JP6983873B2 - 化合物(2s,3r)−イソプロピル2−(((2−(1,5−ジメチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロピリジン−3−イル)−1−((テトラヒドロ−2h−ピラン−4−イル)メチル)−1h−ベンゾ[d]イミダゾール−5−イル)メチル)アミノ)−3−ヒドロキシブタノエートエジシレートの水和物結晶 - Google Patents
化合物(2s,3r)−イソプロピル2−(((2−(1,5−ジメチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロピリジン−3−イル)−1−((テトラヒドロ−2h−ピラン−4−イル)メチル)−1h−ベンゾ[d]イミダゾール−5−イル)メチル)アミノ)−3−ヒドロキシブタノエートエジシレートの水和物結晶 Download PDFInfo
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Description
本明細書で使用する場合、「ブロモドメイン」という用語は、アセチル化リジン残基、例えば、ヒストンのN末端尾部のものなどに結合する、進化的、且つ構造的に保存されたモジュール(長さがおよそ110個のアミノ酸)を指す。それらは、より遥かに大きいブロモドメイン含有タンパク質(BCP)の一部として確認されているタンパク質ドメインであり、これらの多くは、遺伝子転写及び/又はクロマチン再構成を調節する役割を有する。ヒトゲノムは、少なくとも57種のブロモドメインをコードしている。
第1の態様において、本発明は、BET阻害剤であり、従ってBET阻害剤が適応である様々な障害(特に炎症性疾患及び自己免疫性疾患、並びに癌)の治療に有用であり得る、化合物(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエートエジシレートの水和物結晶を提供する。
X線粉末回折(XRPD)
データは、X’Celerator検出器を用いて、PANalytical X’Pert Pro粉末回折計(モデルPW3040/60)上で取得した。取得条件は以下のとおりであった:放射線:Cu Kα、発生器電圧:40kV、発生器電流:45mA、開始角度:2.0° 2θ、終了角度:40.0° 2θ、ステップサイズ:0.0167° 2θ、1ステップ当たりの時間:31.75秒。サンプルは、数ミリグラムのサンプルをシリコンウエハー(ゼロバックグラウンドプレート)上に載せ、粉末の薄膜を生じさせることによって調製した。
ラマンスペクトルは、1064nmのNd:YVO4励起レーザー、液体窒素冷却されたGe検出器、及びmicrostageを備えたNicolet NXR9650分光計(Thermo Scientific)を用いて収集した。スペクトルは、Happ-Genzelアポダイゼーション関数及び2レベルゼロフィリングを用いて、分解能4cm-1、128スキャンで取得した。バンド位置はOmnicソフトウェアを用いて決定し、各バンド位置における許容誤差(誤差範囲)は、約±1cm-1である。
DSCサーモグラムは、50mL/分のN2パージ下の冷凍冷却システム及びオートサンプラーを備えたTA Instruments Q200示差走査熱量測定器を用いて取得した。DSCサーモグラムは、圧着アルミニウムパン中10.00℃/分で取得した。
熱重量分析(TGA)
TGAサーモグラムは、TA Instruments Q5000熱重量分析計を、50mL/分のN2パージ下、10℃/分で用いて取得した。
(i) 強力なBET阻害活性、
(ii) BETファミリーのタンパク質以外の他の既知のブロモドメイン含有タンパク質を上回る選択性、
(iii) 1つ以上の他のBETファミリーメンバーを上回る、特定のBETファミリーメンバーに対する選択性、
(iv) 任意の所与のBETファミリーメンバーについての、1つの結合ドメインに対する選択性(すなわち、BD2よりもBD1)、
(v) 改善された発展性(例えば、望ましい溶解度プロファイル、薬物動態、及び薬動力学)、又は
(vi) 低減された副作用プロファイル。
本明細書中に開示される式(I)の化合物、そのエジシレート塩(式(II)の化合物)及びその水和物結晶はBET阻害剤として知られており、したがって、全身性炎症若しくは組織炎症、感染症若しくは低酸素症に対する炎症反応、細胞の活性化及び細胞増殖、脂質代謝、線維症に関連する様々な疾患又は病態の治療、並びにウイルス性感染症の予防及び治療において治療的有用性を有し得る。一実施形態において、本発明の化合物は、各BETファミリーブロモドメイン含有タンパク質(例えばBRD2、BRD3、BRD4及びBRDT)の、アセチル化リジン残基への結合を阻害することができる。さらなる実施形態において、本発明の化合物は、BRD4の、その同族アセチル化リジン残基への結合を阻害することができる。
療法において使用する場合、本発明の化合物が、未加工の化学物質として投与される可能性もあるが、医薬組成物としてこの活性成分を提供するのが一般的である。
いくつかの実施形態を以下に示す。
項1
(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエートエジシレートの水和物結晶。
項2
一水和物である、項1に記載の水和物結晶。
項3
図1に実質的に示されるとおりのX線粉末回折パターン(XRPD)を有する、項1又は2に記載の水和物結晶。
項4
5.1度、7.9度、10.1度、11.3度、11.9度、12.9度、13.4度、14.2度、18.3度、20.3度、21.0度及び21.8度の特定の2θ値のピーク(±0.1° 2θの実験誤差)を有するX線粉末回折パターンを有する、項1〜3のいずれか1項に記載の水和物結晶。
項5
図2に実質的に示されるとおりのDSCサーモグラムを有する、項1〜4のいずれか1項に記載の水和物結晶。
項6
DSCにより決定される約223℃の融解開始点を有する、項1〜5のいずれか1項に記載の水和物結晶。
項7
図3に実質的に示されるとおりのFTラマンスペクトルを有する、項1〜6のいずれか1項に記載の水和物結晶。
項8
項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶と、1種以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
項9
1種以上の他の治療活性剤をさらに含む、項8に記載の医薬組成物。
項10
療法において使用するための、項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶。
項11
BET阻害剤が適応である疾患又は病態の治療において使用するための、項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶。
項12
疾患又は病態が自己免疫性疾患及び/又は炎症性疾患である、項11に記載の使用のための水和物結晶。
項13
疾患又は病態が関節リウマチである、項11に記載の使用のための水和物結晶。
項14
疾患又は病態が骨関節炎である、項11に記載の使用のための水和物結晶。
項15
BET阻害剤が適応である疾患又は病態の治療方法であって、治療有効量の項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
項16
BET阻害剤が適応である疾患又は病態が、自己免疫性疾患及び/又は炎症性疾患である、項15に記載の治療方法。
項17
BET阻害剤が適応である疾患又は病態が関節リウマチである、項15に記載の治療方法。
項18
BET阻害剤が適応である疾患又は病態が骨関節炎である、項15に記載の治療方法。
LCMS
システムA:
カラム:50mm x 2.1mm(内径)、1.7μm Acquity UPLC CSH C18
流速:1mL/分。
温度:40℃
UV検出範囲:210〜350nm
質量スペクトル:交互走査(Alternate-scan)ポジティブモード及びネガティブモードエレクトロスプレーイオン化を用いて、質量分光計上で記録した。
利用した溶媒は以下のとおりであった:
A = アンモニア溶液でpH10に調整された水中10mM重炭酸アンモニウム。
B = アセトニトリル。
1H NMRスペクトルは、Bruker AV-400 400 MHz分光計上でクライオプローブを用いて、0.00ppmのTMSを基準としてDMSO-d6中で記録した。
(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)メタノール(2.4g、14.02mmol)及び(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メタンアミン(2.423g、21.04mmol)を水(30mL)中に懸濁させ、炭酸カリウム(2.52g、18.23mmol)を添加し、次いで混合物を80℃で24時間撹拌し、その後撹拌しながら冷却した。得られた混合物をEtOAc(50mL)で抽出し、有機層を水(50mL)で洗浄し、乾燥させて真空中で蒸発させ、標題化合物(3.60g、13.52mmol、収率96%)を暗黄色の固体として得た。LCMS(システムA):tRET=0.82分;MH+267。標題化合物を精製することなく次のステップで使用した。
(3-ニトロ-4-(((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)アミノ)フェニル)メタノール(48g、180mmol)をエタノール(400mL)中に溶解させ、Pd/C 5重量%(3g、28.2mmol)上で大気圧にて18時間水素化し、次いで、混合物を窒素下でセライトに通して濾過し、濾液を真空中で蒸発させて、標題化合物(50g、212mmol、収率117%)を暗褐色油状物として得た。LCMS(システムA):tRET=0.62分;MH+237。生成物をさらに精製することなく次のステップに持ち越した。
(3-アミノ-4-(((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)アミノ)フェニル)メタノール(50g、190mmol)を水(500mL)中に懸濁させ、1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-カルボアルデヒド(31.7g、209mmol)及びセチルピリジニウムブロミド(14.64g、38.1mmol)を添加し、その後混合物を一晩激しく撹拌した。この混合物をDCM(3x300mL)で抽出し、合わせた有機物をブライン(500mL)で洗浄し、次いで乾燥させて蒸発させ、暗褐色の固体を得た。これをEtOAc(500mL)中に懸濁させ、2時間加熱還流し、その後冷却して生成物を濾過により回収した。粗生成物をEtOAc(500mL)中に再懸濁させ、再度加熱還流し、次いで氷浴中で冷却して生成物を濾過により回収し、エーテル(300mL)で洗浄して褐色の固体(64g)を得た。LCMSは清浄な生成物を示したが、NMRスペクトルは、生成物中に残留している0.2当量のセチルピリジニウム塩の存在を示す。精製することなく次のステップに持ち越した。標題化合物は純度90重量%であった。LCMS(システムA):tRET=0.66分;MH+368。
AcCl(96mL、1343mmol)を2-プロパノール(500mL、6490mmol)に滴加し、次いで混合物を20分間撹拌した後、(2S,3R)-2-アミノ-3-ヒドロキシブタン酸(40g、336mmol)を添加した。得られた懸濁液を一晩加熱還流し、その後冷却して真空中で蒸発させ、無色油状物を得た。これをエーテル(300mL)で摩砕して生成物を濾過により回収し、標題化合物を無色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.49 (br. s., 3H)、5.66 (br. s., 1H)、4.99 (td, J=6.24, 12.47 Hz, 1H)、4.09 (br. s., 1H)、3.80 (d, J=4.16 Hz, 1H)、1.17-1.29 (m, 9H)。
5-(5-(ヒドロキシメチル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)-1,3-ジメチルピリジン-2(1H)-オン(64g、122mmol)をDCM(600mL)中に溶解させ、二酸化マンガン(42.4g、488mmol)を添加し、次いで混合物を18時間還流で加熱した。LCMSは完全な変換を示し、混合物を濾過し、固体をDCMで洗浄した。濾液を真空中で蒸発させて褐色ガム状物を得て、これをDCM(100mL)中に溶解させて、340gのシリカカラム上にロードし、次いで0〜50%EtOH/EtOAcで溶出(溶離)し、生成物含有画分を真空中で蒸発させて褐色の固体を得た。これをエーテル(200mL)で摩砕して固体を濾過により回収し、次いでEtOAc(300mL)中に懸濁させて1時間加熱還流し、その後氷浴中で冷却して生成物を濾過により回収し、2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-カルボアルデヒド(42.5g、116mmol、収率95%)を砂色の固体として得た。LCMS(システムA):tRET=0.74分;MH+366。濾液を真空中で蒸発させて、残留物をEtOAc(50mL)中還流で30分間摩砕し、次いで冷却して濾過し、生成物のさらなる部分(3g)をベージュ色の固体として得て、NMRは所望のアルデヒドと一致していた。標題化合物は純度80重量%であった。
2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-カルボアルデヒド(42g、115mmol)及び(2S,3R)-イソプロピル2-アミノ-3-ヒドロキシブタノエート塩酸塩(34.1g、172mmol)をDCM(500mL)中に溶解させ、次いでEt3N(48.1mL、345mmol)を添加し、その後ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド(73.1g、345mmol)を添加して、混合物を室温で24時間撹拌した。この混合物を、5リットルの円錐フラスコ中1.5リットルの飽和重炭酸ナトリウム溶液に添加して1時間激しく撹拌し、次いで有機層を分離して、水性層をDCM(500mL)で抽出し、合わせた有機物を水(500mL)及びブライン(500mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて真空中で蒸発させ、褐色泡状物を得た。粗生成物をDCM(200mL)中に溶解させて750gのシリカカラム上にロードし、その後0〜30%EtOH/EtOAcで溶出して清浄な生成物含有画分を真空中で蒸発させ、標題化合物(51g、100mmol、収率87%)をベージュ色泡状物として得た。LCMS(システムA):tRET=0.86分;MH+511。
1H NMR (d6-DMSO):δ 1.06 - 1.26 (m, 13 H)、1.90 - 2.02 (m, 1 H)、2.11(s, 3 H)、2.20 - 2.41(m, 1 H)、3.00 (d, J=4.9 Hz, 1 H)、3.05 - 3.16 (m, 2 H)、3.56 (s, 3 H)、3.66 (d, J=1.32 Hz, 1 H)、3.76 - 3.86 (m, 1 H)、3.90 (d, J=13.2 Hz, 1 H)、4.26 (d, J=7.3 Hz, 2 H)、4.67 (d, J=5.4 Hz, 1 H)、4.93 (sept, J=6.2 Hz, 1 H)、7.22 (dd, J=8.3, 1.2 Hz, 1 H)、7.53 (s, 1 H)、7.61(d, J=8.3 Hz, 1 H)、7.73 (dd, J=2.3, 1.1 Hz, 1 H)、8.12 (d, J=2.2 Hz, 1 H)。
カルーセル管に、(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエート(調製については実施例1を参照、100mg、0.196mmol)及びイソプロパノール(1.35mL)を添加した。撹拌混合物を40℃に加熱し、イソプロパノール(557μL)中のエタン-1,2-ジスルホン酸(44.7mg、0.235mmol)の溶液を添加した。この混合物を40℃で15時間撹拌した。この時間後、固体が形成された。反応物をカルーセルから取り外し、24℃に直接冷却し、6時間撹拌した。この時間後、懸濁液を濾過し、真空下で5分間乾燥させた。バイアル中に移したこの固体を、40℃の真空オーブン中で3日間さらに乾燥させ、標題化合物(91mg、収率66.3%)を白色の結晶固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.61(1H, br. s.)、9.29 (1H, br. s.)、8.35 (1H, br. s.)、8.02 (1H, d, J=8.6 Hz)、7.92 (1H, s)、7.82 - 7.75 (1H, m)、7.58 (1H, d, J=8.6 Hz)、4.94 (1H, spt, J=6.2 Hz)、4.46 - 4.34 (4H, m)、4.05 (1H, quin, J=6.4 Hz)、3.77 -3.69 (2H, m)、3.66 (1H, br. s.)、3.59 (3H, s)、3.17 -3.08 (2H, m)、2.66 (4H, s)、2.13 (3H, s)、2.06 - 1.93 (1H, m)、1.31 - 1.16 (13H, m)。LCMS(システムA):tRET=0.88分;MH+511。
EasyMax 400mL反応器に、(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエート(調製例については実施例1を参照)(10g、19.58mmol)及びイソプロパノール(135mL)を添加した。別のフラスコ中で、イソプロパノール(28mL)中のエタン-1,2-ジスルホン酸(4.47g、23.50mmol)の溶液を調製し、40℃で温めて濾過した。
室温(26℃)の撹拌子を有するWheatonバイアル中で、脱イオン水(175μL)中のエタン1,2-ジスルホン酸(467.4mg)の溶液を、アセトン(8mL)中の非晶質(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエート(調製例については実施例1を参照)(1.0g)の溶液に添加した。エタン1-2-ジスルホン酸を含むバイアルを脱イオン水(175μL)ですすいだ。混合物を50℃に加熱し、次いで、50℃で30分間撹拌した。反応混合物を1時間かけて50℃から室温に冷却し、その後室温から50℃に再加熱した。温度を50℃で30分間維持し、その後26℃に冷却した。懸濁液を26℃で14.5時間撹拌した。固体を濾過により単離し、真空下で10分間脱液し、標題化合物を白色の結晶固体(824mg)として得た。
7.3%(v/v)水性プロパン-2-オール(0.1mL)中の結晶(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエート1,2-エタンジスルホネート(調製例については実施例2又は3を参照)(26mg)の撹拌懸濁液に、(2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエート1,2-エタンジスルホネート水和物(調製例については実施例4を参照)の幾つかの結晶種を添加した。無水物の水和物への変換は、5分以内に観察された。
時間分解蛍光共鳴エネルギー移動(TR-FRET)アッセイ
時間分解蛍光共鳴エネルギー移動結合アッセイを用いて、結合を評価した。このアッセイは、タンパク質のN末端の6-His精製タグを、ユーロピウムキレートで標識された抗-6His抗体(PerkinElmer AD0111)に対するエピトープとして利用し、ドナーフルオロフォアとして作用する上記タンパク質にこのユーロピウムを結合させる。小分子である、ブロモドメインBRD2、BRD3、BRD4及びBRDTの高親和性バインダーをAlexa Fluor647(参照化合物X)で標識し、これがFRET対のアクセプターとして作用する。
全アッセイ成分を、50mM HEPES(pH7.4)、50mM NaCl、5%グリセロール、1mM DTT及び1mM CHAPSからなるバッファー組成物中に溶解させた。ブロモドメインタンパク質の最終濃度は10nMであり、Alexa Fluor647リガンドはKdであった。これらの成分を予め混合し、5μLのこの反応混合物を、Greiner 384ウェル黒色低体積マイクロタイタープレート中の、50nlの様々な濃度の試験化合物又はDMSOビヒクル(最終0.5%DMSO)を含む全ウェルに添加し、暗中室温で30分間インキュベートした。1.5nM最終濃度の抗-6Hisユーロピウムキレートを含む5μLの検出混合物を全ウェルに添加し、少なくとも30分間のさらなる暗中インキュベーションを実施した。その後、プレートをEnvisionプレートリーダー(・ex = 317nm、ドナー・em = 615nm;アクセプター・em = 665nm;Dichroic LANCE dual)上で読み取った。両発光波長における時間分解蛍光強度測定を行い、アクセプター/ドナー比を計算してデータ解析に用いた。全データを、各プレート上の16個の高い(阻害剤対照-WO 2011/054846A1の実施例11)対照ウェル及び16個の低い(DMSO)対照ウェルの平均に対して正規化した。次いで、以下の形の4パラメータ曲線適合を適用した:
y = a + (( b - a) / ( 1 + ( 10 ^ x / 10 ^ c ) ^ d )
(式中、「a」は最小値であり、「b」はHill勾配であり、「c」はpIC50であり、「d」は最大値である)。
細菌リポ多糖(LPS)などのtoll様受容体のアゴニストによる単核球細胞の活性化は、MCP-1などの重要な炎症メディエーターの産生をもたらす。このような経路は、様々な自己免疫性疾患及び炎症性疾患の病態生理の中心であると広く考えられている。血液を、ヘパリンナトリウム(Leo Pharmaceuticals)(血液1ml当たり10単位のヘパリン)を含むチューブに収集する。100%DMSO中1μlの試験試料を含む96ウェルの化合物プレートを調製した(ドナーの可変性を考慮して2複製)。130μlの全血を、96ウェル化合物プレートの各ウェルに分注し、37℃、5%CO2で30分間インキュベートした。PBS中で作製した10μlのリポ多糖(チフス菌(Salmonella typhosa)由来、L6386)(最終アッセイ濃度200ng/mL)を、化合物プレートの各ウェルに添加した。次いで、プレートを、加湿したプライマリーセルインキュベーター内に、37℃、5%CO2で18〜24時間置いた。140μlのPBSを、血液を含む化合物プレートのすべてのウェルに添加した。その後、プレートを密封し、2500rpmで10分間遠心分離した。25μlの細胞上清を、ヒトMCP-1捕捉抗体で予めコーティングした96ウェルMSDプレートに入れた。プレートを密封し、600rpmのシェーカー上に1時間(室温)置いた。MSD SΜLFO-TAG(商標)試薬で標識した、25μlの抗ヒトMCP-1抗体を、MSDプレートの各ウェルに添加する(50×ストックをDiluent100(希釈剤100)で1:50に希釈し、。最終アッセイ濃度は1μg/mLである)。次いで、プレートを再密封し、さらに1時間振盪した後、PBSを用いて洗浄した。その後、150μlの2×MSDリードバッファーT(4×ストックのMSDリードバッファーTを脱イオン水を用いて50:50に希釈し、)を各ウェルに添加し、プレートをMSD Sector Imager 6000で読み取った。各化合物についての濃度応答曲線をデータから生成し、pIC50値を計算した。
カルボキシルエステラーゼ1(CES1)によるESM含有BET阻害剤の加水分解は、標的分子の送達の一態様である。組み換えヒトCES1による本発明の特定の化合物の加水分解速度を、HPLCアッセイを用いて決定した。ヒト細胞中で発現させ、精製して均一化した組み換えヒトCES1(Gly18-Glu563、C末端にポリヒスチジンタグを有する)を、Novoprotein(ニュージャージー州サミット、米国)(カタログ番号C450)から入手した。384ウェルプレート中20℃にて、50mMリン酸ナトリウム(pH7.5)/100mM NaClバッファー中で反応を行った。アッセイは、固定濃度の試験化合物(50μM)及びCES1(50nM)を使用し、反応の経時変化を、増加する時間(increasing times)でギ酸を添加してpHを低下することでサンプルを停止させることによって取得した。その後、停止させたサンプルを、0.1%ギ酸を含む水中アセトニトリルの勾配を使用し、50x2mm C18 5μM逆相カラム(Phenomenex Gemini)を流速1ml/分で用いて、HPLCにより分析し、未加水分解エステルから生成酸を分離した。300nm波長の吸光度を用いてクロマトグラフィーをモニターした。形成された生成物の%を、積分ピーク面積を用いて決定し、これを使用して反応の初期速度を決定した。これらの条件下での各試験化合物に対するCES1の特異的活性(μM/分/μMの単位)を、反応の初期速度をCES1濃度で割ることによって取得した。
Claims (14)
- (2S,3R)-イソプロピル2-(((2-(1,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)メチル)アミノ)-3-ヒドロキシブタノエートエジシレートの水和物結晶。
- 一水和物である、請求項1に記載の水和物結晶。
- 5.1度、7.9度、10.1度、11.3度、11.9度、12.9度、13.4度、14.2度、18.3度、20.3度、21.0度及び21.8度からなる群から選択される少なくとも3つの特定の2θ値のピーク(±0.1° 2θの実験誤差)を有するX線粉末回折パターン(XRPD)を有する、請求項1又は2に記載の水和物結晶。
- 5.1度、7.9度、10.1度、11.3度、11.9度、12.9度、13.4度、14.2度、18.3度、20.3度、21.0度及び21.8度の特定の2θ値のピーク(±0.1° 2θの実験誤差)を有するX線粉末回折パターンを有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の水和物結晶。
- DSCにより決定される223℃の融解開始点を有する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の水和物結晶。
- 805cm -1 、1017cm -1 、1060cm -1 、1117cm -1 、1211cm -1 、1253cm -1 、1264cm -1 、1282cm -1 、1295cm -1 、1331cm -1 、1363cm -1 、1413cm -1 、1459cm -1 、1514cm -1 、1575cm -1 、1631cm -1 、2932cm -1 、2966cm -1 及び3062cm -1 からなる群から選択される少なくとも8個のピーク(ここで、各バンド位置における許容誤差は±1cm -1 である)を含むFTラマンスペクトルを有する、請求項1〜5のいずれか1項に記載の水和物結晶。
- 805cm -1 、1017cm -1 、1060cm -1 、1117cm -1 、1211cm -1 、1253cm -1 、1264cm -1 、1282cm -1 、1295cm -1 、1331cm -1 、1363cm -1 、1413cm -1 、1459cm -1 、1514cm -1 、1575cm -1 、1631cm -1 、2932cm -1 、2966cm -1 及び3062cm -1 におけるピーク(ここで、各バンド位置における許容誤差は±1cm -1 である)を含むFTラマンスペクトルを有する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の水和物結晶。
- 請求項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶と、1種以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
- 1種以上の他の治療活性剤をさらに含む、請求項8に記載の医薬組成物。
- 療法において使用するための、請求項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶。
- BET阻害剤が適応である疾患又は病態の治療において使用するための、請求項1〜7のいずれか1項に定義される水和物結晶。
- 疾患又は病態が自己免疫性疾患及び/又は炎症性疾患である、請求項11に記載の使用のための水和物結晶。
- 疾患又は病態が関節リウマチである、請求項11に記載の使用のための水和物結晶。
- 疾患又は病態が骨関節炎である、請求項11に記載の使用のための水和物結晶。
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