CN110261340A - 一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法及传感器 - Google Patents
一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法及传感器 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110261340A CN110261340A CN201910440739.7A CN201910440739A CN110261340A CN 110261340 A CN110261340 A CN 110261340A CN 201910440739 A CN201910440739 A CN 201910440739A CN 110261340 A CN110261340 A CN 110261340A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- paes
- aptamer
- solution
- colorimetric sensor
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000012800 visualization Methods 0.000 title claims abstract description 11
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 title claims abstract description 6
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 claims abstract description 81
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 35
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 29
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 15
- 239000004803 Di-2ethylhexylphthalate Substances 0.000 claims description 14
- BJQHLKABXJIVAM-UHFFFAOYSA-N bis(2-ethylhexyl) phthalate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCC(CC)CCCC BJQHLKABXJIVAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 claims description 13
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 10
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 9
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 8
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 7
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 claims description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 PCB77 Chemical compound 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004088 simulation Methods 0.000 claims description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 claims description 2
- REHONNLQRWTIFF-UHFFFAOYSA-N 3,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl Chemical compound C1=C(Cl)C(Cl)=CC=C1C1=CC(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1 REHONNLQRWTIFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C2C=CC1C(C(=O)O)C2(C(O)=O)[N+]([O-])=O QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 229910004042 HAuCl4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- MXWJVTOOROXGIU-UHFFFAOYSA-N atrazine Chemical compound CCNC1=NC(Cl)=NC(NC(C)C)=N1 MXWJVTOOROXGIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 claims description 2
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 claims description 2
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000010206 sensitivity analysis Methods 0.000 claims description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 claims 1
- 150000003022 phthalic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003911 water pollution Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 62
- DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N dibutyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCC DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- IRIAEXORFWYRCZ-UHFFFAOYSA-N Butylbenzyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 IRIAEXORFWYRCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 8
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 7
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000031320 Teratogenesis Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- NMJJFJNHVMGPGM-UHFFFAOYSA-N butyl formate Chemical group CCCCOC=O NMJJFJNHVMGPGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000001779 embryotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000238 embryotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000049 endocrine disruptor Toxicity 0.000 description 1
- 239000000598 endocrine disruptor Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 125000005498 phthalate group Chemical class 0.000 description 1
- 238000001020 plasma etching Methods 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000004544 sputter deposition Methods 0.000 description 1
- 238000004416 surface enhanced Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于环境工程以及水污染检测与治理领域，涉及一种核酸适配体比色传感器及其制备方法和应用：基于核酸适配体比色传感器的快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法。将截短优化后具有特定碱基序列、对一类结构相似的PAEs具备特异性识别能力的广谱性核酸适配体与高灵敏度的比色分析技术相结合，构筑得到检测PAEs总量的核酸适配体比色传感器。本发明采用可高亲和力结合多种PAEs的广谱性核酸适配体作为识别元件，成功实现对该类物质总量的高灵敏度、快速和可视化检测分析。PAEs的线性检测范围为0.003μg/L～10μg/L，检测限低达1ng/L。与现有技术相比，该传感器具有操作简便、响应快速、易于微型化且检测结果可视化等优点。
Description
技术领域
本发明属于环境工程以及水污染检测与治理领域，尤其是涉及一种基于广谱性核酸适配体的比色传感器的构筑及对多种PAEs总量的高灵敏度、简便快速及可视化检测分析。
背景技术
邻苯二甲酸酯类化合物(Phthalates，PAEs)作为塑料工业中应用最普遍的一类塑化剂，具有难降解和生物富集效应且通过非共价结合方式与塑料制品相互作用，随着时间推移极易转移至环境中，全球化广泛应用使其在实际水体中大量残留。近年来，在我国的长江、黄河、黄浦江、松花江、巢湖等主要水流域出现了不同程度的PAEs污染，对居民用水和日常生活产生了严重影响。PAEs作为一类典型的环境内分泌干扰物，具有严重的致畸致癌作用和胚胎毒性，对胰脏和肾脏具有严重损害功能，给动物和人类健康产生了极大威胁。其中，最具代表性的邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸丁苄酯(BBP)在塑料制品中添加量巨大、污染范围广且毒性最强，这一类PAEs先后被美国、欧盟、中国等国家列入“优先控制污染物名单”。此外，作为一类毒性效应相似且危害严重的内分泌干扰物质，PAEs在实际水环境中浓度低、成分复杂、种类丰富难以分离，且与多检测种毒性及残留量明显差异的其他污染物共存。因此，建立一种简便快速、高灵敏度、高选择性检测多种PAEs总量的传感方法对保护人类健康和生态环境具有重要的现实意义。
目前，包括气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法在内的色谱法作为最普遍的检测手段广泛应用于PAEs的定量检测。然而，由于样品基质的复杂性以及PAEs的浓度较低，仪器分析前复杂的前处理过程不可避免。例如，通过分子印迹微球对PAEs进行识别，或制备磁性核壳微球等吸附剂结合液-液萃取(LLE)、固相微萃取(SPME)、同步蒸馏萃取(SDE)等手段预先对样品进行净化与富集，这些过程往往时间长、费用高。近期有研究指出通过表面增强拉曼光谱法可实现对痕量DMP的检测，但该方法需使用等离子体刻蚀和离子溅射方法制备贵金属固相基底，制备成本高、难度大，需要专门的仪器设备和操作人员。更为严重的是，这些方法仅仅是对单一种类PAEs的各自含量进行逐一测定，无法通过一步测定方法直接获得PAEs的总量。尽管有研究表明通过将所有PAEs经水解作用转化为邻苯二甲酸(PA)，以PA作为检测对象可间接得PAEs的总量，但该方法仍然面临上述色谱手段检测中存在的问题。所以，开发一种简便快速的一步测定一类PAEs总量的分析方法尤为重要。
比色法不仅操作简便、响应快速，不需要昂贵的大型仪器易于微型化，而且灵敏度高、可以对检测结果进行可视化分析。核酸适配体(aptamer)作为一种采用SELEX技术体外筛选得到的单链DNA或者RNA序列，对靶标物质具有专一性识别与高亲和力结合的能力，同时具有合成周期短、合成成本低、稳定性高、易于修饰等优点。通过裁剪修饰等手段可提高核酸适配体对靶标物质的亲和力、拓宽识别范围，并且在结合过程中截短的适配体序列更易发生构象转换。因此，本发明将分子剪裁设计后的高亲和力、特异性识别多种结构相似PAEs的广谱性核酸适配体与比色方法相结合，实现了对PAEs总量的简便快速、高灵敏度及高选择性检测。具体如下：对PAEs的长链核酸适配体序列进行分子剪裁与设计，采用Mfold二级结构模拟和AutoDock分子对接方法筛选可高亲和力结合一类PAEs的广谱性核酸适配体。将该核酸适配体与氯化钠溶液加入到金纳米粒子溶胶中，表面被核酸适配体包裹的金纳米粒子在高浓度电解质条件下仍呈分散状态显红色。当向体系中加入PAEs混合污染物后，核酸适配体会从金纳米粒子表面脱离并与PAEs发生特异性结合作用。失去保护的金纳米粒子在较高浓度氯化钠条件下发生聚集，紫外特征吸收峰由520nm红移至646nm，溶液颜色相应变蓝。根据金纳米粒子的A646nm/A520nm值与PAEs浓度的对应关系可实现对PAEs总量的快速可视化测定。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述现有PAEs检测技术存在前处理过程复杂、仪器价格昂贵、分析耗时、无法实现一步总量检测等问题而提供的一种基于广谱性核酸适配体的PAEs总量比色传感方法。利用高亲和力、特异性识别一类结构相似PAEs的广谱性核酸适配体作为识别元件，在比色传感器高灵敏度的基础上提高了对PAEs类物质的选择性，实现了对多种PAEs总量的一步检测。同时，该比色传感器具有构筑简便、响应快速、可视化分析等优点。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的核酸适配体比色传感器，其特征在于，该核酸适配体比色传感器以具有特定碱基序列、具备高亲和力与广谱性识别一类PAEs功能的核酸适配体作为识别元件，构筑得到比色传感器，其中核酸适配体的碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’。
采用Mfold软件和AutoDock分子对接模拟的方法对PAEs的长链核酸适配体进行剪裁设计与分段检测，获得亲和力提高、对一类PAEs具有特异性识别能力的广谱性核酸适配体作为识别元件。采用柠檬酸钠还原法制备金纳米粒子溶胶，加入上述核酸适配体溶液孵育5～15min，加入15～35μL不同浓度的PAEs混合污染物溶液，充分作用后加入较高浓度的氯化钠溶液，构筑得到检测PAEs总量的核酸适配体比色传感器。采用该核酸适配体比色传感器快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量，具体步骤如下：
(1)采用Mfold软件对PAEs的长链核酸适配体序列进行二级结构模拟与分子剪裁设计，将从不同位置截断的适配体片段与DEHP、DBP、BBP进行AutoDock分子对接模拟实验，筛选出保留PAEs结合位点、对一类PAEs具有特异性识别能力且亲和能力显著提高的截断片段作为PAEs的广谱性核酸适配体，其碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’
(2)在反应器中，将浓度为0.05～2mM的氯金酸(HAuCl4)溶液加热直到沸腾，随后把浓度为30～40mM的柠檬酸钠溶液迅速且连续地加入沸腾溶液中，快速搅拌5～20min直到溶液变为酒红色，冷却至室温，其中氯金酸(HAuCl4)溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为(5～15)：(1～2)，将所得的金纳米溶液用0.22μm水相滤膜过滤得到金纳米粒子溶胶；
(3)向样品瓶加入金纳米粒子溶胶和浓度为1～3μM的核酸适配体溶液，作用孵育10～20min后加入不同浓度的PAEs溶液，待反应完全后加入NaCl溶液，孵育3～10分钟后，得到核酸适配体比色传感器；其中，金纳米粒子溶胶、核酸适配体溶液、PAEs溶液和NaCl溶液的体积比为：体积比为(150～250)：(30～70)：(15～35)：(15～35)，使用截断优化后的对PAEs类物质具有特异性识别能力的寡核苷酸序列做为PAEs的核酸适配体溶液。
(4)依次称取质量为1g的DEHP、DBP和BBP，以乙醇为溶剂配制浓度为0.1g/mL的三种PAEs储备液，随后将三种PAEs混合得到总浓度为0.1g/mL的PAEs标准混合物溶液，此后可稀释得到不同浓度的PAEs标准混合污染物；将浓度范围为0.003μg/L～10μg/L的PAEs标准混合污染物分别加入到核酸适配体比色传感器中，在室温条件下作用5～20分钟，采用紫外-可见分光光度计对不同体系的紫外-可见吸收光谱进行测定，根据646nm与520nm处吸光度的比值A646nm/A520nm与PAEs浓度的对数之间的线性关系建立标准工作曲线，实现对PAEs的高灵敏度分析；
(5)将PAEs标准混合污染物溶液和100倍于PAEs浓度的不同干扰物溶液分别加入到核酸适配体比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱；根据PAEs和干扰物引起的金纳米粒子在646nm与520nm处吸光度比值A646nm/A520nm的不同实现对PAEs的选择性分析；其中向体系中加入的干扰物包括实际水体中经常存在的内分泌干扰物：Cd2+、阿特拉津、PCB77、PCB126、雌二醇和雌酮，以及水体中大量存在的葡萄糖、氨基酸和腐殖酸。
(6)将需要检测的实际水样，经过0.22μm水相滤膜重复过滤除去水样中的大颗粒及悬浮物质，将未加标及加入0.05μg/L，0.5μg/L和5μg/L PAEs标准混合污染物的实际水样加入到所述的核酸适配体比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱，并与步骤(4)得到的标准工作曲线进行对比，得到多种邻苯二甲酸酯类污染物总量。
与现有技术相比，本发明采用分子剪裁与结构模拟的方法设计得到高亲和力、高特异性结合多种PAEs的广谱性核酸适配体，结合操作简便、响应快速、结果可视化的比色分析方法，创新性地构筑了一个检测PAEs总量的核酸适配体比色传感器。与现有PAEs的检测技术相比，本发明具体以下优点：
(1)与传统分析方法如气相色谱法、高效液相色谱法相比，本发明构筑的核酸适配体比色传感器无需复杂的前处理过程、不需要昂贵的大型仪器、操作简便、响应快速，可实现对PAEs的快速检测。
(2)与现有的生物传感器相比，本发明通过分子剪裁和结构模拟得到的广谱性核酸适配体对一类PAEs具有特异性识别能力且亲和力显著提高，从而可将多种PAEs同时识别出来实现对PAEs总量的一步检测；结合构筑简便、灵敏度高的比色分析技术，核酸适配体作为识别元件赋予比色方法更优异的选择性，可实现复杂体系中PAEs总量的高灵敏度和高选择性检测分析，同时检测过程方便快速、检测结果更为直观可视化。
附图说明
图1为构筑的PAEs总量的核酸适配体比色传感器的吸光度比值A646nm/A520nm与PAEs浓度对数的线性拟合曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
一种基于广谱性核酸适配体的检测多种PAEs总量的比色传感器，以可识别一类PAEs的广谱性核酸适配体作为识别元件，根据金纳米粒子聚集状态的改变造成吸光度比值A646nm/A520nm的变化对PAEs浓度进行快速可视化分析，该传感器通过以下步骤进行构筑：
(1)采用Mfold软件对PAEs的长链核酸适配体序列进行二级结构模拟，以Loop环作为主体通过截取两侧不同支链对其进行分子剪裁与设计，得到不同长度的核酸适配体片段。将不同的适配体片段与DEHP、DBP、BBP进行AutoDock分子对接模拟实验，筛选出保留PAEs结合位点、对一类PAEs具有特异性识别能力且亲和能力显著提高的截断片段作为PAEs的广谱性核酸适配体。其中，获得的广谱性核酸适配体的碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’
(2)在洁净的烧杯中，将100mL浓度为1mM的氯金酸(HAuCl4)溶液加热直到沸腾，随后把10mL 38.8mM柠檬酸钠溶液迅速且连续地加入沸腾溶液中，并快速搅拌5min直到溶液变为酒红色，冷却至室温。将所得的金纳米溶液用0.22μm水相滤膜过滤得到金纳米粒子溶胶，置于棕色瓶中在4℃下冰箱中保存。
(3)向样品瓶中加入200μL金纳米粒子溶胶和40μL 2μM的核酸适配体溶液，孵育10min；随后向体系中加入25μL不同浓度的PAEs溶液，孵育10min；待完全反应后加入25μL500mM的NaCl，孵育4min，得到核酸适配体比色传感器。
实施例2
对影响核酸适配体比色传感器灵敏度的实验参数进行了优化，包括：氯化钠的浓度、核酸适配体的浓度以及体系的孵育时间。具体过程为：分别向金纳米溶胶体系中加入浓度区间为0.06～0.47μmol/L和17.24～103.45mmol/L的核酸适配体溶液和氯化钠溶液。采用紫外-可见分光光度计对不同比色体系的吸光度进行测定，根据A646nm/A520nm的值确定核酸适配体的最优浓度为0.28μmol/L，氯化钠的的最优浓度为43.1mM。反应4min时A646nm/A520nm趋于稳定状态，将体系检测的最佳时间确定为4min。
实施例3
依次称取质量为1g的DEHP、DBP和BBP，以乙醇为溶剂溶解于10ml的容量瓶中得到浓度为0.1g/mL的三种PAEs储备液。随后将三种等浓度的PAEs溶液等体积混合，得到DEHP、DBP、BBP比例为1:1:1,PAEs总浓度为0.1g/mL的标准混合物储备液，此后可稀释得到不同浓度的PAEs标准混合污染物溶液。将DEHP、DBP和BBP以不同体积混合，可得到不同比例的PAEs混合污染物溶液。
实施例1构筑得到的核酸适配体比色传感器中加入的PAEs混合污染物的浓度区间为0.003μg/L～10μg/L，充分孵育后采用紫外-可见分光光度计检测体系吸光度的变化并计算金纳米粒子的A646nm/A520nm值。图1右下角插图为加入不同浓度PAEs后体系的紫外-可见吸收光谱图，随着PAEs浓度逐渐增加，金纳米粒子在520nm处的特征吸收峰逐渐降低，646nm处的吸收强度逐渐提高，A646nm/A520nm逐渐增大。根据A646nm/A520nm与PAEs浓度对数之间的关系绘制工作曲线，结果如图1所示，其线性回归方程为A646nm/A520nm＝1.0689+0.25238Log(CPAEs/μg.L -1)，线性相关系数R2可达0.998，最低检测限为1ng/L。
实施例4
(1)向样品瓶中加入200μL实施例1中制备的金纳米粒子溶胶和40μL 2μM的核酸适配体溶液，孵育10min；随后向体系中加入25μL实施例3中配制的不同浓度的PAEs溶液，孵育10min；待完全反应后加入25μL 500mM的NaCl，孵育4min后采用紫外-可见分光光度计检测体系吸光度的变化并计算金纳米粒子的A646nm/A520nm值。研究结果表明，随着PAEs浓度的增大，金纳米粒子的特征吸收峰发生红移，且520nm处的吸光度逐渐降低，646nm处的吸光度逐渐升高，A646nm/A520nm值逐渐增加。由此可见，利用实施例1中得到的24个碱基的核酸适配体构筑的比色传感器可对不同浓度PAEs的总量实现高灵敏度检测。本实验中使用的对一类PAEs具有广谱性识别能力的核酸适配体的碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’
(2)向样品瓶中加入200μL实施例1中制备的金纳米粒子溶胶和40μL 2μM错配碱基的核酸适配体溶液，孵育10min；随后向体系中加入25μL实施例3中配制的不同浓度的PAEs溶液，孵育10min；待完全反应后加入25μL 500mM的NaCl，孵育4min后采用紫外-可见分光光度计检测体系吸光度的变化并计算金纳米粒子的A646nm/A520nm值。研究结果表明，金纳米粒子特征吸收峰的位置并未随着PAEs浓度的变化发生改变，且520nm处的吸光度值未发生明显改变，646nm处也未出现新的特征吸收峰。可见，碱基错配后的核酸适配体对PAEs不具备特异性识别能力，由此构筑的传感器无法实现对不同浓度的PAEs的高灵敏度检测。本实验中使用的错配碱基的核酸适配体的序列为：
5’-TCGCG-TCCCG-CACGT-TCTCC-GCGT-3’
5’-TCACA-GGCTA-CGCAT-AGTAC-ACAT-3’
5’-GACTA-TCCCA-AGCTA-TCTCC-TGCA-3’
实施例5
采用实施例1构筑得到的核酸适配体比色传感器对100倍PAEs浓度的不同干扰物溶液进行检测。采用紫外可见分光光度计测试不同体系中金纳米粒子的A646nm/A520nm值，并以PAEs的信号值为标准，计算相对信号强度。研究结果表明，PAEs造成AuNPs聚集状态变化明显高于其他污染物，干扰物的相对信号值均小于30％。可见，所构筑的核酸适配体比色传感器对于PAEs可实现高特异性结合，不受其他污染物的干扰，本发明对于PAEs检测具有优越的选择性。
实施例6
采用实施例1构筑得到的核酸适配体比色传感器对实施例3中不同比例的PAEs混合污染物的总量进行检测分析。其中，DEHP、DBP、BBP的比例分别为1:0:0、0:1:0、0:0:1、1:1:0、1:0:1、0:1:1、1:1:1、1:2:3、2:3:1、3:2:1，PAEs总浓度均为10μg/L。孵育4min后采用紫外可见分光光度计测试金纳米粒子A646nm/A520nm的变化。结果表明，不同比例的PAEs混合物的信号几乎一致，均接近于1，检测误差在98.8％～104.3％之间。因此，广谱性PAEs核酸适配体可将PAEs类物质特异性识别出来，从而实现对未知比例的PAEs混合污染物总量的准确测定。
实施例7
将取自塑料加工厂附近河水和市面销售瓶装矿泉水经过0.22μm水相滤膜重复过滤三次以除去水样中的大颗粒及悬浮物质，保存于玻璃瓶中置于4℃冰箱待用。将未加标及加入0.05μg/L，0.5μg/L和5μg/LPAEs Mix的上述实际水样采用实施例1构筑得到的核酸适配体比色传感器对PAEs总量进行测定。研究结果表明，构筑的核酸适配体比色传感器对实际水样的检测具有满意的回收率和相对标准偏差，回收率在95％～108.5％范围内，相对标准偏差在4.56％～9.89％(n＝3)之间，与HPLC的测定结果基本一致。测试结果表明，构筑的核酸适配体比色传感器对PAEs总量检测灵敏度高、准确性强、无需复杂的前处理过程，且操作简单、可视化、成本低，对于实际水体中PAEs总量的检测具有很强的实用性。
实施例8
(1)采用Mfold软件对PAEs的长链核酸适配体序列进行二级结构模拟，通过截取不同支链进行分子剪裁与设计，将不同的截断片段与DEHP、DBP、BBP进行AutoDock分子对接模拟，筛选出保留PAEs结合位点、对多种PAEs具有特异性识别能力且亲和能力显著提高的截断片段作为PAEs的广谱性核酸适配体，其碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’
(2)在洁净的烧杯中，将50mL浓度为0.05mM的氯金酸(HAuCl4)溶液加热直到沸腾，随后把10mL浓度为30mM的柠檬酸钠溶液迅速且连续地加入沸腾溶液中，快速搅拌5min直到溶液变为酒红色，冷却至室温。将所得的金纳米溶液用0.22μm水相滤膜过滤得到金纳米粒子溶胶。
(3)向样品瓶中加入150μL的金纳米粒子溶胶和30μL浓度为1μM的核酸适配体溶液，孵育10min后加入15μL不同浓度的PAEs溶液，待反应完全后加入15μL的NaCl溶液，孵育3分钟后，得到核酸适配体比色传感器。其中，使用截断优化后的对PAEs类物质具有特异性识别能力的寡核苷酸序列做为PAEs的核酸适配体溶液。
(4)依次称取质量为1g的DEHP、DBP和BBP，以乙醇为溶剂配制浓度为0.1g/mL的三种PAEs储备液。随后将三种PAEs混合得到总浓度为0.1g/mL的PAEs标准混合物储备液，此后可稀释得到不同浓度的PAEs标准混合污染物。将15μL不同浓度的PAEs标准混合污染物溶液分别加入到步骤(3)所制备的比色传感器中，在室温条件下作用10分钟，采用紫外-可见分光光度计对不同体系的紫外-可见吸收光谱进行测定。根据646nm与520nm处吸光度的比值A646nm/A520nm与PAEs浓度的对数之间的线性关系建立工作曲线。
(5)将PAEs标准混合污染物溶液和100倍于PAEs浓度的不同干扰物溶液分别加入到步骤(3)所制备的比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱。根据PAEs和干扰物引起的金纳米粒子在646nm与520nm处吸光度比值A646nm/A520nm的不同实现对PAEs的选择性分析。
(6)取塑料加工厂附近河水、市面销售瓶装矿泉水作为实际水样，经过0.22μm水相滤膜重复过滤三次以除去水样中的大颗粒及悬浮物质。将未加标及加入0.05μg/L，0.5μg/L和5μg/L PAEs混合污染物的实际水样加入到步骤(3)所构筑的比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱。
实施例9
(1)采用Mfold软件对PAEs的长链核酸适配体序列进行二级结构模拟，通过截取不同支链进行分子剪裁与设计，将不同的截断片段与DEHP、DBP、BBP进行AutoDock分子对接模拟，筛选出保留PAEs结合位点、对多种PAEs具有特异性识别能力且亲和能力显著提高的截断片段作为PAEs的广谱性核酸适配体，其碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’
(2)在洁净的烧杯中，将150mL浓度为2mM的氯金酸(HAuCl4)溶液加热直到沸腾，随后把20mL浓度为40mM的柠檬酸钠溶液迅速且连续地加入沸腾溶液中，快速搅拌20min直到溶液变为酒红色，冷却至室温。将所得的金纳米溶液用0.22μm水相滤膜过滤得到金纳米粒子溶胶。
(3)向样品瓶中加入250μL的金纳米粒子溶胶和70μL浓度为3μM的核酸适配体溶液，孵育10～20min后加入35μL不同浓度的PAEs溶液，待反应完全后加入35μL的NaCl溶液，孵育3～10分钟后，得到核酸适配体比色传感器。其中，使用截断优化后的对PAEs类物质具有特异性识别能力的寡核苷酸序列做为PAEs的核酸适配体溶液。
(4)依次称取质量为1g的DEHP、DBP和BBP，以乙醇为溶剂配制浓度为0.1g/mL的三种PAEs储备液。随后将三种PAEs混合得到总浓度为0.1g/mL的PAEs标准混合物储备液，此后可稀释得到不同浓度的PAEs标准混合污染物。将35μL不同浓度的PAEs标准混合污染物溶液分别加入到步骤(3)所制备的比色传感器中，在室温条件下作用20分钟，采用紫外-可见分光光度计对不同体系的紫外-可见吸收光谱进行测定。根据646nm与520nm处吸光度的比值A646nm/A520nm与PAEs浓度的对数之间的线性关系建立工作曲线。
(5)将PAEs标准混合污染物溶液和100倍于PAEs浓度的不同干扰物溶液分别加入到步骤(3)所制备的比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱。根据PAEs和干扰物引起的金纳米粒子在646nm与520nm处吸光度比值A646nm/A520nm的不同实现对PAEs的选择性分析。
(6)取塑料加工厂附近河水、市面销售瓶装矿泉水作为实际水样，经过0.22μm水相滤膜重复过滤三次以除去水样中的大颗粒及悬浮物质。将未加标及加入0.05μg/L，0.5μg/L和5μg/L PAEs混合污染物的实际水样加入到步骤(3)所构筑的比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
Claims (3)
1.一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的核酸适配体比色传感器，其特征在于，该核酸适配体比色传感器以具有特定碱基序列、具备高亲和力与广谱性识别一类PAEs功能的核酸适配体作为识别元件，构筑得到比色传感器，对实际水环境中高毒性、低浓度的多种PAEs总量实现高灵敏度与高选择性检测；其中核酸适配体的碱基序列为：
5’-TCACA-TCCCA-CGCAT-TCTCC-ACAT-3’。
2.根据权利要求1所述的一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的核酸适配体比色传感器，其特征在于，所述具备高亲和力与广谱性识别一类PAEs功能的广谱性核酸适配体通过以下方法获得：采用Mfold软件对PAEs的长链核酸适配体序列进行二级结构模拟与分子剪裁设计，将从不同位置截断的适配体片段与DEHP、DBP、BBP进行AutoDock分子对接模拟实验，筛选出保留PAEs结合位点、对一类PAEs具有特异性识别能力且亲和能力显著提高的截断片段作为PAEs的广谱性核酸适配体。
3.一种基于权利要求1所述的核酸适配体比色传感器快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)在反应器中，将浓度为0.05～2mM的氯金酸(HAuCl4)溶液加热直到沸腾，随后把浓度为30～40mM的柠檬酸钠溶液迅速且连续地加入沸腾溶液中，快速搅拌5～20min直到溶液变为酒红色，冷却至室温，其中氯金酸(HAuCl4)溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为(5～15)：(1～2)，将所得的金纳米溶液用0.22μm水相滤膜过滤得到金纳米粒子溶胶；
(2)向样品瓶加入金纳米粒子溶胶和浓度为1～3μM的核酸适配体溶液，孵育10～20min后加入不同浓度的PAEs溶液，待反应完全后加入的NaCl溶液，孵育3～10分钟后，得到核酸适配体比色传感器；其中，金纳米粒子溶胶、核酸适配体溶液、PAEs溶液和NaCl溶液的体积比为：体积比为(150～250)：(30～70)：(15～35)：(15～35)；
(3)以乙醇为溶剂配制含有DEHP、DBP和BBP的PAEs标准混合污染物溶液，将浓度范围为0.003μg/L～10μg/L的PAEs标准混合污染物溶液分别加入到制备的核酸适配体比色传感器中，在室温条件下作用5～15分钟，采用紫外-可见分光光度计对不同体系的紫外-可见吸收光谱进行测定。根据646nm与520nm处吸光度的比值A646nm/A520nm与PAEs浓度的对数之间的线性关系建立标准工作曲线，实现对PAEs的高灵敏度分析；
(4)将PAEs标准混合污染物溶液和100倍于PAEs浓度的不同干扰物溶液分别加入到核酸适配体比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱；根据PAEs和干扰物引起的金纳米粒子在646nm与520nm处吸光度比值A646nm/A520nm的不同实现对PAEs的选择性分析；向体系中加入的干扰物包括实际水体中经常存在的内分泌干扰物：Cd2+、阿特拉津、PCB77、PCB126、雌二醇和雌酮，以及水体中大量存在的葡萄糖、氨基酸和腐殖酸；
(5)将需要检测的实际水样，经过0.22μm水相滤膜重复过滤除去水样中的大颗粒及悬浮物质，将未加标及加入0.05μg/L，0.5μg/L和5μg/L PAEs标准混合污染物溶液的实际水样加入到所述的核酸适配体比色传感器中，充分作用后采用紫外-可见分光光度计测定不同体系的紫外-可见吸收光谱，并与步骤(3)得到的标准工作曲线进行对比，得到多种邻苯二甲酸酯类污染物总量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910440739.7A CN110261340A (zh) | 2019-05-24 | 2019-05-24 | 一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法及传感器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910440739.7A CN110261340A (zh) | 2019-05-24 | 2019-05-24 | 一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法及传感器 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110261340A true CN110261340A (zh) | 2019-09-20 |
Family
ID=67915400
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910440739.7A Pending CN110261340A (zh) | 2019-05-24 | 2019-05-24 | 一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法及传感器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110261340A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111487212A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-08-04 | 中南民族大学 | 一种邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯的快速比色检测法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103217415A (zh) * | 2013-03-11 | 2013-07-24 | 上海交通大学 | 利用核酸适配体修饰纳米金粒子的三聚氰胺检测方法 |
| CN104897585A (zh) * | 2015-05-06 | 2015-09-09 | 同济大学 | 一种用于mc-lr快速检测的核酸适配体比色传感器的制备方法 |
| CN106399317A (zh) * | 2016-10-26 | 2017-02-15 | 首都师范大学 | 一种邻苯二甲酸酯类增塑剂单链dna核酸适配体及其筛选与表征方法及电化学传感器 |
| CN107153041A (zh) * | 2017-05-11 | 2017-09-12 | 同济大学 | 多氯联苯77检测的核酸适配体比色传感器的制备及应用 |
| CN107462714A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-12-12 | 昆明理工大学 | 与吊白块特异结合的核酸适配体Sf‑A09及其应用 |
| CN107760686A (zh) * | 2016-08-23 | 2018-03-06 | 上海伯豪医学检验所有限公司 | Dkk‑1蛋白的核酸适配体及其应用 |
| CN108918885A (zh) * | 2018-06-12 | 2018-11-30 | 浙江工商大学 | 一种特异性结合鱼类小清蛋白的核酸适配体、试剂盒及检测方法 |
| CN109337908A (zh) * | 2018-10-15 | 2019-02-15 | 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 | 一组特异性结合胶霉毒素的核酸适配体及其应用 |
-
2019
- 2019-05-24 CN CN201910440739.7A patent/CN110261340A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103217415A (zh) * | 2013-03-11 | 2013-07-24 | 上海交通大学 | 利用核酸适配体修饰纳米金粒子的三聚氰胺检测方法 |
| CN104897585A (zh) * | 2015-05-06 | 2015-09-09 | 同济大学 | 一种用于mc-lr快速检测的核酸适配体比色传感器的制备方法 |
| CN107760686A (zh) * | 2016-08-23 | 2018-03-06 | 上海伯豪医学检验所有限公司 | Dkk‑1蛋白的核酸适配体及其应用 |
| CN106399317A (zh) * | 2016-10-26 | 2017-02-15 | 首都师范大学 | 一种邻苯二甲酸酯类增塑剂单链dna核酸适配体及其筛选与表征方法及电化学传感器 |
| CN109609507A (zh) * | 2016-10-26 | 2019-04-12 | 首都师范大学 | 一种邻苯二甲酸酯类增塑剂单链dna核酸适配体及其筛选与表征方法及电化学传感器 |
| CN107153041A (zh) * | 2017-05-11 | 2017-09-12 | 同济大学 | 多氯联苯77检测的核酸适配体比色传感器的制备及应用 |
| CN107462714A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-12-12 | 昆明理工大学 | 与吊白块特异结合的核酸适配体Sf‑A09及其应用 |
| CN108918885A (zh) * | 2018-06-12 | 2018-11-30 | 浙江工商大学 | 一种特异性结合鱼类小清蛋白的核酸适配体、试剂盒及检测方法 |
| CN109337908A (zh) * | 2018-10-15 | 2019-02-15 | 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 | 一组特异性结合胶霉毒素的核酸适配体及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 张玉红: "妥布霉素特异性单链DNA适配体的筛选及其序列优化和应用研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111487212A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-08-04 | 中南民族大学 | 一种邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯的快速比色检测法 |
| CN111487212B (zh) * | 2020-05-22 | 2021-03-30 | 中南民族大学 | 一种邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯的快速比色检测法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | High-performance dual-channel ratiometric colorimetric sensing of phosphate ion based on target-induced differential oxidase-like activity changes of Ce-Zr bimetal-organic frameworks | |
| Asfaram et al. | Application of response surface methodology and dispersive liquid–liquid microextraction by microvolume spectrophotometry method for rapid determination of curcumin in water, wastewater, and food samples | |
| CN102967568B (zh) | 一种分光光度双波长检测方法 | |
| CN104897585A (zh) | 一种用于mc-lr快速检测的核酸适配体比色传感器的制备方法 | |
| Hu et al. | Simultaneous determination of palladium, platinum, rhodium and gold by on-line solid phase extraction and high performance liquid chromatography with 5-(2-hydroxy-5-nitrophenylazo) thiorhodanine as pre-column derivatization regents | |
| CN109444282B (zh) | 液相色谱测定大庆油田石油磺酸盐样品中活性物含量的方法 | |
| CN105548109A (zh) | 一种重金属镉的荧光检测体系以及检测方法 | |
| Arvand et al. | Ionic liquid-based dispersive liquid–liquid microextraction for the determination of formaldehyde in wastewaters and detergents | |
| Liu et al. | A colorimetric, ratiometric, and fluorescent cobalt (II) chemosensor based on mixed organic ligands | |
| CN103323412A (zh) | 一种高温合金中铁含量的硫氰酸盐分光光度测定法 | |
| CN102707005A (zh) | 水样中三价铁和二价铁的同时在线分析方法 | |
| Zhang et al. | A chemiluminescence method to detect malondialdehyde in plasma and urine | |
| CN104502477B (zh) | 一种三氯乙醛废硫酸中有机物的分析方法 | |
| Kozak et al. | Single peak parameters technique for simultaneous measurements: Spectrophotometric sequential injection determination of Fe (II) and Fe (III) | |
| Yin et al. | Determination of sulfite in water samples by flow injection analysis with fluorescence detection | |
| Liang et al. | Flow injection analysis of nanomolar level orthophosphate in seawater with solid phase enrichment and colorimetric detection | |
| CN110261340A (zh) | 一种快速可视化分析多种邻苯二甲酸酯类污染物总量的方法及传感器 | |
| CN107941926A (zh) | 一种三乙胺含量的测定方法 | |
| CN101598716A (zh) | 一种棉酚快速检测试纸条及制备方法与应用 | |
| Andac et al. | Flow-injection spectrophotometric determination of cobalt (II) at low μg l− 1 levels with 4-benzylpiperidinedithiocarbamate | |
| CN102954942A (zh) | 一种钯含量检测方法 | |
| CN102998267B (zh) | 一种尾气催化剂中铂、铑含量分光光度检测方法 | |
| CN103207160B (zh) | 以纳米金为显色探针的硫氰酸盐快速测定方法 | |
| Kalyan et al. | Membrane optode for uranium (VI) ions preconcentration and quantification based on a synergistic combination of 4-(2-thiazolylazo)-resorcinol with 8-hydroxyquinaldine | |
| CN109212062A (zh) | 一种用hplc检测工业废水中3-氰基吡啶和3-甲基吡啶的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190920 |