CN110003143A - 一种提取天然紫杉醇的方法 - Google Patents
一种提取天然紫杉醇的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110003143A CN110003143A CN201910298108.6A CN201910298108A CN110003143A CN 110003143 A CN110003143 A CN 110003143A CN 201910298108 A CN201910298108 A CN 201910298108A CN 110003143 A CN110003143 A CN 110003143A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- taxol
- methylene chloride
- acetone
- hexane
- product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 24
- 235000016408 Podocarpus macrophyllus Nutrition 0.000 title claims abstract description 22
- 244000162450 Taxus cuspidata Species 0.000 title claims abstract description 22
- 235000009065 Taxus cuspidata Nutrition 0.000 title claims abstract description 22
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims abstract description 109
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims abstract description 109
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims abstract description 109
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241001116500 Taxus Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 78
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 25
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 25
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 15
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 14
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 14
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 11
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 9
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- KDCIHNCMPUBDKT-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCCCCC KDCIHNCMPUBDKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 5
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 5
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims description 4
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 claims description 2
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- ULSIYEODSMZIPX-UHFFFAOYSA-N phenylethanolamine Chemical compound NCC(O)C1=CC=CC=C1 ULSIYEODSMZIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 abstract 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 241001149649 Taxus wallichiana var. chinensis Species 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 125000003963 dichloro group Chemical group Cl* 0.000 description 3
- -1 filter Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- DBXFAPJCZABTDR-KUEXGRMWSA-N Cephalomannine Natural products O=C(O[C@@H]1C(C)=C2[C@@H](OC(=O)C)C(=O)[C@]3(C)[C@@H](O)C[C@@H]4[C@](OC(=O)C)([C@H]3[C@H](OC(=O)c3ccccc3)[C@@](O)(C2(C)C)C1)CO4)[C@@H](O)[C@H](NC(=O)/C(=C\C)/C)c1ccccc1 DBXFAPJCZABTDR-KUEXGRMWSA-N 0.000 description 2
- 244000050510 Cunninghamia lanceolata Species 0.000 description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- DBXFAPJCZABTDR-WBYYIXQISA-N cephalomannine Chemical compound O([C@@H]1[C@]2(O)C[C@@H](C(=C([C@@H](OC(C)=O)C(=O)[C@]3(C)[C@@H](O)C[C@H]4OC[C@]4([C@H]31)OC(C)=O)C2(C)C)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C(/C)=C/C)C=1C=CC=CC=1)C(=O)C1=CC=CC=C1 DBXFAPJCZABTDR-WBYYIXQISA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 201000003911 head and neck carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000011061 large intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D305/14—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种提取天然紫杉醇的方法，该方法以红豆杉枝叶为原料，用工业级甲醇进行浸提，浓缩浸提液得到流浸膏，加入同等量的丙酮冷冻沉淀，沉淀后的上清液经浓缩抽干后用二氯甲烷溶解过滤，浓缩抽干滤液得到紫杉醇初品，其含量≥1%；紫杉醇初品经过连续反相柱层析得紫杉醇粗品，其含量大于20%，20%的粗品经过二次柱层析和一次重结晶，得到含量大于99.6%的紫杉醇成品；本发明方法简单易操作、生产过程中提取充分、收率较高，成本低，适于工业化应用和市场推广。
Description
技术领域
本发明涉及植物枝叶中天然有机化合物的提取方法，具体为一种从红豆杉枝叶中提取天然紫杉醇的方法。
背景技术
紫杉醇是从红豆杉中提取出的一种天然有机化合物，对治疗卵巢癌、肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤等效果显著。早在1992年美国食品药品管理局（FDA）就批准上市。长期以来，紫杉醇是从红豆杉的树皮中提取的，由于红豆杉的树皮属不可再生资源，导致紫杉醇的获取原料十分有限，因而制备成本高，价格昂贵。加之，红豆杉是世界公认的濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物，在自然条件下生长速度缓慢，再生能力差，仅以红豆杉树皮作为紫杉醇提取原料，将会严重破坏红豆杉植物资源。
据全球知名期刊A Cancer Journal for Clinicians最新发布的全球癌症统计数据显示，预计2018年全球将新增1710万癌症病例，另有970万癌症患者死亡。新增1810万癌症病例中，亚洲占据近一半，960万癌症死亡患者中，亚洲占近七成。另外，1810万新增癌症病例中有950万为男性，死亡率达60%；女性共有860万新增癌症患者，死亡率过半；其中，中国癌症发病率位居全球74位，发病人数全球第一。
目前，全球癌症防控工作已取得很大进展，癌症治疗已大为改观，抗癌药物不断涌现。而紫杉醇作为目前已发现的最有效的天然抗肿瘤药物，通常从红豆杉树皮中提取，严重破坏了红豆杉植物资源；部分从红豆杉枝叶中提取紫衫醇的工艺尚不完善，存在着收率低、生产周期长等缺点。本发明在于提供一种制备紫杉醇的方法，选用红豆杉枝叶作为提取紫衫醇的原料，以降低成本，保护植物资源。
紫杉醇提取现有技术或传统方法中存在如下问题：
（1）目前，紫杉醇提取大多以红豆杉树皮为原料，严重破坏了红豆杉植物资源；由于红豆杉的树皮属不可再生资源，导致紫杉醇的获取原料十分有限， 因而制备成本高，价格昂贵；
（2）部分文献专利报道的从红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法，存在收率低、生产周期长的问题；
（3）现有技术通常用甲醇水或乙醇水提取，提取过程中大量水溶性物质被提取出来，同时在后期浓缩过程中由于水的参与，浓缩提取液耗能耗时，紫杉烷类在浓缩过程中被在破坏降解，影响质量，且成本增加；
（4）传统的工艺从成分之三左右的含量富集到百分之十含量，需要通过至少3次柱层析，加工成本较高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种从红豆杉枝叶中提取天然紫杉醇的方法，该方法简单易行、生产周期短、提取条件要求简单、收率高；该方法用甲醇对红豆杉枝叶进行浸泡，过滤抽干；然后用反相树脂柱连续进行柱层析，将主段液浓缩抽干得紫杉醇粗提物；紫杉醇粗提物经过二次柱层析和两次重结晶，得到含量大于99.6%的紫杉醇成品、最大单一杂质小于0.1%，总杂质小于0.5%。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
1、以干燥、粉碎的红豆杉枝叶为原料，按质量体积比g:mL为1:3～5的比例在原料中加入工业级甲醇，在室温下浸泡6～8h，过滤，滤渣继续加甲醇反复浸泡2～3次后，合并滤液；将合并后的滤液在65～75℃下浓缩抽干至流浸膏状，然后加入膏体等体积的丙酮搅拌混匀，-5℃～0℃下冷冻沉淀24～48小时，沉淀后的上清液在60～65℃下浓缩抽干后，用二氯甲烷溶解，过滤，滤液在35～45℃下浓缩抽干，得到紫杉醇初品；其含量≥1%；
所述二氯甲烷溶解温度为35～45℃；
2、将紫杉醇初品用甲醇溶解，然后加入甲醇体积15～25%的水，混匀，用反相树脂柱层析，收集含紫杉醇的洗出液，洗出液再加入到反相树脂柱中进行柱层析，收集含有紫杉醇的流出液，然后在60～70℃下减压浓缩抽干，40～50℃下干燥2～4小时后得到紫杉醇粗品，紫杉醇含量大于20%；
所述每1g紫杉醇初品添加1～2mL甲醇溶解；第一次柱层析的反相树脂型号为KLIEC-Aw，料胶质量比为1:2～4；第二次柱层析的反相树脂型号为PRP；
3、将紫杉醇粗品用二氯甲烷溶解后，按紫杉醇粗品:硅胶的质量比为1:1.3～1.5的比例拌料胶，经干燥后上样至硅胶柱中层析（料胶质量比为1:6～8），用正己烷-丙酮混合液洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，合并洗出液浓缩抽干，得紫杉醇含量大于40%的浓缩物；
所述正己烷-丙酮混合液是正己烷和丙酮按体积比2.5～3:1及1.6～1.8:1的比例混合制得, 洗脱过程中，先用2.5～3:1配比的混合液洗脱至用TLC板监测出紫杉醇时，改用1.6～1.8:1配比的混合液洗脱至用TLC板监测紫杉醇消失，收集合并含有紫杉醇的流出液。
4、将浓缩物用丙酮溶解，在搅拌状态下加入正己烷，直至有晶体析出为止，静置8～12h，过滤，滤渣干燥得紫杉醇半成品；溶解温度为50～60℃；
5、紫杉醇半成品用二氯甲烷溶解后，加入硅胶柱中层析分离，用二氯甲烷-异戊醇混合液洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，减压浓缩抽干；
所述中使用的柱层析硅胶为薄层层析硅胶，二氯甲烷-异戊醇混合液中二氯甲烷与重蒸异戊醇的体积比为28～30:1；
6、步骤（5）浓缩物用丙酮溶解，溶液真空过滤，在滤液中加入正己烷，边加边搅拌至晶体出现为止，室温静置12～24h，真空抽滤，在50～60℃下真空干燥10～12h，得紫杉醇成品，紫杉醇含量≥99.6%；
所述丙酮为工业级二次重蒸丙酮，正己烷为工业级二次重蒸正己烷。
本发明相对于现有技术的优点和技术效果：
1、本发明选择甲醇作为提取溶剂，提取溶剂用量小，提取充分，能最大限度将紫杉烷类提取出来，收率高，提取液物理方法处理后迅速富集含量，除杂质效果明显；非常适合于工业化生产；
2、本发明用连续柱层析的方法对甲醇初提物进行一次处理后，所得主要物质含量提高20倍以上，同时除去大量的色素及杂质，为后续工艺减少工艺负荷，生产周期短、节省成本，非常适合于工业化生产；
3、本发明用丙酮及正己烷系统进行一次柱层析后能将20%以上的含量富集至少70%以上，并除去大量的三尖杉宁碱等顽固杂质；为后续工艺减少工艺负荷，生产周期短、节省成本，非常适合于工业化生产；
4、本发明采用二氯甲烷与异戊醇（重蒸），能最大限度的除去三尖杉宁碱，将此杂质控制在0.5%以内，有效提高了紫杉醇产品质量，同时，由于二氯甲烷与异戊醇的沸点差异较大，在浓缩时能有垂直分离二者，可以重复使用回收溶剂，且不会产生大量溶剂积压；此法的应用大大改善了环保压力及生产成本的控制；非常适合于工业化生产；
5、紫杉醇在硅胶等正相填料中会发生差向化或降解，本法采用二氯甲烷与重蒸（分析纯）异戊醇，可以有效防止差向化及降解的发生，最在限度的保证了产品质量及收率，适于工业化应用和市场推广。
具体实施方式
实施例1：本提取天然紫杉醇的方法如下：
（1）以500kg干燥、粉碎的红豆杉枝叶为原料，按质量体积比g:mL为1:3的比例在原料中加入甲醇，在室温下浸泡6h，过滤，滤渣继续加甲醇反复浸泡2次后，合并滤液；将合并后的滤液在75℃下浓缩抽干至流浸膏状，然后加入膏体等体积的丙酮搅拌混匀，0℃下冷冻沉淀45小时，沉淀后的上清液在60℃下浓缩抽干后，用二氯甲烷在35℃下溶解，过滤，滤液在45℃下浓缩抽干，得到紫杉醇初品，含量2%；
（2）按每1g紫杉醇初品添加1mL甲醇的比例将紫杉醇初品用甲醇溶解，然后加入甲醇体积15%的水，混匀，用反相树脂KLIEC-Aw柱层析（料胶质量比为1:2），收集含紫杉醇的洗出液，洗出液加入到反相树脂PRP柱中进行柱层析，收集含有紫杉醇的流出液，然后在60℃下减压浓缩抽干，50℃下干燥2小时后得到紫杉醇粗品，紫杉醇含量25%；
（3）将紫杉醇粗品用二氯甲烷溶解后，按紫杉醇粗品:硅胶的质量比为1:1.3的拌料胶，经干燥后上样至硅胶柱中层析（工业级硅胶，料胶质量比为1:6），用体积比2.5:1的正己烷-丙酮混合液洗脱至用TLC板监测出紫杉醇时，改用体积比1.6:1的正己烷-丙酮混合液洗脱至用TLC板监测紫杉醇消失，收集合并含有紫杉醇的流出液，合并洗出液浓缩抽干，得紫杉醇含量53%的浓缩物；
（4）将浓缩物用丙酮在50℃下溶解，在搅拌状态下加入正己烷，直至有晶体析出为止，静置8h，过滤，滤渣干燥得紫杉醇半成品；
（5）紫杉醇半成品用二氯甲烷溶解后，加入硅胶（薄层层析硅胶）柱中层析分离，用二氯甲烷-异戊醇混合液（二氯甲烷与重蒸异戊醇的体积比为28:1）洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，减压浓缩抽干；
（6）步骤（5）浓缩物用工业级二次重蒸丙酮溶解，溶液真空过滤，在滤液中加入工业级二次重蒸正己烷，边加边搅拌至晶体出现为止，室温静置12h，真空抽滤，在60℃下真空干燥12h，得紫杉醇成品；99.62%，收率82.3%。
实施例2：本提取天然紫杉醇的方法如下：
（1）以800kg干燥、粉碎的红豆杉枝叶为原料，按质量体积比g:mL为1:4的比例在原料中加入工业级甲醇，在室温下浸泡7h，过滤，滤渣继续加甲醇反复浸泡3次后，合并滤液；将合并后的滤液在70℃下浓缩抽干至流浸膏状，然后加入膏体等体积的丙酮搅拌混匀，-2℃下冷冻沉淀35小时，沉淀后的上清液在65℃下浓缩抽干后，用二氯甲烷在40℃下溶解，过滤，滤液在35℃下浓缩抽干，得到紫杉醇初品，含量1.8%；
（2）按每1g紫杉醇初品添加1.5mL甲醇的比例将紫杉醇初品用甲醇溶解，然后加入甲醇体积20%的水，混匀，用反相树脂KLIEC-Aw柱层析（料胶质量比为1:3），收集含紫杉醇的洗出液，洗出液加入到反相树脂PRP柱中进行柱层析，收集含有紫杉醇的流出液，然后在70℃下减压浓缩抽干，40℃下干燥4小时后得到紫杉醇粗品，紫杉醇含量26.1%；
（3）将紫杉醇粗品用二氯甲烷溶解后，按紫杉醇粗品:硅胶的质量比为1:1.4的比例拌料胶，经干燥后上样至硅胶柱中层析（料胶质量比为1:8），用体积比3:1的正己烷-丙酮混合液洗脱至用TLC板监测出紫杉醇时，改用体积比1.7:1的正己烷-丙酮混合液洗脱至用TLC板监测紫杉醇消失，收集合并含有紫杉醇的流出液，合并洗出液浓缩抽干，得紫杉醇含量54.1%的浓缩物；
（4）将浓缩物用丙酮在60℃下溶解，在搅拌状态下加入正己烷，直至有晶体析出为止，静置10h，过滤，滤渣干燥得紫杉醇半成品；
（5）紫杉醇半成品用二氯甲烷溶解后，加入硅胶（薄层层析硅胶）柱中层析分离，用二氯甲烷-异戊醇混合液（二氯甲烷与重蒸异戊醇的体积比为29:1）洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，减压浓缩抽干；
（6）步骤（5）浓缩物用工业级二次重蒸丙酮溶解，溶液真空过滤，在滤液中加入工业级二次重蒸正己烷，边加边搅拌至晶体出现为止，室温静置15h，真空抽滤，在50℃下真空干燥12h，得紫杉醇成品；99.64%，收率82.9%。
实施例3：本提取天然紫杉醇的方法如下：
（1）以500kg干燥、粉碎的红豆杉枝叶为原料，按质量体积比g:mL为1:5的比例在原料中加入甲醇，在室温下浸泡8h，过滤，滤渣继续加甲醇反复浸泡2次后，合并滤液；将合并后的滤液在65℃下浓缩抽干至流浸膏状，然后加入膏体等体积的丙酮搅拌混匀，-5℃下冷冻沉淀25小时，沉淀后的上清液在62℃下浓缩抽干后，用二氯甲烷在45℃下溶解，过滤，滤液在40℃下浓缩抽干，得到紫杉醇初品，含量2.1%；
（2）按每1g紫杉醇初品添加2mL甲醇的比例将紫杉醇初品用甲醇溶解，然后加入甲醇体积25%的水，混匀，用反相树脂KLIEC-Aw柱层析（料胶质量比为1:4），收集含紫杉醇的洗出液，洗出液加入到反相树脂PRP柱中进行柱层析，收集含有紫杉醇的流出液，然后在65℃下减压浓缩抽干，45℃下干燥3小时后得到紫杉醇粗品，紫杉醇含量26%；
（3）将紫杉醇粗品用二氯甲烷溶解后，按紫杉醇粗品:硅胶的质量比为1:1.5的拌料胶，经干燥后上样至硅胶柱中层析（料胶质量比为1:7），用体积比2.8:1的正己烷-丙酮混合液洗脱至用TLC板监测出紫杉醇时，改用正体积比1.8:1的己烷-丙酮混合液洗脱至用TLC板监测紫杉醇消失，收集合并含有紫杉醇的流出液，合并洗出液浓缩抽干，得紫杉醇含量43%的浓缩物；
（4）将浓缩物用丙酮在55℃下溶解，在搅拌状态下加入正己烷，直至有晶体析出为止，静置12h，过滤，滤渣干燥得紫杉醇半成品；
（5）紫杉醇半成品用二氯甲烷溶解后，加入硅胶（薄层层析硅胶）柱中层析分离，用二氯甲烷-异戊醇混合液（二氯甲烷与重蒸异戊醇的体积比为30:1）洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，减压浓缩抽干；
（6）步骤（5）浓缩物用工业级二次重蒸丙酮溶解，溶液真空过滤，在滤液中加入工业级二次重蒸正己烷，边加边搅拌至晶体出现为止，室温静置12h，真空抽滤，在55℃下真空干燥10h，得紫杉醇成品；99.66%，收率83.2%。
Claims (9)
1.一种提取天然紫杉醇的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）以干燥、粉碎的红豆杉枝叶为原料，按质量体积比g:mL为1:3～5的比例在原料中加入甲醇，在室温下浸泡6～8h，过滤，滤渣继续加甲醇反复浸泡2～3次后，合并滤液；将合并后的滤液在65～75℃下浓缩抽干至流浸膏状，然后加入膏体等体积的丙酮搅拌混匀，-5℃～0℃下冷冻沉淀24～48小时，沉淀后的上清液在60～65℃下浓缩抽干后，用二氯甲烷溶解，过滤，滤液在35～45℃下浓缩抽干，得到紫杉醇初品；
（2）将紫杉醇初品用甲醇溶解，然后加入甲醇体积15～25%的水，混匀，用反相树脂柱层析，收集含紫杉醇的洗出液，洗出液再加入到反相树脂柱中进行柱层析，收集含有紫杉醇的流出液，然后在60～70℃下减压浓缩抽干，40～50℃下干燥2～4小时后得到紫杉醇粗品；
（3）将紫杉醇粗品用二氯甲烷溶解后，按紫杉醇粗品:硅胶的质量比为1:1.3～1.5的比例拌料胶，经干燥后上样至硅胶柱中层析，用正己烷-丙酮混合液洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，合并洗出液浓缩抽干，得紫杉醇含量大于40%的浓缩物；
（4）将浓缩物用丙酮溶解，在搅拌状态下加入正己烷，直至有晶体析出为止，静置8～12h，过滤，滤渣干燥得紫杉醇半成品；
（5）紫杉醇半成品用二氯甲烷溶解后，加入硅胶柱中层析分离，用二氯甲烷-异戊醇混合液洗脱，用TLC监测洗出液中的紫杉醇，收集含有紫杉醇的洗出液，减压浓缩抽干；
（6）步骤（5）浓缩物用丙酮溶解，溶液真空过滤，在滤液中加入正己烷，边加边搅拌至晶体出现为止，室温静置12～24h，真空抽滤，在50～60℃下真空干燥10～12h，得紫杉醇成品。
2.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：步骤（1）二氯甲烷溶解温度为35～45℃。
3.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：步骤（2）中每1g紫杉醇初品添加1～2mL甲醇溶解。
4.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：第一次柱层析的反相树脂型号为KLIEC-Aw，料胶质量比为1:2～4，第二次柱层析的反相树脂型号为PRP。
5.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：正己烷-丙酮混合液是正己烷和丙酮按体积比2.5～3:1及1.6～1.8:1的比例混合制得, 洗脱过程中，先用2.5～3:1配比的混合液洗脱至用TLC板监测出紫杉醇时，改用1.6～1.8:1配比的混合液洗脱至用TLC板监测紫杉醇消失，收集合并含有紫杉醇的流出液。
6.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：步骤（3）紫杉醇粗品和硅胶的质量比为1:6～8。
7.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：步骤（4）中的溶解温度为50～60℃。
8.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：步骤（5）中使用的柱层析硅胶为薄层层析硅胶，二氯甲烷-异戊醇混合液中二氯甲烷与重蒸异戊醇的体积比为28～30:1。
9.根据权利要求1所述的提取天然紫杉醇的方法，其特征在于：步骤（6）丙酮为工业级二次重蒸丙酮，正己烷为工业级二次重蒸正己烷。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910298108.6A CN110003143A (zh) | 2019-04-15 | 2019-04-15 | 一种提取天然紫杉醇的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910298108.6A CN110003143A (zh) | 2019-04-15 | 2019-04-15 | 一种提取天然紫杉醇的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110003143A true CN110003143A (zh) | 2019-07-12 |
Family
ID=67171740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910298108.6A Pending CN110003143A (zh) | 2019-04-15 | 2019-04-15 | 一种提取天然紫杉醇的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110003143A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111675679A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-09-18 | 云南汉德生物技术有限公司 | 一种高效分离纯化10-脱乙酰基紫杉醇的方法 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1687044A (zh) * | 2005-04-05 | 2005-10-26 | 杨雪峰 | 一种紫杉醇纯品的生产方法 |
| CN101560197A (zh) * | 2009-06-01 | 2009-10-21 | 西北农林科技大学 | 从人工栽培的红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法 |
| CN102838568A (zh) * | 2012-07-26 | 2012-12-26 | 吉林派高生物制药有限公司 | 一种从红豆杉中提取紫杉醇的方法 |
| CN103172598A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-26 | 四川祥光农业科技开发有限公司 | 从红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法 |
| CN103450120A (zh) * | 2013-10-08 | 2013-12-18 | 白心亮 | 一种从红豆杉中提取紫杉醇的制备方法 |
| CN104211667A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-12-17 | 大生祥(武汉）中医投资管理有限公司 | 应用于紫杉醇制剂的植物提取物及其制备方法 |
| CN104230858A (zh) * | 2014-08-08 | 2014-12-24 | 中山大学 | 一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法 |
| CN104529951A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-22 | 宁波绿之健药业有限公司 | 一种天然紫杉醇的制备方法 |
| CN106916121A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 福安药业集团宁波天衡制药有限公司 | 一种紫杉醇的天然制备方法 |
| CN109384749A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-02-26 | 重庆市碚圣医药科技股份有限公司 | 一种紫杉醇的纯化方法 |
-
2019
- 2019-04-15 CN CN201910298108.6A patent/CN110003143A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1687044A (zh) * | 2005-04-05 | 2005-10-26 | 杨雪峰 | 一种紫杉醇纯品的生产方法 |
| CN101560197A (zh) * | 2009-06-01 | 2009-10-21 | 西北农林科技大学 | 从人工栽培的红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法 |
| CN102838568A (zh) * | 2012-07-26 | 2012-12-26 | 吉林派高生物制药有限公司 | 一种从红豆杉中提取紫杉醇的方法 |
| CN103172598A (zh) * | 2013-03-26 | 2013-06-26 | 四川祥光农业科技开发有限公司 | 从红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法 |
| CN103450120A (zh) * | 2013-10-08 | 2013-12-18 | 白心亮 | 一种从红豆杉中提取紫杉醇的制备方法 |
| CN104211667A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-12-17 | 大生祥(武汉）中医投资管理有限公司 | 应用于紫杉醇制剂的植物提取物及其制备方法 |
| CN104230858A (zh) * | 2014-08-08 | 2014-12-24 | 中山大学 | 一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法 |
| CN104529951A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-22 | 宁波绿之健药业有限公司 | 一种天然紫杉醇的制备方法 |
| CN106916121A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 福安药业集团宁波天衡制药有限公司 | 一种紫杉醇的天然制备方法 |
| CN109384749A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-02-26 | 重庆市碚圣医药科技股份有限公司 | 一种紫杉醇的纯化方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| MATTINA等: "Extraction,purification by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatographic analysis of taxanes from ornamental Taxus needles", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
| 常杰华等: "紫杉醇提取及分离纯化技术研究进展", 《安徽农业科学》 * |
| 彭天浩等: "红豆杉中提取紫杉醇研究进展", 《农产品加工（学刊）》 * |
| 许素文等: "红豆杉中紫杉醇的提取和纯化工艺研究", 《广州化工》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111675679A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-09-18 | 云南汉德生物技术有限公司 | 一种高效分离纯化10-脱乙酰基紫杉醇的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109942380B (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备大麻二酚的方法 | |
| CN101723996B (zh) | 一种从黑米中分离制备高纯度花色苷单体的方法 | |
| CN103172598B (zh) | 从红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法 | |
| CN106588616B (zh) | 一种姜黄素的制备方法 | |
| CN101270142B (zh) | 油茶皂素的制备方法 | |
| CN102276679A (zh) | 一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法 | |
| CN102961412A (zh) | 一种强化植物天然活性成分提取的球磨耦合浸提集成工艺 | |
| CN103467438B (zh) | 五味子中木脂素单体的提取分离制备方法 | |
| CN102106928A (zh) | 一种高纯度油茶皂苷的制备方法 | |
| CN101759543B (zh) | 从新鲜明日叶中提取查尔酮的方法 | |
| CN101982471B (zh) | 一种从杜仲果中提取桃叶珊瑚苷的工艺方法 | |
| CN114014830A (zh) | 一种生产制备蓝莓花青素的方法 | |
| CN104230858B (zh) | 一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法 | |
| CN110003143A (zh) | 一种提取天然紫杉醇的方法 | |
| CN111848362A (zh) | 一种超声提取结合动态轴向压缩柱系统制备高纯度大麻二酚的方法 | |
| CN101735021B (zh) | 以hp-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法 | |
| CN103694213B (zh) | 一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法 | |
| CN104189073B (zh) | 丹参总酚酸的制备方法 | |
| CN114671755B (zh) | 一种高含量玛咖烯的制备方法 | |
| CN102432419B (zh) | 从紫茎泽兰中提取分离β-榄香烯的方法 | |
| CN102977165A (zh) | 罗汉果黄素的优化提纯制备方法 | |
| CN102432420B (zh) | 从马缨丹中提取分离β-榄香烯的方法 | |
| CN102293804B (zh) | 一种水飞蓟综合利用的优化方案 | |
| CN104211667A (zh) | 应用于紫杉醇制剂的植物提取物及其制备方法 | |
| CN102086187B (zh) | 一种提取分离云南松树皮中低聚原花青素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190712 |