ADHCE-PC014)。进样总数 = 15。将主要组分的级分合并并标记为峰2。
收集对应于峰1的级分以得到实施例100(33 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 363.2。
收集对应于峰2的级分以得到实施例101(35 mg)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 363.2。
实施例104：N2-甲基-6-((7-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-N4-((1S, 2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将2-((7-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)异烟酸锂盐(36.5 mg, 0.083 mmol)溶于DMF (2 mL)中。添加DIPEA (0.043 mL, 0.248 mmol)，然后添加(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(25 mg, 0.232 mmol)，随后添加HATU (47.1 mg,0.124 mmol)。将反应在室温下搅拌。添加额外部分的HATU (47.1 mg, 0.124 mmol)和(1S,2S)-2-甲基环丙-1-胺盐酸盐(25 mg, 0.232 mmol)并继续搅拌。将反应浓缩以得到棕色油状物。粗产物通过MDAP (高pH法)纯化。将适当的级分在真空下浓缩以得到奶油色固体形式的所需产物(6 mg, 0.015 mmol, 18.28 %收率)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.79 min, [MH]+ = 378.6。
实施例105：6-((S*)-甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N 2-甲基-N 4- ((1S,2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例106：6-((R*)-甲氧基(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)甲基)-N2-甲基-N4-((1S, 2S)-2-甲基环丙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将外消旋体(40 mg)通过手性HPLC纯化。将非对映异构体混合物溶于EtOH (1 mL)中。进样：将1 mL的溶液进样到柱上(15% EtOH(+0.2% 异丙胺)/庚烷，流速 = 30 mL/min，检测波长，215 nm，4. Ref 550，100，柱 30 mm x 25 cm Chiralpak IA，批号IA11157-01 (5 µm))。将24-26 min的级分合并并标记为峰1。将35-44 min的级分合并并标记为峰2。将合并的级分转移，在真空下浓缩到称重的烧瓶中。
收集对应于峰1的级分以得到实施例105(16 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 394.3。
收集对应于峰2的级分以得到实施例106(15 mg)。
LCMS (2 min 高pH法): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 394.3。
实施例107：N 4-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基-6-((S)- 1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例108：N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯 基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺
将N 4-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基-6-((S)-1-苯基乙基)吡啶-2,4-二甲酰胺(156.7 mg, 0.279 mmol)溶于DCM (4 mL)中并添加在二氧杂环己烷中的4M HCl(0.698 mL, 2.79 mmol)。将反应在室温下搅拌1小时。反应混合物用水(20 mL)稀释并用AcOEt (3x20 mL)萃取，合并的有机物通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到黄色胶状物。将其通过MDAP (高pH法)纯化。
收集对应于峰1的级分以得到黄色固体形式的实施例107 (49.5 mg, 0.130mmol, 46.7 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 380.3。
收集对应于峰2的级分以得到黄色固体形式的实施例108 (24.6 mg, 0.065mmol, 23.21 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 380.3。
实施例109-116
实施例109 – 116以类似于先前实施例的方式来制备
实施例117：6-苄基-N 4-((1R,3r,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡 啶-2,4-二甲酰胺
实施例118：6-苄基-N 4-((1R,3s,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡啶- 2,4-二甲酰胺
将6-苄基-N 4-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(113.5 mg, 0.208 mmol)溶于DCM (3 mL)中并添加在二氧杂环己烷中的4M HCl(0.260 mL, 1.038 mmol)。将反应在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取3次，将合并的有机物通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到黄色固体，将其通过MDAP(高pH法)纯化。收集对应于峰1的级分以得到白色固体形式的实施例117 (16.0 mg, 0.044 mmol, 21.09 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 366.2。
收集对应于峰2的级分以得到白色固体形式的实施例118 (30.3 mg, 0.083mmol, 39.9 %收率)。
LCMS (2 min 甲酸法): Rt = 0.87 min, [MH]+ = 366.2。
实施例119：N 4-((1R,3r,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基) 甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例120：N 4-((1R,3s,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲 基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将N4-((1R,5S,6r)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(168.3 mg, 0.147 mmol)溶于DCM (4 mL)中并添加在二氧杂环己烷中的4M HCl(0.368 mL, 1.473 mmol)。将反应在室温下搅拌1.25小时。反应混合物用水稀释并用AcOEt萃取3次，合并的有机物通过疏水性玻璃料过滤并在真空下浓缩以得到黄色胶状物。将其通过MDAP (高pH法)纯化以得到分离的白色固体形式的所需产物N 4-((1R,3r,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(31.1 mg, 0.079 mmol, 53.4 %收率)和N 4-((1R,3s,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (18.8mg, 0.048 mmol, 32.3 %收率)。
实施例119：LCMS (2min 甲酸法): Rt = 0.86. min, [MH]+ = 396.3。
实施例120：LCMS (2min 甲酸法): Rt = 0.81. min, [MH]+ = 396.3。
实施例121：N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基 (苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例122：N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-甲氧基(苯 基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将N 4-((1R,3s,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(16 mg, 0.040 mmol)通过手性色谱法使用以下条件分离：
样品溶于1ml EtOH中。
进样：将1ml的溶液进样到柱上。
所用的溶剂：20%EtOH(+0.2%异丙胺)/庚烷(+0.2%异丙胺)，f=30ml/min，波长，215nm，4. Ref 550,100
柱：30mm x 25cm Chiralpak AD-H(5µm)，批号ADH14252-01。
将对应于第一洗脱对映体的级分合并并在减压下浓缩至干以得到白色固体形式的所需产物，实施例121，N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (3 mg, 7.59 µmol, 18.75 %收率)。
LCMS (2min 甲酸法): Rt = 0.81 mins, [MH]+ = 396.3。
将对应于第二洗脱对映体的级分合并并在减压下浓缩至干以得到白色固体形式的所需产物，实施例122，N 4-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (5 mg, 0.013 mmol, 31.3 %收率)。
LCMS (2min 甲酸法): Rt = 0.81 mins, [MH]+ = 396.3。
实施例123：N 4-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基 (苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
实施例124：N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((S*)-甲氧基(苯 基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺
将N 4-((1R,3r,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-(甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺(29 mg, 0.073 mmol)进行手性分离，使用以下条件：
样品溶于1.5ml EtOH中。
进样：将1.5ml的溶液进样到柱上。
所用的溶剂：20%EtOH(+0.2%异丙胺)/庚烷(+0.2%异丙胺)，f=30ml/min，波长，215nm，4. Ref 550,100
柱：30mm x 25cm Chiralcel OJ-H(5µm)，批号OJH10027-01。
将对应于第一洗脱对映体的级分合并并在减压下浓缩至干以得到白色固体形式的所需产物，实施例123，N 4-((1R,3R,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (6 mg, 0.015 mmol, 20.69 %收率)。
LCMS (2min 甲酸法): Rt = 0.85 mins, [MH]+ = 396.3。
将对应于第二洗脱对映体的级分合并并在减压下浓缩至干以得到黄色固体形式的所需产物，实施例124，N 4-((1R,3S,5S,6r)-3-羟基双环[3.1.0]己-6-基)-6-((R*)-甲氧基(苯基)甲基)-N 2-甲基吡啶-2,4-二甲酰胺 (6 mg, 0.015 mmol, 20.69 %收率)。
LCMS (2min 甲酸法): Rt = 0.85 mins, [MH]+ = 396.3。
生物学数据
式(I)化合物可以在以下一种或多种测定中测试：
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）测定
使用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）竞争测定评估溴结构域结合。为了实现这种方法，用Alexa Fluor® 647（这是一种远红外荧光染料）标记一种已知高亲和力的泛BET相互作用小分子（参考化合物X）。参考化合物X充当溴结构域结合的报告物，并且是TR-FRET对的受体荧光团组分。与抗-6*His抗体缀合的铕螯合物被用作TR-FRET对中的供体荧光团。抗-6*His抗体选择性结合至添加到本研究中使用的每个BET串联溴结构域蛋白构建体的氨基末端的六组氨酸纯化表位。当供体和受体荧光团紧密接近（在20-80 Å之间）时，产生TR-FRET信号，这在本测定中通过参考化合物X与溴结构域蛋白的结合而实现。
参考化合物X：4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺基)戊基)氨基)-6-氧代己基)-2-((2E,4E)-5-(3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-2-基)戊-2,4-二烯-1-叉基)-3-甲基-5-磺基吲哚啉-1-基)丁烷-1-磺酸盐)
向N-(5-氨基戊基)-2-((4S)-6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂䓬-4-基)乙酰胺(制备参见参考化合物J，WO2011/054848A1，1.7mg，3.53 µmol)于DMF (40μl)中的溶液中加入AlexaFluor647-ONSu (2.16 mg，1.966 µmol) 也在DMF (100μl)中的溶液。混合物用DIPEA (1 µl, 5.73 µmol)碱化，并在涡旋混合器上搅拌过夜。
将反应混合物蒸发至干。将固体溶于MeCN/水/AcOH(5/4/1，<1 ml) 中，过滤并施加到Phenomenex Jupiter C18制备柱上，用下列梯度(A = 0.1% 三氟乙酸/水，B= 0.1%TFA/90% MeCN/10%水)洗脱：流速 = 10 ml/min，AU = 20/10 (214nm)：
5-35%，t=0min：B = 5%；t=10min：B = 5%；t=100min：B = 35%；t=115min：B = 100%(Sep. grad：0.33%/min)。
主要组分在26-28%B的范围内洗脱，但似乎由两个峰组成。通过分析HPLC(Spherisorb ODS2, 经60 min 1至35%)分析应含有“两种”组分的中间级分(F1.26)：单组分在28%B洗脱。
合并级分F1.25/26&27并蒸发至干。用DMF转移，蒸发至干，用干燥乙醚研磨，并将蓝色固体在<0.2毫巴下干燥过夜：1.54mg。
分析HPLC (Sphersisorb ODS2, 经60min 1至35%B)：MSM10520-1：[M+H]+ (obs)：661.8/-与M-29相符。对于M-29的计算质量1320.984，这相当于[(M+2H)/2]+。这是使用Alexa Fluor 647染料的标准发生事件，表示在质谱仪条件下理论上损失了两个亚甲基。
测定原理：为了产生TR-FRET信号，用λ337 nm的激光激发供体荧光团，其随后导致在λ618 nm处的发射。如果受体荧光团非常接近，则可能发生能量转移，这导致Alexa Fluor® 647在λ665 nm处的发射。在竞争性化合物存在下，参考化合物X可以从与溴结构域的结合中置换。如果发生置换，则受体荧光团不再接近供体荧光团，这阻止了荧光能量转移，以及随后在λ665处的Alexa Fluor® 647发射损失。
使用跨越溴结构域1（BD1）和溴结构域2（BD2）的蛋白截短物评估式(I)化合物与参考化合物X对与BET家族（BRD2、BRD3、BRD4和BRDT）结合的竞争。为了监测与BD1或BD2的差异结合，在乙酰赖氨酸结合口袋中产生关键酪氨酸至丙氨酸的单个残基突变。为了验证该方法，为每个BET家族成员产生双残基突变串联结构域蛋白。利用荧光偏振方法，测定每个单突变体和双突变体对参考化合物X的结合亲和力。与非突变的野生型串联BET蛋白相比，双突变串联蛋白对参考化合物X的亲和力大大降低（Kd降低> 1000倍）。单突变溴结构域串联蛋白对参考化合物X的亲和力与相应的非突变的BET蛋白是等效的。这些数据证明酪氨酸至丙氨酸的单突变使突变的溴结构域和参考化合物X之间的相互作用的Kd降低> 1000倍。在TR-FRET竞争测定中，参考化合物X以等价于对非突变的溴结构域的Kd的浓度使用，这确保未检测到突变的溴结构域的结合。
蛋白质产生：重组人溴结构域[(BRD2 (1-473) (Y113A)和(Y386A), BRD3 (1-435) (Y73A)和(Y348A)，BRD4 (1-477) (Y97A)和(Y390A)，和BRDT (1-397) (Y66A)和(Y309A)]在大肠杆菌细胞中表达(对于BRD2/3/4，在pET15b载体中，以及对于BRDT，在pET28a载体中)，在N-末端具有6-His标签。将His-标记的溴结构域粒状沉淀重悬于50 mMHEPES (pH7.5)、300 mM NaCl、10 mM咪唑和1 μl/ml蛋白酶抑制剂混合物中，使用超声处理从大肠杆菌细胞中提取并使用镍琼脂糖凝胶高效柱纯化，洗涤蛋白，然后用缓冲液50mMHEPES (pH7.5)、150mM NaCl、500mM 咪唑以0-500 mM咪唑的线性梯度经20个柱体积洗脱。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成最后纯化。将纯化的蛋白在-80℃下储存在20 mMHEPES pH 7.5和100mM NaCl中。通过肽质量指纹图谱确认蛋白身份，并通过质谱法确认预测的分子量。
溴结构域 BRD2、3、4和T，BD1 + BD2突变体TR-FRET竞争测定的方案：
将所有测定组分溶解于由50mM HEPES pH7.4、50mM NaCl、5%甘油、1mM DTT和1mMCHAPS组成的测定缓冲液中。将参考化合物X在含有20nM单突变、串联溴结构域蛋白的测定缓冲液中稀释至等价于对该溴结构域的Kd的2倍的浓度。将含有溴结构域和参考化合物X的溶液加入到Greiner 384孔黑色低体积微量滴定板中的测试化合物或DMSO载体（在该测定中使用最多0.5％DMSO）的剂量响应稀释液中，随后在室温下孵育30分钟。向所有孔中加入等体积的3nM抗-6*His铕螯合物，然后在室温下再孵育30分钟。使用Perkin Elmer多模板读数器，通过在λ337 nm激发供体荧光团，随后在50 μsec的延迟后，分别在λ615nm和λ665nm处测量供体和受体荧光团的发射，来检测TR-FRET。为了控制这些测定，在每个微量滴定板上包括每个未抑制的（DMSO载体）和抑制的(WO2011/054846A1的实施例11的IC50浓度的10倍)TR-FRET测定的16个重复。
然后应用以下形式的四参数曲线拟合：
y = a + (( b – a)/( 1 + ( 10 ^ x/10 ^ c ) ^ d )
其中 ‘a’是最小值，‘b’ 是Hill斜率，‘c’ 是pIC50，以及 ‘d’是最大值。
所有化合物（实施例）均各自基本上如上所述在BRD4 BD1和BRD4 BD2 TR-FRET测定中进行了测试。本领域技术人员将认识到，用于功能活性的体外结合测定和基于细胞的测定易受到实验可变性的影响。因此，应理解，下面给出的pIC50值仅是示例性的。pIC50值以log10单位表示。
发现所有测试化合物在至少一种上述测定中具有≥5.0的pIC50。
发现实施例54和116在BRD4 BD2测定中具有≥ 5.0 且< 6.0的pIC50。
发现所有其他测试化合物在BRD4 BD2测定中具有≥ 6.0的pIC50。具体地，发现实施例30在BRD4 BD2测定中具有8.0的 pIC50(n = 4)；发现实施例46在BRD4 BD2测定中具有7.1 的pIC50(n = 3)；发现实施例49在BRD4 BD2测定中具有7.9的pIC50(n = 2)；发现实施例52在BRD4 BD2测定中具有7.7的pIC50(n = 1)；发现实施例80 在BRD4 BD2测定中具有7.4的pIC50(n = 8)；发现实施例83在BRD4 BD2测定中具有7.5的pIC50(n = 5)；发现实施例106在BRD4 BD2测定中具有7.6的pIC50(n = 2)；发现实施例117在BRD4 BD2测定中具有7.3的pIC50；发现实施例118在BRD4 BD2测定中具有7.3的pIC50；发现实施例119在BRD4 BD2测定中具有8.2的pIC50；发现实施例120在BRD4 BD2测定中具有7.8的pIC50；发现实施例121在BRD4 BD2测定中具有7.2的pIC50；发现实施例122在BRD4 BD2测定中具有7.4的pIC50；发现实施例123在BRD4 BD2测定中具有7.8的pIC50；和发现实施例124在BRD4 BD2测定中具有7.3的pIC50。
相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性的计算
相对于BRD4 BD1，对BRD4 BD2的选择性如下计算：
选择性 = BRD4 BD2 pIC50 – BRD4 BD1 pIC50
发现所有实施例在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为≥ 1个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少10倍。
发现实施例1至108和117至124在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为≥ 2个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例12、13、18、24、28、30、48、52、62、63、67、68、69、71、73、80、82、84、87、88、92、95、99、100、103、106、107、119、122和123在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4BD1对BRD4 BD2的选择性为≥ 3个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例30在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.3个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例46在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.8个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例49在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.8个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例52在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.2个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例80在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.0个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例83在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.9个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例106在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.0个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是BRD4 BD1的至少1000倍。
发现实施例117在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.9个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例118在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.9个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例119在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.1个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例120在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.8个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例121在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.7个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。
发现实施例122在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.1个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例123在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为3.0个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少1000倍。
发现实施例124在至少一种上述TR-FRET测定中相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性为2.8个log单位，因此相对于BRD4 BD1对BRD4 BD2的选择性是至少100倍。

Claims (28)

1.式(I)化合物或其盐
其中：
R1为-C1-3烷基或环丙基；
R2为-C0-3烷基-C3-7环烷基，其中所述C3-7环烷基任选被一个、两个或三个可以相同或不同的R5基团取代；
R3为-H、-C1-4烷基、环丙基、氟、氯、-CH2F、-C0-3烷基OR10或C0-3烷基CN；
R4为苯基或杂芳基，其中各自任选被一个、两个或三个可以形同或不同的R6基团取代；
每个R5独立地选自氟、-C1-6烷基-R13、-OCH3、-O-C2-6烷基-R13、-CN、-OH、-SO2C1-3烷基和-NR14R15；
每个R6独立地选自氧代、卤素、-OCF3、-OCHF2、-C1-4烷基、-C0-3烷基-OR8、-C0-3烷基-NR14R15、-C0-3烷基-CONR11R12、-C0-3烷基-杂环基、-C0-3烷基-O-C1-2烷基-杂环基、-CN和-SO2R7，其中杂环基任选被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代；
R7为-C1-3烷基或-NR11R12；
R8为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12、-C2-3烷基-OH或-C2-3烷基-O-C1-3烷基；
R9为-H、-C1-3烷基、-C2-3烷基-NR11R12或-C2-3烷基-OH；
R10为-H或-C1-3烷基；
每个R11和每个R12独立地选自-H和-C1-3烷基；或R11和R12可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基；
R13为-H、-OR9、-NR14R15或-CN；
每个R14和每个R15独立地选自-H、-C(O)OC(CH3)3、-C(O)C1-3烷基、-C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-C2-3烷基-OH和-C2-3烷基-O-C1-3烷基，其中-C1-6烷基和C3-7环烷基可以任选被一个、两个或三个氟取代；或R14和R15可以与它们所连接的氮连接在一起以形成任选地含有选自氮、氧和硫的另外的杂原子和任选地被一个或两个独立地选自-C1-3烷基、-OH和氟的取代基取代的杂环基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中R1 为甲基。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐，其中R2为环丙基。
4.根据权利要求3所述的化合物或其盐，其中R2 是未取代的。
5.根据权利要求3所述的化合物或其盐，其中 R2 被一个R5基团取代，所述R5基团为甲基。
6.根据前述权利要求任一项所述的化合物或其盐，其中R3为-H、甲基、乙基、氟、-OCH3、-OH、-CH2F、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2OMe或-CH2CN。
7.根据前述权利要求任一项所述的化合物或其盐，其中R4是未取代的苯基或R4是被一个R6 基团取代的苯基。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物或其盐，其中R4是未取代的吡咯并吡啶基。
9.根据权利要求7任一项所述的化合物或其盐，其中R4被一个R6基团取代，所述R6基团选自氧代、氟、-OCH2CH2OH、-OCH2CH(CH3)OH、甲基、-OCH3、-OH和-OCH2CH2-3-(4,4-二氟哌啶基)。
10.化合物或其盐，所述化合物选自实施例1至124。
11.根据前述权利要求任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
12.药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求11中限定的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
13.组合产品，所述组合产品包含如权利要求11中限定的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其他治疗活性剂。
14.如权利要求11中限定的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗。
15.如权利要求11中限定的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症。
16.用于根据权利要求15所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。
17.用于根据权利要求15所述用途的化合物，其中所述疾病或病症涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
18.用于根据权利要求15所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是病毒感染。
19.用于根据权利要求15所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是癌症。
20.用于根据权利要求15所述用途的化合物，其中所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
21.如权利要求11中限定的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
22.需要治疗的对象中适用于溴结构域抑制剂的疾病或病症的治疗方法，所述方法包括给予治疗有效量的如权利要求11中限定的化合物或其药学上可接受的盐。
23.根据权利要求22所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是急性或慢性自身免疫和/或炎性病症。
24.根据权利要求22所述的治疗方法，其中所述疾病或病症涉及细菌、病毒、真菌、寄生虫或它们的毒素感染的炎症反应。
25.根据权利要求22所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是病毒感染。
26.根据权利要求22所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是癌症。
27.根据权利要求22所述的治疗方法，其中所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
28.根据权利要求22至27任一项所述的治疗方法，其中所述对象是人。
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