CN109917026A

CN109917026A - 一种4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法

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Publication number: CN109917026A
Application number: CN201711322404.2A
Authority: CN
Inventors: 杨玥
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-12-12
Filing date: 2017-12-12
Publication date: 2019-06-21

Abstract

本发明涉及一种4,5‑二氨基‑2,7‑萘二磺酸的色谱分析方法。包括以下分析步骤：（1）高效液相色谱的条件为：色谱柱：选用XDB‑C18反相柱，规格为5μm，150×4.6mm；流动相组成体积比和梯度条件：0min10%甲醇‑90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；7min 10%甲醇‑90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；8min 20%甲醇‑80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；9min 40%甲醇‑60%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；10min 20%甲醇‑80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；11min 5%甲醇‑95%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；12min 1%甲醇‑99%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^‑1；（2）配置样品溶液；（3）制作标准曲线；（4）样品含量的测定以及精密度的确定。本发明具有很强的实用价值和广发的市场前景。

Description

一种4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法

技术领域

本发明涉及物质分析技术领域，具体涉及一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法。

背景技术

H 酸（1-氨基-8-萘酚-3，6-二磺酸）是染料工业的重要中间体，主要用于生产酸性、直接和活性染料，如酸性品红6B、酸性大红G、酸性黑10B、直接黑、活性艳红K-2BP、活性紫K-3R、活性深蓝K-R等90余种染料，这些染料用于毛纺，棉织物的染色，亦可用于生产药物，全球年需求量达十五万吨以上。

传统的H酸生产方法是以精萘为原料，经过磺化、硝化、还原等步骤得到产品，其中在还原步骤采用铁粉加酸还原，产生大量的铁泥，难以处理，为了解决传统制备工艺带来的环保问题，提出了新的制备思路：

利用4，5-二硝基-2，7-萘二磺酸进行还原生成4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸，其是合成H酸的重要中间体之一，也是H酸绿色合成过程中的重要步骤之一，同时，其也是重要的化工产品。目前准确测定4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸及其杂质含量的技术还不太成熟，在药物分析领域中准确测定4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸及其杂质含量还属于空白区。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法，包括以下分析步骤：（1）采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱条件如下：色谱柱： XDB-C18反相柱，5μm，150×4.6mm；流动相组成(体积比)和梯度条件：0min10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；7min 10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；8min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；9min 40%甲醇-60%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；10min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；11min 5%甲醇-95%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；12min 1%甲醇-99%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；

（2）配置样品溶液，分别配制4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的标准溶液及样品溶液；

（3）制作标准曲线；

（4）样品含量的测定以及精密度的确定。

所述样品的进样量优选20μL。

所述样品的检测波长为233nm。

本发明中的4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸标准品为自制药品，其制备方法如下：

取一定量的4,5 -二硝基-2,7-萘二磺酸，在一定的温度和压力下，采用可回收还原剂催化，保持反应一定时间，即得到粗产品，然后纯化，经液相色谱一质谱联用及核磁共振检测方法检测证实，粗产品为4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸和4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸及少许4-硝基-2,7-萘二磺酸的混合物，若原料的纯度不够，有可能混有少量的2,7-萘二磺酸，纯化后，4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸纯度可达98%，按照本发明高效液相色谱分析的色谱条件，4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的保留时间为5.608min；2,7-萘二磺酸的保留时间为8.938min；4-硝基-2,7-萘二磺酸保留时间为14.556min；4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸保留时间为15.408min，分离度好。

所述甲醇优选HPLC级，异丙醇优选HPLC级。

试验中流动相和溶液用水优选二次石英蒸馏水。

本发明与现有技术相比具有的有益效果是：本发明的分析方法可以准确测定4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸主体含量，同时准确测定原料4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸及原料杂质2,7-萘二磺酸的含量，方法简单，分离度好，分析时间短，为监控H酸生产过程的质量提供了可靠的保障。

附图说明

图1为本发明中各标准品混合溶液的液相色谱图；

图2为产品4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的标准曲线图；

图3为原料4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸的标准曲线图；

图4为杂质2,7-萘二磺酸的标准曲线图；

图5为实验室制备4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的样品图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明中的主要实验仪器及色谱条件为：Agilent 1100高效液相色谱仪DAD检测器；XDB-C18反相柱，规格为5μm，150×4.6mm；流动相组成体积比和梯度条件：0min10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；7min 10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；8min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；9min 40%甲醇-60%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；10min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；11min 5%甲醇-95%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；12min 1%甲醇-99%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1，本发明中的进样量为20 μL；用紫外可见分光光度计在200-700nm进行连续扫描， 2,7-萘二磺酸、4-硝基-2,7-萘二磺酸、4,5 -二硝基-2,7-萘二磺酸及4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸均在233nm处有特征吸收，故确定检测波长为233nm。

本法明中的试剂与药品为：4,5 -二硝基-2,7-萘二磺酸，生产过程硝化步骤纯化产品；4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸标准品，传统方法制备纯化，并经过液相色谱-质谱鉴定；4-二硝基-2,7-萘二磺酸标准品，传统方法制备纯化，并经过液相色谱-质谱鉴定；2,7-萘二磺酸，标准品，国药集团；甲醇：HPLC级；异丙醇：HPLC级；硫酸锂：分析纯，国药集团；实验中流动相和溶液用水均为二次石英蒸馏水。

本发明中的4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸标准品的制备方法如下：取一定量的4,5-二硝基-2,7-萘二磺酸，在一定的温度和压力下，采用可回收还原剂催化，保持反应一定时间，即得到粗产品，然后纯化，经液相色谱一质谱联用及核磁共振检测方法检测证实，粗产品为4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸和4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸及少许4-硝基-2,7-萘二磺酸的混合物，若原料的纯度不够，有可能混有少量的2,7-萘二磺酸，纯化后，4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸纯度可达98%，按照本发明高效液相色谱分析的色谱条件，4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的保留时间为5.608min；2,7-萘二磺酸的保留时间为8.938min；4-硝基-2,7-萘二磺酸保留时间为14.556min；4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸保留时间为15.408min，分离度好，具体分离情况可参见图1。

本发明中标准溶液配制的方法为：准确称取0. 1590g 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸标准品，置于50mL容量瓶中，溶解，再用二次水定容至50mL，摇匀，配成浓度为0. 01mo1·L^-1的4,5 -二硝基-2,7-萘二磺酸标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度；准确称取0.1892g 4,5-二硝基-2,7-萘二磺酸标准品，置于50mL容量瓶中，加入二次水使之溶解，再用二次水定容至50mL，摇匀，配成浓度为0. 01mo1·L^-1的标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度；2,7-萘二磺酸标准溶液采用类似方法配置。

实验结果表明：甲醇含量增加，混合标样出峰时间很快，但是无法分离；硫酸锂含量增加，分离度增大，但是4,5 -二硝基-2,7-萘二磺酸出峰时间明显增加，且硫酸锂溶液对色谱柱损伤较大，损坏柱子。

实施例1.

标准曲线的制作

选择本发明的高效液相色谱条件，即色谱柱为XDB-C18反相柱，规格为5μm，150×4.6mm；流动相组成体积比和梯度条件：0min10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；7min10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；8min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；9min 40%甲醇-60%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；10min20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；11min 5%甲醇-95%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；12min 1%甲醇-99%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；检测波长为233nm；进样量为20 μL。

取4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸标准溶液进样，以峰面积对浓度作图如图2所示，4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸在溶液浓度为2.5×10^-5 ～5.0×10^-4 mo1·L^-1的范围内线性关系良好，回归方程为： y= 3.64×10⁶x +19.94 R² = 0.9962。

取4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸标准溶液进样，以峰面积对浓度作图如图3所示，4，5-二硝基-2,7-萘二磺酸在溶液浓度为5.0×10^-5 ～7.5×10^-4 mo1·L^-1的范围内线性关系良好，回归方程为：y=1.64×10⁶x-66.77 R²=0.9864。

取2,7-萘二磺酸标准溶液进样，以峰面积对浓度作图如图4所示， 2,7-萘二磺酸在溶液浓度为1.0×10^-4 ～2.0×10^-3 mo1·L^-1的范围内线性关系良好，回归方程为：y=9.01×10⁴x+16.6 R²=0.9960。

实施例2.

样品的测定

1、4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸含量的测定

准确称取0. 0159g 4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸自制样品置于100 mL容量瓶中，加入二次水使之溶解，再用二次水定容至100 mL,摇匀，4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸含量的测定方法与实施例1中用高效液相色谱法测定各物质的方法相同，4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸样品的色谱图如图5所示，4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸自制样品的检测结果如表下表：

表一样品检测结果

样品	4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸	4,5-二硝基-2,7-萘二磺酸	2,7-萘二磺酸
				1	98.2%	0.25%	1.55%
2	99.1%	0.9%	0
				3	97.4%	1.9%	0.7%

2、标准回收试验

标准加入回收试验中4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸的测定方法与实施例1中用高效液相色谱法测定各物质的方法相同，回收实验结果如下表，回收率在97.8%～101.3%，且无系统误差。

表二回收率试验

3、4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸精密度试验

将同一份样品在相同的条件下连续监测7次，监测时用于测定4,5-二氨基-2,7-萘二磺酸的方法与实施例1中用高效液相色谱法测定各物质的方法相同，精密度试验结果见下表，由下表可知，保留时间的RSD%为1.88%，峰面积的RSD%为2.54%，精密度良好。

表三精密度试验

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法，其特征在于包括以下分析步骤：

（1）采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱的条件为：色谱柱：选用XDB-C18反相柱，规格为5μm，150×4.6mm；

流动相组成体积比和梯度条件：0min10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；7min10%甲醇-90%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；8min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；9min 40%甲醇-60%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；10min 20%甲醇-80%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；11min 5%甲醇-95%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；12min 1%甲醇-99%Li₂SO₄，流速为0.8mL·min^-1；

（3）制作标准曲线；

（4）样品含量的测定以及精密度的确定。

2.根据权利要求1所述的一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法，其特征在于：所述样品的进样量优选20μL。

3.根据权利要求1所述的一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法，其特征在于：所述样品的检测波长为233nm。

4.根据权利要求1所述的一种 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的色谱分析方法，其特征在于：所述步骤（2）中的4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸标准品为自制药品，制备方法为：取一定量的4,5 -二硝基-2,7-萘二磺酸，在一定的温度和压力下，采用可回收还原剂催化，保持反应一定时间，制得粗产品后再纯化，并经过液相色谱-质谱鉴定。