CN109984276A - 一种调理肠道应激反应的无抗饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于调理产蛋禽类等动物肠道应激状态的复合颗粒制剂，包括单宁脂质体复合物的薄膜包衣肠溶颗粒，以及包膜处理的甜菜碱‑正丁酸钠盐颗粒；其中，所述含单宁脂质体复合物的肠溶颗粒由单宁‑磷脂/甜菜碱复合物、三丁酸甘油酯、纳米氧化锌及辅料组成。本发明制剂针对肠道特点可以分段释放有效组分，有效缓解肠道应激状态并修复至平衡状态。

Description

一种调理肠道应激反应的无抗饲料添加剂及其制备方法

技术领域

发明属于饲料调理添加剂技术领域，具体涉及一种缓解动物肠道应激反应的调理剂组合物及其制备方法与应用。

背景技术

在养殖业中，随着集约化、规模化养殖的发展，养殖动物发生应激反应的概率越来越大，其中最典型的是肠道应激反应，容易引起肠道粘膜细胞损伤，轻则导致腹泻脱水，重则导致免疫力降低引起多种疾病甚至发生禽畜死亡。

应激反应是指动物机体对异常环境例如高温、长途运输、饲料不适等外界因素的非特异性防御应答的生理反应,以胃肠道反应较为常见。一般来说，对于体型较大的养殖动物例如猪牛羊等，仅在幼崽时期容易受环境影响发生肠道应激反应；而对于体型较小的养殖动物例如鸡鸭鹅等禽类，除了在幼崽期，即使在成年期仍然容易受环境影响例如夏季高温等因素引起应激反应尤其是胃肠道紊乱，不仅影响生长效率及产蛋量，还往往导致肠道微生物失衡，小肠绒毛组织变性甚至脱落，肠细胞膜通透性增加，进而增加患病风险增加。尤其对于产蛋禽来说，腹泻很容易将带有病原微生物的稀粪便附着于蛋表面，不仅污染了蛋品、增加了清洗难度，还给消费者带来了病源感染风险。

目前现有技术中，对于腹泻等常见的肠道应激反应通常采取向饲料中加入氧化锌等止泻剂或添加抗菌剂、有益微生物等添加剂进行肠道调理控制。

例如，CN201410267447公开了一种蛋鸡产蛋期复合预混料，由以下重量份数的原料组成：载体20-40份，磷酸氢钙15-25份，沸石粉10-20份，菜籽粕3-15份，食盐4-8份，健胃酸2-5份，DL-蛋氨酸2.0-3.5份，复合微量元素1.0-3.5份，吸霉灵1.5-3份，复合酶制剂1.0-2.0份，微生态制剂0.8-2份，氯化胆碱0.6-2份，复合维生素0.4-1.2份，和美效素0.4-1.0份，甜菜碱0.4-0.7份，鲜灵5号粉剂0.1-0.15份；所述载体为木屑、稻糠、苜蓿粉等纤维素类原料。

CN201610111413公开了肠溶包衣单宁酸衍生物，包括芯材以及包覆于所述芯材表面。但是该专利的单宁酸衍生物被动物采食后主要在结肠部位或结肠以后的部位水解释放而起作用，在肠道其他部位几乎没有效果。而且作用效果单一，仅仅是防止动物腹泻，不具备应激状态下的机体调理功能。

CN201811291736涉及一种替代锌的饲料添加剂及其制备方法与应用，饲料添加剂包括以下组分及重量份含量：有机酸1-3份、复合酶0.5-1.5份、植物提取物A2-10份、植物提取物B 2-10份、蒙脱石2-4份及载体8-12份；制备时，先将载体分为三份，之后将各相应组分分别与载体混合；将饲料添加剂加入至仔猪的基础日粮中，以替代氧化锌的使用，饲料添加剂的添加量为基础日粮的0.1-0.3wt％。

CN201610966604公开了一种基于氧化锌的仔猪肠道营养调控饲料，全价饲料中包膜氧化锌占重量百分比为0.06～0.2％。包膜氧化锌以硬脂酸、长链米糠油、亚硅酸、羟甲基纤维素钠等材料，采用镶嵌包被技术包膜形成，可有效防止氧化锌在仔猪胃内酸化成为锌离子和消耗氢离子的作用，能提高胃蛋白酶活性，使活性成分(氧化锌)高效到达肠道内发挥抗菌、保护肠黏膜粘蛋白结构作用。

CN201710701441公开了一种肠溶氧化锌微丸的制备方法，该肠溶氧化锌微丸在胃中不溶解，在肠道中溶解且溶解速度在30min-3h可调，可使氧化锌均匀地分散于肠道。具有防腹泻、用量低的特点。

然而，仅通过微生物调理肠道具有起效慢、效果不明显的缺点，采取氧化锌尽管具有好的止泻效果，但是高浓度氧化锌的大量使用(有效作用剂量为2000-2500ppm)造成了铜、铁等其他金属元素的吸收利用率降低，并且粪便中重金属锌也导致了环境的污染。随着人们对环境卫生安全意识的逐渐提高，降低氧化锌的使用量，寻找氧化锌的高效替代物是目前亟待解决的问题之一。

在现有的氧化锌替代物中，天然来源组分及非药物的使用越来越受欢迎。其中，甜菜碱是一种甲基化的氨基酸，在肠道内的吸收效率很高，在肠道中被吸收后经血液循环进入机体各组织。甜菜碱为高半胱氨酸提供一个甲基以合成蛋氨酸。饲粮中添加甜菜碱能够显著加速蛋氨酸的再甲基化，提高蛋氨酸含量，并促进胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽等重要代谢物质生成。同时，还可以降低动物机体脂肪蓄积，维持肠道细胞渗透压以及调节肠道细胞电解质平衡等功能。但是，饲料中直接添加甜菜碱具有比较差的效果，这主要是由于进入肠道内的甜菜碱生物利用率低。

水解类单宁溶于水及乙醇，易溶于甘油，不溶于乙醚、氯仿或苯，单宁属于典型的葡萄糖酰基化合物，其多酚羟基的结构赋予了它一系列独特的化学特性和生理活性，如能与蛋白质、生物碱、多糖结合，具有极强的抗氧化、抑菌、抗炎等活性。由于单宁酸的多酚羟基性，其水溶性强而脂溶性差，限制了肠道黏膜细胞吸收率。因此，对单宁进行改性处理，增加脂溶性，增强肠道表皮细胞的透膜能力，以使其具有更好的与肠道细胞膜的磷脂分子层融合性和更好的吸收率，可有望成为代替抗生素和锌类收敛剂的良好替代品。

另外，单宁脂质体同时也可以补充磷脂等脂质，有利于环合应激反应，修复肠道粘膜，促进机体生长发育。不过，虽然单宁酸具有一定的收敛效果，但使用时量较大，单独使用单宁酸时，每吨饲料需要水解单宁酸1公斤以上，使用成本高于目前的氧化锌，效果却弱于氧化锌。

因此，虽然现有技术中已有多种抗应激的化学试剂或者饲料添加剂，但是开发一种高效、环保的用于缓解肠道应激反应的调理型调节剂，以代替或大幅减少氧化锌的使用，具有良好的环境经济效益和市场应用潜力。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种缓解肠道应激反应的肠溶薄膜包衣复合颗粒及其制备方法。

本发明所述的肠溶薄膜包衣复合颗粒既可以作为饲料添加剂也可以作为肠道调节剂用于禽畜类动物尤其是产蛋禽类，以缓解肠道应激反应并调理肠道至平衡状态。本发明复合颗粒在动物具有较低的胃部释放损失和梯度分布的整体性肠道缓释效应，不仅可以实现中后段肠道收敛与抗应激的作用，还可以在前中段肠道形成肠道保护膜修复肠道内皮粘膜/绒毛损伤。

其中，所述肠道应激反应可包括饲料、温度、运输等外界各种因素引发的消化不良、腹泻及肠炎等。

具体地，本发明采用的技术方案如下。

本发明的第一个方面，提供一种缓解并调理养殖动物肠道应激反应的组合物制剂，所述制剂为肠溶包衣复合颗粒，且所述制剂至少含有单宁脂质体组分。

具体地，上述制剂包括：由单宁-磷脂/甜菜碱复合物、三丁酸甘油酯、任选的纳米氧化锌及辅料组成的薄膜包衣肠溶颗粒，以及防吸湿包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒。即制剂由两种颗粒组分复配得到。

其中，薄膜包衣肠溶颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒的质量比为10:1-5，优选10:1-3。

优选地，包括纳米氧化锌。

其中，所述单宁选自没食子单宁，也可选自其他可水解单宁酸或聚合单宁，通常可按照本领域一般制备方法从五倍子等原料中提取得到或商购得到。

优选地，所述的没食子单宁优选分子量在500以上，更优选800以上。

优选地，所述单宁选自五倍子单宁。

由于没食子单宁是由酸与多元醇组成的酯，在酸碱或酶作用下容易水解产生多元醇和酚羧酸，因此期望用于肠道作用时需要进行预处理，以免在胃部等酸性环境下水解释放单体分子导致损失。同时，期望提高肠道中单宁衍生物的脂溶性，促进肠道表皮细胞转运效率。

因此，本发明中所述五倍子单宁优选以磷脂/甜菜碱复合物的形态存在，其通过如下过程制备得到。

1)配制五倍子单宁磷酸盐缓冲液；

2)称取大豆卵磷脂和甜菜碱或其盐酸盐，混合，无水乙醇溶解；

3)五倍子单宁与磷脂-甜菜碱在加热条件下搅拌反应，冷却降温，静置沉淀，得到以单宁-甜菜碱复合物为主的复合物组分；

4)继续搅拌反应，蒸发溶剂醇，得到单宁磷脂脂质体固体产物；利用溶剂分离得到单宁-磷脂脂质体为主的复合物固体组分，合并固体，干燥，粉碎筛分，从而得到五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物。

本发明的第二个方面，提供上述薄膜包衣肠溶颗粒的制备方法，包括步骤：

(1)制备五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物；

(2)将比例量的单宁-磷脂/甜菜碱复合物、三丁酸甘油酯、纳米氧化锌及辅料混合均匀，制备软材并造粒包衣得到肠溶颗粒；

(3)对甜菜碱-正丁酸钠盐进行防吸湿性包膜处理；

(4)将包含单宁-磷脂/甜菜碱复合物的肠溶颗粒与适量甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒混合复配，得到所述的薄膜包衣肠溶颗粒组合物。

其中，步骤(4)中单宁-磷脂/甜菜碱复合物肠溶颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒的质量比为10:1-5。

具体地，本发明所述的薄膜包衣肠溶颗粒中，五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物通过如下制备过程得到。

S1：配制五倍子单宁磷酸盐缓冲液：称取适量纯化的五倍子单宁，置于用体积比为1-2:1的无水乙醇及磷酸缓冲液(pH 6.5-6.8)配制的复合溶剂中，常温搅拌溶解，配制质量浓度为0.01-0.1g/mL的五倍子单宁-磷酸盐有机缓冲溶液；优选地，单宁质量浓度为0.01-0.05g/mL；

S2：按质量比1.5-2:1称取大豆卵磷脂和甜菜碱或其盐酸盐，混合，然后加入5-10倍重量的无水乙醇中，加热至30-35℃，搅拌充分溶解；

S3：向上述五倍子单宁-磷酸盐有机缓冲溶液中投料上述步骤S2配制的磷脂-甜菜碱混合溶液，控制溶液中单宁与磷脂-甜菜碱混合组分的质量比为2-5:1；

优选地，单宁与磷脂-甜菜碱混合物质量比为3-5:1；

S4：第一反应阶段：首先，在冷凝回流条件下加热至温度50-65℃，磁力搅拌反应1-1.5h，然后冷却降温至3-10℃，静置沉淀，将析出的沉淀过滤或离心处理，烘干干燥，得到以单宁-甜菜碱复合物为主的复合物组分1；

S5：第二反应阶段：

(1)将滤液重新加热至50-60℃，继续搅拌反应30-60min，蒸发回收反应溶剂乙醇，得到单宁磷脂脂质体固体产物；将所得脂质体产物用氯仿溶解，充分溶解其中的磷脂及单宁脂质体复合物，从而得到含单宁及少量甜菜碱等不溶物组分的氯仿溶液；

(2)过滤或离心回收未反应的单宁等固体不溶物以待循环使用，然后将含有单宁脂质体的氯仿溶液蒸发浓缩并完全除去溶剂，从而得到单宁-磷脂脂质体为主的复合物固体组分2；

S6：将所得单宁脂质体组分2与上述第一反应阶段获得的固体组分1合并，真空干燥6-10h，粉碎筛分，从而得到五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒产物，总复合率可高达90％左右。

本发明所述的薄膜包衣肠溶颗粒由芯材和肠溶包衣组成，其中芯材包括五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物、三丁酸甘油酯、纳米氧化锌以及辅料。

其中，按重量份计，五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒15-20份、三丁酸甘油酯3-5份、纳米氧化锌0.1-1份。

具体地，所述肠溶颗粒具体制备过程如下。

(1)配制原料及辅料：按重量份计，称取上述制备的五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒15-20份、三丁酸甘油酯3-5份、纳米氧化锌0.1-1份，混合均匀，得混合物1；另取辅料如下：淀粉3-4份，半乳甘露聚糖或甘露聚糖2-3份，微晶纤维素2-3份，糊精1-2份，硬脂酸钙或硬脂酸镁1-1.5份，羧甲基纤维素钠0.5份，交联聚维酮0.1-0.3份。

(2)在混合机内将上述辅料与混合物1混合均匀，在60-65℃条件下加入月桂酸单甘油酯1-3份，以60-100r/min的速率搅拌10-15min，然后加入适量纯化水(10-20wt％)搅拌混合形成湿软材，将湿颗粒软材加入摇摆式制粒机内用60-80目孔径筛网挤出物料，并将物料投入滚圆机滚圆10-15min，烘箱内烘干干燥2小时，得芯材颗粒；

其中，纯化水的用量根据湿软材所需湿度选择，例如可以为10-20wt％。

(3)制备肠溶薄膜包衣液：取苯二甲酸醋酸纤维素1-2份，聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯0.5-1份，聚丙烯酸酯类共聚物(丙烯酸树脂I或II号)1-1.5份，柠檬酸三乙酯0.3-0.5份，吐温800.1-0.2份，以及包衣助剂滑石粉0.1-0.3份，混合后加入30-50份75-85％体积分数的乙醇溶液中，充分搅拌，将肠溶衣层的包衣材料和辅料配制成均匀的混合溶液，从而制得肠溶薄膜包衣液。

(4)在流化床包衣机或其他包膜设备内向芯材颗粒喷覆肠溶薄膜包衣液进行芯材颗粒的包膜处理，包膜处理完毕后50℃烘干干燥1-2h，40-80目筛分出料，得到肠溶复合颗粒产品，其中控制最终产品中肠溶包衣层质量占产品颗粒总质量的5-20％，优选8-12％。

其中，肠溶薄膜包衣组分中，聚丙烯树脂(例如1-3#)材料具有较高的抗酸蚀的能力，虽然可以避免包容物在胃中的损失，但在小肠中无法快速有效地解离释放，所以优选采用复合肠溶材料，使得包容物既可以在动物胃肠道内长效缓释，又可提高内容物的生物利用率。

本发明中，由于正丁酸钠盐与甜菜碱均具有可吸湿性，且正丁酸钠具有酸败气味，为提高适口性，本发明将正丁酸钠盐与甜菜碱混合并采取防吸湿性性处理；同时，为促进肠道吸收效率，进行适度肠溶包膜处理。

具体地，本发明所述防吸湿性包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒的制备过程如下。

(S1)按重量份计，将饲料级甜菜碱或甜菜碱盐酸盐3-5份、乳清蛋白粉10-15份、正丁酸钠盐0.5-1份以及至少包括蛋氨酸的氨基酸组分1-2份混合均匀，干燥；

(S2)向上述原料中加入1-2倍重量的玉米淀粉，0.2-0.5倍重量的β-环糊精，以及0.1-0.2倍质量的微晶纤维素，搅拌均匀，用1-3wt％的羟甲基纤维素钠溶液制备软材，在制粒机中制成均匀的颗粒，控制制粒机进风温度为50-55℃，控制粒度约为40-80目；

(S3)向所得颗粒产品喷涂质量分数为1-2wt％的邻苯二甲酸醋酸纤维素乙醇溶液少许(例如，溶液喷涂量为颗粒产品的10wt％以内)；然后流化床烘干干燥至含水量低于5％，从而得到防吸湿性包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒。

本发明的第三个方面，提供上述薄膜包衣肠溶颗粒作为饲料添加剂用于肠道应激调理剂的用途。其用量为在每kg饲料中添加0.1-10g，优选0.1-5g，更优选0.1-1g。

除了产蛋禽类及畜类养殖动物之外，所述的调理组合物添加剂也可用于水产养殖动物以维持胃肠系统平衡和提高抗应激水平，例如鱼、虾、蟹、贝等。

当用于调理养殖动物比较严重的应激反应时，例如中度以上消化不良、肠炎、腹泻以及肠壁糜烂时，可适当增加用量或添加频次。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明的薄膜包衣肠溶颗粒含有单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒，为两种复合颗粒组成的组合物。该组合物根据动物肠道结构特性，兼具有肠道前中部快速释放和中后部缓释释放的独特效果，可以完成对肠道整体环境的完整释放和调理，这是现有技术中单独采用单一包膜产品所不具备的特性(现有技术中肠溶包膜物产品功能单一，往往在肠道中前部快速吸收无法达到肠道末端进行收敛止泻，或者靶向肠道后端而忽略了肠道前部的修复调理)。

其中，单宁-磷脂/甜菜碱复合物具有三次表面修饰处理，先是利用高分子纤维素、硬脂酸等大分子对单宁、甜菜碱进行包埋修饰，再利用烷基脂肪酸甘油酯进行二次物理修饰，最后进行肠溶包衣处理，生物大分子材料、脂肪酸甘油酯、肠溶衣依次覆盖于单宁-磷脂/甜菜碱复合物表面，在低pH环境下具有极低的释放率(小于1％)，有效屏蔽胃部环境，在进入肠道后，随着pH的升高，表面材料开始崩解，逐渐释放单宁、甜菜碱、丁酸等肠道吸收组分，发挥缓解应激反应的作用(将上述单宁肠溶颗粒在pH2-3的37℃水中缓慢搅拌溶解45min，单宁组分溶出率为0.1-0.5％；在pH7.0-7.5的37℃水中缓慢搅拌溶解45min，单宁酸溶出释放率为90％以上)。

而甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒仅有有限程度的包膜处理，因此具有快速释放的肠溶效果。小部分颗粒在胃部溶出分解之后，大部分进入肠道环境，然后快速崩解溶出，在pH相对较低的十二指肠、回肠中基本完成溶出释放甜菜碱和丁酸根，从而被肠道快速吸收。在pH为5-6时，本发明甜菜碱-正丁酸钠盐包衣颗粒可完成90％以上的溶出释放率，从而使得甜菜碱、正丁酸具有高度的生物利用度。

同时，作为多次表面处理的单宁包衣颗粒，在十二指肠等肠道中前部溶出释放较小，有效减轻释放的单宁酸对肠道消化酶的破坏，而在肠道中后端例如大肠(盲肠、结肠、直肠)部位，尤其是结肠部位，随着pH的升高，肠溶颗粒组分完全释放从而达到收敛、抗腹泻等缓和调理作用。

(2)由于肠溶包衣处理的单宁不会在胃中分解与蛋白酶结合，而是在肠道内分段缓释逐渐分解释放出单宁复合物，附着于肠粘膜表层，减少应激环境下的细胞液渗出，因此可以减轻炎症刺激及肠蠕动分。由于单宁脂质体的缓释效果，单宁磷脂复合物可在较长时间内具有与肠道细胞膜的磷脂分子层更好的融合性，有利于缓和应激损伤，修复肠道粘膜。

在夏季高温环境时，微量添加即可有效解决产蛋禽类便稀、水样便带来的蛋品污染问题。同时，对于仔猪等早期断奶带来的肠道应激也具有显著的缓和效应，有效改善腹泻等肠道紊乱问题。

(3)本发明丁酸盐具有梯度释放效应，其中部分包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒进入胃部后，小部分丁酸盐解离出丁酸根离子，维持胃液酸性；大部分丁酸盐和三丁酸甘油酯(在胰脂肪酶的作用下分解成丁酸和甘油)进入肠道后在肠内快速释放丁酸并被吸收，从而为肠道粘膜上皮细胞快速提供能量，促进小肠细胞增殖及更新调节，修复小肠黏膜上皮细胞的形态结构，维持小肠黏膜结构和功能的完整性，增加肠道有益菌数量，维持肠道微生物菌群的稳定，从而达到调理肠道微生物菌群平衡的目的。在肠道黏膜细胞出现损伤时，协助修复应激反应所导致的肠黏膜损伤。同时丁酸还具有一定的杀菌抑菌作用，抑制大肠杆菌、沙门氏杆菌，增加乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌，及时修复动物受应激后出现的肠道系统紊乱。

(4)本发明产品中的半乳甘露寡糖、甘露寡糖等聚糖既可作为缓释组分，延缓了有效组分的释放，同时也具有改善畜禽消化道菌群和促进有益菌增殖的功能，提高了有益组分体内的生物利用度。

(5)本发明的制备方法简单便捷，适合大规模生产。

具体实施方式

下面通过具体的制备例和实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

制备例1

制备五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物

(1)称取适量纯化的五倍子单宁1kg，置于等体积比混合的无水乙醇及磷酸二氢钠盐缓冲液(pH 6.8)组成的20L溶剂中，常温搅拌溶解，配制五倍子单宁-磷酸盐有机缓冲溶液。

(2)按质量比2:1称取大豆卵磷脂和甜菜碱480g并混合，然后加入2.5L无水乙醇中，加热至35℃，搅拌充分溶解后，倒入上述五倍子单宁-磷酸盐有机缓冲溶液中，搅拌均匀。

(3)在带冷凝回流的反应釜中，将上述反应原料加热至温度60℃，磁力搅拌反应1h，然后冷却降温至5℃，静置沉淀，将析出的沉淀过滤，烘干干燥，得到以单宁-甜菜碱复合物为主的复合物组分1；接下来，将滤液重新加热至60℃，继续搅拌反应30min，蒸发回收反应溶剂乙醇，得到单宁磷脂脂质体固体产物；将所得脂质体产物用氯仿溶解，充分溶解其中的磷脂及单宁脂质体复合物，从而得到含单宁及少量甜菜碱等不溶物组分的氯仿溶液。

(4)将上述氯仿溶液过滤，回收未反应的单宁等固体不溶物以待循环使用，然后将含有单宁脂质体的氯仿溶液蒸发浓缩并完全回收氯仿溶剂，从而得到单宁-磷脂脂质体为主的复合物固体组分2。

(5)将所得单宁脂质体组分2与固体组分1合并，真空干燥8h，粉碎并筛分至60-80目，从而得到五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒产物1.4kg，产物中单宁复合率达91％。

制备例2

制备含单宁复合物的肠溶颗粒

(1)取上述制备的五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒1000g、三丁酸甘油酯300g、纳米氧化锌50g，混合均匀，得混合物1；另取辅料：玉米淀粉200g，半乳甘露聚糖150g，微晶纤维素120g，糊精60g，硬脂酸钙50g，羧甲基纤维素钠20g，交联聚维酮5g，在混合机内将上述辅料与混合物1混合均匀，并在65℃条件下加入月桂酸单甘油酯120g，以80r/min的速率搅拌15min，然后加入纯化水搅拌混合形成湿颗粒软材，将湿软材加入摇摆式制粒机内用60-80目孔径筛网挤出物料，并将物料投入滚圆机滚圆15min，烘箱内烘干干燥2小时，得芯材颗粒。

(2)制备肠溶薄膜包衣液：取苯二甲酸醋酸纤维素100g，聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯30g，聚丙烯酸酯树脂50g，柠檬酸三乙酯20g，吐温805g，以及包衣助剂滑石粉12g，混合后用2800ml 80％体积分数的乙醇溶液搅拌溶解，配制成均匀的混合溶液，从而制得肠溶薄膜包衣液。

(3)在流化床包衣机内向芯材颗粒喷覆肠溶薄膜包衣液进行芯材颗粒的包膜处理，包膜处理完毕后50℃烘干干燥1-2h，40目筛分出料，得到肠溶复合颗粒产品，其中产品中肠溶包衣层质量占产品颗粒总质量约10％。

将上述单宁肠溶颗粒在pH2的37℃水中缓慢搅拌溶解45min，单宁溶出率为0.25％；在pH7.5的37℃水中缓慢搅拌溶解45min，单宁酸溶出释放率为96.2％。

制备例3

制备防吸湿性包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒

(1)将饲料级甜菜碱盐酸盐30g、乳清蛋白粉100g、正丁酸钠盐5g以及包括等重蛋氨酸和赖氨酸的氨基酸15g混合均匀；向上述原料中加入180g玉米淀粉，40gβ-环糊精，以及18g微晶纤维素，搅拌均匀，用1wt％的羟甲基纤维素钠溶液代替纯化水制备软材，在制粒机中制成均匀的颗粒，控制制粒机进风温度为50-55℃，控制粒度约为60目，干燥所得产品；

(2)向所得颗粒产品喷涂质量分数为2wt％的邻苯二甲酸醋酸纤维素乙醇溶液进行包膜处理(溶液用量为颗粒产品的5wt％)；然后流化床烘干干燥至含水量低于2％，从而得到防吸湿性包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒约0.4kg。

制备例4

将上述制备的单宁复合物肠溶颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒按照1:0.1的重量比混合复配，从而得到薄膜包衣肠溶颗粒组合物，标记为A1产品。

制备例5

将上述制备的单宁复合物肠溶颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒按照1:0.2的重量比混合复配，从而得到薄膜包衣肠溶颗粒组合物，标记为A2产品。

对比实施例1

以五倍子单宁代替五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物，按照制备例2的方法制备肠溶颗粒，得到产品标记为D1。

对比实施例2

以对比实施例1中的产品代替制备例4中的单宁复合物肠溶颗粒，按照制备例4相同的比例，将其与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒复配得到薄膜包衣肠溶颗粒组合物，产品标记为D2。

效果实施例

1.1试验方法及分组

选120-130日龄左右的(此日龄附近的蛋鸡刚进入产蛋期，机体生理上容易受影响出现应激性反应)的海兰褐蛋鸡800只，随机均分为4组，每组4个重复；具体分为实验组、对照组1、对照组2、空白对照组。其中空白对照组仅饲喂高蛋白的基础饲料(碎玉米50％、麦麸5％、豆粕25％、花生粕10％、鱼粉6％、蛋鸡专用商品添加预混料4％)，不添加任何肠道调节剂。实验组在每kg基础饲料中添加500mgA1产品颗粒；对照组1在每kg基础饲料中添加500mgD1产品颗粒；对照组2在每kg基础饲料中添加500mg D2产品颗粒。

试验在夏季养殖场全封闭式蛋鸡舍内进行，并在高蛋白饲料和高温环境下进行诱导肠道产生应激，方法如下：在养殖场正常温度(18-28℃)的基础上，提高温度及湿度；具体地，试验期所有笼舍内白天温度控制在30～33℃，夜间温度控制在26～28℃，湿度80％左右，并提供充足的饮水，使得绝大部分或者所有蛋鸡普遍出现稀薄粪便为宜。

试验期4周，第一周为预饲适应期，试验期间早、中、晚3次喂料，自由采食、自由饮水，维持每天16h光照；养殖场常规消毒防疫。

试验期间，每天按组分别记录产蛋率、粘粪蛋(肉眼明显可见的粪便污染蛋品)数量以及严重腹泻鸡只(持续排出水便或水样便)等数据。所有数据用SPSS单因子方差分析进行分析，差异显著水平为P<0.05，实验结束后平均数据见下表1。

表1蛋鸡应激环境下饲养状况

由上表可以看出，在肠道发生应激反应的情况下，空白组蛋鸡产蛋率呈一定程度的下降趋势，腹泻率和蛋品污染率明显升高；而含缓和应激调理组合物添加剂的试验组产蛋率下降趋势较缓，腹泻率和蛋品污染率相对空白对照组明显降低，差异具有显著性(P<0.05)，表明了调理剂对缓解肠道应激的有效作用。结果还表明，在肠道应激状态条件下，实验组添加剂相对于对照组能更好地缓和并修复肠道应激状态，提高蛋品表观质量。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (9)

1.一种用于调理动物肠道应激反应的组合物制剂，其特征在于，包括：含单宁脂质体复合物的薄膜包衣肠溶颗粒，以及包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒；其中，所述含单宁脂质体复合物的肠溶颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒的质量比为10:1-5；所述含单宁脂质体复合物的肠溶颗粒由单宁-磷脂/甜菜碱复合物、三丁酸甘油酯、纳米氧化锌及辅料组成，其中，按重量份比例计，单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒15-20份、三丁酸甘油酯3-5份、纳米氧化锌0.1-1份。

2.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述单宁选自五倍子单宁，所述单宁-磷脂/甜菜碱复合物由单宁与磷脂、甜菜碱通过如下过程制备：

S1：配制五倍子单宁磷酸盐缓冲液；

S2：称取大豆卵磷脂和甜菜碱或其盐酸盐，混合，无水乙醇溶解；

S3：五倍子单宁与磷脂-甜菜碱在加热条件下搅拌反应，冷却降温，静置沉淀，得到以单宁-甜菜碱复合物为主的复合物组分；

S4：继续搅拌反应，蒸发溶剂，得到单宁磷脂脂质体固体产物；利用溶剂去除未反应原料从而分离得到单宁-磷脂脂质体固体组分，合并甜菜碱复合物固体，干燥，粉碎筛分，得到五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物。

3.一种权利要求1所述制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物；

(2)将比例量的单宁-磷脂/甜菜碱复合物、三丁酸甘油酯、纳米氧化锌及辅料混合均匀，制备软材并造粒包衣得到肠溶颗粒；

(3)对甜菜碱-正丁酸钠盐进行包膜处理；

(4)将包含单宁-磷脂/甜菜碱复合物的肠溶颗粒与适量甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒混合复配，得到所述的薄膜包衣肠溶颗粒组合物；

其中，步骤(4)中单宁-磷脂/甜菜碱复合物肠溶颗粒与甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒的质量比为10:1-5。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)具体如下：

S1：配制五倍子单宁磷酸盐缓冲液：称取适量纯化的五倍子单宁，置于用体积比为1-2:1的无水乙醇及磷酸缓冲液配制的复合溶剂中，常温搅拌溶解；

S2：按质量比1.5-2:1称取大豆卵磷脂和甜菜碱或其盐酸盐，混合，然后加入无水乙醇，加热至30-35℃，搅拌充分溶解；

S3：向上述五倍子单宁溶液中投料磷脂-甜菜碱混合溶液，控制溶液中单宁与磷脂-甜菜碱混合组分的质量比为2-5:1；

S4：第一反应阶段：在冷凝回流条件下加热至温度50-65℃，磁力搅拌反应1-1.5h，然后冷却降温至3-10℃，静置沉淀，将析出的沉淀过滤或离心处理，烘干干燥，得到以单宁-甜菜碱复合物为主的复合物组分1；

S5：第二反应阶段：

(1)将滤液重新加热至50-60℃，继续搅拌反应30-60min，蒸发回收反应溶剂乙醇，得到单宁磷脂脂质体固体产物；将所得脂质体产物用氯仿溶解，得到含单宁及少量甜菜碱等不溶物组分的氯仿溶液；

(2)过滤或离心回收固体不溶物，然后将含有单宁脂质体的氯仿溶液蒸发浓缩并完全除去溶剂，从而得到单宁-磷脂脂质体为主的复合物固体组分2；

S6：将所得单宁脂质体组分2与上述第一反应阶段获得的固体组分1合并，真空干燥6-10h，粉碎筛分，从而得到五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)具体如下：

(1)按重量份计，称取上述制备的五倍子单宁-磷脂/甜菜碱复合物颗粒15-20份、三丁酸甘油酯3-5份、纳米氧化锌0.1-1份，混合均匀，得混合物1；另取如下辅料：淀粉3-4份，半乳甘露聚糖或甘露聚糖2-3份，微晶纤维素2-3份，糊精1-2份，硬脂酸钙或硬脂酸镁1-1.5份，羧甲基纤维素钠0.5份，交联聚维酮0.1-0.3份；

(2)在混合机内将上述辅料与混合物1混合均匀，在60-65℃条件下加入月桂酸单甘油酯1-3份，搅拌10-15min，然后加入适量纯化水搅拌混合形成湿软材，在制粒机内用筛网挤出物料，滚圆机滚圆10-15min，烘干干燥，得芯材颗粒；

(3)制备肠溶薄膜包衣液：取苯二甲酸醋酸纤维素1-2份，聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯0.5-1份，聚丙烯酸酯类共聚物1-1.5份，柠檬酸三乙酯0.3-0.5份，吐温800.1-0.2份，以及包衣助剂滑石粉0.1-0.3份，混合后加入30-50份75-85％体积分数的乙醇溶液中，充分搅拌溶解制成均匀的混合溶液，从而制得肠溶薄膜包衣液；

(4)在流化床包衣机或其他包膜设备内向芯材颗粒喷覆肠溶薄膜包衣液进行芯材颗粒的包膜处理，包膜处理完毕后50℃烘干干燥1-2h，40-80目筛分出料，得到肠溶复合颗粒产品，其中，控制最终产品中肠溶包衣层质量占产品颗粒总质量的5-20％。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)具体如下：

(1)按重量份计，将饲料级甜菜碱或甜菜碱盐酸盐3-5份、乳清蛋白粉10-15份、正丁酸钠盐0.5-1份以及至少包括蛋氨酸的氨基酸组分1-2份混合均匀，干燥；

(2)向上述原料中加入玉米淀粉、β-环糊精、微晶纤维素，搅拌均匀，用1-3wt％的羟甲基纤维素钠溶液制备软材，在制粒机中制成均匀的颗粒，控制制粒机进风温度为50-55℃，控制粒度40-80目；

(3)向所得颗粒产品喷涂少量质量分数为1-2wt％的邻苯二甲酸醋酸纤维素乙醇溶液；然后流化床烘干干燥，得到包膜处理的甜菜碱-正丁酸钠盐颗粒。

7.权利要求1-2所述的制剂用于调理动物肠道应激反应的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肠道应激反应包括肠炎、消化不良、腹泻；所述动物包括禽畜及水产类养殖动物，优选产蛋禽类。

9.如权利要求7-8所述的应用，其特征在于，用量为每kg饲料中添加0.1-10g制剂，优选0.1-1g。