CN110006979A - 基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器 - Google Patents

基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种纳米CuO/Nafion膜修饰电极，它是以纳米CuO和Nafion乙醇溶液组成的悬浮液作为修饰液，滴涂于经α‑Al2O3粉末打磨抛光，稀硫酸溶液活化的金电极表面，挥干后制备而成的修饰电极。本发明的修饰电极，制作简单，基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器，能用于地黄药材中地黄苷D的检测，还能用于地黄伪品锁阳药材的快速鉴别，且在检测时重复性好、检测迅速。经试验证明：本发明的运用CuO/Nafion膜修饰电极检测地黄中地黄苷D的方法，加标回收率为97.71％～106.5％，方法准确、精确度高，实际可行，具有良好的应用前景。

Description

基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器
技术领域
本发明具体涉及基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器及其制备方法和应用。
背景技术
化学修饰电极是由导体或半导体制作的电极，用化学或物理的方法，按人们意图设计，对电极表面进行修饰，形成具有功能的薄膜，如加速电子转移反应，选择性膜透，优先富集作用，较高的选择性、灵敏度和稳定性。修饰方法的设计、操作步骤的合理性与否，以及优劣程度直接影响化学修饰电极的活性、稳定性和重现性，是化学修饰电极研究和应用的基础。
地黄Rehmannia glutinosa Libosch.为玄参科Scrophulariaceae地黄属Rehmannia多年生植物，是我国主要的中药材，常以根茎入药。地黄主要含有梓醇、地黄苷A、地黄苷D等。现代药理学研究表明，地黄具有调节内分泌系统、提高免疫力、降血糖、抗肿瘤以及抗炎等多种功效。地黄苷D是地黄主要的有效成分，具有降低血糖、抗肝毒、滋阴补血等作用，故其含量可以反映地黄药材的质量。目前，地黄苷D的测定方法主要是高效液相色谱法，而该法所需仪器较昂贵且比较耗时，因此，建立一种简单、灵敏、快速检测地黄苷D的分析方法具有更加重要的价值。
目前还未有将电化学方法应用于地黄苷D的分析检测。
地黄苷D的化学结构式如下所示：
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种纳米CuO/Nafion膜修饰电极，它是以纳米CuO和Nafion乙醇溶液组成的悬浮液作为修饰液，采用滴涂法修饰的金电极。
进一步地，所述悬浮液中，纳米CuO粉末与Nafion乙醇溶液的质量体积比为1mg：(0.5～1.5)mL，优选1mg：1mL；所述Nafion乙醇溶液中 Nafion的浓度为1～3％(g/mL)，优选2％(g/mL)。
进一步地，所述金电极是在修饰前进行如下前处理：经打磨抛光，再活化。
更进一步地，所述打磨抛光和活化是用α-Al2O3粉末打磨抛光至循环伏安图的氧化还原峰电位差达到60-80mV时，再用硫酸溶液活化至循环伏安图中峰电流不再增加。
本发明还提供了一种纳米CuO/Nafion膜修饰电极的制备方法，它的制备步骤如下：
a.电极修饰液的制备：取纳米CuO粉末，加Nafion乙醇溶液溶解，即得；
b.预处理金电极：取金电极，依次用1.0，0.3，0.05μm的α-Al2O3粉末打磨抛光，置于含K3Fe(CN)6的KCl溶液中，用循环伏安法扫描，氧化还原峰电位差60-80mV时，用硫酸溶液活化，直至用循环伏安法扫描峰电流不再增加，即可；
c.取步骤a修饰液滴涂于步骤b经预处理的金电极表面，室温下挥干，即得修饰电极。
进一步地，步骤a所述纳米CuO粉末与Nafion乙醇溶液的质量体积比为1mg：1mL；所述Nafion乙醇溶液中Nafion的浓度为2％；所述溶解为超声溶解，超声溶解时间为2h。
进一步地，步骤b所述打磨抛光是用抛光布打磨，每次打磨后用蒸馏水超声清洗；所述含K3Fe(CN)6的KCl溶液是溶液中K3Fe(CN)6浓度5mmol/L， KCl浓度0.5mol/L；所述用循环伏安法扫描测氧化还原峰电位差时的扫描电压范围为-1V～+0.8V；所述硫酸溶液浓度为0.5mol/L；所述用循环伏安法扫描测峰电流时的扫描电压范围为0V～+0.7V；和/或，步骤c所述电极修饰液的取用量为18μL。
更进一步地，所述纳米CuO的制备方法如下：
将Cu(CH3COO)2和冰乙酸依次溶于无水乙醇，混匀，78℃水浴加热，搅拌条件下加入NaOH粉末，反应1h，再4000rpm离心10min，取沉淀，依次用乙醇和水清洗后，60℃真空干燥24h，即得宽度8-12nm，长度40-60nm 的薄片状的纳米氧化铜。
更进一步地，所述无水乙醇的混合溶液中Cu(CH3COO)2浓度为20 mmol/L，冰乙酸浓度为40mmol/L，NaOH浓度80mmol/L。
本发明还提供了一种地黄苷D电化学传感器，它包括工作电极、参比电极、辅助电极，其中将前述纳米CuO/Nafion膜修饰电极作为工作电极，优选的，以Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极。
本发明最后提供了一种地黄苷D电化学传感器在检测地黄中地黄苷D的应用。
进一步地，所述应用是用电化学分析仪检测，具体包括如下操作步骤：
1)对照品溶液的制备:取地黄苷D对照品，加10％乙腈溶解，得储备液，冷藏保存，检测时用支持电解质稀释，即得；
2)供试品溶液制备：取待测样品粉末，过筛，加60％的甲醇浸泡，提取，过滤，滤液蒸干，残渣用10％乙腈溶解，定容，即得；
3)将对照品溶液和供试品溶分别加入支持电解质中，拌匀，将地黄苷D 电化学传感器接入三电极系统，用差分脉冲伏安法和/或循环伏安法扫描。
进一步地,步骤1)所述储备液的浓度为1.0mg/mL；所述冷藏温度为4℃；所述用支持电解质稀释至每1ml溶液含地黄苷D 0.05μg,0.5μg,1μg,2μg, 5μg,10μg和/或20μg；和/或，步骤2)所述过筛为过80目筛网；所述待测样品与60％的甲醇质量体积比为1g：100ml；所述浸泡时间为30min；所述提取为超声提取，超声提取功率为40kHz、500W，时间为40min；所述定容至5mL。
进一步地，步骤1)和步骤3)所述支持电解质是pH 6.0的5mmol/L 硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液；和/或，步骤3)所述差分脉冲伏安法的参数为：电势增量：0.004V，脉冲幅度：0.05V，脉冲宽度：0.05V，脉冲周期：0.2s，静置时间：2s；所述循环伏安法扫描电压范围为-0.8V～1.0V。
本发明纳米CuO/Nafion膜修饰电极，制作简单，基于纳米CuO/Nafion 膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器，能用于地黄药材中地黄苷D的检测，还能用于地黄伪品锁阳药材的快速鉴别，且在检测时重复性好、检测迅速。经试验证明：本发明的运用CuO/Nafion膜修饰电极检测地黄中地黄苷D的方法，加标回收率为97.71％～106.5％，方法准确、精确度高，实际可行，具有良好的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1CuO纳米颗粒的透射电镜(TEM)图
图2裸金电极与CuO/Nafion膜修饰金电极检测对照品CV图(a：修饰金电极，5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠+20μg/mL地黄苷D；b：裸金电极，5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠+20μg/mL地黄苷D)
图3CuO/Nafion膜修饰金电极检测对照品与空白CV图(a：5mmol/L 硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠+20μg/mL地黄苷D；b：5mmol/L硼砂-10mmol/L 磷酸二氢钠)
图4不同pH硼砂-磷酸二氢钠缓冲液测定地黄苷D的峰电流值比较
图5地黄苷D测定还原峰电流值随电极修饰液用量变化图
图6地黄药材与锁阳药材检测的CV图
具体实施方式
1实验材料
1.1实验仪器
CHI660C型电化学工作站 上海辰华仪器有限公司
舒美KQ116超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司
雷磁PHS-3C型精密酸度计 上海仪电科学仪器股份有限公司
XS105电子分析天平 Mettler Toledo
CJJ79-1磁力加热搅拌器 金坛市白塔新宝仪器厂
HH-4数显恒温水浴锅 常州国华电器有限公司
TGL-16G台式离心机 上海安亭科学仪器厂
DYF型摇摆式高速中药粉碎机 温岭市林大机械有限公司
三电极系统：氧化铜/Nafion膜修饰金电极为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极。
1.2实验药品与试剂
地黄苷D(批号：150412) 四川省维克奇生物科技有限公司
生地黄药材(批号：20141101) 河南省怀化市
荆三棱药材(批号：20160601) 安徽惠隆中药饮片有限公司
Nafion 5wt.％溶液 SIGMA公司
无水乙醇 上海子钦有限公司
乙腈、硼砂、磷酸二氢钠 国药集团化学试剂有限公司
纳米氧化铜(纳米CuO) 实验室自制：将1mmol Cu(CH3COO)2和 2mmol的冰乙酸依次溶解在50mL的无水乙醇中，混匀并水浴加热到78℃。磁力搅拌下，4mmol的NaOH粉末添加到该混合溶液中，反应1h。然后将制得的CuO纳米颗粒悬液在4000rpm的转速下离心10min，取沉淀，依次用乙醇和水清洗，最后于60℃条件下真空干燥24h，即得宽度8-12nm，长度40-60nm的薄片状的纳米氧化铜(图1)。
实验中所用水均为二次蒸馏水，经Milli-Q超纯水系统(美国Millipore 公司)处理。
实施例1本发明纳米CuO/Nafion膜修饰电极的制备
a、电极修饰液的制备：取1mg纳米氧化铜粉末溶解于含20μL Nafion 的1mL乙醇中，超声分散2h，得到稳定且分散良好的黑色悬浮液；
b、预处理金电极：金电极在修饰前，依次用1.0，0.3，0.05μm的α-Al2O3粉末在专业抛光布上抛光成镜面，每次打磨后于蒸馏水中用超声的方法清洗，将处理好的电极置于含5mmol/L K3Fe(CN)6的0.5mol/L KCl溶液中，接好三电极系统，在扫描电压-1V～+0.8V用循环伏安法(CV法)进行扫描，根据氧化还原峰电位差判断电极抛光程度，若符合氧化还原峰电位差60-80mV时则进行活化，活化用0.5mol/L的稀硫酸溶液，在扫描电压0V～+1.7V用CV法进行扫描，直到峰电流不再增加；
c、取18μL修饰液滴涂于预处理好的金电极表面，室温条件下使其溶剂自然挥干即得纳米CuO/Nafion膜修饰电极。
实施例2本发明基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的电化学传感器用于地黄药材中地黄苷D检测
1)对照品溶液的制备:精密称取地黄苷D对照品，用10％乙腈溶解制成浓度为1.0mg/mL的对照品储备液，4℃保存，检测时用支持电解质分别稀释到0.05,0.5,1,2,5,10,20μg/mL；
2)供试品溶液制备：取生地黄药材粉末(过80目筛)0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入60％的甲醇50mL，浸泡半小时，40kHz、500W 条件下超声40分钟，摇匀，滤过。将滤液蒸干，残渣用10％乙腈定容于5mL 容量瓶中，备用；
3)将对照品溶液和供试品溶分别加入以pH 6.0的5mmol/L硼砂 -10mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液为支持电解质中，搅拌均匀，将实施例1中修饰电极接入三电极系统，设置差分脉冲伏安法(DPV)参数：电势增量： 0.004V，脉冲幅度：0.05V，脉冲宽度：0.04V，脉冲周期：0.2s，静置时间： 2s，用DPV法扫描得DPV曲线，对地黄苷D在修饰电极上的电化学行为进行分析，并对其定量测定。
实施例3本发明基于纳米CuO/Nafion膜修饰电极的电化学传感器用于地黄药材与锁阳药材的鉴别
1)对照品溶液的制备:精密称取地黄苷D对照品，用10％乙腈溶解制成浓度为1.0mg/mL的对照品储备液，4℃保存，检测时用支持电解质稀释到 20μg/mL；
2)供试品溶液制备：分别取待测样品粉末(过80目筛)各0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入60％的甲醇50mL，浸泡半小时，40kHz、 500W条件下超声40分钟，摇匀，滤过。将滤液蒸干，残渣用10％乙腈定容于5mL容量瓶中，备用；
3)将对照品溶液和供试品溶分别加入以pH 6.0的5mmol/L硼砂 -10mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液为支持电解质中，搅拌均匀，将实施例1修饰电极接入三电极系统，用CV法扫描，CV扫描电压范围-0.8V～1.0V，在 CV图中地黄苷D出峰位置锁阳药材不出峰，由此实现地黄与其伪品锁阳药材的快速鉴别。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果：
试验例1电极的电化学特性
分别以裸金电极和CuO/Nafion膜修饰金电极作为工作电极，在不同缓冲体系下，并于-0.8V～+1.0V电位区间内进行循环伏安(CV)扫描。图2中a 和b分别是CuO/Nafion膜修饰金电极和裸金电极在含20μg/mL地黄苷D的 5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠(pH＝6.0)缓冲中的CV图，从图中可以看出，地黄苷D在裸金电极上几乎没有电化学响应(曲线b)，在CuO/Nafion 膜修饰金电极上出现一对明显的氧化还原峰(曲线a)，且峰电流值明显增加。图3中a和b分别是CuO/Nafion膜修饰金电极在含20μg/mL地黄苷D 的5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠(pH＝6.0)缓冲溶液和空白溶液中的CV图，从图中可以看出，空白溶液出现较小的氧化还原峰，其电化学活性来自于Cu2+的氧化还原活性，对照品溶液的峰电流明显大于空白峰，可以扣除空白峰后对地黄苷D进行测定。综上所述，说明CuO/Nafion膜修饰金电极对地黄苷D有很好的电催化作用。另外多次循环伏安实验发现修饰电极的还原峰峰电流值更加稳定，峰型更加理想，故而选择还原峰峰电流值进行地黄苷D的定量测定。
试验例2实验条件的优化
1支持电解质的选择：实验考察了地黄苷D在不同pH的B-R缓冲，磷酸盐缓冲，硼砂-硼酸缓冲，硼砂-磷酸二氢钠缓冲，Tris-Hcl缓冲，乙酸-乙酸铵缓冲等缓冲溶液中的DPV行为，实验结果表明在相同的测定条件下，硼砂-磷酸二氢钠缓冲作为支持电解质所得到的峰电流值大且峰型理想，所以最终选择了硼砂-磷酸二氢钠缓冲液为支持电解质。
2支持电解质浓度的选择：实验考察了地黄苷D在pH＝6.0的不同浓度的硼砂-磷酸二氢钠缓冲溶液中的DPV行为，测定结果如下表1所示。从表中可以看出，浓度为5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠时还原峰峰电流值最大，所以最后选定了5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠作为配制浓度
表1不同浓度磷酸盐缓冲对地黄苷D峰电流值的影响
3支持电解质pH的选择：实验考察了地黄苷D在5mmol/L硼砂-10 mmol/L磷酸二氢钠的不同pH溶液中的DPV行为，实验结果如图4所示。实验结果表明地黄苷D的还原峰电流值随pH值不同而有所变化，当pH为 6.0时，峰电流值最大，偏离6.0，峰电流值均减小，且pH为中性及碱性时，无电流值，因而选择pH＝6.0为最佳酸度。
4电极修饰液用量的优化：本文对CuO/Nafion电极修饰液的用量进行了优化选择，考察了不同用量对地黄苷D测定的影响。测定结果如下图5所示。由图可得，峰电流值开始随修饰液用量增多而增大，当修饰液用量为18 μL时峰电流值最大，而超过18μL时，修饰液增多峰电流值反而减小，故选择最优修饰用量为18μL。
5DPV参数的优化：DPV的仪器参数影响测试的灵敏度和分辨率，实验考察了不同DPV仪器参数对地黄苷D测定的影响。综合考虑峰值的大小，峰的形状和分析的速度，选定的最佳仪器参数见下表2。
表2地黄苷D测定最佳DPV参数表
试验例3方法学验证
1电极重现性：平行修饰6根金电极，测定同一样品溶液，测得RSD 为0.36％，说明修饰层在电极表面能形成一层比较稳定均一的薄膜，且电极重现性良好。
2工作曲线与检测限：在上述选定的最佳实验条件下进行地黄苷D工作曲线的测定，求得的线性回归方程为：Ip(μA)＝3.5952+0.2847c(μg/mL)，相关系数r为0.9991，检测限为0.041μg/mL，定量限为0.05μg/mL。结果表明：地黄苷D在浓度为0.05μg/mL～20μg/mL的范围内，峰电流值(扣除空白溶液后)与浓度之间呈良好的线性关系。
3仪器精密度：按实施例1的方法制备含20μg/mL的地黄苷D对照品溶液，在最优实验条件下重复测定6次，所测得的平均电流值为9.191μA (n＝6)，RSD为1.01％，表明仪器精密度良好。
4方法重复性：取生地黄药材(批号：20141101)，按实施例1的方法平行制备供试品溶液6份进行分析，求得平均电流值为6.406μA(n＝6)， RSD为0.81％，表明方法重复性良好。
5加样回收率：为了能够更好的研究CuO/Nafion膜修饰金电极对地黄苷D实际样品的分析，我们对处理好的生地黄样品进行了加样回收率的测定，测得平均加样回收率为101.9％，RSD为3.10％(n＝6)，测试结果如下表3 所示。
表3加样回收率测定结果表
4实际样品含量测定
为了检验CuO/Nafion膜修饰金电极是否可以用于生地黄药材中地黄苷 D的含量测定，在最佳条件下，实验测定了平行6份样品中地黄苷D的含量，求出地黄苷D平均值为9.865mg/g，相对标准偏差RSD为1.79％，测试结果如下表4所示。
表4生地药材中地黄苷D类的含量测定
5干扰实验
实验考察了生地黄药材中其它环烯醚萜苷类对于地黄苷D测定的影响，检测发现，地黄苷A、桃叶珊瑚苷、益母草苷、梓醇等对于地黄苷D的测定均无干扰，说明实验自制的地黄苷D电化学传感器具有很好的选择性。
6地黄与其伪品锁阳的快速鉴别
地黄是临床上常用的中药，具有滋阴养血、清热凉血、生津等多种功效，近年来发现地黄药材在实际应用过程中有一些不法分子会以锁阳饮片染成黑色掺入地黄出售，有见采用显微鉴别、形状鉴别等生药鉴别的方法来鉴别两种药材，此方法操作复杂，耗时比较久，采用本发明电化学方法鉴别锁阳伪品，操作简便，检测迅速，检测结果如下图6所示。地黄苷D是地黄的主要活性成分，由图可得，在地黄苷D出峰位置锁阳药材不出峰，由此可以实现地黄与其伪品锁阳药材的快速鉴别。
上述实验表明：纳米CuO对地黄苷D有电催化作用。将电化学传感器用于生地药材中地黄苷D的含量测定，加标回收率为97.71％～106.5％，说明本方法准确、可行。该电化学传感器制作简单、重复性好、检测迅速，可以应用于生地药材中地黄苷D的含量测定。应用电化学方法，根据电化学谱图也可以实现地黄伪品锁阳药材的快速鉴别，操作简便。
综上，本发明纳米CuO/Nafion膜修饰修饰电极，制作简单，基于纳米 CuO/Nafion膜修饰电极的地黄苷D电化学传感器，能用于地黄药材中地黄苷 D的检测，还能用于地黄伪品锁阳药材的快速鉴别，且在检测时重复性好、检测迅速。经试验证明：本发明的运用CuO/Nafion膜修饰电极检测地黄中地黄苷D的方法，加标回收率为97.71％～106.5％，方法准确、精确度高，实际可行，具有良好的应用前景。

Claims (14)

1.一种纳米CuO/Nafion膜修饰电极，其特征在于：它是以纳米CuO和Nafion乙醇溶液组成的悬浮液作为修饰液，采用滴涂法修饰的金电极。
2.根据权利要求1所述的修饰电极，其特征在于：所述悬浮液中，纳米CuO粉末与Nafion乙醇溶液的质量体积比为1mg：(0.5～1.5)mL，优选1mg：1mL；所述Nafion乙醇溶液中Nafion的浓度为1～3％(g/mL)，优选2％(g/mL)。
3.根据权利要求1所述修饰电极，其特征在于：所述金电极是在修饰前进行如下前处理：经打磨抛光，再用硫酸溶液活化。
4.根据权利要求3所述的修饰电极，其特征在于：所述前处理是用α-Al2O3粉末打磨抛光至循环伏安图的氧化还原峰电位差达到60-80mV时；再用硫酸溶液活化至循环伏安图中峰电流不再增加。
5.权利要求1所述修饰电极的制备方法，其特征在于，它的制备步骤如下：
a.电极修饰液的制备：取纳米CuO粉末，加Nafion乙醇溶液溶解，即得；
b.预处理金电极：取金电极，依次用1.0，0.3，0.05μm的α-Al2O3粉末打磨抛光，置于含K3Fe(CN)6的KCl溶液中，用循环伏安法扫描，氧化还原峰电位差60-80mV时，用硫酸溶液活化，直至用循环伏安法扫描峰电流不再增加，即可；
c.取步骤a修饰液滴涂于步骤b经预处理的金电极表面，室温下挥干，即得修饰电极。
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于：步骤a所述纳米CuO粉末与Nafion乙醇溶液的质量体积比为1mg：1mL；所述Nafion乙醇溶液中Nafion的浓度为2％；所述溶解为超声溶解，超声溶解时间为2h。
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于：步骤b所述打磨抛光是用抛光布打磨，每次打磨后用蒸馏水超声清洗；所述含K3Fe(CN)6的KCl溶液是溶液中K3Fe(CN)6浓度5mmol/L，KCl浓度0.5mol/L；所述用循环伏安法扫描测氧化还原峰电位差时的扫描电压范围为-1V～+0.8V；所述硫酸溶液浓度为0.5mol/L；所述用循环伏安法扫描测峰电流时的扫描电压范围为0V～+0.7V；和/或，步骤c所述电极修饰液的取用量为18μL。
8.根据权利要求5～7任意一项所述制备方法，其特征在于，所述纳米CuO的制备方法如下：
将Cu(CH3COO)2和冰乙酸依次溶于无水乙醇，混匀，78℃水浴加热，搅拌条件下加入NaOH粉末，反应1h，再4000rpm离心10min，取沉淀，依次用乙醇和水清洗后，60℃真空干燥24h，即得宽度8-12nm，长度40-60nm的薄片状的纳米氧化铜。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述无水乙醇的混合溶液中Cu(CH3COO)2浓度为20mmol/L，冰乙酸浓度为40mmol/L，NaOH浓度80mmol/L。
10.一种地黄苷D电化学传感器，其特征在于，它包括工作电极、参比电极、辅助电极，其中将权利要求1所述纳米CuO/Nafion膜修饰电极作为工作电极，优选的，以Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极。
11.权利要求10所述电化学传感器在检测地黄中地黄苷D的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，它是采用电化学分析仪检测，具体包括如下操作步骤：
1)对照品溶液的制备:取地黄苷D对照品，加10％乙腈溶解，得储备液，冷藏保存，检测时用支持电解质稀释，即得；
2)供试品溶液制备：取待测样品粉末，过筛，加60％的甲醇浸泡，提取，过滤，滤液蒸干，残渣用10％乙腈溶解，定容，即得；
3)将对照品溶液和供试品溶分别加入支持电解质中，拌匀，将权利要求10所述电化学传感器接入三电极系统，用差分脉冲伏安法和/或循环伏安法扫描。
13.根据权利要求12所述应用，其特征在于：步骤1)所述储备液的浓度为1.0mg/mL；所述冷藏温度为4℃；所述用支持电解质稀释至每1ml溶液含地黄苷D 0.05μg,0.5μg,1μg,2μg,5μg,10μg和/或20μg；和/或，步骤2)所述过筛为过80目筛网；所述待测样品与60％的甲醇质量体积比为1g：100ml；所述浸泡时间为30min；所述提取为超声提取，超声提取功率为40kHz、500W，时间为40min；所述定容至5mL。
14.根据权利要求12所述应用，其特征在于：步骤1)和步骤3)所述支持电解质是pH 6.0的5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液；和/或，步骤3)所述差分脉冲伏安法的参数为：电势增量：0.004V，脉冲幅度：0.05V，脉冲宽度：0.05V，脉冲周期：0.2s，静置时间：2s；所述循环伏安法扫描电压范围为-0.8V～1.0V。
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