CN109925280B - 一种硫辛酸注射液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种安全性高的硫辛酸制剂,包括硫辛酸,助溶剂组分,其特征在于,所述硫辛酸制剂中,含有硫辛酸乙二胺单取代物,其中,硫辛酸乙二胺单取代物含量不高于0.8%。所述的硫辛酸制剂安全性高,毒性低,可以更好的发挥硫辛酸的临床疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂及其制备方法,具体涉及一种含有硫辛酸的注射液及其制备方法。
背景技术
硫辛酸,其化学名称为(±)-5-[3-(1,2-二硫杂环戊烷)]-戊酸,分子式为C8H14O2S2,分子量为206.33,是由Reed氏首次从猪肝中分离出来的天然产物,为丙酮酸和三羧酸循环中α-酮戊二酸的氧化脱羧反应的辅酶因子。硫辛酸兼具脂溶性与水溶性的特性,可以被运输到身体大部分组织内发挥作用。
硫辛酸被大量应用于治疗糖尿病的神经病变上。离体试验显示本品可以降低神经组织的脂质氧化现象,可能阻止蛋白质的糖基化作用;且可抑制醛糖还原酶,因而可阻止葡萄糖或半乳糖转化成为山梨醇,所以硫辛酸可以防止糖尿病、控制血糖及防止因高血糖造成的神经病变。
目前硫辛酸在国内外广泛应用,最早的上市药物硫辛酸源于德国,在欧洲,硫辛酸针剂是唯一被确认的并已上市的治疗糖尿病多发性微循环病变的药物;在我国,该药于2000年批准进口。2009年11月,国家新版医保目录首次收录了α-硫辛酸注射剂为调节血糖的医保乙类药物。
随着硫辛酸在临床的广泛应用,对其不良反应的报告也逐渐增多。临床应用中,硫辛酸注射液的不良反应比较常见,达到10%左右,多表现为输注部位疼痛、静脉炎、手臂酸胀、头晕、头疼、针刺样疼痛等。因此,研究如何降低硫辛酸的不良反应发生率,减小不良反应的严重程度,是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
此外,硫辛酸在水中溶解度小,且具有热不稳定性,温度过高时,可能会被热分解,产生较高的杂质,从而影响其生物活性和使用安全性。因此,现有技术中,硫辛酸注射液长期存放会出现有关物质超标问题,澄明度不合格,pH值降低,稳定性较差影响药效和药物安全性。
因此,我们需要一种能够克服硫辛酸热不稳定性的处方组成,以及相对简便可实现的制备方法,提高硫辛酸注射液的热稳定性,并减小其不良反应的发生率。
发明内容
为此,申请人对硫辛酸进行了大量研究,并意外的发现,在生产和贮存过程中,硫辛酸制剂中会产生硫辛酸乙二胺单取代物(含有式1结构的分子)这种前人未曾发现的有关物质,而这种物质不仅会降低硫辛酸制剂的药效,也会在一定程度上增加硫辛酸制剂在体内的毒性。所述的硫辛酸乙二胺单取代物包括各种含如式1结构的分子。
式1:
因此,需要控制硫辛酸制剂中有关物质的量来提高其药效及使用安全性。
一方面,基于以上目的,本发明提供一种硫辛酸制剂,含有硫辛酸、制剂常用辅料、硫辛酸乙二胺单取代物(含有式1结构的分子,如其盐或水合物),其中,硫辛酸乙二胺单取代物含量(w/v)不高于0.01-0.8%。优选的,硫辛酸含量与硫辛酸乙二胺单取代物含量之比不低于3:1。
所述制剂常用辅料可以为助溶剂、等渗调节剂、缓冲盐、抗氧化剂的一种或几种。
另一方面,本发明提供一种安全性高的硫辛酸注射液,含有硫辛酸,助溶剂组分,其特征在于,所述硫辛酸注射液中,还含有硫辛酸乙二胺单取代物,其中,硫辛酸乙二胺单取代物为含有式1结构的分子(如其盐或水合物),优选为式1的分子(C10H20ON2S2),即N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺,其含量不高于0.8%(w/v),优选不高于0.1%,更优选不高于0.01%。
硫辛酸与硫辛酸乙二胺单取代物的含量之比不低于3:1,优选的含量之比不低于25:1,更优选的含量之比不低于250:1。
所述硫辛酸注射液中,硫辛酸含量(w/v)不低于1%,优选含量为2-10%,更优选含量为2.5%。
所述硫辛酸注射液中,助溶剂组分含量(w/v)不低于0.1%,优选含量不低于0.5%,更优选的含量为0.5-0.8%。
所述助溶剂选自乙二胺、氨丁三醇或葡甲胺的一种或几种的组合。
进一步地,所述硫辛酸注射液中还可以含有药学上可接受的等渗调节剂,所述等渗调节剂选自氯化钠、葡萄糖、果糖、磷酸盐、枸橼酸盐、甘露醇、聚乙二醇、丙二醇的一种或几种的组合。
进一步地,所述硫辛酸注射液中还可以含有药学上可接受的缓冲盐,所述缓冲盐选自如枸橼酸盐、磷酸盐、碳酸盐等的一种或几种的组合。
进一步地,所述硫辛酸注射液中还可以含有药学上可接受的抗氧化剂,所述抗氧化剂选自如半胱氨酸、亚硫酸氢钠、甘氨酸、亚硫酸钠等的一种或几种的组合。
上述制备硫辛酸注射液的方法,其步骤包括:(1)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<20ug/ml-50ug/ml);量取配液总量3/4-4/5的注射用水;(2)称量:按处方量102%-105%称取硫辛酸,按处方量称取助溶剂、硫辛酸乙二胺单取代物及足量活性炭;(3)稀配法:按处方比例加入助溶剂,搅拌均匀;(4)加原料:在继续搅拌(100r/min-500r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸及硫辛酸乙二胺单取代物,搅拌均匀;(5)加入辅料:根据需要加入处方量等渗调节剂、缓冲盐、抗氧化剂;(6)加活性炭:再加水至全量,加入活性炭,搅拌20-40分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为3-4.5小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌15-30min。采用上述的制备方法,可以有效降低注射液在储存过程中硫辛酸乙二胺单取代物的产生。
另一方面,本发明还提供了一种硫辛酸脂质体注射液,包括硫辛酸、磷脂、十八胺、非离子表面活性剂、枸橼酸盐、巯基乙醇,其特征在于,所述硫辛酸脂质体注射液中,含有硫辛酸乙二胺单取代物,其中,以质量计,硫辛酸乙二胺单取代物含量(w/v)不高于0.8%,优选不高于0.1%,更优选不高于0.01%。硫辛酸与硫辛酸乙二胺单取代物的含量之比不低于3:1,优选的含量之比不低于25:1,更优选的含量之比不低于250:1。
以质量计,所述硫辛酸120份,磷脂30-120份,十八胺50-80份,非离子表面活性剂为25-40份,枸橼酸盐1-5份,巯基乙醇为3-12份,溶于1000份注射用水中。
优选的,所述磷脂为合成磷脂,更优选的,所述合成磷脂为二硬脂酸磷脂酰胆碱。
优选的,所述非离子表面活性剂为泊洛沙姆188。
优选的,所述枸橼酸盐为枸橼酸钠。
上述制备硫辛酸脂质体注射液的方法,其步骤包括:(1)将处方量的硫辛酸、硫辛酸乙二胺单取代物、十八胺、磷脂和非离子表面活性剂溶于有机溶剂中,混合均匀,减压除去有机溶剂,得到类脂膜;(2)在氮气保护下,向瓶中加入pH=5-7的枸橼酸盐缓冲溶液,振摇,搅拌20-50分钟,转速为400-700r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机匀质乳化5-10分钟,转速9000-12000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射剂。采用脂质体的处方,及上述的脂质体制备方法,可以十分有效的降低制剂在储存中硫辛酸乙二胺单取代物的产生。
另一方面,本发明还提供了一种硫辛酸的制备方法,其步骤包括:(1)硫化钠溶液的配置;(2)硫辛酸乙酯的合成;(3)硫辛酸乙酯的水解;(4)硫辛酸钠的酸化;(5)硫辛酸粗品的纯化。
具体的,步骤(1)为,将20重量份的硫化钠溶于80-120重量份纯化水中,在35℃-45℃溶解,配制成硫化钠溶液;步骤(2)为,在100-200重量份的水溶剂中加入6,8-二氯辛酸乙酯20-80份、硫磺5-10份、四丁基溴化铵2-5份,升温至85-86℃,将步骤(1)得到的硫化钠溶液缓慢加入到此水溶液中。加入硫化钠溶液后,继续反应3-5小时;反应结束后,降温到60-65℃,静止约60分钟,分层,即得到硫辛酸乙酯;步骤(3)为,在水溶剂中加入硫辛酸乙酯,再加入20-25份氢氧化钠和1-3份四丁基溴化铵,200-400r/min搅拌,升温至60℃-80℃,反应结束后,趁热抽滤;步骤(4)为,将步骤(3)得到的滤液降温至5℃-10℃,然后用盐酸调节pH至1-2过滤即得到硫辛酸粗品;步骤(5)为,将步骤(4)得到的硫辛酸粗品加入到混合溶剂(环己烷:乙酸乙酯=5-10:1(w:w))中,100-500r/min搅拌下,加热升温至40℃-45℃,保温30-50分钟,使硫辛酸粗品完全溶解,然后加入36℃~40℃的纯化水,保持搅拌10-15分钟,静止20-30分钟除去水层,将有机层加热升温到40℃-50℃后,加入硅胶,搅拌2h后,抽滤。然后冷却至16℃-20℃,搅拌析晶1小时,抽滤即得到硫辛酸湿精品,然后在35℃-40℃温度下干燥12-24小时。
另一方面,本发明还提供了一种硫辛酸注射液中硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的检测方法。该方法适用于硫辛酸注射液中硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的检测,且便于操作,分离度高,重现性好。
所述硫辛酸注射液中的硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺采用液相色谱法进行检测。
固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,优选选用Waters Symmetry C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱;流动相由流动相A液与流动相B混合而成,流动相A为:0.002-0.008mol/L磷酸盐溶液,优选为0.005mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值为2-2.5,更优选的,pH值调节至2.3;流动相B为:乙腈-甲醇(10-20:30-50),优选为乙腈-甲醇(12:38);按表2进行梯度洗脱;流速为0.5-1.5ml/min,优选为1.0ml/min;柱温为20-40℃,优选为30℃;检测波长为200-250nm,优选为215nm;检测时,以加校正因子的主成分自身对照法(校正因子为1.2)计算硫辛酸注射液中的硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量。
表2梯度洗脱流动相浓度变化
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 60 | 40 |
15 | 60 | 40 |
30 | 40 | 60 |
50 | 40 | 60 |
51 | 60 | 40 |
60 | 60 | 40 |
发明人意外的发现,当随着硫辛酸乙二胺单取代物含量的提高,硫辛酸注射液的不良反应发生率会有显著提高,具体来说,使用者神经系统的不良反应率显著提高,具体表现为头疼、头晕、手臂酸胀等。
另一方面,本发明还提供一种硫辛酸注射液的质量评价方法,所述方法为,检测注射液中硫辛酸乙二胺单取代物的含量,当所述注射液中硫辛酸乙二胺单取代物含量超过0.8%时,判定其为不合格品。
优选的,所述硫辛酸乙二胺单取代物为N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺。
另一方面,本发明还提供一种提高硫辛酸注射液使用安全性的方法,所述方法为,检测注射液中硫辛酸乙二胺单取代物的含量,当所述注射液中硫辛酸乙二胺单取代物含量超过0.8%(8g/L)时,判定其为不合格品,并弃用;当所述注射液中硫辛酸乙二胺单取代物含量均不超过0.8%(8g/L)时,设硫辛酸乙二胺单取代物含量为x%(10x g/L),那么所述硫辛酸注射液应在检测后(0.8-x)/0.056月内使用。
优选的,所述硫辛酸乙二胺单取代物为N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺。
本发明所述的硫辛酸,可以是(±)-硫辛酸,也可以是(+)-硫辛酸。
与现有技术相比,本发明具有如下优点:
1.本发明发现了一种硫辛酸制剂中新的有关物质,并对其毒性进行了充分的研究,同时推测了这种杂质与硫辛酸不良反应之间的关系。
2.本发明提供了一种硫辛酸注射液,其稳定性好,安全性高,毒性低,可以更好的发挥硫辛酸的临床疗效。
3.本发明提供了硫辛酸注射液中,对硫辛酸乙二胺单取代物的检测方法,其分离度高,专属性好,可以对硫辛酸注射液中的硫辛酸乙二胺单取代物进行准确的检测。
4.本发明提供了一种硫辛酸的制备方法,该方法制备的硫辛酸,纯度更高,配制的制剂有关物质含量小,提高了制剂的安全性。
5.本发明还提供了一种硫辛酸注射液的制备方法,该方法制备的注射液安全性好,稳定性高,并可以有效降低硫辛酸注射液的有关物质含量。
6.本发明还提供了一种硫辛酸注射液质量评价的方法,通过对硫辛酸乙二胺单取代物含量的检测,将有关物质含量高于标准的产品判定为不合格品,以避免毒性较高的产品被患者使用,从而提高了硫辛酸注射液的使用安全性。
7.本发明还提供了一种提高硫辛酸注射液使用安全性的方法,通过对硫辛酸乙二胺单取代物含量的检测,从而判断该批产品可以继续保存的时间,以降低患者用药时的风险。
附图说明:
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为硫辛酸制剂的液相色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的说明。应理解的是,本发明实施例仅仅是用于说明本发明,而不是对本发明的限制,在本发明的构思前提下,对本发明的简单改进均属于本发明要求保护的范围。
实施例1
制备硫辛酸:(1):称取20g的硫化钠溶于80g纯化水中,在35℃溶解,配制成硫化钠溶液;(2):在100g水中加入6,8-二氯辛酸乙酯20g、硫磺5g、四丁基溴化铵2g,升温至85℃,将步骤(1)得到的硫化钠溶液缓慢加入到此水溶液中。加入硫化钠溶液后,继续反应3小时;反应结束后,降温到60℃,静止约60分钟,分层,即得到硫辛酸乙酯;(3):在水溶剂中加入硫辛酸乙酯,再加入氢氧化钠20g和四丁基溴化铵1g,200r/min搅拌,升温至60℃,反应结束后,趁热抽滤;(4):将步骤(3)得到的滤液降温至5℃,然后用盐酸调节pH至1,过滤即得到硫辛酸粗品;(5):将步骤(4)得到的硫辛酸粗品加入到混合溶剂(环己烷:乙酸乙酯=5:1(w:w))中,100r/min搅拌下,加热升温至40℃,保温30分钟,使硫辛酸粗品完全溶解,然后加入36℃的纯化水,保持搅拌10分钟,静止20分钟除去水层,将有机层加热升温到40℃后,加入硅胶,搅拌2h后,抽滤。然后冷却至16℃,搅拌析晶1小时,抽滤即得到硫辛酸湿精品,然后在35℃温度下干燥12小时。
实施例2
制备硫辛酸:(1):称取20g的硫化钠溶于120g纯化水中,在45℃溶解,配制成硫化钠溶液;(2):在200g水中加入6,8-二氯辛酸乙酯80g、硫磺10g、四丁基溴化铵5g,升温至86℃,将步骤(1)得到的硫化钠溶液缓慢加入到此水溶液中。加入硫化钠溶液后,继续反应5小时;反应结束后,降温到65℃,静止约60分钟,分层,即得到硫辛酸乙酯;(3):在水溶剂中加入硫辛酸乙酯,再加入氢氧化钠25g和四丁基溴化铵3g,400r/min搅拌,升温至80℃,反应结束后,趁热抽滤;(4):将步骤(3)得到的滤液降温至10℃,然后用盐酸调节pH至2,过滤即得到硫辛酸粗品;(5):将步骤(4)得到的硫辛酸粗品加入到混合溶剂(环己烷:乙酸乙酯=10:1(w:w))中,500r/min搅拌下,加热升温至45℃,保温50分钟,使硫辛酸粗品完全溶解,然后加入40℃的纯化水,保持搅拌15分钟,静止30分钟除去水层,将有机层加热升温到50℃后,加入硅胶,搅拌2h后,抽滤。然后冷却至20℃,搅拌析晶1小时,抽滤即得到硫辛酸湿精品,然后在40℃温度下干燥24小时。
实施例3
制备硫辛酸:(1):称取20g的硫化钠溶于100g纯化水中,在40℃溶解,配制成硫化钠溶液;(2):在150g水中加入6,8-二氯辛酸乙酯50g、硫磺8g、四丁基溴化铵3g,升温至85℃,将步骤(1)得到的硫化钠溶液缓慢加入到此水溶液中。加入硫化钠溶液后,继续反应4小时;反应结束后,降温到62℃,静止约60分钟,分层,即得到硫辛酸乙酯;(3):在水溶剂中加入硫辛酸乙酯,再加入氢氧化钠22g和四丁基溴化铵2g,300r/min搅拌,升温至70℃,反应结束后,趁热抽滤;(4):将步骤(3)得到的滤液降温至6℃,然后用盐酸调节pH至1.5,过滤即得到硫辛酸粗品;(5):将步骤(4)得到的硫辛酸粗品加入到混合溶剂(环己烷:乙酸乙酯=6:1(w:w))中,300r/min搅拌下,加热升温至42℃,保温40分钟,使硫辛酸粗品完全溶解,然后加入37℃的纯化水,保持搅拌12分钟,静止25分钟除去水层,将有机层加热升温到45℃后,加入硅胶,搅拌2h后,抽滤。然后冷却至18℃,搅拌析晶1小时,抽滤即得到硫辛酸湿精品,然后在37℃温度下干燥16小时。
实施例4
按本发明的方法制备硫辛酸注射液。
(1)称取市售硫辛酸20g,乙二胺5g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺1g;(2)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<20ug/ml);量取配液总量3/4的注射用水,也就是750ml;(3)称量:按处方量102%称取硫辛酸,按处方量称取乙二胺、N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺及足量活性炭;(4)稀配法:按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀;(5)加原料:在继续搅拌(100r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀;(6)加活性炭:再加水至1000ml,加入活性炭,搅拌20分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为3小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌15min。即得硫辛酸注射液。
实施例5
按本发明的方法制备硫辛酸注射液。
(1)称取市售硫辛酸50g,乙二胺8g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺8g;(2)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<50ug/ml);量取配液总量4/5的注射用水,也就是800ml;(3)称量:按处方量105%称取硫辛酸,按处方量称取乙二胺、N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺及足量活性炭;(4)稀配法:按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀;(5)加原料:在继续搅拌(500r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀;(6)加活性炭:再加水至1000ml,加入活性炭,搅拌40分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为4.5小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌30min。即得硫辛酸注射液。
实施例6
按本发明的方法制备硫辛酸注射液。
(1)称取市售硫辛酸25g,乙二胺6g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺0.1g;(2)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<20ug/ml);量取配液总量3/4的注射用水,也就是750ml;(3)称量:按处方量102%称取硫辛酸,按处方量称取乙二胺、N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺及足量活性炭;(4)稀配法:按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀;(5)加原料:在继续搅拌(300r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀;(6)加活性炭:再加水至1000ml,加入活性炭,搅拌30分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为4小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌30min。即得硫辛酸注射液。
实施例7
按本发明的方法制备硫辛酸注射液。
(1)称取实施例3中制备的硫辛酸25g,乙二胺6g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺0.1g;(2)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<20ug/ml);量取配液总量3/4的注射用水,也就是750ml;(3)称量:按处方量102%称取硫辛酸,按处方量称取乙二胺、N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺及足量活性炭;(4)稀配法:按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀;(5)加原料:在继续搅拌(300r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀;(6)加活性炭:再加水至1000ml,加入活性炭,搅拌30分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为4小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌30min。即得硫辛酸注射液。
实施例8
按本发明的方法制备硫辛酸注射液。
(1)称取实施例3中制备的硫辛酸25g,乙二胺6g;(2)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<20ug/ml);量取配液总量3/4的注射用水,也就是750ml;(3)称量:按处方量102%称取硫辛酸,按处方量称取乙二胺及足量活性炭;(4)稀配法:按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀;(5)加原料:在继续搅拌(300r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀;(6)加活性炭:再加水至1000ml,加入活性炭,搅拌30分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为4小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌30min。即得硫辛酸注射液。
实施例9
按本发明的方法制备硫辛酸脂质体注射液。
称取市售硫辛酸120g,二硬脂酸磷脂酰胆碱30g,十八胺50g,泊洛沙姆18825g,枸橼酸钠1g,巯基乙醇3g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺1g。
(1)处方量的硫辛酸、十八胺、二硬脂酸磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188、硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺溶于1000ml体积比为3∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入800ml pH为5的枸橼酸钠缓冲溶液,振摇,搅拌20分钟,转速为400r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化5分钟,转速9000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容至1000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射液。
实施例10
按本发明的方法制备硫辛酸脂质体注射液。
称取市售硫辛酸120g,二硬脂酸磷脂酰胆碱120g,十八胺80g,泊洛沙姆18840g,枸橼酸钠5g,巯基乙醇12g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺8g。
(1)处方量的硫辛酸、十八胺、二硬脂酸磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188、硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺溶于1000ml体积比为5∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入800ml pH为7的枸橼酸钠缓冲溶液,振摇,搅拌50分钟,转速为700r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化10分钟,转速12000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容至1000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射液。
实施例11
按本发明的方法制备硫辛酸脂质体注射液。
称取市售硫辛酸120g,二硬脂酸磷脂酰胆碱50g,十八胺60g,泊洛沙姆18830g,枸橼酸钠3g,巯基乙醇6g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺0.1g。
(1)处方量的硫辛酸、十八胺、二硬脂酸磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188、硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺溶于1000ml体积比为4∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入800ml pH为6.6的枸橼酸钠缓冲溶液,振摇,搅拌40分钟,转速为500r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化8分钟,转速10000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容至1000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射液。
实施例12
按本发明的方法制备硫辛酸脂质体注射液。
称取实施例3制备的硫辛酸120g,二硬脂酸磷脂酰胆碱50g,十八胺60g,泊洛沙姆18830g,枸橼酸钠3g,巯基乙醇6g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺0.1g。
(1)处方量的硫辛酸、十八胺、二硬脂酸磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188、硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺溶于1000ml体积比为4∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入800ml pH为6.6的枸橼酸钠缓冲溶液,振摇,搅拌40分钟,转速为500r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化8分钟,转速10000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容至1000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射液。
实施例13
按本发明的方法制备硫辛酸脂质体注射液。
称取实施例3制备的硫辛酸120g,二硬脂酸磷脂酰胆碱50g,十八胺60g,泊洛沙姆18830g,枸橼酸钠3g,巯基乙醇6g。
(1)处方量的硫辛酸、十八胺、二硬脂酸磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188溶于1000ml体积比为4∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入800ml pH为6.6的枸橼酸钠缓冲溶液,振摇,搅拌40分钟,转速为500r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化8分钟,转速10000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容至1000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射液。
对比例1
按照CN103655469A的方法制备硫辛酸注射液,具体步骤如下:
称取硫辛酸15g,乙二胺3.87g,注射用水加至600ml。
制备工艺:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<50ug/ml)。量取配液总量3/4的注射用水。按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀。在继续搅拌状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀。再加水至全量,加入活性炭,搅拌30分钟。经Φ3μm钛棒过滤器(5芯)粗滤脱碳。初测pH值为8.15。再经0.45μm聚醚砜折叠滤膜芯一级过滤、0.22μm聚醚砜折叠滤膜芯一级除菌过滤。再经过0.22μm聚醚砜折叠滤膜芯二级除菌过滤至灌封,121℃湿热灭菌15min,即得。
对比例2
按照CN102525930A的方法制备硫辛酸注射液,具体步骤如下:
称取硫辛酸240g、二硬脂酸磷脂酰胆碱300g、十八胺200g、泊洛沙姆188150g、氯化钠18g、巯基乙醇10g。
(1)将240g硫辛酸、200g十八胺、300g二硬脂酸磷脂酰胆碱和150g泊洛沙姆188溶于1500ml体积比为4∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入1500mlpH为6.6的枸橼酸盐缓冲溶液,振摇,搅拌30分钟,转速为500r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化12分钟,转速8000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入18g氯化钠和10g巯基乙醇,搅拌,定容至2000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得100支硫辛酸脂质体注射液。
对比例3
按照CN103655469A的方法制备硫辛酸注射液,具体步骤如下:
称取硫辛酸15g,乙二胺3.87g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺10g,注射用水加至600ml。
制备工艺:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<50ug/ml)。量取配液总量3/4的注射用水。按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀。在继续搅拌状态下缓慢加入处方量硫辛酸及硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺,搅拌均匀。再加水至全量,加入活性炭,搅拌30分钟。经Φ3μm钛棒过滤器(5芯)粗滤脱碳。初测pH值为8.15。再经0.45μm聚醚砜折叠滤膜芯一级过滤、0.22μm聚醚砜折叠滤膜芯一级除菌过滤。再经过0.22μm聚醚砜折叠滤膜芯二级除菌过滤至灌封,121℃湿热灭菌15min,即得。
对比例4
按照CN102525930A的方法制备硫辛酸注射液,具体步骤如下:
称取硫辛酸240g、硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺20g、二硬脂酸磷脂酰胆碱300g、十八胺200g、泊洛沙姆188150g、氯化钠18g、巯基乙醇10g。
(1)将240g硫辛酸、20g硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺、200g十八胺、300g二硬脂酸磷脂酰胆碱和150g泊洛沙姆188溶于1500ml体积比为4∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入1500mlpH为6.6的枸橼酸盐缓冲溶液,振摇,搅拌30分钟,转速为500r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化12分钟,转速8000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入18g氯化钠和10g巯基乙醇,搅拌,定容至2000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得100支硫辛酸脂质体注射液。
对比例5
制备硫辛酸注射液。
(1)称取实施例3中制备的硫辛酸25g,乙二胺6g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺10g;(2)预处理:注射用水充氮脱氧,检测水中含氧量合格(水中含氧量<20ug/ml);量取配液总量3/4的注射用水,也就是750ml;(3)称量:按处方量102%称取硫辛酸,按处方量称取乙二胺、N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺及足量活性炭;(4)稀配法:按处方比例加入乙二胺,搅拌均匀;(5)加原料:在继续搅拌(300r/min)状态下缓慢加入处方量硫辛酸,搅拌均匀;(6)加活性炭:再加水至1000ml,加入活性炭,搅拌30分钟;(7)脱碳:经4μm钛棒粗滤;(8)初测:测定pH值,溶液pH值应为8.0-8.3;(9)精滤:经0.45μm滤膜芯一级过滤;(10)终端过滤:经0.22μm滤膜芯二级除菌过滤至灌封步骤,配制开始到灌装开始的时限为4小时内;(11)灌封:检测中间产品,含量97.0-103.0%、pH值8.0-8.3为合格产品,将检测合格的中间产品药液灌装,灌封开始到灌封结束的时限为12小时内;(12)充氮、封口、灭菌:121℃湿热灭菌30min。即得硫辛酸注射液。
对比例6
制备硫辛酸脂质体注射液。
称取实施例3制备的硫辛酸120g,二硬脂酸磷脂酰胆碱50g,十八胺60g,泊洛沙姆18830g,枸橼酸钠3g,巯基乙醇6g,硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺10g。
(1)处方量的硫辛酸、十八胺、二硬脂酸磷脂酰胆碱、泊洛沙姆188、硫辛酸乙二胺单取代物N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺溶于1000ml体积比为4∶1的乙醇和丙酮的混合溶剂,混合均匀,于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂,得到类脂膜;
(2)在氮气保护下,向瓶中加入800mlpH为6.6的枸橼酸钠缓冲溶液,振摇,搅拌40分钟,转速为500r/min,使磷脂膜完全水化,用组织捣碎机高速匀质乳化8分钟,转速10000r/min,用0.45μm微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液;
(3)加入枸橼酸钠和巯基乙醇,搅拌,定容至1000ml,用0.45μm微孔滤膜过滤,灌装,即得硫辛酸脂质体注射液。
实施例14
对实施例6、实施例11的硫辛酸制剂进行液相色谱检测,并进行系统适应性试验。
具体方法为:选用Waters Symmetry C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,流动相由流动相A液与流动相B混合而成,流动相A为:0.002mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值为2;流动相B为:乙腈-甲醇(10:50);按表3进行梯度洗脱;流速为0.5ml/min;柱温为20℃;检测波长为200nm。
系统适应性试验结果如表4所示。
表3梯度洗脱流动相浓度变化
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 60 | 40 |
15 | 60 | 40 |
30 | 40 | 60 |
50 | 40 | 60 |
51 | 60 | 40 |
60 | 60 | 40 |
表4本方法的系统适应性
实施例15
对实施例6、实施例11的硫辛酸制剂进行液相色谱检测,并进行系统适应性试验。
具体方法为:选用Waters Symmetry C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,流动相由流动相A液与流动相B混合而成,流动相A为:0.008mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值为2.5;流动相B为:乙腈-甲醇(20:30);按表5进行梯度洗脱;流速为1.5ml/min;柱温为40℃;检测波长为250nm。
系统适应性试验结果如表6所示。
表5梯度洗脱流动相浓度变化
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 60 | 40 |
15 | 60 | 40 |
30 | 40 | 60 |
50 | 40 | 60 |
51 | 60 | 40 |
60 | 60 | 40 |
表6本方法的系统适应性
实施例16
对实施例6、实施例11的硫辛酸制剂进行液相色谱检测,并进行系统适应性试验。
具体方法为:选用Waters Symmetry C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,流动相由流动相A液与流动相B混合而成,流动相A为:0.005mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值为2.3;流动相B为:乙腈-甲醇(12:38);按表7进行梯度洗脱;流速为1.0ml/min;柱温为30℃;检测波长为215nm。
对实施例6的硫辛酸制剂的色谱图如图1所示,保留时间4.403的峰为N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺,保留时间31.992的峰为硫辛酸。
系统适应性试验结果如表8所示。根据表8数据可知,本实施例的方法为较优的检测方法。
表7梯度洗脱流动相浓度变化
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 60 | 40 |
15 | 60 | 40 |
30 | 40 | 60 |
50 | 40 | 60 |
51 | 60 | 40 |
60 | 60 | 40 |
表8本方法的系统适应性
实施例17
采用实施例16的方法对对比例1、2,实施例4-13的制剂中的硫辛酸及N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量进行检测。结果如表9所示。根据实施例8、实施例13的检测结果,采用本发明的制备方法,可以制备出N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺含量小于0.1g/L的硫辛酸注射液,也就是N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺含量小于0.01%(w/v),这是现有技术中无法达到的。
表9对比例1-4、实施例4-13的制剂中的硫辛酸及N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量
实施例18
对对比例1-4及实施例4-13制备的硫辛酸制剂进行长期毒性实验。(人与大鼠的剂量换算比值为6.25)
取健康SD大鼠,体重(125±10)g,每组50只,雌雄各半,实验组按制剂量每日0.5ml/kg的剂量静脉注射给药,空白对照组按等量生理盐水注射给药。投药前观察一周,各组动物活动、进食、粪便等情况均无异常,然后开始给药。
每天按时给药1次,连续60天,每周称体重一次,据体重变化调整给药量。进行外观体征、行为活动、粪便性状、食量、体重变化等一般观察。
待用药结束后,摘眼球取血进行血象、血生化检查,取心、肝、脾、肺、肾五个脏器称重,计算每100g体重的器官比重量。
实验结果如表10所示。
表10对比例1-4及实施例4-13制备的硫辛酸制剂进行长期毒性实验结果
根据表10的实验结果,对比例3-6中均出现了神经系统失常的大鼠,对比表9可知,在硫辛酸制剂中,N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺含量对大鼠的不良反应发生率有一定的影响,高含量的N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺导致不良反应率的上升。
实施例19
将对比例1-4及实施例4-13获得的成品,置于20℃避光保存18月。
分别检测上述硫辛酸制剂中硫辛酸及N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量。
检测方法如实施例16所述。
检测结果如表11所示。
表11 20℃避光保存18月后,对比例1-4、实施例4-13的制剂中的硫辛酸及N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量
由表11的结果可知,采用本发明中所述的制备方法制备的硫辛酸制剂(实施例4-13),相比与对比例1、对比例2的制备方法,在储存中N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的产生量更小(p<0.01),对硫辛酸的含量影响也更小(p<0.01)。
采用常规方法制备的硫辛酸制剂(对比例1-2),在产生N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的同时,其硫辛酸的含量也大幅降低,影响了药物的药效。
其中,采用本发明方法(实施例3)制备的硫辛酸,制备成相应制剂后(实施例7、8,实施例12、13),在储存中N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的产生量相对于市售硫辛酸制备的制剂(实施例4-6,实施例9-11),显著减少(p<0.01)。
上述数据证明,无论是采用本发明中提供的硫辛酸制备方法,或是硫辛酸制剂的制备方法,均能有效的降低在硫辛酸制剂储存过程中N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的产生量,从而保证硫辛酸主药含量的稳定。
实施例20
将对比例1-4及实施例4-13获得的成品,置于20℃避光保存18月。对上述制剂按实施例18的方法进行长期毒性实验。实验结果如表12所示。
表12 20℃避光保存18月后,对比例1-4及实施例4-13制备的硫辛酸制剂进行长期毒性实验结果
根据表12的实验结果可知,在硫辛酸制剂中,N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量对大鼠的不良反应发生率有显著的影响,高含量的N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺导致不良反应率显著上升。
由表12的实验结果可知,无论是对比例1-6,还是实施例5、10,当N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量超过8g/L(0.8%)时,大鼠不良反应发生率均显著提高(p<0.01),且含量越高,不良反应发生率越高;根据实施例4、6-9、11的结果,当N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量超过1g/L(0.1%)小于8g/L(0.8%)时,大鼠会发生极少量不良反应,显著少于含量超过8g/L的实施例(p<0.01);而实施例12、13中,N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量小于1g/L(0.1%),则没有出现不良反应。进一步证明了控制硫辛酸制剂中N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺含量的重要性,以及证明了本发明制备的硫辛酸制剂的稳定性及安全性。
而且,由表11数据可知,在20℃避光保存的条件下,硫辛酸制剂中N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的增加量最大约为10g/L每18个月,也就是0.56g/L/月,也就是0.056%/月,设某一时刻N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺含量为x%,那么在某些硫辛酸制剂中N-(2-氨基乙基)-1,2-二硫戊环-3-戊酰胺的含量会在检测后(0.8-x)/0.056月到达0.8%,使硫辛酸不良反应率显著提高,因此在检测后(0.8-x)/0.056月内使用硫辛酸制剂是更为安全的使用方式。
应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (1)
1.一种硫辛酸注射液中硫辛酸乙二胺单取代物的检测方法,所述方法为采用液相色谱法进行检测,固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相由流动相A液与流动相B混合而成,流动相A为:0.002-0.008mol/L磷酸盐溶液,用磷酸调节pH值为2-2.5;流动相B为乙腈-甲醇,配比为10-20:30-50;按表1进行梯度洗脱;流速为0.5-1.5ml/min;柱温为20-40℃;检测波长为200-250nm,
表1
。
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