CN109957584A - 一种用于制备（r）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法 - Google Patents

一种用于制备（r）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法 Download PDF

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    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
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Abstract

本发明涉及酶法制备手性醇，属于基因工程技术用于制备医药中间体的领域。一种用于制备（R）‑(4‑氯苯基)‑2‑吡啶甲醇的生物催化方法，(4‑氯苯基)(2‑吡啶基)甲酮在酮还原酶催化作用下，转化为（R）‑(4‑氯苯基)‑2‑吡啶甲醇。该方法通过筛选出特定氨基酸序列的酮还原酶用于催化制备（R）‑(4‑氯苯基)‑2‑吡啶甲醇，实现底物99%以上的转化率，所制备的产物ee值不低于99.5%，且反应的底物浓度最高接近230g/L,具备工业放大生产的价值。该反应能够使得底物完全、高效的转化成为目标产物，并且所制备的产物分离提纯简单，后处理成本低，整个工艺流程环境友好度高，原子利用率高。

Description

一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法
技术领域
本发明涉及一种中间体制备方法，尤其涉及一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法。
背景技术
马来酸卡比沙明是一类乙醇胺类抗组织胺药物，具有温和的镇静作用，过去数年内被证明安全和有效，一直被世界各国广泛使用，有很多包含卡比沙明的复合制剂，包括固体缓释药物。2013年4月3日，美国FDA批准了马来酸卡比沙明缓释剂(Karbinal ER, TrisPH)，用于2岁及以上儿童的季节性和常年性过敏性鼻炎的治疗。商品化的卡比沙明药物已逐步推向市场，目前手性卡比沙明药物的研发正在进行中，将进一步提高药物活性，降低药物副作用。卡比沙明有效成份及其光学异构体分别如式I、式II所示：
式I
式II
根据以上药物分子结构可以看出，手性的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇分子在手性卡比沙明的研发及商品化生产过程中，具备较高的合成价值，可作为关键中间体用于手性卡比沙明原料药的制备。
类似分子结构的药物还有苯磺酸贝托斯汀，由日本田边(Tanabe Seiyaku) 公司和日本宇部(UBEIndustries)公司联合开发的组胺H1受体拮抗剂，是非镇静类高选择性组胺H1受体拮抗剂类药物，具有抗过敏、止痒的效果，能抑制嗜酸性粒细胞浸润至外周组织，因此对缓解鼻粘膜的炎症反应，即鼻塞，较现有的药物有效；且苯磺酸贝托斯汀很少进入脑内，无镇静作用，抗胆碱作用与抗组胺作用相分离，其它不良反应极小，并具有优良的药效学作用和临床效果，作用强度优于酮替芬、特非那定、西替立嗪、依匹那丁，临床应用前景广阔。2002 年批准用于荨麻疹/瘙痒，由Mitsubishi Tanabe Pharma 公司在日本销售，商品名为Talion(坦亮)。苯磺贝托斯汀片已进口我国，用于治疗过敏性鼻炎、荨麻疹、皮肤疾病引起的瘙痒( 湿疹性皮炎、痒疹、皮肤瘙痒症)。其化学名为(+)-(S)-4-[4-[(4-氯代苯基)(2-吡啶基) 甲氧基] 哌啶子基]丁酸一苯磺酸盐，有效成分的化学结构式如下：
式III
随着对贝托斯汀药理学研究的进一步推进，贝托斯汀的光学异构体也具备一定的市场需求；贝托斯汀工业化生产过程中，贝托斯汀光学异构体作为标准对照品已具备广泛的应用市场。目前贝托斯汀光学异构体并无专门的生产路线，而是作为贝他斯汀的拆分纯化副产品制备。但随着手性合成技术研究的不断伸入，作为副产物的贝托斯汀光学异构体产出逐步降低，难以满足市场需求。根据中国专利CN102675283A,CN103121966A公开的一种采用(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇直接合成贝托斯汀的工艺路线IV来分析可知，(R) -(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇将成为制备贝托斯汀光学异构体的关键中间体。
式IV
综上所述，在手性卡比沙明和贝托斯汀药物研究、生产领域,对(R)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇具有广泛的需求，目前我们共检索到以下几种合成方法可用于制备该手性化合物：
专利号为201110369002.4的中国专利采用BINAL-H还原4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮得到R或S构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇，光学纯度达到80%～95.7%不等。
专利号为201110419992.8的中国专利采用克鲁维假丝酵母JNU-KR1（菌种保藏编号为：CCTCC NO：M 2011385），催化还原4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮得到R或S构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇，最高可达到86%的ee值，反应底物浓度为6g/L。
专利号为PCT/IB2014/066031的国际专利更是筛选了9中不同来源的微生物，用于还原4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮得到R或S构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇，所优化得到的R-构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇ee值最高94%，S-构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇ee值最高96%，反应底物浓度不超过5wt%。
文献School of Pharmaceutical Sciences,University of Shizuoka,52-1Yada,Shizuoka 422,Japan. December 14 1995公开了一种酵母菌还原4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮得到R或S构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的工艺，但光学纯度较低，不具备实用性。
鉴于现有技术中，还原4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮得到R构型的(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的工艺多存在产物光学纯度低的问题。即使有些生物酶能够实现接近95.7%的ee值，但距ICH (人用药国际注册技术要求)对药物光学纯度99% ee值仍有不少差距，其制备的原料药必须再经过手性纯化工艺才可符合ICH给出的药物生产规范。
其次，现有技术中还存在收率低，或催化剂昂贵、反应体系不环保等问题，阻碍手性的（R）-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的工艺推向工业化生产。
因此，目前急需一种新的适于工业化应用的技术，实现高效率、低成本制备高光学纯度的手性（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇医药中间体，满足贝托斯汀及类似结构药物的生产需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法, 该方法能够通过可工业化的工艺高转化率、高光学纯度的制备出（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇。
技术方案
一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，如式V所示，将(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮在酮还原酶催化作用下，转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇：
式V
式V中所采用的酮还原酶（KRED）的氨基酸序列如（a）或（b）所述：
（a）、所述酮还原酶具有如表SEQ ID No.2 所记载的氨基酸序列；
（b）、所述酮还原酶为将表SEQ ID No.2 中的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且能催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的酮还原酶。
进一步，（b）所述的酮还原酶的氨基酸序列与（a）所述酮还原酶的氨基酸序列具备85%以上的同源性，且该氨基酸序列所编码的酮还原酶能催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇。
进一步，（b）所述的酮还原酶的氨基酸序列与（a）所述酮还原酶的氨基酸序列具备90%以上的同源性，优选为具备93%以上的同源性，更优选为具备95%以上的同源性，最优选为具备97%以上的同源性。
进一步，所述酮还原酶的基因如下（c）或（d）：
（c）、基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.1所示；
（d）、与（c）具有N%以上的同源性（N选自85、90、95、99），且能编码催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转换为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的酮还原酶的基因。
一种含有上述基因的重组表达载体、重组菌或转基因细胞系。
进一步，上述酮还原酶以酮还原酶酶粉、酮还原酶酶液、含酮还原酶的细胞等形式参与催化反应，用于催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇。
进一步，所述酮还原酶催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的工艺步骤包括：将(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮、酮还原酶酶粉或含有酮还原酶的细胞（本技术方案中所述“含有酮还原酶的细胞”是指本技术领域常见的用于生产发酵的工程细菌，比如酵母菌、大肠杆菌等。）、辅酶、缓冲剂配置成水/异丙醇混合溶液，反应得到产物。
进一步，所述(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮浓度为1～280g/L，优选为1～230g/L，更优选为80～230g/L；
进一步，所述酮还原酶的酶粉使用质量与含有酮还原酶细胞的使用质量之比为1:4～6。即1质量份数的酮还原酶酶粉催化效率相当于4～6质量份数酮还原酶细胞的催化效率。
进一步，所述含有酮还原酶的细胞浓度为20～90g/L，优选为30～70g/L。如果采用酮还原酶酶粉替换酮还原酶细胞，则酮还原酶酶粉的使用浓度为4～20g/L；
进一步，所述水/异丙醇溶液中，异丙醇与水体积比为1:6～15，优选为1:8～12；
进一步，反应体系中可以加入辅酶促进反应，当采用含酮还原酶的细胞时，细胞内部含有少量辅酶，此时也可以不加入辅酶；某些情况下制备的酮还原酶酶粉中亦含有少量辅酶，此时也可以不加入辅酶。但反应体系中也可以加入辅酶进一步促进反应进行，当反应体系中加入辅酶促进反应时，所述辅酶选自NAD+、NADH、NADP+和NADPH 的任意一种或它们的组合物，优选为NADP；所述辅酶浓度为0.02～0.5 g/L，优选为0.1～0.4g/L。
进一步，本技术方案中所采用的辅酶，均购来自尚科生物医药（上海）有限公司。
进一步，所述缓冲剂为磷酸-磷酸盐缓冲剂、柠檬酸-柠檬酸盐缓冲剂，优选为磷酸-磷酸盐缓冲剂；缓冲剂的pH为6.0～9.0，优选为6.4～8.7；缓冲剂摩尔浓度为0.01～0.5mol/L,优选为0.05～0.2 mol/L。
进一步，所述催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的反应温度为22～45℃，反应时间为5～36h。根据本说明书的实施例部分可知，通过控制反应温度、物料浓度和配比，能够将完成反应的时间缩短至5h。但对于5h能完成反应，却仍故意延长反应时间的反应操作行为，亦视为本发明的保护范围。但过长的反应时间将导致副反应增多，产品分析纯度和光学纯度降低，因此一般反应时间不宜超过36h。
进一步，酮还原酶以酶粉形式、含酮还原酶的细胞破碎液或全细胞的形式参与反应，优选以酶粉形式参与反应。
进一步，本技术方案中，所述酮还原酶为来源于Novosphingobium aromaticivorans的突变体，是通过对Novosphingobium aromaticivorans的酮还原酶的突变体文库进行筛选后得到的。来源于Novosphingobium aromaticivorans的野生型酮还原酶在NCBI的登记号为WP_011906790.1。并且本专利中所有的氨基酸序列及其可能对应的基因序列均可通过商业化的全基因合成服务制得。
进一步，所述酮还原酶由基因工程菌发酵得到，所述基因工程菌选自酵母菌、大肠杆菌，优选为酵母菌。
进一步，根据本领域技术人员可知，编码酮还原酶的DNA序列最后三个碱基为终止密码子，终止密码子可有多种碱基序列，经过替换不同碱基序列的终止密码子后，其技术方案的本质是与我们所申请的技术方案内容一致的，亦视为本发明的保护范围。
有益效果
本发明提供一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，该方法通过筛选出特定氨基酸序列的酮还原酶，用于催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇，使得生产过程在水相高效进行，并且反应的原料转化率超过99%，所制备的产物（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇ee值不低于99.5%，底物浓度接近280g/L,能够使得底物完全、高效的转化成为目标产物，并且所制备的产物分离提纯简单，后处理成本低，整个工艺流程环境友好度高，原子利用率高。克服了现有技术酶催化制备工艺中，底物浓度低、产物ee值低于ICH对光学活性药物要求值的缺点，使该工艺能够切实可应用于工业化制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇。
附图说明
图1为反应底物(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮的HPLC分析谱图；
图2为实施例2反应液的手性HPLC分析谱图；
图3为实施例3反应液的手性HPLC分析谱图；
图4为实施例4反应液的手性HPLC分析谱图；
图5为实施例5反应液的手性HPLC分析谱图；
图6为消旋体的手性HPLC分析谱图；
图7为实施例2反应液常规HPLC分析谱图；
图8为实施例3反应液常规HPLC分析谱图；
图9为实施例4反应液常规HPLC分析谱图；
图10为实施例5反应液常规HPLC分析谱图；
图11为实施例2反应进程的TLC板在225nm光波下检测结果的照片；
其中：1-原料点，2-反应液点，3-产物标准品点。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。
实施例1 酮还原酶的制备
将含有酮还原酶的编码基因（SEQ ID No.1）的基因工程菌（载体pET21a，宿主细胞E.Coli BL21(DE3)）接种至5mL 含氨苄青霉素的LB 试管培养基中活化培养（37℃培养12h），按1%接种量转接活化培养物至380mL 含氨苄青霉素的LB 液体培养基中，37℃培养OD至0.6-0.8，加入IPTG（终浓度0.1mM）于27℃诱导培养16h。离心收集菌体得到酮还原酶细胞，用40mL 磷酸盐缓冲液（10mM，pH 7.5）重悬菌体后，于冰水浴中超声破碎10min，离心收集上清，-20℃预冻后真空冷冻干燥48h 后碾碎，即得重组酮还原酶酶粉。
实施例2 克级 （R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的制备
向反应容器中加入异丙醇（1.4mL）及底物(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮（1.5g），搅拌均匀后加入酶粉0.12g、辅酶NADP 1.2mg最后采用pH=8.5的磷酸盐缓冲液定容至10mL，28℃下磁力搅拌反应，同时TLC 检测反应进程，如附图11。反应12 h结束后硅藻土过滤，液相采用有机相萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋干，即得产品。反应液反应前的HPLC图谱如图1所示；消旋体的2-氯-1-（3-羟基苯基）乙醇手性HPLC如附图6所示；反应液的手性HPLC如图2，反应液的常规HPLC如附图7，附图2和7检测产物ee 值及转化率可知：底物转化率=99.6%，R 型产物ee 值=99.5%。将所获得的产物配制成5g/L样品溶于三氯甲烷中，经三次检测取平均值后，旋光度值为-64.0°，可以确认为R型产物。
实施例3 克级 （R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的制备
向反应容器中加入异丙醇（0.86mL）及底物(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮（2.3g），搅拌均匀后加入酮还原酶细胞0.32g，最后采用pH8.1的磷酸盐缓冲液定容至10mL，31℃下磁力搅拌反应，同时TLC 检测反应进程。5h反应结束后硅藻土过滤，液相采用有机相萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋干，即得产品。反应液的手性HPLC如图3、反应液的常规HPLC如附图8，附图3和8检测产物ee 值及转化率可知：底物转化率=99.8%，R型产物ee 值=99.6%。
实施例4 百克级 （R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的制备
向反应容器中加入异丙醇（100mL）及底物(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮（280g），搅拌均匀后加入酮还原酶细胞45g，最后采用pH7.9的磷酸盐缓冲液定容至1.0 L，37℃下磁力搅拌反应，同时TLC 检测反应进程。反应20 h结束后硅藻土过滤，液相采用有机相萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋干，即得产品。反应液的手性HPLC如图4、反应液的常规HPLC如图9，附图4和9检测产物ee 值及转化率可知：底物转化率=99.8%，R 型产物ee 值=99.5%。
实施例5 公斤级 （R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的制备
向反应容器中加入异丙醇（0.75 L）及底物(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮（3.8Kg），搅拌均匀后加入酮还原酶的酶粉0.8Kg、辅酶NADP+（5.7g），最后采用pH7.5的磷酸盐缓冲液定容至20L，44℃下磁力搅拌反应，同时TLC 检测反应进程。11h后反应结束后硅藻土过滤，液相采用有机相萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋干，即得产品。反应液的手性HPLC如图5、反应液的常规HPLC如附图10，附图5和10检测产物ee 值及转化率可知：底物转化率=99.6%，R 型产物e值=99.9%。
序列表
<110> 尚科生物医药（上海）有限公司
<120> 一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 795
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgatgccgc ttgaaatgac gattgctctc aacaatgtgg tcgccgtcgt caccggcgcg 60
gcgggaggca tcggccgcga actggtcaag gcgatgaagg ccgccaacgc catcgtcatc 120
gccaccgaca tggcgccctc ggccgatgtc gaaggcgcgg accattatct ccagcacgac 180
gtgacgagcg aggccggctg gaaggcggtc gcggcgctgg cccaggaaaa gtacgggcgc 240
gtcgatgcgc tggtgcacaa cgcgggcatc tcgatcgtca cgaagttcga agacactccg 300
ctgtccgatt tccaccgcgt gaacacggtc aacgtcgatt ccatcatcat cggtacgcag 360
gtcctgctgc cgctgctcaa ggaaggcggc aaggcgcgcg cagggggcgc ctcggtggtc 420
aacttctcca gcgtcgcggg tctgcgcggc gcggcgttca atgcggccta ttgcaccagc 480
aaggcggcgg tgaagatgct ctcgaagtgc ctcggcgcgg aattcgcggc gctcggctac 540
aacatccgcg tcaactccgt gcatccgggc ggcatcgata ccccgatgct cggctcgatc 600
atggacaagt acgtcgaact cggcgctgcc ccctcgcgcg aggtggccca ggccgcgatg 660
gaaatgcgcc acccggtggg tcgcatgggt cgccctgccg aaatgggcgg cggcgtggtc 720
tatctctgct ccgacgcagc gagcttcgtc acctgcacgg aattcgtgat ggacggcggc 780
ttcagccagg tctga 795
<210> 2
<211> 264
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Met Pro Leu Glu Met Thr Ile Ala Leu Asn Asn Val Val Ala Val
1 5 10 15
Val Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ile Gly Arg Glu Leu Val Lys Ala Met
20 25 30
Lys Ala Ala Asn Ala Ile Val Ile Ala Thr Asp Met Ala Pro Ser Ala
35 40 45
Asp Val Glu Gly Ala Asp His Tyr Leu Gln His Asp Val Thr Ser Glu
50 55 60
Ala Gly Trp Lys Ala Val Ala Ala Leu Ala Gln Glu Lys Tyr Gly Arg
65 70 75 80
Val Asp Ala Leu Val His Asn Ala Gly Ile Ser Ile Val Thr Lys Phe
85 90 95
Glu Asp Thr Pro Leu Ser Asp Phe His Arg Val Asn Thr Val Asn Val
100 105 110
Asp Ser Ile Ile Ile Gly Thr Gln Val Leu Leu Pro Leu Leu Lys Glu
115 120 125
Gly Gly Lys Ala Arg Ala Gly Gly Ala Ser Val Val Asn Phe Ser Ser
130 135 140
Val Ala Gly Leu Arg Gly Ala Ala Phe Asn Ala Ala Tyr Cys Thr Ser
145 150 155 160
Lys Ala Ala Val Lys Met Leu Ser Lys Cys Leu Gly Ala Glu Phe Ala
165 170 175
Ala Leu Gly Tyr Asn Ile Arg Val Asn Ser Val His Pro Gly Gly Ile
180 185 190
Asp Thr Pro Met Leu Gly Ser Ile Met Asp Lys Tyr Val Glu Leu Gly
195 200 205
Ala Ala Pro Ser Arg Glu Val Ala Gln Ala Ala Met Glu Met Arg His
210 215 220
Pro Val Gly Arg Met Gly Arg Pro Ala Glu Met Gly Gly Gly Val Val
225 230 235 240
Tyr Leu Cys Ser Asp Ala Ala Ser Phe Val Thr Cys Thr Glu Phe Val
245 250 255
Met Asp Gly Gly Phe Ser Gln Val
260

Claims (10)

1.一种用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮在酮还原酶催化作用下，转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇，所述酮还原酶的氨基酸序列如（a）或（b）所述：
（a）、所述酮还原酶具有如表SEQ ID No.2 所记载的氨基酸序列；
（b）、所述酮还原酶为将表SEQ ID No.2 中的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且能催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的酮还原酶。
2.如权利要求1所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：（b）所述的酮还原酶的氨基酸序列与（a）所述酮还原酶的氨基酸序列具备90%以上的同源性，且能催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇。
3.如权利要求1所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：所述酮还原酶的基因序列如下（c）或（d）所示：
（c）、基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.1所示基因序列；
（d）、与（c）具有90%以上的同源性，且能催化(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的酮还原酶的基因序列。
4.如权利要求1所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮在酮还原酶催化作用下，转化为（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇，步骤包括：将(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮、酮还原酶酶粉或含有酮还原酶的细胞、辅酶、缓冲剂一起配制成水/异丙醇混合溶液，反应得到产物。
5.如权利要求4所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：所述(4-氯苯基)(2-吡啶基)甲酮浓度为1～230g/L；酮还原酶酶粉浓度为2～20g/L或含有酮还原酶的细胞的浓度为20～90g/L。
6.如权利要求4所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：所述水/异丙醇溶液中异丙醇与水体积比为1:6～15。
7.如权利要求4所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：反应温度为24～45℃。
8.如权利要求4所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：反应时间为5～36h。
9.如权利要求4所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：反应体系中还添加有辅酶因子，所述辅酶选自NAD+、NADH、NADP+和NADPH 的任意一种或它们的组合物；辅酶浓度为0.1～0.4g/L。
10.如权利要求4所述的用于制备（R）-(4-氯苯基)-2-吡啶甲醇的生物催化方法，其特征在于：所述含有酮还原酶的细胞选自基因工程改造的酵母菌或大肠杆菌。
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