CN109954292A - 药材的提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物提取领域，特别涉及药材的提取工艺。该工艺取药材预处理后冷冻、粉碎、过筛，取粉碎后的药材与水混合，匀浆、浸提，过滤，离心，收集上清液；提取工艺的温度不超过60℃。该提取工艺通过对工艺全程的温度控制，得到一种提取率高、工艺路线简单、保存生理活性热敏成分的低温提取方式。

Description

药材的提取工艺

技术领域

本发明涉及药物提取领域，特别涉及药材的提取工艺。

背景技术

药材提取，是中药生产过程重要的单元操作，其工艺方法、工艺流程的选择和设备配置都将直接关系到中药的质量和临床效果。传统提取方法包括煎煮法、浸渍法、渗漉法、改良明胶法、回流法、溶剂提取法、水蒸气蒸馏法和升华法等。其中煎煮法是最常用的方法，最常用的溶剂是水和乙醇。

煎煮法常见、成本较低，操作方便，是目前最广谱的一种提取方式，但无法保存具有生理活性的热敏成分，易损失挥发物质。

近年来，应用于中药提取分离还发展了新技术，有：超临界流体萃取法、膜分离技术、超微粉碎技术、中药絮凝分离技术、半仿生提取法、超声提取法、旋流提取法、加压逆流提取法、酶法、大孔树脂吸附法、超滤法、分子蒸馏法等。这些方法对提取相对传统方法，可以提高提取效率，保存活性成分，产品质量高，但具有成本高、周期长的缺陷。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种药材的提取工艺。本发明提供了一种新的、可以保存热敏性物质的、较简单、成本较低的提取工艺，尤其可以保存具有生理活性的热敏成分，并可以对药材全成分进行提取。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种药材的提取工艺，取药材预处理后冷冻、粉碎、过筛，取粉碎后的药材与水混合，匀浆、浸提，过滤，离心，收集上清液；

所述提取工艺的温度不超过60℃。

在本发明的一些具体实施方案中，所述提取工艺的温度为-273℃～40℃。

在本发明的一些具体实施方案中，所述冷冻的温度不高于-20℃。

在本发明的一些具体实施方案中，所述冷冻的温度为-196℃～-40℃。

作为优选，冷冻使用低温冰箱，至少低于-20℃，多使用-40℃、-60、-80，或者液氮(-196℃)温度冷冻，冷冻温度越低，速度越快，冷冻药材后粉碎起来效果越好。

在本发明的一些具体实施方案中，粉碎的粒径≤1cm，粉碎后过80-100目筛。

在本发明的一些具体实施方案中，所述粉碎后的药材与水的质量比为1:(1～10)。

在本发明的一些具体实施方案中，所述浸提为超声浸提，超声的频率为1～500Hz，超声的时间为5～60min。

在本发明的一些具体实施方案中，所述超声的时间为5～30min。

作为优选，超声的时间为15min。

作为优选，过滤采用挤压过滤、抽滤、纱网、多次离心等，凡是本领域能够达到过滤效果的操作均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。

在本发明的一些具体实施方案中，所述离心的转速为1000～10000rpm，所述离心的时间为5～60min。

在本发明的一些具体实施方案中，所述离心的转速为3000～8000rpm，所述离心的时间为5～30min。

作为优选，所述离心的时间为5～20min。

在本发明的一些具体实施方案中，所述真空干燥的温度为-35℃～30℃，所述真空干燥的真空度为1Pa～50Pa。

作为优选，所述真空干燥的真空度为1Pa～20Pa。更有选的，所述真空干燥的真空度为1Pa～15Pa。

本发明提供了一种药材的提取工艺，取药材预处理后冷冻、粉碎、过筛，取粉碎后的药材与水混合，匀浆、浸提，过滤，离心，收集上清液；提取工艺的温度不超过60℃。该提取工艺通过对工艺全程的温度控制，得到一种提取率高、工艺路线简单、保存生理活性热敏成分的低温提取方式。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示实施例1中人参皂苷标准品1的HPLC图；

图2示实施例1中人参皂苷标准品2的HPLC图；

图3示实施例1中人参皂苷标准品3的HPLC图；

图4示实施例1中鲜人参的HPLC图；

图5示实施例1中鲜人参提取物的HPLC图；

图6示比较例1回流后人参提取物的HPLC图。

具体实施方式

本发明公开了一种药材的提取工艺，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了一种新的、可以保存热敏性物质的、较简单、成本较低的提取工艺，尤其可以保存具有生理活性的热敏成分，并可以对药材全成分提取的工艺。为此，本申请人锐意创新，进行了大量深入的研究和实验工作，通过对工艺全程的温度控制，得到一种提取率高、工艺路线简单、保存生理活性热敏成分的低温提取方式，完成了本发明。

对本发明进行详细阐述。

一种药材的提取工艺，包含以下步骤：

A、药材清洗、去泥沙；

B、低温冷冻；

C、使用粉碎设备，对速冻后的鲜药材进行粗粉和/或细粉，过筛；

D、将冷水加入搅拌机，与粉碎后的鲜药材进行匀浆，得到匀浆液；

E、匀浆液进行超声浸提；

F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液离心，留上清液；

G、上清液进行真空冷冻干燥，得到鲜提物。

所述药材可以为鲜药材或干药材，优选鲜药材；可以来源于动物和植物中的一种或多种组合。

其中动物药材，优选但不限于鹿茸、鹿胎、海参、海参花、燕窝、牡蛎、林蛙油。

其中植物药材，优选但不限于新鲜的人参、三七、西洋参、党参、铁皮石斛、东革阿里、玛咖、西红花、辣木籽、天麻、黑枸杞、枸杞、藿香、马鞭才、车前草、姜、地黄、白芍、黄芩。

还可以涉及到鲜果，可以是但不限于欧洲越橘、蔓越莓、巴西黑酶、葡萄、卡姆果、榄仁果。

所述超低温冷冻，其温度低于0℃，方式可以选自冰箱冷冻、超低温冰箱冷冻、液氮和/或其他冷媒喷淋或浸入方式中的一种或多种组合。

所述滤液离心环节，可以重复多次，并合并上清液。

上述工艺全程对温度控制，全程温度不超过60℃，最优选-273℃～40℃。

本发明提供的药材的提取工艺中所用原料及试剂均可由市场购得。

本发明涉及的含义：

提取率：指提取物总质量：原药材总质量*100％；

对于热敏成分的保护性：评价是否检出，以及检出量差异。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1：鲜人参的提取工艺

A、鲜人参清洗、去泥沙，使用纯净水润洗三次；

B、液氮(-196℃)喷洒低温冷冻；

C、使用破骨机对冷冻后的鲜人参进行粗粉至粒径1cm以下，后将粗粉使用万能粉碎机进行细粉，过80目筛；

D、将25℃纯水1.3倍加入搅拌机，与粉碎后的鲜人参细粉进行匀浆，匀浆时间5min，得到匀浆液；

E、匀浆液进行超声(500Hz)浸提10min；

F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液5000转离心15min，留上清液；离心残渣再次进行匀浆、超声浸提、离心，留上清液，并合并两次离心后的上清液；

G、上清液进行真空冷冻干燥(-35℃～30℃，真空度15pa，时间16h)，得到人参鲜提物。

上述人参鲜提物：鲜人参药材的提取率为10.98％(鲜人参1005g，产出提取物198.99g)。

使用液质联用法检测丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1，条件为：

液相色谱条件：Agilent 1200高效液相色谱仪，色谱柱Chromolith FastGradient反相色谱柱(50×2.0mm)，梯度洗脱，流速0.2mL/min，A相为水溶液(含有2.5×10^-3mol/L醋酸铵以及1/200000氨水w/w)，B相为90％乙腈水溶液(含2.5×10^-3mol/L醋酸铵以及1/200000氨水w/w)。流动相梯度0-3min 90％A和10％B，7min 15％B,40min 40％B，45min65％B。进样体积2μl；

质谱条件：Agilent 6310离子阱质谱，电喷雾离子源，负离子模式；导入洗脱液，流速0.1mL/min。

在鲜人参和鲜提物中，检出丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1。

比较例1：采用常规煎煮法对鲜人参进行提取

A、加10倍水煎煮，加热回流提取；

B、将水提液趁热抽滤，收集滤液；

C、按照上述方法进行二次提取，合并滤液，减压浓缩得人参浸膏；

D、浸膏喷干为提取物。

上述人参提取物，提取率为6.54％(鲜人参1010g，产出提取物66.054g)。

使用液质联用法检测检测丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1，在鲜人参中有检出，在人参提取物中未检出。

效果例1：

原始数据见表1。

表1

注：^*示与对比例1相比具有显著差异(P＜0.05)；^#示与对比例1相比具有极显著差异(P＜0.01)。

图谱如图1～图6所示。可见常规煎煮法，无论是水提还是醇提，都既不能保留热敏成分丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1，其提取率也没有优势。实验组与对照组相比，提取率和有效成分的保留率均具有极显著差异(P＜0.01)。

实施例2欧洲越橘鲜果的提取工艺

A、鲜果清洗、去泥沙，使用纯净水润洗三次；

B、超低温冰箱-40℃低温冷冻8h；

C、使用破骨机对冷冻后的鲜欧洲越橘进行粗粉至粒径3mm，后将粗粉使用万能粉碎机进行细粉，过100目筛；

D、将10℃、1倍纯水加入搅拌机，与粉碎后的鲜欧洲越橘细粉进行匀浆，得到匀浆液；

E、匀浆液进行超声(1Hz)浸提30min；

F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液3000转离心5min，留上清液；离心残渣再次进行匀浆、超声浸提、离心，留上清液，并合并两次离心后的上清液；

G、上清液进行真空冷冻干燥(-35℃～30℃，真空度10pa，时间15h)，得到欧洲越橘鲜提物。

飞燕草素测试方法：

精密称取欧洲越橘鲜果、欧洲越橘鲜提提取物及欧洲越橘煮提提取物分别为500、24、24mg(精确至0.01mg)放入烧瓶中，加入60mL 2％盐酸-甲醇溶液(m/V)，在80℃水浴中回流水解0.5小时后冷却至室温，用2％盐酸-甲醇溶液(m/V)转移完全并定容至100mL，摇匀，得试液A。然后精密吸取5mL到50mL容量瓶中，用2％盐酸-甲醇溶液(m/V)定容至刻度，摇匀，得待测试液B；溶液应澄清透明。若混浊，则用滤纸过滤，开始的滤液约10mL弃去，之后的滤液用作检测。

以2％盐酸-甲醇溶液(m/V)作空白，在540nm吸收波长、1cm比色杯条件下测吸光度A。

以飞燕草素的质量分数w3计，数值以％表示，按下式计算：

式中：

A——供试品溶液B在吸收波长540nm下的吸光度；

f——供试品溶液A至试液B的稀释倍数；

m——供试品质量，单位为克(g)；

1020——飞燕草素的百分吸光系数，既在540nm吸收波长下，飞燕草素的溶液浓度为

1g/100mL、比色杯厚度为1cm时，溶液的吸光度；

1——百分吸光系数定义规定的，在100mL溶液中溶解溶质(飞燕草素)的质量，单位为克(g)。

上述鲜提物，提取率为4.8％(300.4g鲜果，得到14.42g提取物)，工艺全程呈现鲜果的紫红色，紫外法检测飞燕草素含量为鲜果中的83.25％，说明提取工艺对功效花色苷成分没有破坏。

对比例2

采用常规煎煮法对鲜欧洲越橘进行提取

A、加10倍水煎煮，加热回流提取(欧洲越橘变色为棕色)；

B、将水提液趁热抽滤，收集滤液；

C、按照上述方法进行二次提取，合并滤液，减压浓缩得浸膏；

D、浸膏喷干为提取物。

上述人参提取物，提取率为4％(301.1g鲜果，得到12.04g提取物)，工艺中呈现为棕色；

紫外法检测飞燕草素含量为鲜果中的0.5％，说明提取工艺对功效花色苷成分被破坏。

效果例2

原始数据见表2。

表2

注：^*示与对比例2相比具有显著差异(P＜0.05)；^#示与对比例2相比具有极显著差异(P＜0.01)。

可见常规煎煮法不适合于欧洲越橘鲜果，热敏色素成分因高温而破坏。实验组与对照组相比，有效成分的保留率极显著提高(P＜0.01)，显著(P＜0.05)降低了生产成本。

实施例3黑枸杞鲜果的提取工艺

A、鲜果清洗、去泥沙，使用纯净水润洗三次；

B、超低温冰箱-273℃低温冷冻8h；

C、使用破骨机对冷冻后的黑枸杞进行粗粉至粒径3mm，后将粗粉使用万能粉碎机进行细粉，过100目筛；

D、将10℃、10倍纯水加入搅拌机，与粉碎后的黑枸杞细粉进行匀浆，得到匀浆液；

E、匀浆液进行超声(100Hz)浸提60min；

F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液8000转离心30min，留上清液；离心残渣再次进行匀浆、超声浸提、离心，留上清液，并合并两次离心后的上清液；

G、上清液进行真空冷冻干燥(-35℃～30℃，真空度50pa，时间15h)，得到黑枸杞鲜提物。

有效成分测定方法：

取提取物0.2g溶于100ml纯水中，4000rpm离心10min，取上清液。35℃恒温真空旋蒸30min。称量浓缩液，用纯化水定容至100ml。精密量取1ml浓缩液，置于10ml容量瓶中(样液稀释10倍)，分别加入pH1.0、pH4.5的缓冲液，暗处平衡15min。

紫外分光光度计在250～600nm范围扫描，分别测定黑果枸杞花色苷在pH 4.5和pH1.0缓冲液中的最大吸收波长及其最大吸收波长处的吸光度值Aλmax。总花色苷含量(以矢车菊素-3-葡萄糖苷计)的计算公式：

A＝AλmaxpH1.0－AλmaxpH4.5

C＝(A×103×MW×DF)/(ε×l)

总花色苷含量(mg/100g)＝(C×V)/M/10

式中，Aλmax：最大吸收波长处的吸光度值；MW：矢车菊－3－葡萄糖的分子质量(449.2g/mol)；DF：待测液稀释倍数；ε：消光系数(29600L/mol·cm)；l：光路长度(cm)；C：花色苷质量浓度(mg/L)；V：待测液的体积(mL)；M：样品质量(g)。

数据记录如下：

表3

根据算式，结果为：

表4

上述鲜提物，提取率为4.8％，工艺全程呈现鲜果的紫红色，紫外法检测鲜果中花色苷含量为19.02％，提取物中花色苷含量为17.75％，花色苷保存率93.3％，说明提取工艺对功效花色苷成分没有破坏。

比较例3

将黑枸杞采用常规煎煮法提取物，如下：

A、对黑枸杞进行粉碎，加水；

B、加热至50℃时，果粉液体完全变色，紫外法检测花色苷含量0％，花色苷被完全破坏。

比较例4

将黑枸杞采用溶剂浸提法，如下：

A、对黑枸杞粉碎至80目，取4g，加入200ml0.5％TFH-MeOH浸渍；

B、均匀浆2min，低温超声30min，置于7℃冰箱，避光6天，得到浸提物。

取浸提物，4000rpm离心10min，取上清液。35℃恒温真空旋蒸30min。称量浓缩液，用纯化水定容至100ml。精密量取1ml浓缩液，置于10ml容量瓶中(样液稀释10倍)，分别加入pH1.0、pH4.5的缓冲液，暗处平衡15min。同上，紫外法检测花色苷含量，数据记录如下：

表5

根据算式，浸提物结果为：

表6

上述提取物提取率同样为4.8％，提取物有少量变色，紫外法检测花色苷含量为12.17％，检测花色苷成分有一定损失。

表7

注：^*示与对比例3、4相比具有显著差异(P＜0.05)；^#示与对比例3、4相比具有极显著差异(P＜0.01)。

本发明提供的提取工艺与常规煎煮法、浸提法相比，极显著(P＜0.01)提高了热敏色素成分的保留率，极显著(P＜0.01)降低了生产成本。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.药材的提取工艺，其特征在于，取药材预处理后冷冻、粉碎、过筛，取粉碎后的药材与水混合，匀浆、浸提，过滤，离心，收集上清液；

所述提取工艺的温度不超过60℃。

2.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，所述提取工艺的温度为-273℃～40℃。

3.根据权利要求1或2所述的提取工艺，其特征在于，所述冷冻的温度不高于-20℃。

4.根据权利要求1至3任一项所述的提取工艺，其特征在于，所述冷冻的温度为-196℃～-40℃。

5.根据权利要求1至4任一项所述的提取工艺，其特征在于，所述粉碎后的药材与水的质量比为1:(1～10)。

6.根据权利要求1至5任一项所述的提取工艺，其特征在于，所述浸提为超声浸提，超声的频率为1～500Hz，超声的时间为5～60min。

7.根据权利要求6所述的提取工艺，其特征在于，所述超声的时间为5～30min。

8.根据权利要求1至7任一项所述的提取工艺，其特征在于，所述离心的转速为1000～10000rpm，所述离心的时间为5～60min。

9.根据权利要求1至8任一项所述的提取工艺，其特征在于，所述离心的转速为3000～8000rpm，所述离心的时间为5～30min。

10.根据权利要求1至9任一项所述的提取工艺，其特征在于，所述真空干燥的温度为-35℃～30℃，所述真空干燥的真空度为1Pa～50Pa。