KR20170132887A - 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 펩티드의 용도 - Google Patents

세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 펩티드의 용도 Download PDF

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카트린 곤드랑
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Abstract

본 발명은 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 0.1 내지 1 μM의 합성 펩티드 또는 이의 염 중 하나를 활성제로서 생리학적으로 허용되는 매질 내에 포함하는 조성물의 미용 용도로서, 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한 미용 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 2일 이상의 기간에 걸쳐 1일 1회 이상 국소 적용하는 단계를 포함하는, 상기 신규한 용도에 관한 미용적 처리 방법에 관한 것이다.

Description

세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 펩티드의 용도
본 발명은 미용 및 피부-약학 활성제, 및 이와 관련된 미용 처리 방법의 분야에 관한 것이다.
본 발명은 또한 세포 노화의 출현을 감소시키거나 지연시키기 위한, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 합성 펩티드를 포함하는 조성물의 신규한 미용 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 피부 노화의 징후, 더욱 바람직하게는 주름의 출현을 감소시키거나 지연시키기 위한, 상기 펩티드를 포함하는 조성물의 신규한 미용 용도, 특히 주름에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 조성물을 2일 이상의 기간 동안 1일 1회 이상 국소 적용하는 단계를 포함하는, 이의 신규한 용도에 관한 미용 처리 방법에 관한 것이다.
피부는 여러 층(진피, 진피-표피 접합부, 표피)으로 구성된 외피 기관(enveloping organ)이다. 진피는 피부를 지탱하는 조직이고, 물, 엘라스틴 섬유 및 콜라겐 섬유로 구성된다. 후자는 진피 섬유의 약 70%를 나타내고, 섬유아세포에 의해 합성된다.
콜라겐의 합성, 이의 분해 및 이의 재활용은 피부의 세포외 기질에서의 발현 수준을 유지하는데 필수적인 단계이다. 이러한 모든 단계, 특히 재활용은 고도로 조정된다. 후자의 단계는 세포질 효소, 프롤리다제에 의해 수행된다. 프롤리다제는 C-말단 위치에서 프롤린 또는 하이드록시프롤린을 함유하고 주로 콜라겐으로부터 유도되는 이미도- 및 트라이-펩티드를 분해하는 효소이다(문헌[Surazynski et al., Amino Acids (2008) 35:731-738). 따라서, 프롤리다제의 작용으로 인해, 새로운 콜라겐이 합성될 수 있도록 세포 내에서 프롤린 및 하이드록시프롤린의 저장소가 재생된다. 실제로, 콜라겐은 23% 프롤린과 하이드록시프롤린으로 구성된 단백질이고, 기본 요소인 프롤린과 하이드록시프롤린의 이용가능성은 콜라겐의 신합성에 매우 중요하다(문헌[Barbul A., J. Nutr. 138:2021S-2024S, 2008]). 콜라겐 합성에 사용되는 프롤린의 90%는 프롤리다제의 작용에 기인한다(문헌[Son et al., Biol. Pharm. Bull. 30 (8) 1395-1399 (2007)]).
다른 모든 기관과 마찬가지로, 피부는 노화의 복잡한 생리학적 과정을 거친다. 내인성 또는 연대순 노화는 유전적으로 프로그래밍된 노화와 내생 요인에 의한 생화학적 변화의 결과이다. 피부에서, 이것은 세포와 세포외 기질의 재생 속도가 느려져 진피 및 표피 위축, 건조, 피부의 탄력과 견고성(firmness)의 감소, 및 가는 선(fine line) 및 주름의 출현을 특징으로 하다. 반면에, 외인성 노화는 공해, 태양(자외선), 질병, 생활 습관 등과 같은 환경적 공격에 기인한다. 이것은 이러한 공격에 만성적으로 노출되는 구역에서 내인성 노화와 중첩되고, 이것은 광-노화(photo-aging)로 공지되어 있다.
따라서, 20 내지 80세의 연령에서, 섬유아세포의 수는 절반으로 줄어들 것이다. 또한, 섬유아세포가 노화될 때, 콜라겐 합성 수준 및 프롤리다제의 활성은 감소되고, 이는 노화에서의 이러한 효소의 영향 및 섬유아세포의 노화를 방지하기 위한 분자 표적을 발견하는 이점을 나타낸다(문헌[Palka et al. Tokai J Exp Clin Med., Vol. 21, No. 4-6, pp. 207- 213, 1996]).
연구는 콜라겐 합성을 증가시키고 피부 노화를 방지할 수 있는 활성제를 확인할 수 있었다. 그러나, 세포내 콜라겐 합성 및 세포 노화 지연을 효과적으로 표적화할 수 있는 신규한 화합물을 동정할 필요가 있다.
헥사펩티드-2의 국제 명명법 명칭 INCI를 갖는 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 합성 펩티드는 이의 표백, 은폐(concealing) 및 피부-미백(skin-lightening) 활성에 대해 이미 공지되어 있다(문헌[Sawyer TK et al. Discovery and structure-activity relationships of novel alpha-melanocyte-stimulating hormone inhibitors. Pept Res. 1989 Jan-Feb;2(1):140-6]).
그러나, 피부 노화에 대한 이의 효과는 기술되지 않았다. 대조적으로, 유럽 특허출원 제2 666 780호는 1 μM, 10 μM 및 100 μM의 농도에서 헥사펩티드-2가 시험관내 배양된 섬유아세포에 의한 콜라겐 분비에 영향을 미치지 않는 반면, 바이오틴 기가 화학적으로 치환된 동일한 펩티드는 동일한 농도에서 콜라겐의 분비를 증가시킴을 개시하고 있다.
그럼에도 불구하고, 바이오티닐화된 헥사펩티드-2는 프롤리다제의 활성화 및 콜라겐의 발현에 대해 아무런 효과도 갖지 않았다.
대조적으로, 본 발명자들은 연구 동안 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 합성 펩티드가, 0.1 내지 1 μM 범위의 저농도로 사용될 때, 프롤리다제의 발현 및 활성화를 증가시키고; 유형 I 및 III 콜라겐의 발현을 증가시키고; 노화된 섬유아세포에서의 콜라겐 I의 발현을 증가시키고; 섬유아세포에서의 노화 마커의 발현을 감소시키거나 지연시키고; 주름의 출현을 감소시킴을 증명하였다.
이에 따라, 본 발명자들은 상기 펩티드가 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후, 더욱 구체적으로 주름의 출현을 감소시키거나 지연시키는 것을 목적으로 하는 미용 용도에 적합함을 증명하였다.
본 명세서의 과정 동안, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 합성 펩티드는 "합성 펩티드" 또는 "본 발명에 따른 펩티드" 또는 "헥사펩티드-2"로 구별없이 지칭된다.
따라서, 본 발명의 주요 목적은 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2(서열번호 1)를 갖는 0.1 내지 1 μM의 합성 펩티드 또는 이의 염 중 하나를 활성제로서 생리학적으로 허용되는 매질 중에 포함하되, 2일 이상의 기간 동안 1일 1회 이상 국소 적용되는 조성물의 미용 용도로서, 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한 미용 용도이다.
용어 "피부"는 피부, 점막 및 머리카락과 손발톱을 구성하는 외피 조직의 집합체를 의미하다.
"세포 노화의 출현을 감소시키거나 지연시키는"이란 표현은 본 발명에 따른 펩티드가, 노화가 유전자 FOXO3a의 소멸에 의해 유도되었거나 복제적인 노화가 다수의 계대배양에 의해 유발된 인간 섬유아세포에서의 노화 마커의 발현을 감소시키거나, 실제로 이러한 현상의 출현을 지연시킴을 의미한다.
"생리학적으로 허용되는"이란 용어는 독성, 과민증, 불안정성, 알러지 반응 및 기타 이차적 영향의 위험성 없이 피부 또는 인간 머리카락 및 손발톱과 접촉하기에 적합한 용매 또는 매질을 의미하다.
이때, 본 발명에 따른 희석된 펩티드는 무균 여과에 의해 멸균된다.
"피부 노화의 징후"란 용어는, 예를 들어 피부 얇아짐(thinning), 처짐(sagging), 수분 손실, 피부 아토니(atony), 깊은 주름 및 가는 선, 견고성 및 색조(tone)의 손실, 피부 위축(dermal atrophy) 및 피부의 임의의 내부 열화와 같은 노화에 기인한 피부 및 모발, 손발톱의 외부 외관에 대한 임의의 변형을 의미하고, 피부의 색소 이상(pigmentary anomaly), 흑색점 타입의 검버섯 또는 안색에서의 임의의 다른 불규칙성은 제외한다.
바람직하게는, "피부 노화의 징후를 감소시킨다"라는 표현은 본 발명에 따른 펩티드가 주름의 수, 총 표면적, 총 길이 및 총 깊이를 감소시킴을 의미한다.
유리하게는, 본 발명에 따른 조성물은 국소 적용에 적합한 형태이다.
용어 "국소 적용"은 본 발명에 따른 펩티드를 포함하는 조성물이 피부 또는 점막의 표면 상에 살포되거나 도포되는 것을 의미한다.
유리하게는, 본 발명에 따른 펩티드를 활성제로서 포함하는 조성물은 1일 1회 이상의 빈도로 국소 적용될 수 있다.
다른 양태에서, 상기 조성물은 1일 2회 빈도로 적용될 수 있다.
유리하게는, 본 발명에 따른 펩티드를 활성제로서 포함하는 조성물은 2일 이상의 기간 동안 국소 적용될 수 있다.
다른 양태에서, 상기 조성물은 6주 이상의 기간 동안 적용될 수 있다.
다른 양태에서, 상기 조성물은 3개월 이상의 기간 동안 적용될 수 있다.
본 발명에 따른 펩티드는 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 합성 헥사펩티드이다. 바람직하게는, 펩티드는 트라이플루오로아세테이트 염의 형태이다.
본 발명에 따른 펩티드는 유리하게는 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 용매, 예컨대 물, 글리세롤, 에탄올, 프로판다이올, 부틸렌 글리콜, 다이프로필렌 글리콜, 에톡실화된 또는 프로폭실화된 다이글리콜, 환형 폴리올 또는 이들 용매의 임의의 혼합물에 용해된다.
유리하게는, 본 발명에 따른 펩티드는 물 중 용액 내에 존재한다.
상기 희석 단계 후에, 본 발명에 따른 펩티드는 화장품 분야에서 사용되거나, 분말화된 유기 중합체, 예컨대 활석 및 벤토나이트와 같은 미네랄 지지체 상에 흡착된 리포좀 또는 임의의 다른 마이크로캡슐과 같은 미용 벡터(cosmetic vector)에 캡슐화되거나 포함될 수 있고, 더욱 일반적으로 임의의 생리학적으로 허용되는 벡터에 용해되거나 고정된다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 조성물은 임의의 적절한 방식을 사용하여, 특히 경구 또는 국소적으로(외부적으로) 적용될 수 있고, 상기 조성물의 제형화는 당업자에 의해 변경될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 국소 적용에 적합한 형태로 존재한다. 따라서, 이들 조성물은 생리학적으로 허용되는 매질, 즉 적용 시에 불편할 어떠한 위험 없이 피부 및 모발, 손발톱과 상용성인 매질을 함유해야 하고, 모든 미용 형태를 포함해야 한다.
이들 조성물은 특히 수성, 수-알코올 또는 유성 용액, 수-중-유, 유-중-수 또는 복합 에멀젼, 수성 또는 무수 겔 또는 콜로이드의 형태일 수 있다. 이들 조성물은 또한 피부, 점막, 입술 및/또는 모발 및 손발톱에 적용하기에 적합한 크림, 현탁액 또는 실제로 분말의 형태일 수 있다. 이러한 조성물은 보다 크거나 보다 작은 정도의 유체일 수 있고 크림, 로션, 우유, 세럼, 포마드, 크림, 페이스트 또는 폼의 외관을 가질 수 있다. 그들은 또한 막대와 같은 고체 형태일 수 있거나, 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수 있다. 그들은 케어 제품 및/또는 피부를 화장하기 위한 제품으로서 사용될 수 있다.
또한, 이들 조성물 모두는 적용 분야에서 예상되는 통상적인 용도를 갖는 임의의 첨가제 및 이들의 제형화에 필요한 보조제, 예컨대 보조용매(에탄올, 글리세롤, 벤질 알코올, 보습제 등), 증점제, 희석제, 에멀젼화제, 산화방지제, 착색제, 자외선차단제, 안료, 충전제, 방부제, 방향제, 악취 흡수제, 정유, 올리고-요소, 필수 지방산, 계면활성제, 필름-형성 중합체, 화학 또는 미네랄 필터, 보습제 또는 열수 등을 포함한다. 인용될 수 있는 예는 천연 중합체 유형의 수용성 중합체, 예를 들어, 다당류 또는 폴리펩티드, 메틸셀룰로스 또는 하이드록시프로필셀룰로스 유형의 셀룰로스 유도체, 또는 실제로 합성 중합체, 폴락사머, 카보머, 실록산, PVA 또는 PVP, 특히 애쉴랜드(Ashland)사에 의해 시판되는 중합체이다.
각각의 경우에, 당업자는 보조제 및 이의 비율이 본 발명의 조성물에 대해 요구되는 유리한 특성에 해로운 영향을 미치지 않는 방식으로 선택되도록 주의를 기울일 것이다 . 이러한 보조제는, 예를 들어 조성물의 총 중량의 0.01 내지 20%의 농도로 존재할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물이 에멀젼인 경우, 지방 상은 전체 조성물 중량을 기준으로 5 내지 80 중량%, 바람직하게는 5 내지 50 중량%를 나타낼 수 있다. 조성물에 사용된 에멀젼화제 및 보조-에멀젼화제는 고려 중인 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 것으로부터 선택될 것이다. 예로서, 이들은 전체 조성물 중량에 대하여 0.3 내지 30 중량%의 비율로 사용될 수 있다.
명백하게, 활성제로서 사용되는 본 발명에 따른 펩티드는 단독으로 또는 실제로 다른 활성제와 함께 사용될 수 있다.
유리하게는, 본 발명에 따를 용도를 위한 조성물은 또한 피부 노화의 징후의 예방 및 개선 분야에서 본 발명에 따른 활성제의 작용을 보강하기 위한 하나 이상의 다른 활성제, 또는 실제로 고려 중인 조성물의 특성 범위를 확장시키기 위한 다른 활성제를 함유할 수 있다.
하기 부류의 성분들이 비제한적인 방식으로 인용될 수 있다: 재생제(regenerative agent), 노화방지제, 주름방지제, 진정제, 라디칼 포집제, 당화방지제, 보습제, 항균제, 항진균제, 각질 용해제, 근이완제, 박리제, 고화제, 진피 거대 분자 또는 에너지 대사 또는 미소 순환 또는 손발톱 성장 또는 모발 성장의 합성을 자극하는 제제, 표피의 분화 또는 색소침착을 조절하는 제제, 메탈로-프로테이나제(metallo-proteinase)를 억제하는 제제 또는 실제로 자외선차단제 또는 필터.
보다 특정한 양태에서, 본 발명에 따른 펩티드 이외에, 본 발명에 따른 조성물은 하기 화합물을 포함할 수 있다:
- 사이토크롬 c를 활성화시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 아쿠아포린을 활성화시키는 화합물과 같은 하나 이상의 보습 화합물, 및/또는
- 시르투인을 활성화시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 세포 부착을 증가시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 콜라겐, 피브로넥틴, 라미닌, 글리코사미노글리칸과 같은 기질 단백질의 생산을 증가시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 프로테아좀 활성을 조절하는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 일주기 리듬을 조절하는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- HSP 단백질을 조절하는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 세포 에너지를 증가시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 피부 색소침착을 조절하는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 코엔자임 Q10을 활성화시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 트랜스글루타미나제 또는 HMG-CoA 환원효소를 활성화시키는 화합물과 같은 장벽 기능을 향상시키는 하나 이상의 화합물, 및/또는
- 미토콘드리아를 보호하는 하나 이상의 화합물.
상기 화합물은 천연 유래이거나(예컨대, 식물 펩티드 보습제), 실제로 합성 유래(예컨대, 펩티드)일 수 있다.
이들의 기능과는 독립적으로, 조성물 중 본 발명에 따른 활성제와 결합된 다른 활성제는 매우 광범위한 화학 구조를 가질 수 있다. 인용될 수 있는 비제한적인 예는 펩티드, 비타민 C 및 이의 유도체, B 군으로부터의 비타민, 다이하이드로에피안드로스테론(DHEA), 피토스테롤, 살리실산 및 이의 유도체, 레티노이드, 플라보노이드, 아미노 당, 아졸, 금속 염, 식물 유래의 펩티드 유도체 또는 실제로 중합체이다.
유리하게는, 본 발명에 따른 펩티드는 0.1 내지 1 μM 범위의 농도, 바람직하게는 0.5 내지 1 μM 범위의 농도, 더욱 바람직하게는 정확히 1 μM 미만의 농도로 조성물 중에 존재한다.
임의의 과학적 이론에 얽매이려는 것은 아니지만, 상기 농도 범위는 프롤리다제의 활성 및 콜라겐의 합성에서의 최적화된 증가로서 정의된, 원하는 분자 효과를 얻기 위한 활성제로서 본 발명에 따른 펩티드에 필요한 양을 나타낸다.
유리하게도, 이러한 농도 범위는 타입 I 및 III 콜라겐의 합성에서 최대 증가를 얻는데 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키는 미용 처리 방법으로서, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 0.1 내지 1 μM의 합성 펩티드를 활성제로서 생리학적으로 적합한 매질 중에 포함하는 조성물을 2일 이상의 기간 동안 1일 1회 이상 국소 적용함을 포함하는 미용 처리 방법에 관한 것이다.
본 발명 및 결과적인 장점은 첨부된 도면을 참조하여 하기 비제한적인 양태로부터 더욱 잘 이해될 것이다.
도 1은 상이한 연령의 공여자로부터의 인간 섬유아세포에서의 miRNA-29a 3p의 발현에 대한 연구를 나타낸다.
도 2는 siRNA FOXO3a에 의한 형질감염에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 콜라겐 I의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 효과의 평가를 나타낸다.
도 3은 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 β-갈락토시다제의 활성에 대한 헥사펩티드-2(장기 처리)의 효과의 평가를 나타낸다.
도 4는 헥사펩티드-2의 존재 하의 복제적인 노화에 의해 노화되는 인간 섬유아세포에서 β-갈락토시다제의 활성에 대한 헥사펩티드-2(단기 처리)의 효과의 평가를 나타낸다.
도 5는 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 활성에 대한 헥사펩티드-2(장기 처리)의 효과의 평가를 나타낸다.
도 6은 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 miRNA-29a 3p의 발현에 대한 헥사펩티드-2(장기 처리)의 효과의 평가를 나타낸다.
도 7은 임상 연구에 의해 평가된 주름의 총 표면적에 대한 1% 헥사펩티드-2의 효과를 나타낸다.
도 8은 임상 연구에 의해 평가된 주름의 총 길이에 대한 1% 헥사펩티드-2의 효과를 나타낸다.
도 9는 임상 연구에 의해 평가된 주름의 총 깊이에 대한 1% 헥사펩티드-2의 효과를 나타낸다.
상세한 설명 및 실시예에서, 달리 명시하지 않는 한, 주어진 범위는 상기 범위의 상한치 및 하한치를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
실시예 1: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 발현의 연구
본 연구의 목적은 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다.
프로토콜: 배양된 인간 섬유아세포를 배양 배지에서 희석한 후 0.5 및 1 μM의 최종 농도의 헥사펩티드-2로 24시간 동안 처리하였다(1일 2회 적용). 이어서, 세포를 세척하고, 4℃에서 4분 동안 차가운 메탄올로 고정시켰다. 세포를 프롤리다제에 특이적인 마우스 단일클론 항체(라이프스팬 바이오사이언시스(LifeSpan BioSciences), 참조번호 LS-C115644), 및 이어서 형광색소에 커플링된 항-마우스 이차 항체(인비트로겐(Invitrogen), 참조번호 A21202)의 존재 하에, 세포를 항온처리하였다. 이어서, 세포를 형광 현미경(epifluorescence microscope)(자이쓰 악시오버트(Zeiss Axiovert) 200M 현미경) 하에서 검사하였다. 수득된 사진으로부터 형광의 정량화를 수행하였다.
결과: 표 1에 제시된 현미경 관찰은 헥사펩티드-2로 처리된 세포에서 유의하게 더 강한 세포질 형광을 나타냈다(스튜던트 t-시험을 사용함).
[표 1]
Figure pct00001
결론: 헥사펩티드-2는 인간 섬유아세포에서의 프롤리다제의 발현을 자극한다.
실시예 2: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 활성의 연구
본 연구의 목적은 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 활성에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다.
프로토콜: 배양된 인간 섬유아세포를 배양 배지에서 희석한 후 0.5 및 1 μM의 농도의 헥사펩티드-2를 24시간 동안 처리하였다(1일 2회 적용). 동시에, 섬유아세포를 프롤리다제의 활성화제 및 억제제인 레티노산(시그마(Sigma), 참조번호 2625) 및 Cpz-Pro(바켐(Bachem), 참조번호 4001343)로 처리하였다. 이어서, 150 mM NaCl 용액을 사용하여 세포를 접시에서 분리하였다. 세포 펠렛을 회수하고, 37℃에서 2시간 동안 2 mM MnCl2를 함유하는 용액으로 프롤리다제를 활성화시킨 후, 프롤리다제 기질을 첨가하였다: 37℃에서 1시간 동안 47 mM의 글리신-프롤린(시그마, 참조번호 G3002). 이어서, 각각의 샘플에 함유된 프롤린의 양을 키나드(Chinard) 시약을 사용하여 515 nm의 파장에서 측정하였다. 동시에, 프롤린 농도 범위를 검정선을 확립하기 위해 생성하였다. BCA 단백질 분석 키트(써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 참조번호 2225)를 사용하여 단백질의 양을 측정하였고, 이는 각각의 시료의 단백질 수에 대한 프롤린의 비가 기록될 수 있게 하였다.
결과: 헥사펩티드-2에 의한 치료는 프롤리다제의 활성(스튜던트 t-시험을 사용)이 유의하게 증가되도록 하였다. 결과는 하기 표 2에 제시된다.
[표 2]
Figure pct00002
결론: 헥사펩티드-2는 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 활성을 자극한다.
실시예 3: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 인간 섬유아세포에서 세포내 콜라겐 I의 발현의 연구
본 연구의 목적은 유세포 분석기에 의한 인간 섬유아세포에서의 세포내 콜라겐 I의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다.
프로토콜: 배양된 인간 섬유아세포를 배양 배지에서 희석한 후 0.5 및 1 μM의 농도의 헥사펩티드-2로 48시간 동안 처리하였다(1일 2회 적용). 동시에, 섬유아세포를 콜라겐 I에 대한 활성화제인 TGF-β(알앤디 시스템(R&D system), 참조번호 240B)로 처리하였다. 섬유아세포를 트립신처리하고, 세포 펠렛을 회수하였다. 이어서, 세포를 4℃에서 15분 동안 차가운 메탄올로 고정시켰다. 형광색소와 커플링된 콜라겐 I에 특이적인 마우스 단클론 항체(밀리포어(Millipore), 참조번호 항 콜라겐 타입 I, 클론: 5D8-G9)를 이용하여 면역표지를 수행하였다. 이어서, 10,000개의 세포를 유세포 분석기(구아바 이지사이트(Guava EasyCyte))로 분석하여 이들 각각의 형광의 양을 결정하였다.
결과: 유세포 분석기에 의한 분석에 따라서, 헥사펩티드-2로 처리된 세포에서 보다 강한 세포질 형광이 검출되었다. 결과는 하기 표 3에 제시된다.
[표 3]
Figure pct00003
결론: 헥사펩티드-2는 인간 섬유아세포에서 콜라겐 I의 발현을 자극한다.
실시예 4: 헥사펩티드-2의 존재 하에 생체 외에서, 인간 피부에서 콜라겐 I 및 III의 발현의 연구
본 연구의 목적은 생체외 인간 피부에서 콜라겐 I 및 III의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다.
프로토콜: 인간 피부 샘플을 공기/액체 계면에서 배양하였다. 헥사펩티드-2를 1일 2회 적용의 양으로 배양 배지에서 희석한 후 0.5 및 1 μM의 농도로 샘플에 국소 적용하고, 이어서, 37℃에서 48시간 동안 항온처리하였다.
이어서, 이들 피부 샘플을 폼알데하이드로 고정하고, 이어서 파라핀에 포함시키고, 이어서, 4 μm 섹션이 생성되었다.
이어서, 초음파 항온처리 및 이어지는 트립신처리에 의해 특정 부위를 데마스킹(demasking)시킨 후, 콜라겐 I 및 III의 표지를 수행하였다. 콜라겐 I에 특이적인 토끼 다클론 항체(록랜드(Rockland), 참조번호 600-401-103-0.5), 콜라겐 III에 특이적인 토끼 다클론 항체(록랜드, 참조번호 600-401-105-0.5), 이어서 형광색소에 커플링된 항-토끼 이차 항체(인비트로겐, 참조 A21206)를 사용하여 면역표지를 수행하였다. 이어서, 세포를 형광 현미경(자이쓰 악시오버트 200M 현미경) 하에서 검사하였다. 수득된 사진으로부터 형광의 정량화를 수행하였다.
결과: 현미경 관찰은 헥사펩티드-2로 처리된 생검의 진피에서 상당히 더 강한 형광을 나타냈다. 결과는 하기 표 4에 제시된다.
[표 4]
Figure pct00004
결론: 헥사펩티드-2는 생체외 인간 피부에서 콜라겐 I 및 III의 발현을 자극한다.
실시예 5: 상이한 연령의 공여자로부터 유래하는 인간 섬유아세포에서 miRNA-29a 3p의 발현의 연구
본 연구의 목적은 상이한 연령의 공여자로부터의 인간 섬유아세포에서 miRNA-29a 3p의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 qPCR에 의해 결정하는 것이었다. miRNA는 이들의 표적을 억제함으로써 표적의 전사-후 조절에 기본적인 역할을한다. 문헌에 따르면, miRNA-29a의 발현이 노화에 따라 증가한다는 것이 증명되었다(문헌[Mancini M. et al., 2014]). miRanda와 같은 데이터베이스를 사용함으로써, miRNA-29a의 표적이 콜라겐 I 및 프롤리다제인 것으로 동정되었다.
프로토콜: 33, 45 및 66세의 3명의 공여자로부터의 인간 섬유아세포를 배양 배지에서 0.5 및 1 μM의 농도의 헥사펩티드-2로 밤새 처리하였다(1회 적용).
miRNA는 추출 키트(앰비온(Ambion), 참조번호 AM1561)를 사용하여 추출하고, 이어서 특이적인 키트(어플라이드 바이오시스템(Applied Biosystem), 참조번호 4374966)를 사용하여 역전사시켰다. miRNA-29a 3p에 특이적인 태크맨 유전자 발현 어세이(TaqMan Gene Expression Assay)(어플라이드 바이오시스템즈, 참조번호 002112)와 대조군 엔도겐으로서 사용되는 RNU44에 특이적인 태크맨 유전자 발현 어세이(어플라이드 바이오시스템즈, 참조번호 001094)를 사용하여 실시간 PCR을 써모사이클러(thermocycler)에서 수행하였다. miRNA-29a 3p의 발현의 상대적인 정량화는 비교 Ct 방법에 의해 수행되었다.
결과: 세 연령을 비교하면, miRNA-29a 3p의 발현은 노화에 따라 +32%(33세와 45세 사이) 및 +48%(45세와 66세 사이)만큼 유의하게 증가한다(스튜던트 t-시험). 33세, 45세 및 66세의 각각의 연령에서, 헥사펩티드-2로 처리된 세포는 각각 miRNA-29a 3p의 발현에서 -13%, -14% 및 -27%의 유의한 감소를 나타냈다(스튜던트 t-시험). 결과는 도 1에 제시된다.
결론: miRNA-29a 3p의 발현은 세포가 헥사펩티드-2로 처리될 때 감소되고, 이는 콜라겐 및 프롤리다제와 같은 표적에 대한 이의 발현의 부정적인 영향이 제한될 수 있음을 의미한다.
실시예 6: 헥사펩티드-2의 존재 하에, siRNA FOXO3a를 사용하는 형질감염에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 β-갈락토시다제의 활성의 연구
본 연구의 목적은 노화된 인간 섬유아세포에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다. 노화는 FOXO3a로부터의 간섭 RNA(siRNA)를 사용하는 FOXO3a 유전자의 억제에 의해 유발되었다. FOXO3a는 세포 장수에 관여하는 포크헤드(Forkhead) 타입 전사 인자이다. FOXO3a의 발현을 억제함으로써, 세포는 노화 세포의 특징인 β-갈락토시다제를 과다-발현한다.
프로토콜: 배양된 인간 섬유아세포를 리포펙타민(Lipofectamine: 상표) RNAiMAX(인비트로겐, 참조번호 6531)에 의한 형질감염 기술을 사용하여 25 nM의 최종 농도의 FOXO3a(인비트로겐, 참조번호 HSS177176)의 특정 siRNA로 처리하거나 처리하지 않았고, 배지에서 1 μM의 최종 농도의 헥사펩티드-2로 48시간 동안 처리하거나 처리하지 않았다(1일 2회 적용).
세포를 세정하고, 고정 완충액(0.2% 글루타르알데하이드, 2% 폼알데하이드)에 고정시켰다. 이어서, 세포를, 40 mM의 시트르산/포스페이트(pH 6) 중 1 mg/mL X-Gal, 5 mM K3FeCN6, 5 mM K4FeCN6, 150 mM NaCl 및 2 mM MgCl2의 용액을 사용하여, 24시간 동안 CO2 없이 37℃에서 배양하였다. 이어서, 세포를 백색광 하에서 현미경으로 검사하였다(니콘 이클립스(Nikon Eclipse) E600 현미경).
결과: 특이적인 β-갈락토시다제 활성을 갖는 노화 세포를 청색으로 염색하였다. FOXO3a의 특이적인 siRNA로 처리된 세포는 노화와 연결된 β-갈락토시다제의 증가를 나타내어, 청색-염색된 세포의 수를 증가시켰다. FOXO3a의 특이적인 siRNA로 형질감염되고 헥사펩티드-2로 처리된 세포는 노화와 연결된 β-갈락토시다제의 활성에서의 현저한 감소를 나타내어 청색-염색된 세포의 수를 감소시켰다(결과는 표시되지 않음).
결론: 헥사펩티드-2에 의한 처리는 미처리된 형질감염 세포보다 노화 수준이 낮은 것으로 세포가 관찰되도록 하였다.
실시예 7: 헥사펩티드-2의 존재 하에, siRNA FOXO3a를 사용하는 형질감염에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 콜라겐 I의 발현의 연구
본 연구의 목적은 siRNA FOXO3a를 사용하는 형질감염에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 콜라겐 I의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다.
프로토콜: 배양된 인간 섬유아세포를 리포펙타민(상표) RNAiMAX(인비트로겐, 참조번호 6531)에 의한 형질감염 기술을 사용하여 25 nM의 최종 농도의 FOXO3a의 특이적인 siRNA(인비트로겐, 참조번호 HSS177176)로 처리하거나 처리하지 않고, 배양 배지에서 0.5 또는 1 μM의 농도의 헥사펩티드-2로 48시간 동안 처리하거나 처리하지 않았다(1일 2회 적용).
섬유아세포를 트립신처리하고, 세포 펠렛을 회수하였다. 이어서, 세포를 4℃에서 15분 동안 차가운 메탄올로 고정시켰다. 형광색소와 커플링된 콜라겐 I에 특이적인 마우스 단클론 항체(밀리포어, 참조번호 항 콜라겐 타입 I, 클론: 5D8-G9)를 사용하여 면역표지를 수행하였다. 이어서, 유세포 분석기(구아바 이지사이트)를 사용하여 10,000개의 세포를 분석하여 이들 각각의 형광 수준을 결정하였다.
결과: siRNA FOXO3a를 사용하는 형질감염에 의한 노화의 유발 후, 이들 세포에서 콜라겐 I의 발현 감소가 관찰되었다. 노화되고 헥사펩티드-2 자체로 처리된 세포는 콜라겐 Ⅰ의 발현에서 보다 적은 감소를 나타냈다. 결과는 도 2에 제시된다.
결론: 헥사펩티드-2에 의한 치료는 콜라겐 I의 발현 감소와 같은 노화의 효과를 제한할 수 있다.
실시예 8: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 반복적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 β-갈락토시다제의 활성의 연구(장기 처리)
본 연구의 목적은 노화된 인간 섬유아세포에서 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다. 노화가 48시간에 걸쳐 유발된, siRNA FOXO3a의 형질감염에 의해 수득된 노화 모델과 대조적으로, 복제적인 노화는 약 3개월을 필요로 하는 장기 과정이다. 섬유아세포는 트립신처리에 의해 규칙적으로 계대배양되어 분열을 일으키고 결과적으로 노화되었다.
프로토콜: 인간 섬유아세포를 특이적인 배지에서 배양하고, 배양 하에 유지시키고(27 초과의 계대), 배양 배지에서 1 μM의 농도의 헥사펩티드-2를 매일 적용하여 처리하거나 처리하지 않았다(즉, 1주 당 5회 적용). 일부 세포는 각각의 계대에서 동결되었다. 이어서, 핵심 계대를 선택하였다: 계대 4, 12, 16, 20, 24 및 27. 동결 후, 1 μM 헥사펩티드-2로 처리되거나 처리되지 않은 섬유아세포의 노화 표현형을 β-갈락토시다제의 활성을 어세잉(assaying)함으로써 평가하였다.
이를 위하여, 세포를 세정하고, 고정 완충액(0.2% 글루타르알데하이드, 2% 폼알데하이드)에 고정시켰다. 이어서, 40 mM의 시트르산/포스페이트(pH 6) 중 1 mg/mL X-Gal, 5 mM K3FeCN6, 5 mM K4FeCN6, 150 mM NaCl 및 2 mM MgCl2의 용액을 사용하여 24시간 동안 CO2 없이 37℃에서 항온처리하였다. 이어서, 세포를 백색광 하에서 현미경으로 검사하였다(니콘 이클립스 E600 현미경).
결과: 세포 계대배양의 과정 중에, β-갈락토시다제의 활성이 증가되었고, 이는 노화 수준이 각각의 계대에 증가하였음을 나타냈다. 이들 세포를 1 μM 헥사펩티드-2로 처리하는 경우, 본 발명자들은 미처리된 세포에 비해 -22%의 β-갈락토시다제의 활성의 전반적으로 유의한 감소를 관찰하였다(스튜던트 t-시험을 사용함). 결과는 도 3에 도시된다.
결론: 약 3개월의 장기 처리 후에 헥사펩티드-2로 처리된 세포의 노화 정도가 미치료된 세포보다 낮음을 관찰하였다. 따라서, 헥사펩티드-2에 의한 처리는 세포 노화를 늦출 수 있다.
실시예 9: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 β-갈락토시다제의 활성의 연구(단기 처리)
본 연구의 목적은 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다.
프로토콜: 인간 섬유아세포를 특이적인 배지에서 배양하고, 장기간 배양 처리 하에 유지하였다(28 초과의 계대, 즉 약 3개월). 일부 세포를 각각의 계대에서 동결시켰다. 이어서, 핵심 계대를 선택하였다: 계대 4, 12, 16, 20 및 28. 동결 후, 섬유아세포를 배양 배지에서 1 μM 헥사펩티드-2로 48시간 동안 처리하였다(1일 2회 적용). 1 μM 헥사펩티드-2로 처리되거나 처리되지 않은 섬유아세포의 노화 표현형을 β-갈락토시다제의 활성을 어세잉함으로써 평가하였다.
이를 위하여, 세포를 세정하고, 고정 완충액(0.2% 글루타르알데하이드, 2% 폼알데하이드)에 고정시켰다. 이어서, 40 mM 시트르산/포스페이트(pH 6) 중 1 mg/mL X-Gal, 5 mM K3FeCN6, 5 mM K4FeCN6, 150 mM NaCl 및 2 mM MgCl2의 용액을 사용하여 24시간 동안 CO2 없이 37℃에서 세포를 항온처리하였다. 이어서, 세포를 백색광 하에서 현미경으로 검사하였다(니콘 이클립스 E600 현미경).
결과: 세포 계대배양의 과정 동안, β-갈락토시다제의 활성이 증가하였고, 이는 각각의 계대의 노화 수준을 나타낸다. 노화된 이들 세포를 1 μM 헥사펩티드-2로 처리하는 경우, 본 발명자들은 미처리된 세포에 비해 -31%의 β-갈락토시다제의 활성의 전반적으로 유의한 감소를 관찰하였다(스튜던트 t-시험을 사용함). 결과는 도 4에 제시된다.
결론: 48시간의 단기 처리에 따라서, 본 발명자들은 헥사펩티드-2로 처리된 세포가 미처리된 세포보다 낮은 수준의 노화를 갖는다는 것을 관찰하였다. 따라서, 헥사펩티드-2에 의한 처리는 세포 노화를 늦추는데 사용될 수 있다.
실시예 10: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 활성의 연구(장기 처리)
본 연구의 목적은 노화된 인간 섬유아세포에서 프롤리다제의 활성에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다. 문헌에 따르면, 프롤리다제의 활성은 세포 노화에 따라 감소하고, 이것은 노화 세포에서 관찰되는 콜라겐 I의 감소와 관련된다(문헌[Palka et al., Tokai J Exp Clin Med 1996]).
프로토콜: 인간 섬유아세포를 특이적인 배지에서 배양하고, 장기 배양 처리 하에 유지시키고(20 초과의 계대, 즉 약 3개월), 배양 배지에서 1 μM의 농도의 헥사펩티드-2의 매일 적용을 사용하여 처리하거나 처리하지 않았다(1주 당 5회). 일부 세포를 각각의 계대에서 동결시켰다. 이어서, 두 계대를 선택하였다: 계대 12 및 20. 동결 후, 프롤리다제의 활성을 이러한 조건에 대해 관찰하였다.
이를 위하여, 150 mM NaCl 용액으로 세포를 지지체에서 분리하였다. 세포 펠렛을 회수하고, 37℃에서 2시간 동안 2 mM MnCl2를 함유하는 용액으로 프롤리다제를 활성화시킨 후, 프롤리다제를 위한 기질을 첨가하였다: 37℃에서 1시간 동안 글리신-프롤린(시그마, 참조번호 G3002). 이어서, 각각의 샘플에 함유된 프롤린 함량을 키나드 시약을 사용하여 515 nm의 파장에서 측정하였다. 동시에, 검정선을 확립하기 위하여 프롤린에 대한 농도 범위를 생성하였다. BCA 단백질 어세이 키트(써모 사이언티픽, 참조번호 23225)를 사용하여 단백질 함량을 측정하여, 프롤린 함량을 각각의 샘플의 단백질 수와 관련시켰다.
결과: 계대 P12(젊은 것으로 간주되는 세포)와 P20(노화된 것으로 간주되는 세포)의 비교는 복제적인 노화 동안 프롤리다제의 활성이 36%만큼 감소됨을 나타낸다(스튜던트 t-시험을 사용하는 유의한 값). 흥미롭게도, 헥사펩티드-2는 젊은 세포(P12)에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않았지만, 노화 세포(P20)로의 헥사펩티드-2의 적용은 동일한 계대의 미처리된 대조군 세포에 비해, 프롤리다제의 활성에서 20%의 복원을 나타냈다(스튜던트 t-시험을 사용하는 유의한 값).
결과는 도 5에 도시된다.
결론: 노화 동안, 프롤리다제의 활성은 콜라겐의 발현과 함께 감소한다. 헥사펩티드-2에 의한 처리는 프롤리다제의 활성을 유지시켜 콜라겐 재활용을 유지할 수 있다.
실시예 11: 헥사펩티드-2의 존재 하에, 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 miRNA-29a 3p의 발현의 연구(장기 처리)
본 연구의 목적은 복제적인 노화에 의해 노화된 인간 섬유아세포에서 miRNA-29a 3p의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 영향을 결정하는 것이었다. miRNA는 이들의 표적을 억제함으로써 표적의 전사-후 조절에 근본적인 역할을 한다. miRNA-29a의 발현이 노화에 따라 증가하는 것은 문헌[Mancini M. et al., 2014]에 제시되었다. miRanda와 같은 데이터베이스에 의해 콜라겐 I 및 프롤리다제를 비롯한 miRNA-29a의 표적이 동정되었다.
프로토콜: 인간 섬유아세포를 특이적인 배지에서 배양하고 장기 배양 처리 하에 유지하고(24 초과의 계대, 즉 약 3개월), 배양 배지에서 1 μM의 농도로 헥사펩티드-2를 매일 적용하여 처리하거나 처리하지 않았다(1주 당 5회). 각각의 계대의 경우, 일부 세포를 동결시켰다. 이어서, 세 계대를 선택하였다: 계대 4, 12 및 24. 동결 후, 정량적 PCR에 의해 miRNA-29a 3p의 발현이 이들 조건에서 관찰되었다.
추출 키트(앰비온, 참조번호 AM1561)를 사용하여 miRNA를 추출한 후, 특이적인 키트(어플라이드 바이오시스템즈, 참조번호 4374966)로 역전사시켰다. miRNA-29a 3p에 특이적인 태크맨 유전자 발현 어세이(어플라이드 바이오시스템즈, 002112) 및 내인성 대조군으로 사용되는 RNU44에 특이적인 태크맨 유전자 발현 어세이(어플라이드 바이오시스템즈, 001094)를 사용하여 실시간 PCR을 써모사이클러에서 수행하였다. 비교 Ct 방법을 사용하여 miRNA-29a 3p 발현의 상대적 정량을 수행하였다.
결과: P4, P12 및 P20의 세 계대의 비교에 따라, 본 발명자들은 miRNA-29a 3p의 발현이 노화에 따라 +25%(P4와 P12 사이) 및 +52%(P4와 P24 사이)만큼 유의하게 증가함을 관찰할 수 있었다(스튜던트 t-시험). 계대 4에서, miRNA-29a 3p의 발현에 대한 헥사펩티드-2의 효과는 전혀 관찰되지 않았다. 대조적으로, 계대 12 및 24에서, 헥사펩티드-2로 처리된 세포는 각각 miRNA-29a 3p의 발현에서 -16% 및 -7%의 유의한 감소를 나타냈다(스튜던트 t-시험을 사용함). 결과는 도 6에 도시된다.
결론: 1 μM 헥사펩티드-2로 처리된 세포는 노화에도 불구하고 miRNA-29a 3p의 일정 수준의 발현을 유지하는 것으로 나타났고, 이에 따라 콜라겐 및 프롤리다제와 같은 표적에 대한 그의 발현의 부정적인 영향이 제한될 수 있다.
실시예 12: 안면용 노화방지 미용 조성무의 제조
Figure pct00005
이러한 제형의 제조를 위한 조건 하에서, 1% 헥사펩티드-2는 1 μM의 농도에 상응한다.
헥사펩티드-2를 정제수로 대체한 것을 제외하고는, "플라시보(placebo)"로 지칭되는 안면용 미용 조성물을 정확히 동일한 방식으로 제조하였다.
실시예 13: 주름의 출현에 대한 1% 헥사펩티드-2의 효과의 연구(임상 연구)
목적: 플라시보와 비교되는, 1% 헥사펩티드-2를 포함하는 미용 조성물로 국소 처리한 후의 주름의 출현에 관한 임상 연구.
프로토콜:
참가자의 수: 35명(35 내지 65세의 연령).
연구: 플라시보에 대한 이중 맹검 연구.
시험된 제품: 플라시보 조성물에 대해 실시예 12에 기술된 미용 조성물 중 헥사펩티드-2, 1% 제형(즉, 1 μM의 최종 농도). 하기 조건 하에 수행됨:
적용 횟수: 2 mg/cm2의 복용량으로 1일 2회 적용, 아침 및 저녁.
시험 기간: 6주.
대조군 방문: 제0일(D0) 및 제42일(D42).
측정: 비지올린(Visioline: 등록상표) VL650 소프트웨어를 사용하는, 까마귀 발로 제조된 실리콘 복제물의 분석.
통게학적 분석: 데이터 분포의 정규성에 따라, "t" 스튜던트 시험 또는 윌콕슨(Wilcoxon) 시험을 사용하였다.
결과: 실시예 12에 따른 조성물 중 1% 제형인 헥사펩티드-2를 적용한 후, 실리콘 복제물의 분석은 D42에 주름의 수, 총 표면적, 총 길이, 총 깊이 및 최대 깊이가 플라시보에 비해 통계학적으로 유의하게 감소됨을 나타냈다. 결과는 도 7, 8 및 9 및 하기 표 5에 제시된다.
[표 5]
Figure pct00006
결론: 42일에 걸쳐 1% 헥사펩티드-2(즉, 1 μM의 농도)의 국소 적용은 주름의 출현을 통계학적으로 유의하게 감소시킨다.
SEQUENCE LISTING <110> ISP Investments LLC <120> NOVEL USES OF THE PEPTIDE OF SEQUENCE HIS-D-TRP-ALA-TRP-D-PHE-LYS-NH2 FOR REDUCING OR DELAYING THE APPEARANCE OF CELL SENESCENCE AND SIGNS OF SKIN AGEING <130> Bv 15-176 PCT <140> PCT/EP2016/057813 <141> 2016-04-08 <150> FR 1553139 <151> 2015-04-10 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Configuration D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Configuration D <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> AMIDATION <400> 1 His Trp Ala Trp Phe Lys 1 5

Claims (10)

  1. 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2(서열번호 1)를 갖는 0.1 내지 1 μM의 합성 펩티드 또는 이의 염 중 하나를 활성제로서 생리학적으로 허용되는 매질 중에 포함하되, 2일 이상의 기간 동안 1일 1회 이상 국소 적용되는 조성물의 미용 용도로서,
    피부 얇아짐(thinning), 처짐(sagging), 수분 손실, 피부 아토니(atony), 깊은 주름 및 가는 선(fine line), 견고성(firmness) 및 색조(tone)의 손실, 및 피부 위축(dermal atrophy)으로부터 선택되고 피부의 색소 이상(pigmentary anomaly)을 제외하는 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한 미용 용도.
  2. 제1항에 있어서,
    조성물이 0.5 내지 1 μM의 합성 펩티드를 포함하는, 미용 용도.
  3. 제1항에 있어서,
    조성물이 1 μM 미만의 합성 펩티드를 포함하는, 미용 용도.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    적용이 1일 2회 수행되는, 미용 용도.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    적용이 6주 이상의 기간에 걸쳐 수행되는, 미용 용도.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    적용이 3개월 이상의 기간에 걸쳐 수행되는, 미용 용도.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    합성 펩티드가 프롤리다제의 활성 및 콜라겐의 합성을 증가시키는, 미용 용도.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    피부 노화의 징후가 주름인, 미용 용도.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물이 본 발명에 따른 활성제의 작용을 보강하기 위한 하나 이상의 다른 활성제를 추가로 포함하고, 상기 다른 활성제가 펩티드, 비타민 C 및 이의 유도체, 비타민 류, 비타민 C 및 이의 유도체, 군 B로부터의 비타민, 다이하이드로에피안드로스테론(DHEA), 피토스테롤, 살리실산 및 이의 유도체, 레티노이드, 플라보노이드, 아미노 당, 아졸, 금속 염, 식물 기원의 펩티드 추출물 및 실제로 중합체로부터 선택되는, 미용 용도.
  10. 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2(서열번호 1)를 갖는 0.1 내지 1 μM의 합성 펩티드를 활성제로서 생리학적으로 허용되는 매질 중에 포함하는 조성물을 2일 이상의 기간에 걸쳐 1일 1회 이상 국소 적용함을 포함하는, 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키는 미용 처리 방법.
KR1020177032447A 2015-04-10 2016-04-08 세포 노화의 출현 및 피부 노화의 징후를 감소시키거나 지연시키기 위한, 서열 His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2를 갖는 펩티드의 용도 KR20170132887A (ko)

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