CN109966178A - 皮肤外用组合物及赋予或增强抗皱纹效果的方法 - Google Patents

皮肤外用组合物及赋予或增强抗皱纹效果的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种起到优异的抗皱纹效果的抗皱纹皮肤外用组合物及赋予或增强抗皱纹效果的方法。皮肤外用组合物，其包含视黄醇及山茶种子油。

Description

皮肤外用组合物及赋予或增强抗皱纹效果的方法
技术领域
本发明是涉及一种皮肤外用组合物及赋予或增强抗皱纹效果的方法。
背景技术
随着皮肤老化，肌肤中皱纹增加。皱纹(wrinkle)中有自在眼睛的下方细细地横入、深度为表皮水平的皱纹(表皮性皱纹)至作为与眼角或额等表情肌的方向垂直的细小的褶皱出现的、皱纹的深度为真皮水平的皱纹(真皮性皱纹)；或者作为眼睛或嘴周围、脸的轮廓等的大的褶皱出现的皱纹(老人性皱纹)等。为了找到对此种表皮或真皮等部位进行综合性作用来对皱纹的形成防止或改善起多面性作用的解决方法，而进行了研究。
视黄醇(retinol)及其衍生物是已知与以视觉为首的生物功能的维持、或皮肤及粘膜等正常上皮组织的再生功能等相关的维生素的一种，作为寻常性鱼鳞癣等角化异常皮肤疾病的外用医药品而已知，另外，已知视黄醇衍生物通过维持上皮组织的活性并阻断紫外光线的信号透过而抑制皮肤的老化，作为防止皮肤老化用的化妆品等而广泛使用。
另外，进而发现：关于在将具有特定的氨基酸序列的肽单元缩合而获得的多肽(聚(脯氨酸-羟基脯氨酸-甘氨酸))上经由琥珀酸结合视黄醇而成的物质，其细胞毒性低，增大表皮中的透明质酸(hyaluronic acid)产生，另外，可促进真皮中的胶原蛋白(collagen)的合成(专利文献1)。
[现有技术文献]
[专利文献]
[专利文献1]国际公开第2011/158864号
发明内容
[发明所要解决的问题]
本发明的目的在于提供一种起到优异的抗皱纹效果(例如为防止皱纹形成效果、皱纹改善效果、美肌效果或肌质改善效果等效果)的抗皱纹皮肤外用组合物。
[解决问题的技术手段]
本发明人等人发现通过将自山茶种子获得的油(山茶种子油)与视黄醇组合使用而获得特别高的透明质酸合酶(Hyaluronan Synthase，HAS)2和/或HAS3基因表达(geneexpression)亢进效果，进而重复进行改良而完成本发明。
本发明例如包含以下项中记载的主题。
项1.
一种皮肤外用组合物，其包含视黄醇及山茶种子油。
项2.
根据项1所述的组合物，其中，山茶种子油的脂肪酸含有比率如以下所述：
项3.
根据项1或项2所述的组合物，其为抗皱纹皮肤外用组合物。
项4.
根据项1至项3中任一项所述的组合物，其为表皮细胞透明质酸产生亢进用组合物。
项5.
一种对皮肤外用组合物赋予或增强用于皮肤时的抗皱纹效果的方法，其中，通过使皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油而对所述组合物赋予或增强用于皮肤时的抗皱纹效果。
项6.
一种增强视黄醇所具有的用于皮肤时的抗皱纹效果的方法，其中，通过使皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油而增强所述视黄醇所具有的用于皮肤时的抗皱纹效果。
[发明的效果]
通过使用本发明的皮肤外用组合物，可获得优异的抗皱纹效果(更具体而言，例如为防止皱纹形成效果、皱纹改善效果、美肌效果或肌质改善效果等)。
附图说明
图1是表示通过实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)来对视黄醇(10-5M)和/或山茶种子油(0.001％或0.005％)给透明质酸合酶基因(HAS2)的表达带来的影响进行分析而得的结果。
图2是表示在三维皮肤模型中，通过实时PCR来对视黄醇(0.05％)和/或山茶种子油(1％或2％)给透明质酸合酶基因(HAS3)的表达带来的影响进行分析而得的结果。
图3是表示在三维皮肤模型中，通过实时PCR来对视黄醇(0.05％)和/或山茶种子油(2％、3％或5％)给与细胞增殖相关的基因(肝素结合性表皮生长因子(heparin bindingEGF-like growth factor，HB-EGF))的表达带来的影响进行分析而得的结果。
图4是表示在三维皮肤模型中，通过透明质酸量的定量来对视黄醇(0.05％)和/或山茶种子油(1％、2％或3％)给透明质酸合成带来的影响进行分析而得的结果。
具体实施方式
以下，对本发明的各实施方式进一步进行详细说明。
本发明中所包含的皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油。以下，有时将所述组合物称为本发明的皮肤外用组合物。
视黄醇为下述结构式所表示的化合物，如上所述，用于防止皮肤老化用化妆品等中。
[化1]
关于本发明的皮肤外用组合物中的视黄醇的含量，只要不损及本发明的效果，则并无特别限制，例如可优选地列举：0.005质量％～1质量％左右、0.01质量％～0.5质量％左右或0.02质量％～0.1质量％左右。另外，例如，在组合物为液状的情况下，优选为10-6M～10-2M左右，更优选为10-5M～10-2.5M左右。
本发明中所使用的山茶种子油是自山茶的种子进行提取而获得的油。山茶为属于山茶科山茶属的植物，若其种子油为可获得本发明的效果者，则并无特别限制。其中，优选为山茶花(Camellia Japonica)。自山茶种子提取油的方法并无特别限制，可使用公知的方法或根据公知的方法而容易想到的方法。例如，可使用压榨方法或熬煮方法等。另外，作为山茶种子油，也可购买市售品来使用。
山茶种子油包含多种脂肪酸。对于用于本发明而言，更优选为其脂肪酸含有比率成为如下所述者。棕榈酸：7.5％～20.0％、油酸：62.0％～85.0％、亚油酸：3.5％～10.0％、亚麻酸：1.5％以下、硬脂酸：0.5％～5.0％。
关于本发明的皮肤外用组合物中所含的山茶种子油的含量，若为可获得本发明的效果的范围，则并无特别限制，例如优选为0.0005质量％～10质量％左右，更优选为0.001质量％～5质量％左右，进而优选为0.01质量％～2质量％左右，进而更优选为0.1质量％～2质量％左右。所述范围的上限可为0.5质量％、0.05质量％、0.01质量％或0.005质量％左右。
另外，本发明的皮肤外用组合物中可还含有皮肤外用组合物(特别是外用医药品组合物及化妆品组合物)中所使用的公知的成分。作为此种成分，例如可列举：水、油剂、表面活性剂、保湿剂、高级醇、金属离子螯合剂、天然高分子及合成高分子、水溶性高分子及油溶性高分子、紫外线遮蔽剂、各种提取液、有机染料等色剂、防腐剂、抗氧化剂、色素、增粘剂、pH调整剂、香料、冷感剂、止汗剂、杀菌剂、皮肤活化剂、各种粉体等成分。这些成分的调配量也可基于在公知的皮肤外用组合物中的调配量的信息来适宜设定。虽并无特别限制，但例如可为1质量％～99.9质量％左右或50质量％～99.9质量％左右。
虽并无特别限制，但本发明的皮肤外用组合物优选为液状组合物。另外，作为本发明的皮肤外用组合物的使用形态，例如可列举：面霜、糊剂、软膏、霜剂、凝胶、洗剂、乳液、美容液、化妆水、喷雾剂、护发剂等。
此种本发明的皮肤外用组合物可通过公知的方法或根据公知的方法而容易想到的方法来制造。例如，可通过将视黄醇及山茶种子油以及其他皮肤外用组合物中所使用的公知的成分适宜混合来制造。
另外，本发明的皮肤外用组合物通过含有视黄醇及山茶种子油，而在皮肤(特别是表皮细胞)中起到优异的透明质酸合酶基因(特别是HAS2和/或HAS3)表达亢进效果、以及/或者细胞增殖因子的基因(特别是HB-EGF基因)表达亢进效果。另外，本发明的皮肤外用组合物在皮肤(特别是表皮细胞)中起到优异的透明质酸产生亢进效果。
Hyaluronan Synthase(HAS)为透明质酸合酶，HAS2及HAS3分别为透明质酸合酶的一种。通过使HAS的表达亢进而促进透明质酸合成，由此可优选地起到抗皱纹效果。另外，已知：肝素结合性表皮生长因子(heparin binding EGF-like growth factor，HB-EGF)与皮肤细胞增殖相关，特别是，若HB-EGF增多，则皮肤更新(turnover)加快而再生为新的皮肤。由此，可消除外伤或晒斑或者皱纹或斑点。
因此，本发明还包含含有视黄醇及山茶种子油的透明质酸合成(也称为产生)亢进用组合物以及含有视黄醇及山茶种子油的细胞(特别是皮肤细胞，其中，表皮细胞)增殖促进用或皮肤更新用组合物。关于这些组合物中所含的各成分，较佳地适用所述记载。
另外，本发明还优选地包含(i)通过使皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油而对所述组合物赋予或增强用于皮肤时的抗皱纹效果的方法；以及(ii)通过使皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油而增强所述视黄醇所具有的用于皮肤时的抗皱纹效果的方法。
(i)的方法中，通过使皮肤外用组合物组合包含视黄醇及山茶种子油的特定成分来增强所述组合物自身的用于皮肤时的抗皱纹效果；或者当在所述组合物自身中除视黄醇及山茶种子油以外，不含起到用于皮肤时的抗皱纹效果的成分时，可赋予所述效果。另外，(ii)的方法中，原本可对视黄醇期待用于皮肤时的抗皱纹效果，结果通过将山茶种子油与视黄醇组合使用(即，使皮肤外用剂包含视黄醇及山茶种子油)，可增强所述视黄醇的抗皱纹效果。
再者，在本说明书中，所谓“包含”，还包括“本质上包括”与“包括”(The term"comprising"includes"consisting essentially of"and"consisting of".)。
[实施例]
以下，对本发明进一步进行具体说明，但本发明并不限定于下述例。再者，以下，只要无特别说明，则表示以下研究中所使用的各种组合物中的成分含有比例的％表示质量(w/w)％。CO2浓度的％为v/v％。再者，所使用的山茶种子油的脂肪酸含有比率满足下述范围。棕榈酸：7.5％～20.0％、油酸：62.0％～85.0％、亚油酸：3.5％～10.0％、亚麻酸：1.5％以下、硬脂酸：0.5％～5.0％。
透明质酸合酶基因及细胞增殖促进基因的表达研究
使用NHEK细胞(正常人表皮角化细胞；来自新生儿)，并利用视黄醇及山茶种子油来研究透明质酸合酶基因(HAS2)及细胞增殖促进基因(HB-EGF)的表达是否发生变化。再者，关于细胞、培养基及培养基相关试剂，全部购买市售品来使用(仓敷纺织股份有限公司或西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich))。
＜增殖培养基制备方法＞
向恒温化为37℃的HuMedia-KB2培养基500毫升(mL)中添加经同样地恒温化的胰岛素0.5毫升、hEGF 0.5毫升、氢化可的松(hydrocortisone)0.5毫升、牛脑下垂体提取液(Bovine Pituitary Extract，BPE)2毫升、庆大霉素/两性霉素B(Gentamycin/Amphotericin B)0.5毫升(抗菌剂)。将其缓缓混合后，在4℃下加以保存。
＜冻结NHEK细胞的解冻及培养基置换方法＞
利用37℃的恒温槽对放入有冻结NHEK细胞的安瓿(ampoule)2根进行解冻。解冻后，将细胞溶液混合于预先分注至15毫升试管的4℃的Humedia-KG2培养基6毫升中。将预先恒温化为37℃的Humedia-KG2培养基39毫升向三个烧瓶中分别移入13毫升。将经混合的细胞溶液以2毫升为单位移至接着细胞培养烧瓶(苏米龙(SUMILON)250毫升)中，以细胞变得均匀的方式混合，然后静置一段时间。在37℃、5％CO2的培养箱中进行培养。第二天以后，进行一天一次培养基置换，直至细胞密度达到80％汇合(confluent)。
＜NHEK细胞的传代培养方法＞
抽吸增殖培养基，添加恒温化为37℃的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid，HEPES)缓冲液5毫升，轻轻地清洗细胞层。抽吸HEPES缓冲液，添加0.25％胰蛋白酶溶液2毫升，在37℃、5％CO2的培养箱中静置3分钟。其后，将接着于烧瓶底表面的细胞剥落(轻轻地叩击烧瓶的深处而将细胞剥落)。向其中添加恒温化为37℃的胰蛋白酶中和液4毫升而使胰蛋白酶酵素的反应停止。将细胞悬浊液回收至50毫升法尔孔(Falcon)塑料试管中，并进行离心(RT、1,000转(rpm)、5分钟(min))。抽吸上清液，并混合于Humedia-KG2培养基10毫升中，然后利用血球计数盘来计测细胞数。其后，在接着细胞24孔板(well plate)上以在培养基量950微升(μL)中细胞数成为1.2×105个的方式播种。第二天，进行培养基置换。
＜试样添加方法＞
抽吸增殖培养基，利用磷酸盐缓冲生理盐水(Phosphate buffered saline，PBS)1毫升进行清洗后，添加混合于Humedia-KB2培养基1毫升中而得的研究试样(视黄醇和/或山茶种子油)，并培养24小时。再者，视黄醇是以成为10-5M的终浓度的方式添加于培养基中。关于山茶种子油，在HAS2基因的表达分析时，以终浓度成为0.001％或0.005％的方式添加于培养基中，在HB-EGF基因的表达分析时，以终浓度成为0.1质量％的方式添加于培养基中。另外，代替视黄醇而添加在培养基中稀释为1/1000的容量的二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)而成者也同样地培养24小时。
＜细胞回收方法＞
抽吸Humedia-KB2培养基，利用PBS1毫升进行清洗。抽吸PBS，添加细胞溶解液(RLT)350微升，利用板振动器(plate shaker)振荡3分钟。利用乙烯胶带(vinyl tape)覆盖24孔板的周围，并在-80℃下加以保存。
＜cDNA的制作＞
自-80℃取出24孔板，利用恒温槽进行解冻。添加70％EtOH 350微升，利用板振动器振荡3分钟。总核糖核酸(Total ribonucleic acid，Total RNA)样品是使用总RNA迷你试剂盒(RNeasy Mini Kit)(强根(Qiagen)公司)来进行提取。利用纳米微滴2000分光光度计(NANODROP 2000Spectrophotometer)(赛默飞世尔(Thermo SCIENTIFIC))来测定RNA浓度，使用普利姆司丽普(PrimeScript)RT试剂试剂盒(reagent Kit)(塔克拉巴衣奥(Takara-bio)公司)，自约500纳克(ng)的Total RNA中制作互补DNA(complementary DNA，cDNA)。
＜实时PCR＞
向Primix Ex Taq(塔克拉巴衣奥(Takara-bio)公司)10微升中添加引物(primer)、ROX染料(Dye)II及无RNA(RNA Free)水，制备18微升的混合液，添加2微升(约50纳克)的cDNA样品，针对各引物而分别制备实时(Real-Time)PCR测定样品。选择β-肌动蛋白(actin)作为内源性对照，选择HAS2及HB-EGF作为目标基因。通过实时PCR标准7500(Real-Time PCR Standard 7500)(应用生物系统公司(Applied Biosystems))，并根据校准曲线法来进行目标基因的表达分析(相对定量)。
将HAS2基因的表达分析结果(将添加DMSO时设为1时的基因表达比例)示于图1中。在图1中，***表示具有显著性差异(***：P＜0.001)。另外，在图中，棒图表的上部的***表示与对照(DMSO添加)相比具有显著差异，横棒上部的***表示将位于所述横棒的端部的样品彼此加以比较而具有显著差异。另外，HB-EGF基因分析的结果，关于将添加DMSO时设为1时的基因表达比例，仅添加视黄醇时为约6.4，添加视黄醇及山茶种子油时为约9.9，与仅添加视黄醇时相比，添加视黄醇及山茶种子油时显著高(P＜0.05)。
使用三维皮肤模型的透明质酸合成及细胞增殖促进基因的表达研究
使用三维皮肤模型，并利用视黄醇及山茶种子油来研究透明质酸合酶基因(HAS3)及细胞增殖促进基因(HB-EGF)的表达是否发生变化。进而，针对作为最终产物的透明质酸产生量的表达是否发生变化，也进行研究。再者，关于细胞、培养基及培养基相关试剂，全部购买市售品来使用(马特泰克(MatTek)或仓敷纺织股份有限公司或西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich))。
＜三维皮肤模型的培养方法＞
使用马特泰克(MatTek)公司的试剂盒(EPI-200)来培养三维皮肤模型。具体而言，将恒温化为37℃的测定培养基(Assay Medium)向24孔板中分别添加500微升，在其上放置由马特泰克(MatTek)公司制备的包含NHEK细胞(正常人表皮角化细胞；来自新生儿)的三维皮肤模型。在37℃、5％CO2的培养箱中培养1天。
＜试样添加方法＞
向三维皮肤模型中添加研究试样(视黄醇和/或山茶种子油)50微升，并培养24小时(利用实时PCR的基因的表达分析实验)或48小时(透明质酸产生的定量实验)(以添加试样普遍浸于皮肤整体的方式添加)。视黄醇以成为0.05％的浓度的方式调整后，添加于三维皮肤模型中。关于山茶种子油，在HAS3基因的表达分析时，以浓度成为1％或2％的方式调整后，添加于三维皮肤模型中，在HB-EGF基因的表达分析时，以浓度成为2％、3％或5％的方式调整后，添加于三维皮肤模型中，在透明质酸产生的定量实验时，以浓度成为1％、2％或3％的方式调整后，添加于三维皮肤模型中。另外，在无添加的条件下，也培养24小时或48小时。
再者，所添加的视黄醇溶液的浓度调整是通过如下方式来进行：首先，制备将视黄醇以成为1％的浓度的方式溶解于Decaglyn 1-L、1,3-BG及离子交换水的混合液中而成的浓缩液，利用离子交换水对浓缩液进行稀释。另外，所添加的山茶种子油的浓度调整是通过如下方式来进行：首先，制备将山茶种子油以成为20％的浓度的方式溶解于Decaglyn 1-L、1,3-BG及离子交换水的混合液中而成的浓缩液，利用离子交换水对浓缩液进行稀释。
＜三维皮肤模型的回收方法＞
向新的24孔板中添加PBS 500微升并移至三维皮肤模型。利用吸气器轻轻地抽吸残留于皮肤上的液体，利用PBS进行清洗。利用镊子自杯将三维皮肤模型切离，使用镊子而将薄膜剥落。将所剥落的三维皮肤模型放入至耐热试管中，利用液态氮进行冻结，然后在-80℃下加以保存。
＜自三维皮肤模型的RNA提取及cDNA的制作＞
向15毫升法尔孔(Falcon)塑料试管中添加细胞溶解液(RLT)600微升并进行冰浴冷却。利用液态氮将保存于-80℃下的冻结样品进行冷却后，放入至RLT中，使用均质机保利陶龙(POLYTRON)(金艾玛奇卡(KINEMATICA)公司)均质化40秒。将三维皮肤模型破碎液回收至1.5毫升试管中，并进行离心(RT、14,000转、5分钟)。回收上清液，添加等量的70％EtOH350微升，利用涡旋混合机进行搅拌。Total RNA样品是使用总RNA迷你试剂盒(RNeasy MiniKit)(强根(Qiagen)公司)来进行提取。利用纳米微滴2000分光光度计(NANODROP2000Spectrophotometer)(赛默飞世尔(Thermo SCIENTIFIC))来测定RNA浓度，使用普利姆司丽普(PrimeScript)RT试剂试剂盒(reagent Kit)(塔克拉巴衣奥(Takara-bio)公司)，自约500纳克的Total RNA中制作cDNA。
＜实时PCR＞
实时PCR与所述同样地进行。即，向Primix Ex Taq(塔克拉巴衣奥(Takara-bio)公司)10微升中添加引物、ROX染料(Dye)II及无RNA水，向其中添加约50纳克的cDNA样品，针对每种引物而分别制备实时(Real-Time)PCR测定样品20微升。选择β-肌动蛋白(actin)作为内源性对照，选择HAS3及HB-EGF作为目标基因。通过实时PCR标准7500(Real-Time PCRStandard 7500)(应用生物系统公司(Applied Biosystems))，并根据校准曲线法来进行目标基因的表达分析(相对定量)。
将HAS3基因的表达分析结果(将对照(无添加)设为1时的基因表达比例)示于图2中。另外，将HB-EGF基因分析的该结果(将对照(无添加)设为1时的基因表达比例)示于图3中。在图2及图3中，***、**、*及+表示具有显著性差异(***：P＜0.001、**：P＜0.01、*：P＜0.05、+：P＜0.1)。棒图表的上部的这些记号表示与对照(无添加)相比而具有显著差异。另外，横棒上部的这些记号表示将位于所述横棒的端部的样品彼此加以比较而具有显著差异。再者，在图2中，表示仅添加山茶种子油时(“1％山茶种子油”及“2％山茶种子油”)的结果的棒图表上部的记号表示针对与对照(无添加)相比降低而具有显著差异。
＜自三维皮肤模型的透明质酸提取＞
利用冻结干燥机FDU-2200(东京理化器械股份有限公司)将保存于-80℃下的冻结样品(三维皮肤模型)冻结干燥3小时，并测定干燥重量。相对于干燥重量10毫克(mg)，添加2.5％链霉蛋白酶(actinase)E(科研制药股份有限公司)/10mM Tris-HCl(pH值8.0)溶液1毫升，在加热块(heat block)中且在55℃下反应24小时，从而进行蛋白质分解处理。在加热块中且在100℃下反应10分钟，从而使链霉蛋白酶煮沸失活。其后，进行离心(RT、12,000转、10分钟)并回收上清液。
＜透明质酸产生的定量＞
使用Hyaluronan Quantikine ELISA Kit(船越(funakoshi))对所获得的上清液中的透明质酸量进行定量。将结果示于图4中。在图4中，***及*表示具有显著差异(***：P＜0.001、*：P＜0.05)。横棒上部的***及*分别表示将位于所述横棒的端部的样品彼此加以比较而具有显著差异。
再者，各PCR中所使用的各引物的碱基序列如下所述。(F：表示正向引物，R：表示反向引物)
β-肌动蛋白(actin)
F：TTGTTACAGGAAGTCCCTTGCC
R：ATGCTATCACCTCCCCTGTGTG
HAS2
F：AGTCATGTACACAGCCTTCAGAGCA
R：CACCTCCAACCATGGGATCTTC
HAS3
F：TCGGCGATTCGGTGGACTA
R：CCTCCAGGACTCGAAGCATCTC
HB-EGF
F：GGGACCCATGTCTTCGGAAATA
R：CCAGGATGGTTGTGTGTGGTCATAG
序列表
<110> 太阳星光齿磨公司
<120> 皮肤外用组合物及赋予或增强抗皱纹效果的方法
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<150> JP 2017-252183
<151> 2017-12-27
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于β肌动蛋白的正向PCR引物
<400> 1
ttgttacagg aagtcccttg cc 22
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于β肌动蛋白的反向PCR引物
<400> 2
atgctatcac ctcccctgtg tg 22
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于HAS2的正向PCR引物
<400> 3
agtcatgtac acagccttca gagca 25
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于HAS2的反向PCR引物
<400> 4
cacctccaac catgggatct tc 22
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于HB-EGF的正向PCR引物
<400> 5
gggacccatg tcttcggaaa ta 22
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于HB-EGF的反向PCR引物
<400> 6
ccaggatggt tgtgtgtggt catag 25
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于HAS3的正向PCR引物
<400> 7
tcggcgattc ggtggacta 19
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 用于HAS3的反向PCR引物
<400> 8
cctccaggac tcgaagcatc tc 22

Claims (6)

1.一种皮肤外用组合物，其特征在于：包含视黄醇及山茶种子油。
2.根据权利要求1所述的皮肤外用组合物，其特征在于，山茶种子油的脂肪酸含有比率如以下所述：
3.根据权利要求1或2所述的皮肤外用组合物，其特征在于：为抗皱纹皮肤外用组合物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的皮肤外用组合物，其特征在于：为表皮细胞透明质酸产生亢进用组合物。
5.一种对皮肤外用组合物赋予或增强用于皮肤时的抗皱纹效果的方法，其特征在于：通过使皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油而对所述皮肤外用组合物赋予或增强用于皮肤时的抗皱纹效果。
6.一种增强视黄醇所具有的用于皮肤时的抗皱纹效果的方法，其特征在于：通过使皮肤外用组合物包含视黄醇及山茶种子油而增强所述视黄醇所具有的用于皮肤时的抗皱纹效果。
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